Кузнецова Е.П. 14.10.13

реклама
Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии
ПЕПТИДЫ ВОССТАНАВЛИВАЮТ ИММУНОГЕНЕЗ
В СЕЛЕЗЕНКЕ ПРИ ЕЕ СТАРЕНИИ
Кузнецова Е.П.
[email protected]
Санкт-Петербург, 2013
Старение иммунной системы
Известно, что с возрастом увеличивается вероятность
развития аутоиммунных, эндокринных, инфекционных и раковых
заболеваний. В старении иммунной системы важную роль играет
инволюция тимуса и селезенки.
В
Санкт-Петербургском
геронтологии
разработаны
институте
биорегуляции
сигнальные
и
пептиды,
восстанавливающие иммуногенез при старении и различной
патологии.
Цель
работы:
изучить
влияние
коротких
пептидов
на
экспрессию маркеров иммунных клеток в селезенке при старении
Задачи:
1. Оценить
возрастную
динамику
экспрессии
маркеров
недифференцированных Т-лимфоцитов (CD5), В-лимфоцитов
(CD20), Т-хелперов (CD4) и цитотоксических Т-лимфоцитов
(CD8) в органотипических культурах клеток селезенки.
2. Изучить влияние дипептида Lys-Glu и трипептида Lys-Glu-Asp
на
экспрессию
маркеров
недифференцированных
Т-
лимфоцитов, В-лимфоцитов, Т-хелперов и цитотоксических Т-
лимфоцитов в органотипических культурах клеток селезенки
молодых и старых крыс.
Короткие пептиды
Вилон – дипептид со структурной формулой
Lys-Glu, сконструированный на основе
анализа полипептидного экстракта,
входящего в состав эндогенных факторов
тимуса и цитокинов.
Везуген – трипептид со структурной формулой
Lys-Glu-Asp, сконструированный на основе
анализа полипептидного экстракта сосудов.
Голубым цветом обозначены атомы
углерода, белым – атомы водорода,
красным – атомы кислорода
Методы исследований
1.
Метод
органотипического
культивирования
–
выращивание
фрагментов живых тканей в питательной среде (45% среды Хенкса,
45% среды Игла, 10% FBS, глюкоза 10 мг/мл, гентамицин 0,5 мг/мл).
2.
Метод иммуноцитохимии - оценка результатов реакции антигенантитело в органотипических культурах. Были использованы
первичные моноклональные антитела к маркерам иммунных клеток
CD4, CD5, CD8 и CD20 (1:30, Dako).
3.
Метод гистологического окрашивания - морфологическая оценка
органотипической культуры клеток селезенки с использованием
гематоксилин-эозина.
4.
Морфометрический анализ данных - программа «ВидеотестМорфология 5.2» - оценка площади экспрессии исследуемых
маркеров.
Методика создания органотипической
культуры клеток
Фрагмент ткани
селезёнки крысы
эксплантаты селезёнки
термостат
Молодые – 3 мес.
Группы:
37о С
Старые – 20-24 мес.
1 – контроль (физраствор)
5% СО2
2 – дипептид вилон 10 нг/мл
3 суток
3 – трипептид везуген 10 нг/мл
Органотипическая культура
клеток селезенки
Эксплантат
селезенки
лимфоциты
Зона роста
культуры
(монослой
клеток)
Органотипическая культура
клеток селезенки молодой
крысы, гематоксилин-эозин,
х40.
Органотипическая культура
клеток селезенки молодой
крысы, гематоксилин-эозин,
х400
Влияние пептидов на площадь экспрессии маркера
CD5 в органотипической культуре клеток селезенки
молодых и старых крыс
Площадь экспрессии маркера CD5, %
30
#
25
20
молодые
15
старые
*
10
#
#
5
0
контроль
дипептид
трипептид
•*– р<0,05 по сравнению с молодыми животными.
•#- p<0.05 по сравнению с аналогичным показателем в контроле
Влияние пептидов на площадь экспрессии маркера
CD20 в органотипической культуре клеток селезенки
молодых и старых крыс
Площадь экспрессии маркера CD20, %
12
#
10
#
8
молодые
6
старые
4
#
2
0
контроль
дипептид
трипептид
•#- p<0.05 по сравнению с аналогичным показателем в контроле
Влияние пептидов на площадь экспрессии маркера
CD4 в органотипической культуре клеток селезенки
молодых и старых крыс
Площадь экспрессии маркера CD4, %
30
#
25
20
молодые
15
старые
10
*
#
5
0
контроль
дипептид
трипептид
•*– р<0,05 по сравнению с молодыми животными.
•#- p<0.05 по сравнению с аналогичным показателем в контроле
Влияние пептидов на площадь экспрессии маркера
CD8 в органотипической культуре клеток селезенки
молодых и старых крыс
Площадь экспрессии маркера CD8, %
35
#
#
30
25
20
молодые
15
10
старые
#
*
5
0
контроль
вилон
везуген
•*– р<0,05 по сравнению с молодыми животными.
•#- p<0.05 по сравнению с аналогичным показателем в контроле
Заключение
Увеличение площади экспрессии маркеров CD5, CD4 и CD8 в старых
культурах
в
контроле
отражает
повышение
количества
недифференцированных Т-лимфоцитов, Т-хелперов и цитотоксических Тлимфоцитов в селезёнке старых крыс. Таким образом, с возрастом в
селезёнке
иммуногенез
усиливается,
что
свидетельствует
о
её
выраженной компенсаторной роли при старении иммунной системы.
Было
показано,
что
иммуномодулирующий
дипептид
эффект.
имеет
Lys-Glu
Данный
пептид
выраженный
стимулировал
пролиферацию недифференцированных Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов,
Т-хелперов
и
цитотоксических
культурах молодых и старых крыс.
Т-лимфоцитов
в
органотипических
Спасибо за внимание!
Скачать