Кубанский государственный медицинский университет

реклама
КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ
УНИВЕРСИТЕТ
На правах рукописи
Породенко Игорь Валериевич
ОЦЕНКА ЭФФЕКТОВ ОКТРЕОТИДА
НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ
НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ
03.00.13 – физиология,
14.00.15 – патологическая анатомия
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Краснодар – 2009
Работа
выполнена
в
Государственном
образовательном
учреждении высшего профессионального образования «Кубанский
государственный медицинский университет Федерального агентства
по здравоохранению и социальному развитию» (КГМУ).
Научные руководители:
доктор медицинских наук
Курзанов Анатолий Николаевич,
доктор биологических наук профессор
Славинский Александр Александрович.
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук профессор Сторожук Пётр Григорьевич
доктор медицинских наук профессор Ермилов Виктор Владимирович
Ведущая организация: Ставропольская государственная медицинская
академия.
Защита состоится «____» декабря 2009 г. в 10:00 часов на заседании
диссертационного совета Д208.038.01 при КГМУ по адресу: 350063,
Краснодар, ул. Седина, 4, КГМУ, тел. (861) 262-73-75.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке КГМУ.
Автореферат разослан «____» ноября 2009 года.
Ученый секретарь
диссертационного совета
доктор медицинских наук
профессор
2
Ю.Р. Шейх-Заде
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность
исследования.
Соматостатин

нейропептид,
вырабатываемый гипоталамусом, поджелудочной железой, а также
слизистой оболочкой желудка и кишечника (Chen D. et al., 2006; Raufman
J.P. et al., 2009). Этот пептид ингибирует секрецию соматотропного
гормона передней доли гипофиза, угнетает желудочную секрецию и
секрецию поджелудочной железы, тормозит выделение гастрина и
мотилина, уменьшает висцеральный кровоток. В экспериментах на крысах
показано,
что
соматостатин
стимулирует
активность
ретикуло-
эндотелиальной и лимфопоэтической систем. Изменение под его влиянием
активности клеток-киллеров отмечено у человека (Case C.C., Wirfel K.,
Vassilopoulou – Sellin R., 2002).
Синтетический
экзокринную
аналог
функцию
соматостатина
поджелудочной
октреотид
железы,
снижает
угнетает
объем
панкреатического секрета, содержание в нем ферментов и концентрацию
бикарбонатов. Октреотид оказывает прямое угнетающее действие на
экзокринную секрецию поджелудочной железы через специфические
мембранные рецепторы. Препарат также обладает противовоспалительным
действием, которое связано со стабилизацией клеточных мембран,
блокадой цитокиногенеза и продукции простагландинов, антиоксидантной
активностью (Ревтович М.Ю., 2003; Леонович С.И. с соавт., 2003).
Обнаружено, что подкожно вводимая однократная доза октреотида
подавляет секрецию инсулина через 30 минут после инъекции (Antony
L.B., Woltering E.A., Espenan G.D., 2002). Эти свойства октреотида
послужили основанием для его применения у больных, которым
проводятся оперативные вмешательства на поджелудочной железе (Gur R.,
Meier R., 1996).
Существует представление о возможной роли нейропептидов в
регуляции деятельности иммунной системы на разных уровнях ее
3
организации – от субклеточного до системного. Накапливается все больше
данных, свидетельствующих о роли нейропептидов, в том числе и
соматостатина, в обеспечении взаимодействия нервной и иммунной систем
(Perry M.D. et al., 2009).
Пептиды,
взаимодействуя
со
специфическими
рецепторами,
расположенными на нейтрофильных лейкоцитах и в центральной нервной
системе, способны регулировать механизмы резистентности организма
(Kumar U. et al., 2009). Введение пептидов повышает уровень содержания
катионных
белков
в
нейтрофильных
лейкоцитах.
Установлено
корригирующее влияние пептидов на поврежденный рецепторный аппарат
нейтрофильных лейкоцитов (Andina N. et al., 2009).
Существует предположение, что система тканевых нейтрофилов
выполняет посредническую роль между центральной нервной системой и
соединительной тканью (Третьякова И.Е., Долгушин И.И., 2004).
Нейтрофильные лейкоциты получают сигналы по нейросекреторным
каналам, реализуют в тканях свой функциональный потенциал и
одновременно осуществляют механизм обратной связи.
