Бесприборные тест-системы для ветеринарии. Новые возможности и перспективы.

Бесприборные тест-системы
для ветеринарии.
Новые возможности и
перспективы.
Островский М.В.
к.в.н. начальник отдела
ветеринарии ЗАО «Биоград».
Бесприборные тест-системы
ImmunoComb®
Страны, где уже используются
эти тест-системы
Scandinavian
Countries
Netherlands
Korea
USA*
UK
France
Spain
Austria +
Central Europe
India
Germany
Ecuador
Chile
Italy
Brazil*
Japan*
Philippine
Israel
Thailand
Australia
Biogal Galed Labs. - создана в 1986 году.
Является лидером в области ветеринарных диагностических
наборов.
Серологические и прямые оценки заболеваний в ветеринарии.
Клиенты > 30 стран мира.
s
Миссия Biogal Galed Labs. :
Улучшить здоровье животных,
обеспечивая врачей превосходным и
уникальным диагностическим
инструментом
Что такое ImmunoComb® ?
• Тест ImmunoComb® является модифицированным
иммуноферментным анализом, который может быть описан
как точечный анализ с использование вторичных антител,
меченых ферментом.
• Обеспечивает серологические результаты; определяет
уровень антител в сыворотке или цельной крови для
конкретного заболевания (например, вирусы, микоплазмы,
риккетсии).
ImmunoComb®
ассортимент продукции
С/Х животные
Домашние
животные
 Собаки
 Кошки
 Птица
КРС
 МРС

С/Х птица
Индейки
 Куры

Грызуны
 Крысы
 Мыши
Дополнительно:
 CombScan
 Сделанные на
заказ
комплекты
ImmunoComb®
Основная Продукция для Домашних Животных
•VacciCheck для собак
(ICH,CPV,CDV)
•Эрлихиоз
•Лептоспироз
•Парвовирусная инфекция &
Чума плотоядных (IgM & IgG)
•Бруцеллёз
•Хламидиоз
(пситтакоз,орнитоз) птиц
•VacciCheck для кошек
(FPLV, FHV, FCV)
•Короновирусная инфекция
(FIP)
•Токсоплазмоз &
Хламидиоз
Содержимое набора ImmunoComb®
Гребень*
Проявочная
ванна*
Пинцет *
Comb шкала*
Капиллярные
трубки &
поршень
Стандартный набор – 12 тестов (Также
Индивидуально)
Комплект для лаборатории – 120 тестов
Примечание: * во всех наборах. Количество
варьируется в зависимости от комплекта.
Процедура анализа на
ImmunoComb®
Анализ результатов
Пример проявочного гребня на вирусный
гепатит, парвовирусный энтерит и чуму
плотоядных
Цветная интенсивность
пятен соответствует
уровню антител.
Точка контроля
Гепатит
Парвовирус
Чума
плотоядных
Оценка результатов:
3 способа прочитать результаты:
(1) на глаз,
(2) с помощью шкалы и гребня,
(3) с помощью прибора CombScan
Чтение результатов на
глаз
Качественные результаты
Чтение результатов с
помощью шкалы Comb
Полуколичественные
результаты
Чтение результатов с
помощью Comb
сканера
Количественные результаты
Чтение результатов на глаз:
Сравните цветовой тон тестового пятна с
положительной точкой контроля.
4 варианта интерпретации:
 Отрицательный
 Слабоположительный(подозрительный)
 Положительный
 Высокоположительный
Чтение результатов CombScale:
1. Найдите тон пурпурно-серый на шкале, который наиболее
близко подходит к точке Положительного Контроля
(верхняя точка).
2. Двигая желтую линейку найдите отметку С+, появившуюся
в окошке над цветом, который вы только что нашли.
Чтение результатов
CombScale:
3. Держите линейку в таком
положении на
протяжении всего
чтения результатов.
Этот шаг фактически
калибрует С+ и S3, с
которыми будут
сравниваться точки
теста.
4.Удерживая линейку,
найдите тон на шкале,
который будет наиболее
подходить точке
результата теста
(нижние точки).
Значение, которое
появится в окошке
сверху, является
оценкой CombScale (S0S6).
