(I) р>0,05 при сравнении на фоне приема между группами. 1 ОГ n

Кировская Государственная Медицинская академия
Современные возможности
пробиотической коррекции
заболеваний с помощью
кисломолочных продуктов
Носкова Ольга Юрьевна ассистент
кафедры семейной медицины и
поликлинической терапии
18 сентября 2015 г.
Киров
ПЕРВЫЕ 1000 ДНЕЙ ЖИЗНИ
ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА
Актуальность.
КИШЕЧНЫЙ
МИКРОБИОЦЕНОЗ
ПИТАНИЕ
МЕТАБОЛИТЫ КИШЕЧНОЙ
МИКРОФЛОРЫ –
КОРОТКОЦЕПОЧЕЧНЫЕ
ЖИРНЫЕ КИСЛОТЫ
РЕГУЛИРОВАНИЕ ЭПИГЕНОМНЫХ ПРОЦЕССОВ
ПРОГРАММИРОВАНИЕ БУДУЩЕГО ЗДОРОВЬЯ
ЧЕЛОВЕКА И ЕГО АДАПТАЦИОННЫХ
ВОЗМОЖНОСТЕЙ
Актуальность.
Микробиоценоз кишечника влияет на иммунный ответ, метаболические
процессы, восприимчивость к болезни в последующие периоды жизни (de
Fillippo C. et al., 2010, Maslowski K.M. et al., 2011, Guarino A. et al., 2012, Biasucci G. et al., 2010,
Хавкин А.И. 2006).
«Западный тип микробиоценоза»
- формирование у младенца
неоптимального микробиоценоза со
сниженной микробной
контаминацией (Вязова Л.И, 2001,
Конь И.Я., Сафронова А.И., 2002)
Нарушение выполнения
микробиотой своих функций
Инфекционные заболевания и
прием антибактериальных
препаратов приводят к
дисбиотическим нарушениям
Изменения состава
микробиоценоза отягощает
течение инфекционных
заболеваний (Мазанкова Л.Н. и
др. 2005, Коган Н.В., 2009 )
Перспективное направление- пробиотическое кисломолочное
питание функционального значения для профилактики и
реабилитации инфекционных заболеваний
Основы «Концепции государственной политики
в области здорового питания до 2020 года»*
- расширение отечественного производства основных видов
продовольственного сырья, отвечающего современным
требованиям качества и безопасности;
-развитие производства пищевых продуктов, обогащенных
незаменимыми компонентами, специализированных продуктов
детского питания, продуктов функционального назначения,
диетических (лечебных и профилактических) пищевых продуктов и
биологически активных добавок к пище, в том числе для питания в
организованных коллективах (трудовые, образовательные и др.)
- разработка и внедрение в пищевую промышленность
инновационных технологий, включая биотехнологии
*Утверждены распоряжением Правительства Российской Федерации от 25 октября 2010 г. N 1873-р
Цель исследования:
оценить особенности влияния кисломолочных продуктов на
показатели микробиоценоза кишечника
Критерии включения:
•
•
•
•
практически здоровые дети (1-2 группы здоровья)
возраст от 8 до 12 мес включительно - до 18 мес.
отсутствие острых инфекционных заболеваний и приема системных АБП в
теч. 30 дн. до начала исследования
письменное согласие родителей
Критерии исключения:
•
•
•
•
кожные или иные симптомы непереносимости, связанные с употреблением
изучаемых продуктов
острые инфекционные заболевания в период получения продуктов
непереносимость коровьего молока (анамнез, тест на лактазную
недостаточность по методике Бенедикта)
симптомы функциональных нарушений пищеварения (отсутствие стойких
колик, болей, метеоризма, вздутия, отсутствие воспалительных изменений по
копроскопии)
Цель исследования:
оценка влияния кисломолочного
прикорма на метаболическую активность микрофлоры кишечника и
некоторые показатели резистентности организма (уровень секреторного
иммуноглобулина А (sIgA) и индекс частоты острых заболеваний (Iоз).
•
Критерии включения:
•
•
•
•
•
•
практически здоровые дети (1-2 группы здоровья) обоего пола
возраст от 8 до 12 месяцев включительно
отсутствие острых инфекционных заболеваний и приема системных
антибиотиков в течение 30 дней до начала исследования
отсутствие непереносимости коровьего молока (анамнез, тест на лактазную
недостаточность по методике Бенедикта)
отсутствие у детей симптомов функциональных нарушений пищеварения
(отсутствие стойких колик, болей, метеоризма, вздутия, отсутствие
воспалительных изменений по копроскопии)
письменное согласие родителей
Критерии исключения:
•
•
кожные или иные симптомы непереносимости, связанные с употреблением
изучаемых продуктов
острые инфекционные заболевания в период получения продуктов
Материалы и методы исследования:
103 практически здоровых детей в возрасте 8-12 мес.
Параметры
Методы исследования
Общеклинические исследования
общий анализ крови
общий анализ мочи
копрограмма
Состав микробиоты кала
бактериологическое исследование кала (ОСТ
91500. 11. 0004-2003 «Протокол ведения
больных. Дисбактериоз кишечника»)
Содержание и спектр КЖК в кале, анаэробный
индекс
жидкостный хроматографический анализ*
Уровень секреторного иммуноглобулина А в
секрете ротовой полости
твердофазный иммуноферментный анализ
Индекс частоты острых заболеваний (Jоз) в 6ти мес. катмнезе
Jоз= количество перенесенных острых
заболеваний/число месяцев наблюдений**
Статистическая обработка результатов
исследования
STATISTICA 10
*профессор Ардатская М.Д. . Способ разделения смеси жирных кислот, фракций С2-С7 методом газо-жидкостной хроматографии, Патент РФ
№9910669/12. Приоритет от 4.04 1999 г..
** Доскина В.А., 2010
Характеристика микробиологических параметров
биоценоза кишечника у детей в общей группе, n=95
log10 КОЕ /г
12
10
10
8
6
4
2
0
8,24
6
7
7,53
5,42
5
3
2
2,07
1,72
0
ББ
ЛБ
КП
ЭН
КБ
ЗС
%
30
26,89
25
НГВН
20
15
11,55
общая
группа
10
5
5
0
0
ЛНЭБ
ГКП
НГВН – нижняя граница возрастной нормы; ББ – бифидобактерии; ЛБ- лактобакетрии; КП – типичная
кишечная палочка; ЭН – энтерококки; КБ – клебсиеллы; ЗС – золотистый стафилококк; ЛНЭБ –
лактозонегативные энтеробактерии; ГКП – гемолизирующая кишечная палочка
Результаты первичного микробиологического
исследования кала
Степени дисбактериоза при первичном
исследовании кала на дисбактериоз втрех
группах, n=95, % детей
% детей
100%
90%
18
24
21
80%
70%
3 степень
60%
50%
40%
2 степень
76
76
75
30%
20%
10%
0%
6
1 ОГ (n=34)
4
2ОГ (n=33)
группы
ГС (n=28)
1 степень
0 степень
Метаболическая активность микробиоты в
общей группе, n = 103
1 тип
Анаэробный
(70% детей)
Уровень и
спектр КЦЖК
2 тип
Аэробный
(30% детей)
•невыраженное снижение суммарного
количества КЦЖК
•выраженное снижение суммарного
количества КЦЖК
•повышение содержания пропионовой
(С3) и масляной (С4) кислот, р<0,05
•снижение содержания пропионовой (С3)
и масляной (С4) кислот, р<0,05
•снижение уксусной кислоты (С2),
р<0,05
• повышение относительного
количества уксусной кислоты С2, р<0,05
•АИ отклонен в сторону
отрицательных значений
•АИ отклонен в сторону слабо
отрицательных значений
• снижение суммарного
относительного содержания изо Сн
•повышение суммарного
относительного содержания изо Сн
*ООО «Уни-мед» г.Москва, профессор Ардатская М.Д. . Способ разделения смеси жирных кислот, фракций С2-С7 методом газожидкостной хроматографии, Патент РФ №9910669/12. Приоритет от 4.04 1999 г.., Готтшал Г., 1982 г.
Материалы исследования:
Все дети (n=95) получали продукт кисломолочного
прикорма
в течение 30 дней и были разделены на 3 группы
1 ОСНОВНАЯ ГРУППА
(1 ОГ)
2 ОСНОВНАЯ ГРУППА
(2 ОГ)
БИОРЯЖЕНКА*
БИОПРОСТОКВАША*
n = 34
n = 33
ГРУППА СРАВНЕНИЯ
(ГС)
детский
необогащенный
кефир
n = 28
*способ получения запатентован, имеют невысокую кислотность, приближенную к адаптированным
продуктам (60 – 80 Т) в отличие от кефира (100-110Т), адаптированные продукты – 60 Т)
Группы были сопоставимы по полу, по виду вскармливания, по весоростовым показателям, количеству принятого продукта за период
наблюдения р>0,05.
Биотехнологический процесс производства
функциональных фермнетированных
пробиотиками кисломолочных продуктов
Термостатный способ
(позволяет сохранять
бифидобактерии в активном
состоянии,
получать густую консистенцию
продукта)
Энергосберегающее
оборудование
собственной разработки
Внесение разработанной закваски
пробиотических бифидобактерий
и молочнокислых
микрорганизмов при
определенных режимах
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КИСЛОМОЛОЧНОГО
ПРОДУКТА – ПАТЕНТ РФ № 2483557 ОТ 11.10.2011
Результаты микробиологического исследования
кала на фоне приема продуктов кисломолочного
прикорма (I)
log 10
12,00
10,00
8,00
6,00
4,00
2,00
0,00
10,00 9,82
7,91 7,82
7,58 7,49
0,68 2,29
0,35 1,64
ББ
ЛБ
КП
ЭН
КБ
p<0,05 для ЭН при сравнении на фоне приема между группами
%
20,00
15,00
10,00
5,00
0,00
18,53
15,82
ЗС
1 ОГ n=34
0,00
ЛНЭБ
0,32 0,96
0,00
ГКП
р>0,05 при сравнении на фоне приема между группами.
ГС n=28
Результаты микробиологического исследования кала
на фоне приема продуктов кисломолочного прикорма
(II)
12,00
log 10
10,00
10,00
9,82
8,00 7,82
8,00
7,76 7,49
6,00
4,00
0,55 2,29
2,00
1,64
0,00
0,96
0,27
0,00
ББ
ЛБ
КП
ЭН
КБ
ЗС
p<0,05 для ЭН при сравнении на фоне приема между группами
18,00
%
15,82
16,00
14,00
12,00
2 ОГ n=34
10,00
8,00
6,00
4,00
3,58
ГС n=28
2,00
0,00
ЛНЭБ
ГКП
р>0,05 при сравнении на фоне приема между группами
Результаты оценки суммарного содержания КЖК в
кале и анаэробный индекс между группами
Суммарное содержание КЖК
Норма (6-12 мес)
мг/г
6,0
1 т ип до приема
4,8
5,0
4,3
4,2
1 ОГ 1 т ип до
приема
4,6**
4,2*** (2)
4,1
4,0
2 ОГ 1 т ип до
приема
3,0
норма
4,0
2,0
3,2
3,1
ГС 1 т ип до приема
2 т ип до приема
1 тип -анаэробный
у 70% детей
1 ОГ 2 т ип после
приема
2 тип -аэробный
у 30% детей
1,0
2 ОГ 2 т ип после
приема
ГС 2 т ип после
приема
0,0
Анаэробный индекс
мг/г
0,000
-0,100
норма
р<0,05
* - при сравнении с
нормой,
** - при сравнении
показателей на
фоне приема,
*** - при сравнении
на фоне приема
между группами.
-0,200
-0,300
2 тип- аэробный
у 30% детей
1 тип- анаэробный
у 70% детей
-0,164*
-0,280**
-0,302
-0,333**
-0,400
-0,360*,**
-0,500
-0,504*
-0,600
-0,185*,***(1,2)
-0,451*,**,
***(1,2)
-0,267*,**
Результаты оценки пропионовой и масляной кислот
в кале у детей между группами
Содержание пропионовой кислоты
мг/г
0,20
0,19*
0,18
0,16
0,18*,
0,16*,**
0,14
***(1,2)
0,15**
0,14**
0,14
0,12*,**
0,10*,***(1,2)
0,10
0,08
норма
0,12
0,10*
1 тип- анаэробный
у 70% детей
2 тип- аэробный
у 30% детей
0,06
0,04
0,02
0,00
Содержание масляной кислоты
мг/г
0,16
0,149*
0,132*,***(1,2)
0,14
0,12
0,1
0,091
0,08
0,06
0,04
0,02
0
0,105**
0,098**
0,084** 0,087**
норма
р<0,05;* - при
сравнении с нормой,
** - при сравнении
показателей на фоне
приема, *** - при
сравнении на фоне
приема между
группами.