На поверхности нейтрофилов обнаружены рецепторы к различным
пептидам, осуществляющим регуляторную функцию (Маянский Д.Н.,
Маянская С.Д., 2001). Количество и аффинность рецепторов, их
способность вызывать различные проявления активации нейтрофильных
лейкоцитов изменяются в зависимости от уровня функционального
состояния клеток (Prasad V. et al., 2007). Нейтрофильные
способны
продуцировать
пептиды,
участвующие
лейкоциты
в
регуляции
иммуногенеза, что позволяет рассматривать нейтрофил как регуляторную
клетку, связанную с поддержанием постоянства внутренней среды
организма (Falanga A. et al., 2000; Femling J.K., 2005).
Установлено, что инфильтрация нейтрофилами поджелудочной
железы – ключевое событие в развитии панкреатита (Tu W. et al., 2000;
4
Wang X.P. et al., 2003). Ацинарные клетки поджелудочной железы
способны нацеливать нейтрофильные лейкоциты на свою поверхность, что
может привести к смерти не только клеток, но и самой железы (Hegyi P. et
al., 2009). Это свидетельствует о том, что фатальный панкреатит может
быть результатом прежде всего избыточной стимуляции нейтрофильных
лейкоцитов (Maher O. et al., 1999; Zaninovic V. et al., 2000).
Вопрос о влиянии соматостатина и октреотида на функциональную
активность нейтрофилов в норме и при развитии
патологических
состояний остается недостаточно изученным.
Цель исследования
Оценить влияние октреотида на функциональную активность
нейтрофильных лейкоцитов крови в норме и при наличии патологических
изменений поджелудочной железы у людей и крыс.
Задачи исследования
1. Выявить воздействие октреотида на способность нейтрофилов
крови здоровых людей к активации in vitro.
2. Охарактеризовать
октреотидиндуцированные
эффекты
на
функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов
больных острым панкреатитом in vivo и in vitro.
3. Определить характер изменений функциональной активности
нейтрофилов периферической крови крыс в процессе развития острого
экспериментального панкреатита (ОЭП).
4. Оценить влияние октреотида на состояние ткани поджелудочной
железы крыс в динамике развития ОЭП.
5. Установить характер воздействия октреотида на функциональнометаболическую
активность
нейтрофильных
лейкоцитов
в
физиологических условиях и при остром панкреатите.
5
Новизна результатов исследования
1. Представлены новые данные о влиянии октреотида in vitro на
способность к активации нейтрофильных лейкоцитов периферической
крови здоровых людей в зависимости от концентрации пептида.
2. Выявлена
действие
in
способность
vitro
на
октреотида
повышенную
оказывать
ингибирующее
функциональную
активность
нейтрофилов крови больных с острым панкреатитом.
3. Найдены
новые
особенности
изменения
функционально-
метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов (активность
NADPH-оксидазы, миелопероксидазы, щелочной фосфатазы, содержание
катионных белков, активационный потенциал ядерного хроматина) при
развитии ОЭП.
4. Получены сведения о протекторном действии октреотида на ткань
поджелудочной
железы
и
ингибирующем
–
на
функционально-
метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов крови крыс с
ОЭП.
Теоретическая значимость исследования
Выявлено модулирующее действие октреотида на функциональнометаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов в норме и при
патологии
(острый
панкреатит),
что
расширяет
современные
представления о взаимодействии нейроэндокринной и иммунной систем
организма.
Результаты проведенной работы могут быть использованы в учебном
процессе со студентами медицинских специальностей, а также служить
основой для дальнейших прикладных исследований.
Практическая значимость исследования
Обнаруженное ингибирующее влияние октреотида на повышенную
функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов
in vitro у людей с острым панкреатитом и in vivo у крыс с острым
6
экспериментальным
панкреатитом
может
быть
использовано
для
иммунокоррекции состояний, сопровождающихся избыточной активацией
нейтрофилов крови.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объекты исследования: венозная кровь 25 здоровых людей, 25
больных
острым
панкреатитом
и
капиллярная
кровь
38
крыс.
Экспериментальная часть работы выполнена на стандартизированных
аутбредных крысах-самцах породы Sprague Dawley 4-5 месячного возраста
массой 420-500 граммов, которые были разделены на 5 групп: 1 группа –
ложнооперированые животные (5 крыс) с минимальным хирургическим
вмешательством в виде лапаротомии; 2 группа – животные с острым
экспериментальным панкреатитом (9 крыс); 3 группа – животные с острым
экспериментальным панкреатитом, получавшие инъекции октреотида (9
крыс); 4 группа – ложнооперированые животные (5 крыс), получавшие
инъекции октреотида; контрольная группа – интактные, здоровые
животные (10 крыс).
