Каталитические активности абзимов у больных шизофренией
advertisement
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, г. Томск НИИ психического здоровья СО РАМН, г. Томск Институт химической биологии и фундаментальной медицины, г. Новосибирск Каталитические активности абзимов у больных шизофренией Докладчик: студент 4 курса МБФ Фаттахов Николай Сергеевич Научные руководители: Смирнова Л.П., к.м.н., н.с. НИИПЗ СО РАМН Бунева В.Н., д.б.н., г.н.с. ИХБФМ СО РАН Шизофрения – тяжелое психическое заболевание с неизвестной до сих пор этиологией и патогенезом, протекающее с полиморфной симптоматикой и приводящее к особому дефекту личности. Гипотезы шизофрении: Индоламиновые (при участии серотонина и его производных) Катехоламиновая: 0-метилирования и дофаминовая Генетическая Аутоинтоксикационная Иммунологическая (аутоиммунная) Механизмы тардивной (поздней) дискинезии у больных шизофренией Постсинаптические дофаминовые рецепторы Абзимы (AntiBody enZYMES) IgG Б. Дженкс, 1969 г. Актуальность исследования Открытие природных абзимов поставило много вопросов об их возможной биологической функции. Остается неясным, являются ли каталитические антитела, обнаруживаемые при патологиях, реальными эффекторами патогенного иммунного ответа, или же их образование вторично после нарушения гомеостаза иммунных сетей. Исследования каталитической активности антител крови больных психическими расстройствами и, в частности шизофренией, ранее не проводились. Цель Исследовать каталитическую активность иммуноглобулинов класса G, выделенных из крови больных шизофренией Объект исследования Для выделения Ig G бралась кровь 20 больных шизофренией, находящихся на лечении в отделении эндогенных расстройств НИИ психического здоровья СО РАМН, и 15 здоровых лиц. Методы исследования Иммуноглобулины G выделены из сыворотки крови здоровых доноров и больных шизофренией методом аффинной хроматографии на колонке Protein-G Sepharose. ДНКазную активность антител определяли по степени превращения суперскрученной формы ДНК плазмиды pBluescript в кольцевую и линейную формы (электрофорез в агарозном геле) Протеолитическую активность оценивали по степени гидролиза одного из пептидов основного белка миелина (ОБМ) методом тонкослойной хроматографии. Методом ИФА (наборы ORGENTEC ANTI-dsDNA, ANTI-ssDNA) определяли титр IgG к в одно- и двунитевой ДНК в сыворотке крови Расчет активности велся по анализу электрофореграмм в программе Image Quant 5.2., cтатистическую обработку полученных данных осуществляли с помощью программы Statistica 6.0. Дизайн исследования Vacuette С АКТИВАТОРОМ ОБРАЗОВАНИЯ СГУСТКА CЫВОРОТКА КРОВИ АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ НА PROTEIN-G SEPHAROSE IgG ИЗМЕРЕНИЕ КАТАЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ Анализ ДНКазной активности препаратов Ig G со lin sc 1 2 3 4 5 6 к к sc, co, lin – суперскрученная, кольцевая и линейная формы ДНК–плазмиды pBluescript; Дорожки 1 - 6 - препараты IgG больных шизофренией; К – контроль Анализ протеолитической активности Продукты гидролиза ОБМ Короткая последовательность основного белка миелина (ОБМ) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 К Дорожки 1 - 14 - препараты IgG больных шизофренией; К – контроль Электрофоретический анализ гомогенности препаратов IgG AT M 220 170 116 73 53 АТ – антитела крови больных шизофренией М- высокомолекулярные маркеры молекулярной массы белков Окраска серебром Определение ДНКазной активности во фракциях IgG в условиях кислого шока 1 2 Высокоэффективная гель-фильтрация IgG сыворотки крови одного из больных шизофренией на Superdex3200 в Gly-HCl, pH 2,6 4 Удельная ДНКазная активность IgG пМ 1,2 ДНК/мкг АТ/ч 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 1 Относительная протеолитическая активность IgG % протеолиза * * - достоверность различия при сравнении больных шизофренией с ТД и группы контроля (p<0,05) Титр IgG к двунитевой ДНК в сравниваемых группах 12 * 10 8 Больные шизофренией без тардивной дискинезии Здоровые доноры Ед/мл 6 4 Больные шизофренией с тардивной дискинезией 2 0 * - достоверность различия при сравнении больных шизофренией с ТД и группы контроля (p<0,05) Титр IgG к однонитевой ДНК в сравниваемых группах 30 ** 25 Больные шизофренией без тардивной дискинезии 20 Здоровые доноры Ед/мл 15 * 10 Больные шизофренией с тардивной дискинезией 5 0 * - достоверность различия при сравнении больных шизофренией с ТД и без ТД (p<0,05) ** - достоверность различия при сравнении больных шизофренией с ТД и группы контроля (p<0,05) Сравнение исследуемых показателей в группах Титр IgG к однонитевой ДНК, Ед/мл ДНКазная активность, пМ ДНК/мкг АТ/ч Протеолитичес кая активность, % протеолиза Больные шизофренией с тардивной дискинезией 12,29 2,17 89% 15,59 2,92 31,6% Больные шизофренией без тардивной дискинезии 5,37 0,032 0,8% 5,9 0,022 8,3% Здоровые доноры 11,58 0,001 1,8% 7,8 0,014 0 БОЛЬШОЕ КОЛИЧЕСТВО ВНЕКЛЕТОЧНОЙ ДНК В КРОВИ БОЛЬНЫХ ШИЗОФРЕНИЕЙ (В ОСОБЕННОСТИ, ПОЯВЛЕНИЕ В СЫВОРОТКЕ ОДНОНИТЕВОЙ) КРОВИ БОЛЬНЫХ ШИЗОФРЕНИЕЙ БОЛЬШОГО КОЛИЧЕСТВА РАЗРУШЕННЫХ ИЛИ УВЕЛИЧЕНИЕ ДНКГИДРОЛИЗУЮЩИХ ПОВРЕЖДЁННЫХ БЕЛКОВ СВОЙСТВ IG G УВЕЛИЧЕНИЕ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ IG G ТАРДИВНАЯ ДИСКИНЕЗИЯ Выводы Впервые показано, что антитела шизофренией активностью. обладают сыворотки крови больных ДНКазной и протеолитической Проверка основных критериев принадлежности ДНКазной активности антителам показала, что она является их собственным свойством. У IgG больных шизофренией с тардивной дискинезией обнаружены более высокие удельная ДНКазная (примерно в 2 раза) и относительная протеолитическая (примерно в 5 раз) активности, чем у иммуноглобулинов класса G больных шизофренией без тардивной дискинезии. Титр антител к двунитевой ДНК в группе больных шизофренией с тардивной дискинезией повышен в 2 раза в сравнении со здоровыми донорами и больными без неё, титр IgG к однонитевой ДНК у больных с тардивной дискинезией в 3 раза выше по сравнению с теми же группами. Благодарю за внимание!
