10 4
реклама
Материалы XIX Международного ветеринарного конгресса, Москва, 16ю04.2011 г. БАКТЕРИАЛЬНЫЕ ИНФЕКЦИИ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ СОБАК к.в.н. Шуляк Б.Ф. МОЧЕВАЯ СИСТЕМА И БАКТЕРИИ У здоровых животных мочевая система (МС), за исключением дистального отдела уретры, свободна от бактериальных агентов. Бактерии попадают в МС через наружные половые органы, реже гематогенным путем (лептоспиры, сальмонеллы и др.). Инцидентность инфекций у собак составляет 10-15 % ? КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ ИНФЕКЦИЙ МС Клинические последствия бактериальных инфекций МС зависят от ряда факторов: патогенности возбудителя, локализации инфекции, состояния иммунной системы животного, наличия у него болезней другой этиологии, своевременности и рациональности лечения, рациона и т.д. Комплексное влияние этих факторов определяет многообразие форм течения инфекций МС (от бессимптомной бактериурии до острого пиелонефрита и септицемии). ТИПЫ ИНФЕКЦИЙ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ Абортивная Острая = элиминация бактерий = заболевание летальный исход Хроническая = рецидивы заболевания Латентная ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ Данные анамнеза, результаты клинического обследования и общего анализа мочи позволяют лишь предполагать наличие у животного инфекции МС. Окончательный диагноз можно поставить только после: 1. изоляции возбудителя 2. определения уропатогенности изолята 3. оценки степени бактериурии Для получения достоверных результатов необходимо стандартизировать все этапы бактериологического анализа мочи: *Преаналитический **Аналитический ***Учет и анализ результатов ПРЕАНАЛИТИЧЕСКИЙ ЭТАП Сбор проб мочи ± Хранение проб мочи Доставка в лабораторию СБОР ПРОБ МОЧИ При естественном мочеиспускании (высок риск контаминации проб) Через катетер (высок риск травмирования уретры и мочевого пузыря, а механической диссеминации патогенных бактерий) Пункцией мочевого пузыря (не позволяет судить о наличие инфекций в уретре) Взятие проб мочи с помощью катетера Катетеризация кобеля Катетеризация суки Цистоцентез мочеточник уретра Правильно Неправильно «Слепая» пункция МП у кобеля Контейнеры для проб мочи Пробы мочи следует собирать в чистые стерильные, надежно закрывающиеся контейнеры. Использование контейнеров специального назначения облегчает отбор из них проб для анализов без риска случайной контаминации посторонней микрофлорой и попадания мочи (потенциально инфекционный материал!) на объекты внешней среды, одежду и руки специалистов. Хранение и доставка проб мочи в лабораторию Моча — прекрасная питательная среда для бактерий, титр которых в ней прогрессирующе возрастает с течением времени. Оптимально, когда пробу мочи высевают на питательную среду сразу же после взятия. Максимальная продолжительность этого срока при нахождении мочи в условиях комнатной температуры — 2 ч. В холодильнике ее можно хранить не более 12 ч. Если использовать в качестве консерванта борную кислоту, то срок хранения проб мочи в холодильнике можно увеличить до 24 ч. Борная кислота снижает жизнеспособность некоторых бактерий, в т.ч. псевдомонад. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЭТАП НЕПОСРЕДСТВЕННАЯ ДЕТЕКЦИЯ БАКТЕРИЙ, ЛЕЙКОЦИТОВ И МВР (визуальные и автоматические методы) ПОСЕВ НА ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ХИМИЧЕСКИЕ ЭКСПРЕССМЕТОДЫ (±) ИДЕНТИФИКАЦИЯ ИЗОЛЯТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЯЖЕСТИ БАКТЕРИУРИИ ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ БАК.АНАЛИЗА ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВ-ТИ К АНТИБИОТИКАМ 13 ОБНАРУЖЕНИЕ БАКТЕРИЙ В МОЧЕ ХИМ. МЕТОДЫ 1. Нитритный 2. Аденозин триптофазный 3. Каталазный 4. Глюкозооксидазный и др. 5. Выявление метаболитов бактерий. 6. Обнаружение маркеров воспалительной реакции БАКТЕРИОСКОПИЯ 1. Нативных проб 2. Седимента 3. Концентрата (получ.фильтрацией) АВТОМАТИЗИРОВАННЫЕ МЕТОДЫ Проточная цитометрия и др. методы детекции частиц (в т.