Моделировали ОЭП путем глубокого охлаждения обеих поверхностей
поджелудочной железы хлорэтилом (Малхасян В.А., Симоворян П.Р., 1972).
Для подтверждения развития ОЭП проводили морфологическое исследование
состояния поджелудочной железы крыс в динамике эксперимента.
Функционально-метаболическую
активность
нейтрофилов
исследовали на первые (до манипуляций), третьи (после операции) и
седьмые сутки эксперимента. В нейтрофильных лейкоцитах определяли
активность NADPH-оксидазы с помощью НСТ-теста (Нестерова И.В.,
1980), активность миелопероксидазы оценивали по методу Шафран М.Г. и
соавт. (1979), щелочной фосфатазы – по методике М.Г. Шубича (1965).
Содержание катионных белков выявляли по методике А.А. Славинского и
Г.В. Никитиной (1999). Активационный потенциал ядерного хроматина
оценивали поляризационно-оптическим методом А.А. Евглевского (2000).
7
Компьютерную
морфометрию
изображения
нейтрофильных
лейкоцитов выполняли при помощи цветной телевизионной системы для
микроскопических исследований «CitoW» (Диаморф, Москва). Результаты
оценивали с использованием интегрального цитохимического показателя ИЦП (Славинский А.А., 2000).
Оценку значимости различий между средними значениями двух
сравниваемых
исследуемых
дисперсионного
анализа,
показателей
вычисляли
выполняли
критерий
с
помощью
Стьюдента
(t)
и
доверительную вероятность различий (p) (Гланц С., 1999). Диапазон,
ограниченный ±2 S (стандартное отклонение от средней величины),
использовали при характеристике границ нормы как наиболее приемлемый
для гематологических показателей (Воробьев А.И., 2002).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Влияние октреотида на функционально-метаболическую
активность нейтрофилов крови здоровых людей in vitro
Изучение
влияния
нейропептида
на
функционально-
метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов производили в
опытах in vitro с помощью постановки НСТ-теста, отражающего
изменение активности NADPH-оксидазы, по которой можно судить о
способности нейтрофилов к активации. В контрольной группе без
инкубации с октреотидом средние значения ИЦП составили 4,90±0,3 отн.
ед. Воздействие пептида в диапазоне концентраций от 5∙10 -4 М до 5∙10-7 М
способствовало постепенному снижению активности NADPH-оксидазы.
Наибольшее
уменьшение
показателей
получено
в
результате
использования октреотида в концентрации 5∙10-7 М. При этом значения
ИЦП составили 1,92±0,2 отн. ед., что ниже в 2,5 раза по сравнению с
контролем (рис.1). Инкубация крови с раствором пептида в более низких
концентрациях (5∙10-9 М и 5∙10-14 М) не вызывала такого выраженного
8
угнетения функционально-метаболической активности нейтрофилов, как
действие октреотида в концентрации 5∙10-7 М.
Влияние октреотида на функционально-метаболическую активность
нейтрофилов крови больных острым панкреатитом in vitro
При постановке НСТ – теста ИЦП нейтрофильных лейкоцитов на
первые
сутки
наблюдения
превышал
аналогичный
показатель
нейтрофилов здоровых людей и составил 8,76±0,3 относительных единиц,
что по сравнению с группой здоровых людей без инкубации с
октреотидом было выше в 1,8 раза (p<0,05). Этот же показатель
нейтрофилов на первые сутки наблюдения оказался меньше, чем в
нейтрофилах
образцов
крови,
не
подвергавшихся
инкубации
с
октреотидом, но при этом он был достоверно (p<0,05) больше
соответствующего показателя у здоровых людей (рис. 2).
На третьи сутки наблюдения ИЦП нейтрофилов в пробах крови,
инкубированных in vitro с октреотидом, в 2 раза уменьшился как по
сравнению с результатами в первые сутки наблюдения, так и, хотя в
меньшей степени, по сравнению с соответствующим показателем у
здоровых лиц (в 1,2 раза).
