БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЕ ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ В КЛИНИЧЕСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ Угарова Наталья Николаевна

БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЕ
ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ
В КЛИНИЧЕСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ
ООО «Люмтек», Москва, Научный Парк МГУ
Генеральный директор, профессор, доктор наук
Угарова Наталья Николаевна
E-mail: [email protected]
КЛАССИЧЕСКИЙ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
ДЕТЕКЦИИ МИКРОБНЫХ КЛЕТОК




длительность анализа: от 24-120 часов до 5 недель
высокая трудоемкость
анализ в специализированной лаборатории
экологическая опасность
АТФ - УНИВЕРСАЛЬНЫЙ ИНДИКАТОР
ПРИСУТСТВИЯ ЖИВЫХ КЛЕТОК
Биологический
материал
Ткани
млекопитающих
Бактерии
Одноклеточные
водоросли
Содержание АТФ,
мкг/г сухой биомассы
500-5000
1000-10000
500-5000
КОРРЕЛЯЦИЯ МЕЖДУ КОНЦЕНТРАЦИЕЙ АТФ И
ТИТРОМ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КЛЕТОК В ОБРАЗЦЕ
10
10
7
КОЕ/мл
6
10
5
10
10
R=0.98
4
3
10
ATФ, моль/мл
2
10
-15
10
-14
10
-13
10
-12
10
-11
10
-10
ЛЮЦИФЕРИН-ЛЮЦИФЕРАЗНАЯ СИСТЕМА СВЕТЛЯКОВ
АТФ-реагент
D-люциферин, MgSO4,
люцифераза
+
ATФ
Продукты реакции
+
Свет (max = 570 нм)
АТФ-РЕАГЕНТЫ
(защищены патентами РФ)
Основные достоинства:
 Высокая активность

Стабильный во времени
сигнал биолюминесценции

Длительный срок хранения
ЛЮМИНОМЕТР «ЛЮМ-1»
(совместная разработка МГУ и ООО «Люмтек»)
широкий рабочий интервал
измеряемых сигналов
вес прибора: 650 г
рабочий диапазон
температур: от 10С до 30С
встроенная память
наличие интерфейса
программное обеспечение
автономное питание
КОРРЕЛЯЦИЯ МЕЖДУ КОНЦЕНТРАЦИЕЙ АТФ И
ИНТЕНСИВНОСТЬЮ БИОЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ
100000 Imax, усл. ед.
10000 R=0.99
1000
АТФ, моль/мл
100
10
-15
-14
10
10
-13
10
-12
10
-11
Корреляция между интенсивностью
биолюминесценции и титром бактериальных
клеток в анализируемом образце
100000 Imax, усл. ед.
(1)
10000 R=0.99
1000
КОЕ/мл
100
2
10
3
10
4
10
5
10
6
10
БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ
АТФ-МЕТРИЯ В МЕДИЦИНЕ
 скрининг микробных загрязнений в биологических
жидкостях ( моча, кровь, раны)
 быстрое определение чувствительности
возбудителя к антибиотикам при химиотерапии
инфекционных заболеваний
 оценка чистоты оборудования и материалов в
операционных и других помещениях клиник
БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ СКРИНИНГ БАКТЕРИУРИИ
(10-минутный тест)
Общее
содержание Общий АТФ,
микробных
пмоль/мл
клеток, КОЕ/мл
0 – 103
<60
103 – 104
60 - 150
Свыше 105
Свыше 150
Рекомендации
Норма
посев не
требуется
Группа риска
посев
требуется
Патология
посев
требуется
АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
КЛИНИЧЕСКИХ ОБРАЗЦОВ
Коэффициент относительного подавления
роста микробных клеток под действием антибиотика
U(%) = 100 x [(1- (Iпроба) /(Iконтр)]
ЭКСПРЕС-КОНТРОЛЬ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ
ЧИСТОТЫ В КЛИНИКЕ
Сильно загрязненные
поверхности
Длительность
анализа – 5 мин
Мало загрязненные
поверхности
Длительность
анализа – до 7 часов
Стерильные поверхности
Длительность
анализа – 7 часов
Более 100 клеток на 100 см2
Высокий сигнал
биолюминесценции
Менее 100 клеток на 100 см2
Измерение сигнала
биолюминесценции только
после инкубирования
Нет сигнала
биолюминесценции
ПРЕИМУЩЕСТВА ТЕСТ-СИСТЕМ ЛЮМТЕК

Оперативность: длительность анализа от 2 до 30 мин на
один образец

Мобильность: возможность проводить анализ в полевых
условиях

Экологическая чистота: безотходные технологии

Высокая чувствительность: от 100 КОЕ/мл(г) образца без
предварительной инкубации

Простота и удобство: анализ проводится лаборантом
средней квалификации

Правильность: точная количественная оценка
жизнеспособных клеток в образце