Технологические основы приготовления диагностических препаратов: диагностических сывороток, антигенов,

Технологические основы
приготовления диагностических
препаратов: диагностических
сывороток, антигенов,
бактериофагов и аллергенов
Содержание.
Введение:
1. Что такое диагностические препараты.
2. Технология приготовления бактериальных
антигенов.
3. Технология приготовления вирусных антигенов.
4. Технология приготовления аллергенов.
5. Технология приготовления бактериофагов.
Заключение.
Список литературы






1. Тихонов И.В. «Биотехнология» Санкт – Петербург Гиорд
2005год.
2. Аксенов М.Ю. «Диагностика инфекционных заболеваний
методом ПЦР» М – 1993год.
3. Самуйленко А.Я., Рубан Е.А. «Основы технологии
производства ветеринарных биопрепаратов». М.: ВНИИТиБП,
том 1; 2000 г.
4. Грязнева Т.Н., Тихонов И.В. «Основы производства
гипериммунных сывороток и иммуноглобулинов». Учебнометодическое пособие для ВУЗов. М.: МГАВМиБ, 2003 г, 49 с.
5. Кирюткин Г.В., Горлов И.Ф. «Справочник ветеринарных
биологических препаратов». Волгоград: типография Химпром,
2002 г.
6. «Ветеринарная энциклопедия. Гл. ред. К.И. Скрябин. М.: Издво «Советская энциклопедия», 1975 г.
Диагностические препараты
 1.Иммунные
сыворотки
 2.Антигены-диагностикумы
 3.Бактериофаги
 4.Аллергены
 5.Моноклональные антитела
Технологическая схема
приготовления гипериммунных
сывороток
 1.Приготовление
антигенов
 2.Заготовка животных и их
карантинирование
 3.Вакцинация животных-продуцентов
Подготовка животныхпродуцентов
 Грундиммунизация
 Отбор
животных
продуцентов
 Гипериммунизация животныхпродуцентов
 Получение гипериммунной сыворотки
Изготовление диагностической
сыворотки
 1.Взятие
крови у продуцентов
 2.Получение нативной сыворотки
 3.Очистка и концентрирование
 4.Фильтрация через пластины ФиСФ
5.Консервирование
6.Контроль
Диагностические сыворотки
 1.Агглютинирующие
 2.Преципитирующие
 3.Лизирующие
(комплементсвязывающие)
 4.Антитоксические
 5.Меченные (люминесцирующие,
иммуноферментные,радиоиммунные)
Диагностические антигены
 1.Корпускулярные
(взвесь живых или
убитых микробов)
 2.Тканевые антигены вирусов или
риккетсий
 3.Растворимые антигены (экстракты
микробов, продукты метаболизма в т.ч.
токсины
Приготовление эритроцитарного диагностикума
Диагностические методы








1.Реакция агглютинации (РА,РБП,ГНГА)
2.Реакция связывания комплемента (РСК)
3.Реакция преципитации (РП,РДП)
4.Реакция иммунофлюоресценции
(МФА,РИФ)
5.Иммуноферментный анализ (ИФА)
6.Радиоиммунный анализ (РИД)
7.Реакция нейтрализации (РН)
8.Реакция гемадсорбции (РГА)
Диагностические аллергены
 1.Туберкулин
 2.Бруцеллин
 3.Малеин
(ППД,АТК)
Технология приготовления туберкулинов
1.Выращивание в среде Коттона с аспарагином и лимонной кислотой
2.Бактериальную массу автоклавируют
3.Белок культуральной жидкости осаждают трихлоруксусной кислотой
4.Центрифугируют и повторно осаждают белок сернокислым аммонием
5.Надосадок удаляют, приципитат растворяют дист.Н2О и диализируют
для удаления сернокислого аммония
6.Раствор туберкулина подщелачивают и фильтруют
7.Расфасовывают во флаконы объемом 10-20 мл и лиофильно высушивают.
8.Проводят контроль туберкулинов на растворимость, стерильность, рН,
безвредность, специфичность и содержание туберкулиновых единиц
Технология приготовления бруцеллина
- Прогревают в реакторе при t -105 -1100С при перемешивании,
охлаждают и центрифугируют
- Надосадок фильтруют через стерилизующие пластины, разводят
физраствором 1:50, стерилизуют при 105 – 1100С
- Доводят рН до 7,2 – 7,4 , разливают по флаконам, стерилизуют
в автоклаве при t – 105 - 1100С и выдерживают трое суток при
370С
- Контроль на стерильность, содержание бактерийного белка, рН,
безвредность, спецефичность и активность.
- Штамм Вr. abortus B -1 выращивают в питат. среде с 0,5%
глюкозы глубинным методом, 4 – 5 суток
Технология приготовления маллеина
1.Actinobacillus mallei № 5584 выращивают в мясопептонном
глицериновом бульоне (МПГБ) в бутылях в течение
4
месяцев при 37°С.
2.Культуральную суспензию автоклавируют и
отстаивают в
течение 4-х месяцев при 20°С.
3.Надосадочную жидкость фильтруют через
стерилизующие
пластины.
4.Готовый препарат контролируют на стерильность,
безвредность и специфичность.
Фагодиагностика
 Бактериофаги-вирусы
способные
инфицировать бактериальную клетку,
репродуцироваться в ней и вызывать её
лизис или переход в лизогенное
состояние
Биологические формы
бактериофагов
 1.Вегетативный-репродуцируется
внутри бакклетки и не обнаруживается
 2.Вирулентный-вызывает лизис клетки
и выход в среду своего потомства
 3.Дефектный-не способен к
репродукции полноценного фага
 4.Умеренный-существует внутри клетки
в форме профага, вызывая лизогению
клеток
Специфичность бактериофагов
родственные
бактерии разных видов
 2.Монофаги-лизируют бактерии одного
вида
 3.Фаговары-лизируют только
определенные варианты (фаготипы)
данного вида бактерий
 1.Полифаги-лизируют
Специфичность бактериофагов
родственные
бактерии разных видов
 2.Монофаги-лизируют бактерии одного
вида
 3.Фаговары-лизируют только
определенные варианты (фаготипы)
данного вида бактерий
 1.Полифаги-лизируют
Развитие вирулентного фага в восприимчивой
бактериальной клетке
А
Б
Г
Д
В
А — прикрепление фага; Б — проникновение ДНК фага внутрь клетки; В — синтез белковых
оболочек новых вирусных частиц; Г — обнаружение вирулентных вирусных частиц;
Д— освобождение новых фаговых частиц.
Адсорбция фага на бактериальной клетке
Строение бактериофага
Бляшки, образованные
бактериофагом λ
 Рис.13.
Крупные негативные
колонии(В.Я. Ганюшкин,1984)Рис.12
Негативные колонии среднего
размера(В.Я. Ганюшкин,1984)