На седьмые сутки наибольшие изменения в данной серии
исследований отмечены по параметрам ИЦП в нейтрофилах образцов
крови больных острым панкреатитом после инкубации с октреотидом. Он
оказался в 5,5 раз меньше этого показателя функциональной активности
нейтрофильных лейкоцитов по сравнению со здоровыми испытуемыми, а
также в 4,3 раза меньше соответствующих значений, зафиксированных в
тех же условиях у исследуемых пациентов на третьи сутки наблюдения.
9
отн.ед
9
8,5
8
7,5
7
6,5
6
5,5 4,9
5
4,5
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
1,92
контроль
10-7
Рис. 1
отн.ед
8,76
9
8,5
8
7,5
7
6,5
6
5,5
5
4,5
4
3,19
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
1 сутки
4,75
4,58
1,52
0,35
3 сутки
7 сутки
Рис. 2
Рис. 1. Влияние октреотида на функционально-метаболическую
активность нейтрофилов здоровых людей.
Активность NADPH-оксидазы (отн. ед.):
– кровь здоровых людей без инкубации с октреотидом (контроль);
– кровь здоровых людей, инкубированная с октреотидом в концентрации
5∙10-7 М в течение 60 минут.
Рис. 2. Влияние октреотида на функционально-метаболическую
активность нейтрофилов больных острым панкреатитом.
Активность NADPH-оксидазы (отн. ед.):
– кровь больных острым панкреатитом без инкубации с октреотидом;
– кровь больных острым панкреатитом, инкубированная с октреотидом в
концентрации 5∙10-7 М в течение 60 минут.
ВЛИЯНИЕ ОКТРЕОТИДА НА СОСТОЯНИЕ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ
ЖЕЛЕЗЫ КРЫС ПРИ ОСТРОМ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ
ПАНКРЕАТИТЕ
Проведено моделирование ОЭП у 38 крыс-самцов. В качестве групп
сравнения служили ложнооперированные животные без моделирования
ОЭП, часть из которых получала инъекции раствора октреотида, а также
животные, у которых выполняли моделирование ОЭП, но лечение
октреотидом не проводили.
В селезеночном сегменте поджелудочной железы уже на 3-и сутки
заболевания отмечались крупные масштабы незавершенного некроза
10
ацинарной ткани и дольки с неполноценной протоковой регенерацией, а
также жировые некрозы с нагноением. К 7-м суткам поврежденные дольки
поджелудочной
железы
подвергались
склерозу
с
сохраняющимся
воспалением. Незавершенная регенерация жировых интерстициальных
некрозов
приводила
инфильтратов,
к
формированию
отграниченных
крупных
фиброзной
воспалительных
капсулой,
спаянной
с
окружающими органами (рис. 3).
Лечение ОЭП октреотидом тормозило прогрессирование ацинарного
некроза во всех отделах поджелудочной железы, приводило к быстрому
(3-и
сутки)
отграничению
атрофирующихся
путем
протоковой
трансформации долек от неповрежденной ацинарной ткани. Мелкие
интерстициальные жировые некрозы под влиянием миграции лейкоцитов
подвергались
разобщению,
элиминации
детрита
под
воздействием
макрофагов и заместительному склерозу. При этом крупные жировые
некрозы инкапсулировались, отделяясь от ткани поджелудочной железы
фиброзной капсулой. Вокруг таких инкапсулированных некрозов в
результате перипроцесса формировался воспалительный инфильтрат с
вовлечением окружающих органов.
Таким
образом,
можно
заключить,
что
при
лечении
ОЭП
октреотидом морфологически выявлены положительные эффекты влияния
на течение заболевания по сравнению с контрольной серией без лечения.
Они состоят в уменьшении масштабов ферментного некроза ацинарной и
жировой ткани, ранних процессах репарации поврежденных тканей без
нагноения. Репарация ацинарной ткани протекает по типу неполноценной
протоковой трансформации с последующим склерозом и убылью в
большей или меньшей степени ацинарной ткани. Заживление жировых
некрозов происходит по типу полноценной завершенной регенерации:
сначала острого демаркационного воспаления с завершенным протеолизом
липолитического некроза без нагноения, затем сменой воспалительного
11
инфильтрата на макрофагальный с элиминацией некротического детрита и
завершается заместительным склерозом и липоматозом без остаточных
признаков интерстициального склероза.
а
б
в
г
Рис. 3. Патогистологические изменения в селезеночном сегменте
поджелудочной железы на 3 и 7 сутки ОЭП у крыс без лечения (а, б) и при
лечении октреотидом (в, г):
а – атрофия и склероз дольки, макрофагальное воспаление вокруг
жирового некроза (х125); б – незавершенный краевой некроз ацинусов с
миграцией лейкоцитов в некротизированнные ткани (х400); в – краевая
атрофия долек с воспалением интерстиция (х125); г – фиброзная капсула
вокруг жирового некроза, спаянная с печенью (х125). Окраска
гематоксилином и эозином.
12
ВЛИЯНИЕ ОКТРЕОТИДА НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ
АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ КРОВИ КРЫС ПРИ ОСТРОМ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ПАНКРЕАТИТЕ
NADPH-оксидаза. В течение первых суток эксперимента не
наблюдалось существенных изменений активности NADPH-оксидазы
нейтрофильных лейкоцитов крови у подопытных животных всех групп. На
третьи сутки эксперимента средние значения ИЦП нейтрофилов в 1-й
группе
ложнооперированных
животных
не
имели
статистически
достоверных отличий по сравнению с группой интактных животных и с
группой
крыс,
которой
проводилась
лапаротомия
на
1-е
сутки
эксперимента. Во 2-й группе крыс с ОЭП значения ИЦП достигали
значений 2,09±0,44 относительных единиц, что говорит о достоверном
(p<0,05) повышении активности NADPH-оксидазы нейтрофилов в 4 раза
по сравнению с активностью этого фермента у животных 1-й группы и
более чем в 3,6 раза превышает соответствующий показатель у животных
этой же группы на 1-е сутки наблюдения (рис. 4). Это свидетельствует о
том, что развитие ОЭП сопровождается резким повышением активности
NADPH-оксидазы нейтрофилов крови крыс. Значения ИЦП в 3-й группе
животных
с
ОЭП
и
введением
октреотида
составили
0,86±0,12
относительных единиц, что по сравнению со 2-й группой животных с ОЭП
ниже в 2,4 раза (р<0,01). Таким образом, введение октреотида достоверно
уменьшило повышение активности этого фермента на фоне ОЭП. В 4-й
группе ложнооперированных животных введение октреотида привело к
снижению активности NADPH-оксидазы нейтрофилов до 0,41±0,01, что по
отношению к группе животных с лапаротомией на 3-и сутки эксперимента
ниже в 1,3 раза (р<0,05), а по сравнению с группой ложнооперированных
животных, получавших инъекции октреотида, меньше в 1,1 раза (p>0,05).
На седьмые сутки эксперимента в 1-й группе крыс различия не
были статистически достоверными в сравнении с группой интактных
13
животных, а также в сравнении со значениями ИЦП нейтрофилов в группе
ложнооперированных животных на 1-е и 3-и сутки наблюдения. Во 2-й
группе животных с ОЭП значения ИЦП превышали в 3 раза этот
показатель в группе ложнооперированных крыс и составили 1,68±0,04
относительных
единиц
(р<0,01).
Активность
NADPH-оксидазы
нейтрофилов у крыс с ОЭП в этот период наблюдения в 2,9 раза
превышала
показатель
активности
этого
фермента
на
1-е
сутки
наблюдения, но по сравнению с 3-ми сутками оказалась в 1,2 раза меньше
(p<0,05). Значения ИЦП в 3-й группе
животных с ОЭП и введением
октреотида снижались до 0,48±0,02, что по сравнению со 2-й группой крыс
с ОЭП меньше в 3,5 раза (р<0,01) и в 1,8 раза меньше (p<0,05) того же
показателя в 3-й группе животных на 3-и сутки наблюдения.
Таким образом, введение октреотида ложнооперированным крысам
не
вызвало
заметных
изменений
нейтрофильных лейкоцитах.
активности
NADPH-оксидазы
в
Развитие ОЭП привело к достоверному
увеличению активности этого фермента, в то время как введение
животным октреотида существенно уменьшило, а к концу периода
наблюдения фактически нормализовало уровень активности NADPHоксидазы нейтрофилов крови.
отн.ед.
2,5
2
1,5
1
0,5
0,54 0,58 0,58 0,52 0,47
0,55 2,09 0,86 0,41
0,53 1,68 0,48 0,54
0
1 сутки
3 сутки
7сутки
Рис. 4. Влияние октреотида на динамику активности NADPH-оксидазы
нейтрофилов крыс при моделировании острого экспериментального
панкреатита:
– интактные животные;
– лапаротомия;
– ОЭП;
– ОЭП с введением октреотида;
– лапаротомия с введением
октреотида.
14
Миелопероксидаза. Колебания активности фермента в 1й
группе
ложнооперированных крыс на третьи и седьмые сутки эксперимента были
статистически не достоверны (рис. 5).
На третьи сутки эксперимента во 2й группе животных
с ОЭП
введение октреотида привело к увеличению активности миелопероксидазы
в 2 раза по сравнению с контрольной группой (р<0,05). Важно, что
активность миелопероксидазы нейтрофилов на 3-и сутки эксперимента
достоверно снизилась (p<0,05) по сравнению с 1-ми сутками наблюдения и
в группе животных с острым экспериментальным панкреатитом, и в группе
животных
с
этой
же
экспериментальной
моделью
патологии
поджелудочной железы, которые получали инъекции октреотида.
На седьмые сутки эксперимента во 2й группе животных с ОЭП
активность миелопероксидазы несколько повысилась (в 1,2 раза), но была
существенно ниже того же показателя на 1-е сутки наблюдения (в 1,5 раза;
p<0,05).
отн.ед.
1
0,5
0,67 0,67 0,68 0,69 0,65
0,72 0,39 0,42 0,78
0,75 0,46 0,83 0,82
0
1 сутки
3 сутки
7сутки
Рис. 5. Влияние октреотида на динамику активности миелопероксидазы
нейтрофилов крыс при моделировании ОЭП:
– интактные животные;
– лапаротомия; – ОЭП; – ОЭП с введением октреотида;
– лапаротомия с введением октреотида.
Сопоставление уровня активности миелопероксидазы нейтрофильных
лейкоцитов на этом этапе эксперимента с аналогичным показателем во
15
всех группах животных на 1-е и 3-и сутки наблюдения показало, что
наиболее значимое изменение активности фермента имело место в группе
подопытных животных с острым экспериментальным панкреатитом,
которые
получали
инъекции
октреотида.
Введение
октреотида
ложнооперированным животным сопровождалось заметным увеличением
активности миелопероксидазы нейтрофилов по сравнению с 1-и сутками.
Щелочная фосфатаза.
На третьи сутки во 2й группе животных значения ИЦП достигали
7,06±0,18 относительных единиц, что свидетельствует о повышении
активности щелочной фосфатазы по сравнению с 1-й группой в 2,1 раза
(рис. 6).
Значения активности щелочной фосфатазы в 3-й группе крыс с ОЭП и
введением октреотида по сравнению со 2-й группой животных с ОЭП, не
получавших препарат, были меньше в 1,4 раза (5,18±0,06, р<0,05).
В 4-й группе животных (ложнооперированные, получавшие инъекции
октреотида) активность щелочной фосфатазы составила 3,43±0,17.
отн.ед.
8
7,5
7
6,5
6
5,5
5
4,5
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
3,52 3,36 3,49 3,73 3,34
1 сутки
3,28 7,06 5,18 3,43
3 сутки
3,42 6,14 4,74 3,40
7сутки
Рис. 6. Влияние октреотида на динамику активности щелочной фосфатазы
нейтрофилов крыс при моделировании острого экспериментального
панкреатита: – интактные животные;
– лапаротомия; – ОЭП;
– ОЭП с введением октреотида;
– лапаротомия с введением
октреотида.
16
На седьмые сутки активность фермента несколько снизилась, но
при этом значения активности фермента достоверно (p<0,05) превышали
соответствующие показатели как интактных животных, так и у крыс с
ОЭП в 1-е сутки наблюдения. Введение октреотида в течение 7 суток
крысам с ОЭП оказало достоверное (p<0,05) влияние на активность
щелочной фосфатазы. Активность фермента под влиянием аналога
соматостатина была существенно ниже и на 3-и, и на 7-е сутки наблюдения
по сравнению с группой животных с ОЭП, не получавших инъекции
октреотида, хотя к концу эксперимента все же несколько превышала этот
показатель
в
группе
ложнооперированных
интактных
животных
животных.
значимых
В
обеих
изменений
группах
активности
щелочной фосфатазы нейтрофильных лейкоцитов крови на протяжении
всего периода наблюдения не отмечено.
