бахоевой кометой авалиевной - Московский государственный

На правах рукописи
БАХОЕВА
Комета Авалиевна
Клиническое значение ингибиторов апоптоза
у больных серозными новообразованиями яичников
14.01.01 – «Акушерство и гинекология»
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Москва - 2010
2
Работа выполнена в ГОУ ВПО «Московский государственный медикостоматологический университет» Росздрава.
Научный руководитель:
доктор медицинских наук, профессор
Высоцкий Максим Маркович
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Зуев Владимир Михайлович
доктор медицинских наук, профессор Дамиров Михаил Михайлович
Ведущее
учреждение:
ГУ
«Московский
областной
научноисследовательский институт акушерства и гинекологии» Министерства
Здравоохранения Московской области.
Защита состоится «___»_______________2010 года в______часов на
заседании диссертационного совета Д 208.041.06 при ГОУ ВПО
«Московский государственный медико-стоматологический университет
Росздрава» по адресу: 127473, Москва, ул. Делегатская, д.20/1.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского
государственного медико-стоматологического университета (127206,
г.Москва, ул.Вучетича, д.10а).
Автореферат разослан «___»______________2010 года
Ученый секретарь диссертационного совета,
доктор медицинских наук, профессор
Умаханова М.М.
3
Общая характеристика работы
Актуальность проблемы. Новообразования яичников (ДНЯ) считаются
одними из наиболее часто встречающихся
патологических процессов
женских
гениталий (Высоцкий М.М., 2005; Фролова О.Г. и соавт., 2005; Мартынова Ж.А. и
соавт., 2008; Duhoux F.P. et al., 2009). Повышенный интерес исследователей к
проблеме РЯ объясняется трудностями диагностики (Сергеева Н.С. и соавт., 2010;
Bast
R.C.Jr.
et
al.,
неудовлетворительными
2009),
частыми
результатами
рецидивами
лечения
заболевания
диссеминированных
и
форм
заболевания, 5-летняя выживаемость варьирует от 5 до 25% (Горбунова В.А. и
соавт., 2003; Новикова Е.Г. и соавт., 2007; Аксель Е.М., 2009; Moore R.G. et al.,
2008). По данным Европейского общества медицинской онкологии (ESMO)
ежегодная заболеваемость РЯ в Европе составляет 18, а смертность – 12 случаев на
100 тыс. женщин в год и увеличивается с возрастом (Aebi S. et al., 2008).
Сложность проблемы патогенеза, диагностики и лечения новообразований
яичников связана с особенностями природы этого эндокринного органа, а также
множеством гистологических форм РЯ и ДНЯ, которые обусловливают особенности
клинического течения этих заболеваний и прогноз (Карселадзе А.И., 2000; Горелова
И.А., 2008). Если же принять во внимание еще и переходные формы (Тюляндин
С.А. и соавт., 2009), а также опухоли, которые представлены сочетанием
двух и более гистологических типов, то количество вариантов этих
новообразований значительно возрастает (Козаченко В.П., 1999; Жорданиа К.И.,
2005). Однако, подавляющее большинство злокачественных опухолей яичников
являются эпителиальными (Винокуров В.Л., 2004; Grant D.J. et al., 2010).
Особое внимание в последние годы исследователи уделяют изучению
механизмов
апоптоза
(программируемой
гибели
клетки)
с
характерными
морфологическими и биохимическими признаками (Сухих Г.Т. и соавт., 1999;
Белушкина Н.Н. и соавт., 2004; Пальцев М.А., 2004; Thompson C.B., 1995).
