E) Для лечения актиномикоза

УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 1 из 189
МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ
РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
имени ШАКАРИМА города СЕМЕЙ
Документ СМК 3
УМК
УМКД
уровня
042-18-23.1.01/03-2014
УМКД
Редакция № ____
Учебно-методические
От____________
.
материалы по
дисциплине
«Ветеринарная
микробиология и
вирусология -1»
УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЙ КОМПЛЕКС
ДИСЦИПЛИНЫ
«Ветеринарная микробиология и вирусология - 1»
для специальностей
5В120200 – «Ветеринарная санитария»
5В120100 – «Ветеринарная медицина»
УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЕ МАТЕРИАЛЫ
Семей
2014
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Содержание
1.
2.
3.
4.
Глоссарий
Лекции
Лабораторные занятия
Самостоятельная работа обучающегося
Страница. 2 из 189
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 3 из 189
1 ГЛОССАРИЙ
В настоящем УММ использованы следующие сокращения:
РА – реакция агглютинации
РСК – реакция связывания комплемента
РДСК – реакция длительного связывания комплемента
КР – кольцевая реакция с молоком
РБП – роз-бенгал проба
РИФ (МФА)– реакция иммунофлуоресценции (метод флюоресцирующих
антител)
ИФА – иммуноферментный анализ
РС – реакция Сайдулдина
ПЦР – полимеразная цепная реакция
Гр(-) – грамотрицательные бактерии
Гр(+) – грамположительные бактерии
Аг - антиген
Aт - антитело
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 4 из 189
2 ЛЕКЦИИ
МОДУЛЬ 1
Морфология и строение микроорганизмов
ЛЕКЦИЯ 1
Тема: Предмет и задачи микробиологии
ПЛАН:
1. Предмет и задачи микробиологии
2. Основные этапы развития микробиологии
Ключевые слова: микробиология, общая микробиология, вирусология,
вездесущность микробов.
1.Предмет и задачи микробиологии
«МИКРОБИОЛОГИЯ» происходит от греческих слов «micros» -малый,
«bios» - жизнь и «logos» - наука (учение). Таким образом, микробиология
является наукой о жизни микроскопически малых существ микроорганизмов,
невидимых невооруженным глазом.
Ветеринарная микробиология – наука о мельчайших, невидимых
невооруженным глазом организмах,
названных микробами
или
микроорганизмами. Она изучает их строение, морфологию, физиологию,
роль в различных процессах, происходящих в природе, генетику и экологию
микроорганизмов, использование микробов в тех или иных областях жизни и
деятельности человека, а также изменения, вызываемые ими в организме
людей, животных, растений, знакомит с методами устранения их вредного
действия.
Предметом (Рисунок 1)изучения микробиологии являются бактерии,
плесневые грибы, дрожжи, актиномицеты, риккетсии, микоплазмы, вирусы.
Но поскольку вирусы абсолютно не могут существовать без живого
организма, изучением их занимается самостоятельная наука, называемая
«вирусологией».
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 5 из 189
Рисунок 1. Предмет микробиологии
Взаимосвязь с другими науками. Ботаника и зоология (где изучается
жизнь и строение простейших представителей обоих царств природы),
биохимией (в вопросах изучения ферментов, витаминов, антибиотиков),
гигиеной (в разделах микробиологии почвы, воздуха и воды), физиологией
(она помогла понять роль микробов в процессах пищеварения у животных и
человека). Методы стерилизации, разработанные микробиологией, оказали
неоценимую услугу хирургии.
Вездесущность
микробов.
Мир
микроорганизмов
сложен
и
многообразен. Они широко распространены в природе. Естественными
резервуарами микробов в природе являются почва, воздух и вода.
Миллиарды микробов окружают нас. Академик В.А.Омелянский так
характеризовал микробов: «Поистине они вездесущи…. Незримо они
сопутствуют человеку на всем его жизненном пути, властно вторгаясь в его
жизнь то в качестве врагов, то, как друзья. В громадном количестве они
встречаются в пище, которую мы принимаем, в воде которую пьем, и в
воздухе, которым дышим».
Полезные и вредные свойства микроорганизмов
Полезные свойства микроорганизмов
1. Сапрофитные микробы (гнилостные бактерии, вызывающие
минерализацию белков) являются санитарами в природе (гниение –
микробиологический процесс)
2. Микроорганизмы используют для получения продуктов питания
(молочнокислых продуктов, кормовых белков, хлеба, алкогольных
напитков - пива, вина, спирта)
3. Микроорганизмы используют для получения биологически активных
веществ – ферментов, гормонов, витаминов, антибиотиков,
гибберилинов, аминокислот, органических кислот и т.д.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 6 из 189
4. Микроорганизмы могут быть источником электрической энергии
5. Микробы способны извлекать ионы металлов из полезных руд
6. Микроорганизмы принимают участие в пищеварении животных и
человека. (В толстом кишечнике человека обитает кишечная палочка –
Escherichia coli, продуцент витаминов группы В. Название получила в
честь открывшего ее крупного немецкого педиатра Теодора Эшериха,
нашедшего эту бактерию в человеческом кале. Ее численность – 75%
от общего числа всех кишечных микроорганизмов. Другим
распространенным микробом кишечника является (Streptococcus
faecalis). Микроорганизмы пищеварительного тракта снабжают наш
организм витамином К, который необходим для свертывания крови
(без которого нарушается образование протромбина)
7. Патогенные микроорганизмы (микроорганизмы вызывающие
инфекционные болезни у животных и человека) используют для
профилактики инфекционных болезней, путем получения из них
вакцинных штаммов. Ослабленные патогенные микробы не вызывают
заболевания, а напротив, стимулируют формирование иммунитета.
Препараты, приготовленные из убитых или ослабленных микробов
получили название – вакцины. (Слово вакцина произошло от
латинского Vacca – корова. Дженнер. Оспа.) Впервые аттенуацию
(ослабление вирулентных свойств патогенных микробов) микробов
разработал Л.Пастер, когда готовил вакцину против бешенства.
Вредные свойства микроорганизмов
1. Патогенные микроорганизмы вызывают инфекционные заболевания
(сибирская язва, бруцеллез, туберкулез, сальмонеллез и др.)
2. Микроорганизмы могут вызывать порчу продуктов питания, могут
быть вредителями на различных производствах, разлагают древесину,
волокна текстильного сырья - хлопка, шерсть, вызывают коррозию
металлов. Микробы участвуют в процессах разложения каучука, нефти,
бумаги, текстиля и пластмасс.
Полезных микроорганизмов большинство, лишь 1:30000 часть от всех
известных микробов составляют вредные микроорганизмы.
Направления микробиологии (Рисунок 2). Развитие микробиологии,
как и других научных дисциплин, находится в тесной зависимости от
способов производства, запросов практики, общего прогресса науки и
техники. В настоящее время в соответствии с потребностями общества
микробиология дифференцировалась на:
-общую микробиологию;
-медицинскую;
-сельскохозяйственную;
-ветеринарную;
-промышленную
Фундаментом (базой) для всех перечисленных направлений является
общая микробиология, которая изучает морфологию, физиологию,
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 7 из 189
распространение и сохранение микробов во внешней среде, генетику
микроорганизмов, вопросы систематики и классификации их, роль
микробов в круговороте веществ в природе, патогенность и
вирулентность, роль микробов в инфекционном процессе, вопросы
иммунитета.
Задачи микробиологии будут зависеть от направления. Задачи общей
микробиологии изложены в определении.
2.Основные этапы развития микробиологии
В развитии микробиологии выделяют два этапа:
1. Морфологический – связан с именем Антона Левенгука (1632-1723),
который создал первый микроскоп и описал основные формы микробов.
2. Физиологический – на этом этапе происходило более глубокое изучение
жизнедеятельности микробов.
- Луи Пастер (1822-1895) –французский ученый;
- Роберт Кох (1843-1910) – немецкий ученый,
- Илья Ильич Мечников(1845-1916) – русский ученый;
- Пауль Эрлих (1854-1916) немецкий ученый,
- Сергей Николаевич Виноградский (1856-1953);
- Василий Леонидович Омелянский (1867-1928)
- Дмитрий Иосифович Ивановский (1864-1920);
- Н.Ф. Гамалея (1859-1949);
- Г.Н.Габричевский (1860-1907);
- А.Флеминг(1929г. – открыл пенициллин),
- В.Н Шапошников (1884-1968) (производство молочной кислоты при
помощи молочно-кислых бактерий),
- Я.Я.Никитинский (1878-1941)(консервное производство)
3. Вторая половина 20 столетия – новый этап, связан с рождением
молекулярной генетики и молекулярной биологии. Носитель гена – ДНК.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 8 из 189
Рисунок 2. Направления микробиологии
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
1.
2.
3.
4.
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №1
Аттенуация
Вакцина
Вирусология
Микробиология
Направления микробиологии (общая микробиология, ветеринарная
микробиология, медицинская микробиология, сельскохозяйственная
микробиология, промышленная микробиологи, пищевая микробиология)
Патогенные микроорганизмы
Предмет микробиологии (бактерии, плесневые грибы, дрожжи,
актиномицеты, риккетсии, микоплазмы)
Сапрофиты
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ:
Что изучает дисциплина «микробиология и вирусология»?
Предмет микробиологии.
Что изучают конкретные направления микробиологии (общая,
медицинская, сельскохозяйственная, ветеринарная, промышленная,
пищевая генетическая и др.)?
Морфологический этап в развитии микробиологии.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
5.
6.
7.
8.
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 9 из 189
Физиологический этап в развитии микробиологии.
Полезные свойства микроорганизмов.
Вредные свойства микроорганизмов.
Вклад ученых в развитие микробиологии.
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА:
Основная
1. Бияшев Б.К. Ветеринарная микробиология и иммунология.- Алматы,2007.
– 417 с.
2. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Костенко Т.С. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. М., 2008. – 224с.
Дополнительная
1.
Мудрецова-Висс К.А., Дедюхина В.П. Микробиология санитария и
гигиена: учебник – 4-е изд. – М.: ИД «Форум»: ИНФРА-М, 2014. – 400с.
2.
Тлепов А.А. Микробиология. – Алматы,2011. – 314 с.
3.
Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и
иммунология. –М.: КолосС, 2003.-432 с.
4.
Нетрусов А.И., Котова И.Б. Общая микробиология.-М: Издательский
центр «Академия», 2007. – 288 с.
5.
Сидоренко О.Д., Борисенко Е.Г. и др. Микробиология: Учебник для
агротехнологов. – М.: ИНФРА-М, 2005. – 287 с.
6.
Горохова С.С. Основы микробиологии, производственной санитарии и
гигиены. – М.,2008.
7.
Блейм Т.Н. Сборник тестов по микробиологии. Учебное пособие. –
Семипалатинск: СГУ имени Шакарима,2005. – 112 с.
8.
Ветеринарная микробиология и иммунология /Под ред.проф.
Н.А.Радчука.-М.,1991.-С.3-10.
9.
Костенко Т.С., Скаршевская Е.И., Гительсон С.С. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,1989.- 272с.
Лекция №2
ТЕМА: Систематика и морфология микроорганизмов
ПЛАН:
1. Систематика, классификация и номенклатура микроорганизмов
2. Морфология и строение бактерий
2.1 Постоянные элементы - нуклеоид, цитоплазма, оболочка
2.2 Непостоянные элементы - спора, капсула, жгутики
Ключевые слова: систематика, классификация, номенклатура
микроорганизмов, идентификация, морфология и строение бактерий.
1. Систематика, классификация и номенклатура бактерий.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 10 из 189
В настоящее время все микроорганизмы делятся на три царства.
Царство вирусов. К ним относят возбудителей инфекционных болезней и
бактериофаги
Эукариоты – ядерные организмы, ядерная мембрана отграничивает ДНК
от цитоплазмы (дрожжи, микроскопические грибы).
Прокариоты – безъядерные организмы, ДНК располагается в
цитоплазме (бактерии).
Рисунок 1. Классификация микроорганизмов
Систематика (таксономия) – наука, занимающаяся вопросами
классификации, номенклатуры и идентификации микроорганизмов.
Под классификацией микроорганизмов понимают распределение их по
группам (таксонам) на основании общих признаков. Каждая группа имеет
свое название (Рис.1).
Самой мелкой единицей классификации является «вид» – группа
микроорганизмов, наделенная общими стабильными
признаками и
происходящая от общего предка.
В микробиологии пользуются терминами «вид», «штамм», «клон»,
«культура».
Вид – это совокупность особей, имеющих общее происхождение и
генотип, морфологические, физиологические и др. признаки, способные в
определенных условиях вызывать одинаковые процессы.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 11 из 189
Культура - это микроорганизмы, выделенные от животного, человека,
растений и т.д. и выращенные на питательных средах. Культуры микробов
могут быть чистыми (из одного вида микроорганизмов) или смешанными (из
нескольких видов).
Штамм – культура одного и того же вида, но выделенная из различных
объектов и поэтому отличающаяся незначительным изменением свойств.
Клон – культура микроорганизмов, выращенная из одной микробной
клетки на искусственной питательной среде. Всё потомство обладает
совершенно одинаковыми свойствами.
Идентификация – отнесение микроорганизмов к определенному таксону
(виду) на основании конкретных признаков.
Номенклатура – система наименований, применяемых в определенной
области знаний.
Название бактериям присваивается в соответствии с правилами
Международного кодекса номенклатуры бактерий введенного с 1 января
1980 года. Принята двойная номенклатура, предложенная еще в 18 в. К.
Линнеем. Название бактериям дается на латинском языке и состоит из двух
слов. Первое слово обозначает род, к которому принадлежит данная
бактерия, второе – название вида. Родовое название пишется с прописной
буквы, видовое – со строчной.
В настоящее время классификация микроорганизмов основана на
комплексе следующих признаков:
1.Фенотипические признаки – внешние признаки, не связанные с
наследственностью и генотипом. Фенотипические признаки определяют
место микробов в классификации по их сходству по морфологическим
признакам, культуральным, физиологическим, тинкториальным и др.
Например, по классификации Красильникова микроорганизмы делятся на
три группы (по внешнему виду): 1 – шаровидные, 2 – палочковидные, 3 –
извитые.
2. Генотипические признаки. В основе геносистематики лежит
изучение нуклеотидного состава ДНК и наиболее важных характеристик
генома (величина, объем, молекулярная масса и др.).
Существует второй подход к систематике бактерий, преследующий
практические цели, т.е. служит для идентификации бактерий – установления
принадлежности к определенному виду. Для этого созданы определители,
которыми пользуются при определении вида того или иного
микроорганизма. К международным определителям бактерий относится
«Определитель бактерий 9», вышедший в свет в 1993 году.
В зависимости от строения клеточной стенки все бактерии делятся на 4
отдела: грациликуты, фирмикуты, тенерикуты, мендосикуты.
Грациликуты (или тонкокожие) – бактерии с тонкой клеточной
стенкой грамотрицательные бактерии.
Фирмикуты (или тостокожие) – бактерии с толстой клеточной
стенкой, грамположительные бактерии.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 12 из 189
Тенерикуты (или нежнокожие) – организмы, не имеющие клеточной
стенки. Микоплазмы.
Мендосикуты – бактерии, большинство из которых хотя и имеют
клеточную стенку, но она не содержит пептидогликан. Некоторые
грамположительные. Другие грамотрицательные сюда относятся
архебактерии.
2. Морфология и строение бактерий
К постоянным элементам микробной клетки относят: клеточную
стенку, цитоплазматическую мембрану, цитоплазму, нуклеоид (ядерное
вещество), рибосомы, мезосомы.
К непостоянным элементам относят капсулу, эндоспору, жгутики,
ворсинки.
Постоянные элементы. Оболочка состоит из двух слоев: наружной
мембраны, клеточной стенки.
Наружная мембрана – это вязкий слой слизи, состоящий из
полисахаридов (у кокков) или полипептидов (у бацилл). Выполняет
защитную функцию, предохраняет клетку от неблагоприятных факторов
внешней среды (температуры, высушивания, давления и т.д.).
Клеточная стенка – это основной слой (имеется только у бактерий),
он придает клетке форму и определяет ее морфологические особенности.
Отсюда кокки, палочки или извитые формы. Выполняет защитную функцию.
Кроме того, через нее поступают питательные вещества внутрь клетки, т.е.
участвует в обмене веществ. Основу клеточной стенки составляет
пептидогликан или муреин (от лат.murus – стенка), являющийся каркасом
бактериальной клетки и имеющий сетчатую структуру. Химический состав и
ультраструктура клеточной стенки бактерий лежит в основе разного
окрашивания бактерий по методу Грама и деления их на грамположительные
и грамотрицательные. Этот метод предложен в 1884 г. Х.Грамом и
используется для дифференцирования бактерий.
Цитоплазматическая мембрана. Полупроницаемая оболочка,
отделяющая цитоплазму от клеточной стенки. В химическом отношении это
белково-липидный комплекс, состоящий из 50-75% белков и 15-50%
липидов(90% фосфолипидов). Через цитоплазматическую мембрану
осуществляется поступление питательных веществ в клетку и выход
продуктов метаболизма наружу – является осмотическим барьером клетки.
При нарушении осмотического давления наступает кариопикноз
(разбухание) или кариолизис (разрушении).
Цитоплазма – безоболочечная коллоидная часть клетки с зернистой
структурой. Основную массу гранул составляют рибосомы, включения.
Центральную часть цитоплазмы занимает ядерный аппарат – нуклеоид.
Нуклеоид - ядерное вещество, генетический аппарат микробной
клетки. Представлен молекулой ДНК. Нуклеоид обеспечивает видовую
принадлежность, участвует при размножении бактериальной клетки. В
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 13 из 189
клетках бактерий обнаружены внехромосомные генетические элементы,
называемые плазмидами. Плазмиды это небольшие ковалентнозамкнутые
кольцевые молекулы ДНК, содержащие 1500-40000 пар нуклеотидов.
Плазмиды играют важную роль в эволюции прокариот, так как придают им
дополнительные свойства, способствующие их выживанию.
Непостоянные элементы. Капсула, спора и жгутики.
Капсула – слизистый слой, расположенный над клеточной стенкой
бактерий. Капсула образуется при попадании патогенного микроба в
организм. Она выполняет защитную функцию.
Спора – это стадия покоя в жизненном цикле бактериальной клетки.
Споры образуются при попадании бактерий во внешнюю среду, в условия
неблагоприятные для жизнедеятельности. Споры устойчивы к физическим и
химическим факторам. Различают центральное (возбудитель сибирской
язвы), терминальное (возбудитель столбняка) и субтерминальное
(возбудитель ботулизма) расположение.
Жгутики образованы белком флагелином. Являются средством
передвижения. Количество жгутиков и расположение их на поверхности
клетки разное. Патогенные свойства реализуются за счет адгезии –
прилипания к ворсинкам кишечника. Кроме жгутиков на поверхности клеток
могут быть фимбрии (ворсинки, пили). Это прямые полые цилиндры,
отходящие от цитоплазматической мембраны. Они образованы белком
пилином. Принимают участие в конъюгации.
Таким образом, непостоянные элементы микробной клетки
являются дифференцирующими признаками бактерий.
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №2
1. Адгезия
2. Вид, культура чистая, культура смешанная, клон, штамм
3. Систематика (таксономия): классификация микроорганизмов
(грациликуты,
фирмикуты,
тенерикуты,
мендосикуты);
номенклатура, идентификация
4. Постоянные
элементы
бактерий
(клеточную
стенку,
цитоплазматическую мембрану, цитоплазму, нуклеоид (ядерное
вещество),
рибосомы,
мезосомы).
(Грамположительные
бактерии. Грамотрицательные бактерии)
5. Непостоянные элементы бактерий (капсула, эндоспора и
жгутики)
6. Формы микроорганизмов (кокки, бактерии, извитые)
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ:
Систематика, классификация и номенклатура микроорганизмов.
«Вид», «штамм», «клон» микроорганизмов. Постоянные (нуклеоид,
цитоплазма, оболочка) и непостоянные (спора, капсула, жгутики) элементы
бактерий.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 14 из 189
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА:
Основная
1. Бияшев Б.К. Ветеринарная микробиология и иммунология.- Алматы,2007.
– 417 с.
2. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Костенко Т.С. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. М., 2008. – 224с.
Дополнительная
1. Мудрецова-Висс К.А., Дедюхина В.П. Микробиология санитария и
гигиена: учебник – 4-е изд. – М.: ИД «Форум»: ИНФРА-М, 2014. – 400с.
2. Тлепов А.А. Микробиология. – Алматы,2011. – 314 с.
3. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и
иммунология. –М.: КолосС, 2003.-432 с.
4. Нетрусов А.И., Котова И.Б. Общая микробиология.-М: Издательский
центр «Академия», 2007. – 288 с.
5. Сидоренко О.Д., Борисенко Е.Г. и др. Микробиология: Учебник для
агротехнологов. – М.: ИНФРА-М, 2005. – 287 с.
6. Горохова С.С. Основы микробиологии, производственной санитарии и
гигиены. – М.,2008.
7. Блейм Т.Н. Сборник тестов по микробиологии. Учебное пособие. –
Семипалатинск: СГУ имени Шакарима,2005. – 112 с.
8. Ветеринарная микробиология и иммунология /Под ред.проф.
Н.А.Радчука.-М.,1991.-С.3-10.
Модуль 2
Физиология микроорганизмов
Лекция № 3-4:
ТЕМА: Физиология микроорганизмов
План:
1.
2.
3.
4.
5.
Химический состав бактерий
Ферменты микроорганизмов
Типы питания микроорганизмов
Типы дыхания микроорганизмов
Рост и размножение микроорганизмов
Ключевые слова: физиология микроорганизмов, аэробы, анаэробы,
аутотрофы, гетеротрофы, метаболизм, ферменты
Физиология микроорганизмов это раздел микробиологии, изучающий
химический состав, процессы питания, дыхания, роста и размножения.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 15 из 189
1. Химический состав микроорганизмов
Как и все живые существа бактерии состоят из органогенов –
углерода, кислорода, азота и водорода.
Химические элементы микробной клетки
Углерод 45-55 %
Азот 8-15%
кислород 30%
Водород 8%
Рисунок 1. Химический состав бактерий
В среднем бактериальная клетка содержит 80% воды и 20 % сухого
вещества. Содержание воды более или менее постоянно. Вода является
растворителем органических и неорганических веществ. В составе бактерий
различают свободную и связанную воду. Свободная вода служит дисперсной
средой для коллоидов, растворителем кристаллических веществ, источником
водородных и гидроксильных ионов. Связанная вода находится в комплексах
(сложные соли, гидраты). Она является структурным растворителем. При
подготовки к спорообразованию количество воды уменьшается до 40%.
Клетка, в таком состоянии, способна длительно переживать в окружающей
среде.
Сухое вещество содержит минеральные соли, белки, углеводы,
липиды, ферменты, витамины, токсины, пигменты и антибиотики.
Минеральные вещества. Количество их составляет от 2 до 30 % от
сухого вещества.. Минеральные вещества необходимы для поддержания
внутриклеточного осмотического давления, для поддержания положительной
электрозаряженности, для регулирования рН среды и для активизации
ферментов. Самыми важными минеральными веществами являются – Р, К,
Na, Mg, S, Cl, Fe, Ca. Микроэлементы используются клеткой для синтеза
витаминов, активизации ферментов, стимулируют процессы роста и
размножения и др. К ним относят Cu, Ni (никель), Mn, Mo, Zn, Sb (олово).
Белки. Составляют от 40 до 80 % сухого остатка. Они определяют
видовую специфичность микроба, вирулентность, окраску, иммуногенность
(способность вызывать защитные реакции), устойчивость бактерий во
внешней среде. Представлены белки в микробной клетке простыми белками
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 16 из 189
протеинами (альбумины, глобулины) и сложными беками протеидами. В
состав сложных белков входят нуклеопротеиды (протеины, связанные с
нуклеиновыми кислотами), хромопротеиды (обуславливают цвет бактерий),
мукопротеины, гликопротеины (входят в состав клеточной стенки).
Углеводы. Содержат 10-30% сухого остатка клетки. Бактерии
содержат две категории углеводов 1) моно- или дисахара; 2) полисахариды.
Они входят в структуру клеточной стенки. Гр (+) бактерии имеют более
толстую стенку(до 50 нм), в составе которой много гликозидов, тейхоевых
кислот (полисахариды).
Липиды. Составляют от 0,2 до 41 % сухого вещества. У риккетсий,
дрожжей, микобактерий, грибов до 40 % липидов, у других не более 3-7%
(по Радчуку). Липиды обнаруживаются в бактериях в форме крупных
биологически активных молекул, или реже в свободном состоянии в виде
пищевых вакуолей. У бактерий различают следующие классы липидов: 1) в
форме свободных жирных кислот, 2) в форме восков, 3) в форме
фосфолипидов ( у кислотоустойчивых бактерий до 6,5% сухого вещества).
Липиды обуславливают проницаемость, поверхностный электрический
заряд. Они входят в состав токсической фракции ряда микробов. Молекулы
липидов комплектуют цитоплазматическую мембрану и клеточную стенку
бактерий. Липидов много у Гр (-) бактерий, в виде липополисахарида и
липополисахаридо-протеина. Липиды являются резервными веществами и
могут быть использованы как исходные компоненты для синтеза белков.
2. Ферменты микроорганизмов
Ферменты это биологические катализаторы, усиливающие скорость
реакций. Ферменты – глобулярные белки, молекулярная масса которых
колеблется от 15 кД до нескольких тысяч. Это простые белки и сложные
белки, например уреаза. Пепсин, трипсин – простые белки, а
карбоксипептидаза, амилаза, рибонуклеаза – сложные. С помощью
ферментов у микроорганизмов осуществляются процессы метаболизма:
пищеварение, дыхания, выделения. Незначительное количество ферментов
превращает большое количество субстрата, оставаясь при этом в свободном
состоянии. Так. Одна часть химозина (сычужного фермента) может свернуть
до 12 млн частей молока; 1 г амилазы при определенных условиях может
превратить в сахар 1 т крахмала.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 17 из 189
Рисунок 2. Ферменты бактерий
Ферменты вырабатываются клетками и способны действовать, даже
будучи выделенными из нее, что имеет большое практическое значение. Для
ферментов характерны термолабильность и высокая специфичность.
Например, фермент лактаза расщепляет только сахар лактозу.
Микробная клетка может содержать большое количество ферментов.
Например, у аспергилла обнаружено до 50 ферментов. Поэтому
микроорганизмы могут осуществлять одновременно ряд различных реакций
в среде, где они находятся.
Различают экзо- и эндоферменты.
Экзоферменты выделяются микробной клеткой при жизни в субстрат
(окружающую среду), растворимы в питательной среде и проходят
бактериальные фильтры. Эти ферменты связаны в основном с процессом
питания: расщепляют сложные высокомолекулярные вещества (белки,
крахмал, клетчатку), т.е. подготавливают питательные вещества к усвоению
микробной клеткой.
Эндоферменты прочно связаны с бактериальной клеткой и действуют
только внутриклеточно, осуществляют дальнейшее разложение питательных
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 18 из 189
веществ, и превращение их в составные части клетки. К таким ферментам
относят дегидрогеназы, оксидазы.
Оптимальная температура для действия ферментов 40-50 град по С. при
температуре 100 град. они разрушаются. На их активность влияет и рН
среды.
Название фермента связано с веществом, на которое он действует, с
изменением окончания на «аза» или с природой катализируемой им
химической реакции. На этом основана и современная классификация их. В
настоящее время насчитывается более двух тысяч ферментов. Различают 6
групп ферментов (Рис.2)
1.Оксидоредуктазы – ферменты катализирующие окислительновосстановительные реакции (дегидрогеназы – НАД, НАДФ, ФАД).
Ферменты, принимающие участие в переносе электронов водорода,
кислорода и др.
2. Трансферазы – ферменты, катализирующие перенос отдельных
радикалов, частей молекул или целых атомных группировок (не водорода) от
одних соединений к другим. (ацетилтрансфераза, фосфотрансфераза)
3.Гидролазы – ферменты, катализирующие реакции расщепления и
синтеза из них сложных соединений, как белки, жиры и углеводы, с участием
воды.
4. Лиазы - ферменты, катализирующие отщепление от субстратов
определенных химических групп с образованием двойных связей или
присоединение отдельных групп или радикалов по двойным связям.
5. Изомеразы – ферменты, осуществляющие превращение органических
соединений в их изомеры.
6. Лигазы – ферменты, катализирующие синтез сложных органических
соединений из простых.
В микробиологической практике ферментативную активность бактерий
применяют для идентификации и дифференциации бактерий, в
биотехнологии – для получения ферментов, приготовления уксусной,
молочной, щавеливой, лимонной кислот, молочных продуктов (сыр,
ацидофилин,
кумыс),
в
виноделии,
пивоварении,
силосовании.
Ферментативная активность микроорганизмов определяет патогенез и
клиническую картину инфекционных заболеваний.
С помощью ферментов у микроорганизмов осуществляются процессы
метаболизма: пищеварение, дыхания, выделения. Незначительное количество
ферментов превращает большое количество субстрата, оставаясь при этом в
свободном состоянии.
3. Типы питания микроорганизмов
Метаболизм
объединяет
два
взаимосвязанных,
но
и
взаимопротивоположных процесса: анаболизм и катаболизм.
Анаболизм это использование микроорганизмами питательных веществ,
для биосинтеза веществ собственного тела.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 19 из 189
Катаболизм это извлечение энергии из питательных веществ, которая
используется микроорганизмами для своей жизнедеятельности.
Под питанием понимают получение из окружающей среды источников
энергии и веществ, необходимых для биосинтеза клеточных компонентов.
По способам питания микроорганизмы делятся на две группы:
автотрофы и гетеротрофы (Рис. 3).
Типы питания
Автотрофы
Фотоавтотрофы
Гетеротрофы
и
Хемоавтотрофы
Сапрофиты
Паразиты
Факультативные
облигатные
Рисунок 3. Типы питания
1. Аутотрофные микроорганизмы – используют неорганические
вещества в качестве источника углерода – углекислый газ и не нуждаются в
сложных органических соединениях.
2. Гетеротрофные микроорганизмы - получают углерод из
органических углеродсодержащих соединений, которым являются углеводы,
углеводороды, аминокислоты и органические кислоты.
3.Метанотрофы –используют органические вещества неживой
природы.
4. Паратрофы – используют органические вещества живой природы.
5.Прототрофы – способны сами синтезировать необходимые вещества
из низкоорганизованных.
6.Ауксотрофы - являются мутантами прототрофов, потерявшими гены;
ответственны за синтез некоторых веществ –витаминов, аминокислот,
поэтому нуждаются в этих веществах в готовом виде.
7. Органотрофы - используют органические вещества в качестве
доноров водорода для восстановления углерода.
8. Литотрофы – используют минеральные вещества в качестве доноров
водорода для восстановления углерода.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 20 из 189
9. Фотолитотрофы – используют энергию солнечного света.
10.Фотоорганотрофные микроорганизмы – для восстановления
углекислого газа могут использовать водород органических соединений.
11.Хемолитотрофные микроорганизмы – способны усваивать
углекислоту и синтезировать органические вещества за счет химической
энергии, получаемой при окислении различных минеральных веществ.
12.Хемоорганотрофные микроорганизмы – нуждаются в готовых
органических веществах.
В основе питания бактерий лежит осмотическое явление, кроме того,
питание
может
осуществляться
с
помощью
диффузии
и
стереохимического переноса питательных веществ с помощью особых
белков называемых пермеазами.
4. Типы дыхания микроорганизмов
Дыхание микроорганизмов это сложный биологический процесс,
сопровождаемый
окислением
или
восстановлением
различных,
преимущественно органических соединений с последующим выделением
энергии в виде АТФ, необходимой микробам для физиологических нужд.
Дыхание микроорганизмов может осуществляться как в присутствие
кислорода воздуха, так и без него. В связи с этим микроорганизмы разделяют
на аэробы и анаэробы.
Аэробы это микроорганизмы, живущие и размножающиеся за счет
свободного доступа кислорода воздуха.
Анаэробы это микроорганизмы, живущие и размножающие в условиях
отсутствия кислорода.
Имеются и промежуточные формы. По типу дыхания (Рис.4)
микроорганизмы подразделяют на 4 группы:
1. Облигатные или строгие аэробы – это микроорганизмы, которые живут
при свободном доступе кислорода (уксуснокислые бактерии, туберкулезная
палочка);
2. Микроаэрофильные бактерии – способны расти и размножаться в
присутствие незначительного количества свободного кислорода воздуха до
1% (актиномицеты, бруцеллы);
3. Факультативные микроорганизмы – живущие как в присутствие, так и в
отсутствие кислорода воздуха. (кандида, верховые дрожжи, энтеробактерии).
Они имеют два набора ферментов.
4. Облигатные или строгие анаэробы развиваются при полном отсутствии
кислорода в окружающей среде (маслянокислые бактерии, возбудитель
столбняка, ботулизма).
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 21 из 189
Типы дыхания
Строгие аэробы
Строгие анаэробы
Микроаэрофилы
Факультативные анаэробы
Рисунок 4. Типы дыхания
Механизм дыхания. Первым этапом дыхательных процессов является
отнятие водорода от субстрата с помощью ферментов – дегидрогеназ (НАД и
НАДФ).
Отнимая водород от окисляемого субстрата они переходят в
восстановительную форму (НАД х Н2 и НАДФ х Н2) и переносят водород на
другое вещество (акцептор).
СУБСТРАТ-Н2 + НАД (НАДФ) → окисленный субстрат + НАД хН2(НАДФ
хН2)
АКЦЕПТОРОМ водорода для аэробов служит кислород воздуха.
АКЦЕПТОРОМ водорода для анаэробов являются другие вещества
(соли азотной, серной кислот, углекислоты).
Типы биологического окисления. Различают четыре типа
биологического
окисления
(Рис.5).
Прямое
окисление,
аэробное
дегидрирование, анаэробное дегидрирование, брожение.
Наибольшее практическое значение из всех типов биологического
окисления имеет брожение. Оно осуществляется только микроорганизмами. В
промышленности с помощью брожения получают множество полезных
химических веществ – спирты, молочную, щавелевую, уксусную кислоты,
витамин В12. Кроме химических веществ брожение дает ценные продукты
питания – кисломолочные (кефир, сметана, творог, йогурт, кумыз).
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Прямое окисление
Аэробное
дегидрирование
Брожение
Анаэробное
дегидрирование
Страница. 22 из 189
Рисунок 5. Типы биологического окисления
5. Рост и размножение микроорганизмов
Под ростом понимают увеличение массы отдельной бактериальной
клетки. Под размножением - увеличение числа особей микроорганизмов.
Бактерии размножаются преимущественно простым поперечным
делением пополам, которое происходит в различных плоскостях. При этом
образуются многообразные сочетания клеток (кисть винограда –
стафилококки, цепочки - стрептококки, соединения по парам – диплококки,
тюки, пакеты – сарцины др.). Процесс деления бактерии проходит ряд
последовательных этапов. Сначала появляется перетяжка, состоящая из
цитоплазматической мембраны, а затем происходит разъединение
образовавшихся дочерних клеток. Параллельно с этим синтезируется
клеточная стенка. Вместе с цитоплазмой в дочерние клетки переходит и
нуклеоид, состоящий из ДНК. ДНК реплицируется в результате разрыва
водородных связей, образуются две спирали ДНК, каждая из которых
включается в состав новой клетки. Затем дочерние односпиральные ДНК
восстанавливают водородные связи и вновь образуются двуспиральные ДНК.
Грибы размножаются в основном в виде спор, дрожжи - почкованием.
Большинство клеток делится через 20-30 минут. Так, у кишечной
палочки новое поколение образуется через 20-30 минут, у
нитрифицирующих бактерий - через 5-10 ч, а у возбудителей туберкулеза
только через 18-24 ч.
Микроорганизмы размножаются быстро, но не беспредельно. Это
связано с нарушением оптимальных условий роста и размножения
(истощение среды, неблагоприятная температура, свет, продукты
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 23 из 189
жизнедеятельности). Процесс размножения микроорганизмов на не
сменяемой среде (in vitro) протекает неравномерно (стадийно).
Различают восемь (четыре) стадий (разные авторы по-разному).
1. Начальная фаза (лаг-фаза), или фаза покоя. Культура приспосабливается к
питательной среде.
2.
Экспоненциальная
(логарифмическая)
фаза
характеризуется
максимальным увеличением клеток в культуре. Оно идет в геометрической
прогрессии. Большинство клеток молодые и биологически активные.
Питательная среда истощается, продукты обмена замедляют рост. Кривая
роста постепенно принимает горизонтальное положение.
3.
Стационарная фаза, или период зрелости. Кривая идет параллельно оси
абсцисс. Наступает равновесие между числом вновь образованных и
погибших клеток. Количество питательной среды уменьшается, плотность
клеток увеличивается, токсическое действие продуктов обмена усиливается.
Все это ведет к гибели клеток.
4.
Фаза отмирания (фаза старости). Происходит уменьшение клеток и
изменение их. Появляются деградированные формы, а также споры. Через
несколько недель или месяцев культура погибает, из-за ядовитого действия
продуктов жизнедеятельности. Знание закономерностей развития имеет
практическое значение при выращивании и сохранении культур на жидких и
плотных питательных средах.
Знание физиологических свойств микроорганизмов позволяет
культивировать (выращивать) их на искусственных питательных средах,
изучать их свойства, определять вид микроба.
Понятийный аппарат к лекциям 3-4 (Тезаурус)
1.Типы питания микроорганизмов (аутотрофные микроорганизмы,
гетеротрофные
микроорганизмы,
метанотрофы,
паратрофы,
прототрофы, ауксотрофы, органотрофы, литотрофы, фотолитотрофы,
фотоорганотрофные микроорганизмы, хемолитотрофные микроорганизмы,
хемоорганотрофные микроорганизмы)
2. Типы дыхания микроорганизмов (облигатные (строгие, абсолютные)
аэробы, микроаэрофилы, факультативные анаэробы, облигатные (строгие,
абсолютные) анаэробы)
3. Пермеазы
4. Экзоферменты
5. Эндоферменты
6. Классификация ферментов (оксидоредуктазы, трансферазы, гидролазы,
лиазы, изомеразы, лигазы)
7. Типы биологического окисления
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ
1. Механизм и источники питания микроорганизмов.
2. Классификация ферментов. Их значение в жизни микроорганизмов.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 24 из 189
3. Значение ферментативной активности микробов в лабораторной
практике.
4. Механизм дыхания микроорганизмов.
5. Понятие «рост» и «размножение» микроорганизмов.
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА:
Основная
1. Бияшев Б.К. Ветеринарная микробиология и иммунология.- Алматы,2007.
– 417 с.
2. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Костенко Т.С. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. М., 2008. – 224с.
Дополнительная
1. Мудрецова-Висс К.А., Дедюхина В.П. Микробиология санитария и
гигиена: учебник – 4-е изд. – М.: ИД «Форум»: ИНФРА-М, 2014. – 400с.
2. Тлепов А.А. Микробиология. – Алматы,2011. – 314 с.
3. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и
иммунология. –М.: КолосС, 2003.-432 с.
4. Нетрусов А.И., Котова И.Б. Общая микробиология.-М: Издательский центр
«Академия», 2007. – 288 с.
5. Сидоренко О.Д., Борисенко Е.Г. и др. Микробиология: Учебник для
агротехнологов. – М.: ИНФРА-М, 2005. – 287 с.
6. Горохова С.С. Основы микробиологии, производственной санитарии и
гигиены. – М.,2008.
7. Блейм Т.Н. Сборник тестов по микробиологии. Учебное пособие. –
Семипалатинск: СГУ имени Шакарима,2005. – 112 с.
8.Ветеринарная микробиология и иммунология /Под ред.проф. Н.А.Радчука.М.,1991.-С.3-10.
Лекция № 5
Тема: Генетика микроорганизмов
План:
1. Структура и функции генома микроорганизмов
2. Формы изменчивости у микроорганизмов
3. Генетические взаимодействия (самостоятельно)
4. Генная инженерия
Ключевые слова: генетика, геном микробной клетки, фенотипическая
изменчивость, генотипическая изменчивость, мутации, рекомбинативная
изменчивость.
Генетика – наука о наследственности и изменчивости организмов.
1.
Структура и функции генома микроорганизмов
Геном – носитель генетической информации. Геном прокариотной
клетки находится в нуклеоиде в виде одной хромосомы, представленой
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 25 из 189
громадной 2-х спиральной молекулой ДНК, включающей в зависимости от
вида и размера микробной клетки от 50 до 2-3 тысяч генов. В среднем
каждый ген состоит из 1000 пар нуклеотидов. Геном вируса гепатита В имеет
самое маленькое число генов. Геном состоит из 4 генов и имеет
молекулярную массу 1,6 Д. Геном вируса – возбудителя СПИДа представлен
молекулой РНК, который состоит из 9213 нуклеотидов, образующих 9 генов.
Геном бактериофагов – из 9-200 генов, у хламидий – из 400-600 генов, у
риккетсий – из 1000 генов. E.coli имеет молекулярную массу 2,8 х 10 (9) Д и
содержит 2500-3000 генов.
ДНК большинства растений и животных состоит из нескольких
миллиардов пар нуклеотитов. Геном человека составляет 3,5 х 10 (9) пар
нуклеотидов – 3,5 х 10 (6) пар генов.
Молекула ДНК является носителем генетической информации и
состоит из генов, которые располагаются линейно вдоль хромосомы. Каждый
ген представлен определенным участком молекулы ДНК. Специфическая
информация, содержащаяся в гене, определяется последовательностью
оснований в цепи ДНК. «Алфавит», с помощью которого записана эта
информация ДНК, вкдючает четыре «буквы» основания: аденин, гуанин,
тимин и цитозин.
Гены
являются
функциональной
единицей
наследственности. В генах записана информация относительно всех свойств,
присущих клетке. Каждый ген может существовать в виде ряда структурных
форм – аллелей. Совокупность аллелей всех генов клетки составляет генотип.
В настоящее время созданы генетические карты микроорганизмов,
отражающие расположение генов на хромосоме. Бактерии гаплоидны, т.е.
имеют один набор хромосом.
Возникает вопрос, каким же образом сохраняется наследственная
информация при росте и размножении бактерий? Перед делением клетки
происходит репликация генов (удвоение) и на каждой цепи по принципу
комплементарности осуществляется синтез двух новых цепей. Таким
образом, две новые цепи содержат одну родительскую и одну вновь
синтезированную. Эта точная репликация ДНК гарантирует сохранение
генетической информации.
ДНК, будучи носителем генетической информации, тем не менее, не
служит матрицей для синтеза полипептидов. Биосинтез белков происходит
на рибосомах, которые свободно располагаются в цитоплазме и не никак не
контактируют с ДНК.
Синтез белка идет в два этапа:
- на первом этапе происходит переписывание (транскрипция) информации
с ДНК на РНК, которую именуют матричная или информационная РНК.
иРНК представляет точную копию ДНК с той лишь разницей, что тимин
ДНК заменен в РНК на уроцил.
- на втором этапе на рибосомах осуществляется соединение аминокислот в
полипептидную цепь в порядке, определяемом триплетами мРНК
(трансляция (перевод)). В этом процессе кроме мРНК и рибосом
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 26 из 189
принимают участие тРНК, ряд ферментов и др.факторы. тРНК подносит
триплеты (колоны), каждый из которых кодирует одну аминокислоту и таким
образом
осуществляется
синтез
определенной
нуклеотидной
последовательности, определяющей структуру специфического белка. К
мРНК как правило присоединяется несколько рибосом и такой комплекс
мРНК и рибосом называется полисомами.