Неферментные катионные белки. Содержание катионных белков в
1й группе ложнооперированных крыс составило 0,68±0,01 относительных
единиц (рис. 7). На третьи сутки в группе крыс с ОЭП значения достигли
2,90±0,05 относительных единиц, что указывает на повышение содержания
неферментных
катионных
белков
по
сравнению
с
группой
ложнооперированных крыс в 4 раза (р<0,01), и в сравнении с группой
животных с ОЭП на первые сутки эксперимента в 4,1 раза (p<0,05). На
седьмые сутки содержание катионных белков в нейтрофилах достоверно
(p<0,01) возросло у животных с ОЭП как не получавших октреотид, так и
получавших его инъекции. Однако у животных с ОЭП, получавших
инъекции октреотида, увеличение названного показателя было достоверно
(p<0,05) меньшим. Следует отметить, что в динамике экперимента
наиболее значимые изменения содержания неферментных катионных
белков в нейтрофильных лейкоцитах крыс отмечены в группах животных с
моделированием острого экспериментального панкреатита.
17
отн.ед.
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0,76
0,68
0,7
0,78
0,91
0,71
2,9
1,97
0,95
0,8
1,93
1,51
1,00
0
1 сутки
3 сутки
7сутки
Рис. 7. Влияние октреотида на динамику содержания катионных белков
нейтрофилов крыс при моделировании острого экспериментального
панкреатита: – интактные животные;
– лапаротомия; – ОЭП;
– ОЭП с введением октреотида;
– лапаротомия с введением
октреотида.
Ядерный хроматин. В 1й группе ложнооперированных животных и
во 2й группе
крыс, получавших инъекции октреотида, статистически
достоверных изменений показателя активационного потенциала ядерного
хроматина нейтрофилов не выявлено (рис. 8).
отн.ед.
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
1,91
1,91
1,91
1,88
1,92
1,93
2,04
3,42
2,46
1,94
2,00
2,81
2,16
0
1 сутки
3 сутки
7сутки
Рис. 8. Влияние октреотида на активационный потенциал ядерного
хроматина
нейтрофилов
крыс
при
моделировании
острого
экспериментального панкреатита: – интактные животные;
– лапаротомия; – ОЭП; – ОЭП с введением октреотида;
– лапаротомия с введением октреотида.
18
На третьи сутки эксперимента моделирование ОЭП в 3й группе
животных вызвало повышение показателя активационного потенциала
хроматина нейтрофилов в 1,8 раза по сравнению с показателем
контрольной группы (р<0,01). Инъекции октреотида животным 4й группы с
ОЭП снизили активационный потенциал хроматина нейтрофильных
лейкоцитов в 1,4 раза (р<0,01), по сравнению с группой животных с ОЭП
без лечения.
На седьмые сутки эксперимента у крыс 3й группы с ОЭП показатель
активационного потенциала хроматина нейтрофильных лейкоцитов был
выше значения контрольной группы в 1,1 раза (р<0,01). Однако это
значение было ниже, чем показатель, полученный на третьи сутки
эксперимента, в 1,2 раза (р<0,01). В 4й группе животных с ОЭП, на фоне
лечения октреотидом, наблюдалось снижение показателя активационного
потенциала ядерного хроматина нейтрофилов в 1,3 раза по сравнению с 3й
группой животных (р<0,01).
ВЫВОДЫ
1. Синтетический аналог соматостатина нейропептид октреотид у
здоровых людей угнетает функционально-метаболическую активность
нейтрофильных лейкоцитов, о чем свидетельствует снижение активности
NADPH-оксидазы. Наиболее выраженное действие пептид оказывает в
концентрации 5∙10-7М.
2. У больных острым панкреатитом октреотид снижает повышенную
функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов
венозной крови in vitro, что проявляется уменьшением активности
NADPH-оксидазы в цитоплазме клеток.
3. Моделирование острого экспериментального панкреатита у крыс
приводит к повышению функционально-метаболической активности
нейтрофильных лейкоцитов. Воспалительно-деструктивным изменениям
в поджелудочной железе сопутствует увеличение в нейтрофилах крови
19
активационного потенциала ядерного хроматина, активности NADPHоксидазы, щелочной фосфатазы и содержания неферментных катионных
белков со снижением активности миелопероксидазы.
4. Репаративные изменения в поджелудочной железе крыс при остром
экспериментальном панкреатите сопровождаются спонтанным снижением
активационного потенциала ядерного хроматина, активности NADPHоксидазы
и
щелочной
неферментных
фосфатазы,
катионных
белков
и
уменьшением
содержания
увеличением
активности
миелопероксидазы в нейтрофилах.