Чтение результатов CombScan:
CombScan
Программа, которая
использует компьютер
и офисный сканер.
Гребень помещается
в сканер. Программа
переводит цветовые
результаты на
численные значения.
Предоставляется бесплатно и это очень удобно при
чтении большого количества анализов (в лабораториях).
Преимущества ImmunoComb® Biogal
И вот, тогда Пискун и Джерри поняли, что у г-на
Скемперса действительно было конкурентное
преимущество.
Серологическое тестирование имеет
важное значение в
оценке иммунного статуса животного
Для всех тестов ImmunoComb :
Диагностика клинических случаев
заболеваний.
Основное применение серологии - помощь в
диагностировании клинических случаев
заболеваний (Полуколичественный результат
обеспечивает более полный и точный
прогноз).
Например: Эрлихиоз и лептоспироз собак, инфекционный
перитонит кошек (зоонозы).
Серологическое тестирование является
необходимым в
оценке иммунного статуса собак/кошек
Основные Преимущества Тестирования
Титра :
1. Проверить Иммунный ответ, следующий за
вакцинацией (котят/ щенков).
2. Определить, необходима ли вакцинация.
3. Определить, эффективна ли вакцинация.
Применимо к: VacciCheck для кошек/собак
Преимущества ImmunoComb® Biogal
ImmunoComb®
Biogal
Классический ИФА
Иммунофлюоресцент
ный Анализ
1. Простой
2. Портативный идеален для
полевых
исследований.
Требует аппарата
для считывания
результатов ИФА.
Необходимо
специальное
оборудование в
лаборатории.
Нужно небольшое
количество
образцов.
Необходимо
большое количество
образцов.
Необходимо
небольшое количество
образцов.
Быстрый срок
выполнения
анализа.
Более длинный срок Долгий срок
выполнения анализа. выполнения анализа.
1.Удобный, лёгкий в
освоении и
использовании.
2.Выполняется
непосредственно
ветврачом.
Выполняется
специалистом в
лаборатории.
1.Выполняется
опытным
специалистом в
лаборатории.
2.Субъективный.
Преимущества ImmunoComb® Biogal:
Сравнение с одношаговыми (One-Step ) тестами
Biogal’s ImmunoComb®
One-Step Test Kits
Обеспечивает количественный
результат.
Точный и надежный.
Обеспечивает только
качественный результат.
Даёт ответ только да/нет.
– ImmunoComb ® определяет относительный
уровень титра - диагностирует болезнь на
гораздо более низком уровне титра, чем
положительное пороговое значение.
– ImmunoComb ® может идентифицировать
подозрительные случаи заболевания, за
которыми в дальнейшем может быть
изменение титра.
– Более точный в определении, не только
если, но также и до какой степени животное
заражено.
- Положительное пороговое значение для
заболевания может давать
«ложноотрицательный» результат,
поскольку уровень антигена/антител может
быть слишком низким, чтобы обнаружить
заболевание на ранней стадии.
• Поверяет несколько антигенов в одном тесте
Какую же выгоду обеспечивает каждая
особенность ImmunoComb® ?
1.Независимо от оснащённости в клинике лабораторией у вас сразу же появляется
полная комплектация наборов (мини-лаборатория).
2.Для постановки анализа и его учёта не требуется приборное обеспечение.
3.Практичность (можно провести от 1 до 12 анализов, в зависимости от
необходимости).
4.Быстрота получения результатов (от 20 до 60 минут).
5.Стабильность (срок хранения до 15 мес.).
6.Простота в использовании, возможность визуального учёта результатов (не
требуется специальная квалификация персонала).
7.Надёжность (наличие дополнительного, внутреннего контроля).
8.Безопасность (в комплекте нет инфицированного материала).
9.Экономичность (экономится время и финансовые затраты на исследования).
10.Возможность исследования не только сыворотки или плазмы, но и цельной крови.
11.Возможность хранения и документирования тестов.
12. Чувствительность и специфичность (до 100% - в зависимости от заболевания).
13.Полностью удовлетворяет самым строгим требованиям международных
стандартов.
