SUP35 РЕФЕРАТ. Ключевые

№ РНП.2.2.2.3.16050 “Изучение экспрессии гена SUP35 дрожжей Sacchoromyces
cerevisiae”
РЕФЕРАТ.
Отчет с, 0 ч., рис 2., табл 1, источников 29, прил.0.
Ключевые
слова:
регуляция
экспрессии
генов,
инициация
трансляции,
транскрипционные факторы.
Объект исследования: дрожжи Saccharomyces cerevisiae.
Цель работы: изучение экспрессии гена SUP35 дрожжей S. cerevisiae на уровне
транскрипции и трансляции.
Методика:.
Cтандартные
методы
генетики
микроорганизмов,
молекулярно-
биологические методы (сайт направленный олигонуклеотидный мутагенез, ПЦР,
лигирование),
использовавшиеся
для
получения
дрожжевых
векторов,
несущих
мутантные аллели гена SUP35.
Результаты работы: оценены возможные плейотропные проявления мутаций в сайтах
связывания транскрипционных факторов промоторной области гена SUP35
(аллели
sup35-Abf1, sup35-Reb1A, sup35-Reb1B, sup35-Reb1C, sup35-Mbp1 sup35-Gcn4).
При
тестировании
осмочувствительность,
влияния
промоторных
дыхательную
мутаций
компетентность,
гена
гена
SUP35
на
температурочувствительность,
чувствительность к беномилу и к аминогликозидному антибиотику паромомицину для
штаммов с мутантными аллелями никаких отличий по сравнению со штаммом дикого
типа обнаружено не было. Получена аллель гена SUP35 несущая делецию кодона АТГ1 (
sup35-ATG1). Оценено влияние аллели sup35-ATG1 и ранее полученной аллели sup35AGG1 на жизнеспособность клеток дрожжей при использовании различных штаммов и
при выращивании дрожжей в различных физиологических условиях. Мы показали, что
что у гаплоидного штамма 19А-Д780 (sup35::TRP1 [CEN SUP35+ URA3]) замещение
аллели SUP35 дикого типа на мутантную аллель sup35-AGG1 (АТГ1АГГ) или sup35-
ATG1 приводит к летальности при выращивании клеток на глюкозе в качестве источника
углерода. Замена глюкозы на галактозу или голодание по гистидину частично
восстанавливает жизнеспособность мутантов sup35-AGG1 [2] и sup35-ATG1.
В настоящей работе мы показали, что у гаплоидного штамма 8-7А-Д832 (sup35::TRP1
[CEN SUP35 URA3]) замещение аллели SUP35 дикого типа на мутантную аллель sup35AGG1 или sup35-ATG1 приводит к снижению жизнеспособности при выращивании
клеток на глюкозе, но не является летальным. Нами также показано отсутствие
жизнеспособности дрожжей у штамма 19А-Д780 (sup35::TRP1 [CEN SUP35+ URA3]) при
замещение аллели SUP35 дикого типа на мутантную аллель sup35-AGG1 при выращивании
клеток на среде с галактозой и содержащей 0.1% глюкозы. Мутация sup35-AGG1 также
приводит к летальности при любых проверенных условиях выращивания как у гибрида,
полученного в скрещивании 19А-Д780 х 8-7А-Д832, так и у автодиплоидов, полученных у
обоих родительских штаммов. Нами получена серия плазмид, несущих ген ADE2
в
качестве селективного маркера и аллель гена SUP35 дикого типа или мутантные аллели
sup35-AGG1 или sup35-ATG1. Разработана система для скрининга генов, участвующих в
процессе
регуляции
транскрипции
и
трансляции
гена
SUP35
в
различных
физиологических условиях.
Основные
конструктивные,
технологические
и
технико-эксплуатационные
характеристики: дрожжи Saccharomyces cerevisiae являются удобным модельным
объектов для исследования базовых физиологических процессов, происходящих в клетке.
В частности могут служить прекрасным объектом для изучения эволюционно
консервативных генов, кодирующих компоненты аппарата трансляции и транскрипции.
Степень внедрения: полученные данные о регуляции экспрессии эволюционно
консервативного гена SUP35, контролирующего один из важнейших процессов
жизнедеятельности клетки- синтез белка, могут быть использованы при чтении лекций.
Рекомендации по внедрению или итоги внедрения результатов НИР: Использование
полученных
данных
при
чтении
курсов
лекций
‘’Молекулярная
биология’’,
‘’Молекулярная генетика’’, ‘’Генетический контроль трансляции’’.
Область применения: исследование базовых механизмов синтеза белка.
Экономическая эффективность или значимость работы: результаты работы могут
иметь значение для понимания механизмов регуляции экспрессии генов на уровне
транскрипции и трансляции в зависимости от физиологических условий.
Прогнозные предположения о развитии объекта исследования: развитием объекта
исследования может быть разработка новых систем контроля синтеза белка
Результаты опубликованы в 1 статье и 2 тезисах.