5. Инъекции октреотида животным с острым экспериментальным
холодовым
панкреатитом
оказывают
протективное
действие
на
поджелудочную железу. При репаративных изменениях в поджелудочной
железе после применения октреотида
метаболической
активности
показатели функционально-
нейтрофильных
лейкоцитов
крови
нормализуются.
6. Октреотид проявляет модулирующее действие на функциональнометаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов, снижая её при
избыточном исходном уровне. Эффекты октреотида проявляются in vitro и
in vivo в норме и при остром панкреатите как у экспериментальных
животных, так и у людей.
РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Породенко
И.В.
Влияние
октреотида
на
активность
нейтрофильных лейкоцитов при остром панкреатите
// Кубанский
научный медицинский вестник. – 2008. – № 1-2. – С. 79-83.
2. Породенко
И.В.,
Курзанов
А.Н.,
Славинский
А.А.
Октреотидиндуцированные изменения патоморфологических проявлений
острого экспериментального панкреатита // Вестник хирургической
гастроэнтерологии. – 2006. – № 1. – С. 127-128.
3. Породенко И.В., Курзанов А.Н. Лиганды соматостатиновых
рецепторов в экспериментальной и клинической панкреатологии.
Сообщение 3. Октреотид и соматостатин в хирургической панкреатологии
20
и онкопатологиии поджелудочной железы // Успехи современного
естествознания. – 2006. – № 8. – С. 15-17.
4. Породенко И.В., Курзанов А.Н. Лиганды соматостатиновых
рецепторов в экспериментальной и клинической панкреатологии.
Сообщение 1. Базисные предпосылки использования в гастроэнтерологии
// Успехи современного естествознания. – 2006. – № 10. – С. 14-16.
5. Породенко И.В., Курзанов А.Н. Лиганды соматостатиновых
рецепторов в экспериментальной и клинической панкреатологии.
Сообщение 2. Соматостатин и его аналоги в лечении острого и
хронического панкреатита // Успехи современного естествознания. – 2006.
– № 10. – С. 17-20.
6. Породенко
И.В.
Иммунотропные
эффекты
лигандов
соматостатиновых рецепторов // Открытое образование. – 2006. – № 3
– С. 248-250.
7. Породенко И.В., Беспалова Ж.Д., Славинский А.А.,
Курзанов А.Н. Морфологические изменения в поджелудочной железе при
лечении экспериментального панкреатита октреотидом // Новые
информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и
экологии, 2007. Материалы ХIV международной конференции и
дискуссионного научного клуба. – Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 31 мая –
9 июня 2007. – С. 225-227.
8. Породенко И.В., Славинский А.А., Балачевский Б.В.,
Курзанов А.Н. Октреотидиндуцированная оптимизация функциональной
активности нейтрофильных лейкоцитов // Конгресс «Человек и лекарство.
Краснодар – 2008». – 2008. – С. 72.
9. Славинский А.А., Балачевский Б.В., Породенко И.В.
Функционально-метаболическая активность нейтрофильных лейкоцитов
при остром панкреатите // Тез. докл. ХII международного конгресса
«Парентеральное и энтеральное питание». – 2008. – С. 28-29.
10. Курзанов А.Н., Славинский А.А., Породенко И.В.,
Балачевский Б.В. Пептидергическая модуляция функциональнометаболической активности нейтрофильных лейкоцитов // Науч. труды II
Съезда физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека». МоскваКишинев. – 2008. – С. 160.
11. Курзанов А.Н., Славинский А.А., Породенко И.В.,
Балачевский Б.В. Пептидергическая модуляция функциональнометаболической активности нейтрофильных лейкоцитов как компонент их
панкреатопротекторного действия // Тезисы докладов IV Российского
симпозиума «Белки и пептиды». Казань, 23-27 июня 2009 г. – 2009. – С. 60.
21
22
Породенко Игорь Валериевич
ОЦЕНКА ЭФФЕКТОВ ОКТРЕОТИДА
НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ
НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ
автореферат
Подписано в печать 02.11.2009. Формат А5.
Ризография. Усл.печ.л.1,3. Тираж 100 экз. Заказ 90,
МУ «Краснодарский медицинский информационно-вычислительный
центр»
350059, г. Краснодар, ул. Дунайская, 62.
23
Скачать