Кроме того, некоторая часть генетической информации содержится вне
хромосомы в цитоплазме в виде так называемой плазмиды (замкнутая в
кольцо цепь нуклеиновой кислоты, состоящей не более чем из 40 триплетов и
составляющую примерно 1/100 длины ДНК хромосомной). Плазмиды
разнообразны по генетическим свойствам и молекулярным размерам. М.м.
плазмид от 4,5 х 10 (6) до 9,4 х 10(6).
Плазмиды придают бактериям дополнительные свойства, но не
обязательные. Бактерии могут терять плазмиды, но потеря не влияет на
основные свойства клетки. Плазмиды имеются у многих бактерий.
Наиболее изученными являются:
- половой фактор (F);
- фактор множественной лекарственной устойчивости (R);
-фактор бактериоциногении (Col);
- плазмиды, контролирующие у E.coli синтез энтеротоксина (Hly);
- плазмиды, детерминирующие синтез поверхностных антигенов (К88, К99);
- известны плазмиды, контролирующие метаболические процессы,
ферментацию углеводов, образование H2S, резистентность к действию
тяжелых металлов (ртути) и др.
Например:
плазмида
бактериоциногении
контролирует(
детерминирует) синтез белковых веществ колицинов (антибиотических
веществ), которые подавляют рост и размножение чувствительных к ним
бактерий (близкородственных).
Впервые способность выделять колицины установлена в 1925 г. Gratta
у штамма E.coli, поэтому феномен получил название колициногении и
плазмида – Col. Другие многие бактерии также выделяют белклвоподобные
вещества, летальные для близких видов. Вещества эти называют –
бактериоцины, феномен – бактериоциногении (туберкулоцины, пестицины,
вибриоцины). Колицины, адсорбируются на чувствительных клетках
(лишенных –Col-фактора), не проникают внутрь клетки, вызывают
нарушение метаболизма, приводят клетку к гибели.
У бактерий может быть одновременно до 4 плазмид.
Плазмиды (F-фактор) способные интегрировать в хромосому и
реплицировать вместе с ней получили название эписом.
Практическое применение плазмид. Плазмиды обладают
способностью передаваться от бактерий при конъюгации. Их называют
конъюгативными. Внедряясь в клетку реципиента, коньюгативные
плазмиды сообщают ей свойства донора. Это свойство применяется при
создании новых штаммов – продуцентов полезных веществ.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 27 из 189
Таким образом, геном и плазмида обуславливают все фено- и
генотипические свойства микроорганизмов.
Функции генома – сохранение генетического постоянства ДНК,
проявление внешних признаков.
2.Типы изменчивости у микроорганизмов.
Наследственность бактерий – свойство микробов, обуславливающее
воспроизводства одних и тех же морфологических и других свойств в ряде
поколений, а также обуславливает специфический характер индивидуального
развития.
Изменчивость – свойство противоположное наследственности. У
бактерий она может осуществляться путем изменения генотипа ( мутации
генов, различным сочетанием генов двух бактерий при рекомбинациях) и
фенотипа (различным проявлением признаков, зависящих от внешних
условий - модификационная изменчивость).
У бактерий различают фенотипическую и генотипическую
изменчивость (Рис.1) . К фенотипическим изменениям относят адаптацию
и модификацию.
Адаптация – приспособление микроорганизмов к условиям среды.
Приспособленные клетки размножаются (при действии антибиотиков), а
остальные погибают, то есть происходит естественный отбор. В геноме
бактерий всегда имеются запасные возможности, т.е.гены, определяющие
выработку адаптивных ферментов. Например, кишечная палочка, растущая
на среде, не содержащей углевод лактозу, не вырабатывает фермент лактазу,
но если пересеять культуру на среду с лактозой, то она начнет вырабатывать
этот
фермент.
Адаптивные
ферменты
позволяют
микробам
приспосабливаться к определенным условиям существования.
Модификации – изменение микроорганизмов под влиянием
условий среды. Изменяются только внешние (фенотипические) признаки
клетки (форма, размеры). Так, добавление в среду глицерина и аланина
вызывает полиморфизм у холерного вибриона. При добавлении среду
кальция хлорида клетки кишечной палочки сильно укорачиваются. После
удаления этого вещества из среды палочки вновь принимают исходную
форму.
Изменениям подвержен и генотип. Генотипическая изменчивость
играет большую роль в эволюции микроорганизмов. Если бы клетки не
обладали способностью к изменению генотипа, то любое неблагоприятное
изменение условий среды привело бы к вымиранию вида. Например,
появление бактериофагов в культуре вызвало бы полную гибель ее, если бы
гены, определяющие фагочувствительность, не подвергались изменениям и
клетки в силу этого не приобрели свойство фагорезистентности.
В основе генетической изменчивости лежат мутации и рекомбинации.
Они происходят в генетическом аппарате клетки - в ДНК и проявляются
стабильностью изменения каких-либо свойств.
Мутации (mutacio – изменение) характеризуются изменением
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 28 из 189
Рисунок 1. Виды изменчивости
последовательности нуклеотидов в ДНК, возникающие под влиянием
эндогенных факторов или при действии химических и физических факторов
(мутантов). Измененнные бактерии называются мутантами. Мутации
приводят к стойким передающимся по наследству изменениям свойств
бактерий. Мутации делятся на две группы:
1. Мутации спонтанные
2. Мутации индуцированные
Мутации спонтанные – происходят в природе, независимо от воли и
деятельности человека. Например от действия радиоактивных элементов.
Примером спонтанным мутаций возникающих при
культивировании
бактерий может быть феномен диссоциации, т.е. разъединение бактерий и
возникновение S- и R- форм (Таблица1). Есть и переходные формы: М(слизистая) и О-(переходная) формы. Следует отметить, что большинство
патогенных
бактерий
имеют
S-форму,
R-формы
являются
слабовирулентными. Однако такие бактерии как возбудители сибирской язвы
и туберкулеза патогенны в R-форме.
Мутации индуцированные - такие изменения генотипа, которые
происходят путем определенных воздействий на бактерию различными
мутагенами, для получения клеток с заранее заданными свойствами.
ПРИМЕРЫ. Одним и з первых, кто изучал изменчивость у бактерий
основных при знаков был Л.Пастер. Он показал как можно ослабить
вирулентные свойства у микробов под влиянием физических, химических и
биологических факторов.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 29 из 189
Свойства клеток колоний S- и R-форм
Таблица 1
S-форма
Колонии прозрачные, с гладкой
блестящей поверхностью, круглые, с
ровными краями, выпуклые
Подвижные виды имеют жгутики
У капсульных видов хорошо видна
капсула или слизистый слой
Биохимически более активны
У патогенных видов выражены
вирулентные свойства
Полноценны в антигеном отношении
R-форма
Колонии шероховатые, неправильные
с
неровными
краями,
часто
морщинистые
Жгутики часто отсутствуют
Капсулы
или слизистый слой
отсутствуют
Биохимически менее активны
Слабовирулентные или авирулентные
Неполноценны
в
антигеном
отношении
Чувствительны к фагу
Слабочувствительны к фагу
Взвесь клеток в физиологическом Взвесь быстро оседает. Осадок
растворе гомогенная, стойкая. Клетки крошковидный,
клетки
нормальных размеров
полиморфные.
Так Луи Пастер в 1881 г. приготовил вакцину против сибирской язвы.
Он выращивал возбудителя при температуре -42,5С (вместо 37С) в течение
12 и 24 дней, что привело к снижению патогенности.
Таким же образом была получена вакцина против бешенства в 1885 г.
путем 133 последовательных заражений кроликов интрацеребрально. Тем
самым он ослабил вирус для людей. При подкожном введении предупреждал
у покусанных бешество (фиксированный вирус – virus fixe). Мутация при
пассаже на кроликах. Пассаж самая распространенная форма
индуцированной мутации применяемой на практике для получения
вакцин. (Пассаж – это многократные пересевы микробов. Мутации при
пассажи –пересев в системах культивирования не свойственных данному
микроорганизму в природе).
Путем мутации при пассаже на искусственной питательной среде
была получена вакцина против туберкулеза. Кальмет и Герен во Франции в
1919 г. путем длительных пассажей на картофельной среде с желчью и
глицерином, при Т-38 С
значительно снизили патогенные свойства
возбудителя туберкулеза бычьего вида. Таким образом полученный штамм
был назван вакциной БЦЖ (BCG – от фр.: Bacilla Calmet –Geren)/
Мутации могут быть точечными, которые затрагивают только одну
пару нуклеотидов и могут быть мутации-абберации – они затрагивают
изменение двух и более пар нуклеотидов в структуре генома.
Точечные мутации могут происходить в результате: замены пары
нуклеотидов, в результате выпадения (делеции) пары нуклеотидов, или в
результате вставки пары нуклеотидов. Самая легкая мутация это замена.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 30 из 189
Изменения происходят только в одном триплете, т.е. изменяется кодировка
только одной аминокислоты. Мутация замены не всегда приводит к
изменением фенотипа бактерий. Это обусловлено эффектом вырожденности
генетического кода, когда одна и та же аминокислота может кодироваться не
одним, а несколькими триплетами. Генотип изменяется.
Делеция и вставка – это сложные мутации, так как одновременно
меняется кодировка всех последующих аминокислот. Образуются другие
белки. (Плакат)
Мутации абберации – занимают большое место. Они могут
происходить в результате замены, вставки и выпадения двух и более пар
нуклеотидов, а также в результате инверсии. Это такая мутация, когда часть
нуклеотидной последовательности в составе нуклеиновой кислоты
разворачивается на 180С.
Мутации могут иметь различные последствия для бактерий. В
некоторых случаях меняется генотип, фенотипические свойства. В других
случаях, когда нарушатся синтез жизненно важного белка, мутация является
летальной. Мутация может быть условно летальной, если жизненноважный
белок сохраняет свою функцию только при определенных условиях внегней
среды (температура 37-40С).
Мутации по механизму действия могут быть прямыми и
обратимыми. Прямые мутации изменяют фенотип, а обратимые мутации
(реверсии) востанавливают его до такого состояния, каким он был перед
прямой мутацией (L-формы бактерий – утрачивают клеточную стенку под
воздействием различных факторов).
Мутагены – факторы, ведущие к проявлению мутации. Они бывают
физической, химической, биологической природы.
1. Физические мутагены.
1.1 Повышенная температура до 40-50 С. Она способствует
удалению пуринового основания – гуанина из цепочки ДНК. На его место
может встать любое азотистое основание.
1.2 УФО, рентгеновские лучи способствуют изменению химической
структуры пиримидиновых оснований (аденин, тимин). Под воздействием
этих лучей увеличивается внутримолекулярная энергия пиримидиновых
оснований и между двумя соседними молекулами пиримидиновых оснований
образуются мостики – ковалентные связи. Образуется димер, который не
может играть никакой информативной роли.
2. Химические мутагены.
2.1 Первая группа – это вещества, которые реагируют с нуклеиновой
кислотой только во время ее репликации. Такие химические веществ, а по
своей структуре сходны с пуриновыми и пиримидиновыми основаниями, но
не несут никакой информации и если в момент репликации ДНК такие
вещества окажутся в нуклеоиде, они могут встать в структуру ДНК на место
нуклеотидов.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 31 из 189
2.2 Вторая группа – это такие химические вещества, которые
вступают в реакцию с покоящейся молекулой ДНК, но для проявления
мутации необходима последующая репликация ДНК.
Таким образом мутации классифицируются:
По локализации различают мутации:
1. Генные (точечные)
2. Хромосомные
3. Плазмидные.
По происхождению мутации могут быть:
1. спонтанными ( образующиеся самопроизвольно и без видимого внешнего
воздействия);
2. индуцированными (проявляющиеся в результате обработки микробной
популяции мутагенными агентами).
По направлению мутационного изменения мутации подразделяются на:
1. Прямые (возникают в геноме «дикого типа» у бактерий в естественных
условиях обитания. Образовавшиеся особи являются мутантами).
2. Обратные (завершающиеся возвратом от мутантного типа к дикому).
3. Одной из форм мутации является диссоциация (мутация, в результате
которой в популяции микроорганизмов возникают особи, отличающиеся от
исходных внешним видом и структурой колоний, так называемые –S-формы
и R-формы).
3. Генетические взаимодействия (самостоятельно)
Генетические рекомбинации возникают в результате обмена
генетичеким материалом между бактериями. Получаются рекомбинанты,
обладающие свойствами обоих родителей. Рекомбинации осуществляются
путем трансформации, трансдукции, коньюгации.
Трансформация – вставка в струкрупу генома реуипиентной бактерии
свободного участка ДНК из среды, целого генома или части генома другой
бактерии (донорной) из среды. В результате трансформации образуется
полиплоидная бактерия.
Коньюгация
–
замена
участка
генома
одной
бактерии
соответствующим участком генома другой бактерии при непосредственном
контакте (половое разхмножение у бактерий).
Трансдукция – вставка в геном бактерий чужеродной генетической
информации, главным образом вирусов (бактериофагов).
4. Генетическая инженерия
Изучение генетики микроорганизмов позволило конструировать
рекомбинантные молекулы ДНК вне живой клетки (70-е г.20ст.)
Молекулярная генетика (50-60г.20ст)
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 32 из 189
Биотехнология –на стыке микробиологии, генетики и молекулярной
биологии. Биотехнология использует методы генетической и клеточной
инженении для получения биологических веществ с заданными свойствами
по производству антибиотиков, витаминов, вакцин, моноклональных
антител, диагностикумов.
Заключение. Генетическая система бактерий имеет четыре
особенности, присущие только им.
1.
Хромосомы бактерий, располагаются свободно в цитоплазме, не
имеющие мембран, но связаны с определенными рецепторами на
цитоплазматической мембране. Хромосома у E.coli мм, т.е. во много раз
превышает длину бактериальной клетки (1,5-3мкм в среднем).ДНК
компактным образом упакована, в виде спирали свернута.
2.
Бактерии являются гаплоидными организмами, т.е. имеют один
набор генов, которые определяют все основные свойства организма.
Содержание ДНК у них не постоянно (при благоприятных условиях ДНК по
массе может соответствовать 2, 4, 6 – 8 хромосомам). У всех других живых
существ содержание ДНК постоянное, и оно удваивается перед делением.
3.
У бактерий в естественных условиях передача генетической
информации происходит не только по вертикали, т.е. от родительской клетки
дочерним, но и по горизонтали с помощью различных механизмов:
конъюгации, сексдукции, трансдукции, трансформации. Практическое
применение.
4.
У
бактерий
кроме
хромосомного
генома
имеется
дополнительный
плазмидный
геном,
наделяющий
их
важными
биологическими свойствами, нередко – специфическими (приобретенными)
иммунитетом к различным антибиотикам и др. химиопрепаратам.
Понятийный аппарат (тезаурус)
1. Геном
2. Плазмида
3. Фенотипическая изменчивость (адаптация, модификация)
4. Генотипическая изменчивость (мутации, рекомбинации)
5. Мутации (спонтанные, индуцированные, прямые, обратные
(реверсионные), генные (точечные), хромосомные (мутацииабберации), плазмидные, диссоциация)
6. Пассаж
7. Рекомбинативная изменчивость (трансформация, трансдукция,
конъюгация)
8. Генетическая инженерия
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ
1. Сформулируйте цели и задачи генетики микроорганизмов.
2. Что вы понимаете под термином «ген»?
3. Что вы понимаете под термином «диссоциация культуры»?
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 33 из 189
4. Что означает термин «фенотипическая изменчивость»?
5. Что означает термин «генотипическая изменчивость»?
6.Что вы понимаете под термином «мутация»?
7.Что такое трансформация, трансдукция, конъюгация?
8. Что такое колицины (бактериоцины)?
9. Что такое «плазмиды»?
10. Назовите задачи, которые решает генетическая инженерия.
РЕКОМЕНДУЕМАЯ литература
Основная
1. Бияшев Б.К. Ветеринарная микробиология и иммунология.Алматы,2007. – 417 с.
2. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Костенко Т.С. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. М., 2008. – 224с.
Дополнительная
1. Тлепов А.А. Микробиология. – Алматы,2011. – 314 с.
2. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и
иммунология. –М.: КолосС, 2003.-432 с.
3. Нетрусов А.И., Котова И.Б. Общая микробиология.-М: Издательский
центр «Академия», 2007. – 288 с.
4. Сидоренко О.Д., Борисенко Е.Г. и др. Микробиология: Учебник для
агротехнологов. – М.: ИНФРА-М, 2005. – 287 с.
5. Горохова С.С. Основы микробиологии, производственной санитарии и
гигиены. – М.,2008.
6. Ветеринарная микробиология и иммунология /Под ред.проф.
Н.А.Радчука.-М.,1991.-С.3-10.
7. Блейм Т.Н. Сборник тестов по микробиологии. Учебное пособие. –
Семипалатинск: СГУ имени Шакарима,2005. – 112 с.
8. Костенко Т.С., Скаршевская Е.И., Гительсон С.С. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,1989.- 272с.
Модуль 3
Основы учения об инфекции и иммунитете
Лекция № 6
ТЕМА: УЧЕНИЕ ОБ ИНФЕКЦИИ
ПЛАН:
1. Типы
биотических
взаимоотношений
микроорганизмов
с
макроорганизмами.
2. Общая характеристика инфекции.
2.1 Определение понятий «инфекция», «инфекционный процесс»,
«инфекционная болезнь».
2.2 Патогенность и вирулентность микробов
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 34 из 189
3. Формы инфекций и периоды инфекционных болезней
4.Роль микроорганизма, макроорганизма и факторов внешней среды в
возникновении инфекционной болезни.
Ключевые
слова:
инфекция,
инфекционная
болезнь,
микробоносительство, иммунизирующая субинфекция.
1.Типы биотических взаимоотношений микроорганизмов с
макроорганизмами
Всякое сожительство микроорганизма с макроорганизмом представляет
собой симбиоз в широком смысле. Различают следующие формы симбиоза:
Мутуализм
Комменсализм
Метабиоз
Сателлизм
Синергизм
Паразитизм.
2. Определение понятий «инфекция», «инфекционный процесс»,
«инфекционная болезнь»
Инфекция (лат.infectio – впитывание, заражение) (по Радчуку) –
состояние зараженности, при котором развивается эволюционно
сложившийся
комплекс
биологических
реакций
взаимодействия
макроорганизма и патогенных микроорганизмов.
Инфекция (по Бияшеву Б.К.) – совокупность биологических процессов,
присходящих в макроорганизме при внедрении в него патогенных
микроорганизмов независимо от того, повлечет ли это внедрение за собой
развитие явного или скрытого заболевания или оно ограничестся только
временным носительством возбудителя.
Инфекционный процесс – динамика реакций взаимодействия микро- и
макроорганизмов (это совокупность физиологических и патологических
процессов, возникающих и развивающихся в организме при внедрении в него
патогенных микробов, которые вызывают нарушение постоянства его
внутренней среды и физиологических функций).
Наиболее яркой формой проявления инфекции является инфекционная
болезнь.
Отличия инфекционных болезней от других заболеваний.
1.
Инфекционная болезнь вызывается определенным патогенным
возбудителем.
2.
Больной организм становится источником возбудителя инфекции.
3.
В больном организме образуются антитела. Он становится
невосприимчивым к повторному заражению
4.
Контагиозность.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 35 из 189
5.
Цикличность в развитии инфекционной болезни (инкубационный
период, продромальный период (период предвестников), период развития
основных клинических признаков (разгар болезни), период выздоровления,
реконвалесцинции (исход болезни).
Микробоносительство – одна из форм взаимодействия между микро- и
макроорганизмом, когда животные не являются больными, отсутствуют
признаки заболевания. Хотя они являются источником возбудителя
инфекции.
Иммунизирующая субинфекция – состояние взаимодействия, когда
проникший в организм возбудитель вызывает иммунизаторную реакцию
(выработку антител) и в дальнейшем погибает, и организм не становится
источником инфекции.
3.Патогенность и вирулентность микробов
Чтобы возникла инфекционная болезнь, возбудитель должен обладать
патогенностью и вирулентностью.
Патогенность – видовой генетический признак микроорганизма, его
потенциальная возможность вызывать при благоприятных условиях
инфекционный процесс. Каждый вид, как правило, способен вызывать
определенную инфекционную болезнь. В зависимости от этого свойства все
микроорганизмы подразделяются на патогенные, условно-патогенные и
сапрофиты.
Реализация патогенности идет через вирулентность
Вирулентность – это степень патогенности конкретного
микроорганизма. Вирулентным считается тот микроорганизм, который даже в
исключительно-малых дозах приводит к болезни. Вирулентность это
штаммовый признак, он поддается количественной характеристике, т.е. ее
можно измерить. За единицу измерения вирулентности условно приняты
летальная и инфицирующая дозы. Вирулентность – это фенотипическое
проявление патогенности.
Факторы вирулентности: 1. инвазивные и 2. токсигенные
Инвазивные
факторы – капсула, ферменты (гиалуронидаза,
нейроминидаза), жгутики и другие химические компоненты.
Токсигенные факторы – токсины микроорганизмов: экзотоксины и
эндотоксины.
3. Формы инфекций и периоды инфекционных болезней
Классификация инфекций
А) по этиологии
1) бактериальные
2) вирусные
3) протозойные
4) микозы
5) микст(смешанные)-инфекции
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 36 из 189
В) По количеству возбудителей
1) моноинфекции
2) полиинфекции
С) По тяжести течения
1) легкие
2) тяжелые
3) средней тяжести
Д) По длительности
1) острые (явные)
2) подострые
3) хронические
4) латентные (скрытые)
5) сверхострые
Е) По путям передачи
1) Горизонтальные (воздушно-капельный, алиментарный, контактный,
трансмиссивный, половой)
2) вертикальные (от матери-плоду-транплацентарный, от матери к
новорожденному при рождении)
3) артифициальные (искусственные) – при инъекциях, обследованиях,
операциях.
Ж) В зависимости от локализации возбудителя различают:
1) очаговую инфекцию
2) генерализованную инфекцию. Бактеремия, вирусемия, септицемия
(сепсис) – наиболее тяжелая форма.
Выделяют также:
-экзогенные инфекции
-эндогенные инфекции (аутоинфекции).
Различают следующие инфекционные болезни: антропонозные (болеют
только люди: дизентерия, холера и т.д.); зоонозные (болеют только
животные: чума КРС, чума свиней); зооантропонозные (ими болеют и
животные и люди: туляремия, бруцеллез, лептоспироз и др.)
Понятийный аппарат к лекции 6 (Тезаурус)
1. Типы биотических взаимоотношений между микроорганизмами и
макроорганизмами (мутуализм, комменсализм, паразитизм, метабиоз,
сателлизм)
2. Инфекция
(инфекционная
болезнь,
микробоносительство,
иммунизирующая субинфекция)
3. Инфекционный процесс
4. Патогенность
5. Вирулентность
6. Факторы вирулентности (инвазивные - капсула, ферменты,
жгутики,пили и токсигенные – экзотоксины, эндотоксины). Агрессины.
Адгезия.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 37 из 189
7. Виды инфекций (токсемия, бактеремия, сепсис (септицемия),
септикопиемия, пиемия, реинфекция, суперинфекция, рецидив, ремиссии.,
моноинфекции, смешанные инфекции, вторичная (секундарная)
инфекция)
8. Микробоносительство (здоровыми животными, переболевшими
животными)
9. Формы течения и клиническое проявление инфекционных болезней
(молниеностное (сверхострое), острое, подострое, хроническое,
абортивное, типичное и атипичное)
10. Распространение
инфекционных
заболеваний
(спорадические
заболевания, эпизоотии, панзоотии)
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
Основная
1.
Бияшев
Б.К.Ветеринарная
микробиология
и
иммунология.Алматы,2007. – 417 с.
2.
Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и
иммунология. – М.: КолосС, 2003.-432 с.
Дополнительная
1. Тлепов А.А. Микробиология. – Алматы,2011. – 314 с.
2. Нетрусов А.И., Котова И.Б. Общая микробиология.-М: Издательский
центр «Академия», 2007. – 288 с.
3. Сидоренко О.Д., Борисенко Е.Г. и др. Микробиология: Учебник для
агротехнологов. – М.: ИНФРА-М, 2005. – 287 с.
4. Горохова С.С. Основы микробиологии, производственной санитарии и
гигиены. – М.,2008.
5. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Костенко Т.С. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. М., 2008. – 224с.
6. Блейм Т.Н. Сборник тестов по микробиологии. Учебное пособие. –
Семипалатинск: СГУ имени Шакарима,2005. – 112 с.
7. Ветеринарная микробиология и иммунология /Под ред.проф.
Н.А.Радчука.-М.,1991.-С.104-118.
Лекция №7
Иммунитет
План
1.
Иммунитет. Виды иммунитета.
2. Неспецифические (физиологические, естественные) и специфические
факторы защиты.
Ключевые слова: иммунитет, неспецифические и специфические
факторы защиты.
1. Иммунитет. Виды иммунитета
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 38 из 189
Иммунитет (от лат. Immunitas – освобождение или избавление от
чего-либо) состояние невосприимчивости организма к воздействию
патогенных микробов, их токсинов и других чужеродных веществ
биологической природы.
Иммунитет – это способ защиты от тел и веществ, несущих
признаки генетической чужеродности. Таким чужеродными веществами
могут быть патогенные бактерии, чужеродные белки, липополисахариды,
полисахариды, собственные измененные клетки, т.е. организмы человека и
животных точно дифференцируют «свое» и «чужое» и осуществляют защиту
против них. Следовательно, главное значение иммунитета состоит в
распознавании «своего» и «чужого», что жизненно важно, что обеспечивает
постоянство внутренней среды организма – гомеостаз (Бернет –
австралийский ученый,1964г). Иммунитет - одно из проявлений гомеостаза. В
связи с этим иммунитет является свойством всего живого: человека,
животных, растений и даже бактерий.
Система органов и клеток, осуществляющая реагирование на
чужеродные вещества, называется иммунной системой организма.
Иммунная система распределена по всему организму, ее клетки постоянно
рециркулируют по всему телу через кровоток. Она обладает способностью
вырабатывать специфические антитела, различные по своей специфике в
отношении каждого антигена.
По происхождению различают два вида иммунитета: врожденный и
приобретенный.
Врожденный (наследственный, видовой, генетический иммунитет –
передается по наследству. Специфическое видовое свойство.
Приобретенный – возникает при жизни человека, животного.
Приобретенный иммунитет подразделяется на естественный и искусственный.
Естественный иммунитет возникает в результате естественного
заражения и переболевания. Он в свою очередь делиться на активный и
пассивный. Активный – постинфекционный, его продолжительность 1-2
года, иногда пожизненно. Пассивный (колостральный, плацентарный,
трансовариальный) – продолжительность от нескольких недель до нескольких
месяцев.
Искусственный иммунитет возникает с помощью человека. Он
подразделяется на активный и пассивный. Активный искусственный
иммунитет возникает после вакцинации через 7-14 дней и продолжается до 1
года и более. Пассивный искусственный иммунитет возникает после
введения сывороток содержащих защитные вещества – антитела. Такой
иммунитет продолжается не более 15 дней. Пассивный колостральный
иммунитет возникает при иммунизации беременных матерей.
Иммунитет может быть стерильным и нестерильным . Стерильный
иммунитет возникает, если организм освобождается от возбудителя. Сохраняя
невосприимчивость. Нестерильный иммунитет продолжается до тех пор пока
в организме находится возбудитель.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 39 из 189
В зависимости от механизмов защиты иммунитет может быть
гуморальным и клеточным. Гуморальный иммунитет обусловлен
выработкой антител, а клеточный – образованием специфических
(антигенреактивных) Т-лимфоцитов, реагирующих с возбудителем.
Различают: антибактериальный, противовирусный, антитоксический
иммунитет. Местный иммунитет.
2. Неспецифические (физиологические, естественные) и специфические
факторы защиты
Организм человека и животных обладает целым комплексом защитных
приспособлений. Они препятствуют проникновению патогенных микробов и
губительно действуют на них. Эти приспособления называют
неспецифическими (врожденные внутренние механизмы поддержания
постоянства внутренней среды). Они появились, по-видимому, в результате
постоянного контакта организма с микроорганизмами. К ним относят кожу,
слизистые оболочки, лимфатические узлы, фагоцитоз, нормальные
антитела, лизоцим, секреторный иммуноглобулин А, пропердин, лизины,
лактоферрин, комплемент, интерферон.
Кроме неспецифических факторов защиты выделяют специфические,
т.е. под воздействием определенного микроорганизма (антигена) в организме
могут вырабатываться специфические защитные вещества, называемые
антителами и антигенреактивными клетками.
1.
2.
3.
4.
Понятийный аппарат (тезпурус) к теме №7
Иммунитет
Виды иммунитета:
- активный и пассивный;
-врожденный и приобретенный;
- гуморальный и клеточный;
- естественный и искусственный;
- местный;
- стерильный и нестерильный
Неспецифические факторы защиты (кожа, слизистые оболочки,
лимфатические узлы, фагоцитоз, нормальные антитела, лизоцим,
секреторный иммуноглобулин А, пропердин, лизины, лактоферрин,
комплемент, интерферон.)
Специфические факторы защиты (антитела и антигенреактивные Тлимфоциты)
Основная
1. Бияшев
Б.К.Ветеринарная
микробиология
и
иммунология.Алматы,2007. – 417 с.
2. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и
иммунология. –М.: КолосС, 2003.-432 с.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 40 из 189
Дополнительная
1. Тлепов А.А. Микробиология. – Алматы,2011. – 314 с.
2. Нетрусов А.И., Котова И.Б. Общая микробиология.-М: Издательский
центр «Академия», 2007. – 288 с.
3. Сидоренко О.Д., Борисенко Е.Г. и др. Микробиология: Учебник для
агротехнологов. – М.: ИНФРА-М, 2005. – 287 с.
4. Горохова С.С. Основы микробиологии, производственной санитарии и
гигиены. – М.,2008.
5. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Костенко Т.С. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. М., 2008. – 224с.
6. Блейм Т.Н. Сборник тестов по микробиологии. Учебное пособие. –
Семипалатинск: СГУ имени Шакарима,2005. – 112 с.
7. Ветеринарная микробиология и иммунология /Под ред.проф.
Н.А.Радчука.-М.,1991.-С.104-118.
Лекция №8
Практическое значение учения
об инфекции и иммунитете
План
1. Антигены. Природа и свойства антител. Полноценные антигены и
гаптены. Антигены бактериальной клетки.
2. Антитела. Строение антител. Классификация антител.
3. Взаимодействие антител с антигенами.
Ключевые слова: антитела, антигены, гаптены, иммуноглобулины
1. Антигенами называют вещества, которые несут признаки
генетической чужеродности и при введении в организм вызывают
развитие специфических иммунологических реакций. Если говорить об
иммунитете, то антигены это вещества стимулирующие образование антител
и вступающие с ними в реакцию.
К антигенам относят микробы и их токсины, чужие эритроциты и
сыворотки, вирусы, микроскопические грибы, яды животных (змей,
скорпионов, пчел), яды растительного происхождения (рицин, кортин). Чаще
антигены белковой природы (полноценные антигены). Но могут быть и
сложные комплексы из полисахаридов, липидов, белков. Антигены из
полисахаридов, липидов называют неполноценными или гаптенами.
В зависимости от места локализации в теле бактерии различают
следующие антигены:
1. капсульный антиген (у бактерий образующих капсулу), поверхностный –
антиген клеточной стенки. Их обозначают: К-антигены;
2. жгутиковый антиген – Н-антиген;
3. соматический антиген – О-антиген.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 41 из 189
2.
Антитела
это
белки,
иммуноглобулины,
которые
вырабатываются иммунной системой организма при воздействии на него
антигенов (микробов).
Иммуноглобулины
–
семейство
сывороточных
белков,
характеризующихся сходством принципов структурной организации и
способностью в качестве антител взаимодействовать с антителами. Различают
5 классов иммуноглобулинов (Jg): JgG, JgМ, JgА, JgД, JgЕ. Молекула
иммуноглобулина может иметь от одного до нескольких полимеров.
Антитела строго специфичны. Антитела способны вступать в реакцию с
антигенами и обезвреживать их действие.
Все антитела отличаются друг от друга, т.е гетерогенны. Считают, что
существует более 100000 антигенов. На каждый антиген синтезируется свое
антитело. Такое многообразие антител обусловлено разным строением их
активных центров.
Активный центр – место на молекуле иммуноглобулина, через которое
происходит соединение с антигеном.
Под валентностью антител понимают количество активных центров,
способных реагировать с антигеном. (Молекула JgG двухвалентна, т.е. имеет
два активных центра; молекула JgМ поливалентна, имеет 10 активных
центров)
Строение антител (молекулы JgG). Молекула иммуноглобулина
имеет две тяжелые и две легкие полипептидные цепи, связанные между собой
дисульфидными мостиками. Легкие цепи (L) являются общими для всех
классов и подклассов. Тяжелые цепи (Н) отличаются по строению у каждого
класса. Легкие цепи подразделяются на два типа: κ (каппа) и λ (лямбда).
Тяжелые цепи обозначают греческими буквами: γ (гамма), μ (мю), α (альфа), δ
(дельта) и ε (эпсилон), что соответствует латинскому обозначению того или
иного класса: JgG, JgМ, JgА, JgД, JgЕ. Гипервариабельные участки легкой и
тяжелой цепей образуют активный центр. Именно этой частью отличаются
антитела друг от друга.
В зависимости от характера реакции с антигенами антитела получили
разные названия: агглютинины, преципитины, опсонины, бактериолизины,
антитоксины.
Агглютинины вызывают склеивание микробов и дают реакцию
агглютинации, так как антигеном в данном случае являются микробы,
имеющие корпускулярное строение.
Преципитины осаждают (преципитируют) белок. Антигеном служит
экстракт бактерийный клеток или тканей и представляет собой прозрачную
жидкость.
Опсонины протравливают микробную клетку и облегчают ее фагоцитоз.
Бактериолизины в присутствии комплемента лизируют (растворяют)
бактерии.
Антитоксины нейтрализуют действие токсинов.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 42 из 189
2.Взаимодействие антител с антигеном происходит за счет наличия у
антител активного центра, который соответствует пространственной
конфигурации антигенной детерминанте. Активный центр должен быть
комплементарным (т.е. соответствовать как перчатка руке) детерминантной
группе антигена, иначе не произойдет их сцепление, взаимодействие.
Активность связывания антител ас антигеном оценивается такими
понятиями как аффинитет и авидность.
Аффинитет – это уровень сродства между активным центром
антител
и
детерминантной
группой
антигена,
т.е.
степень
комплементарности или совпадения конфигураций активного центра и
детерминатной группы.
Авидность – это валентность антител, или количество и
расположение активных центров. Чем выше авидность, тем прочнее связь и
слабее склонность агрегатов к диссоциации.
Заключение. Учение об иммунитете имеет практическое значение.
В иммунопрофилактике (вакцины, сыворотки), иммунотерапии (лечебнопрофилактические сыворотки и иммуноглобулины) и диагностике
(диагностические
иммунные
сыворотки
и
иммуноглобулины,
диагностические антигены и аллергены, бактериофаги) инфекционных
болезней.
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №8
1. Антигены (полноценные антигены, гаптены)
2. Антитела, иммуноглобулины (агглютинины, преципитины, гемолизины,
опсонины, бактериолизины, антитоксины, комплементсвязывающие антитела)
3. Активный центр
4. Валентность
5. Антигенная детерминанта
6. Аффинитет
7. Авидность
Рекомендуемая литература
Основная
1. Бияшев
Б.К.Ветеринарная
микробиология
и
иммунология.Алматы,2007. – 417 с.
2. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и
иммунология. –М.: КолосС, 2003.-432 с.
Дополнительная
1. Тлепов А.А. Микробиология. – Алматы,2011. – 314 с.
2. Нетрусов А.И., Котова И.Б. Общая микробиология.-М: Издательский
центр «Академия», 2007. – 288 с.
3. Сидоренко О.Д., Борисенко Е.Г. и др. Микробиология: Учебник для
агротехнологов. – М.: ИНФРА-М, 2005. – 287 с.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 43 из 189
4. Горохова С.С. Основы микробиологии, производственной санитарии и
гигиены. – М.,2008.
5. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Костенко Т.С. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. М., 2008. – 224с.
6. Блейм Т.Н. Сборник тестов по микробиологии. Учебное пособие. –
Семипалатинск: СГУ имени Шакарима,2005. – 112 с.
7. Ветеринарная микробиология и иммунология /Под ред.проф.
Н.А.Радчука.-М.,1991.-С.104-118.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 44 из 189
Модуль 4
Частная микробиология
Лекция № 9
Методы диагностики инфекционных болезней.
Патогенные кокки
План
1. Принципы диагностики бактериальных инфекций.
2.
Патогенные
стафилококки.
Морфологические,
культуральные,
биохимические свойства.
3.
Патогенные
стрептококки.
Морфологические,
культуральные,
биохимические свойства.
Ключевые слова: бактериологическая диагностика, стафилококки,
стрептококки.
1. Принципы диагностики бактериальных инфекций
Диагностика инфекционных болезней бактериальной этиологии
осуществляется тремя основными методами:
1. Бактериологическая диагностика
2. Серологическая диагностика
3. Аллергическая диагностика
Цель бактериологического метода диагностики заключается в
выделении чистой культуры микроба из патологического материала и
определении его видовой принадлежности. Бактериологическая диагностика
является обязательным методом диагностики , как при острых, так и при
хронических
инфекционных
заболеваниях.
Для
постановки
бактериологического диагноза в лабораторию направляется патологический
материал (кусочки паренхиматозных органов, соскобы с кожи, трубчатая
кость, остатки корма и т.д. в зависимости от заболевания). Патматериал
должен быть свежим. В летнее время его консервируют 30% водным
раствором глицерина (при вирусных болезнях 50% раствором).
Чистую культуру выделяют тем или иным методом (чистая культура
это культура одного вида микроба выделенного из патологического
материала). Например: микобактерии (возбудители туберкулеза) устойчивы к
спирту, щелочам, кислотам. Поэтому суспензию из патматериала
обрабатывают 5-10 % раствором серной кислоты.
После выделения чистой культуры, необходимо определить вид
микроорганизма (т.е. провести идентификацию культуры). Видовую
принадлежность выделенной чистой культуры определяется путем изучения:
1. морфологических свойств,
2. тинкториальных свойств,
3. культуральных свойств,
4. ферментативных свойств
5. токсигенных свойств, патогенных свойств,
6. антигенных свойств,
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 45 из 189
7. устойчивости к антибиотикам и бактериофагам,
8. постановки МФА, ИФА
1. Принципы диагностики бактериальных инфекций.
СХЕМА БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
1.
2.
3.
Краткая характеристика заболевания (определение, какие виды животных
болеют, в каком возрасте, клинические признаки, патологоанатомические
данные)
Название возбудителя (семейство, род, вид)
Методы диагностики
А) Бактериологическая диагностика
↓
правила взятия и пересылки патологического материала
для исследования
↓
↓
↓
Микроскопия
Выделение чистой культуры
Биопроба
Гр (-) (+)
Питательные среды,
Вид лаборат-го
Спора
потребность
жив-го, метод
Капсула
в кислороде, температура,
заражения, доза.
Жгутики
время культивирования
Сроки гибели.
МФА
ПЦР
↓
Идентификация
(определение видовой или типовой (вариантной) принадлежности микроорганизма
↓
1. Морфология
2. Тинкториальные свойства
3. Характер роста на питательных средах
4. Ферментативные (биохимические) свойства
5. Антигенные (серологические) свойства
6. Патогенные свойства
7. Фаготипирование
8. Токсигенные свойства
9. Антибиотикочуствительность
В) Серологическая диагностика
↓
РА, РСК, РП, РДП, РДСК, РС, РБП, КР
↓
С) Аллергическая диагностика
↓
аллергены, методы введения, доза, учет
4.
5.
Иммунитет, средства специфической профилактики (вакцины, сыворотки их характеристика)
Лечение
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 46 из 189
Целью серологического метода диагностики является определение
наличия типоспецифических антител в сыворотках крови исследуемых
животных. Патологическим материалом служит сыворотка крови.
Серологический метод диагностики используется при хронических инфекциях
(бруцеллез). Обнаружение антител свидетельствует о присутствии антигена
(возбудителя)
в
организме.
Определение
антител
осуществляют
серологическими реакциями – РА, РСК, РДСК, РБП.
Аллергический
метод
диагностики
основан
на
гиперчувствительности
замедленного
типа
(повышенной
чувствительности
сенсибилизированного
организма).
Достаточно
сенсибилизированному организму ввести небольшую дозу аллергена и
организм реагирует повышенной чувствительностью в месте введения
аллергена (на месте введения развиваются признаки воспаления).
Аллергическая диагностика используется при хронических инфекциях.
Например, при туберкулезе аллергическая диагностика является ведущим
методом прижизненной диагностики.
2. Патогенные стафилококки. Морфологические, культуральные,
биохимические свойства.
Микроорганизмы, имеющие форму кокков, довольно широко
распространены в природе. Некоторые из них являются патогенными для
животных и человека и вызывают воспалительные процессы, которые часто
сопровождаются образованием гноя. Поэтому их называют гноеродными
кокками.
Патогенные стафилококки. Стафилококки вызывают абсцессы,
флегмоны, фурункулы, мастит, послеродовой эндометрит у коров,
пневмонию, септицемию, энтерит у молодняка, артриты, гнойное воспаление
ран, менингиты, пищевые токсикозы, стафилококкоз птиц.
Классификация. Основные виды.
Семейство: Micrococcaceae
Род: Staphylococcus
Виды: Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus saprophyticus
Staphylococcus albus
Staphylococcus citreus
Staphylococcus roseus
Из них патогенным является Staphylococcus aureus. Патогенным для
человека является и Staphylococcus epidermidis.
В патогенезе стафилококковых процессов ведущая роль принадлежит
экзотоксинам и ферментам патогенности, которые оказывают разрушительное
действие на клетки крови (эритроциты, лейкоциты, клетки тканей, на плазму
крови).
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 47 из 189
Устойчивость к неблагоприятным факторам внешней среды высокая (в
высушенном гное до 200 дней, в молоке при 70 С – 1 час, 85 С – 30 минут).
Учитывая высокую устойчивость стафилококков. Их используют в качестве
тест-объекта при испытании новых антибиотиков или дезинфицирующих
веществ.
Морфология. Стафилококки (от греч. Staphyle гроздь + kokkos зерно)
– шаровидные неподвижные бактерии, образующие при размножении
скопления, похожие на грозди. Спор, капсул не образуют. Размеры: 0,5-1,5
мкм. Грамположительные. Факультативные анаэробы.
Культивирование. Первичные посевы проводят на кровяном агаре
(гемолиз), на молочно-солевом агаре (образуют пигмент), на желточносолевом агаре (вокруг колоний появляется зона помутнения с радужным
венчиков по периферии. Затем из характерных колоний делают отсев на
МПА, для получения чистых культур. Чистую культуру идентифицируют
методом микроскопии, ставят реакцию плазмокоагуляции с чистой культурой,
позволяющей дифференцировать патогенные стафилококки от непатогенных.
На кроликах проводят дермонекротическую пробу. Кролику
внутрикожно вводят 0,2 мл 2 млрд взвеси культуры. Наличие некроза на месте
инъекции учитывают на четвертые сутки.
Кроме того, Staphylococcus aureus в отличие от других стафилококков
ферментирует манит в анаэробных условиях.
Для выявления источника стафилококковой инфекции используют
фаготипирование.
Иммунитет
антитоксический,
слабой
напряженности,
непродолжительный. После переболевания накапливаются антитоксины,
которые обуславливают повышенную устойчивость к повторным
заболеваниям
Диагностика заболеваний вызванных патогенными стафилококками
проводится путем бактериологической диагностики. При определении
видовой принадлежности выделенных стафилококков, акцентируют внимание
на патогенных, ферментативных, токсигенных, антигенных свойствах.
Патогенные стафилококки отличают от непатогенных по ферментативной
активности. Для биопробы используют кроликов. Изучают чувствительность
к антибиотикам. Для профилактики заболеваний вызванных стафилококками
используют очищенный адсорбированный стафилококковый анатоксин и
аутовакцину. Лечение осуществляют антибиотиками.
3.Патогенные стрептококки
1874г. – Т.Бильрот выделил из тканей людей больных рожей, и при раневых
инфекциях.
1879 г. – Л.Пастер, 1881г. – А.Огстон – описали при сепсисе.
1883г. – Ф.Фелейзен, 1884г. А.Розенбах – выделили и изучили чистую
культуру.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 48 из 189
Стрептококки вызывают неспецифические нагноительные процессы, а
могут быть возбудителями специфических инфекционных заболеваний, таких
как мыт лошадей, мастит коров, диплококковая инфекция.
Характеристика патогенных стрептококков
Морфология. Стрептококки имеют шаровидную форму, размеры их
0,6-1 мкм, располагаются парами, цепочками, неподвижны, не образуют спор,
грамположительны. Отдельные виды образуют капсулу.
Культивирование. Стрептококки – факультативные анаэробы,
некоторые разновидности анаэробы. Мезофиллы. На обычных средах растут с
трудом. Хорошо культивируются на сахарном, кровяном, сывороточном агаре
и бульоне при рН среды 7,2-7,6. На плотных средах образуют мелкие, мутные,
сероватые или серовато-белые, зернистые, не резко очерченные колонии. На
кровяном агаре в зависимости от вида стрептококка могут вызывать β-гемолиз
(прозрачная зона) или α-гемолиз (зеленая зона) вокруг колоний вследствие
превращения гемоглобина в метгемоглобин. Некоторые виды стрептококков
не дают гемолиза –- негемолитические стрептококки . На сахарном бульоне
растут с образованием пристеночного и придонного мелкозернистого осадка,
редко мутят бульон.
Ферментативные свойства. Патогенные стрептококки обычно не
разжижают желатин, не восстанавливают нитраты в нитриты. Свертывают
молоко, растворяют фибрин, ферментируют глюкозу, мальтозу, лактозу,
сахарозу, маннит (не всегда), расщепляют салицин, трегалозу с образованием
кислоты.
Токсинообразование. Патогенные стрептококки образуют различные
по своему действию экзотоксины:
1. гемолизин, инактивирующийся при температуре 55 С в течение 30 мин;
обуславливает разрушение эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов,
макрофагов; при внутривенном введении кроликам вызывает
гемоглобинемию и гематурию;
2. лейкоцидин, разрушающий лейкоциты; встречается у очень
вирулентных штаммов, обезвреживается при 70 С;
3. летальный токсин (некротоксин) при внутрикожном введении кроликам
приводит к некрозу, обладает некротическим действием и по
отношению к другим тканям, особенно к клеткам печени, при
внутривенном введении кроликам и белым мышам вызывает их
быструю гибель.
Кроме того. патогенные стрептококки образуют ферменты
патогенности: гиалуронидазу, благодаря которой возбудитель проникает в
ткани и органы пораженного организма животного, фибринолизин,
дезоксирибонуклеазу, рибонуклеазу, нейроминидазу, протеиназу, амилазу,
липазу, стрептокиназу.
Антигенная структура. В основу изучения антигенного строения
стрептококков положены данные серологических исследований. Ф.Гриффитс
использовал для этой цели реакцию агглютинации стрептококков. Р.Ленсфилд
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 49 из 189
применила реакцию преципитации с экстрактом из осадка бульонной
культуры.
По антигенной структуре стрептококки выделены в 17 серологических
групп. Из них шесть серологических групп представляют практический
интерес (А, В, С, Д, Е, F).
Группа А – гноеродные стрептококки, вызывающие заболевания людей
ангиной, скарлатиной, рожей и т.д.
Группа В – возбудители мастита у коров.
Группы В, С, Д, Е – возбудители инфекций у животных разных видов.
Антигеном, который позволяет разделить стрептококки на серогруппы,
является полисахарид (С-вещество), входящий в состав клеточной стенки
стрептококков.
Классификация
Семейство: Streptococcaceae
Род: Streptococcus
Виды: Streptococcus egui – возбудитель мыта лошадей
Streptococcus agalactiae – возбудитель мастита у коров
Streptococcus pneumonia – возбудитель диплококковой инфекции
Streptococcus pyogenes - вызывает абсцессы, артриты, флегмоны,
эндометриты, септицемию.
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №9
1.Патогенные стафилококки (Staphylococcus aureus, Staphylococcus
epidermidis – морфологические, культуральные, биохимические, патогенные
свойства)
2. Сапрофитные стафилококки (Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus
albus, Staphylococcus citreus, Staphylococcus roseus)
3. Патогенные стрептококки (Streptococcus egui, Streptococcus agalactiae ,
Streptococcus pneumonia, Streptococcus pyogenes - морфологические,
культуральные, биохимические, патогенные свойства)
4. Сапрофитные стрептококки (Streptococcus lactis, Streptococcus cremoris,
Streptococcus diacetilactis)
5. Бактериологическая диагностика (микроскопия, выделение чистой
культуры, биопроба)
6. Серологическая диагностика
7. Аллергическая диагностика
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ
1. Схема бактериологической диагностики инфекционных болезней.
2. Объяснить понятия: идентификация, морфология, тинкториальные
свойства, характер роста на питательных средах, ферментативные
свойства, антигенные свойства, патогенные свойства, фаготипирование,
токсигенные свойства, антибиотикочувствительность.
3. Какие заболевания вызывают патогенные стафилококки и стрептококки?
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 50 из 189
4. Латинские названия возбудителей.
РЕКОМЕДУЕМАЯ ДЛИТЕРАТУРА
Основная
1. Бияшев
Б.К.Ветеринарная
микробиология
и
иммунология.Алматы,2007. – 417 с.
2. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и
иммунология. –М.: КолосС, 2003.-432 с.
Дополнительная
1. Тлепов А.А. Микробиология. – Алматы,2011. – 314 с.
3. Нетрусов А.И., Котова И.Б. Общая микробиология.-М: Издательский
центр «Академия», 2007. – 288 с.
4. Сидоренко О.Д., Борисенко Е.Г. и др. Микробиология: Учебник для
агротехнологов. – М.: ИНФРА-М, 2005. – 287 с.
5. Горохова С.С. Основы микробиологии, производственной санитарии и
гигиены. – М.,2008.
6. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Костенко Т.С. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. М., 2008. – 224с.
7. Блейм Т.Н. Сборник тестов по микробиологии. Учебное пособие. –
Семипалатинск: СГУ имени Шакарима,2005. – 112 с.
8. Ветеринарная микробиология и иммунология /Под ред.проф.
Н.А.Радчука.-М.,1991.-С.104-118.
Лекция №10
Бруцеллы (Brucella)
План
1.Определение болезни. Историческая справка
2. Возбудители бруцеллеза. Устойчивость бруцелл
3. Морфологические, культуральные, биологические свойства бруцелл
4. Методы диагностики бруцеллеза
5. Иммунитет и иммунизация
Ключевые слова: бруцеллез, бруцеллы, бруцеллин
1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ БОЛЕЗНИ. ИСТОРИЧЕСКАЯ СПРАВКА
Бруцеллёз (Мальтийская лихорадка) – это инфекционное
хроническое заболевание всех видов сельскохозяйственных, многих видов
промысловых и диких животных, вызываемое бруцеллами, проявляющееся
абортами, задержанием последа, эндометритами, орхитами, расстройством
воспроизводительной функции, артритами, бурситами, или протекающая
бессимптомно. Бруцеллезом болеют и люди.
Возбудителя мальтийской лихорадки открыл английский бактериолог
Д.Брюс. Однако ему не был известен процесс переноса болезни на человека.
Разгадка пришла позже, когда в 1905г. перевозили морем с о. Мальты в США
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 51 из 189
65 внешне вполне здоровых коз. Экипаж корабля во время плавания пил
сырое козье молоко, и некоторые матросы заболели лихорадкой. По
прибытии на место в молоке были обнаружены возбудители болезни. Так
выяснилось, что заболевание передается людям через молоко.
1886-1887 гг. – Д.Брюс впервые выделил возбудителя на о.Мальта из
селезенки солдата умершего от «мальтийской лихорадки». Микроб назван
«мальтийским микрококком» (Micrococcus melitensis).
1897 г. – Б. Банг (Дания) и Стрибольт выделили мельчайшую
бактерию их абортированного плода коровы (B.abortus).
1914 г. – Д.Траум (США) выделил возбудителя от абортировавшей
свиноматки (B.suis – биовар 1).
1918 г. – Эванс изучил известные виды бруцелл и объединил их в род
Brucella в честь Д.Брюса – Bruce.
1956 г. – Br. ovis (Buddle) – возбудитель инфекционного эпидидимита
баранов.
1957 г. – Br. neotomae (Stoenner, Lackman) – возбудитель бруцеллеза
у пустынных крыс.
1966-1968 гг. – Br. canis (Carmichael, Brunner) – возбудитель
бруцеллеза у собак.
Значительный вклад в изучение бруцеллеза внесли следующие ученые:
С.Н. Вышелесский, П.Ф. Здродовский, П.А.Вершилова, М.К. Юсковец, Е.С.
Орлов, В.Е. Корнеева, П.С. Уласевич, П.А. Триленко, Е.В. Козловский
(Россия). В.С.Степин и его ученики, Н.П. Иванов, Т.С.Сайдулдин, К.И.
Минжасов (Казахстан) и др.
1. ВОЗБУДИТЕЛИ БРУЦЕЛЛЕЗА. УСТОЙЧИВОСТЬ БРУЦЕЛЛ
В настоящее время род Brucella насчитывает 9 самостоятельных видов
(Таблица 1).
Каждый из видов представлен биотипами, отличающимися друг от друга
биохимическими, культуральными, антигенными и патогенными свойствами.
Возбудители бруцеллеза
№ Виды бруцелл
1
2
BRUCELLA
ABORTUS
BRUCELLA
MELITENSIS
Количество
биоваров
7
Естественные
хозяева
КРС
3
Козы, овцы
Таблица 1
Восприимчивы к
возбудителю
яки, буйволы,
верблюды,лошади
КРС, верблюды,
свиньи, домашние
кролики,
собаки,сайгаки,
буйволы, зебу,
антилопы, олени.
Человек.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
1
Свиньи,
Носителем 2
биовара являются
зайцы, 4 биовара
– северные
олени (Br.
rangiferi tarandi),
5 биовара –
мышевидные
грызуны.
Бараны
1
Собаки
1
Пустынные
кустарниковые
крысы
Китообразные
3
BRUCELLA SUIS 5
4
BRUCELLA
OVIS
BRUCELLA
CANIS
BRUCELLA
NEOTOME
5
6
7
8
9
BRUCELLA
CETI
BRUCELLA
PINNIPEDIALES
BRUCELLA
MICROTI
Страница. 52 из 189
Ластоногие
Серая полевка
Устойчивость бруцелл к физическим и химическим факторам невысока
(Таблица 2).
Таблица 2
№
Факторы
Время гибели
1
Температура – 60 С
30 мин
70 С
5-10 мин
90 -100 С
моментально
2
Закисающее и охлажденное молоко, сливки
4-7 сут
3
На одежде
14 дней
4
В сырах, масле, брынзе, соленых шкурах
67 дней
5
В соленом мясе
3 месяцев
6
В замороженном мясе и на шерсти
5 месяцев
7
В почве, воде, навозе, грубых кормах
4 месяцев
8
В гниющем материале
Погибают быстро
9
Прямые солнечные лучи
3-4 ч
10
Растворы креолина, фенола, формальдегида 1ч
(1%)
11
Свежегашеная известь (5%)
2ч
12
Растворы лизола (3%),хлорной извести
3-5 мин
(1%), хлорамина (0,01%)
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 53 из 189
3.
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ,
КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ,
БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БРУЦЕЛЛ
Морфология. Бруцеллы обладают сходными морфологическими,
тинкториальными и культуральными свойствами. Все бруцеллы
полиморфны, Гр (-) – мелкие кокковидные или палочковидные клетки d=0,5
– 0,7 мкм и длинной 0,6 – 1,5 мкм, неподвижные, спор не образуют,
некоторые штаммы образуют капсулу, жгутиков не имеют, располагаются
беспорядочно, иногда парами, аэробы. Специальный метод окрашивания по
Козловскому (красные). Относятся к внутриклеточным паразитам.
Культивирование. Рост при t = 36 – 37оС, рН 7,0 – 7,2, обычные
питательные среды, но лучше с добавлением сыворотки или крови.
Специальные
питательные
среды:
МППБ,
печёночно-глюкозноглицериновый агар и бульон, картофельный агар, кровяной, сывороточный
агар. В качестве элективных используют среды с генцианвиолетом и
малахитовой зеленью, элективную среду Кроля, плотные среды с фуксином и
тионином и др. Особенностью Brucella abortus является повышенная
потребность в СО2 (5 - 10%) в атмосфере роста. Бруцеллы растут медленно
через 2 – 4 недели. Колонии бруцелл бесцветные, выпуклые, круглые S –
формы или шероховатые R – формы, нежные и прозрачные в начале, с
возрастом мутнеют. Встречаются М-слизистые варианты колоний.
Установлена L-форма бруцелл.
Рост бруцелл в бульонной среде сопровождается равномерным
помутнением.
На агаре с кровью бруцеллы гемолиза не дают, пигмент не синтезируют
Биохимические свойства. Сахаролитическая активность у бруцелл
выражена слабо. Они утилизируют углеводы, но не образуют кислоту и газ в
количествах, достаточных для их идентификации.
Бруцеллы ферментируют глюкозу и арабинозу с образованием кислоты
без газа, восстанавливают нитраты в нитриты. Образуют Н2S, что наиболее
выражено у Brucella suis. Молоко не свертывают, желатин не разжижают.(Не
обладают протеолитическими свойствами.)
Могут продуцировать каталазу, пероксидазу, липазу, фосфотазу.
Антигенная структура. Бруцеллы в S-форме трех основных видов
обладают двумя соматическими антигенами: имеют глубинный О и
поверхностный S-антиген. Последний существует в двух вариантах – А и М.
Возбудитель в R-форме в той или иной степени утрачивает S-антиген, т.е.
диссоциация связана с утратой А и М-антигенов и уменьшением
вирулентности. Предполагают, что эти антигены представлены сложным
глюцидо-липидополипептидным комплексом. Они активно индуцируют
синтез антител, выявляемых в реакциях агглютинации, РСК, преципитации и
других. Особенности антигенной структуры бруцелл позволяют получить
моноспецифичесие А- и М-антисыворотки. Кроме того был обнаружен
поверхностный L-антиген, сходный с Vi-антигеном сальмонелл.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 54 из 189
Патогенные свойства бруцелл. Патогенное действие бруцелл связано с
образованием токсинов - эндотоксинов, а также ферментов вирулентности гиалуронидазы, каталазы, уреазы. Бруцеллы высокоинвазивны, могут
проникать через неповрежденные слизистые покровы пищеварительного
тракта, легких, глаз и кожу.
Восприимчивы овцы, козы, крупный рогатый скот, буйволы, свиньи,
лошади, мулы, верблюды, северные олени, собаки кошки,, многие дикие
животные (маралы, лоси, косули, сайгаки и др.). Молодняк до половой
зрелости более устойчив. Каждый вид бруцелл поражает животных
определенного вида. Но бруцеллы могут мигрировать, заражая животных
других видов, например B.melitensis – КРС, свиней и лошадей, B.abortus –
коз, овец, лошадей, свиней, B.suis – крупный и мелкий рогатый скот,
лошадей. Для человека наиболее опасна B.melitensis.
Бруцеллы вызывают генерализованную инфекцию во время
бактериемии, размножаются в различных тканях, репродуктивных органах.
Из лабораторных животных к заражению чувствительны морские свинки,
мыши. У мышей после заражения иногда развивается септицемия, свинки
абортируют, худеют, у них выпадают волосы, возникает генерализованная
инфекция.
4. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА
Диагноз ставят комплексным методом. Главными методами
диагностики бруцеллеза являются бактериологический, биологический
(биопроба) серологический, аллергический (Рис.1).
Рисунок 1. Методы диагностики бруцеллеза
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 55 из 189
1. Бактериологическую диагностику проводят при аборте или
появлении у животных других признаков (бурситы, гигромы, архиты,
эпидидимиты и пр.) бруцеллеза. Материал для исследования:
абортированный плод с плодными оболочками (от свиноматок берут не
менее 3 плодов) или желудок плода с содержимым( желудок перевязывают
со стороны пищевода и со стороны двенадцатиперстной кишки), а также
кусочки печени и селезенки. Содержимое гигром (бурс). Пробы молока
(последние порции молока по 10-15мл из каждой доли), можно
консервировать сухой борной кислотой (0,1 г/10мл). Кровь от
абортировавшего животного. Консервирование материала 30% водным
раствором глицерина.
Бактериологическое исследование включает бактериоскопию мазков из
патматериала, выделение чистой культуры бруцелл на питательных средах и
постановку биопробы на морских свинках.
Мазки окрашивают по Грамму или одному из специальных методов: по
Стампу, Козловскому или Шуляку-Шин. Бруцеллы – мелкие,
грамотрицательные коккобактерии, расположены отдельно, попарно или
кучно, окрашиваются по Козловскому (Стампу, Шуляку-Шину) в красный
цвет.
Для выделения чистых культур делают посевы на специальные и
элективные питательные среды, за которыми наблюдают в течение 30 дней
просматривая визуально каждые 3-4 дня, обращая внимание на характер
роста. На поверхности агара бруцеллы образуют мелкие, блестящие,
выпуклые с ровными краями и гладкой поверхностью просвечивающиеся
колонии, имеющие в отраженном свете голубоватый оттенок, а в падающем –
сероватый. С возрастом колонии мутнеют (это связано с появлением
пигмента) и приобретают более темную окраску.
В бульоне бруцеллы образуют равномерное помутнение и пристеночное
кольцо, возвышающееся над уровнем, а в дальнейшем небольшой осадок на
дне пробирки. В отраженном свете пристеночное кольцо имеет голубоватый
оттенок. Выделенные культуры идентифицируют по тинкториальным,
морфологическим, культуральным свойствам, в реакции агглютинации
на стекле – с позитивной бруцеллезной сывороткой.
Для видовой и биовариантной дифференциации бруцелл учитывают,
потребность в росте первых генераций их культур в углекислоте (5-10%),
способность к образованию сероводорода, рост на средах с тионином и
основным фуксином, агглютинацию моноспецифическими сыворотками,
фагочувствительность, а также способность метаболирования ряда
аминокислот и углеводов.
Биопробу проводят на морских свинках (не менее двух массой по 300400г), предварительно проверенных на бруцеллез (в РА). Суспензию из
патматериала (органов, содержимого желудка, плаценты) (1:10) вводят
подкожно в дозе 1 мл с внутренней стороны бедра морской свинке.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 56 из 189
Содержимое гигром подкожно по 0,2-0,3 мл, молоко после
центрифугирования (осадок) – 2-3 мл.
На 15, 25, 40 дни после заражения берут 1-2 мл крови из ушной вены или
из сердца и сыворотку крови исследуют в РА в разведениях 1:10 до 1:80. При
положительной РА (1:10 и выше) морских свинок убивают и материал от них
исследуют бактериологически, т.е. делают посевы из лимфоузлов, селезенки,
печени и костного мозга..
Результат исследования на бруцеллез считают положительным
при выделении культуры возбудителя или при получении у морской
свинки положительной РА (1:10 и выше), если из исходного материала
культура не выделена. Срок биологического исследования – до двух
месяцев.
2. На производстве, ведущим методом диагностики является
серологический (Рис.2).
Рисунок 2. Серологические реакции
Примечание: ПЦР не является серологической
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 57 из 189
Реакции считаются положительными (диагностический титр):
РА - от двух до четырех крестов, в разведениях:
1:50 (для мелких животных)
1:100 (для крупных животных)
1:10 (для пушных зверей и морских свинок),
реакция положительная, животные больные.
РСК – от двух до четырех крестов, в разведениях:
1:5 (для всех животных),
реакция положительная, животные больные.
РДСК – более чувствительный тест, чем РСК. При инфекционном
эпидидимите баранов используют только РДСК с овисным антигеном. РСК и
РДСК считают положительными при задержке гемолиза на 2-4 креста в
одном или двух разведениях (1:5 или 1:10) и полном гемолизе эритроцитов в
контрольной пробирке (без антигена).
РБП – реакцию проводят при температуре 18-30 С с бруцеллезным
антигеном, окрашенным бенгальским розовым, на пластинках с лунками.
При положительной реакции в течение 4 минут появляются мелкие или
крупные хлопья агглютината розового цвета.
КР – ставят с цельным свежим молоком или консервированным
формалином молоком коров и антигеном – взвесью убитых бруцелл,
окрашенных в синий цвет гематоксилином. При наличии в молоке
специфических антител происходит агрегация антигена. Образовавшийся
комплекс адсорбируется сливками молока и поднимается с ними вверх,
образуя четкое, окрашенное кольцо.
Для выявления бруцелл непосредственно в патологическом материале,
а также в объектах окружающей среды предложен прямой метод
иммунофлюоресценции (РИФ).
3.Аллергический метод диагностики основан на выявлении у
больных
бруцеллезом
животных
повышенной
чувствительности
замедленного типа к специфическому аллергену. Для аллергической
диагностики применяют бруцеллин )ВИЭВ) – стерильный биологический
препарат (жидкость коричневато-желтого цвета без опалесценции),
содержащий продукты жизнедеятельности и специфические вещества,
извлеченные из бруцелл. Бруцеллин вводят под кожу нижнего века на 1 см
ниже его края со стороны наружного угла глаза (пальпебральная проба):
овцам, козам и оленям – 0,5 мл, КРС и буйволам – 1,0 мл. Свиньям
внутрикожно, с наружной стороны ушной раковины, ближе к основанию уха
(0,2мл). У больных животных на месте введения бруцеллина наступает
воспалительная реакция в виде плотной или тестоватой припухлости,
гиперемия. У здоровых животных реакция не наступает.
5. Иммунитет и иммунизация
Животных, больных бруцеллезом, не лечат из-за отсутствия
эффективных средств. Больные животные представляют серьезную
опасность для здоровья человека, поэтому подлежат убою.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 58 из 189
С развитием инфекционного процесса у животных формируется
нестерильный иммунитет, который сохраняется некоторое время и после
освобождения организма от бруцелл (стерильный, постинфекционный
иммунитет). Решающее значение в противобруцеллезном иммунитете
имеют клеточные факторы.
Для специфической профилактики бруцеллеза используют живые и
инактивированные вакцины. При выборе вакцинных штаммов учитывают
четыре критерия: остаточную вирулентность, патогенность, длительность
выживания в организме и иммуногенность. Во всем мире наибольшее
распространение получила сухая живая вакцина из штамма Brucella
abortus 19, выделенного из молока коров Баком в 1923 г. в США.
Долгое время
применяли сухую живую вакцину из
слабоагглютиногенного штамма Br.abortus 82. Вакцинируют молодняк
(КРС) в возрасте 5-6 месяцев и за два месяца перед случкой
Для иммунизации овец и коз с 1975 г. применяли
высокоиммуногенную, обладающую антигенными свойствами, сухую
живую вакцину из штамма Рев-1 бруцелл вида мелитензис. Эта вакцина
предложена в 1957 г. Эльбергом и Фонсом (США).
Вакцины используют согласно наставлениям.
В настоящее время вакцинация с.-х. животных против бруцеллеза в
Казахстане приостановлена. В отдельных регионах, где бруцеллез имеет
распространение, применяют вакцину против бруцеллеза из штамма РБ 1.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
1.
2.
3.
4.
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме № 10
Возбудители бруцеллеза (Brucella abortus, Brucella melitensis, Brucella
suis, Brucella ovis, Brucella neotomae, Brucella canis)
Коккобактерии, Гр(-), по Козловскому
Бактериологический
метод
диагностики
(морфологические,
культуральные, биохимические, антигенные, патогенные свойства
бруцелл)
Серологический метод диагностики
Аллеогический метод диагностики. Бруцеллин
Серологические реакции (РА, РСК, РДСК, КР, РБП, ИФА)
Диагностический титр
Биопрепараты
–
вакцины
(сухая
живая
вакцина
из
слабоагглютиногенного штамма Br.abortus 82, сухая живая вакцина из
штамма Brucella abortus 19, сухая живая вакцина из штамма Рев-1).
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ
Морфологические, культуральные, биологические свойства бруцелл.
Методы диагностики. Критерии дифференциальной диагностики
бруцелл
Значение серологического метода диагностики.
Вакцины, применяемые для профилактики.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 59 из 189
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
Основная
1. Бияшев
Б.К.Ветеринарная
микробиология
и
иммунология.Алматы,2007. – 417 с.
2. Сансызбай А.Р., Еспембетов Б.А., Сырым Н.С. и др. Анализ
эпизоотической ситуации по бруцеллезу животных в мире и Казахстане
// Ветеринария, 2013. - №5. – С.52-64.
3. Тайтубаев М.К., Саримбекова С.Н. Осадочная реакция при
исследовании молока коз на бруцеллез//Ветеринария, 2013. - №1(35). –
С.22-24.
4. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и
иммунология. –М.: КолосС, 2003.-432 с.
Дополнительная
1. Тлепов А.А. Микробиология. – Алматы,2011. – 314 с.
2. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Костенко Т.С. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. М., 2008. – 224с.
3. Блейм Т.Н. Сборник тестов по микробиологии. Учебное пособие. –
Семипалатинск: СГУ имени Шакарима,2005. – 112 с.
4. Ветеринарная микробиология и иммунология /Под ред.проф.
Н.А.Радчука.-М.,1991.-С.104-118.
Лекция № 11
Энтеробактерии. Общая характеристика рода.
Эшерихии
План
1. Общая характеристика рода.
2. Escherichia coli. Характеристика возбудителя (морфологические,
тинкториальные, культуральные, биохимические, антигенные и патогенные
свойства).
3. Колибактериоз. Методы диагностики.
4. Средства специфической профилактики (биопрепараты).
Ключевые слова: энтеробактерии, кишечная палочка, перитрихи,
колибактериоз
1. Общая характеристика рода
Семейство Enterobacteriaceae включает 12 родов: Escherichia, Salmonella,
Proteus, Yersinia, Shigella, Klebsiella, Citrobacter, Enterobacter, Edwardsiella,
Erwinia, Hafnia, Serratia. В патологии домашних животных наибольшее
значение имеют роды: Escherichia, Salmonella, Proteus, Yersinia.
Бактерии этого семейства имеют следующие общие свойства: все они
грамотрицательные палочки, не образуют спор, лишены оксидазы,
восстанавливают нитраты в нитриты, ферментируют глюкозу с образованием
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 60 из 189
или без образования газа, подвижные (перитрихи) или неподвижные, хорошо
растут на обычных средах, факультативные анаэробы.
Дифференциацию энтеробактерий (кишечно-тифозно-паратифозных и
дизентерийных бактерий) производят по ряду признаков: подвижности,
ферментации углеводов, аминокислотному метаболизму, образованию индола
и сероводорода, а также по антигенным свойствам, выявляемым в
серологических реакциях с заведомо известными видоспецифическими,
группоспецифическими
и
типоспецифическими
агглютинирующими
сыворотками.
Патогенные виды и типы вызывают болезни, отличающиеся по
клиническим проявлениям (кишечные инфекции, бактериемии, пневмонии и
массовые аборты у животных, артриты, маститы и др.). Поэтому название
семейства больше соответствует месту их обитания и способам заражения.
2. Escherichia coli. Характеристика возбудителя (морфологические,
тинкториальные, культуральные, биохимические и патогенные
свойства).
Микроб выделен из испражнений Т. Эшерихом в 1885 г. E.coli –
обитатель толстого кишечника человека и млекопитающих; содержаться
также в кишечнике птиц, рыб, рептилий, амфибий и насекомых. Выделяясь в
изобилии с испражнениями. Постоянно обнаруживаются и во внешней среде
(почва, вода, предметы). Патогенные серотипы вызывают колибактериоз –
весьма распространенную болезнь у новорожденных домашних животных,
иногда у птенцов и эмбрионов птиц.
В род Escherichia входят два вида - E.coli (у животных, человека, птиц) и
E.blatta (у насекомых). E.coli включает более 500 серогрупп,
дифференцирующихся по культуральным, биохимическим и антигенным
признакам.
Морфология. E.coli - полиморфные палочки. Располагаются одиночно.
Длина 1-3 мкм, ширина 0,3-0,6 мкм.. имеются подвижные и неподвижные
особи. Некоторые образуют капсулу (О8,О9,О101). Грамотрицательные. Спор
не образуют. На поверхности клеток имеются пили, на которых
адсорбируются некоторые фаги.
Устойчивость. Эшерихии устойчивы к воздействию факторов внешней
среды. В почве – до 11 месяцев, в навозе – до 11 месяцев,, в воде – до 300
дней. При 60 С – 10 мин, 100 С – моментально. Дезсредства – 2% раствор
активного хлора, 2.5% раствор формальдегида, 2%- р-р гидроокиси натрия,
3% р-р однохлористого йода.
Культивирование. Факультативный анаэроб, 30-37 С, рН7,2-7,6. К
питательным средам неприхотлива. Растет на обычных питательных средах.
На МПА развивается в виде слабовыпуклых полупрозрачных сероватых
колоний, в бульоне вызывает диффузное помутнение с образованием осадка.
Дифференциально-диагностическими средами являются среды Эндо, Левина,
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 61 из 189
Плоскирева. На дифференциальных средах в зависимости от их состава
образуют различного цвета колонии.
Ферментативные свойства. E.coli обладает высокой ферментативной
активностью, что используется в идентификации микроба. Ферментирует с
образованием кислоты и газа лактозу, глюкозу, манит; сахарозу и дульцит не
постоянно, не изменяет адонит и инозит. Образует индол, не образует
сероводород, желатин не разжижает, на среде Симонса не растет, дает
положительную реакцию с метиловым красным(ярко-розового цвета),
отрицательную реакцию Фогеса – Проскауэра (среда желтого цвета),
восстанавливает нитриты в нитраты, мочевину не расщепляет.
Антигенная структура. Эшерихии имеют О-, К-, Н-антигены.
О-антигены (соматический) термостабильный не разрушается при
темпрературе 120 С(выдерживает кипячение и автоклавирование).
К-антигены – поверхностные или капсульные, представляют собой
комплекс термолабильных (L,B) и термостабильных антигенов (А и М).
Н-антиген (жгутиковый) – термолабильный.
Эшерихии подразделяются по характеру О-антигена на 170 серогрупп,
К-антигену -100 серогрупп, Н-антигену – около 60 типов. На основании
антигенной структуры каждая серогруппа обозначается формулой с указанием
антигена и его разновидности, выражаемой арабской цифрой (Кауфман,
Книпшильд,Вэлне). Например, серогруппа О111 имеет формулу –
О111:К58:Н2.
Сочетание
различных
антигенов
определяет
специфичность
серологических типов кишечной палочки, систематика которых имеет важное
эпизоотологическое значение.
Патогенность. Патогенные свойства у эшерихий
обусловлены
следующими факторами: наличием эндотоксина, выработкой энтеротоксинов,
гемолизина, адгезией и выделением колицинов.
E.coli. некоторые штаммы вызывают тяжелое заболевание с высокой
смертностью у телят – сосунов. При парентеральном введение
энтеропатогенных культур кроликам, морским свинкам, белым мышам у них
развивается токсико-септический процесс, приводящий к гибели животных.
3. Колибактериоз. Методы диагностики
Колибактериоз – остропротекающая инфекционная болезнь молодняка
сельскохозяйственных животных, включая пушных зверей и птиц. Болезнь
протекает
в
септической
(ее вызывают
капсульные
штаммы),
энтеротоксемической (эшерихии с адгезивными свойствами), и энтеритной
формах (эндотоксины, вызывающие диарею).
Основным методом постановки диагноза на колибактериоз является
бактериологический. Для бактериологического исследования в лабораторию
направляют труп животного или, голову, головной мозг), трубчатую кость.
Селезенку, долю печени желчным пузырем, брыжеечные лимфатические
узлы, пораженный участок тонкого кишечника.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 62 из 189
Бактериологическое исследование.
1-й день – посевы в МПБ, на МПА, среды Эндо или Левина; микроскопия
мазков из патматериала;
2-й день – пересев колоний в МПБ и после 4ч культивирования посев на
среды Гиса и МПА для приготовления антигена и заражения белых мышей
(цыплят).
3-й день – микроскопия мазков из чистых культур, учет ферментативных
свойств. Заражение лабораторных животных. Изучение антигенных свойств в
реакции агглютинации с типоспецифическими сыворотками для определения
серогрупповой принадлежности..
4-й день. Учет биопробы и развернутой реакции агглютинации.
Определение чувствительности культур к антибактериальным препаратам.
5-й день. Результаты биопробы и чувствитльности культур к препаратам.
6-7-й день. Подведение окончательных результатов биопробы и изучения
ферментативных свойств культур. Оформление экспертизы.
Если в течение 2суток после заражения белые мышки погибают
(цыплята на 4 сутки), то культура эшерихий считается патогенной.
Патогенные культуры серологической типизации не подвергают.
Бактериологический
диагноз
у
млекопитающих
считают
установленным:
1. при выделении культур эшерихий из селезенки, костного или головного
мозга без определения их патогенности и серологической
принадлежности;
2. при выделении не менее чем из двух органов животного культур
эшерихий, патогенных для белых мышей или принадлежащих к Осерогруппам, признанным патогенными для животных;
3. у птиц – при выделении патогенных для цыплят эшерихий из костного
мозга, крови или печени.
4. Средства специфической профилактики и лечения (биопрепараты)
1. Для формирования колострального иммунитета вакцинируют
стельных коров, супоросных свиноматок, суягных овец, за 1-2 месяца до
отела, опороса, окота - ГОА-формолтиомерсаловой вакиной.
2. Колипротектант ВИЭВ для телят (взвесь убитой нагреванием
культуры эшерихий одной серогруппы, отмытой от токсинов и
консервированной формалином).
3. Поливалентная вакцина против сальмонеллеза и колибактериоза
пушных зверей.
4. Инактивированная вакцина против колибактериоза птиц, применяют
за 7-10 дней до взятия от кур яиц на инкубацию. Для создания
трансовариального иммунитета.
5.Поливалентная иммунная сыворотка (и для лечения).
6. Бактериофаг против паратифа и колибактериоза с питьем.
7. Антибиотики с учетом чувствительности к ним.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 63 из 189
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме № 11
1. Семейство Enterobacteriaceae включает 12 родов: Escherichia,
Salmonella, Proteus, Yersinia, Shigella, Klebsiella, Citrobacter,
Enterobacter, Edwardsiella, Erwinia, Hafnia, Serratia.
2. Escherichia coli – возбудитель колибактериоза (морфологические,
культуральные, биохимичесие и патогенные свойства)
3. Антигенная формула эшерихий (О-антиген, К-антигены, Н-антиген)
4. Сахаролитические свойства (среды Гисса, среды Эндо, Левина,
Плоскирева)
5. Диференциальная диагностика (от сальмонелл)
6. Серологическая идентификация патогенных эшерихий (РА с
типоспецифическими сыворотками)
7. Биопрепараты
(вакцины,
диагностические
типоспецифические
сыворотки, гипериммунные сыворотки, бактериофаги)
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ
1. Общая характеристика рода.
2. Escherichia coli. Характеристика возбудителя (морфологические,
тинкториальные, культуральные, биохимические, антигенные и патогенные
свойства).
3. Колибактериоз. Методы диагностики.
4. Когда диагноз на колибактериоз считается установленным?
4. Средства специфической профилактики (биопрепараты).
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
Основная
1. Бияшев Б.К.Ветеринарная микробиология и иммунология.- Алматы,2007. –
417 с.
2. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и
иммунология. –М.: КолосС, 2003.-432 с.
Дополнительная
1. Тлепов А.А. Микробиология. – Алматы,2011. – 314 с.
2. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Костенко Т.С. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. М., 2008. – 224с.
3. Блейм Т.Н. Сборник тестов по микробиологии. Учебное пособие. –
Семипалатинск: СГУ имени Шакарима,2005. – 112 с.
4. Ветеринарная микробиология и иммунология /Под ред.проф.
Н.А.Радчука.-М.,1991.-С.104-118.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 64 из 189
Лекция №12
Возбудитель сибирской язвы
План
1. Определение болезни. Историческая справка.
2. Характеристика возбудителя (морфологические,
культуральные , биохимические и патогенные свойства).
3. Методы диагностики.
4. Средства специфической профилактики
тинкториальные,
Ключевые слова: сибирская язва, бацилла антракса (B.anthracis),
капсула, спора, карбункулы, вакцина из штамма 55
1. Определение болезни. Историческая справка
Сибирская язва – это острое инфекционное заболевание животных.
Характеризуется явлениями септицемии образованием различной величины
карбункулов в области подгрудка и живота. Заболевание в настоящее время
встречается в виде спорадических случаев. Болеет человек.
Русское название болезни дал С.С.Андриевский в связи с крупной
эпидемией на Урале и в Сибири в 1789 г. В 1788 г. героическим опытом
самозаражения он доказал идентичность сибирской язвы человека и
животных и окончательно подтвердил ее нозологическую самостоятельность.
Возбудитель сибирской язвы Bacillus anthracis был неоднократно
описан разными авторами – А.Полендер (1849), К.Дален(1850), Ф.Браун
(1854). Брауэль (1857, Россия), профессор Дерптского ветеринарного училища
обнаружил в крови погибших и больных от сибирской язвы овец наличие
нитевидных, неподвижных и неветвящихся телец. Брауэль один из первых
выявил бациллы в крови человека, умершего от сибирской язвы и
экспериментально воспроизвел заболевание у животных при заражении их
кровью. Однако, этиологическая роль возбудителя была установлена Р.Кохом
(1876) и Л.Пастером в 1881. Они выделили чистые культуры и независимо
друг от друга при помощи этих культур воспроизвели заболевание у
животных.
В России первую культуру сибиреязвенного возбудителя получил
В.К.Высокович в 1882 г.
Исследованиями Р.Коха в 1876 г. было доказано, что вегетативные
клетки бациллы обладают способностью образовывать споры.
В 1888 г. Серафини обнаружил капсулу
2. Характеристика возбудителя (морфологические, тинкториальные,
культуральные, биохимические и патогенные свойства).
Семейство:
Bacillacea
Род: Bacillus
Вид: B.anthracis
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 65 из 189
B.anthracis - крупная палочка длиной 5-8 иногда 10 мкм, диаметром
1,0-1,5 мкм. Концы у живых палочек закруглены, у убитых они как бы
обрублены и слегка вогнуты. Палочки в мазках располагаются парами и очень
часто цепочками, особенно длинными на питательных средах. Напоминая
бамбуковую трость.
Сибиреязвенная палочка красится всеми анилиновыми красителями. По
методу Грама –Гр(+). Жгутиков не имеет, образует спору, капсулу. Бациллы
чрезвычайно устойчивы: в почве сохраняются десятки лет, в воде – в течение
нескольких лет,под действием прямых солнечных лучей погибают через 20 и
более суток. При кипячение разрушаются через 45-60 минут, при
автоклавировании (110 град.С) – через 5 мин, сухой жар (140 град С)
выдерживают до 3 часов. Споры долго сохраняются в шерсти и шкурах
животных, используемых для различной выделки и в засоленном мясе.
Культивирование. Аэроб или факультативный анаэроб, Т=37-38 С, рН
среды 7,2-7,6. К питательным средам не требователен, растет на обычных
средах – МПА, МПБ. На плотных средах образует характерные крупные
матовые шероховатые колонии R-формы. Структура колоний имеет сходство
с локонами или львиной гривой. Благодаря цепочечному расположению
палочек, которые образуют нити, отходящие от центра.
На агаре с пенициллином (0,05-0,5 ЕД/мл) через 3 ч роста бациллы
распадаются на отдельные шарики, располагающиеся в виде цепочки, образуя
феномен «жемчужного ожерелья».
В бульоне палочка, находящаяся в R-форме, растет на дне, образуя
осадок в виде комочка ваты, бульон при этом остается прозрачным.
B.anthracis вирулентна в R-форме, при переходе в S-форму она
утрачивает свою вирулентность. На агаре образуют круглые гладкие колонии
с ровными краями, а в бульоне равномерное помутнение. При этом палочки
утрачивают способность располагаться в мазках цепочками и приобретают
вид коккобактерий, располагающихся скоплениями.
Ферментативная активность. B.anthracis довольно активна в
биохимическом отношении. Ферментирует с образованием кислоты без газа
глюкозу, сахарозу, мальтозу, трегалозу, образует сероводород, свертывает
молоко и пептонизирует его, каталазопозитивна. Имеет нитратредуктазу.
Характерно растет в МПЖ. При посеве уколом в столбик 10-12% МПЖ
вызывает послойное разжижение его (рост в виде елочки, опрокинутой вниз
вершиной).
Антигенное строение. Возбудитель сибирской язвы имеет
соматические антигены и капсульный антиген белковой
природы.
Соматический антиген полисахаридной природы, термостабилен, длительно
сохраняется во внешней среде и в трупах погибших животных. На его
обнаружении основана диагностическая реакция кольцепреципитации Асколи
(можно использовать загнивший материал). Сибиреязвенные палочки имеют
антигены общие для рода Bacillus.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 66 из 189
Факторами патогенности являются капсула и экзотоксин (фактор
отечности, протективный антиген, летальный антиген).
Патогенность. Болеют травоядные животные. Они заражаются
алиментарно, через корм, питьевую воду, зараженную спорами. Почвенная
инфекция. Реже трансмиссивно – через укусы мух, клещей, слепней. При
контакте больного со здоровым животным возбудитель не передается.
Человек заражается при контакте с сибиреязвенными трупами, при
разделке туш вынужденно убитых животных, при уходе за больными
животными, при контакте с шерстью, кожей, щетиной, зараженными
возбудителями или его спорами. Заражение здорового человека от больного
происходит крайне редко.
Из лабораторных животных наиболее восприимчивы белые мыши,
кролики и морские свинки. Павших животных вскрывают, производят посевы
на обычные питательные среды из всех паренхиматозных органов, крови
сердца и с места введения исследуемого материала. Готовят мазки-отпечатки,
окрашивают по Грамму, на капсулу.
3.Методы диагностики
Диагноз на сибирскую язву ставят бактериологическим методом с учетом
клинической картины и патологоанатомических изменений (если вдруг
вскрыли труп).
Трупы при сибирской язве вскрывать нельзя! Так как при контакте с
воздухом моментально образуются споры. Патологическим материалом
является ухо (кровь из надреза уха). Если материал загнивший, то берут
кусочки кожи. При вскрытии можно брать кусочки печени, измененные
лимфоузлы. От трупов свиней берут кусочки воспаленных тканей в области
глотки и заглоточных лимфатических узлов. Материал должен быть свежим
или консервированным в 30% растворе глицерина
Методы диагностики:
1. Микроскопическое исследование исходного материала –мазок
отпечаток.
2. Посев на питательные среды
3. Идентификация по культурально-биохимическим свойствам.
4. Заражение лабораторных животных.
5. РП по Асколи. При наличии несвежего материала решающе значение
остается за реакцией преципитации. Эту реакцию широко применяют для
исследования на сибирскую язву кожевенного, овчинно-шубного и
мехового сырья.
Дифференциальная диагностика. Возбудителя сибирской язвы
необходимо отличать от так называемых антракоидов.