ч. бактерий) 14 ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ УНИВЕРСАЛЬНЫЕ СЕЛЕКТИВНЫЕ Успех бактериологического анализа мочи в значительной степени зависит от качества и спектра используемых в лаборатории питательных сред. ХРОМОГЕННЫЕ ПОЛИФАЗНЫЕ 15 Универсальные среды (кровяной агар, CLED и др.) МПА Кровяной агар CLED 16 Селективные среды (МакКонки, Колумбийский CNA Агар МакКонкиМ Колумбийский CNA агар с кровью без крови 17 Хромогенные среды (Uriselect ¾ и др.) Бактерии Колонии Характеристики Диаметр, мм Цвет β-глюкуронидаза β-глюкозидаза Индол Триптофан-дезаминаза E.coli 2-3 Фиолетовый + — + — P.mirabilis 2 — — — + E.faecalis 0,5-1 Оранжевокоричневый Светло-голубой — + — P.stuartii 2 Оранж-коричн. — + ± — S.aureus 1-2 Белый — — — — 18 Алгоритм идентификации бактерий на среде Uriselect 3 Полифазные среды Среда Энтеро ПЛЮС (Новамед) (для дифференциации энтеробактерий) 20 ИДЕНТИФИКАЦИЯ ИЗОЛЯТОВ Культуральные свойства Морфология бактерий Тинкториальные свойства Биохимические свойства Дифференциация энтеробактерий 25 БИОХИМИЧЕСКИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ УСКОРЕННОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ УРОПАТОГЕНОВ ( LaChema) Результаты учитывают визуально (цвету содержимого лунок) или с помощью компьютерных программ КЛАССИФИКАЦИЯ УРОПАТОГЕНОВ СОБАК Первичные (самостоятельно вызывают поражения органов мочевой системы): E. coli, Staph. intermedius, лептоспиры. Вторичные (проявляют патогенные свойства реже - преимущественно на фоне других инфекций, при ослаблении иммунитета, после инвазивных диагностических и лечебных процедур): стафилококки, стрептококки, протеи, энтеробактеры, энтерококки. Сомнительные: псевдомонады, клебсиеллы, коринебактерии Большинство остальных бактерий, обнаруживаемых в моче следует считать компонентами нормальной микрофлоры или контаминантами, а не уропатогенами. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ БАК. АНАЛИЗ МОЧИ Изоляция из мочи даже первичных уропатогенов не может служить основанием для постановки окончательного диагноза без подтверждений того, что это не случайная контаминация. Основным критерием этого остается установление диагностического титра уропатогенов в моче (степени бактериурии). Критерии Е.Х. Касса 103 = отсутствии воспалительного процесса, контаминация мочи 104 = сомнительный результат (исследование следует повторить) 105 = на наличие воспалительного процесса Если в посевах обнаруживают 3 или большее количества микроорганизмов, то считают, что исследованная проба контаминирована банальной микрофлорой, и проводят исследование мочи повторно. 28 РЕКОМЕНДАЦИИ ЕВРОПЕЙСКОЙ КОНФЕДЕРАЦИИ ЛАБОРАТОРНОЙ МЕДИЦИНЫ (ECLM) Способ взятия мочи Наличие симптомов БМП При мочеиспускании + (средняя порция) — Обнаруженные уропатогенов тип Первичные —“— Вторичные —“— Сомнительные число Диагностически значимый титр (КОЕ/мл) 1 1-2 1 2 102 103 104 (♀) - 103 (♂) 105 105 1 105 1-2 101 Надлобковая пункция ± Любые уропатогены —“— При цистоскопии или 1-кр. катетеризации ± —“— 1-2 102 Из введенного на длительное время катетера + —“— 1-3 104 — —“— 1 104 Ветеринарным специалистам еще предстоит определить диагностические уровни бактериурии при инфекционных процессах в мочевой системе собак 29 МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИТРА БАКТЕРИЙ В МОЧЕ ТОЧНЫЕ КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ПОЛУКОЛИЧЕСТВЕННЫЕ Серийных разведений Капельный Штриховой несекторный Погружной Четырехсекторный Дипстрика/Дипслайда Штриховой несекторный в ЧП V инокулума, мкл 1 10 100 N колоний / Титр чашку Петри (КОЕ/мл) 1 103 10 104 100 105 1 102 10 103 100 104 1 101 10 102 100 103 4-секторный в ЧП Количество колоний в секторах I II III IV Титр (КОЕ/мл) 1-6 — — — < 103 8-20 — — — 3 х 103 20-30 — — — 5 х 103 30-60 — — — 104 70-80 — — — 5 х 104 100-150 5-10 — — 105 Нельзя сосчитать 20-30 — — 5 х 105 40-60 — — 106 100-140 10-20 — 5 х 106 Нельзя сосчитать 30-40 — 107. 60-80 Един. колонии 108 Капельный Lorrier J.C., Valkenburg H.A. Quantitative Urine Culture by Surface Drop Method. Applied Microbiol, 1969, 57—63 Погружной (технология дипслайда) Технология дипслайда начинает «буксовать» при высоком титре бактерий в моче (107 и выше) = газонный рост не позволяет подсчитать число колоний Штриховая технология дипстрика N колоний <10 10-24 КОЕ/мл 103 104 25-50 105 >50 106 107 108 Дипстрик и Диаслайд – альтернатива традиционному методу посева проб мочи на чашки Петри, признаваемому «золотым стандартом» бактериологического анализа мочи. Позволяют совместить преаналитический и аналитический этапы, высевать мочу на месте ее сбора сразу на несколько сред, транспортировать и инкубировать посевы в закрытом контейнере, одновременно идентифицировать уропатогены и достоверно оценивать тяжесть бактериурии. ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ БАК. АНАЛИЗА МОЧИ √ Повторная изоляция того же вида, типа, варианта бактерий = наличие инфекционного процесса. √ Необходимо определять степень бактериурии при различных патологиях мочевой системы, чтобы дифференцировать инфекционный процесс в мочевых путях от контаминации мочи нормальной микрофлорой и сапрофитами. √ Ассоциации микроорганизмов чаще встречаются при хронических процессах и коррелируют с низкой степенью бактериурии. Изоляция 3 и большего числа бактерий свидетельствует о контаминации пробы. √ Изменение степени бактериурии в процессе заболевания или лечения = прогностический признак. √ Для окончательной трактовки результатов микробиологического исследования следует учитывать данные анамнеза, результаты клинического обследования пациента и другие лабораторные анализы. 39 ЭТАП III. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ИЗОЛЯТОВ К АНТИБИОТИКАМ Кульминацией бактериологического анализа должно быть определение чувствительности изолятов бактерий к антибиотикам. Для этого пользуются несколькими методами: Cерийных разведений Стандартных дисков Диффузионный (Е-тест) 40 Метод серийных разведений Метод стандартных дисков Диско-диффузионный метод Диспенсор дисков Окто=диск Градиентно-диффузионный метод Интерпретация антибиотикограмм Категория чувствительности микроорганизма Характеристика чувствительности изолята к антибиотику Прогноз применения антибиотика в терапевтических целях Чувствительность Не обладает механизмами резистентности Лечение будет эффективным при использовании обычных доз антибиотика Умеренная чувствительность Субпопуляция, находящаяся между чувствительной и резистентной Лечение будет эффективным при использовании максимальных доз антибиотика или при локализации инфекции в местах аккумуляции антибиотика Резистентность Обладает механизмами резистентности Лечение антибиотиком будет неэффективным СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ИНФЕКЦИИ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ Прихотливые» уропатогены Не все уропатогены удается выделить на рутинно применяемых с этой целью питательных средах. К их числу относятся лептоспиры и уреаплазмы. Для лабораторной диагностики таких инфекций применяют специальные питательные среды, иммунологические и другие специфические методы диагностики. Лептоспироз Безжелтушный лептоспироз (штутгардская болезнь ) Серовары : Canis Grippotyphosa Kirschneri Pomona Australis Sejroe Желтушный лептоспироз (болезнь Вейля) Cеровар Ichterohaemorrhagiae Почки поражаются на острой стадии лептоспироза. По мере роста гуморального иммунного ответа этот орган остается одним из немногих мест, где «укрываются» лептоспиры, что ведет к переходу инфекции в латентную форму и регулярному выделению возбудителя с мочой Схема диагностики лептоспироза Комплексная диагностика лептоспироза Эпизоотологические и анамнестические данные Результаты клинического исследования Обнаружение возбудителя Бактериоскопия (кровь, моча, п/м) Изоляция на питат. средах Иммунол. тесты (РИФ, ИФА, РЛА, РСК) Молек. диагн. (ПЦР, ДНК-зонд) Результатов серологических исследований Результатов биопробы на лаб. ж-х Изоляты лептоспир серотипируют в реакции агглютинации-лизиса Питательные среды для лептоспир Для изоляции лептоспир применяют среды с 5-10% сыворотки крови кролика или барана (либо сывороточного альбумина) : жидкие (Ногуши-Веньона, Уленгута, Ферворта-Вольфа в модификации Тарасова и др.) = 5-10 дн., культуры бесцветные, опалесцирующие полужидкие (Флетчера и др.) = кольцо помутнения на глубине 1,5-2,0 см; с 1% агара заглубленные колонии с расплывчатыми контурами С 2% агара поверхностные колонии вариабельной прозрачности В качестве селективных факторов в среды добавляют: Фосфомицин + 5-флуорацил Мочевину Соли кобальта Антибиотики (неомицин, рифампицин, фурацилин, фурагин, налидиксовую кту, комбинации рифампицина , полимиксина В, бацитрацина и актидиона) Секундарные инфекции МС На фоне заболеваний, сопровождающихся снижением иммунитета и повреждениями мочевой системы другими факторами (химическими, уролитами, небактериальными паразитами), инфекции первичных и вторичных уропатогенов могут протекать тяжелее, и даже сомнительные уропатогены могут вызвать значимые поражения мочевыводящих путей. К числу наиболее опасных небактериальных паразитов, локализующихся в мочевой системе относятся нематоды D.renale и C.plica. Свайник-великан (D.renale) Свайник-великан в почке Яйца D.renale (овальные с крышечкой на полюсах PEARSONEMA (CAPILARIA) PLICA Ключ к успеху Широкий спектр уропатогенов, многообразие и неспецифический характер симптоматики, вызываемых ими болезней МС, а также возможность длительного бессимптомного течения этих бактериозов, диктует необходимость подходить творчески к их диагностике. Опыт и знания ветеринарного врача Ключ успеха на этом пути = + Эффективная лаб. диагностика БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ !
