му методические рекомендации об определении свободного

Методические рекомендации об определении свободного формальдегида в биосредах методом
тонкослойной хроматографии
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР
ГЛАВНОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ УПРАВЛЕНИЕ
УТВЕРЖДАЮ
Заместитель Главного
санитарного врача МЗ СССР
В.Е.Ковшило
20.10.1976
№ 1514-76
http://mozdocs.kiev.ua/view.php?id=4718
ВВЕДЕНИЕ
Формальдегид H*COH, молекулярный вес 30,03. Бесцветный газ с резким
запахом.
Порог
восприятия
запаха
0,2
мг/куб.м.
Температура
плавления
92
град.С, температура кипения - 21 град.С. Хорошо растворим в воде; 35-40%
водный раствор формальдегида называется формалином. Он легко полимеризуется с
образованием параформальдегида, легко конденсируется с аммиаком, аминами и
фенолами. Формальдегид находит большое применение при производстве полимерных
материалов на основе мочевино-формальдегидной, феноло-формальдегидной и др.
смол.
Для определения формальдегида в биосредах в литературе описан метод,
основанный на способности формальдегида восстанавливать окраску бесцветного
раствора
фуксинсернистой
чувствительным
при
кислоты
определении
[1].
H*COH
Однако
в
он
органах
оказался
недостаточно
подопытных
животных,
подвергавшихся длительной затравке формальдегидом на уровнях, соответствующих
его
выделению
из
полимерных
материалов.
По
этой
же
причине
оказался
неудовлетворительным метод, описанный в работе [2].
Настоящий метод предназначен для определения формальдегида в печени,
почках,
легких,
мозге
подопытных
животных.
Извлечение
формальдегида
из
органов животных делалось так, как описано в работе [1], синтез формдимедона
по прописи, представленной в руководстве [3], условия хроматографирования и
количественного определения формдимедона разработаны авторами.
Принцип метода
1.
Метод
взаимодействии
основан
с
на
димедоном
извлечении
формальдегида
из
(5,5-диметилдигидрорезорцином)
органов,
с
его
последующим
выделением продукта взаимодействия (формдимедона) в тонком слое сорбента. В
качестве
алюента
применяется
хлороформ.
Проявление
пластины
осуществляется
хлороформенным раствором йода.
2. Открываемый минимум - 0,2 мкг в пробе.
3. Веществ, мешающих определению, не установлено.
Реактивы, растворы
1. Соляная кислота (d=1,19), "хч", ГОСТ 3118-67; Ін; 0,1н р-ры.
2. Димедон, "ч", ГОСТ 6622-53, перекристаллизованный; 5% спиртовый р-р,
свежеприготовленный.
3. Гидроокись натрия, "хч", ГОСТ 4328-66; 0,1н; 0,05н и 20% р-ры.
4. Спирт этиловый, ректификат, ГОСТ 5962-67; перегнанный.
5. Вода, бидистиллат.
6. Бромфеноловый синий, "чда", ГОСТ ТУ 6-03-311-70.
7. Ацетат натрия, "ч", ТУ 6-09-246-70.
8. Нитрат серебра, "хч", ГОСТ 1277-63; 0,1н р-р.
9. Хлороформ, "хч", ГОСТ 3160-51.
10. Трихлоруксусная кислота, "ч", МРТУ 6-09-2299-65; 5% р-р.
11. Йод, "чда", ГОСТ 4159-64.
12. Крахмал растворимый, для йодометрии, ГОСТ 10163-62.
13. Формалин медицинский, ГФ-10.
14. Буферный р-р: смешивают 2 объема Iн р-ра ацетата натрия с 1 объемом
Iн р-ра HCl, pH=4,0.
15. Бромфеноловый синий: 0,1 г индикатора растворяют в 3 мл 0,05н p-pa
NaOH в мерной колбе емкостью 250 мл, добавляют горячей бидистиллированной
воды, остывший р-р взбалтывают в мерной колбе, затем доводят до метки водой и
хорошо перемешивают.
16. Проявляющий р-р: 0,5% р-р йода в хлороформе и 1% р-р крахмала.
17. Синтез
формальдегида,
формдимедона:
в
прибавляют 0,5 мл
подкисляют несколькими
каплями
стакан
5%
0,1н
вносят
спиртового
р-ра
HCl
5
мл
р-ра
в
4%
р-ра
димедона,
присутствии
бромфенолового синего. Затем прибавляют несколько капель 0,1н р-ра
NaOH
до
р-ра.
изменения
окраски
в красно-фиолетовую и 5 мл буферного
Содержимое стакана оставляют стоять на 12 часов, после чего
фильтруют через
стеклянный
фильтр
с
пористой
пластинкой
№ 4.
Осадок промывают бидистиллированной водой до отрицательной реакции
на
ион хлора (проба с р-ром AgNO )
и сушат до постоянной массы в
3
течение 4,5 часов при температуре 100 град.С.
18.
Стандартный
р-р
формдимедона
концентрацией
50
мкг/мл
готовится
обычным способом.
Приборы и посуда
1. Центрифуга.
2. Форвакуумный или водоструйный насос.
3. Стеклянная ловушка.
4. Стеклянные пластинки размером 9х12 см.
5. Поглотитель Полежаева на шлифе с оттянутым концом.
3. Мерные колбы для приготовления стандартного р-ра, микропипетки.
7. Батарейные стаканы.
8. Пульверизатор.
9. Реактивные склянки.
10. Фарфоровые чашки.
Приготовление пластин для хроматографии
Тщательно
вымытые
хромовой
смесью
пластины
промывают
водой,
затем
дистиллированной водой, сушат в сушильном шкафу, а потом на них наносят слой
сорбента. Для приготовления сорбционной массы использовался силикагель марки
КСК
и
медицинский
отверстиями
с
гипс,
частотой
которые
ячеек
предварительно
100
меш.
просеивались
Адсорбционная
через
масса
сито
с
готовилась
следующим образом:
14 г силикагеля + 1 г гипса + 50 мл дистиллированной воды смешивают и
интенсивно встряхивают в плоскодонной колбе в течение 20 минут. Однородную
массу
наносят
на
10
пластинок
и
встряхиванием
добиваются
равномерного
распределения слоя на поверхности каждой пластины.
Стеклянные пластинки после нанесения слоя сорбента сушат на воздухе в
течение суток. В дальнейшем пластинки хранят в эксикаторе.
Описание определения
0,5
г
органа
подопытного
животного
(печени,
почек,
легких,
мозга)
тщательно растирают в ступке, желательно с кварцевым песком. Затем прибавляют
3 мл 5% трихлоруксусной кислоты, перемешивают и переносят в пробирку. Чашку
дважды ополаскивают 2 мл бидистиллированной воды и смывы также переносят в
пробирку. Содержимое пробирки центрифугируют, жидкость над осадком осторожно
сливают в пробирку с притертой пробкой и к фильтрату по каплям прибавляют 20%
раствор
NaOH
до
нейтральной
реакции
(проба
с
лакмусовой
бумажкой).
Далее
прибавляют 0,2 мл раствора димедона и проводят синтез формдимедона так, как
описано выше.
После того как проба была выдержана 12 часов при комнатной температуре,
ее
переносят
в
испаритель
и
упаривают
под
вакуумом
досуха.
В
качестве
испарителя можно использовать поглотитель Полежаева. Чтобы ускорить процесс
упаривания, целесообразно между насосом и испарителем поместить ловушку со
льдом. Остаток растворяют в 0,1 мл этилового спирта.
В период
обработки органа,
проведения синтеза формдимедона,
упаривания растворов возможно попадание формальдегида в
воздуха.
Поэтому
расчете.
Результаты
анализа
Проба и контроль
расстоянии 1
см
от
учитываются
наносятся
нижнего
которое не подвергалось
края.
на
при
окончательном
середину
Во
пластинки
избежание
точки,
куда
были
на
потерь стенки
испарителей аккуратно споласкивают спиртом и смывы переносят в
же
из
для контроля в той же постановке опыта проводят
анализ соответствующего органа животного,
затравке.
пробу
нанесены проба и контроль.
те
Слева и справа
наносят пятна стандартного раствора формдимедона в количестве 0,2;
0,4;
0,6
мкг,
что
соответствует
стандартного раствора.
пластине ее
камере с насыщением,
притертой
0,012
мл
Для ускорения процесса высыхания пятен
на
подогревают
крышкой,
ацетоном (ацетон
хлороформа).
феном.
0,004;
Разделение вещества производят в
представляющей собой
на
дно
0,008;
сосуд
любой
формы
с
которого наливают смесь хлороформа с
добавляется
в
количестве
1/10
от
объема
После подъема растворителя на высоту 10 см пластинку
вынимают,
сушат на воздухе и опрыскивают хлороформенным раствором
йода.
пластинке
На
пластинки и обработки
синий
цвет.
появляются желтые пятна.
ее
раствором
Непрореагированный
формдимедон - с R
крахмала
После подсушивания
пятна
приобретают
димедон дает пятно около старта;
= 0,4-0,5.
f
Расчеты
Количество вещества в пробе определяется путем сравнения площади пятна
пробы
с
площадью
пятен
стандартных
растворов.
Количество
определяемого
формальдегида в пробе (в том или ином органе) рассчитывается в мкг/г по
формуле:
C1 - C2
g = ------- мкг/г, где
0,5
C1 - количество формальдегида в органе подопытного животного, мкг;
C2 - количество формальдегида в органе контрольного животного, мкг;
0,5 - навеска взятого для анализа органа, г.
ЛИТЕРАТУРА
1. Перегуд Е.А. Санитарная химия полимеров, Изд-во "Химия", Л., 1967,
стр. 60.
2.
Розенберг
П.Я.,
Беялко
Н.К.
Химические
методы
исследования
биологических субстратов в профпатологии. М., Изд-во "Медицина", 1969, стр.
171-173.
3. Nash T., The colorimetric estamation of formaldehyde by means of the
Hantrsch Reaction, Biochem. J. 1953.55.3.416.