Некоторые представители семейства Bacillacea имеют сходство с
сибиреязвенными бациллами, как по морфологическим, так и по
культурально-биологическим свойствам. Поэтому в целях дифференциации
обращают
внимание
на
ряд
второстепенных
признаков:
сибиреязвеподорбные микробы в отличие от возбудителя сибирской язвы
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 67 из 189
обладают подвижностью (до начала спорообразования), не образую капсул,
на кровяных средах вызывают гемолиз, на МПБ зачастую дают равномерное
помутнение, а привитые лабораторные животные не погибают.
Сенная бацилла (B.subtilis), палочки грубые, с закругленными
концами. Споры располагаются центрально, диаметр их шире поперечника
палочек.
Картофельная бацилла (B.mesentericus) –палочки толсиые с
закругленными концами. Споры располагаются централь. Диаметр спор не
превышает поперечника палочек.
Капустная бацилла (B.megatherium) крупные, грубые. Размером
9х2,5 мкм. Споры центральные. Диаметр спор не превышает поперечника
палочек.
Корневидная палочка (B.mycoides) 2,5х0,8 мкм. Споры центральные,
диаметр их больше поперечника палочек.
Заключение. Предварительное положительное заключение дается в
тот же день при наличии в мазках из исходного материала типичных для
сибирской язвы капсульных бацилл. Окончательное заключение дается в
течение трех суток по получении сибиреязвенной культуры на питательных
средах, гибели зараженных подопытных животных и при наличии
положительного результата по реакции преципитации. При задержке гибели
зараженных животных или их выживании ответ о результатах исследования
дается в течение семи дней с момента поступления патматериала в
лабораторию.
4.Средства специфической профилактики. В настоящее время для
профилактики сибирской язвы у животных применяется вакцина из штамма
55.
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме № 12
1. Возбудитель сибирской язвы – Bacillus anthracis
2. Морфологические особенности
- спора – высокая устойчивость
- капсула – защита от фагоцитов
3. Феномен «Жемчужное ожерелье»
4. R-форма колонии
5. Антракоиды (Bacillus mesenthericus, Bacillus subtilis, Bacillus megaterium,
Bacillus mycoides)
6. РП по Асколи
7. Биопрепараты – вакцина из штамма 55, сибиреязвенная диагностическая
сыворотка, сибиреязвенный антиген, гипериммунная сибиреязвенная
сыворотка
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ
1. Какие непостоянные элементы имеет возбудитель сибирской язвы?
2. Характер роста возбудителя сибирской язвы на МПА.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
3.
4.
5.
6.
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 68 из 189
Устойчивость возбудителя во внешней среде.
Значение РП в диагностике сибирской язвы.
В чем сущность феномена «жемчужное ожерелье»?
Как поступают с трупами животных, павших от сибирской язвы?
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
Основная
1. Бияшев
Б.К.Ветеринарная
микробиология
и
иммунология.Алматы,2007. – 417 с.
2. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и
иммунология. – М.: КолосС, 2003.-432 с.
Дополнительная
3. Тлепов А.А. Микробиология. – Алматы,2011. – 314 с.
4. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Костенко Т.С. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. М., 2008. – 224с.
5. Блейм Т.Н. Сборник тестов по микробиологии. Учебное пособие. –
Семипалатинск: СГУ имени Шакарима,2005. – 112 с.
6. Ветеринарная микробиология и иммунология /Под ред.проф.
Н.А.Радчука.-М.,1991.-С.104-118.
Лекция №13
Патогенные анаэробы
План:
1. Общая характеристика рода клостридий
2. Характеристика возбудителя эмфизематозного карбункула
3. Характеристика возбудителей злокачественного отека
4. Методы диагностики
5. Средства специфической профилактики
Ключевые слова: клостридии, анаэробы, эмкар, злокачественный отек,
столбняк, ботулизм.
1. Общая характеристика рода клостридий.
Патогенные анаэробы принадлежат к семейству Bacillaceae роду
Clostridium. В эту группу входят возбудители эмкара, ботулизма, столбняка и
злокачественного отека. Они характеризуются рядом общих признаков. Кроме
клостридий к патогенным анаэробам относят и неспоровые фузобактерии
(возбудитель некробактериоза) (Рис.1).
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 69 из 189
Cl.chauvo
ei
F.necro
phorum
Cl.tetani
Cl.septicu
m
Cl.botulinu
s
Патоген
ные
анаэроб
ы
Cl.hystolit
icum
Cl.novyi
Cl.perfrin
gens
Cl.sordelli
i
Рисунок 1. Патогенные анаэробы. Семейство: Bacillacea, Род: Clostridium.
Семейство: Bacteroidace, Род: Fusobacterium
Клостридии – большая группа почвенных анаэробных бактерий,
включающая (93 вида), 61 вид (по Радчуку). Однако, только 12 видов
являются патогенными микробами.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Сапрофитный
образ жизни
Крупные
полиморфные палочки
Ред. №___ от ___ 20___г.
Перитрихи
Образуют
споры
Рисунок 2.
Высокая
устойчивость
Хемоорганотрофы
Патогенные
анаэробы
Продуцируют
экзотоксины
Места обитания:
почва, желудочнокишечный тракт
Страница. 70 из 189
Анаэробы
Имеют общие
антигены
Широкая
распространенность
Общие признаки патогенных клостридий
Схема диагностики клостридиозов единая.
2. Характеристика возбудителя эмфизематозного карбункула
Эмкар – острая неконтагиозная болезнь, характеризующаяся
развитием крепитирующих отеков в массивных группах мышц богатых
гликогеном, хромотой и быстрой гибелью животных.
Болеют чаще упитанные животные, мышцы которых богаты гликогеном,
благоприятствующих развитию возбудителя. Встречается в виде
спорадических случаев.
Инкубационный период 1-2 дня, до 5 дней. Различают острое течение,
типичное проявление, карбункулезную форму. Температура 41-42 С. В местах
с развитыми мышцами (бедро, круп, шея, грудь, подчелюстная область)
появляется быстро увеличивающаяся (8-10 раз) отечная припухлость
(карбункул), плотная, горячая, болезненная, при пальпации слышна
крепитация (треск), а при перкуссии слышен ясный тимпанический звук.
Заражение животных происходит с кормом, питьевой водой.
Проникновению возбудителя способствуют травмы слизистой оболочки.
Животные погибают через 24-36 часов после появления первых
признаков заболевания.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 71 из 189
Патологоанатомические изменения. Мускулатура и подкожная клетчатка
геморагично инфильтрированы, темно-красного цвета, сухие, губчатые,
спузырьками газа.
Клостридии эмкара – палочки с закругленными концами 0,6-1,0 х 2-8
мкм. Располагаются одиночно, парами, полиморфны, могут иметь форму
веретена, лимона, груши, шара и т.д. Безкапсульные, подвижные. Имеют 6-8
боковых жгутиков. Спору образуют в организме и во внешней среде, с
центральным
или
субтерминальным
расположением.
Интенсивнее
окрашиваются по полюсам, в цитоплазме обнаруживается зернистость.
Грамположительные, в старых культурах грамотрицательные.
Патогенность. В естественных условиях болеют КРС и овцы. Редко –
козы, буйволы, олени и лоси. Болеют от 3 мес. До 4 лет. Животные старше 4
лет резистентны за счет иммунизирующей субинфекции, телята до 3 мес.
Возраста – благодаря колостральному иммунитету. Повышенной
чувствительностью обладают упитанные животные. Их мышечная ткань
содержит больше гликогена, необходимого для развития микроба.
Культурально-биохимические свойства. Растет хорошо на средах типа
Китта-Тароцци с добавлением печеночного экстракта и кусочков печени.
Через 16-24 ч вызывает слабое помутнение среды и газообразование. На
желатине и сахарном агаре в глубоком слое растет мелкими колониями в виде
булавочной головки или чечевицеобразной формы с нежными отростками.
Желатину разжижает медленно; ферментирует сахарозу, не ферментирует
салицин (отношение разных штаммов к сахарам не постоянно, однако реакции
на сахарозу и салицин являются индикаторными); молоко свертывает
медленно – на 5-6 день; мозговую среду не изменяет.
На кровяном агаре с глюкозой в чашках Петри растет в виде круглых
плоских приподнятых колоний с ровными краями, напоминающих
перламутровые пуговицы или виноградный лист. Колонии окружены узкой
зоной прозрачного гемолиза.
Токсинообразование. Образуют экзотоксин, как в организме, так и при
выращивании микроба в жидких питательных средах. В составе токсина
обнаружены гемотоксический и некротизирующий компоненты. Возбудитель
эмкара обладает ферментами патогенности – дезоксирибонуклеаза,
гиалуронидаза, кислородолабильный гемолизин.
Антигенная структура. Различают термостабильный О-антиген и
термолабильный Н-антиген Они обладают видовой специфичностью и
являются общими у всех штаммов
Биологические свойства. Из лабораторных животных наиболее
чувствительны морские свинки и хомяки.
При подкожном и внутримышечном введении морским свинкам суточной
культуры в дозе 0,3-1,0 мл они погибают через 16-48 часов с характерной
патологоанатомической картиной. (серозно-геморагический отек подкожной
клетчатки, мышцы темно-красные). В мазках с перитонеальной поверхности
печени наблюдают палочки микроба, расположенные по одной-две.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 72 из 189
Лабораторная диагностика. Материалом для исследования являются
кусочки пораженных мышц (отечный экссудат, кровь, кусочки
паренхиматозных органов).
Следует помнить, что вскрытие трупов животных, погибших от эмкара,
недопустимо (почвенная инфекция).
Схема исследования: микроскопия мазков, посевы на питательные
среды в анаэробных и аэробных условиях и заражение лабораторных
животных.
Для подавления сопутствующей микрофлоры материал можно
высушивать в термостате, сеять на жидкую элективную среду с добавлением
фенола, кристалвиолета или азида натрия, прогревать при температуре 80 С в
течение 15-20 мин., при этом вегетативные клетки погибают, а споры
сохраняются. Выделяют чистую культуру. Наличие характерных колоний на
агаре и типичных по морфологии палочек дает основание для постановки
предварительного
диагноза.
В
необходимых
случаях
изучают
сахаролитические
и
протеолитические
свойства
культуры.
Для
окончательного диагноза ставят биопробу.
Вирулентностью обладают только свежевыделенные культуры.
Иммунитет и средства специфической профилактики.
Иммунитет
при эмкаре
антитоксический и антимикробный.
Естественного иммунитета у КРС и овец нет, но с возрастом восприимчивость
к данному заболеванию снижается (иммунизирующая субинфекция). После
переболевания животные приобретают длительный активный иммунитет.
Для специфической профилактики используют концентрированную
гидроокисьалюминиевую формолвакцину против эмкара КРС и овец.
Иммунитет проявляется на 14 день и продолжается 6 мес.
3. Характеристика возбудителей злокачественного отека
Злокачественный отек (газовая инфекция, раневой газовый отек,
газовая гангрена) – острая неконтагиозная раневая инфекция,
вызываемая группой патогенных клостридий.
Клинические признаки: болезненный отек мягких тканей, их разрушение,
образование в пораженных тканях газа, интоксикация организма. Встречается
повсеместно в виде спорадических случаев. Чаще болезнь развивается после
обширных и глубоко проникающих ранений. Болеют животные и человек. У
КРС злокачественный отек наблюдается после тяжелых отелов,
сопровождающихся повреждениями и ранениями родовых путей, после
аборта.
Злокачественный отек – заболевание полимикробной этиологии. В
развитии инфекционного процесса основную роль играют следующие виды
клостридий (Рис.3).
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 73 из 189
Рисунок 3. Возбудители злокачественного отека
Лабораторная диагностика. Патматериалом является тканевой
экссудат, кусочки пораженных мышц, паренхиматозные органы, а от трупов
овец. Также часть сычуга и тонкого кишечника с содержимым (для
одновременного исследования на брадзот и энтеротоксемию).
Схема исследования. Микроскопия мазков из патматериала, посевы на
питательные среды, заражение лабораторных животных.
Мазки окрашивают по Граму и Муровцеву. Наличие в препаратах
большого
количества
палочек
ориентирует
на
подозрение
на
клостридиальную инфекцию.
Посевы из свежего материала проводят на среду Китта-Тароццы, а
также в МПБ и на МПА.
Если материал несвежий, то суспензию из патматериала прогревают 1520 мин при температуре 80 С для разрушения вегетативных форм
сопутствующей микрофлоры и затем высевают материал. Одновременно
материал засевают на глюкозно-кровяной агар в чашках. Посевы инкубируют
в анаэробных условиях 24-48 ч, после чего изучают рост на среде КиттаТароццы и глюкозно-кровяном агаре. Определяют морфологию и
подвижность бактерий из культур на среде Китта-Тароцци.
С жидкой среды выделяют чистую культуру посевом на чашки с
глюкозно-кровяным агаром. Наличие характерных колоний и крупных
грамположительных палочек в мазках дает основание для постановки
предварительного микробиологического диагноза. Иногда изучают
биохимические показатели выделенной культуры.
Для подтверждения диагноза ставят биопробу. М.свинок заражают
подкожно или внутримышечно взвесью из патматериала в дозе 1 мл и
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 74 из 189
наюлюдают за ними 7-8 дней. Гибель наступает через 16-48 ч при наличии
возбудителя с характерными патологоанатомическими изменениями.
Для определения вида и серовара возбудителя применяют реакцию
нейтрализации с гомологичными антитоксическими сыворотками.
4. Иммунитет и средства специфической профилактики.
Иммунитет
антитоксический.
Из-за
спородичности
и
полиэтиологичности болезни активная иммунизация не нашла практического
применения. Пассивная иммунопрофилактика рекомендуется – поливалентная
антитоксическая
сыворотка.
Антибиотики
широкого
спектра
и
пролонгированного действия.
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №13
1.Патогенные клостридии (Clostridium schauvoe, Cl. perfringens, Cl.
septicum, Cl. hystoliticum, Cl. oedematins, Cl. botulinum, Cl. tetani)
2. Анаэробы
3.Токсинообразование
4. Реакция нейтрализации
5. Иммунитет антитоксический и антимикробный
6. Среда Китта-Тароцци
7. Кровяной агар, гемолиз
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ
1. Возбудители эмкара и злокачественного отека, их отличительные
особенности.
2. Питательные среды и условия культивирования анаэробов.
3. Патматериал, направляемый для бактериологического исследования на
злокачественный отек и эмкар.
4. Схема бактериологического исследования при злокачественном отеке и
эмкаре.
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
Основная
1.
Бияшев
Б.К.Ветеринарная
микробиология
и
иммунология.Алматы,2007. – 417 с.
2.
Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и
иммунология. – М.: КолосС, 2003.-432 с.
Дополнительная
1.
Тлепов А.А. Микробиология. – Алматы,2011. – 314 с.
2.
Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Костенко Т.С. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. М., 2008. – 224с.
3.
Блейм Т.Н. Сборник тестов по микробиологии. Учебное пособие. –
Семипалатинск: СГУ имени Шакарима,2005. – 112 с.
4.
Диагностика
инфекционных
и
протозойных
болезней
сельскохозяйственных животных (Альбом) - М.,1968. – 196с.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
5.
Ветеринарная микробиология
Н.А.Радчука.-М.,1991.-С.251-284.
и
Страница. 75 из 189
иммунология
/Под
ред.проф.
Лекция №14
Микобактерии. Общая характеристика рода.
Возбудитель туберкулеза
План:
1. История открытия возбудителя туберкулеза
2. Классификация и характеристика микобактерий
3. Методы диагностики туберкулеза животных и меры специфической
профилактики
Ключевые слова: микобактерии, туберкулез, туберкул, корд-фактор
1. История открытия возбудителя туберкулеза
Туберкулез – это хроническое инфекционное заболевания
млекопитающих животных, птиц и человека, которое характеризуется
образованием в пораженных органах и тканях характерных узелков
туберкулов.
Поражаются следующие органы:
1.Лимфатические узлы
2. Легкие, печень, селезенка
3. Костная ткань, органы мочеполовой системы, кожа
Туберкулез известен с древнейших времен. Еще Гиппократ (4 в. до н.э.)
описал клинические признаки болезни у человека и рекомендовал способы
лечения. Возбудителей туберкулеза человека и крупного рогатого скота
открыл Роберт Кох.
2.Классификация и характеристика микобактерий
Классификация
Семейство: Mycobacteriaceae
Род: Mycobacterium (mycos – гриб, bacterium – палочка), включает 49 видов,
как патогенных, так и непатогенных.
Виды: Myc.tuberculosis – у людей
Myc. bovis – животных (КРС, лошади, козы и овцы, свиньи, пушные
звери, редко – человек иптица)
Myc. avium – птица, остальные редко
Myc. murium - мыши
Myc.poikilotermum- микобактерии туберкулеза холоднокровных –
рыб, змей, лягушек, черепах
Myc. leprae – возбудитель проказы (хроническое заболевание, при
котором поражаются различные органы и ткани, преимущественно
слизистые оболочки, кожа, периферическая нервная система – был
обнаружен новежским врачом Гансеном в 1871 г. в тканях больных людей)
Myc. paratuberculosis – возбудитель паратуберкулеза КРС
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 76 из 189
В природе наряду с истинными возбудителями существуют так
называемые атипичные микобактерии, которые отличаются по своим
свойствам от туберкулезных и друг от друга. Интерес к атипичным
микобактериям вызван тем, что они встречаются не только в больном
организме, но и в здоровом вызывая сенсибилизацию (повышенную
чувствительность) к туберкулинам. Сенсибилизация к туберкулинам мешает
в диагностике туберкулеза аллергическим методом. Кроме того, атипичные
микробактерии
могут
вызывать
ряд
хронических
заболеваний
(микобактериозы). В настоящее время существует классификация
атипичных микобактерий Раньона (1959), которая основана на двух
признаках – образование пигмента и скорость роста.
Характеристика микобактерий.
Микобактерии
палочковидные,
с
закругленными
концами
полиморфные бактерии, спор, капсул, жгутиков не имеют. Величина – длина
от 1,5 до 4 мкм, ширина от 0,2 до 0,5 мкм. Установлена филогенетическая
близость
туберкулезных
микобактерий
с
лучистыми
грибамиактиномицетами. Это сходство проявляется в медленном развитии
микобактерий на элективных питательных средах, в способе размножения,
полиморфности и способности при определенных условиях иногда
образовывать нитевидные ветвистые формы с колбовидными вздутиями на
концах, что напоминает актиномицеты. Это и явилось причиной замены
названия бациллы Коха на микобактерии туберкулеза.
Грамположительные, но с трудом окрашиваются.
Для быстрого обнаружения используют люминесцентный метод.
В цитоплазме патогенных микобактерий можно обнаружить зерна
Муха, что является дифференцирующим признаком.
В 1910 г. Фонтес обнаружил фильтрующие формы бактерий.
Фильтратом заражал лабораторных животных. В 1945 г. Джексон установил
способность микобактерий переходить в L-формы. Они установлены у всех
видов бактерий.
L-формы – варианты микобактерий, частично или полностью
утратившие клеточную стенку. Причиной утраты клеточной стенки могут
быть биологические факторы- антибиотики, лизоцим. Химические факторы.
Особенностью L-форм является реверсия . т.е. превращение в типичные
микобактерии. Это происходит при благоприятных факторах (стрессы), что
ведет к рецидиву болезни в оздоравливаемых стадах. (В.С.Федосеев,
А.Н.Байгазанов, 1987).
Микобактерии на поверхности имеют муриновый слой из
жировосковых веществ. Высокое содержание липидов обуславливает ряд
свойств.
Возбудители туберкулеза высоко устойчивы во внешней среде. Птичий
вид сохраняется в почве 17-18 мес., бычий вид в почве – 4 мес., в мокроте 5-6
мес. В культурах погибает через 8-10 мес. В молоке, сырах, масле длительное
время. При температуре 100 град погибает моментально.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 77 из 189
Культуральные свойства. Аэроб строгий. Для культивирования
используют специальные среды. Для первичного выделения используют
плотные яичные среды (Петраньяни, Гельберга). Для выделения чистой
культуры используют среду Левенштейна - Йенсена. Микобактерии хорошо
растут на средах с добавлением глицерина. Глицеринофильность впервые
обнаружил в 1887 г. Нокар и Ру. Глицерин оказался лучшим источником
углерода. Добавление его к мясному бульону и агару дает обильный рост
культур. Для культивирования L-форм используют полужидкую среду
Школьниковой в модификации Дорожковой.
На жидких средах микобактерии могут образовывать поверхностный и
донный рост, и характеризуется наличием пленки, рыхлой, матовой,
крошкоподобной
или
сплошной,
морщинистой,
блестящей
и
соответствующего цвета.
На плотных средах микобактерии растут в виде колоний R- и S-форм. Rформы колоний характерны для патогенных видов микобактерий. Колонии
могут быть крошкоподобными мелкими либо крупными, блестящими или
матовыми, в виде единичных обособленных или сплошных скоплений, в виде
морщинистого налета белого или белого с желтоватым оттенком, или же
другого цвета.
Патогенность. Микобактерии бычьего вида патогенны для многих
животных. Из лабораторных животных наиболее чувствительны кролики и м.
свинки, у которых развивается генерализованный туберкулез.
Птичий вид микобактерий вызывает туберкулез у кур, индеек, цесарок,
фазанов, уток. В естественных условиях птичьими микобактериями
заражаются домашние животные (лошади, свиньи, козы, овцы, иногда КРС,
может и человек). Из лабораторных животных генерализованным
туберкулезом болеют кролики септическая форма. М.свинки менее
чувствительны.
3.Методы диагностики туберкулеза животных и меры
специфической профилактики
Основным прижизненным методом диагностики туберкулеза
является аллергический. Для аллергической диагностики предложены
туберкулины – альт-туберкулин, сухой очищенный ППД-туберкулин для
млекопитающих (протеин-пуривиед дериват), ППД-туберкулин для птиц.
Туберкулины представляют собой фильтраты бульонных культур
туберкулезных бактерий бычьего вида или птичьего вида.
Вторым методом диагностики является бактериологический
(Рис.1). Патологическим материалом для прижизненного исследования
является трахеальная слизь, мокрота, молоко, реже кал, сперма и др. От
павших или вынужденно убитых животных берут лимфатические узлы,
кусочки пораженных органов – легкие, плевра, кишечник, гной. Можно
консервировать 30% раствором глицерина.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 78 из 189
Дифференциацию
микобактерий
проводят
на
основании
микроскопического
метода,
культурального,
биохимического,
серологического, аллергического, биологического и др.
Серологическая диагностика на практике не применяется. Это связано
с общностью антигенных свойств микобактерий.
Иммунитет при туберкулезе клеточный, нестерильный. Вакцину
против туберкулеза предложили в 1924 г. Кальмет и Герен, французские
ученые. В ветеринарной практике вакцину БЦЖ не применяют.
Рисунок 1. Схема исследования патологического материала на
туберкулез
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №14
1. Патогенные микобактерии (Myc.tuberculosis, Myc. вovis, Myc. аvium)
2. Атипичные микобактерии
3. Аллергены - ППД туберкулины
4. Аллергическая диагностика
5. Туберкулы
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 79 из 189
6. Специальные
питательные
среды
(Левенштейна-Йенсена,
Петраньяни, Гельберга, полужидкую среду Школьниковой в
модификации Дорожковой)
7. БЦЖ – вакцина при туберкулезе
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ
1. Классификация микобактерий.
2. L-формы микобактерий.
3. Какие свойства обуславливает жировосковой слой на поверхности
микобактерий?
4. Основной прижизненный метод диагностики туберкулеза.
5. Питательные среды для культивирования микобактерий.
6. Какой формы колонии образуют патогенные микобактерии?
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
Основная
1. Бияшев Б.К.Ветеринарная микробиология и иммунология.- Алматы,2007.
– 417 с.
2. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и
иммунология. – М.: КолосС, 2003.-432 с.
Дополнительная
1. Блейм Т.Н.Сборник тестов по микробиологии. Семей,2005.-112с.
2. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
3. Диагностика
инфекционных
и
протозойных
болезней
сельскохозяйственных животных (Альбом) - М.,1968. – 196с.
4. Емельяненко П.А. Ветеринарная микробиология. – М.,1982.- С.245-253.
5. Пяткин К.Д.. Кривошеин Ю.С. Микробиология.- М.,1980.-С.343-352.
6. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. М.,1983. –С.348-353.
7. Ветеринарная микробиология и иммунология /Под ред.проф.
Н.А.Радчука.-М.,1991.-С. 243-251.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 80 из 189
Лекция № 15 (Обзорная)
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №1
1. Аттенуация
2. Вакцина
3. Вирусология
4. Микробиология
5. Направления микробиологии (общая микробиология, ветеринарная
микробиология, медицинская микробиология, сельскохозяйственная
микробиология, промышленная микробиологи, пищевая микробиология)
6. Патогенные микроорганизмы
7. Предмет микробиологии (бактерии, плесневые грибы, дрожжи,
актиномицеты, риккетсии, микоплазмы)
8. Сапрофиты
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №2
1. Адгезия
2. Вид, культура чистая, культура смешанная, клон, штамм
3. Систематика
(таксономия):
классификация
микроорганизмов
(грациликуты, фирмикуты, тенерикуты, мендосикуты); номенклатура,
идентификация
4. Постоянные
элементы
бактерий
(клеточную
стенку,
цитоплазматическую мембрану,
цитоплазму, нуклеоид (ядерное
вещество), рибосомы, мезосомы). (Грамположительные бактерии.
Грамотрицательные бактерии)
5. Непостоянные элементы бактерий (капсула, эндоспора и жгутики)
6. Формы микроорганизмов (кокки, бактерии, извитые)
Понятийный аппарат к темам № 3-4 (Тезаурус)
1.Типы питания микроорганизмов (аутотрофные микроорганизмы,
гетеротрофные
микроорганизмы,
метанотрофы,
паратрофы,
прототрофы, ауксотрофы, органотрофы, литотрофы, фотолитотрофы,
фотоорганотрофные микроорганизмы, хемолитотрофные микроорганизмы,
хемоорганотрофные микроорганизмы)
2. Типы дыхания микроорганизмов (облигатные (строгие, абсолютные)
аэробы, микроаэрофилы, факультативные анаэробы, облигатные (строгие,
абсолютные) анаэробы)
3. Пермеазы
4. Экзоферменты
5. Эндоферменты
6. Классификация ферментов (оксидоредуктазы, трансферазы, гидролазы,
лиазы, изомеразы, лигазы)
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №5
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 81 из 189
Геном
Плазмида
Фенотипическая изменчивость (адаптация, модификация)
Генотипическая изменчивость (мутации, рекомбинации)
Мутации
(спонтанные,
индуцированные,
прямые,
обратные
(реверсионные), генные (точечные), хромосомные (мутации-абберации),
плазмидные, диссоциация)
6. Пассаж
7. Рекомбинативная
изменчивость
(трансформация,
трансдукция,
конъюгация)
8. Генетическая инженерия
1.
2.
3.
4.
5.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №6
Типы
биотических
взаимоотношений
между
микрои
макроорганизмами (мутуализм, комменсализм, паразитизм)
Инфекция
(инфекционная
болезнь,
микробоносительство,
иммунизирующая субинфекция)
Инфекционный процесс
Патогенность
Вирулентность
Факторы вирулентности (инвазивные- капсула, ферменты, жгутики и
токсигенные - токсины)
Классификация инфекций
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №7
1. Иммунитет
2. Виды иммунитета:
- активный и пассивный;
-врожденный и приобретенный;
- гуморальный и клеточный;
- естественный и искусственный;
- местный;
- стерильный и нестерильный
3. Неспецифические факторы защиты (кожа, слизистые оболочки,
лимфатические узлы, фагоцитоз, нормальные антитела, лизоцим,
секреторный иммуноглобулин А, пропердин, лизины, лактоферрин,
комплемент, интерферон.)
4. Специфические факторы защиты (антитела и антигенреактивные Тлимфоциты)
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №8
1. Антигены (полноценные антигены, гаптены)
2. Антитела, иммуноглобулины (агглютинины, преципитины, гемолизины,
опсонины, бактериолизины, антитоксины, комплементсвязывающие антитела)
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 82 из 189
3. Активный центр
4. Валентность
5. Антигенная детерминанта
6. Аффинитет
7. Авидность
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №9
1.Патогенные стафилококки (Staphylococcus aureus, Staphylococcus
epidermidis – морфологические, культуральные, биохимические, патогенные
свойства)
2. Сапрофитные стафилококки (Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus
albus, Staphylococcus citreus, Staphylococcus roseus)
3. Патогенные стрептококки (Streptococcus egui, Streptococcus agalactiae ,
Streptococcus pneumonia, Streptococcus pyogenes - морфологические,
культуральные, биохимические, патогенные свойства)
4. Сапрофитные стрептококки (Streptococcus lactis, Streptococcus cremoris,
Streptococcus diacetilactis)
5. Бактериологическая диагностика (микроскопия, выделение чистой
культуры, биопроба)
6. Серологическая диагностика
7. Аллергическая диагностика
1.
2.
3.
4.
5.
1.
2.
3.
4.
5.
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме № 10
Возбудители бруцеллеза (Brucella abortus, Brucella melitensis, Brucella
suis, Brucella ovis, Brucella neotomae, Brucella canis)
Бактериологический
метод
диагностики
(морфологические,
культуральные, биохимические, антигенные, патогенные свойства
бруцелл)
Серологический метод диагностики
Серологические реакции (РА, РСК, РДСК, КР, РБП, ИФА)
Биопрепараты
–
вакцины
(сухая
живая
вакцина
из
слабоагглютиногенного штамма Br.abortus 82, сухая живая вакцина из
штамма Brucella abortus 19, сухая живая вакцина из штамма Рев-1).
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме № 11
Семейство Enterobacteriaceae включает 12 родов: Escherichia,
Salmonella, Proteus, Yersinia, Shigella, Klebsiella, Citrobacter,
Enterobacter, Edwardsiella, Erwinia, Hafnia, Serratia.
Escherichia coli – возбудитель колибактериоза (морфологические,
культуральные, биохимичесие и патогенные свойства)
Антигенная формула эшерихий (О-антиген, К-антигены, Н-антиген)
Сахаролитические свойства (среды Гисса, среды Эндо, Левина,
Плоскирева)
Диференциальная диагностика (от сальмонелл)
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 83 из 189
6. Серологическая идентификация патогенных эшерихий (РА с
типоспецифическими сыворотками)
7. Биопрепараты
(вакцины,
диагностические
типоспецифические
сыворотки, гипериммунные сыворотки, бактериофаги
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме № 12
1. Возбудитель сибирской язвы – Bacillus anthracis
2. Морфологические особенности
- спора – высокая устойчивость
- капсула – защита от фагоцитов
3. Феномен «Жемчужное ожерелье»
4. R-форма колонии
5. Антракоиды (Bacillus mesenthericus, Bacillus subtilis, Bacillus megaterium,
Bacillus mycoides)
6. РП по Асколи
7. Биопрепараты – вакцина из штамма 55, сибиреязвенная диагностическая
сыворотка, сибиреязвенный антиген, гипериммунная сибиреязвенная
сыворотка
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №13
1.Патогенные клостридии (Clostridium schauvoe, Cl. perfringens, Cl.
septicum, Cl. hystoliticum, Cl. oedematins, Cl. botulinum, Cl. tetani)
2. Анаэробы
3.Токсинообразование
4. Реакция нейтрализации
5. Иммунитет антитоксический и антимикробный
6. Среда Китта-Тароцци
7. Кровяной агар, гемолиз
Понятийный аппарат (тезаурус) к теме №14
1. Патогенные микобактерии (Myc.tuberculosis, Myc. вovis, Myc. аvium)
2. Атипичные микобактерии
3. Аллергены - ППД туберкулины
4. Аллергическая диагностика
5. Туберкулы
6.
Специальные
питательные
среды
(Левенштейна-Йенсена,
Петраньяни, Гельберга, полужидкую среду Школьниковой в
модификации Дорожковой)
7. БЦЖ – вакцина при туберкулезе
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 84 из 189
3 ЛАБОРАТОРНЫЕ ЗАНЯТИЯ
ТЕМА №1: Микробиологическая лаборатория, ее задачи. Устройство
микроскопа. Иммерсионная система. Морфология бактерий
Целевая установка: ознакомить студентов с морфологией бактерий.
Материальное обеспечение: микроскоп для каждого студента; окрашенные
препараты различных форм бактерий; иммерсионное масло.
Учебные пособия:
Таблицы: ход лучей в микроскопе; основные формы бактерий;
непостоянные элементы микробной клетки.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2.Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.5-21.
Основные вопросы:
1. Правила работы в микробиологической лаборатории
2. Формы микроорганизмов
3. Ход лучей в иммерсионной системе
4. Строение микроскопа
Краткое содержание занятия: знакомство со студентами группы,
закрепление рабочих мест, назначение дежурного студента. Знакомство с
правилами работы в бактериологической лаборатории. Знакомство с учебнометодическим комплексом дисциплины «Ветеринарная микробиология и
вирусология 1». Демонстрация устройства
микроскопа. По плакату
разобрать ход лучей в иммерсионной и сухой системах микроскопа.
Демонстрация работы с иммерсионной системой микроскопа. Знакомство с
морфологией бактерий.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
После демонстрации преподавателя, дежурный студент раздает
каждому студенту по четыре готовых (окрашенных) бактериальных
препаратов. На бактериальный препарат нанести иммерсионное масло. Затем
на препарат навести иммерсионный объектив (увеличение 100) микроскопа
поворачивая револьвер до щелчка, и погрузить его в иммерсионное масло с
помощью макрометрического винта. Винт можно поднимать или опускать до
появления изображения, не выходя из иммерсионного масла. Увиденную
форму бактерий зарисовать в рабочей тетради и обозначить русским и
латинским названием.
Используя плакат «Основные формы бактерий» зарисовать в тетради
основные формы бактерий с обозначением названий на русском и латинском
языках.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 85 из 189
ТЕМА №2:
Краски и красящие растворы. Техника приготовления
бактерийных препаратов. Простой способ окрашивания.
Целевая установка: ознакомиться с красками и методами приготовления их
растворов. Научиться готовить и окрашивать бактериальные препараты
простым методом. Убедиться в вездесущности микроорганизмов.
Материальное обеспечение: микроскоп для каждого студента;
иммерсионное масло, бактериальные петли, предметные стекла, спиртовки,
спички, фильтровальная бумага, карандаши по стеклу, краски в растворах,
пробирки с культурой на МПА, сенным настоем и капустным (огуречным)
рассолом. Демонстрация: краски сухие, реактивы для химической фиксации,
фиксажница.
Учебные пособия:
Таблицы: основные формы бактерий; анатомия микробной клетки.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.21-28.
Основные вопросы:
1. Краски, применяемые для окраски бактерий. Техника приготовления.
2. Техника приготовления мазка из культуры, выращенной на плотной
питательной среде.
3. Сущность простого метода окрашивания бактериальных препаратов.
По всем вопросам составить конспекты.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия. Беседа о вездесущности
микроорганизмов. Ознакомление с техникой приготовления бактерийных
препаратов, методами их фиксации и окраски. Демонстрация техники
приготовления препаратов, фиксации химическим и физическим способами,
техники окраски простым способом. Демонстрация сопровождается беседой
о цели и методах фиксации, о принципах приготовления красящих растворов,
цели простого метода окраска. Проведение самостоятельной работы.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
Приготовить насыщенный спиртовый раствор фуксина. Для этого
краску залить 96% раствором спирта в соотношении 1:10. Для насыщения
спиртовый раствор поместить в термостат и выдержать до полного
растворения. Затем из насыщенного раствора приготовить карболовый
фуксин (Циля). Взять 10 мл насыщенного спиртового раствора основного
фуксина и 100 мл 5% водного раствора фенола. Второй раствор при
постоянном взбалтывании постепенно прилить к первому (а не наоборот).
Готовый раствор профильтровать через бумажный фильтр в бутыль из
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 86 из 189
темного стекла. Краску использовать для окрашивания бактериальных
препаратов, приготовленных самостоятельно.
После демонстрации техники приготовления и окраски бактериального
препарата каждый студент получает культуру, выращенную на плотной
питательной среде (МПА), из которой готовит бактериальный препарат,
сушит его, фиксирует над пламенем горелки и окрашивает одним из
красителей. Приготовленные препараты микроскопирует. Определяет
морфологию бактерий, зарисовывает в рабочую тетрадь и обозначает форму.
В тетрадь записать схему: мазок – сушка – фиксация – окраска.
ТЕМА №3:
Сложные методы окраски. Сущность окраски по методу Грама и ЦиляНильсена
Целевая установка: уяснить сущность и значение окраски по методу Грама
и Циля-Нильсена.
Материальное обеспечение: микроскоп для каждого студента;
иммерсионное масло, бактериальные петли, предметные стекла, спиртовки,
спички, фильтровальная бумага, карандаши по стеклу, пробирки со смесью
(смыв) культур кишечной палочки и стафилококка, стерильные тампоны
(спички) для приготовления мазков из зубного налета. Краски для метода
Грама. Препарат, окрашенный по методу Циля-Нильсена для демонстрации.
Учебные пособия:
Таблицы: окраска по методу Грама; окраска по методу Циля-Нильсена;
химический состав бактерий; анатомия клетки.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.29-34.
Основные вопросы:
1. Строение бактериальной клетки.
2. Химический состав микробной клетки.
3. Сущность сложных методов окраски бактериальных препаратов.
4. Строение клеточной стенки грамотрицательных и грамположительных
бактерий.
5. Техника окраски по методу Грама.
6. Сущность окраски по методу Циля-Нильсена.
По 3,4,5,6 вопросам составить конспект в рабочей тетради для
лабораторных занятий. Первый и второй вопросы повторить.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, опрос по текущей теме,
проверка конспектов; демонстрация техники окраски по методу Грама,
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 87 из 189
выяснение сущности и значения этого метода при определении вида
микроорганизмов,
диагностике
инфекционных
болезней,
по
демонстрационному препарату - разбор сущности и техники окраски
препаратов по методу Циля-Нильсена; проведение аудиторной контрольной
работы по усвоению метода Грама.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
1. Приготовить бактерийные препараты из смеси культур, зубного
налета и окрасить по методу Грама. Окрашенные препараты просмотреть под
микроскопом, микроскопическую картину зарисовать в рабочую тетрадь
(рисунки должны быть цветными) и подписать. Подчеркнуть значение этого
метода при определении вида микроорганизмов.
2. Изучить демонстрационный препарат, окрашенный по методу ЦиляНильсена. Микроскопировать. Зарисовать и обозначить. Подчеркнуть
значение этого метода.
ТЕМА №4:
Методы обнаружения спор и капсул. Определение подвижности
бактерий
Целевая установка: уяснить сущность и значение окраски спор, капсул.
Освоить технику определения подвижности микробов.
Материальное обеспечение: микроскоп для каждого студента;
иммерсионное масло, бактериальные петли, предметные стекла, спиртовки,
спички, фильтровальная бумага, карандаши по стеклу. Демонстрационный
мазок с окрашенными спорами. Набор красок для окраски спор по методу
Виртца (бумага пропитанная малахитовой зеленью и сафранином).
Препараты, приготовленные из органов мышки павшей от сибирской язвы и
окрашенные по методу Ольта. Смыв с бульонной культуры кишечной
палочки. Демонстрация подвижности бактерий в «темном поле» микроскопа.
Готовые препараты, окрашенные по методу Морозова.
Учебные пособия:
Таблицы: непостоянные элементы микробной клетки; окраска спор и
капсул; жгутики анатомия микробной клетки.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.29-34 .
Основные вопросы:
1. Строение бактериальной клетки
2. Сущность методов окраски спор
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 88 из 189
3. Сущность методов окраски капсул
4. На какие группы делятся микроорганизмы в зависимости от
расположения и количества жгутиков? Зарисовать.
5. Методы обнаружения подвижности микробов: метод «висячая капля»;
метод «раздавленная капля»; прямые методы обнаружения жгутиков
(окраска по Морозову).
6. Функции жгутиков.
7. Значение непостоянных элементов в лабораторной практике
По 2, 3, 4, 5, 6 вопросам составить конспект в рабочей тетради для
лабораторных занятий. Первый и второй вопросы повторить.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, опрос по текущей теме,
проверка конспектов, демонстрация техники окраски спор и капсул;
выяснение сущности окраски спор и капсул и значения при определении вида
микроорганизмов, диагностике инфекционных болезней. Проведение
аудиторной контрольной работы по усвоению методов обнаружения спор и
капсул и жгутиков.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
1. Изучить готовые бактериальные препараты, окрашенные по методу Ольта
с целью обнаружения капсул. Микроскопировать и зарисовать
2. Готовые препараты окрасить по методу Виртца, для обнаружения спор.
Микроскопировать, зарисовать. Обозначить.
Окраска по методу Виртца. На мазок положить бумагу, пропитанную
малахитовой зеленью. Смочить дистиллированной водой. Нагревать 3-4 раза
в течение 7 минут до появления паров периодически снимая с огня. Краску
смыть и нанести на препарат бумагу, пропитанную раствором сафранина.
Смочить дистиллированной водой и красить 45 секунд. Смыть водой.
Просушить фильтровальной бумагой.
3.
Изучить подвижность микроорганизмов методом «раздавленная капля»
в темном поле микроскопа по демонстрационному препарату
4.
Изучить мазок, окрашенный по методу Морозова. Микроскопировать.
Зарисовать.
5.
Приготовить препарат «висячая капля». Микроскопировать.
ТЕМА №5:
Морфология плесневых грибов,
дрожжей и актиномицет
Целевая установка: ознакомится с морфологией грибов и техникой их
микроскопического исследования.
Материальное обеспечение: ДЛЯ ДЕМОНСТРАЦИИ – микроскопы с
готовыми препаратами плесневых грибов, дрожжей и актиномицет; три вида
плесневых грибов (пеницилл, аспергилл, мукор) на хлебе. Микроскопы,
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 89 из 189
предметные стекла, покровные стекла, препаровальные иглы, бактериальные
петли, спиртовки, спички, физраствор, иммерсионное масло.
Учебные пособия:
Таблицы: морфология плесневых грибов, актиномицет и дрожжей;
строение дрожжевой клетки, актиномикоз у крупного рогатого скота.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2.Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.-С.34-43.
Основные вопросы:
1. Основные виды плесневых грибов (аскомицеты, мукоровые грибы), их
строение и морфология, способы размножения.
2. Строение и морфология дрожжей, способы размножения.
3. Строение и морфология актиномицет, способы размножения.
4. Практическое значение плесневых грибов, несовершенных грибов,
дрожжей, актиномицет в биотехнологии. Использование продуктов
жизнедеятельности.
В рабочей тетради дать письменные ответы на поставленные вопросы и
сделать схематические зарисовки морфологии плесневых грибов (пеницилл,
аспергилл, мукор, дрожжей и актиномицет – представителей
многоклеточных и одноклеточных организмов
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, опрос по текущей теме,
проверка конспектов, изучение морфологии плесневых грибов по
демонстрационным препаратам, изучение готовых препаратов актиномицет и
дрожжей, демонстрация преподавателем техники приготовления препаратов
из плесневых грибов, самостоятельное приготовление препаратов из
плесневых грибов, проведение аудиторной контрольной работы.
Самостоятельная работа: Ход выполнения.
1. Изучить демонстрационные препараты плесневых грибов,
расположенных под номерами (№1, №2, №3), приготовленные лаборантом,
сопоставить с табличным материалом. В процессе дискуссии определить
принадлежность гриба к определенному роду.
2. Дежурный студент раздает по два готовых бактериальных препарата
каждому студенту, где они изучают морфологию дрожжей и актиномицет.
Делают зарисовки увиденной картины. Препараты можно смотреть под
объективом на 40.
3. Рассмотреть три вида плесневых грибов, выращенных на хлебе.
Изучить культуральные свойства грибов. Затем из каждого гриба
приготовить с помощью бактериальных игл препараты на предметном
стекле, накрыть покровным стеклом и рассматривать под объективом на 40 в
затемненном поле микроскопа. Зарисовать.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 90 из 189
Для того чтобы определить род гриба необходимо
плодоносящую часть гриба и сопоставить с табличным материалом.
найти
ТЕМА №6:
Методы стерилизации. Питательные среды. Компоненты,
классификация
Целевая установка:
разобрать методы стерилизации (сухим жаром,
влажным жаром). Ознакомиться с устройством и правилами работы
основных приборов, используемых для «горячей» и «холодной»
стерилизации.
Уяснить понятия «дезинфекция», «асептика» и
«антисептика». Разобрать технику приготовления МПА, МПБ, МПЖ.
Самостоятельно приготовить агар Эндо и МПБ из сухих питательных сред.
Материальное обеспечение: автоклавы, стерилизатор со шприцами и
инструментами, печь Пастера, аппарат Коха, фильтры Зейтца, ручной насос
Комовского, лабораторная посуда( пипетки градуированные и пастеровские,
чашки Петри, ступки, пестики, бюксы, пробирки, вата, марля, бумага,
нарезанная для завертывания чашек Петри и пипеток. образцы питательных
сред:
плотные,
жидкие,
полужидкие.
Обычные,
специальные,
дифференциальные (Эндо, среды Гисса). Ингредиенты питательных сред
(МПА, МПБ, Эндо) – мясная вода, пептон, сухой агар. Колбы, пробирки с
пробками, чашки Петри стерильные, дистиллированная вода, рН – метр,
весы, разновесы
Учебные пособия:
Таблицы: мезофиллы, психрофилы, термофилы; характер роста на
питательных средах.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.-С.43-52, 60-67.
Основные вопросы:
1. Понятия «стерилизация», «дезинфекция», «асептика», «антисептика»,
«пастеризация».
2. Методы стерилизации:
5.1 Методы влажной стерилизации (кипячении, стерилизация паром под
давлением, дробная стерилизация – текучим паром и тиндализация).
5.2 Устройство автоклава и правила работы с ним.
5.3 Методы сухой стерилизации ( прокаливание на огне, стерилизация в
печах Пастера).
2.4. Механическая стерилизация (фильтрование – фильтры Зейтца, свечи
Шамберлана, свечи Беркефельда).
6. Характеристика и классификация питательных сред.
7. Требования, предъявляемые к питательным средам.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 91 из 189
8. Техника приготовления питательных сред (МПА, МПБ, МПЖ). Их
стерилизация.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, разбор методов стерилизации.
Демонстрация оборудования, используемого для стерилизации (автоклавы,
сушильные шкафы, УФЛ) – экскурсия в лабораторию кафедры. Проведение
аудиторной контрольной работы.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
1. Подготовить посуду к стерилизации – пипетки, чашки Петри,
предметные стекла, колбы. Приготовить ватно-марлевые пробки. Провести
стерилизацию пинцетов и ножниц методом кипячения.
2. Приготовить 100 мл мясо-пептонного бульона и 100 мл агара Эндо
из сухих сред и с помощью преподавателя определить рН среды. Разлить
МПБ в пробирки, агар Эндо – в чашки Петри. Нарисовать схему
приготовления питательных сред
Влияние на бактерии гидростатического давления
Многие микроорганизмы хорошо растут и размножаются в условиях
обычного атмосферного давления. Однако есть микробы обитающие в
глубинах океанов, в нефтяных скважинах, которые существуют при давлении
1.10 в 5 Па (глубина 5 тыс.м). Споры выдерживают давление 2.10 в 6 Па.
Микроорганизмы,
устойчивые
к высокому давлению
называют
барофильными (баротолерантными).
Механизм действия высокого гидростатического давления заключается
в денатурации ряда важных ферментов клетки и нарушении функций
цитоплазматической мембраны.
В микробиологии появилось направление – баробиология
микроорганизмов, которое изучает влияние гидростатического давления на
микроорганизмы обитающие в глубине морей и океанов. Повышенное
давление в сочетании с высокой температурой используется в автоклаве (10 в
3, 10 в 6 Па и Т +120 С). В таких условиях погибают практически все
микроорганизмы.
Влияние осмотического давления на микроорганизмы
Осмотическое давление обусловлено концентрацией растворенных в
среде веществ. Внутри бактериальной клетки осмотическое давление
соответствует 10-20% сахарозы. Если микроорганизмы попадают в среду с
более высоким осмотическим давлением т.е. в среду с повышенным
содержанием соли или сахара, то происходит потеря воды и гибель клетки –
плазмолиз. Вода устремляется за пределы клетки, чтобы снизить
осмотическое давление. При попадании бактерий в среду с низким
осмотическим давлением, т.е. концентрация вещества вне клетки низкая,
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 92 из 189
вода, напротив, будет поступать в клетку. Клетка разбухает, клеточная стенка
разрывается, клетка погибает – плазмоптис. При повышении осмотического
давления у многих микробов не возможен рост и размножение.
Однако есть так называемые осмофильные микроорганизмы или
галлофилы (любящие соль), которые живут и размножаются при высоком
осмотическом давлении. Их ферменты активны только при повышенном
содержании хлорида натрия. Ионы натрия необходимы им для усвоения из
окружающей среды питательных веществ. Так, некоторые галлофилы
размножаются при концентрации хлорида натрия 20-30% - Halobacterium,
Micrococcus, Sarcina. Они находятся в солончаковых почвах,в рассолах для
соления рыбы, мяса (т.е. они вызывают порчу этих продуктов).
Стафилококки могут расти в присутствии 15% раствора хлорида натрия. Это
свойство используют для выделения стафилококков на питательных средах.
Действие различных типов излучения на микроорганизмы
1. Действие видимого света (длина волн 300-1000нм). Он угнетает
жизнедеятельность микробов (меньше, чем прямые солнечные лучи),
поэтому микроорганизмы выращивают (культивируют в темноте (в
термостатах). Однако, есть пигментообразующие бактерии, которые активно
образуют пигмент при использовании световой энергии. Микробные
культуры приобретают разный цвет. Микроорганизмы, не имеющие
пигмента можно искусственно сделать чувствительными к видимому свету,
если их окрасить. Это явление называется фотосенсибилизацией, а действие
фотодинамическим.
Прямые солнечные лучи губительно действуют практически на все
микроорганизмы, особенно патогенные. Некоторые сапрофиты более
адаптированы к воздействию света (культура пастерелл 7-12 мин;
возбудители туберкулеза 45-90 мин). Прямые солнечные лучи не разрушают
бактериальную клетку, а действуют бактерицидно. В клетке образуются
гидроксильные радикалы, губительно действующие на микробную клетку и
инактивируют ферменты.
2. Действие ультрафиолетовых лучей (100-380нм)
Лучи от 295нм до 300 нм (уточнить) бактерицидно активны. Обладают либо
летальным, либо мутагенным действием.
Механизм действия
ТЕМА №7:
Чистые культуры микробов. Методы выделения. Культивирование
аэробов и анаэробов
Целевая установка.
Уяснить понятия «чистая культура», «микробная
культура», «аэробы», «анаэробы», «микроаэрофилы», «факультативные
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 93 из 189
анаэробы». Разобрать основные методы получения чистых культур и
способы создания анаэробных условий для культивирования анаэробов.
Материальное обеспечение: Чашки Петри с МПА для каждого студента,
пробирки с бактериальной куьтурой для посева, пробирка со стерильным
физраствором и ватным тампоном на палочке, бактериологические петли,
спиртовки, стерильные пастеровские пипетки, стерильный шпатель,
карандаши по стеклу, взвесь смешанных культур микроорганизмов. Среда
Китта-Тароццы. Термостат, анаэростат.
Учебные пособия:
Таблицы: характер роста микроорганизмов на плотных и жидких
питательных средах.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.-С.67-74.
Основные вопросы:
1. Понятия «чистая культура», «микробная культура», «аэробы»,
«анаэробы», «микроаэрофилы», «факультативные анаэробы».
2. Методы выделения чистой культуры (механические, физические,
химические, биологические). Их преимущества и недостатки.
3. Культивирование аэробов (термостат, принцип его работы).
4. Культивирование анаэробов. Методы создания анаэробных условий.
Все вопросы конспектировать.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия. Беседа по вопросам темы, где
преподаватель акцентирует внимание на необходимость выделения культур
микробов одного вида, демонстрирует способы создания анаэробных
условий. Проведение аудиторной контрольной работы.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
Задание 1.Одна группа студентов готовит смывы с объектов внешней
среды, другая – с поверхности кожи и делают посевы на МПА в чашках
Петри. Третья группа производит посевы на МПА в чашках Петри из
воздуха.
Задание 2. Из микробной и чистой культур приготовить мазки. Окрасить
по методу Грама. Микроскопировать. Зарисовать
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 94 из 189
ТЕМА № 8:
Культуральные свойства микроорганизмов
Целевая установка: изучить рост микроорганизмов на плотных (МПА),
жидких (МПБ), полужидких (МПЖ) питательных средах.
Материальное обеспечение: микроскоп для каждого студента;
иммерсионное масло, бактериальные петли, предметные стекла, спиртовки,
спички, фильтровальная бумага, карандаши по стеклу, краски в растворах,
каждрму студенту чашка Петри со своими посевами с прошлого занятия.
Пробирки с МПА, МПБ. Демонстрация роста микробов на различных
питательных средах. Термостат.
Учебные пособия:
Таблицы: колонии разных видов микробов; свойства культур из R - и
S - колоний
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.70-74.
Основные вопросы:
1. Характер роста бактерий на плотных питательных средах
2. Характер роста бактерий на жидких питательных средах
3. Характер роста бактерий на полужидких средах
4. Что такое «колония», «чистая культура», «смешанная культура», «вид»,
R - и S- формы бактерий?
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, беседа по основным вопросам
темы, демонстрация роста различных видов микробов на МПА, МПБ, агаре
Эндо и техники пересева изолированной колонии на скошенный МПА,
проведение аудиторной контрольной работы.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
Студенты получают посевы на чашках Петри с предыдущего занятия и
изучают характер роста микробов, выделенных из разных объектов, на МПА.
Выбирают отдельно выросшую колонию и описывают ее свойства.
Желательно выбрать две колонии R- и S-формы и указать на различия в их
свойствах. Затем из описанной колонии делают посевы на скошенный МПА
и МПБ и готовят бактерийный препарат. Препарат окрашивают по методу
Грама, микроскопируют, определяют морфологию и тинкториальные
свойства, зарисовывают.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 95 из 189
ТЕМА № 9:
Ферментативные свойства микроорганизмов. Определение вида
микроорганизмов
Целевая установка: изучить сахаролитические, протеолитические,
гемолитические, редуцирующие свойства микроорганизмов. Ознакомиться с
питательными средами для изучения перечисленных свойств и учетом
результатов.
Материальное обеспечение: микроскоп для каждого студента;
иммерсионное масло, бактериальные петли, предметные стекла, спиртовки,
спички, фильтровальная бумага, карандаши по стеклу, краски в растворах,
набор сред для определения сахаролитических (пестрый ряд) и
протеолитических (МПБ, индикаторные бумаги на индол и сероводород)
свойств. Термостат. Демонстрация посевов микробов, обладающих
протеолитическими,
сахаролитическими,
гемолитическими
и
редуцирующими свойствами. Чистые культуры на скошенном МПА,
выделенные студентами на предыдущем занятии.
Учебные пособия:
Таблицы: рост микробов (E. coli, Salmonella) на средах Гисса, агаре
Эндо. Классификация микробных ферментов.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.74-80.
Основные вопросы:
1. Классификация ферментов. Их значение в жизни микроорганизмов.
2. Значение ферментативной активности микробов в лабораторной
практике.
3. Определение сахаролитических свойств. Питательные среды. Учет
результатов.
4. Определение протеолитических свойств. Питательные среды. Учет
результатов.
5. Определение гемолитических свойств. Питательные среды. Учет
результатов.
6. Определение редуцирующих
свойств. Питательные среды. Учет
результатов.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, беседа по основным вопросам
темы (акцентировать внимание на роль микробных ферментов при
определении вида и
ферментах как факторах вирулентности
микроорганизмов), демонстрация ферментативной активности различных
микроорганизмов, проведение аудиторной контрольной работы.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 96 из 189
Из чистых культур микроорганизмов произвести посев на пестрый ряд
(среды Гисса) и МПБ для определения ферментативных свойств. В пробирку
с МПБ под пробку вставить индикаторные бумажки на индол и сероводород.
На следующем занятии студенты анализируют результаты посевов на
пестрый ряд и МПБ. Определяют сахаролитические и протеолитические
свойства микробов.
Самостоятельно изучают редуцирующие и
гемолитические свойства микробов на метиленовом и лакмусовом молоке и
на агаре с кровью, соответственно. Результаты заносят в тетрадь в виде
таблицы (С.102 – Нецепляев С.В.) и делают заключение о ходе определения
вида микроорганизма.
ТЕМА № 10:
Антибиотики. Бактериофаги. Источники получения. Классификация
Целевая установка: уяснить механизм действия антибиотиков на
микроорганизмы, ознакомиться с методами определения активности
антибиотиков, чувствительности и устойчивости к ним (метод диффузии в
агар и метод серийных разведений) микробов. уяснить механизм действия
бактериофагов на бактерии. Усвоить методику определения их активности.
практическое использование фага, диагностическое значение реакции
нарастания титра фага
Материальное обеспечение: посевы на скошенный МПА с прошлого
занятия, чашка Петри с МПА, пастеровская пипетка, стакан с дезраствором,
карандаш по стеклу, краски в растворах. Набор дисков с антибиотиками,
пинцеты. Чашка с демонстрацией действия антибиотиков. Чистые культуры,
по две пробирки с МПБ, пастеровские пипетки, сальмонеллезный фаг
(колифаг), одна чашка с посевом на МПА для демонстрации действия фага.
Микроскоп для каждого студента; иммерсионное масло, бактериальные
петли, предметные стекла, спиртовки, спички, фильтровальная бумага,
карандаши по стеклу, краски в растворах.
Учебные пособия:
Таблицы: Метод диффузии в агар, метод серийных разведений.
Строение фага, механизм действия фага.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.80-88 .
Основные вопросы:
1.Классификация антибиотиков. Общая характеристика каждой группы.
2. Механизм действия антибиотиков на микроорганизмы. Единица
действия антибиотиков.
3. Методы определения активности антибиотиков.
4. Селекция антибиотикоустойчивых штаммов.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 97 из 189
5. Строение бактериофага.
6. Механизм действия бактериофага, специфичность его действия.
7. Определить понятия «умеренный фаг», «лизогенный фаг».
8. Практическое использование бактериофагов.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, беседа по вопросам темы,
разбор демонстрационного материала, демонстрация преподавателем
определения вида микроба с помощью бактериофага на плотной (методом
дорожки) и жидкой среде, проведение аудиторной контрольной работы.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
Проверить чистоту выделенной культуры на МПА. Для этого приготовить
мазок, окрасить по методу Грама, микроскопировать. Затем приготовить
смыв культур, путем добавления в пробирку 2 мл физраствора. Пастеровской
пипеткой (или обычной градуированной) провести посев культуры на МПА в
чашке Петри. После чего на поверхность посева разложить диски с
антибиотиками. Ход работы зафиксировать в рабочей тетради.
Посеять чистую культуру (при наличии достаточного времени сделать
мазок и окрасить по методу Грама) на две пробирки с МПБ, затем в первую
пробирку внести фаг (соответствующий), вторая пробирка останется
контрольной. Учет результатов на следующем занятии.
ТЕМА № 11:
Молекулярно-генетические методы идентификации
микроорганизмов (ПЦР)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Методическое указание к лабораторному занятию
1. Глоссарий
Полимеразная цепная реакция - это метод, который позволяет найти в
исследуемом клиническом материале небольшой участок генетической
информации любого организма среди огромного количества других
участков и многократно размножить его.
Амплификация – воспроизведение ДНК, многократное увеличение
числа копий.
Амплификон – продукт амплификации.
Амплификатор – прибор, обеспечивающий поддержку в реакционной
смеси заданной температуры в течение заданного времени в
автоматическом режиме.
Праймеры – фрагменты ДНК, состоящие из 20-30 нуклеотидов,
являющихся маркером данного возбудителя.
Плавление – денатурация ДНК.
Отжиг – комплементарное связывание праймера с ДНК-матрицей.
ДНК-полимераза – фермент с помощью которого происходит
достройка праймера (синтез ДНК).
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 98 из 189
9. Молекулярно-генетический метод - обнаружение в исследуемом
материале нуклеотидных последовательностей (фрагментов ДНК, РНК)
микроорганизмов.
Полимеразная цепная реакция
1.
2.
3.
4.
План
Введение
История создания метода. Сущность реакции ПЦР. Преимущества и
недостатки.
Компоненты ПЦР. Постановка реакции.
Разновидности ПЦР.
Практическое применение ПЦР (при бруцеллезе, сибирской язве,
туберкулезе и других инфекционных болезнях).
Введение
Одним из методов микробиологической диагностики является
молекулярно-генетический, суть которого состоит в обнаружении в
исследуемом материале нуклеотидных последовательностей (фрагментов
ДНК, РНК) микроорганизмов. Для реализации данного метода применяют
следующие методы.
1. Метод ДНК-гибридизации (ДНК-зондирование) – основан на
способности денатурированной одноцепочечной ДНК возбудителя
достраивать гомологичную цепь в бесклеточной системе. В качестве
материала для этой второй нити используют ДНК-зонды – лабораторно
приготовленные фрагменты молекулы ДНК, гомологичные фрагментам ДНК
искомого возбудителя и помеченные либо радиоактивным изотопом, либо
ферментом.
Для регистрации включения ДНК зонда в ДНК бактерий, содержащихся в
исследуемом материале, используется учет радиоактивности или к пробе
добавляют субстрат, соответствующий использованному в зонде ферменту.
Положительная реакция субстрат-фермент проявляется изменением окраски
субстрата, что свидетельствует о соответствии ДНК зонда ДНК возбудителя,
находящегося в исследуемом материале.
2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
1. История создания метода. Сущность реакции ПЦР.
В начале 1970-х годов норвежскому ученому Хьеллю Клеппе из
лаборатории нобелевского лауреата Хара Гобинды Хораны пришла в голову
мысль, что можно амплифицировать ДНК с помощью пары коротких
одноцепочечных молекул ДНК — синтетических праймеров. Однако в то
время эта идея осталась невостребованной. Полимеразная цепная реакция
была вновь открыта в 1983 году Кэри Маллисом. Его целью было создание
метода, который бы позволил амплифицировать ДНК в ходе многократных
последовательных удвоений исходной молекулы ДНК с помощью фермента
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 99 из 189
ДНК-полимеразы. Через 7 лет после опубликования этой идеи, в 1993 г.,
Маллис получил за неё Нобелевскую премию.
В начале использования метода после каждого цикла нагревания —
охлаждения приходилось добавлять в реакционную смесь ДНК-полимеразу,
так как она быстро инактивировалась при высокой температуре,
необходимой для разделения цепей спирали ДНК. Процедура была очень
неэффективной, требовала много времени и фермента. В 1986 г. она была
существенно улучшена. Было предложено использовать ДНК-полимеразы из
термофильных бактерий. Эти ферменты оказались термостабильными и были
способны выдерживать множество циклов реакции. Их использование
позволило упростить и автоматизировать проведение ПЦР. Одна из первых
термостабильных ДНК-полимераз была выделена из бактерий Thermus
aquaticus и названа Taq-полимеразой.
2.Сущность реакции ПЦР. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) –
метод направленной амплификации (воспроизведения) ДНК, позволяющей
найти в исследуемом клиническом материале небольшие участки (ДНК)
любого организма и многократно размножить их. Для реализации ПЦР
используют набор праймеров – фрагментов ДНК, являющихся маркером
данного возбудителя. При добавлении такого праймера к пробе исследуемого
материала, содержащей денатурированную одноцепочечную ДНК,
происходит их соединение с комплементарным участком ДНК.
Образовавшийся двунитевой стартовый участок ДНК воспроизводится
(амплифицируется) с помощью фермента полимеразы, входящего в набор
для ПЦР.
Вновь синтезированные двунитевые фрагменты ДНК служат матрицей
для синтеза новых нитей в следующем цикле амплификации и так далее, что
и представляет собой цепную реакцию. В течение 2-3 ч происходит 30-40
циклов апмплификации, в результате чего образуется достаточно большое
число соответствующих копий ДНК, достаточное для визуального учета.
Преимущества метода. Полимеразная цепная реакция в настоящее время
является наиболее совершенным диагностическим методом, позволяющим
выявлять единичные клетки возбудители многих инфекционных заболеваний
за счет многократного увеличения количества копий тестируемых
специфических последовательностей ДНК.
Тест-системы, основаны на принципе амплификации ДНК, позволяет
обнаруживать патогенные для человека бактерии и вирусы даже в тех
случаях, когда другими способами (иммунологическим, бактериологическим,
микроскопическим) их выявление невозможно. Это преимущество
достигается за счет высокой чувствительности ПЦР - системы, которая
составляет около 10 бактериальных клеток, в то время как чувствительность
иммунологических и микроскопических тестов колеблется в пределах 10 3-106
клеток.
Тест-системы на основе ПЦР эффективны при диагностике трудно
культивируемых, не культивируемых и персистирующих форм патогенных
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 100 из 189
бактерий. С этим приходится сталкиваться при латентных и хронических
инфекциях, а также при тестировании объектов внешней среды. ПЦР диагностикумы позволяют избежать основной трудности, связанной с
неспособностью таких бактерий размножаться в лабораторных условиях.
При ПЦР - диагностике размножению подвергается не бактерия, а только ее
ДНК, причем не вся молекула ДНК, а только определенный фрагмент,
являющийся маркером данного возбудителя.
ПЦР - диагностикумы, в отличие от иммунологических тест-систем,
позволяют избежать проблем, связанных с перекрестно-реагирующими
антигенами, тем самым, обеспечивая абсолютную специфичность.
Определение можно проводить непосредственно в клиническом
материале (кровь, сыворотка, мокрота, слюна, желудочный сок, биопсийный
материал, мазки, смывы) и в материале, получаемом из объектов внешней
среды (вода, почва).
Недостатком этих методов является гипердиагностика, поскольку при их
использовании нельзя определить, принадлежит ли выделенный фрагмент
ДНК живому микроорганизму.
3. Компоненты ПЦР. Постановка реакции.
Основные компоненты ПЦР
1.фермент Таг-ДНК-полимераза
2. пара олигонуклеотидных праймеров
3. четыре типа дезоксинуклеозидтрифосфатов
4. копируемая ДНК
5. ионы магния
Вспомогательными компонентами являются
минеральное масло.
буферный
раствор
и
Праймеры.
Специфичность
ПЦР
основана
на
образовании
комплементарных комплексов между матрицей и праймерами, короткими
синтетическими олигонуклеотидами длиной 18—30 оснований. Каждый из
праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы и
ограничивает начало и конец амплифицируемого участка.
После гибридизации матрицы с праймером (отжиг), последний служит
затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи
матрицы. Важнейшая характеристика праймеров — температура плавления
(Tm) комплекса праймер-матрица. Tm это температура, при которой половина
ДНК-матриц образует комплекс с олигонуклеотидным праймером.
Температуру плавления можно приблизительно определить по формуле
, где nX — количество нуклеотидов Х в
праймере. В случае неверного выбора длины и нуклеотидного состава
праймера или температуры отжига возможно образование частично
комплементарных комплексов с другими участками матричной ДНК, что
может привести к появлению неспецифических продуктов. Верхний предел
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 101 из 189
температуры плавления ограничен оптимумом температуры действия
полимеразы, активность которой падает при температурах выше 80 °C.
Как правило, праймеры для ПЦР - детекции инфекционных
возбудителей создают на консервативные участки их ДНК, которые редко
подвергаются генетическим перестройкам. Писки таких участков
осуществляют при помощи специальных компьютерных программ.
Амплификатор
Рис. 1: Амплификатор для проведения ПЦР
ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем
периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не
менее 0,1 °C (рис.1). Современные амплификаторы позволяют задавать
сложные программы, в том числе с возможностью «горячего старта»,
Touchdown ПЦР и последующего хранения амплифицированных молекул
при 4 °C. Для ПЦР в реальном времени выпускают приборы, оборудованные
флуоресцентным детектором. Существуют также приборы с автоматической
крышкой и отделением для микропланшет, что позволяет встраивать их в
автоматизированные системы.
Обычно при проведении ПЦР выполняется 20—35 циклов, каждый из
которых состоит из трех стадий (рис. 2).
Стадии ПЦР:
1. денатурация ДНК (плавление);
2. комплементарное связывание праймера с ДНК-матрицей (отжиг);
3. синтез ДНК с помощью ДНК-полимераз (достройка праймера) и
составляет суть каждого цикла ПЦР.
В дальнейшем этот стандартный цикл ПЦР – плавление, отжиг, синтез
воспроизводится многократно, и в идеале количество амплификонов растет в
геометрической прогрессии. Предположительность реакции определяется
числом циклов, необходимых для синтеза ДНК амплификонов в количестве
достаточном для дальнейшего исследования инфекции.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 102 из 189
Денатурация. Двуцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94—96°C
(или до 98 °C, если используется особенно термостабильная полимераза) на
0,5—2 мин., чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется
денатурацией, так как разрушаются водородные связи между двумя цепями
ДНК. Иногда перед первым циклом (до добавления полимеразы) проводят
предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2—5 мин. для
полной денатурации матрицы и праймеров. Такой приём называется горячим
стартом, он позволяет снизить количество неспецифичных продуктов
реакции.
Отжиг. Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы
праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия
называется отжигом. Температура отжига зависит от состава праймеров и
обычно выбирается на 4—5°С ниже их температуры плавления. Время
стадии — 0,5—2 мин. Неправильный выбор температуры отжига приводит
либо к плохому связыванию праймеров с матрицей (при завышенной
температуре), либо к связыванию в неверном месте и появлению
неспецифических продуктов (при заниженной температуре).
Элонгация. ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя
праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Полимераза начинает
синтез второй цепи от 3'-конца праймера, который связался с матрицей, и
движется вдоль матрицы. Температура элонгации зависит от полимеразы.
Часто используемые полимеразы Taq и Pfu наиболее активны при 72 °C.
Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины
амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным
одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех
циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы
достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 7-10 мин.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 103 из 189
Рис. 2: Схематическое изображение первого цикла ПЦР. (1) Денатурация при
94—96°C. (2) Отжиг при 68 °C (например). (3) Элонгация при 72 °C
(P=полимераза). (4) Закончен первый цикл. Две получившиеся ДНК-цепи
служат матрицей для следующего цикла, поэтому количество матричной
ДНК в ходе каждого цикла удваивается.
Количество специфического продукта реакции (ограниченного
праймерами) теоретически возрастает пропорционально 2 n, где n — число
циклов реакции. На самом деле эффективность каждого цикла может быть
меньше 100 %, поэтому в действительности P ~ (1+E)n, где P — количество
продукта, Е — средняя эффективность цикла.
Число «длинных» копий ДНК тоже растет, но линейно, поэтому в
продуктах реакции доминирует специфический фрагмент.
Рост требуемого продукта в геометрической прогрессии ограничен
количеством реагентов, присутствием ингибиторов, образованием побочных
продуктов. На последних циклах реакции рост замедляется, это называют
«эффектом плато».
4. Практическое применение ПЦР.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 104 из 189
ПЦР применяют при диагностике бруцеллеза,
туберкулеза и других инфекционных болезнях
сибирской
язвы,
Место проведения занятия: Семипалатинский Региональный филиал
РГКП «Республиканская ветеринарная лаборатория»
Целевая установка: 1. Ознакомить студентов с методикой постановки
полимеразной цепной реакции.
2. Ознакомить студентов с оборудованием для ПЦР.
3.Демонстрация работы амплификатора.
Материальное обеспечение: лаборатория – ПЦР, амплификатор для
проведения ПЦР, халаты, таблицы – «Этапы ПЦР».
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
Основные вопросы:
1. Сущность реакции ПЦР.
2. Определить понятия «амплификация», «амплификон», «праймер»,
«отжиг», «плавление», «ДНК-полимераза», «молекулярно-генетический
метод».
3. Стадии ПЦР. Их сущность.
4. Преимущества и недостатки ПЦР
Самостоятельная работа
1. Изучить практическое применение ПЦР при инфекционных болезнях
по ветеринарному законодательству (бруцеллез, сибирская язва, туберкулез).
2. Зарисовать схему цикла амплификации ПЦР.
ТЕМА № 12
Микрофлора воды, воздуха и почвы. Изучение санитарнопоказательных микроорганизмов. Бактерии группы кишечных палочек
(БГКП)
Целевая установка:
усвоить правила отбора проб воды, почвы и
отработать методы санитарно-бактериологической оценки воды, воздуха и
почвы.
Материальное обеспечение: микроскоп для каждого студента;
иммерсионное масло, бактериальные петли, предметные стекла, спиртовки,
спички, фильтровальная бумага, карандаши по стеклу, краски в растворах.
Посевы почвы в чашке на полосках фильтровальной бумаги со стеклом
(Среда Виноградского) на наличие азотобактера. Аппарат Кротова и одна
чашка с МПА. Набор среды Булира. Один набор с посевом, второй
стерильный, пипетки стерильные на 1.2,5 мл и мензурки. Фильтр Зейтца,
стерильные нитроцеллюлозные фильтры. Чашка Петри со средой Эндо. Вода
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 105 из 189
речная в колбе. Цилиндры для взятия проб воды водопроводной. Для
каждого студента чашка Петри с МПА. Насос Камовского.
Учебные пособия:
Таблицы: санитарная оценка воды, почвы, воздуха.
Учебники: Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной
микробиологии и иммунологии. – М.,1989.- С.94-104.
Основные вопросы:
1. Микрофлора воды, воздуха и почвы.
2. Санитарно-показательные
микроорганизмы.
Требования,
предъявляемые к ним.
3. Культурально-биохимические
свойства
санитарно-показательных
микроорганизмов (кишечная палочка, гемолитический стрептококк).
4. Дифференциация БГКП – ТИМАЦ.
5. Определение ОМЧ, коли-титра, коли-индекса.
6. Методы санитарно-бактериологической оценки воды, почвы, воздуха.
6. Нормативы по содержанию микробов в 1мл воды, в 1г почвы, в 1м
воздуха. Коли-индекс, коли-титр воды, почвы. Содержание гемолитических
стрептококков в 1 м воздуха.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, беседа со студентами о
микроорганизмах почвы, воды и воздуха, о санитарном значении микробов и
методах санитарно-бактериологической оценки почвы, воздуха и воды.
Преподаватель демонстрирует определение коли-титра методом Булира и
коли-индекса методом мембранных фильтров на среде Эндо, а также
производит посев из воздуха с помощью аппарата Кротова. Проведение
аудиторной контрольной работы.
Самостоятельная работа: ход выполнения АКР.
1. Дежурному студенту продемонстрировать порядок взятия проб
водопроводной воды. Из водопроводной (речной) воды приготовить
разведения 1:10, 1:100, 1:1000 и произвести посев на чашки Петри с МПА.
Посевы поместить в термостат для культивирования на 24 ч. Общее
микробное число посчитать на следующее занятие по формуле:
ОМЧ=число выросших колоний Х на степень разведения.
2. Приготовить мазки из посевов почвы для определения азотобактера,
окрасить простым способом, микроскопировать, зарисовать.
3. Каждому студенту сделать посев из воздуха на чашки Петри С МПА
для определения ОМЧ воздуха. Посевы поместить в термостат для
культивирования на 48 ч при температуре 37 С. ОМЧ воздуха определяют по
формуле. ОМЧ=число выросших колоний х 100 : 78,5 х 100, где 78,5 –
площадь чашки Петри.
4. Под контролем преподавателя студенты осваивают метод мембранных
фильтров для определения коли-индекса воды.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 106 из 189
ТЕМА № 13
Лабораторные животные в бактериологии
Целевая установка: освоить способы заражения и вскрытия лабораторных
животных, методы бактериологического исследования трупов животных.
Материальное обеспечение: ножницы, пинцеты, дезраствор (крупные
тампоны с карболовой кислотой и спиртом), пастеровские пипетки, МПА,
МПБ. Труп белой мыши, павшей от заражения культурой Escherichia coli
О86, О78. для демонстрации заражения – кролик, белые мыши, морская
свинка, стерилизатор с иглами и шприцами.
Учебные пособия:
Таблицы: методы заражения.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.88-94.
Основные вопросы:
1. С какой целью проводят экспериментальное заражение животных?
2. Что понимают под патогенностью и вирулентностью?
3. В
каких
условных
единицах
измеряют
вирулентность
микроорганизмов?
4. Виды лабораторных животных, используемых для заражения
микроорганизмами.
5. Способы заражения лабораторных животных.
6. Методика бактериологического исследования трупа животного.
На все вопросы составить конспект.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия. Беседа о патогенности,
вирулентности микробов, о цели и методах заражения животных.
Демонстрация
перорального,
подкожного,
внутримышечного,
внутрибрюшинного, внутривенного, внутрикожного, интранозального
методов заражения на кролике, морской свинке,
белой
мышке.
Демонстрация техники вскрытия трупа лабораторного животного, техники
посева из органов трупа мышки на МПА и МПБ.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
Задание. Из органов трупа белой мышки провести посевы на МПА, МПБ;
приготовить мазки-отпечатки, окрасить по методу Грама, микроскопировать.
Результаты записать в тетрадь.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 107 из 189
ТЕМА № 14:
Первый рубежный контроль
Коллоквиум (Компьютерное тестирование)
Тестовые задания приведены в разделе №4
«Самостоятельная работа обучающихся»
Вопросы по модулю 1 и 2
1. Предмет и задачи микробиологии.
2. Основные формы бактерий. Размеры и единицы измерения.
3. Строение бактерий, дрожжей, грибов, актиномицет.
4. Сущность методов обнаружения спор, жгутиков, капсул.
5. Определение
понятий
–
классификация,
таксономия,
номенклатура и идентификация микроорганизмов.
6. Определение понятий «вид», «штамм», «клон», «культура»,
«чистая культура», «смешанная культура», «колония».
7. Техника приготовления бактериального препарата. Простой метод
окраски.
8. Сущность окраски по методу Грама, Циля-Нильсена.
9. Классификация питательных сред и требования предъявляемые к
ним.
10. Техника приготовления МПА, МПБ, МПЖ.
11.Определение
понятий
«стерилизация»,
«дезинфекция»,
«асептика», «антисептика».
12. Мезофиды, психрофилы, термофилы, барофилы, галлофилы,
лиофилизация.
13. Методы стерилизации. Преимущества и недостатки их.
14.Определение понятий «аэробы», «анаэробы», «факультативные
анаэробы», «микроаэрофилы».
15.Питательные среды и требования, предъявляемые к ним.
Классификация питательных сред.
16.Порядок приготовления питательных сред.
17.Действие на микроорганизмы физических, химических и
биологических факторов.
18.Микрофлора воды, почвы, воздуха. Методы микробиологической
оценки воды, почвы, воздуха
ТЕМА № 15:
Реакция агглютинации (РА). Реакция преципитации (РП)
Целевая установка: изучить сущность и отработать технику постановку и
учета РА пробирочным методом, РП.
Материальное обеспечение: компоненты для постановки РА пробирочным
методом – единый бруцеллезный антиген, позитивная и негативная
бруцеллезные сыворотки. Компоненты для пластинчатой РА – антиген
(культура E.coli), поли- и монорецепторные агглютинирующие сыворотки.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 108 из 189
Каждому студенту пипетки, набор пробирок (4шт.), сыворотка и антиген в
штативе. Демонстрация РА в пробирках. Стандартные антигены и сыворотки
для РА. Антиген сибиреязвенный, преципитирующая сыворотка.
Демонстрация РДП в агаровом геле с отрицательным и положительным
результатом. Штатив с пробирками Уленгута, пастеровские пипетки, воронки
с асбестовыми фильтрами для фильтрации суспензии из патматериала.
Учебные пособия:
Таблицы: РА, антигенная структура кишечной палочки и сальмонелл
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.105-115, С.117-123.
Основные вопросы:
1. В чем заключается сущность серологических реакций?
2. Антигенное строение бактерий.
3. Классификация, строение антител, место их образования.
4. Механизм взаимодействия антигена
и антитела. Практическое
использование серологических реакций.
5. Сущность РА и РП.
6. Компоненты реакции агглютинации, преципитации.
7. Техника постановки.
8. Учет реакции.
На 5,6,7,8 вопросы составить конспект.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, уяснение сущности
серологических реакций, демонстрация реакции (РА) разными методами,
демонстрация РДП в агаровом геле, реакции кольцепреципитации,
демонстрация техники извлечения преципитиногена из кожсырья,проведение
аудиторной контрольной работы.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
Задание 1. Отработать методику постановки РА пробирочным методом.
1. Ознакомиться с компонентами реакции.
2. Поставить реакцию и учесть результаты на следующем занятии.
Реакцию ставить в трех пробирках, четвертая – контрольная.
3. В рабочей тетради зарисовать схему постановки реакции
агглютинации.
Задание 2. Отработать методику постановки реакции кольцепреципитации в
пробирках Уленгута.
1. Ознакомиться с компонентами реакции.
2. Из материала павшей от сибиреязвенной вакцины белой мыши
приготовить антиген горячим способом.
3. Поставить реакцию и учесть результаты.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 109 из 189
4. В рабочей тетради зарисовать схему постановки
кольцепреципитации, реакции диффузной преципитации.
реакции
ТЕМА № 16
Реакция связывания комплемента (РСК)
Целевая установка: изучить сущность, отработать технику и учет РСК.
Материальное обеспечение: на каждый стол штатив с пробирками: две
пустые, остальные пять – с компонентами для реакции – сыворотка
испытуемая в разведении 1:10, единый бруцеллезный антиген (1:100),
комплемент, гемолизин в рабочем разведении, эритроциты (1:40). Пипетки на
1мл. Водяная баня. Баночки с физраствором для промывания пипеток. На
стол преподавателя образцы компонентов для реакции. Демонстрация РСК
(положительный и отрицательный результаты).
Учебные пособия:
Таблицы:
РСК, схема титрации комплемента в гемолитической
системе, постановка главного опыта, РСК – результат.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.123-134.
Основные вопросы:
1. В чем заключается сущность РСК и ее систем?
2. Характеристика компонентов реакции связывания комплемента
(испытуемая сыворотка, антиген, комплемент, гемолизин, эритроциты
барана). Их подготовка.
3. Цель титрации комплемента.
4. Техника постановки.
5. Учет реакции.
6. Реакция длительного связывания комплемента (РДСК), ее сущность.
Все вопросы конспектировать.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, уяснение сущности реакции,
демонстрация компонентов и реакции, проведение аудиторной контрольной
работы.
Самостоятельная работа: ход выполнения АКР.
Задание. Отработать методику постановки реакции связывания комплемента.
1. Ознакомиться с компонентами реакции.
2. Записать схему главного опыта в рабочую тетрадь
3. Поставить реакцию и учесть результаты.
Задание. Провести расчет комплемента (свежего) для постановки 500 проб
РСК, при условии известного титра комплемента.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 110 из 189
ТЕМА № 17
Метод флюоресцирующих антител (МФА). Иммуноферментный анализ
(ИФА)
План:
1. Гистохимический вариант ИФА, или иммунопероксидазная реакция.
1.1 Прямой пероксидазный тест
1.2 Непрямой пероксидазный тест
2. Методы твердофазного иммуноферментного анализа.
3. Автоматизация иммуноферментного теста.
1. Гистохимический вариант ИФА, или иммунопероксидазная
реакция.
В настоящее время в диагностике вирусных и бактериальных инфекций
широко используется методы, основанные на использовании в качестве
метки антигенов и антител ферментов. Эта группа методов носит название
иммуноферментного анализа (ИФА).
Основными направлениями применения ИФА являются ранняя
диагностика инфекционных (бруцеллеза), онкологических и других болезней,
проведение
массовых
эпидемиологических
и
эпизоотологических
исследований, контроль качества продукции и соблюдение санитарных норм
на предприятиях медицинской, микробиологической и пищевой
промышленности.
ИФА используется для выявления и идентификации вируса и антител к
нему (у животных реконвалесцентов или исследования уровня
поствакцинальных антител).
Для идентификации вирусоспецифического антигена иммуноферментный
тест применяют в двух вариантах: гистохимическом и твердофазном.
1.1. Прямой пероксидазный тест.
Имммунопероксидазная
реакция
аналогична
методу
иммунофлуоресценции, но отличается тем, что для постановки реакции
используют антитела, меченные не флуорохромом, а ферментом, и учет
результатов реакции проводят не под люминесцентным микроскополм, а под
обычным световым. В этом варианте ИФА используют антитела, меченные
пероксидазой, так как ее молекулярная масса (40000) меньше, чем
молекулярная масса щелочной фосфотазы (100000) и галоактозидазы
(150000), что способствует лучшему проникновению пероксидазного
конъюгата сквозь клеточную мембрану. Кроме того, пероксидаза устойчива
при гистологической обработке.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 111 из 189
Материалом для выявления вирусспецифических антигенов или вирусов
могут служить: мазки-отпечатки различных органов, парафиновые срезы,
культура клеток, мазки крови. Для инактивации эндогкнной пероксидазы
применяют азид натрия в сочетании с перекисью водорода и фенилгидразин.
Обработку проводят перед нанесением иммуноферментного конъюгата на
препарат.
Иммунопероксидазную реакцию ставят в прямом и непрямом вариантах.
Прямой пероксидазный тест. Для выявления антигена используют
пртивовирусный конъюгат, т.е. конъюгат полученный из антител,
выделенных их специфической сыворотки, и фермент.
Конъюгаты
готовят
в
спейиализированых
учреждениях
биопромышленности.
Постановка реакции. Культуру клеток, инфицированную вирусом или
мазки-отпечатки в течении 10 мин фиксируют охлажденным до минус 10-20
С
ацетоном.
Высушивают.
Наносят
на
них
0,2-0,3
мл
иммунопероксидазного конъюгата в рабочем разведении, которое указано
на ампуле. Инкубируют 1-2 ч при 37С во влажной камере. Препарат в
течении 15 мин тщательно промывают физиологическим раствором,
споласкивают дистиллированной водой и высшивают на воздухе. Наносят на
него
несколько
капель
раствора
субстрата
–
диаминобензидинтетрахлорида, инкубируют 5-10 мин и промывают 10-15
мин в физиологическом растворе, споласкивают дистиллированной водой.
Положительный результат: т.е. при наличии антиген в исследуемом
препарате, после нанесения иммунопероксидазного конъюгата, образуется
комплекс антиген- антитело, меченный ферментом. После нанесения на
препарат раствора субстрата последний под действием фермента разлагается,
образуя цветной продукт ферментативной реакции, хорошо видный в
световой микроскоп.
Результаты
учитывают
с
помощью
светового
микроскопа.
Диаминобензидинтетрахлорид под действием пероксидазы разлагается,
образуя продукт голубого цвета, который быстро переходит в коричневый. В
препарате видны или диффузное желто-коричневое окрашивание, или
гранулы коричнево-черного цвета. В контрольных препаратах окрашивания
не обнаруживают.
1.2. Непрямой пероксидазный тест.
Непрямой иммунопероксидазный тест применяют для выявления
вирусспецифического антигена. При этом используют антивидовые
иммунопероксидазные конъюгаты, приготовленные в специалтзированных
учреждениях. Преимуществом непрямого метода является универсальность
меченных антивидовых глобулинов, а также большая чувствительность его
по сравнению с прямым.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 112 из 189
Постановка реакции. Культуру клеток, инфицированную вирусом или
мазки-отпечатки в течении 10 мин фиксируют охлажденным до минус 10-20
С ацетоном. Высушивают. Наносят на них 0,2-0,3 мл специфической к
искомому антигену сыворотки. Инкубируют 1-2 ч при 37С во влажной
камере. Препарат в течении 5 мин промывают физиологическим раствором,
и высушивают на воздухе. Наносят 0,2-0,3 мл антивидового
иммунопероксидазного конъюгата в рабочем разведении, указанном на
ампуле, и инкубируют при 37 С 1-6 ч. Далее следуют процедуры, котрые
были описаны для прямого метода.
Результат положительный. При наличии антигена в исследуемом
материале после внесения сыворотки образуется комплекс антиген-антитело,
для выявления которого используют антивидовые или вторичные антитела,
меченные ферментом; образуется более сложный, чем в первом случае,
комплекс: антиген-антитело –вторичное антитело – фермент. Полученный
комплекс выявляют добавлением субстрата, который под действием
фермента разлагается, образуя цветной продукт ферментативной реакции.
Учет также в световом микроскопе.
Иммунопероксидазная реакция в прямом и непрямом вариантах
используется для выявления вирусов бешенства, ящура, герпесвирусов,
энтеровирусов и др.
2. Методы твердофазного иммуноферментного анализа.
Методы твердофазного ИФА основаны на применении антител
(антигенов), фиксированных на нерастворимых носителях. В качестве
носителей используют стеклянные или нейлоновые шарики, полистироловые
или керамические пробирки и микропанели. В последнее время широкое
использование в ИФА получили полистироловые микропанели. Применение
их и автоматизация процесса постановки и учета реакции позволяют за
короткое время исследовать большое число образцов сывороток на наличие
антител и другого материала на наличие вирусспецифического антигена.
Твердофазный ИФА был предложен в 1971 г. E.Engvall с соавт. A.Schurrs
с соавт.
В твердофазном ИФА используют как пероксидазные, так и щелочнофосфатазные конъюгаты.
Для исследования большого числа образцов необходимо:
1. полистироловые микропанели с плоским дном
2. автоматические пипетки с переменным и постоянным объемом от 50 до
200 мкл,
3. промывочное устройство – автоматическое или полуавтоматическое
4. считывающее устройство
Анализ может быть выполнен на микропанелях и без перечисленных
выше приборов, т.е. визуально. Но в этом случае снижается
производительность.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 113 из 189
Для
выявления
вирусспецифического
антигена
в
различных
биологических жидкостях наиболее часто используют метод двойных
антител, или «сэндвич». Для этого лунки полистироловых микропанелий
сенсибилизируют гамма-глобулинам, выделенным из специфической к
исследуемому антигену сыворотки. Концентрацию гамма-глобулина
подбирают путем титрования, используя заведомо позитивный и
негативный антигены. Оптимальной концентрацией считается считается
такая, при которой уровень оптической плотности позитивных образцов в
5-10 раз превышает уровень оптической плотности негативных образцов.
Чаще всего используют концентрацию 10-30 мкг/мл.
Схема определения вирусспецифического антигена:
1. в лунки
микропанелий + 0,2 мл гамма глобулина в нужной
концентрации в натрий корбонатном буфере с рН 9,6.
2. Микропанели инкубируют в течении часа при 37С и оставляют на ночь
при 4 С.
3. наутро из лунок удаляют раствор глобулинов, микропанели
промывают 3 раза по 5 мин калийфосфатным буфером с рН 7,4
содержащим 0,05% твина-20.
4. в лунки вносят по 0.2 мл раствора, содержащего исследуемый антиген,
и инкубируют при 37 С 2 ч. В контрольные лунки вносят заведомо
положительный и отрицательный антигены
5. микропанели промывают, как в пп.3
6. в лунки вносят по 0,2 мл иммуноферментного конъюгата и панели
инкубируют 1-2 ч при 37С.
7. микропанели промывают, как в пп.3 и 5.
8. в лунки вносят по 0,2 мл раствора субстрата: ортофенилендиамина
(ОФД) или 5-аминосалициловой кислоты (для пероксидазы) и рнитрофенилфосфат (для щелочной фосфатазы). Инкубируют в темноте
при комнатной температуре 5-30 мин
9. реакцию останавливают добавлением 0,05 мл 2 н. серной кислотой
(для пероксидазы) и 3 М едкого натра (для щелочной фосфотазы)
10. реакцию учитывают визуально по разности в окраске опытных и
контрольных образцов или колориметрически при длине волны 490 нм
(для пероксидазы) или 405 нм (для щелочной фосфатазы).
При использовании субстрата ОФД положительные образцы имеют
оранжево-коричневую окраску, а при применении 5-аминосалициловой
кислоты опытные образцы окрашиваются в интенсивно коричневый цвет, в
то время как отрицательный контроль либо совсем не окрашен, либо
окрашен в слабо-желтый цвет. При использовании щелочной фосфатазы
опытные образцы окрашены в желтый цвет.
За положительный результат принимают превышение оптической
плотности опытных образцов над контрольными в 5-10 раз.
3. Автоматизация иммуноферментного теста.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 114 из 189
Результаты, получаемых с помощью ИФА, оценивают с помощью
спектрофотометрии, регистрируя процессы изменения концентрации
субстрата или продуктов ферментативной реакции. Измеряемым параметром
в этих случаях была или начальная скорость ферментативной реакции, или
конечная оптическая плотность продукта, образовавшегося за определенный
промежуток времени.
Фирмы «Дайнатек» (Швейцария и «Флоу» (Англия) выпускают
комплекты приборов для проведения иммуноферментного анализа на
полистироловых микропанелях. Основная часть комплектов – оснащенные
микрокомпьютерами вертикальные спектрофотометры, позволяющие
проводить измерение оптической плотности продукта ферментативной
реакции непосредственно в лунках микропанелий. Считывание результатов
96 анализов занимает всего 1 мин; измеряющие, промывающие и
дозирующие устройства указанных приборов позволяют проводить анализ
как в лабораториях, так и в полевых условиях.
Для
крупных
клинических
центров
разработаны
полностью
автоматизированные установки для проведения твердофазного ИФА, в
котором антигены (антитела) адсобционно фиксированы на поверхности
полистироловых пробирок. Данные системы, которые обслуживают 2
человека, позволяют анализировать до 4000 проб ежедневно.
При отсутствии специального оборудования учет результатов ИФА может
эффективно проводиться на струйных спектрофотометрах, флуориметрах,
фотоэлектрокаллориметрах. Достоверность результатов анализа при этом
несколько снижается и уменьшается число проб, которое могло бы быть
проанализировано за рабочий день.
3.Методическое указание к лабораторному занятию
Целевая установка: ознакомиться с методикой постановки и учета РИФ
(МФА) и ИФА
Материальное обеспечение: люминесцентный микроскоп, наборы
флюоресцирующих сывороток для демонстрации (листериозные, рожистые,
сибиреязвенные, бруцеллезные). Культуры микробов соответствующих
сывороток.
Таблицы: схема реакции иммунофлуоресценции, иммуноферментного
анализа.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.134-138.
Основные вопросы:
1. В чем заключается сущность серологических реакций?
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 115 из 189
2. Сущность метода флюоресцирующих антител.
3. Варианты МФА, их преимущества и недостатки. Техника постановки.
Учет и оценка реакции.
4. ИФА. Сущность метода. Техника постановки. Учет и оценка реакции.
На 2, 3, 4 вопросы составить конспект.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, уяснение сущности
серологических реакций, знакомство с особенностями иммуноферментного
анализа, иммунофлюоресцентного метода – прямого и непрямого.
Акцентирование внимания на преимуществе этого метода в экспресс
диагностике инфекционных болезней. Дается характеристика компонентов,
методики их приготовления и использования. Подведение итогов по
серологической диагностике инфекционных болезней и идентификации
микробных культур по антигенной структуре.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
Зарисовать схему вариантов метода флюоресцирующих антител,
иммуноферментного анализа.
Вопросы по модулю 3
Основы учения об инфекции и иммунитете
1. Культивирование аэробов и анаэробов.
2. Методы выделения чистой культуры.
3. Понятие о росте и размножении бактерий, бесполое и половое
размножение.
4. Характер роста микроорганизмов на плотных и жидких
питательных средах.
5. Определение ферментативной активности микроорганизмов.
6. Классификация изменчивости. Спонтанные и индуцированные
мутации.
7. Рекомбинации
бактерий.
Трансформация,
конъюгация,
трансдукция.
13.
Антибиотико-резистентность
микроорганизмов,
методы
определения чувствительности к антибиотикам.
14.Инфекция, инфекционный процесс, инфекционная болезнь.
15.Понятие о патогенности и вирулентности бактерий, методы
ослабления и усиления вирулентности.
16.Факторы вирулентности микроорганизмов. Инвазивные и
токсигенные свойства микроорганизмов.
17.Определение понятия иммунитет. Иммунная система и ее
функции.
18.Виды иммунитета.
19.Неспецифические факторы защиты.
20.Антигены бактериальной клетки, их основные свойства.
21.В чем заключается сущность серологических реакций?
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 116 из 189
22.Классификация, строение антител, место их образования, функции
антител.
23.Механизм взаимодействия антигена
и антитела. Практическое
использование серологических реакций.
24.Сущность реакций -РА , РП, РСК, РИФ.
25.Компоненты реакций.
26.Техника постановки серологических реакций.
27.Учет реакций.
ТЕМА № 18 Схема диагностики бактериальных инфекций
Целевая установка: усвоить методы диагностики инфекционных болезней.
Учебные пособия:
Таблицы: схема бактериологической диагностики инфекционных
болезней.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2.Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989
. Основные вопросы:
1. Бактериологическия диагностика
2. Серологическая диагностика
3. Аллергическая диагностика
Краткое содержание занятия: рассматривается каждый этап схемы
бактериологической диагностики
Самостоятельная работа:
Записать схему диагностики в альбом.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 117 из 189
СХЕМА БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ
ЗАБОЛЕВАНИЙ
1.Краткая характеристика заболевания (определение, какие виды животных
болеют, в каком возрасте, клинические признаки, патологоанатомические данные)
2. Название возбудителя (семейство, род, вид)
3. Методы диагностики
А) Бактериологическая диагностика
↓
правила взятия и пересылки патологического материала
для исследования
↓
↓
↓
Микроскопия
Выделение чистой культуры
Гр (-) (+)
Спора
Капсула
Жгутики
МФА
ПЦР
Питательные среды,
потребность
в кислороде, температура,
время культивирования
Биопроба
Вид лаборат-го
жив-го, метод
заражения, доза.
Сроки гибели.
↓
Идентификация
(определение видовой или типовой (вариантной) принадлежности микроорганизма
↓
1.Морфология
2.Тинкториальные свойства
9. Характер роста на питательных средах
10. Ферментативные (биохимические) свойства
11. Антигенные (серологические) свойства
12. Патогенные свойства
13. Фаготипирование
14. Токсигенные свойства
15. Антибиотикочуствительность
В) Серологическая диагностика
↓
РА, РСК, РП, РДСК, РС, РБП
↓
С) Аллергическая диагностика
↓
аллергены, методы введения, доза, учет
4. Иммунитет, средства специфической профилактики (вакцины, сыворотки - их
характеристика)
5. Лечение
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 118 из 189
ТЕМА №19
Патогенные кокки
(Staphilococcus aureus, Streptococcus egui, Str.mastitidis,
Str.pneumoniae)
Целевая установка: усвоить правила взятия и пересылки патологического
материала, ознакомиться со свойствами и методами идентификации
патогенных кокков, а также с методами дифференциации патогенных и
непатогенных стафилококков.
Материальное обеспечение: культуры стафилококков и стрептококков на
МПА и МПБ, кровяном агаре, желточно-солевом агаре. Стафилококки –
Staph. albus, Staph.citreus, Stahp. aureus. Готовые окрашенные мазки (по
Романовскому-Гимзе) – стафилококки в гное, мазки – отпечатки мытного
стрептококка и диплококка. Рост трех видов стафилококков на МПА в
чашках с дисками антибиотиков. Чашки с МПА – посев белого стафилококка
с трафаретами «свет» и «тень», обработанные ультрафиолетовыми лучами.
Каждому студенту – культуры стафилококка и стрептококка. Термостат.
Учебные пособия:
Таблицы: схема бактериологической диагностики инфекционных
болезней, схема изучения возбудителей стафилококковых и стрептококковых
инфекций, морфология кокковых форм, стафилококк в гное, мытный
стрептококк.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.142-156.
Основные вопросы:
1.
Общая характеристика стафилококков и стрептококков, их
распространение.
2.
Патогенные стафилококки и заболевания обуславливаемые ими.
3.
Факторы вирулентности стафилококков и методы их обнаружения.
4.
Дифференциация патогенных стафилококков от непатогенных.
5.
Особенности патогенеза кокковых заболеваний и роль фагоцитоза в
развитии стафилококковой инфекции.
6.
Характеристика
заболеваний,
вызываемых
патогенными
стрептококками – Streptococcus egui (мыт лошадей),Streptococcus mastitidis
(agalactiae) (мастит), Streptococcus pneumoniae (пневмококковая инфекция,
диплококковая септицемия).
7.
Характеристика
специфических
средств
профилактики
при
диплококковой септицемии, стафилококковых инфекциях (анавакцины –
механизм их действия). Иммунитет при стрептококковых и стафилококковых
заболеваниях.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 119 из 189
8.
На основании изучения основных вопросов по теме составить
схемы
бактериологических
диагнозов
стрептококковых
и
стафилококковых инфекций.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия. Знакомство с основными
культурально-морфологическими свойствами патогенных коков, методами
их дифференциации от непатогенных кокков. Демонстрация роста
стафилококков и стрептококков на питательных средах. Акцентирование
внимания на роли кокков в патологии и связи патогенности с наличием
ферментов – ДНК-азы, плазмокоагулазы, эндо-, экзотоксинов и методах их
обнаружения, на роли стрептококков как санитарно-показательных
микроорганизмов при определении загрязненности воздуха. Демонстрация
биопрепаратов (вакцин против диплококковой септицемии, стафилококковой
аутовакцины и анатоксина, сывороток).
Самостоятельная работа: ход выполнения.
Задание 1. Изучить морфологические и тинкториальные свойства
патогенных кокков.
Для этого приготовить мазки из стрептококковых и стафилококковых
культур, окрасить по методу Грама, микроскопировать, зарисовать.
Задание 2. Микроскопировать готовые препараты из гноя – мытный
стрептококк, стафилококки в гное.
По результатам оформить протокол.
ТЕМА № 20
Бруцеллы (Brucella abortus, Br. melitensis, Br. suis, Br. ovis, Br. neotome,
Br. canis) . Методы диагностики бруцеллеза
Целевая установка: ознакомиться с морфологическими и культуральнотинкториальными свойствами бруцелл, методами идентификации. Составить
схему микробиологической диагностики.
Материальное обеспечение:
1. Для демонстрации рост бруцелл на МПА и МПБ (вакцинный штамм 19
и 82).
2. Смыв бруцелл и белого стафилококка (взвесь в физрастворе) на каждое
рабочее место.
3. Набор реактивов и красок для окраски по Граму и Козловскому.
4. Микроскопы, бактериальные петли, предметные стекла, спиртовки.
5. Компоненты реакций РА, РСК, КР, РБП.
6. Демонстрация РА, РСК, КР, РБП.
7. Вакцины из штаммов 19, 82, РЕВ-1.
Учебные пособия:
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 120 из 189
Таблицы:
общая схема бактериологической диагностики, схема
диагностики бруцеллеза, серологические реакции (РА, РСК).
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С. 184-193.
Основные вопросы:
1. Краткая характеристика бруцеллеза и классификация бруцелл.
2. Особенности морфологических, культурально-тинкториальных свойств
бруцелл.
3. Методы идентификации чистой культуры.
4. Серологическая диагностика. Диагностические титры серологических
реакций для разных видов животных (РА, РСК, КР). Компоненты
реакций, их получение и контроль.
5. Аллергическая диагностика. Характеристика аллергена – бруцеллина.
6. Характеристика бруцеллезных вакцин (штаммы 19, 82, РЕВ-1)
7. Составить схему бактериологического диагноза бруцеллеза.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия. Знакомство с культуральноморфологическими, тинкториальными свойствами бруцелл, методами их
идентификации. Изучение роста бруцелл на питательных средах. Разбор
сущности и особенностей серологических методов исследования на
бруцеллез. Характеристика компонентов, их получение и контроль при
постановке РА (пробирочным методом), РСК, КР, РБП. Характеристика
бруцеллезного аллергена (бруцеллина). Демонстрация биопрепаратов.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
Задание. Изучить морфологические и тинкториальные свойства бруцелл.
Для этого приготовить мазки из смеси культур (бруцеллы и белый
стафилококк), окрасить по методу Грама (Козловскому), микроскопировать,
зарисовать.
По результатам оформить протокол.
ТЕМА №21
Морфология и биология возбудителя колибактериоза. Эшерихии.
методы диагностики эшерихиозов
Целевая установка: усвоить правила отбора и пересылки патологического
материала
в
лабораторию,
освоить
методику
проведения
бактериологического исследования патматериала (изучить тинкториальные,
морфологические, культуральные свойства эшерихий)
Материальное обеспечение: для демонстрации - культуры эшерихий и
сальмонелл на МПА и МПБ, на агаре Эндо, Левина, средах с углеводами
(среды Гисса); на МПА в чашках Петри с действием антибиотиков и
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 121 из 189
бактериофагов; набор сывороток для РА с культурой эшерихий. На каждый
рабочий стол культуру эшерихий по одной пробирке, стерильную чашку
Петри с МПА и набор антибиотиков.
Учебные пособия:
Таблицы:
общая схема бактериологической диагностики, схема
диагностики колибактериоза, антигенное строение кишечной палочки,
морфология и рост на среде Эндо кишечной палочки и сальмонелл,
дифференциация кишечной палочки от сальмонелл по ферментативным
свойствам.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С. 156-164.
Основные вопросы:
1. Общая характеристика бактерий рода эшерихий, их распространение,
культурально-морфологические совйства.
2. Характеристика антигенов и их значение при дифференциации.
3. Принципы
получения
и
применения
агглютинирующих
диагностических коли-сывороток.
4. Механизм действия и практическое применение коли-фага,
антибиотиков при колибактериозе.
5. Иммунитет при колибактериозе и факторы его обуславливающие
(вакцины).
6. Составить схему бактериологического диагноза колибактериоза.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, беседа по основным вопросам
темы - акцентировать внимание на распространении эшерихий в природе,
индикации прижизненной и посмертной, дифференциации патогенных
серотипов по биохимическим, антигенным, биологическим свойствам с
демонстрацией роста на дифференциально-диагностических средах (средах
Гиса, Эндо), серотипирования (РА на стекле) с типоспецифической Околисывороткой. Обратить внимание на гемолитические свойства и
колициногенность эшерихий и значение этих факторов в патогенезе колиинфекции, а также на их чувствительность к антибиотикам и бактериофагу.
Проведение аудиторной контрольной работы.
Самостоятельная работа: ход выполнения АКР.
Задание 1. Провести посев культуры эшерихий соответствующего
серотипа на МПА в чашке Петри. В чашку Петри с посевом расставить
диски, пропитанные антибиотиком, для определения чувствительности к
ним. (Результат учесть на следующем занятии).
Задание 2. Определить серотип культуры в РА на предметном стекле с
типоспецифическими сыворотками.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 122 из 189
Задание 3. Приготовить мазок из культуры эшерихий, окрасить по методу
Грама, микроскопировать, изучить морфологию, тинкториальные свойства,
зарисовать.
По результатам оформить протокол.
ТЕМА №22
Сальмонеллы (Salmonella). Методы диагностики сальмонеллезов
Целевая установка: усвоить правила отбора и пересылки патологического
материала в лабораторию, порядок и методику исследования его для
выделения и идентификации возбудителей сальмонеллезов.
Материальное обеспечение: для демонстрации - культуры эшерихий и
сальмонелл на МПА и МПБ, на агаре Эндо, Левина, средах с углеводами
(среды Гисса); на МПА в чашках Петри с действием антибиотиков и
бактериофагов; набор О-агглютинирующих сывороток для РА с культурой
сальмонелл и эшерихий; вакцины поливалентные сыворотки. На каждый
рабочий стол культуру сальмонелл по одной пробирке, стерильную чашку
Петри с МПА и набор антибиотиков.
Учебные пособия:
Таблицы:
общая схема бактериологической диагностики; схема
диагностики сальмонеллезов (паратифов); антигенное строение сальмонелл;
морфология и рост на среде Эндо кишечной палочки и сальмонелл;
дифференциация кишечной палочки от сальмонелл по ферментативным
свойствам; классификация сальмонелл по Кауфману-Уайту.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.164-170.
Основные вопросы:
1. Патологический
материал,
направляемый
для
диагностики
сальмонеллеза телят, поросят и овец.
2. Культурально-морфологические свойства сальмонелл. Характер роста
сальмонелл на средах Эндо, Плоскирева и висмут-сульфит-агаре.
3. Методы дифференциации сальмонелл от E.coli.
4. Антигенная структура сальмонелл, принцип их серологической
типизации.
5. Характеристика возбудителя сальмонеллеза(паратифа) телят.
6. Бактериологическая и серологическая диагностика сальмонеллеза
(пуллороза) птиц.
7. Патологический материал и бактериологическая диагностика
сальмонеллеза (паратифа) лошадей.
8. Составить схему бактериологического диагноза сальмонеллезов.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 123 из 189
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия. Знакомство с культуральнобиохимическими свойствами сальмонелл, с дифференциацией сальмонелл от
эшерихий. Демонстрация роста на МПА, МПБ, средах Гиса, агаре Эндо,
висмут-сульфит-агаре, бактоагаре Ж. Разбор дифференциальной схемы
сальмонелл по антигенным свойствам. Демонстрация РА на стекле с
паратифозными
агглютинирующими
сыворотками.
Основы
бактериологической диагностики сальмонеллезов. Серодиагностика с
характеристикой компонентов (антигены, антитела). Знакомство с
биопрепаратами – вакцинами, сыворотками, принципами их получения,
контроля, применения. Практическое- лечебное и диагностическое значение
сальмонеллезных фагов. Применение АБК,
ПАБК.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
Задание 1.Приготовить мазки из культур сальмонелл, окрасить по
Грамму, микроскопировать, определить морфологические и тинкториальные
свойства, зарисовать.
Задание 2. Определить видовую принадлежность культуры в РА с
типоспецифическими сыворотками (сальмонеллезной и эшерихиозной).
По результатам оформить протокол.
ТЕМА № 23
Возбудитель рожи свиней (Erysipelotrix rhusiopatiae). Листерии (Listeria
monocytogenes)
Целевая установка: ознакомить с правилами взятия, упаковки и пересылки
патологического материала. Изучить свойства возбудителей, методы
бактериологических и серологических исследований, дифференциацию
возбудителей.
Материальное обеспечение: культуры рожи свиней и листерии на МПА и
МПБ. Труп голубя или белой мыши, павшей от листериоза. Готовые мазки
(фиксированные) из крови голубя. Готовые мазки из культуры листерий.
Каждому студенту две пробирки с ростом культур на МПА – листерий и
возбудителя рожи.
Учебные пособия:
Таблицы:
общая схема бактериологической диагностики;
дифференциация возбудителя рожи от листерий; морфология возбудителей.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.170-178.
Основные вопросы:
1. Латинские наименования возбудителей.
2. Правила взятия и пересылки патологического материала для
бактериологического исследования его на рожу свиней и листериоз.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 124 из 189
3. Морфологические,
культуральные,
биохимические
свойства
возбудителей.
4. Критерии дифференциации возбудителей рожи свиней и листериоза.
5. Методы серологической идентификации возбудителей.
6. Биопроба.
7. Биопрепараты (вакцины и сыворотки), получение, контроль,
применение (принцип аттенуации при получении вакцин против рожи).
8. Составить схему бактериологического диагноза рожи свиней и
листериоза. В схеме отразить методы и цель дифференциации.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, беседа по основным вопросам
темы – разбор схемы бактериологического диагноза при эризипелотриксе и
листериозе, схемы дифференциации возбудителя рожи и листериоза.
Демонстрация роста возбудителей на плотных и жидких питательных средах
с одновременным сравнением роста листерий и возбудителя рожи. Обратить
внимание на получение, контроль и применение биопрепаратов при роже и
листериозе.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
Задание 1. Окрасить готовые мазки из культуры листерий по Грамму.
Микроскопировать. Изучить морфологические и тинкториальные свойства
возбудителя, зарисовать.
Задание 2. Изучить готовые препараты, приготовленные из крови трупов
голубей, павших от рожи и окрашенных по Романовскому-Гимзе.
Определить морфологические и тинкториальные свойства возбудителя.
Зарисовать.
По результатам оформить протокол.
ТЕМА №24
Пастереллы (Pasterella multocida). Возбудитель зооантропонозной
чумы (Yersinia pestis). Возбудитель псевдотуберкулеза (Yersinia
pseudotuberculosis)
Целевая установка: освоить правила отбора и пересылки патологического
материала для бактериологического исследования на пастереллез. Изучить
морфологические, культуральные и биохимические свойства возбудителя
пастереллеза. Ознакомиться с биопрепаратами, применяемыми для
специфической профилактики и лечения пастереллеза.
Материальное обеспечение: культуры пастерелл на МПА и МПБ суточные
и на МПБ – недельного возраста. Трупы голубей и мышей, павших от
пастереллеза. Готовые мазки из крови голубя, павшего от пастереллеза,
окрашенные по Романовскому-Гимзе. Вакцины, сыворотки против
пастереллеза различных видов животных и птиц.
Учебные пособия:
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 125 из 189
Таблицы: общая схема бактериологического диагноза; морфология
пастерелл.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С178-184.
Основные вопросы:
1.Особенности морфологии и тинкториальных свойств пастерелл.
2. Ферментативные свойства пастерелл.
3. Культуральные свойства пастерелл.
4. Значение биопробы в диагностике пастереллеза.
5. Схема бактериологического исследования на пастереллез.
6. Биопрепараты: вакцины, лечебно-профилактические сыворотки.
7. Составить схему бактериологического диагноза пастереллеза.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия. Разбор схемы диагностики:
акцентирование внимания на особенностях морфологической структуры,
тинкториальных, культуральных свойствах возбудителя, на биологических
особенностях пастерелл, восприимчивости лабораторных животных к
различным видам пастерелл, бактерионосительстве при пастереллезе.
Изучение биопрепаратов – вакцин, сывороток применяемых при
пастереллезе.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
Задание 1.
Вскрыть труп голубя или белой мыши, павших от
пастереллеза, отметить особенности патологоанатомических изменений.
Провести посев пастеровской пипеткой из органов (сердце, печень,
селезенка) на МПА и МПБ.
Задание 2. Приготовить мазки из культуры пастерелл с МПА, окрасить по
методу
Грама,
микроскопировать,
изучить
морфологические
и
тинкториальные свойства, зарисовать.
Задание 3. Изучить мазки, окрашенные по Романовскому-Гимзе.
Обратить внимание на полярное окрашивание пастерелл. Зарисовать.
По результатам оформить протокол.
ТЕМА № 25
Бацилла антракса. Методы диагностики сибирской язвы
(Bacillus anthracis)
Целевая установка: освоить правила взятия и пересылки патологического
материала для лабораторного исследования на сибирскую язву, изучить
методы микроскопического и серологического (РП) исследования
патологического материала на сибирскую язву.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 126 из 189
Материальное обеспечение: рост Bacillus anthracis и антракоидов (Bacillus
mesentericus, B.meghaterium, B.sereus, B.subtilis) на МПА, МПБ, МПА с
кровью, МПЖ. Труп белой мыши, павшей от антракса (вакцинный штамм).
Краски для окраски по методу Ольта ( на наличие капсулы). Посуда,
инструменты, компоненты для приготовления антигена для РП и ее
постановки. Стандартный сибиреязвенный антиген, преципитирующая
сибиреязвенная сыворотка, пробирки Уленгута, штатив для них. Воронки,
асбестовая вата, пастеровские пипетки. Демонстрация реакции преципитации
в агаровом геле. Биопрепараты – вакцины, сибиреязвенный гамма-глобулин,
сыворотки, люминесцирующие сибиреязвенные сыворотки. Культуры
Bacillus anthracis на МПА, препараты, окрашенные по методу Ольта, мазки с
феноменом «жемчужное ожерелье» для каждого студента.
Учебные пособия:
Таблицы: общая схема бактериологической диагностики; схема
бактериологической диагностики сибирской язвы; споры, капсулы
возбудителя сибирской язвы; край колонии Bacillus anthracis.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.193-201.
Основные вопросы:
1. Правила взятия патологического материала.
2. Методы бактериологической диагностики сибирской язвы.
3. Морфологические, тинкториальные и культуральные свойства Bacillus
anthracis.
4. Дифференцирование
Bacillus
anthracis
от
сапрофитных
спорообразующих аэробов.
5. Идентификация при помощи сибиреязвенного бактериофага. Феномен
«ожерелья».
6. Серологические методы (РП) обнаружения сибиреязвенного антигена в
исследуемом материале.
7. Биопрепараты, применяемые для профилактики и лечения.
8. Составить схему бактериологического диагноза сибирской язвы.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, беседа по основным вопросам
темы: акцентирование внимания на наличие непостоянных элементов у
возбудителя - споры и капсулы, их значение в диагностике. Изучение роста
возбудителя на МПА и МПБ. Дифференциация от антракоидов.
Демонстрация вскрытия трупа белой мыши, павшей от антракса, посева на
МПА и МПБ из органов, изготовления антигена горячим методом,
постановки реакции кольцепреципитации в пробирке Уленгута. Знакомство с
методом экспресс-диагностики сибирской язвы МФА.
Проведение
аудиторной контрольной работы.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 127 из 189
Самостоятельная работа: ход выполнения.
Задание 1. Изучить край колонии культуры Bacillus anthracis в
пробирке под микроскопом (увеличение на 8). Зарисовать край колонии.
Задание 2. Изучить готовый препарат из капсульного штамма,
окрашенный по методу Ольта. Найти капсулу (тело клетки окрашено в
розовый цвет, капсула в желтый цвет). Картину зарисовать.
Задание 3. Микроскопировать готовый мазок, приготовленный из
культуры Bacillus anthracis, выращенной на МПА с пенициллином. Изучить
феномен «ожерелье». Картину зарисовать.
Задание 4. Изучить биопрепараты – вакцины и сыворотки.
Приготовление, контроль, применение.
По результатам оформить протокол.
ТЕМА №26
Патогенные анаэробы. Возбудители эмкара, злокачественного отека,
ботулизма, столбняка
(Clostridium schauvoe, Cl. perfringens, Cl. septicum, Cl. hystoliticum, Cl.
oedematins, Cl. botulinum, Cl. tetani)
Целевая установка: усвоить правила отбора и пересылки патологического
материала
для
бактериологического
исследования,
изучить
морфологические,
культурально-биохимические
свойства
названных
возбудителей, особенности дифференциации.
Материальное обеспечение: труп морской свинки, павшей от эмкара. Рост
возбудителя эмкара на МППБ (среда Кита-Тароццы), среде Вильсона Блера,
молоке, кровяном агаре, трубках Виньона. Готовые мазки-отпечатки из
органов (Cl.schauvoe , Cl.septicum) и препараты из культур (Cl.tetani,
Cl.botulinum). МППБ и пастеровские пипетки для посевов из органов. Белые
мыши с картиной столбняка и ботулизма.
Учебные пособия:
Таблицы:
общая схема бактериологической диагностики; схема
бактериологической диагностики эмкара; рост на кровяном агаре;
дифференциация возбудителя эмкара Cl. schauvoe от Cl.septicum.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.201-218..
Основные вопросы:
1. Общая характеристика патогенных анаэробов (род Clostridium, род
Fusobacterium). Питательные среды и условия культивирования
анаэробов.
2. Патологический материал, направляемый для бактериологического
исследования на эмкар, злокачественный отек, ботулизм, столбняк.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 128 из 189
3. Возбудители злокачественного отека, их отличительные особенности.
4. Характеристика Cl.schauvoe , его дифференциация от Cl.septicum.
5. Токсинообразование. Значение и постановка реакции нейтрализации в
определении токсинов, образуемых патогенными клостридиями.
6. Принципы получения, контроля и применения вакцин и сывороток при
эмкаре и злокачественном отеке. Ассоциированные вакцины.
7. Возбудители столбняка и ботулизма, их свойства и отличительные
особенности. Характеристика анатоксина и антитоксина.
8. Составить
схему бактериологического диагноза эмкара,
злокачественного отека, столбняка и ботулизма.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, беседа по основным вопросам
темы - акцентирование внимания на синергидности анаэробных
возбудителей, изучение особенностей патогенеза и бактериологической
диагностики анаэробных инфекций. Демонстрация вскрытия трупа морской
свинки, посевов из органов, приготовления мазков-отпечатков. Знакомство с
биопрепаратами, особенности получения, контроля и применения.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
Задание 1. Микроскопировать готовые мазки – отпечатки из органов от
животных павших от эмкара и злокачественного отека. Изучить морфологию
возбудителей (Cl.schauvoe , Cl.septicum), тинкториальные свойства,
зарисовать.
Задание 2. Изучить морфологические свойства возбудителей (Cl.tetani,
Cl.botulinum) в готовых мазках, окрашенных по методу Грама. Обратить
внимание на сходство и различие возбудителей. Зарисовать.
По результатам оформить протокол.
ТЕМА № 27
Патогенные микобактерии. Возбудитель туберкулеза
(Mycobacterium tuberculosis, M. bovis, M. avium)
Возбудитель паратуберкулеза
(Mycobacterium paratuberculosis)
Целевая установка: ознакомиться с правилами взятия проб материала, его
упаковки и пересылки в лабораторию, с методами обработки (подготовки)
патматериала для бактериологического исследования. Усвоить методы
бактериологического анализа поступившего в лабораторию материала.
Разобрать аллергический метод диагностики туберкулеза.
Материальное обеспечение: для демонстрации - культура Micobacterium
bovis и 2-3 культуры представителей атипичных, сапрофитных микобактерий
на средах: Левенштейна-Йенсена, картофеле с глицерином, МПБ с
глицерином. Каждому студенту два мазка из культуры и патматериала,
краски и реактивы для окраски по Циль-Нильсену. Аллергены –
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 129 из 189
альттуберкулин, ППД-туберкулин для млекопитающих, ППД-туберкулин для
птиц, КАМ-туберкулин; вакцина – БЦЖ (ВCG).
Учебные пособия:
Таблицы:
общая схема бактериологической диагностики; схема
бактериологической диагностики туберкулеза; морфология микобактерий;
окраска по методу Циля-Нильсена; классификация микобактерий по Раньону;
дифференциальная диагностика микобактерий.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.218-227.
Основные вопросы:
1. Классификация микобактерий
2. Правила взятия патологического материала, его упаковки и пересылки
в лабораторию.
3. Морфологические, тинкториальные свойства
Mycobacterium
tuberculosis, M. bovis, M. avium
4. Питательные
среды для культивирования
микобактерий,
культуральные свойства и идентификация микобактерий туберкулеза.
5. Дифференциация вирулентных микобактерий от кислотоустойчивых
сапрофитов и атипичных форм туберкулезных микобактерий.
6. Особенности биопробы при диагностике туберкулеза и как
дифференцирующий критерий от возбудителя паратуберкулеза.
7. Методы диагностики туберкулеза.
8. Морфологические, тинкториальные и биологические особенности
возбудителя паратуберкулеза, его дифференциация от возбудителя
туберкулеза.
9. Составить схему бактериологического диагноза туберкулеза и
паратуберкулеза
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, беседа по основным вопросам
темы. Изучение классификации рода микобактерий. Акцентирование
внимания на роли отдельных представителей рода в патологии человека и
животных, птиц. Изучение культурально-морфологических, тинкториальных,
биохимических
свойств
патогенных,
атипичных,
сапрофитных
микобактерий. Объяснение причины кислото-спиртоустойчивости, сравнение
морфологических особенностей. Полиморфизм микобактерий. L-формы
микобактерий, их роль в патологии. Разбор принципов бактериологичекой и
аллергической диагностики туберкулеза. Разобрать принципы приготовления
аллергенов – туберкулинов, вакцин при туберкулезе. Акцентирование
внимания на парааллергических реакциях при аллергическом диагнозе.
Ознакомление с порядком проведения бактериологического исследования
(по таблице).
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 130 из 189
Самостоятельная работа: ход выполнения.
1.
Изучить характер роста микобактерий туберкулеза на плотных и
жидких питательных средах.
2.
Микроскопировать два готовых препарата, окрашенных по методу
Грама и по методу Циля-Нильсена. Изучить морфологию,
тинкториальные свойства. Зарисовать.
3.
Описать аллергены. Порядок их применения. Учет реакций.
ТЕМА № 28
Возбудители лептоспироза (Leptospira interrogans).
Кампилобактеры (Campilobacter fetus, Campilobacter jejuni,
Campilobacter sputorum, Campilobacter fecalis)
Целевая установка: ознакомиться с правилами взятия патматериала, его
пересылкой в лабораторию. Изучить морфологические, культуральные и
биологические свойства возбудителей. Усвоить методы бактериологического
и серологического исследований при диагностике лептоспироза и
кампилобактериоза.
Материальное обеспечение: культура лептоспир на среде Уленгута и
Терских. Культура вибрионов на полужидких средах. Готовые мазки
лептоспир, окрашенных по методу Гимза с тушью. Демонстрационный
препарат с живыми лептоспирами в микроскопе с темным полем. Вакцины,
сыворотки, антигены при лептоспирозе и кампилобактериозе.
Учебные пособия:
Таблицы:
общая схема бактериологической диагностики; схема
бактериологической диагностики лептоспироза и кампилобактериоза.
Морфология лептоспир. Строение лептоспир.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.229-235, 235-240.
Основные вопросы:
1. Правила взятия и пересылки патологического материала для
микробиологической
диагностики
лептоспироза
и
кампилобактериоза.
2. Возбудитель лептоспироза, его морфологическая, тинкториальная и
культуральная характеристика.
3. Особенности культивирования и микроскопирования лептоспир.
4. Методы серологической диагностики лептоспироза (РА, РМА),
кампилобактериоза, серологической идентификации лептоспир.
5. Антиген для серологических исследований при лептоспирозе.
6. Латинское
название
возбудителя
кампилобактериоза,
его
морфологические и культуральные особенности.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 131 из 189
Вакцины,
сыворотки,
применяемые
при
лептоспирозе
и
кампилобактериозе.
8. Составить схему бактериологического диагноза лептоспироза.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, беседа по основным вопросам
темы.
Разобрать
свойства
и
распространение
извитых
форм
микроорганизмов. Отразить их патогенетическую роль в патологии человека
и животных, а также методы дифференциации патогенных вибрионов и
лептоспир
от
сапрофитов.
Ознакомиться
с
культуральными,
морфологическими,
тинкториальными,
биохимическими
свойствами
патогенных вибрионов и вызываемыми ими заболеваниями. Обратить
внимание
на
дифференциацию
вибрионов.
Разобрать
схему
бактериологического
и серологического диагноза. Ознакомиться с
основными свойствами патогенных серовариантов лептоспир и методами их
индикации (РМА). Остановиться на особенностях взятия патологического
материала и его исследования. Проведение аудиторной контрольной работы.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
1.
Микроскопировать
готовые
бактериальные
препараты,
приготовленные из чистых культур лептоспир и кмпилобактеров.
Изучить морфологию. Зарисовать.
2.
Поставить РМА с культурой лептоспир и двумя сыворотками
различных антигенных групп (в пластинах). Поместить в термостат
на 60 мин при 37 град.С. Учесть результат, вынув пластину из
термостата. Из лунки каждого разведения сыворотки приготовить
препарат «раздавленная капля». Исследование начинать с
наибольшего
разведения
сыворотки
(наименьшей
его
концентрацией), микроскопировать в «темном поле». Видимую
картину записать в тетради.
Ознакомиться с биопрепаратами. Дать краткую характеристику
7.
ТЕМА № 29
Возбудители дерматомикозов и микотоксикозов
(Trichophyton, Microsporum, Favus, Aspergillus, Mucor)
Целевая установка: ознакомить студентов с правилами взятия материала
для исследования и методами микологического исследования на
дерматомикозы (трихофития, микроспория), кандидамикоз и плесневые
микозы.
Материальное обеспечение: культуры грибов (Trichophyton verrucosum,
Microsporum canis,Candida albicans) на средах Сабуро (Чапека или суслоагаре), патологический материал от животных, больных трихофитией и
микроспорией, препаровальные иглы, микологические крючки, предметные и
покровные стекла. Готовые бальзамированные препараты. Биопрепараты.
Учебные пособия:
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 132 из 189
Таблицы:
морфология грибов, схема бактериологической
диагностики микозов.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.248-258.
Основные вопросы:
1. Распространение патогенных грибов в природе и характеристика
заболеваний, вызываемых патогенными грибами.
2. Патологический материал для исследования на дерматомикозы.
3. Отличительные особенности разных родов дерматомицетов.
4. Возбудители кандидамикоза, аспергиллеза, их культивирование.
5. Патогенные свойства грибов рода Candida.
6. Принципы диагностики микозов.
7. Иммунитет при микозах. Средства специфической профилактики, их
характеристика.
8. Составить схему бактериологического диагноза трихофитии и
микроспории.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, беседа по основным вопросам
темы. Знакомство с морфологическими свойствами возбудителей
трихофитии и микроспории. Изучение демонстрационных препаратов.
Исследование
культуральных
свойств
возбудителей.
Изучение
биопрепаратов,
применяемых
при
дерматомикозах.
Изучение
морфологических и культуральных свойств возбудителя кандидамикоза.
Изучение схемы исследований при микозах. Акцентировать внимание на
особенности взятия материала для исследования. Проведение аудиторной
контрольной работы.
Самостоятельная работа: ход выполнения.
1.
Приготовить препараты методом «раздавленная капля» из
патматериала и культур грибов, вызывающих дерматомикозы.
Микроскопировать под объективом 40. Изучить морфологию.
Описать и зарисовать.
2.
По готовому препарату изучить морфологию возбудителя
кандидамикоза. Описать, зарисовать.
Возбудители микотоксикозов
(Stachybotrys alternans, Fusarium, Dendrodochium toxinum, Claviceps
purpurea)
Целевая установка: ознакомиться с правилами взятия материала для
исследования и методами лабораторной диагностики микотоксикозов.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 133 из 189
Материальное обеспечение: культуры грибов родов Stachybotrys, Fusarium,
Dendrodochium на агаре Чапека в чашках Петри; препаровальные иглы,
предметные и покровные стекла.
Учебные пособия:
Таблицы:
морфология грибов, схема бактериологической
диагностики микотоксикозов.
Учебники:
1. Скородумов Д.И., Родионова В.Б., Т.С.Костенко. Практикум по
ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.,2008.-224 с.
2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и
иммунологии. – М.,1989.- С.258-267.
Основные вопросы:
1. Основные отличия микозов от микотоксикозов.
2. Материал и порядок его исследования при микотоксикозах.
3. Возбудители микотоксикозов, их морфологические, культуральные
свойства.
4. Методы определения токсичности грибов.
5. Основные питательные среды для культивирования грибов при
диагностике микозов и микотоксикозов.
Краткое содержание занятия: назначение дежурного, закрепление
теоретического материала прошлого занятия, беседа по основным вопросам
темы. Знакомство с морфологическими свойствами возбудителей
микотоксикозов
(стахиоботриотоксикоза,
дендротохиотоксикоза,
фузариотоксикоза). Изучение демонстрационных препаратов. Исследование
культуральных свойств возбудителей. Изучение схемы исследований при
микотоксикозах.
Уяснить
сущность
токсико-биологического,
микологического и физико-химического исследования. Акцентировать
внимание на особенности взятия материала для исследования.
Самостоятельная работа:
1. Приготовить из культур грибов препараты «раздавленная капля», изучить
под микроскопом и зарисовать в тетради морфологию грибов.
2. Ознакомиться со свойствами грибов родов Stachybotrys, Fusarium,
Dendrodochium.
ТЕМА № 30
Второй рубежный контроль
Итоговое занятие. Компьютерное тестирование
Вопросы коллоквиума
1. Возбудитель мыта. Морфология и свойства возбудителя. Схема
диагностики заболевания.
2.
Возбудитель инфекционного мастита. Морфология и свойства
возбудителя. Схема диагностики заболевания.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 134 из 189
3.
Возбудитель диплококковой септицемии. Морфология и свойства
возбудителя. Схема диагностики заболевания
4.
Возбудитель
колибактериоза.
Морфология
и
свойства
возбудителя. Схема диагностики заболевания.
5.
Возбудители сальмонеллезов. Морфология и свойства возбудителя.
Схема диагностики заболевания.
6.
Возбудитель иерсиниоза. Морфология и свойства возбудителя. Схема
диагностики заболевания.
7.
Возбудитель рожи свиней. Морфология и свойства возбудителя. Схема
диагностики заболевания.
8.
Возбудитель листериоза. Морфология и свойства возбудителя. Схема
диагностики заболевания.
9.
Возбудители пастереллеза млекопитающих. Морфология и свойства
возбудителей. Схема диагностики заболевания.
10. микроорганизмов.
11.
Возбудитель пастереллеза (холеры) кур. Морфология и свойства
возбудителя. Схема диагностики заболевания.
12. Возбудитель туляремии. Морфология и свойства возбудителя. Схема
диагностики заболевания.
13. Возбудители бруцеллеза. Морфология и свойства возбудителей. Схема
диагностики заболевания.
14. Возбудитель инфекционного эпидидимита баранов. Морфология и
свойства возбудителя. Схема диагностики заболевания.
15. Возбудитель сибирской язвы. Морфология и свойства возбудителей.
Схема диагностики заболевания.
16. Возбудители злокачественного отека. Морфология и свойства
возбудителей. Схема диагностики заболевания.
17. Возбудитель эмфизематозного карбункула. Морфология и свойства
возбудителя. Схема диагностики заболевания.
18. Возбудитель столбняка. Морфология и свойства возбудителя. Схема
диагностики заболевания.
19. Возбудитель ботулизма. Морфология и свойства возбудителя. Схема
диагностики заболевания.
20. Возбудитель некробактериоза. Морфология и свойства возбудителя.
Схема диагностики заболевания.
21. Возбудитель анаэробной энтеротоксемии овей и коз. Морфология и
свойства возбудителя. Схема диагностики заболевания.
22. Возбудитель сапа. Морфология и свойства возбудителя. Схема
диагностики заболевания.
23. Возбудители туберкулеза млекопитающих. Морфология и свойства
возбудителей. Схема диагностики заболевания.
24. Возбудитель туберкулеза птиц. Морфология и свойства возбудителя.
Схема диагностики заболевания.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 135 из 189
25. Возбудитель паратуберкулезного энтерита крупного рогатого скота.
Морфология и свойства возбудителя. Схема диагностики заболевания.
26. Возбудитель лептоспироза. Морфология и свойства возбудителя. Схема
диагностики заболевания.
4 САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА ОБУЧАЮЩЕГОСЯ
4.1 Перечень тем рефератов
4.1.1 Особенности морфологии микроорганизмов: (2 неделя)
- риккетсии,
- хламидии,
- микоплазмы.
4.1.2 Влияние физических факторов на микроорганизмы (3неделя)
4.1.3 Влияние химических факторов на микроорганизмы (4неделя)
4.1.4 Влияние биологических (антибиотики и бактериофаги) факторов на
микроорганизмы (5неделя)
4.1.5 Экология микроорганизмов (6 неделя)
4.1.6 Распространение и роль микробов в природе (8неделя)
4.1.7 Биопрепараты, применяемые для диагностики инфекционных
заболеваний (9неделя)
4.1.8
Биопрепараты, применяемые для
профилактики и лечения
инфекционных заболеваний (10 неделя)
4.1.9 Возбудитель туляремии (11 неделя)
4.1.10 Возбудители кампилобактериоза (12 неделя)
4.1.11 Возбудители микотоксикозов (13 неделя)
Для выполнения реферативных тем слудует изучить методические
рекомендации к ним.
Примечание: при выполнении самостоятельной работы изучить
методические рекомендации к ним.
4.2 Вопросы экзамена
1. Основные формы бактерий. Размеры и единицы измерения.
2. Основные структурные компоненты бактериальной клетки: оболочка,
цитоплазма, нуклеоид.
3. Значение микроорганизмов в патологии животных, использование
полезных микроорганизмов в животноводстве, промышленности.
4. Строение актиномицет и плесневых грибов, их полезные свойства и
значение в патологии животных.
5. Принципы классификации и таксономии микроорганизмов.
6. Химический состав микроорганизмов
7. Ферменты микроорганизмов и их классификация по специфической
активности.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 136 из 189
8. Потребность прокариот в питательных веществах. Автотрофный и
гетеротрофный типы питания.
9. Механизм питания микробной клетки.
10. Классификация микроорганизмов по типу дыхания. Биологическая
сущность.
11. Понятие о росте и размножении бактерий. Бесполое и половое
размножение.
12. Питательные среды и требования предъявляемые к ним. Условия
культивирования микроорганизмов.
13. Фазы развития бактериальной популяции.
14. Способы размножения плесневых грибов и дрожжей.
15. Фенотипическая изменчивость бактерий (модификация, диссоциация).
16. Генотипическая изменчивость бактерий. Спонтанные и индуцированные
мутации.
17. Рекомбинационная
изменчивость:
трансформация,
трансдукция,
конъюгация.
18. Действие на микроорганизмы высоких и низких температур.
19. Действие химических веществ на микроорганизмы. Понятие о
бактериостатическом и бактерицидном действии.
20. Тест - микробы, используемые для оценки качества обеззараживания
животноводческих объектов.
21. Микроорганизмы продуценты антибиотиков. Механизм действия их на
бактериальную клетку.
22. Антибиотикорезистентность
микробов,
методы
определения
чувствительности к антибиотикам.
23. Микрофлора почвы. Патогенные микроорганизмы в почве.
24. Микрофлора воды. Патогенные бактерии в воде. Методика обнаружения.
25. Микрофлора воздуха животноводческих помещений
26. Микрофлора тела животных. Понятие о нормальной микрофлоре и ее
отрицательной функции на макроорганизм.
27. Микрофлора
молока
и
молочных
продуктов.
Патогенные
микроорганизмы в молоке и способы его обеззараживания.
28. Микрофлора преджелудков жвачных и ее участие в процессе
пищеварения.
29. Участие микроорганизмов в превращении азота: аммонификация,
нитрификация.
30. Характеристика спиртового, уксуснокислого, масляно-кислого брожений
и их возбудителей.
31. Роль микроорганизмов в превращении фосфора, серы, железа.
32. Типы взаимоотношений макро- и микроорганизмов.
33. Пути внедрения, локализация микроорганизмов в макроорганизме.
34. Понятие о сепсисе, бактеремии, токсемии.
35. Понятие о микробоносительстве, его значении в инфекционном
процессе.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 137 из 189
36. Понятие о патогенности и вирулентности микробов. Методы ослабления
и усиления вирулентности.
37. Определение понятий иммунитет, иммунная система. Их функции.
38. Формы иммунного реагирования: образование антител и антигенреактивных клеток.
39. Антигены бактериальной клетки, основные свойства.
40. Антитела, природа и функции антител.
41. Реакции антиген-антитело, используемые для идентификации микробов
и диагностики инфекционных болезней.
42. Виды иммунитета.
43. Понятие о естественной резистентности макроорганизма. Факторы
резистентности.
44. Возрастные особенности иммунологического статуса животных.
45. Биопрепараты. Биотехнологические основы производства. Принципы
контроля.
46. Стафилококки. Патогенные свойства, устойчивость.
47. Возбудитель мыта. Бактериологическая диагностика. Дифференциация.
48. Возбудитель диплококковой инфекции, морфологические свойства,
патогенность, биопрепараты.
49. Возбудитель
рожи
свиней.
Основные
морфологические
и
бактериологические свойства. Биопрепараты.
50. Возбудитель листериоза. Патогенные свойства. Устойчивость к низкой
температуре. Дифференциация от возбудителя рожи свиней.
Биопрепараты.
51. Возбудитель туберкулеза животных, общая характеристика рода
микобактерий.
52. Лабораторная диагностика туберкулеза животных.
53. Изменчивость микобактерий. Атипичные микобактерии и их роль в
патологии животных.
54. Аллергическая диагностика туберкулеза, аллергены и их характеристика.
55. Возбудитель актиномикоза.
56. Возбудитель сибирской язвы. Бактериологическая диагностика,
дифференциация от антрокоидов. Биопрепараты.
57. Возбудитель эмкара. Характеристика возбудителя. Биопрепараты.
58. Возбудители злокачественного отека.
59. Общая характеристика клостридиозов. Биопрепараты.
60. Возбудитель столбняка. Биопрепараты.
61. Возбудитель некробактериоза. Бактериологическая диагностика.
62. Возбудитель
ботулизма.
Токсинообразование.
Особенности
бактериологической диагностики. Биопрепараты.
63. Возбудитель колибактериоза, основные биологические свойства.
Бактериологическая диагностика, биопрепараты.
64. Возбудители сальмонеллеза телят. Бактериологическая диагностика.
Принципы дифференциации. Биопрепараты.
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 138 из 189
65. Возбудитель
пуллороза
птиц,
серологическая
диагностика.
Биопрепараты.
66. Возбудитель
кампилобактериоза,
особенности
морфологии
и
культивирования.
67. Возбудитель лептоспироза. Особенности морфологии. Серологическая
диагностика.
68. Возбудитель пастереллеза. Лабораторная диагностика. Биопрепараты.
69. Возбудитель бруцеллеза. Виды бруцелл, морфология и особенности
культивирования.
70. Серологическая и аллергическая диагностика бруцеллеза животных,
иммунитет и средства активной профилактики.
71. Возбудитель микоплазмозов животных, особенности морфологии.
Отличие микоплазм от Л – форм бактерий.
72. Патогенные риккетсии и хламидии, бактериологические особенности.
73. Аспергиллез, особенности диагностики грибковых заболеваний.
74. Возбудители микозов, вызываемых грибами. Материал для
лабораторных
исследований,
диагностика
и
специфическая
профилактика.
75. Микотоксикозы, характеристика наиболее известных токсикозов.
76. Микробиологические основы консервирования кормов.
77. Основоположники микробиологии (Л.Пастер, Р. Кох, И. Мечников, Д.
Ивановский)
78. Ветеринарная микробиология и ее задачи.
79. Характеристика вакцин, применяемых в ветеринарии.
4.2 Тестовые задания для первого рубежного контроля (Модуль1 и 2)
Модуль 1
Морфология и систематика
микроорганизмов
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 139 из 189
1. Первым увидел и описал микроорганизмы:
А) Гиппократ
В) Л. Пастер
С) А. Левенгук
D) Р.Кох
Е) И.И. Мечников
2.Основоположником физиологического этапа в развитии
А) Гиппократ
В) Л. Пастер
С) А. Левенгук
D) Д.И. Ивановский
Е) И.И. Мечников
микробиологии был:
3.Ученый доказавший, что причиной брожения и гниения являются микроорганизмы:
А) Р.Кох
В) Л. Пастер
С) С.Н. Виноградский
D) Д.И. Ивановский
Е) И.И. Мечников
4. Основоположник почвенной микробиологии:
А) Р.Кох
В) Л. Пастер
С) С.Н. Виноградский
D) Д.И. Ивановский
Е) И.И. Мечников
5. Явление фагоцитоза открыл:
А) П.Эрлих
В) Л. Пастер
С) Д. Ивановский
D) И. Мечников
Е) Н. Гамалея
6.Микроорганизмы, обладающие строгим внутриклеточным паразитизмом:
А) бациллы
В) риккетсии
C) актиномицеты
D) дрожжи
Е) стрептококки
7. Вирус был открыт:
А) Л.Пастером
В) Л. Пастером
С) Д. Ивановским
D) И. Мечниковым
Е) Р.Кохом
8. Три основные группы бактерий, подразделяющихся по форме
А) монококки, стрептококки, стафилококки
клеток:
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 140 из 189
В) кокки, бактерии, извитые
С) бактерии, бациллы, клостридии
D) вибрионы, спириллы, спирохеты
Е) стрептококки, бактерии, спириллы
9. К шаровидным формам бактерий относят:
А) клостридии
В) сарцины
С) вибрионы
D) бациллы
Е) стрептобактерии
10. Палочковидные бактерии:
А) сарцины
В) вибрионы
С) клостридии
D) аспергиллы
Е) актиномицеты
11. К извитым формам бактерий относят:
А) сарцины
В) вибрионы
С) клостридии
D) аспергиллы
Е) актиномицеты
12. Кокки, располагающиеся цепочкой:
А) диплобактерии
В) стрептобациллы
С) стрептококки
D) стафилококки
Е) сарцины
13. Бактерии, располагающиеся цепочкой:
А) диплобактерии
В) стрептобациллы
С) стрептококки
D) стафилококки
Е) сарцины
14. Микроорганизмы, располагающиеся в виде грозди винограда:
А) стрептобактерии
В) стрептобациллы
С) стрептококки
D) стафилококки
Е) сарцины
15. Сарцины после деления располагаются:
А) по одной клетке
В) по две клетки
С) цепочкой
D) пакетами
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 141 из 189
Е) скоплениями клеток
16. Стафилококками называют клетки, располагающиеся после деления:
А) по одной клетке
В) по две клетки
С) в виде цепочки
D) пакетами
Е) скоплениями клеток
17. Стрептококки расположены:
А) по одной клетке
В) по две клетки
С) в виде цепочки
D) пакетами
Е) скоплениями клеток
18.Попарно соединенные кокки:
А) тетракокки
В) диплобактерии
С) диплобациллы
D) диплококки
Е) стрептококки
19. Палочки с булавовидными утолщениями на концах:
А) бактерии
В) бациллы
С) коринебактерии
D) клостридии
Е) фузобактерии
20. Спирохеты имеют:
А) 5 завитков
В) более 5 завитков
С) менее 5 завитков
D) 1 завиток
Е) 2 завитка
21.Извитые бактерии:
А) сарцины
В) стрептококки
С) стрептобактерии
D) спириллы
Е) стафилококки
22. Вибрионы по форме напоминают:
А) точку
В) запятую
С) двоеточие
D) две запятые
Е) две точки
23. Бактерии с пучком жгутиков на одном полюсе:
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
А) Монотрихи
В) Лофотрихи
С) Перитрихи
D) Амфитрихи
Е) Атрихии
24. Бактерии со жгутиками по всей поверхности:
А) Монотрихи
В) Лофотрихи
С) Перитрихи
D) Амфитрихи
Е) Атрихии
25. Величина бактерий измеряется:
А) см
В) мм
С) нм
D) мкм
Е) Аْ
26. Бактерии без жгутиков:
А) Монотрихи
В) Лофотрихи
С) Перитрихи
D) Амфитрихи
Е) Атрихии
27.
Клетки со спорами:
А) стрептобациллы
В) стрептобактерии
С) диплобактерии
D) спирохеты
Е) стрептококки
28. Бактерии с пучками жгутиков на двух полюсах:
А) Монотрихи
В) Лофотрихи
С) Перитрихи
D) Амфитрихи
Е) Атрихии
29. Спора у бактерий предназначена для:
А) размножения
В) защиты от неблагоприятных факторов внешней среды
С) защиты от иммунных факторов макроорганизма
D) вирулентности
Е) патогенности
30. Бактерии, имеющие один жгутик:
А) лофотрихи
В) амфитрихи
С) монотрихи
Страница. 142 из 189
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
D) перитрихи
Е) атрихии
31. Жгутики бактерий образованы белком:
А) пилином
В) пептидогликаном
С) флагелином
D) желатиной
Е) нуклеопротеидом
32. В состав фимбрий бактерий входит белок:
А) пилин
В) пептидогликан
С) флагеллин
D) желатин
Е) нуклеопротеид
33. Под таксисом понимают способность бактерий:
А) расщеплять сахара
В) к направленным формам движения
С) к антагонизму
D) расщеплять белки
С) ориентироваться в магнитном поле
34. Половые-пили обеспечивают:
А) трансформацию
В) конъюгацию
С) трансдукцию
D) окрашивание
Е) обмен веществ
35. Подвижность бактерий определяют:
А) окраской по методу Циля -Нильсена
В) окрашиванием по методу Грама
С) методом раздавленная капля
D) пробой на редуктазу
Е) простым способом окрашивания
36. Бацилла от клостридии отличается:
А) размером клетки
В) наличием споры
С) отсутствием споры
D) наличием капсулы
Е) диаметром споры
37. Скопления бактерий, заключенные в общую капсулу:
А) стафилококки
В) стрептококки
С) зооглеи
D) макрофаги
Е) стрептобактерии
Страница. 143 из 189
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
38. Под цитоплазматической мембраной берут начало:
А) ворсинки
В) капсула
С) жгутики
D) эндоспора
Е) фимбрии
39. Орган движения бактерий:
А) ворсинки
В) капсула
С) жгутики
D) эндоспора
Е) фимбрии
40. Беспорядочно и с кувырканием движутся:
А) монотрихи
В) лофотрихи
С) амфитрихи
D) перитрихи
Е) атрихии
41. По прямой линии всегда передвигаются:
А) монотрихи
В) лофотрихи
С) амфитрихи
D) перитрихи
Е) атрихии
42. Самая подвижная бактерия:
А) кишечная палочка
В) холерный вибрион
С) сальмонелла
D) листерия
Е) лептоспира
43.Вращательно-спиральный тип движения характерен:
А) бактериям со жгутиками
В) спирохетам
С) сине-зеленым водорослям
D) миксобактериям
Е) атрихиям
44. Клетки, заключенные в общую капсулу:
А) адгезия
В) зооглея
С) аскоспоры
45. Капсулу образует:
А) азотобактер
В) кишечная палочка
С) бацилла
D) холерный вибрион
Страница. 144 из 189
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Е) сарцины
46. Скользящий тип движения наблюдается у:
А) перитрихов
В) вибрионов
С) спирохет
D) лептоспир
Е) миксобактерий
47. Реакция клеток на химическое вещество:
А) хемотаксис
В) фототаксис
С) аэротаксис
48. Реакция клеток на кислород:
А) хемотаксис
В) фототаксис
С) аэротаксис
49. Реакция клеток на свет:
А) хемотаксис
В) фототаксис
С) аэротаксис
50. Основу клеточной стенки микробной клетки составляет:
А) капсула
В) полипептид
С) липопротеид
D) пептидогликан
Е) нуклеопротеид
51.Постоянные элементы микробной клетки:
А) капсула, спора, нуклеоид
В) оболочка, цитоплазматическая мембрана
С) спора, жгутики, капсула
D) оболочка, цитоплазма, нуклеоид
Е) рибосома, плазмиды, цитоплазма
52. Непостоянные элементы микробной клетки:
А) капсула, спора, нуклеоид
В) оболочка, цитоплазматическая мембрана
С) спора, жгутики, капсула
D) оболочка, цитоплазма, нуклеоид
Е) рибосома, плазмиды, цитоплазма
53. Непостоянный компонент микробной клетки:
А) клеточная стенка
В) цитоплазма
С) нуклеоид
D) эндоспора
Е) рибосома
Страница. 145 из 189
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 146 из 189
54. Простой способ окрашивания препарата позволяет определить:
А) капсулу
В) строение
С) морфологию
D) тинкториальные свойства
Е) спору
55.В основе окрашивания капсул лежит явление:
А) протрава
В) метахромазия
С) таксис
D) люминесценция
Е) обесцвечивание спиртом
56. В процессе окрашивания спор применяют:
А) стерилизацию
В) дезинфекцию
С) метахромазию
D) протраву
Е) фламбирование
57. Различное окрашивание грамположительных и грамотрицательных бактерий
обусловлено:
А) строением клеточной стенки
В) строением внутренних структур клетки
С) размером клетки
D) содержанием углеводов
Е) наличием капсулы
58. Споры от вегетативных клеток отличаются:
А) особым составом белков клеточной стенки
В) органоидами
С) малым количеством свободной воды в цитоплазме
D) малым количеством связанной воды в цитоплазме
Е) малым количеством свободной воды в клеточной стенке
59. Термоустойчивость спор обусловлена:
А) особым составом белков клеточной стенки
В) наличием дипикалината кальция
С) особым составом липидов клеточной стенки
D) малым количеством свободной воды в цитоплазме
Е) образованием термоустойчивых ферментов
60. По методу Виртца окрашивают микробы:
A) Капсулообразующие
B) Спорообразующие
C) Кислотоустойчивые
D) Имеющие жгутики
E) Подвижные
61. Микроорганизмы, которые можно увидеть только с помощью электронного
микроскопа:
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 147 из 189
A) Бактерии
B) Вирусы
C) Грибы
D) Актиномицеты
E) Микоплазмы
62. Капсульные микроорганизмы:
A) Азотобактер
B) Цианобактерии
C) Микоплазмы
D) Риккетсии
E) Энтеробактер
63.Капсула у патогенных микробов:
A) Участвует в размножении
B) Служит энергетическим материалом
C) Выполняет защитную функцию
D) Повышает устойчивость к кислотам
E) Образуется во внешней среде
Таксономия, классификация, номенклатура
1. Основная номенклатурная единица бактерий:
А) класс
В) род
С) вид
D) семейство
Е) порядок
2. Наука, занимающаяся вопросами классификации, номенклатуры и идентификации
микроорганизмов:
А) таксономия
В) микробиология
С) биология
D) биотехнология
Е) морфология
3. Отнесение микроорганизмов к определенному таксону (виду) на основании конкретных
признаков, называется:
А) идентификация
В) дифференциация
С) классификация
D) нитрификация
Е) агглютинация
Совокупность микроорганизмов, имеющих единый генотип, сходных по
морфологическим и биологическим свойствам, способных вызывать специфические
процессы, определяется как:
А) клон
В) вид
С) смешанная культура
4
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 148 из 189
D) чистая культура
Е) штамм
5. Культура, полученная из одной клетки:
А) клон
В) вид
С) смешанная культура
D) чистая культура
Е) штамм
6. Микроорганизмы, выращенные на питательных средах в условиях лаборатории,
называют:
А) клоном
В) видом
С) смешанной культурой
D) культурой
Е) штаммом
7. За царством (regnum) следует:
А) вид (species)
В) род (genus)
С) семейство (familia)
D) секция (section)
Е) отдел (division)
8. За секцией (section) следует таксономическая категория:
А) вид (species)
В) род (genus)
С) семейство (familia)
D) класс (classis)
Е) отдел (division)
9. За отделом (division) следует:
А) вид (species)
В) род (genus)
С) семейство (familia)
D) секция (section)
Е) отдел (division
10. После семейства (familia) следует:
А) вид (species)
В) род (genus)
С) порядок (ordo)
D) секция (section)
Е) отдел (division)
11. За классом (genus) следует таксономическая категория:
А) вид (species)
В) порядок (ordo)
С) семейство (familia)
D) секция (section)
Е) отдел (division)
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 149 из 189
12. За порядком (ordo) следует:
А) вид (species)
В) род (genus)
С) семейство (familia)
D) секция (section)
Е) отдел (division)
13. За родом (genus) следует:
А) вид (species)
В) порядок (ordo)
С) семейство (familia)
D) секция (section)
Е) отдел (division)
14. Смесь неоднородных микроорганизмов, выделенная из исследуемого материала:
А) клон
В) вид
С) смешанная культура
D) чистая культура
Е) штамм
15. Культура одного и того же вида, выделенная из разных объектов и отличающаяся
незначительными изменениями свойств:
А) клон
В) чистая культура
С) смешанная культура
D) культура
Е) штамм
16.Культура микроорганизмов, состоящая из особей одного вида:
А) клон
В) вид
С) смешанная культура
D) колония
Е) чистая культура
17. Особей одного вида, отличающихся по антигенным признакам, называют:
А) сероваром
В) биоваром
С) фаговаром
D) патоваром
Е) подвидом
Дрожжи, плесневые грибы
1.Микроскопический гриб:
А) микрококки
В) спирохеты
С) сарцины
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
D) клостридии
Е) пеницилл
2. Леечная плесень:
А) аспергилл
В) пеницилл
С) мукор
D) актиномицеты
Е) молочная плесень
3. Кистевидная плесень:
А) аспергилл
В) пеницилл
С) мукор
D) актиномицеты
Е) молочная плесень
4.Основной способ размножения у плесневых грибов:
А) прямое деление
В) почкование
С) спорообразование
D) конъюгация
5. Головчатая плесень:
А) аспергилл
В) пеницилл
С) мукор
D) актиномицеты
Е) молочная плесень
6.Функция споры у микроскопических грибов:
А) размножения
В) защиты от неблагоприятных факторов внешней среды;
С) защиты от иммунных факторов макроорганизма;
D) вирулентности
Е) патогенности
7. Структурный основной элемент плесневых грибов:
А) спорангионосец
В) спорангий
С) гифы
D) конидии
Е) мицелий
8. У пеницилла в отличие от аспергилла септирован:
А) конидионосец
В) мицелий
С) гиф
D) спорангионосец
Е) спорангий
9. Орган плодоношения у мукора:
Страница. 150 из 189
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 151 из 189
А) конидионосец
В) мицелий
С) базидии
D) спорангионосец
Е) спорангий
10. Укажите признак общий для актиномицет и плесневых грибов:
А) наличие ворсинок
В) наличие жгутиков
С) отсутствие сформированного ядра
D) наличие мицелия
Е) отсутствие мицелия
11. Укажите признак, общий для бактерий и актиномицет:
А) наличие ворсинок
В) наличие жгутиков
С) отсутствие сформированного ядра
D) наличие мицелия
Е) отсутствие мицелия
12. Структурный компонент, имеющийся у дрожжей в отличие от
бактерий:
А) клеточная стенка
В) капсула
С) оформленное ядро
D) нуклеоид
Е) ворсинки
13. Наиболее распространенный способ вегетативного размножения дрожжей:
А) деление
В) спорообразование
С) конъюгация
D) почкование
Е) фрагментация
14. Кефирные грибки содержат:
А) бактерии
В) стрептококки и палочки
С) стрептококки, палочки, дрожжи
D) стрептококки, дрожжи
Е) стрептококки, палочки, вибрионы
15. Микроорганизмы, размножающиеся подобно плесневым грибам:
А) актиномицеты
В) бациллы
С) спирохеты
D) сарцины
Е) микобактерии
16. Микроорганизмы, большинство из которых способно превращать различные углеводы
в этиловый спирт и углекислый газ, на чем основано их использование:
А) вирусы
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 152 из 189
В) бактерии
С) дрожжи
D) плесневые грибы
Е) актиномицеты
Действие физических факторов на микроорганизмы
1. Сжатие протоплазмы и отделение ее от оболочки в результате потери воды:
А) плазмоптис
В) плазмолиз
С) диффузия
D) осмос
Е) тургор
2. Давление, создаваемое внутри клетки растворенными веществами:
А) плазмоптис
В) плазмолиз
С) диффузия
D) осмос
Е) тургор
3. Напряженное состояние клетки с нормальной концентрацией веществ:
А) плазмоптис
В) плазмолиз
С) диффузия
D) осмос
Е) тургор
4. Полое освобождение от микробов разнообразных объектов:
А) пастеризация
В) дезинфекция
С) асептика
D) антисептика
Е) стерилизация
5. Уничтожение микроорганизмов при помощи химических веществ:
А) пастеризация
В) дезинфекция
С) асептика
D) антисептика
Е) стерилизация
6. Предотвращение проникновения микроорганизмов в макроорганизм:
А) пастеризация
В) дезинфекция
С) асептика
D) антисептика
Е) стерилизация
7. Полное уничтожение патогенных микроорганизмов в объектах внешней среды:
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 153 из 189
А) тиндализация
В) стерилизация
С) дезинфекция
D) пастеризация
Е) автоклавирование
8. Обработка продукта при температуре ниже 100ْ С с последующим охлаждением:
А) тиндализация
В) стерилизация
С) дезинфекция
D) пастеризация
Е) автоклавирование
9. “Фламбирование”- это стерилизация:
А) текучим паром
В) паром под давлением
С) ультразвуком
D) пламенем
Е) кипячением
10. Дробная стерилизация на водяной бане:
А) тиндализация
В) стерилизация
С) дезинфекция
D) пастеризация
Е) автоклавирование
11. Автоклавирование-это стерилизация:
А) текучим паром
В) паром под давлением
С) ультразвуком
D) пламенем
Е) кипячением
12. Температурный оптимум для психрофилов:
А) 0-5ْ С
В) 5-10ْ С
С) 15-20ْ С
D) 35-45ْ С
Е) 50-60ْ С
13. Температурный оптимум для термофилов:
А) 0-5ْ С
В) 5-10ْ С
С) 15-20ْ С
Д) 35-45ْ С
Е) 50-60ْ С
14. Температурный оптимум для мезофилов:
А) 15-20ْ С
В) 25-30ْ С
С) 30-37ْ С
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 154 из 189
D) 40-45ْ С
Е) 50-70ْ С
15. “Лиофилизация” – это:
А) замораживание микробной культуры
В) высушивание микробной культуры из замороженного состояния под
С) высушивание жидкой микробной культуры под вакуумом
D) переход льда из твердого состояния в парообразное
Е) переход льда в жидкое состояние
вакуумом
16. В микробной клетке при воздействии высокой температуры происходит:
А) повреждение генома
В) денатурация белка
С) нарушение синтеза белка
D) изменения в рибосомах
Е) повреждение цитоплазмы
17. При воздействии ионизирующей радиации на микробную клетку происходит:
А) повреждение генома
В) денатурация белка
С) нарушение синтеза белка
D) изменения в рибосомах
Е) повреждение цитоплазмы
18. Микроорганизмы устойчивые к высокому гидростатическому давлению:
А) галофилы
В) сапрофиты
С) барофилы
D) мезофилы
Е) термофилы
19. В процессе пастеризации уничтожаются:
А) все микроорганизмы
В) все микроорганизмы, кроме вирусов
С) споровые формы микробов
D) вегетативные формы микробов
Е) микроорганизмы не уничтожаются
20. Микроорганизмы, устойчивые к высокому осмотическому давлению:
А) галофилы
В) сапрофиты
С) барофилы
D) мезофилы
Е) термофилы
21. При попадании бактерий в среду с высоким осмотическим давлением происходит:
А) гемолиз
В) плазмолиз
С) плазмоптис
D) анабиоз
Е) протеолиз
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 155 из 189
22. При попадании бактерий в среду с низким осмотическим давлением происходит:
А) гемолиз
В) плазмолиз
С) плазмоптис
D) анабиоз
Е) протеолиз
23. Организмы, нуждающиеся в факторах роста, называются:
А) прототрофы
В) ауксотрофы
С) метилотрофы
D) автотрофы
Е) гетеротрофы
24. Микроорганизмы, использующие в качестве источника энергии метан, называются:
А) ацидофилы
В) ауксотрофы
С) алкалофилы
D) метилотрофы
Е) прототрофы
25. Ацидофилы – это микроорганизмы растущие при:
А) добавлении 5% поваренной соли
В) рН 7,0-7,5
С) рН 5,0-5,5
D) рН 8,0-8,5
Е) рН 1,0-1,5
26. Экстремальные галофилы – это микроорганизмы, растущие при концентрации
поваренной соли:
А) 10-12%
В) 20-25%
С) 30-32%
D) 40-42%
Е) 50-52%
27. Оптимальная концентрация поваренной соли для галофилов:
А) 10-12%
В) 20-25%
С)30-32%
D) 40-42%
Е) 50-52%
28. Галофилы относятся к семейству:
А) Halobactetiaceae
В) Enterobacteriaceae
С) Bacillaceae
D) Micrococcaceae
Е) Mycobacteriaceae
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 156 из 189
29. Оптимальное значение рН для алкалофильных микроорганизмов:
А) 5-6
В) 7-8
С) 9-10
D) 10-11
Е)11-12
30. Миксотрофия это способ питания бактерий с использованием:
А) органических веществ и углекислоты
В) белков и витаминов
С) углекислоты и витаминов
D) углеводов и микроэлементов
Е) органических веществ и витаминов
31. Паратрофами называют:
А) факультативные анаэробы
В) факультативные паразиты
С) облигатные анаэробы
D) облигатные паразиты
Е) облигатные аэробы
32. Прототрофы – это:
А) микробы, нуждающиеся в факторах роста
В) микробы, не нуждающиеся в факторах роста
С) микробы со смешанным типом питания
D) облигатные паразиты
Е) факультативные паразиты
33. Эубактерии отличаются от архебактерий:
А) отсутствием клеточной стенки
В) наличием клеточной стенки
С) отсутствием пептидогликана
D) наличием пептидогликана
Е) наличием белка флагелина
34. Микроорганизмы, растущие при давлении (1,0 -3,5) ∙ 10 7, называются:
А) баротолерантными
В) барофилами
С) облигатными барофилами
D) факультативными барофилами
Е) облигатными галофилами
35. Набухание клетки вплоть до разрыва ее оболочки за счет притока воды:
А) плазмоптис
В) плазмолиз
С) диффузия
D) осмос
Е) тургор
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 157 из 189
Модуль 2
Физиология микроорганизмов (химический состав, питание микроорганизмов)
1. Основной компонент бактериальной клетки:
А) белки
В) углеводы
С) вода
D) жиры
Е) макроэлементы
2. Раздел микробиологии, изучающий химический состав, процессы питания, дыхания,
рост и размножение микроорганизмов, называется:
А) морфология
В) физиология
С) генетика
D) селекция
Е) инфекция
3. Ведущие органогены микробной клетки:
А) кислород, азот, углерод, фосфор
В) кислород, азот, натрий, углерод
С) кислород, азот, углерод, водород
D) кислород, фосфор, углерод, водород
Е) азот, углерод, водород
4. Вода в микробной клетке составляет:
А) 20%
В) 40%
С) 60%
D) 80%
Е) 100%
5. Сухое вещество в микробной клетке составляет:
А) 20%
В) 40%
С) 60%
D) 80%
Е) 100%
$$$6
Ферменты, катализирующие окислительно-восстановительные реакции, называются:
А) оксидоредуктазы
В) трансферазы
С) гидролазы
D) лиазы
Е) изомеразы
7. Ферменты, катализирующие перенос отдельных радикалов, частей молекул или целых
атомных группировок от одних соединений к другим, называются:
А) оксидоредуктазы
В) трансферазы
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 158 из 189
С) гидролазы
D) лиазы
Е) изомеразы
8. Ферменты, катализирующие отщепление от субстратов определенных химических
групп с образованием двойных связей, называются:
А) оксидоредуктазы
В) трансферазы
С) гидролазы
D) лиазы
Е) изомеразы
9. Ферменты, осуществляющие превращение органических соединений в их изомеры,
называются:
А) оксидоредуктазы
В) трансферазы
С) гидролазы
D) лиазы
Е) изомеразы
10. Ферменты, катализирующие реакции расщепления и синтеза сложных соединений с
участием воды, называются:
А) оксидоредуктазы
В) трансферазы
С) гидролазы
D) лиазы
Е) изомеразы
11. Ферменты, катализирующие синтез сложных органических соединений из простых
веществ, называются:
А) оксидоредуктазы
В) трансферазы
С) гидролазы
D) лигазы
Е) изомеразы
12. Оптимальная температура для действия ферментов:
А) 30-40ْ С
В) 40-50ْ С
С) 60-70ْ C
D) 70-80ْ С
Е) 20-30ْ С
13. Как называются микроорганизмы, обладающие способностью усваивать углерод из
углекислого газа воздуха и из органических соединений?
А) миксотрофы
В) аутотрофы
С) гетеротрофы
D) сапрофиты
Е) паразиты
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 159 из 189
14. Микроорганизмы, обладающие способностью усваивать углерод из
газа воздуха, называются:
А) миксотрофы
В) аутотрофы
С) гетеротрофы
D) сапрофиты
Е) паразиты
15. Микроорганизмы,
соединений:
А) миксотрофы
В) аутотрофы
С) гетеротрофы
D) метанотрофы
Е) хемотрофы
углекислого
усваивающие углерод, главным образом, из органических
16. Микроорганизмы, обладающие способностью усваивать углерод из мертвых
органических соединений:
А) миксотрофы
В) аутотрофы
С) гетеротрофы
D) сапрофиты
Е) паразиты
17. Микроорганизмы, получающие энергию в результате окисления неорганических
субстратов:
А) хемотрофы
В) аутотрофы
С) гетеротрофы
D) фототрофы
Е) паразиты
18. Микроорганизмы, использующие световую энергию для построения органических
веществ своего тела:
А) хемотрофы
В) аутотрофы
С) гетеротрофы
D) фототрофы
Е) паразиты
19. Микроорганизмы, питающиеся за счет других организмов:
А) миксотрофы
В) аутотрофы
С) гетеротрофы
D) сапрофиты
Е) паразиты
20. Основным источником азотного питания у аутотрофов являются:
А) соли азота
В) аминокислоты
С) белки
D) пептоны
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 160 из 189
Е) сахара
Питательные среды для микробов
1.Бактерии, колонии которых имеют соответствующий цвет:
А) выделяют токсины
В) растут на МПА
С) образуют пигменты
D) растут на МПБ
Е) образуют антибиотики
2. Дифференциально-диагностическая среда:
А) Китта-Тароцци
В) Гисса
С) МПБ
D) Чапека
Е) бульон Хоттингера
3. Для культивирования анаэробов применяется:
А) среда Китта-Тароцци
В) среда Гисса
С) МПБ
D) среда Чапека
Е) бульон Хоттингера
4. Среды для культивирования анаэробов:
A) Левина
B) МПА
C) Кровяной агар
D) Гисса
E) МПЖ
5.Для культивирования плесневых грибов используется среда:
А) Китта-Тароцци
В) Гисса
С) МПБ
D) Чапека
Е) бульон Хоттингера
Практические вопросы по физиологии микроорганизмов
1. Сахаролитические свойства бактерий определяют на:
А) средах Гисса
В) мясопентонном агаре
С) мясопентонном желатине
D) среде Левенштейна-Иенсена
Е) среде Сабура
2. Протеолитические свойства бактерий определяют на среде:
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 161 из 189
А) Гисса
В) мясопентонном агаре
С) мясопентонном желатине
D) Левенштейна-Иенсена
Е) Сабура
3. Цвет индикаторной бумаги, при расщеплении белков до сероводорода:
А) синий
В) желтый
С) черный
D) розовый
Е) оранжевый
4. Цвет индикаторной бумаги, при расщеплении белков до индола:
А) синий
В) желтый
С) черный
D) розовый
Е) оранжевый
5. При протеолитической активности микроорганизмов – желатин:
А) свертывается
В) разжижается
С) изменяет цвет
D) выпадает в осадок
Е) остается без изменений
Роль микроорганизмов в превращении веществ в природе
Круговорот азота
1 Разрушение азотистых соединений с образованием аммиака:
А) брожение
В) фиксация азота
С) нитрификация
D) денитрификация
Е) аммонификация
2. Восстановление нитратов до молекулярного азота:
А) брожение
В) фиксация азота
С) нитрификация
D) денитрификация
Е) аммонификация
3. Превращение микроорганизмами нитритов в нитраты:
А) брожение
В) фиксация азота
С) нитрификация
D) денитрификация
Е) аммонификация
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 162 из 189
4. Превращение газообразного азота в формы, доступные растениям:
А) брожение
В) фиксация азота
С) нитрификация
D) денитрификация
Е) аммонификация
5. Под нитрификацией понимают:
А) превращение нитратов в нитриты
В) превращение аммиака в нитраты
С) восстановление нитратов до молекулярного азота
D) превращение нитритов в нитраты
Е) разрушение азотистых соединений с образованием аммиака
6. Денитрификация – это:
А) превращение нитратов в нитриты
В) превращение аммиака в нитраты
С) восстановление нитратов до молекулярного азота
D) превращение нитритов в нитраты
Е) разрушение азотистых соединений с образованием аммиака
7. Аммонификация - это:
А) превращение нитратов в нитриты
В) превращение азота в нитраты
С) восстановление нитратов до молекулярного азота
D) превращение нитритов в нитраты
Е) разрушение белков с образованием аммиака
8. Бактерии рода Azotobacter и Clostridium имеют большое значение как:
A) фиксаторы азота
B)денитрификаторы
C) возбудители порчи продуктов
D)нитрификаторы
E) аммонификаторы
9. Симбиотические азотфиксаторы:
A) Asotobacter
B) Clostridium
C) Bacillus
D) Rhisobium
E) Nitrococcus
10. Нитрагин – это:
A) удобрение с большим содержанием "S"
B) фосфорное удобрение
C) азотное удобрение
D) органическое удобрение
E) компост
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 163 из 189
Генетика и селекция
микроорганизмов
1. Обмен генетической информации у бактерий при трансформации происходит путем:
А) поглощения из среды свободного фрагмента ДНК
В) передачи ДНК с помощью бактериофага
С) передачи ДНК с помощью экзотоксина
D) передачи ДНК с помощью эндотоксина
Е) непосредственного контакта
2. Обмен генетической информации у бактерий при трансдукции происходит путем:
А) поглощения из среды свободного фрагмента ДНК
В) передачи ДНК с помощью бактериофага
С) передачи ДНК с помощью экзотоксина
D) передачи ДНК с помощью эндотоксина
Е) непосредственного контакта
3. Диссоциация культуры – это:
А) изменение патогенных свойств микроба
В) изменение ферментативных свойств
С) изменение токсигенных свойств
D) изменение редуцирующих свойств
Е) переход из одной формы колонии в другую
4. Колицины это белковые вещества:
А) подавляющие рост и размножение чувствительных к ним бактерий
В) вызывающие гемолиз эритроцитов
С) вызывающие расщепление клетчатки
D) вызывающие расщепление глюкозы
Е) подавляющие рост и размножение Е. coli
5. Передача ДНК донора клетке-реципиенту при конъюгации происходит при:
А) участии бактериофага
В) непосредственном контакте
С) помощи плазмиды
D) участии нуклеоида
Е) участии экзотоксина
6. Биосинтез белка происходит на:
А) митохондриях
В) нуклеоиде
С) ДНК
D) РНК
Е) рибосомах
7.Что является функциональной единицей наследственности:
А) ДНК
В) мРНК
С) тРНК
D) ген
Е) геном
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 164 из 189
8. Изменения в структуре генома, происходящие в одной паре нуклеотидов называются:
А) точечные мутации
В) мутации абберации
С) рекомбинации
D) инверсия
Е) трансформация
9. Изменения в структуре генома, происходящие в двух и более пар нуклеотидов
называются:
А) точечные мутации
В) мутации абберации
С) рекомбинации
D) инверсия
Е) трансформация
10. Разворот нуклеотидной последовательности в ДНК на 180 градусов называется:
А) точечная мутация
В) мутация абберация
С) рекомбинация
D) инверсия
Е) трансформация
Микрофлора почвы, воды и воздуха
1. ОМЧ воздуха в помещениях в летнее время:
А) 1500;
В) 2500;
С) 3500;
D) 4500;
Е) 5500.
2. ОМЧ воздуха в помещениях в зимнее время:
А) 1500;
В) 2500;
С) 3500;
D) 4500;
Е) 5500.
3. Какой микроорганизм является санитарно-показательным для воздуха жилых
помещений?
А) дрожжи
В) плесневые грибы
С) гемолитический стрептококк
D) кишечная палочка
Е) картофельная палочка
4. Седиментационный метод используют для определения:
А) коли-титра
В) коли-индекса
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 165 из 189
С) общего микробного числа воды
D) общего микробного числа почвы
Е) общего микробного числа воздуха
5. Коли-индекс – это количество:
А) кишечных палочек в 1 л воды
В) кишечных палочек в 333 мл воды
С) микроорганизмов в единице объема
D) кишечных палочек в 1 мл воды
Е) патогенных бактерий в 1 л воды
6. Что такое коли-титр?
А) наименьшее количество воды, в котором обнаруживается хотя бы один патогенный
микроорганизм
В) количество кишечных палочек в 1 л воды
С) наименьшее количество воды, в котором нет кишечной палочки
D) наименьшее количество субстрата, в котором обнаружена кишечная палочка
Е) количество кишечных палочек, обнаруживаемых в определенном объеме исследуемого
субстрата
7. При определении коли-индекса используют посев на среду:
А) МПА
В) Эндо
С) МПБ
D) МППЖ
Е) Китта-Тароцци
8. Санитарно-показательными называют микроорганизмы, обитающие:
А) на поверхности тела человека и животных
В) в толстом и тонком кишечнике животных и человека
С) в естественных полостях человека и животных в большом количестве
D) в верхних дыхательных путях человека и животных
Е) в большом количестве в почве, воде, воздухе
9. Назовите санитарно-показательный микроорганизм для воды:
A) кишечная палочка
B) протей
C) сальмонелла
D) гемолитический стрептококк
E) клостридия
10. Санитарно-показательным микроорганизмом для почвы является:
A) кишечная палочка
B) протей
C) сальмонелла
D) гемолитический стрептококк
E) клостридия
Серологические реакции
1. Серологическая реакция с дополнительным компонентом:
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 166 из 189
А) РСК
В) РБП
С) РА
D) КП
Е) РДП
2. Серологическая реакция, которая ставится на предметном стекле:
А) РСК
В) КП
С) ИФА
D) РДСК
Е) РБП
3. Реакция, в которой комплекс антиген-антитело светится:
А) РСК
В) КП
С) ИФА
D) МФА
Е) РБП
4. В этой реакции меткой является фермент:
А) РСК
В) ПЦР
С) ИФА
D) МФА
Е) РБП
5. ИФА – реакция положительная на 4 креста:
А) Желтое окрашивание
В) Желто-коричневое окрашивание
С) Оранжево-коричневое окрашивание
D) Слабо-желтое окрашивание
Е) Интенсивно-коричневое окрашивание
6. Лимитирующий фактор в ИФА:
А) Комплемент
В) Гемолизин
С) Испытуемая сыворотка
D) Антиглобулин
Е) Антиген
7. Реакция, в которой используются эритроциты барана:
А) РСК
В) РБП
С) РА
D) КП
Е) РДП
8 . Лимитирующий фактор в РСК:
А) Комплемент
В) Гемолизин
С) Испытуемая сыворотка
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 167 из 189
D) Антиглобулин
Е) Антиген
9. Склеивание специфических антигенов с антителами происходит в:
А) РСК
В) МФА
С) РА
D) ИФА
Е) РДП
10. Задержка гемолиза в РСК:
А) Реакция положительная
В) Реакция отрицательная
11. Гемолиз в РСК:
А) Реакция положительная
В) Реакция отрицательная
12 . Учет РА: выраженный зонтик, надосадочная жидкость прозрачная:
А) ++++
В) +++
С) ++
D) +
Е) –
ИНФЕКЦИЯ
1. Эритроциты барана в присутствии гемолизина и комплемента:
А)
В) Светятся
С) Осаждаются
D) Склеиваются
Е) Лизируются
2. Реакция Асколи:
А) РБП
В) МФА
С) РСК
D) РА
Е) РКП
3. Симбиоз, при котором оба симбионта – хозяин и микроб – получают
взаимную выгоду:
А) мутуализм
В) комменсализм
С) паразитизм
D) антагонизм
Е) эктосимбиоз
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 168 из 189
4. Симбиоз, при котором один из симбионтов живет за счет другого, не
причиняя ему вреда:
А) мутуализм
В) комменсализм
С) паразитизм
D) антагонизм
Е) эктосимбиоз
5. Симбиоз, при котором один из симбионтов живет за счет другого, при этом
причиняет ему вред:
А) мутуализм
В) комменсализм
С) паразитизм
D) антагонизм
Е) эктосимбиоз
6. Симбиоз клубеньковых бактерий с бобовыми растениями характеризуется
типичным:
А) мутуализмом
В) комменсализмом
С) паразитизмом
D) антагонизмом
Е) эктосимбиоз
7. Взаимоотношение симбионтов, при котором происходит смена микробов в
одной и той же среде:
А) паразитизм
B) метабиоз
C) синергизм
D) мутуализм
E) сателлизм
8. При каком взаимоотношении один из микробов стимулирует рост другого
микроорганизма?
А) паразитизм
B) метабиоз
C) синергизм
D) мутуализм
E) сателлизм
9. Микробная ассоциация, в которой усиливаются физиологические функции
ее членов:
А) паразитизм
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 169 из 189
B) метабиоз
C) синергизм
D) мутуализм
E) сателлизм
10. Микроорганизмы, не обладающие свойством вызывать заболевания:
А) ауксотрофы
B) прототрофы
C) паратрофы
D) сапрофиты
E) паразиты
11. Микроорганизмы, обладающие свойством вызывать заболевания:
А) ауксотрофы
B) прототрофы
C) паратрофы
D) сапрофиты
E) паразиты
12. Состояние
макроорганизма, при котором развивается комплекс
эволюционно сложившихся биологических реакций взаимодействия
макроорганизма и патогенных микроорганизмов:
А) микробоносительство
В) иммунизирующая субинфекция
С) инфекция
D) инфекционная болезнь
Е) инфекционный процесс
13. Состояние макроорганизма, при котором происходит иммунологическая
перестройка, и образуются антитела, называется:
А) микробоносительство
В) иммунизирующая субинфекция
С) инфекция
D) инфекционная болезнь
Е) инфекционный процесс
14. Зараженность макроорганизма, не сопровождающееся иммунологической
перестройкой, называется:
А) микробоносительство
В) иммунизирующая субинфекция
С) инфекция
D) инфекционная болезнь
Е) инфекционный процесс
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 170 из 189
15. Внедрение, размножение и распространение микроба в организме и его
реакция на микроорганизм, определяется как:
А) микробоносительство
В) иммунизирующая субинфекция
С) инфекция
D) инфекционная болезнь
Е) инфекционный процесс
16. Какая форма инфекции проявляется клиническими признаками?
А) инфекционная болезнь
В) микробоносительство
С) вирусоносительство
D) иммунизирующая субинфекция
Е) ремиссия
17. Ферменты, подавляющие защитные силы организма:
А) Гиалуронидаза
В) Дегидрогеназа.
С) Оксидаза
D) Лактаза
Е) Фруктаза
18. Факторы, обуславливающие вирулентность бактерий:
А) Эндоспора
В) Эндотоксины
С) Пептидогликан
D) Пили
Е) Цитоплазматическая мембрана
19. Функция капсулы у патогенных микробов:
А) Обеспечивает питание
В) Дыхание
С) Патогенность
D) Вирулентность
Е) Устойчивость в среде
20. Промежуток времени от момента проникновения микроорганизма в
макроорганизм до появления первых признаков болезни, называется:
А) инкубационный период
В) продромальный период (период предвестников)
С) клинический период
D) исход болезни
Е) выздоровление
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 171 из 189
Иммунитет
1. Способность сыворотки крови подавлять рост микроорганизмов:
А) бактерицидная активность сыворотки
В) опсоно-фагоцитарная реакция
С) фагоцитоз
D) защитно-адаптационный механизм
Е) ингибиторы вирусов в сыворотке крови
2. Способ защиты макроорганизма от тел и веществ, несущих признаки
генетической чужеродности:
А) гиперчувствительность замедленного типа
В) гиперчувствительность немедленного типа
С) иммунологическая толерантность
D) иммунитет
Е) иммунологическая память
3.Центральный орган иммунной системы:
А) селезенка
В) лимфатический узел
С) кровь
D) печень
Е) костный мозг
4. Периферический орган иммунной системы:
А) костный мозг
В) селезенка
С) макрофаги
D) лимфоциты
Е) тимус
5. Гуморальный фактор неспецифической защиты:
А) Т- лимфоциты
В) пропердин
С) эритроциты
D) макрофаги
Е) слезная жидкость
6. Иммунитет, когда в организме возбудителя нет:
A) гуморальный
B) местный
C) стерильный
D) клеточный
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 172 из 189
E) приобретенный
7. Иммунитет, обусловленный выработкой антител:
А) генетический
В) клеточный
С) местный
D) стерильный
Е) гуморальный
8. Теорию фагоцитоза создал:
A) Пастер
B) Мечников
C) Левенгук
D) Кох
E) Эрлих
9. Колостральный иммунитет формируется:
А) молозивом
B) введением вакцин
C) прохождением антител через плаценту
D) введением сывороток
E) введением крови
10. Клетки тормозящие образование антител:
А) Т-киллеры
B) Т-хелперы
C) Т-супрессоры
D) О-лимфоциты
E) NK- нормальные киллеры
11. Антитела вырабатываются клетками:
А) фагоцитарными
B) лимфоидными
C) плазматическими
D) макрофагами
E) эпителиальными
12. Центральный лимфоидный орган иммунной системы
А) селезенка
B) печень
C) тимус
D) сердце
E) почки
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 173 из 189
13. Активный иммунитет формируется после введения:
А) гипериммунной сыворотки
B) антибиотиков
C) аллергенов
D) вакцины
E) лизоцима
14. Гуморальную теорию иммунитета выдвинул:
А) Эрлих
B) Пастер
C) Кох
D) Дженнер
E) Мечников
15. Впервые метод предупреждения оспы среди людей путем заражения
коровьей оспой разработал:
A) Дженнер
В) Пастер
С) Мечников
D) Бернет
Е) Кох
16. Иммунитет, который передается через яйцо:
А) колостральный
B) трансовариальный
C) трансплацетарный
D) поствакциональный
E) молозивный
17. Прививки против бешенства разработал:
А) Кох
B) Пастер
C) Дженнер
D) Мечников
E) Левенгук
18. Пассивный иммунитет обусловлен введением:
А) вакцин
B) гипериммунных сывороток
C) антибиотиков
D) аллергенов
E) бактериофагов
19. Центральный лимфоидный орган иммунной системы у птиц:
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 174 из 189
А) селезенка
B) печень
C) бурса
D) тимус
E) почки
20. После естественного переболевания формируется иммунитет:
А) активный постинфекционный
B) активный поствакцинальный
C) приобретенный пассивный
D) врожденный
E) клеточный
21. Анатомофизиологический фактор естественной защиты:
А) пропердин
B) комплемент
C) слюна
D) лизоцим
E) интерферон
22. Стволовые клетки:
А) вырабатывают антитела
B) участвуют в фагоцитозе
C) предшественники лимфоцитов
D) представлены Т-лимфоцитами
E) состоят из В-лимфоцитов
23. Периферический лимфоидный орган иммунной системы
А) тимус
B) печень
C) сумка Фабрициуса
D) лимфоузел
E) красный костный мозг
24. Препарат для создания активного иммунитета:
A) аллергены
B) антибиотики
C) вакцины
D) гипериммунные сыворотки
E) дезинфектанты
25. Клетки, продуцирующие антитела:
A) стволовые
B) плазмоциты
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 175 из 189
C) нейтрофилы
D) базофилы
E) макрофаги
26. Клеточные факторы неспецифической защиты:
А) лизоцим
В) макрофаги
С) эритроциты
D) тромбоциты
Е) желчь
27. Основной функциональный элемент микро- и макрофагов:
А) фагосомы
В) адгезия
С) митохондрии
D) лизосомы
Е) рибосомы
28. Распознавание «своего» и «чужого» обеспечивает:
А) фагоцитоз
В) гомеостаз
С) пиноцитоз
D) хемотаксис
Е) фототаксис
29. Принцип создания вакцин из микробов с ослабленной вирулентностью
сформулировал:
А) Бернет
B) Пастер
C) Дженнер
D) Мечников
E) Левенгук
30. Центральной фигурой иммунной системы является:
А) нейтрофил
В) лейкоцит
С) эритроцит
D) лимфоцит
Е) макрофаг
4.4 Тестовые задания для второго рубежного контроля (Модуль 3 и 4)
ЧАСТНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
042-14-4-03.01.20.03/03-2008 Редакция №2
Возбудители кокковых инфекционных
болезней
1.Какому из перечисленных видов
стафилококков принадлежит основная
роль в инфекционной патологии
животных и человека?
А) Staph. aureus
В) Staph. epidermidis
С) Staph. saprophyticus
D) Staph. albus
Е) Staph. citreus
2.В
патогенезе
стафилококковых
процессов ведущая роль принадлежит:
А)
эндотоксинам
и
ферментам
патогенности
В)
экзотоксинам
и
ферментам
патогенности
С) агрессинам
D) образованию корд-фактора
Е) образованию капсулы
3.Укажите
тест,
подтверждающий
принадлежность
стафилококковой
культуры к патогенному штамму:
А) реакция нейтрализации
В) реакция агглютинации
С) реакция плазмокоагуляции
D) САМР (КАМП) - метод
Е) реакция связывания комплемента
4.Укажите фермент являющийся одним
из наиболее важных и постоянных
критериев патогенности стафилококков:
А) фибринолизин
В) гиалуронидаза
С) ДНК-аза
D) лецитовителаза
Е) коагулаза
5.S. aureus в отличие от других видов
стафилококков ферментирует:
А) галактозу
В) сахарозу
С) лактозу
D) маннит
Е) сорбит
6.
Современная
классификация
стрептококков
основывается
на
определении:
стр. 176 из 189
А) антигенной структуры
В) токсинообразования
С) тинкториальных свойств
D) патогенности
Е) культуральных свойств
7. Возбудителя мыта лошадей открыл:
А) Л.Пастер
В) Щютц
С) Т.Бильрот
D) А.Огстон
Е) Ф.Фелейзен
8. Назовите гноеродный стрептококк:
А) Str. lactis
В) Str. pneumoniae
С) Str. egui
D) Str. agalactiae
Е) Str. pyogenes
9.
Морфологический
характерный
для
диплококковой инфекции:
А) палочковидный микроб
В) подвижный
С) образует спору
D) образует капсулу
Е) стрептобактерии
признак
возбудителя
10. Возбудитель инфекционного мастита
относится к:
А) Стафилококкам
В) Сарцинам
С) Диплококкам
D) Стрептококкам
E) Микрококкам
11.Возбудителем мыта лошадей является:
A) Str.agalactiae
B) Str.equi
C) Str.pneumoniae
D) Str.pyogenes
E) Str.faecies
12.Возбудитель мастита коров:
А) Str.agalactiae
В) Str.equi
С) Str.pneumoniae
D) Str.pyogenes
E) Str.faecies
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
13. Возбудитель диплококковой
септицемии:
А) Str.agalactiae
В) Str. lactis
С) Str.pneumoniae
D) Str.pyogenes
E) Str.faecies
14.Назовите непатогенный стрептококк:
А) Str.faecies
В) Str.equi
С) Str.pyogenes
D) Str.agalactiae
E) Str. lactis
15. (САМР) КАМП – метод применяют
для дифференциации:
А) гноеродного стрептококка от других
стрептококкков
В) пневмонийного стрептококка от
других стрептококков
С) мытного стрептококка от других
стрептококков
D) агалактийного стрептококка от
стафилококков
E) агалактийного стрептококка от других
стрептококов
16. Назовите патогенный стафилококк:
А) Staph. roseus
В) Staph.citreus
С) Staph. albus
D) Staph. aureus
E) Staph. saprophyticus
Возбудитель колибактериоза
17. Возбудитель колибактериоза:
А) Salmonella dublin
В) Enterobacter
С) Escherichia blatta
D) Escherichia coli
Е) Citrobacter
18.
Антигены
колибактериоза:
А) О; К; Н
В) О; Н
С) О
D) О; К
Е) А; В; N
возбудителя
Страница. 177 из 189
19.Дифференциально-диагностической
средой для выявления E.coli является:
А) среда Плоскирева
В) среда Чапека
С) среда Сабуро
D) среда Китта-Тароцци
Е) среда Левенштейна-Иенсена
20.Возбудителя колибактериоза впервые
выделил:
А) Сальмон
В) Т.Эшерих
С) Леффлер
D) Д' Эррель
Е) Гертнер
21. В какой реакции изучают антигенную
структуру возбудителя колибактериоза?
А) РП
В) РА
С) РСК
D) ИФА
Е) МФА
22. Специальная питательная среда для
культивирования
возбудителя
колибактериоза:
А) Левенштейна- Йенсена
В) Чапека
С) МПА
D) Эндо
Е) Китта-Тароццы
23. На какой среде проводят
дифференциацию E. coli?
А) Эндо
В) Козера
С) Симмонса
D) Кесслер
Е) Эйкмана
24. Дифференциация эшерихий от
сальмонелл основана на ферментации:
А) сахарозы
В) маннита
С) глюкозы
D) лактозы
Е) фруктозы
25. Какой углевод входит в состав среды
Эндо?
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
А) сахароза
В) маннит
С) глюкоза
D) лактоза
Е) фруктоза
26. Какой углевод входит в состав среды
Левина?
А) сахароза
В) маннит
С) глюкоза
D) лактоза
Е) фруктоза
27. Какой углевод входит в состав среды
Плоскирева?
А) сахароза
В) маннит
С) глюкоза
D) лактоза
Е) фруктоза
28. Какого цвета колонии образует E. coli
на среде Эндо?
А) вишнево-красного
В) бледно-розового
С) бесцветного
D) сине-черного
Е) розового
29.Возбудитель колибактериоза
относится к:
A) Амфитрихам
B) Монотрихам
C) Лофотрихам
D Перитрихам
E) Атрихам
Возбудитель сальмонеллеза
30.Какого цвета колонии образует
сальмонелла на среде Эндо?
А) вишнево-красного
В) бледно-розового
С) бесцветного
D) сине-черного
Е) розового
31. Дифференциально-диагностическая
среда для культивирования сальмонелл:
А) среда Эндо
Страница. 178 из 189
В) среда Чапека
С) среда Сабуро
D) среда Китта-Тароцци
Е) среда Левенштейна-Иенсена
32.Антигенная структура сальмонелл
представлена:
А) О-, К-, Н-антигенами
В) О-,Н-антигенами
С) О-антигеном
D) О-, К-антигенами
Е) А-, В-, N-антигенами
33. В какой реакции изучают антигенную
структуру возбудителя сальмонеллеза?
А) РП
В) РА
С) РСК
D) ИФА
Е) МФА
34. Какой вид сальмонелл не обладает
подвижностью?
А) S.enteritidis
В) S.typhimurium
С) S.dublin
D) S.pullorum
Е) S.cholerasuis
35. Какой из перечисленных видов
вызывает сальмонеллез у птиц?
А) S.enteritidis
В) S.typhimurium
С) S.dublin
D) S.pullorum
Е) S.cholerae suis
36. В честь какого ученого дано название
возбудителю сальмонеллеза?
А) С.С. Андриевского
В) Л. Пастера
С) Т. Эшериха
D) Сальмона
Е) Р. Коха
37. Почему на среде Эндо сальмонеллы
образуют бесцветные колонии?
А) расщепляют глюкозу
В) расщепляют лактозу
С) нерасщепляют лактозу
D) нерасщепляют маннит
Е) нерасщепляют желатин
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 179 из 189
Е) колиьактериоз жеребят
38. Что лежит в основе серологической
классификации сальмонелл?
А) ферментативная активность
В) антигенная структура
С) гемолитическая активность
D) антибиотикочувствительность
Е) культуральные свойства
39. Возбудитель сальмонеллеза является:
А) монотрихом
В) амфитрихом
С) лофотрихом
D) атрихом
Е) перитрихом
40.Возбудителем сальмонеллеза жеребят
чаще является:
А)S.gallinarum
B) S.anatum
C) S.infantis
D) S.abortus egui
E) S.dublin
41. Возбудителем сальмонеллеза мышей
является:
А)S.gallinarum
B) S.abortus ovis
C) S.typhimurium
D) S.abortus egui
E) S.cholerae suis
42. На среде Левина сальмонеллы
образуют колонии:
А) красные с металлическим блеском
В) прозрачные с голубоватым оттенком
С) черного цвета
D) прозрачные с розовым оттенком
Е) безцветные
43. На висмут-сульфитном агаре
сальмонеллы растут в виде колоний:
А) красных с металлическим блеском
В) прозрачных с голубоватым оттенком
С) черного цвета
D) прозрачных с розовым оттенком
Е) безцветных
44.S.dublin вызывает:
А) сальмонеллез телят
В) колибактериоз телят
С) сальмонеллез ягнят
D) сальмонеллез жеребят
45. На среде Эндо и Левина
культивируют:
А) микобактерии туберкулеза
В) бруцеллы
С) стрептококки
D) стафилококки
Е) кишечную палочку
Возбудитель пастереллеза
40. В мазках из крови при окраске по
Романовскому-Гимзе пастереллы:
А) Гр(-) палочки
В) палочки с обрубленными концами
С) Гр(+) палочки
D) имеют вид стрептобактерий
Е) имеют вид биполяров
41. Возбудитель антропозоонозной чумы:
А) Yersinia pseudotuberculosis
В) Yersinia pestis
С) Yersinia enterocolitica
D) Pasterella multocida
Е) Erysipelotrix insidiosa
42. Отметьте морфологическую
особенность пастерелл:
А) Образуют споры
В) Образуют капсулы
С) Имеют жгутики
D) Длинная грубая палочка
E) Диплококк
Возбудитель РОЖИ СВИНЕЙ
43. Какие методы серологической
диагностики используют при постановке
диагноза на рожу свиней?
А) РП и РСК
В) РСК и РГА
С) РА и МФА
D) РБП и РДП
E) РНГА и РСК
44. Назовите дифференцирующий
признак возбудителя рожи свиней от
листериоза
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
А) подвижность в молодой культуре
В) образование сероводорода
С) проба на каталазу
D) конъюнктивальная проба на морских
свинках
E) ферментация салицина
45. При каком течении рожи свиней в
мазках из пораженных клапанов сердца
обнаруживают длинные переплетающися
нити?
А) сверхостром
В) подостром
С) остром
D) хроническом
E) септическом
46. Возбудитель рожи свиней
культивируют на средах:
А) общеупотребительных
В) специальных
С) дифференциально-диагностических
D) элективных
E) селективных
47. Возбудитель рожи свиней относится к
роду:
А) Bactertum
В) Borrelia
С) Mycobacterium
D) Clostridium
E) Erysipelothrix
48. От каких болезней следует
дифференцировать рожу свиней?
А) классической чумы
В) африканской чумы
С) листериоза
D) дизентерии
E) атрофического ринита
49. В каком возрасте чаще болеют свиньи
рожей?
А) до 3 мес.
В) от 3 мес до 1 года
С) старше 1 года
D) в любом возрасте
E) болеют только свиноматки
50. Возбудитель рожи свиней:
А) Erysipelotrix suis
В) Bacillus anthracis
Страница. 180 из 189
С) Mycobacterium avium
D) Listeria monocytogenes
Е) Brucella suis
51. Возбудитель рожи
морфологии является:
А) кокком
В) бациллой
С) бактерией
D) стрептобактерией
Е) вибрионом
свиней
по
52. По типу дыхания рожистая палочка:
А) аэроб
В) факультативный анаэроб
С) анаэроб
D) микроаэрофил
Е) макроаэрофил
53. Какой признак отличает возбудителя
рожи свиней от листериоза?
А) подвижность
В) неподвижность
С) наличие споры
D) отсутствие споры
Е) палочковидная форма
54. Кто открыл возбудителя
свиней?
А) Кох и Пастер
В) Поллендер и Пастер
С) Тюилье и Пастер
D) Тюилье и Кох
Е) Брюс
Возбудитель листериоза
рожи
55. По морфологии возбудитель
листериоза:
A) Полиморфная подвижная палочка с
закруглёнными концами
B) Стрептобактерия с обрубленными
концами
C) Капсульный диплококк
D) Тонкая зернистая палочка с
обрубленными концами
E) Коккобактерия
56. Возбудитель листериоза необходимо
дифференцировать от:
A) Бруцеллёза
B) Рожи свиней
C) Сальмонеллёза
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
D) Кишечной палочки
E) Лептоспироза
57. Возбудителем листериоза является:
А) Erysipelotrix suis
В) Bacillus anthracis
С) Mycobacterium avium
D) Listeria monocytogenes
Е) Brucella suis
58. Кто открыл возбудителя листериоза?
А) Листер
В) Пастер
С) Кох
D) Гюльферс
Е) Пири
59. Листерии это:
А) стрептококки
В) стрептобактерии
С) бактерии
D) спириллы
Е) спирохеты
60. В мазках отпечатках
располагаются в виде:
А) цепочек
В) диплобактерий
С) скоплений
D) частокола
Е) пакетов
Страница. 181 из 189
63. Какой из перечисленных
микроорганизмов относится к
возбудителю бруцеллеза?
А) Erysipelotrix suis
В) Bacillus anthracis
С) Mycobacterium avium
D) Listeria monocytogenes
Е) Brucella suis
64. Бруцелла, вызывающая бруцеллез у
крупного рогатого скота:
А) Br.melitensis
В) Br.abortus
С) Br.suis
D) Br.canis
Е) Br.neotome
65. Бруцелла, выделенная от свиней:
А) Br.melitensis
В) Br.bovis
С) Br.suis
D) Br.canis
Е) Br.neotome
листерии
61.
Какие
колонии
формирует
возбудитель листериоза на МПА:
А) в виде поверхностной пленки
В) сухие бородавчатые
С) серовато-белые шероховатые
D) золотисто-желтые
Е) прозрачные росинчатые
Возбудитель бруцеллеза
62. Назовите возбудителя бруцеллеза
наиболее опасного для человека:
А) Brucella canis
В) Brucella neotome
С) Brucella melitensis
D) Brucella suis
Е) Brucella ovis
66. Возбудитель бруцеллеза мелкого
рогатого скота:
А) Brucella melithensis
В) Brucella abortus
С) Brucella ovis
D) Brucella suis
E) Brucella canis
67.
Какой
метод
окрашивания
используют для обнаружения бруцелл в
мазках-отпечатках?
А) Циль-Нильсена
В) Грама
С) Ольта
D) Козловского
Е) Павловского
68. В честь какого ученого назван
возбудитель бруцеллеза?
А) Брюс
В) Сальмон
С) Эшерих
D) Андриевский
Е) Листер
69. Возбудитель бруцеллёза по
морфологии относится к:
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
A) Бациллам
B) Микрококкам
C) Коккобактериям
D) Диплококкам
E) Спириллам
70. Основной метод диагностики
бруцеллёза при массовых исследованиях:
A) Бактериологический
B) Бактериоскопический
C) Серологический
D) Биологический
E) Аллергический
71. Что такое бруцеллин?
А) Сухая живая вакцина
B) Противобруцеллёзный бактериофаг
C) Аллерген
D) Иммунная сыворотка
E) Жидкая инактивированная вакцина
72. Вакцину из штамма 82 против
бруцеллёза применяют для иммунизации:
A) Овец и коз
B) Всех видов животных
C) Свиней
D) Лошадей
E) Крупного рогатого скота
73. Возбудитель инфекционного
эпидидемита овец:
А) Brucella melithensis
В) Brucella abortus
С) Brucella ovis
D) Brucella suis
E) Brucella canis
74. Возбудитель бруцеллеза собак:
А) Brucella melithensis
В) Brucella abortus
С) Brucella ovis
D) Brucella suis
E) Brucella canis
75. Диагностический титр агглютининов
при бруцеллезе у КРС, лошадей и
верблюдов:
A) 1:25
В) 1:50
С) 1:100
D) 1:200
Е) 1:400
Страница. 182 из 189
76. Диагностический титр агглютининов
при бруцеллезе у овец, коз, буйволов,
оленей и собак:
A) 1:25
В) 1:50
С) 1:100
D) 1:200
Е) 1:400
77. Назовите реакцию, с помощью
которой исследуют молоко на бруцеллез:
A) РН
В) РСК
С) РП
D) РА
Е) КР
78. Для профилактики бруцеллеза у
мелкого рогатого скота применяют
вакцину:
A) из штамма СТИ
В) из штамма 55
С) из штамма №19 Br.abortus
D) из штамма РЕВ -1
Е) из штамма №82 Br.abortus
79. Для серологической диагностики
инфекционного эпидидимита баранов
используют:
A) РА
В) РСК
С) РДСК
D) РБП
Е) КР
80. РСК при бруцеллезе считается
положительной при задержке гемолиза на
2-4 плюса в разведении:
A) 1:10
В) 1:20
С) 1:40
D) 1:80
Е) 1:160
Возбудитель сибирской язвы
81. Название болезни «сибирская язва»,
предложил:
А) С.С. Андриевский
В) Л. Пастер
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
С) Т. Эшерих
D) Сальмон
Е) Р. Кох
В) Bacillus mesenthericus
С) Bacillus anthracis
D) Bacillus mycoides
Е) Bacillus megaterium
82.
Какие
заболевания
называют
зооантропонозными?
А) болезни общие для млекопитающих и
рыб
В) болезни общие для животных и
человека
С) болезни всех животных
D) инфекционные болезни человека
Е) незаразные болезни человека и
животных
83. Назовите возбудителя
язвы:
А) Erysipelotrix suis
В) Bacillus anthracis
С) Mycobacterium avium
D) Listeria monocytogenes
Е) Brucella suis
сибирской
84.
Какой
непостоянный
элемент
характерен для возбудителя сибирской
язвы?
А) ядро
В) жгутики
С) клеточная стенка
D) капсула
Е) муриновый слой
85.
Что
является
фактором
вирулентности у возбудителя сибирской
язвы?
А) нуклеоид
В) спора
С) жгутики
D) капсула
Е) пептидогликан
86. Чем отличается
клостридии?
А) нуклеоидом
В) наличием споры
С) отсутствием споры
D) наличием капсулы
Е) диаметром споры
Страница. 183 из 189
бацилла
от
87. Какая из перечисленных бацилл
является патогенной?
A) Bacillus subtilis
88. Кто обнаружил капсулу у возбудителя
сибирской язвы?
А) Р. Кох
В) Л.Пастер
С) Серафини
D) Поллендер
Е) Брауэлл
89. Что общего у возбудителя сибирской
язвы и антракоидов?
А) капсула
В) жгутики
С) спора
D) муриновый слой
Е) патогенность
90. Какой метод позволяет определить
наличие
капсулы у возбудителя
сибирской язвы?
А) Грама
В) Ольта
С) Циль-Нильсена
D) Козловского
Е) Виртца
91. Назовите метод определения споры
у возбудителя сибирской язвы:
А) Грама
В) Ольта
С) Циль-Нильсена
D) Козловского
Е) Виртца
92. Какие среды используют для
культивирования возбудителя сибирской
язвы?
А) обычные
В) специальные
С) селективные
D) среды накопления
Е) дифференциально-диагностические
93. Назовите среду культивирования
возбудителя сибирской язвы:
А) Китта-Тароцци
В) МПА
С) Среда Левенштейна-Иенсена
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
D) МППБ
Е) МППА
94. Назовите возбудитель, образующий
колонию
напоминающую
«львиную
гриву»:
А) бруцеллы
В) возбудитель сибирской язвы
С) картофельная палочка
D) пастереллы
Е) микобактерии
95. Феномен «жемчужного ожерелья»
образуют:
А) бруцеллы
В) микобактерии
С) картофельная палочка
D) пастереллы
Е) возбудитель сибирской язвы
96.Возбудитель сибирской язвы по типу
дыхания является:
А) аэробом
В) факультативным анаэробом
С) микроаэрофилом
D) анаэробом
Е) гетеротрофом
97. В какой форме чаще протекает
сибирская язва у человека?
А) кишечной
В) легочной
С) кожной
D) ангинозной
Е) отечной
98.Что напоминает рост возбудителя
сибирской язвы на желатине?
А) репу
В) чулок
С) кратер
D) перевернутую елочку
Е) ерш
99. К возбудителю сибирской язвы не
восприимчивы:
A) Птицы
B) Человек
C) Овцы
D) Верблюды
E) Свиньи
Страница. 184 из 189
100.Почему запрещено вскрывать трупы
животных при подозрении на
сибирскую язву?
А) Чтобы не испортить шкуру животного
B) Для постановки диагноза достаточно
клинических признаков
C) Патологоанатомические изменения
при сибирской язве нехарактерны
D) Для недопущения рассеивания
возбудителя
E) Во внешней среде возбудитель быстро
инактивируется
101.Для определения обсеменения
возбудителем сибирской язвы
кожевенного сырья применяется:
A) Микроскопия мазков-отпечатков
B) РСК
C) Реакция преципитации по Асколи
D) Заражение лабораторных животных
E) РА
102. Почему возбудитель сибирской язвы
долгое время сохраняется во
внешней среде?
А) образует капсулу
В) образует эндоспору
С) имеет на поверхности фосфолипиды
D) образует зооглею
E) за счет подвижности
103. Какие питательные среды
используют для выделения чистой
культуры возбудителя сибирской
язвы?
А) агар Эндо
В) МПЖ
С) МПА, МПБ
D) кровяной МПА
E) МПА с пенициллином
104. Назовите дифференцирующий
признак, отличающий
сапрофитных бацилл от
возбудителя сибирской язвы ?
А) помутнение бульона
В) палочковидные бактерии
С) R-формы колонии
D) наличие споры
E) подвижность
Возбудитель туберкулеза
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
105. Bозбудитель туберкулеза:
А) Erysipelotrix suis
В) Bacillus anthracis
С) Mycobacterium tuberculosis
D) Listeria monocytogenes
Е) Brucella suis
106. Среда Левенштейна-Иенсена
используется для культивирования:
А) бацилл сибирской язвы
В) палочек Коха
С) бруцелл
D) эризипелотриксов
Е) листерий
107.
Кто
открыл
туберкулеза?
А) Л.Пастер
В) Р.Кох
С) Брюс
D) И.Мечников
Е) Циль-Нильсен
Страница. 185 из 189
111.Чем
характеризуется
микобактерий
туберкулеза
глицериновом МПБ?
А) помутнением
В) образованием осадка
С) образованием облака
D) образованием пленки
Е) образованием слизистого налета
рост
на
112. Какие компоненты необходимы для
роста возбудителя туберкулеза?
А) краски
В) картофель
С) лактоза
D) дрожжевой экстракт
Е) желатин
возбудителя
108. Какой метод окраски используют
для
обнаружения
туберкулезных
палочек?
А) Грама
В) Муха
С) Циль-Нильсена
D) Козловского
Е) Ольта
109. Какие химические вещества на
поверхности клетки характерны для
палочек Коха?
А) белковые
В) углеводные
С) жировые и воскоподобные
D) липополипротеидные
Е) микроэлементы
110. Назовите среду для культивирования
микобактерий туберкулеза?
А) Чапека
В) Китта-Тароцци
С) МПБ
D) МПА
Е) Петраньяни
113. Какой метод диагностики
туберкулёза применяют при массовых
исследованиях?
А) Бактериологический
B) Биологический
C) Серологический
D) Аллергический
E) Патологоанатомический
114. Какой метод наиболее широко
применяют для оздоровления хозяйств от
туберкулёза?
А) Поголовная вакцинация животных
B) Лечение антибиотиками
C) Убой положительно реагирующих
животных с последующей
промпереработкой
D) Лечение сыворотками
E) Уничтожение и утилизация всех
восприимчивых животных в очаге
инфекции
115. Внутренние органы животных,
больных туберкулёзом:
A) уничтожают
B) отправляют на промышленную
переработку
C) автоклавируют
D) Выпускают без ограничения
E) Выпускают после
бактериологического контроля
116. Для выделения чистой культуры
возбудителя туберкулеза используют:
А) среду Мюллера
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
В) среду Чапека
С) среду Китта-Тароццы
D) среду Эндо
E) среду Левенштейна -Йенсена
Возбудители анаэробных инфекций
(ботулизм, эмкар)
117. Возбудитель ботулизма вызывает:
А) высококонтагиозную респираторную
инфекцию
В) остропротекающий кормовой токсикоз
С) неконтагиозную раневую инфекцию
D) местную гнойничковую инфекцию
Е) хроническую инфекцию
118. По типу дыхания возбудитель
ботулизма:
А) облигатный анаэроб
В) облигатный аэроб
С) факультативный анаэроб
D) микроаэрофил
Е) макроаэрофил
119. Какое расположение имеет спора у
возбудителя ботулизма?
А) центральное
В) терминальное
С) субтерминальное
D) центральное или субтерминальное
Е) центральное или терминальное
120. В течение, какого времени при
нагревании до 100ْ С, сохраняется
жизнеспособность Cl. botulinum?
А) 5-6 минут
В) 5-6 часов
С) 1-2 минуты
D) 1-2 часа
Е) 30 минут
121. Что является фактором
вирулентности Cl. botulinum?
А) эндотоксин
В) капсула
С) лактоза
D) спора
Е) экзотоксин
122. Какую среду используют для
культивирования Cl. botulinum?
Страница. 186 из 189
А) МПА
В) МПБ
С) солевой агар
D) желточный агар
Е) Китта-Тароцци
123. Для вакцинации животных против
столбняка применяют:
A) Гидроокисьалюминиевую
формолвакцину
B) Живую аттенуированную вакцину
C) Поливалентную сыворотку
D) Моновалентную сыворотку
E) Анатоксин
124. Диагностика ботулизма основана на:
A) Микроскопии мазков-отпечатков
B) Определении тинкториальных свойств
возбудителя
C) Обнаружении токсина
D) Выделении анатоксина
E) Определении ферментативных свойств
возбудителя
125. Возбудителем эмфизематозного
карбункула является:
A) Cl. tetani
B) Br. melitensis
C) Cl. chauvoei
D) Сl. perfringens
E) Cl. hystoliticum
126. Возбудитель столбняка:
А) Cl. tetani
В) Br. melitensis
С) Cl. chauvoei
D) Сl. perfringens
E) Cl. hystoliticum
127. Питательную среду для
культивирования патогенных анаэробов:
А) среда Мюллера
В) среда Чапека
С) среда Левенштейна -Йенсена
D) среда Эндо
E) среда Китта-Тароццы
128. От какого возбудителя
дифференцируют возбудитель эмкара?
А) Cl. tetani
В) Cl. septicum
С) Cl. chauvoei
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
D) Сl. perfringens
E) Cl. hystoliticum
129.
Какой
элемент
возбудителя
ботулизма
обуславливает
его
термостойкость?
А) капсула
В) спора
С) жировосковые вещества
D) пептидогликан
Е) жгутики
130. Возбудитель столбняка:
А) Cl. tetani
В) Cl. septicum
С) Cl. chauvoei
D) Сl. perfringens
E) Cl. hystoliticum
МИКОТОКСИКОЗЫ
131. Какой из перечисленных
микроорганизмов вызывает
микотоксикоз?
A) Возбудитель актиномикоза
B) Возбудитель трихофитии
C) Возбудитель микроспории
D) Возбудитель кандидомикоза
E) Возбудитель стахиботриотоксикоза
МИКОЗЫ
132. С какой целью применяется вакцина
ЛТФ-130?
A) Для профилактики трихофитии
B) Для профилактики актиномикоза
C) Для лечения трихофитии и
микроспории
D) Для профилактики и лечения
трихофитии
E) Для лечения актиномикоза
МИКРОБИОЛОГИЯ КОРМОВ
133. В каком случае происходит
прогоркание силоса?
A) При усиленном развитии
молочнокислых бактерий
B) При усиленном развитии
маслянокислых бактерий
C) При усиленном развитии гнилостных
микробов
Страница. 187 из 189
D) При усиленном развитии
уксуснокислых микробов
E) При развитии в продукте любого
микроорганизма
134. Наличие, каких химических веществ
способствует хорошему
силосованию кормов?
А) Сахара
B) Липиды
C) Витамины
D) Белки
E) Минеральные вещества
135. Какой основной
микробиологический процесс
происходит в рубце жвачных
животных?
А) Расщепление сахаров
B) Усвоение сахаров
C) Усвоение минеральных веществ
D) Расщепление целлюлозы
E) Расщепление белков
136. По какому тесту проводят
дифференциацию бактерий группы
кишечных палочек:
А) БГКП
В) ТИМАЦ
С) по расщеплению лактозы
D) образованию индола
Е) цитратному
137. Чем отличаются пищевые токсикозы
от пищевых токсикоинфекций?
А) микроорганизмы накапливаются в
пище
В) токсины накапливаются в пище
С)
накапливаются
токсины
и
микроорганизмы
D) накапливаются эндотоксины
Е) названием
138. Назовите возбудитель, вызывающий
пищевой токсикоз:
А) сальмонеллы
В) эшерихии
С) бациллы
D) стафилококки
Е) микобактерии
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
139. К числу пищевых бактериальных
токсикозов относится:
A) Сальмонеллёз
B) Ботулизм
C) Парвовирусный энтерит
D) Эшерихиоз
E) Диплококковая септицемия
140. К числу возбудителей пищевых
токсикоинфекций относятся:
А) сальмонеллы
В) клостридии ботулизма
С) возбудитель листериоза
D) патогенные стафилококки
Е) патогенные стрептококки
141. Proteus vulgaris выявляют на:
А) МПБ
В) МППА
С) МПА
D) МПГА
Е) МПГБ
142. Какой метод используют для
выделения чистой культуры протея?
А) метод Шукевича
В) метод Дригальского
С) метод Пастера
D) метод Коха
Е) биологический
143.Продукт, пораженный
стафилококками:
А) дурно пахнет
В) изменяет цвет
С) не изменяет свойств
D) изменяет отдельные свойства
Е) изменяет консистенцию
144. Полное разрушение эритроцитов,
вызванное гемолитическими
стрептококками, называется:
А) β- гемолиз
В) α - гемолиз
С) γ - гемолиз
Страница. 188 из 189
D) δ - гемолиз
Е) ε – гемолиз
145. Стрептококки, вызывающие гемолиз
эритроцитов называются:
А) Str. anhaemolyticus
В) Str. viridans
С) Str. lactis
D) Str. faecalis
Е) Str. haemolyticus
146. Назовите стрептококк, вызывающий
пищевой токсикоз:
А) Str. agalactiae
В) Str. anhaemolyticus
С) Str. cremoris
D) Str. citrovorum
Е) Str. viridans
147. Укажите вид клостридий,
вызывающих пищевой токсикоз:
А) Cl. perfringens
В) Cl. botulinum
С) Cl. septicum
D) Cl. oedematins
Е) Cl. histoliticum
148. Укажите род, относящийся к БГКП:
А) Salmonella
В) Proteus
С) Citrobacter
D) Asotobacter
Е) Bacilla
149. Назовите морфологический признак
характерный для БГКП:
А) спора
В) капсула
С) зооглея
D) жгутики
Е) пили
УМКД 042-18-23.1.01 / 03-2014
Ред. №___ от ___ 20___г.
Страница. 189 из 189