ЭКСПРЕСС-ТЕСТЫ
ИХА
•
•
•
•
•
•
•
Вирус кошачьего иммунодефицита (FIV)
Лейкемия кошек (FeLV)
Парвовироз собак (CPV)
Чума плотоядных (CDV)
Дирофилярио́з (CDI)
Лямблиоз (CFG)
Лейшманиоз собак (CLI)
Что такое экспресс-тест ImmunoRun?
•
•
•
В основе теста лежит метод иммунохроматографического
анализа (ИХА) в котором на коллоидное золото, распределенное в
тест-полоске, ученые «пришили» особые вещества
(моноклональные и поликлональные антитела или антигены),
которые способны выявить тот или иной маркер - вестник болезни по принципу «свой или чужой».
В основе иммунохроматографического анализа лежит классическая
реакция "антиген-антитело" с образованием иммунных комплексов,
которые можно визуально обнаружить на тест-полоске.
Принцип действия состоит в том, что при погружении тест-полоски
в биологическую жидкость (или другой жидкий образец), она
начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной
хроматографии. Вместе с ней движутся нанесенные на нижнюю
часть тест-полоски меченые специфические антитела, которые
аффинно (прочно и родственно) связываются с анализируемым
веществом.
Преимущества экспресс-тестов
ImmunoRun (Biogal)
Быстрый:
- Одношаговая процедура с точным результатам в течение
10 минут.
Надежный:
- Высокая чувствительность, высокая специфичность,
высокая точность.
Легкий:
- Простой в использовании и легкий в прочтении
результатов.
Универсальный:
- Экономичный и недорогой тест-набор подходящий для
обычной или большой клиники / лаборатории - удобный
размер упаковки из 5 или 50 тестов.
Экспресс-тесты ImmunoRun
набор для исследования на
дорофеляриоз
Внесение образца в лунку тест-кассеты
Подготовка
проб при CDV
Подготовка
проб при CPV
Чтение и интерпретация результатов
Положительный тест
Отрицательный тест
Некорректный (повторить) тест
ImmunoRun. таблица данных
на 01.02. 2011г.
Название
теста
Чувствительность Специфичность Сравнительный тест
CPV Ag
100%
98.8%
Реакция
Гемагглютинации
CHW Ag
* 94.4%
100%
Аутопсия
CDV Ag
100%
98.5%
ПЦР
FIV Ab
96.8%
99.7%
Вестерн-блоттинг
FeLV Ag
94.7%
99.7%
С изолированным
вирусом
Giardia Ag
100%
100%
Промышленные
испытания
Leishmania
Ab
95.6%
98%
ИФА
* CHW антиген чувствительности:
1 женская особь червя: 85%, 2 ж. особи червя: 100%,
более 3 ж. особей червей: 100%
*Нет необходимости в холодильнике – легко хранить и отправлять.
*Нет времени ожидания, чтобы тест согрелся перед использованием.
* Длительный срок хранения до 24 месяцев.
Спасибо за внимание
Таблица перехода от S-значения в Титрах для
Мелких домашних животных
Avian Chlamyophila
Canine Brucella
Canine Distemper IgG
Хламидиоз птиц
Бруцеллёз собак
Чума плотоядных
РИФ
РИФ
РН
S1 < 1:50
S1 = 1:50
S1 < 1:8
S2 = 1:50
S2 = 1:100
S2 = 1:16
S3 = 1:100
S3 = 1:200
S3 = 1:32
S4 = 1:200
S4 = 1:400
S4 = 1:64
S5 = 1:400
S5 = 1:800
S5 = 1:128
S6 ≥ 1:800
S6 = >1:1600
S6 ≥ 1:256
Таблица перехода от S-значения в Титрах для
Мелких домашних животных
Canine Distemper IgM
Canine Ehrlichiosis
Canine Hepatitis (CAV)
Чума плотоядных
Эрлихиоз собак
Вирусный гепатит
РИФ
РИФ
РН
S1 < 1:10
S1 < 1:40
S1 = 1:4
S2 = 1: 50
S2 = 1: 40
S2 = 1:8
S3 = 1: 250
S3 = 1: 80
S3 = 1:16
S4 = 1:1250
S4 = 1:160
S4 = 1:32
S5 = 1:6250
S5 = 1:320
S5 = 1:64
S6 > 1:6250
S6 = 1:640
S6 = 1:128