1 тип- анаэробный
у 70% детей
0,055
0,046*
2 тип- аэробный
у 30% детей
*,***(1,2)
Результаты оценки уксусной кислоты и изокислот в
кале у детей между группами
Содержание уксусной кислоты в кале у детей
Норма (6-12 мес)
мг/г
1
0,69*,***(1,2)
0,9
0,77
0,8
0,67*
0,6
0,5
0,4
норма
0,7
0,74*,**
0,84*, ***(1,2)
0,86*
0,78**
0,75**
0,79**
1 тип до приема
1 ОГ 1 тип до приема
2 ОГ 1 тип до приема
ГС 1 тип до приема
1 тип- анаэробный
у 70% детей
2 тип- аэробный
у 30% детей
2 тип до приема
0,3
1 ОГ 2 тип после приема
0,2
2 ОГ 2 тип после приема
0,1
0
ГС 2 тип после приема
Содержание изоС5/С5.
мг/г
12
10,08*
10
7,51*
8
5,75*
6
4
3,35*,**
2,1
2
0
норма
р<0,05;* - при
сравнении с нормой,
** - при сравнении
показателей на фоне
приема, *** - при
сравнении на фоне
приема между
группами.
2,41*,**
1 тип- анаэробный
у 70% детей
5,33*,***(1,2)
2,91**
3,13**
2 тип- аэробный
у 30% детей
Уровень sIg А у детей 11-12 мес.,
не получающих грудного молока, на фоне КМ/прикорма
Дельта = LnsIgА до приема - Ln sIgА после приема
Средние значения показателя дельты Ln sIgA в слюне,
р<0,05
ГС n=9
0,56
2ОГ n=22
-0,08
-0,2
-0,1
0
0,1
0,2
де льта Ln s IgA
0,3
0,4
0,5
0,6
Прием обогащенного бифидобактериями кисломолочного прикорма
стимулирует выработку секреторного иммуноглобулина А в слюне у детей в
возрасте 11-12 месяцев, не получающих грудное молоко.
Индекс частоты острых заболеваний (Jоз) у детей при
наблюдении в катамнезе 6 месяцев
Ранг
0,00-0,32
высокая
1
0,33-0,49
сниженная
2
0,50-0,60
низкая
3
0,60 и
выше
очень низкая
4
Индекс Iоз, абс.
Оценка
резистенности
ранги уровней резистенности
Значение
индекса
Jоз
Индекс Iоз детей 1 за 6 месяцев наблюдения после 30-ти дневного приема
кисломолочных продуктов прикорма,
n=58, М
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0,24
0,13
основ ная
срав нения
группы
Ранги уровней резистенности детей1 за 6-ти месячный период
наблюдения после 30-ти дневого приема кисломолочных продуктов,
(n=58), M.
2
1,5
1
0,5
1,69
1,22*
0
основная
сравнения
группы
* р<0,05 при
сравнении между
группами
Заключение:
1. Процесс становление микробиоценоза кишечника у детей к концу 1го года жизни характеризуется формированием неоптимального
. состава со сниженной микробной контаминацией, что обусловливает
особенности функциональной активности симбионтов и
метаболического профиля КЖК (70% - анаэробный тип, 30% аэробный).
2. В сравнении с традиционным кефиром пробиотические
кисломолочные продукты оказывают значимое положительное
влияние на показатели функциональной активности микробиоты
параметры мукозального иммунитета и частоту острых заболеваний.
3. Разработка новых видов пробиотических кисломолочных продуктов
функционального значения и их использование является
перспективным направлением оптимизации питания в условиях
замедления становления нормобиоза с целью программирования
будущего здоровья и профилактики заболеваний.
Индекс частоты острых заболеваний (Jоз )*
Jоз=
количество перенесенных ребенком острых заболеваний
число месяцев наблюдений
Частота острых
заболеваний в год
Значение индекса Jоз
Оценка резистенности
0-3
0,00-0,32
высокая
4-5
0,33-0,49
сниженная
6-7
0,50-0,60
низкая
8 и более
0,60 и выше
очень низкая
*Рысева Л.Л., Григорович М. С. 2009, Доскина В.А., 2010