Таблица перехода от S-значения в Титрах для
Мелких домашних животных
Canine Leptospirosis
Canine Parvovirus IgG
. Canine Parvovirus IgM
Лептоспироз собак
Парвовирусная инфекция
Парвовирусная инфекция
РМА
РТГА
РИФ
S1 < 1:100
S1 < 1:40
S1 = 1:10
S2 = 1:200
S2 = 1:40
S2 = 1:50
S3 = 1:400
S3 = 1:80
S3 = 1:250
S4 = 1:800
S4 = 1:160
S4 = 1:1250
S5 = 1:1600
S5 = 1:320
S5 = 1:6250
S6 = 1:3200
S6 ≥ 1:640
S6 > 1:6250
Таблица перехода от S-значения в Титрах для
Мелких домашних животных
Feline Toxoplasma
FCoV (FIP)
Хламидиоз кошек
Токсоплазмоз кошек
Коронавирусная инфекция
РСК
РИФ
РИФ
S1 < 1:16
S1 < 1:16
S1 = <1:10
S2 = 1:16
S2 = 1:16
S2 = 1:10
S3 = 1:32
S3 = 1:32
S3 = 1:20
S4 = 1:64
S4 = 1:64
S4 = 1:20-80
S5 = 1:128
S5 = 1:128
S5 = 1:160-320
S6 ≥ 1:256
S6 ≥ 1:256
S6 > 1:320
Feline Chlamydia
Таблица перехода от S-значения в Титрах для
Мелких домашних животных
Feline Calicci Virus
Feline Herpes Virus
Feline Panleokopenia
Калицивироз кошек
Герпес-вирус
Панлейкопения кошек
РН
РН
РТГА
S1 = 1:8
S1 = 1:4
S1 = 1:20
S2 = 1:16
S2 = 1:8
S2 = 1:40
S3 = 1:32
S3 = 1:16
S3 = 1:80
S4 = 1:64
S4 = 1:32
S4 = 1:160
S5 = 1:128
S5 = 1:64
S5 = 1:320
S6 = 1:256
S6 = 1:128
S6 = 1:640
Иммунофлуоресцентный анализ (РИФ)
Реакция нейтрализации вируса (РН)
Реакция связывания комплемента (РСК)
Реакция торможения гемагглютинации (hemagglutination inhibition) (РТГА)
Реакция микроагглютинации (РМА)
ОТЛИЧИЕ ИФА ОТ ИХА
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
ИХА -тесты выполнены в виде тест-полоски или тест-кассеты. Подвижной фазой в
данном случае является физиологическая жидкость. Для проведения анализа
вносится 1-2 капли сыворотки или плазмы в область образца тестовой полосы, далее
добавляется 1 капля буфера и через 5-10 минут получается результат в виде
окрашенных линий.
1. Не допускается считывание результата после 20 минут, так как окраска линий
не стабильна. Из-за этого нет возможности хранения результатов тестов для
отчётности и документирования.
2. Чувствительность и специфичность ИХА-тестов не достигает показателей
иммуноферментного анализа!!!
Надежность и чувствительность зависит,
во-первых, от качества используемых в тесте реагентов и,
во-вторых, от концентрации антигена в биоматериале.
Качество используемых реагентов зависит от способов их получения, очистки и
фиксации на полоске.
Концентрация антигена – от стадии заболевания и количества биоматериала.
3. Достаточно много фирм Китая производят тестовые полосы или сами тесты
(которые в дальнейшем закупают другие страны, производящие ИХА-тесты), несмотря
на указанную в инструкции 100% чувствительность и специфичность, в реальности
качество данных тестов низкое, разные серии часто не одинаковы, результаты не
воспроизводятся, так же много ложноположительных результатов.
4. ИХА-тесты обеспечивают только качественный результат (да-нет).
5. Экспресс-тесты (антигенные) работают только в течение ~ 3-7 дней после
заражения (полезны только при первоначальном воздействии).
6.Положительное пороговое значение для заболевания при использовании
одношаговых тестов (ИХА) может давать «ложноотрицательный» результат»,
поскольку уровень антигена/антител может быть слишком низким, чтобы обнаружить
заболевание на ранней стадии.