Нарушение процессов клеточной гибели может приводить к возникновению
патологических состояний, к числу которых относятся онкологические заболевания,
в том числе и РЯ (Аббасова С.Г. и соавт., 1999; Симонова В.С. и соавт., 2005; Hefler
L. et al., 2000). Одной из ключевых молекул, участвующих в развитии Fas-
4
опосредуемого апоптоза, является Fas-рецептор - трансмембранный гликопротеин 1
типа (синонимы АРО-1, СD-95), который индуцирует апоптоз в клетке после
взаимодействия с Fas-лигандом (FasL) или агонистическими моноклональными
антителами против Fas. Причиной устойчивости опухолевых клеток к Fasзависимому апоптозу может быть повышенная продукция растворимого Fas (sFas)
этими клетками, который является продуктом альтернативного сплайсинга
полноразмерной молекулы Fas (Cascino I. et al., 1995) и способен ингибировать Fasопосредуемый
апоптоз.
Повышенный
уровень
sFas
отмечен
также
при
гепатоцеллюлярной карциноме, раке щитовидной, молочной и предстательной
желез, саркомах костей (Бабкина И.В., 2000; Скрипниченко И.В., 2002; Ирменов
К.М., 2003; Вищипанова Н.Л., 2006; Jodo S. et al., 1998; Basolo F. et al., 2000). В связи
этим определение концентрации sFas в сыворотке крови больных злокачественными
опухолями яичников позволит выявить его взаимосвязь с основными клиникоморфологическими характеристиками заболевания и прогнозом. L.Hefler et al. (2000)
на основании предварительных исследований предлагают использовать этот маркер
в дифференциальной диагностике РЯ и ДНЯ, а высокая концентрация sFas в
сыворотке крови больных до проведения химиотерапии может служит фактором
прогноза общей и безрецидивной выживаемости.
В
последние
годы
интерес
онкологов
привлекает
также
мультифункциональный цитокин интерлейкин-6 (ИЛ-6), который регулирует рост и
дифференцировку клеток различных тканей, играет важную роль в иммунном ответе
в острой фазе воспалительного процесса и считается ингибитором апоптоза, в том
числе и Fas-зависимого (Yamasaki K. et al., 1988; Jilka R.L. et al., 1998).
Стало быть, сравнительный анализ основных клинико-морфологических
факторов при серозных ДНЯ и РЯ с уровнями ингибиторов Fas-зависимого апоптоза
sFas и ИЛ-6, а также FasL в сыворотке крови этих пациенток может иметь значение
в клиническом их течении.
Цель исследования – выбор объема и доступа при хирургическом лечении
новообразований яичников на основании сравнительного анализа содержания
ингибиторов Fas-зависимого апоптоза - sFas, ИЛ-6, а также FasL в сыворотке крови
больных серозными новообразованиями яичников, оценка их взаимосвязи с
5
основными клинико-морфологическими характеристиками опухолей для улучшения
результатов лечения.
Задачи исследования.
1. Провести сравнительное иммуноферментное определение концентрации
ингибиторов апоптоза – sFas, ИЛ-6, а также FasL у больных серозными
злокачественными и доброкачественными новообразованиями яичников.
2. Сравнить уровни sFas, ИЛ-6, FasL в сыворотке крови больных серозными
новообразованиями яичников с учетом основных клинических проявлений и
морфологических характеристик заболевания.
3. Проанализировать особенности содержания FasL в сыворотке крови больных
серозными злокачественными и доброкачественными новообразованиями яичников
и сопоставить его уровни с исходными показателями sFas у этой категории
пациенток.
4. Провести анализ взаимосвязи содержания sFas, ИЛ-6, FasL в сыворотке крови
больных серозными злокачественными и доброкачественными новообразованиями
яичников и сопоставить их с таковыми показателями у практически здоровых
женщин.
5. Выявить роль исследуемых маркеров (sFas, ИЛ-6, FasL) в сыворотке крови в
диагностике,
выборе
объема
и
доступа
при
хирургическом
лечении
новообразований яичников.
Научная новизна исследования.
Впервые обнаружено достоверно высокое исходное содержание ИЛ-6 в
сыворотке крови больных серозным раком яичников по сравнению со здоровыми
женщинами и пациентками с серозными доброкачественными новообразованиями
яичников, при этом уровень ИЛ-6 <2 пг/мл с вероятностью 88% указывает на
отсутствие злокачественного характера новообразования яичника.
Показано, что содержание ИЛ-6 в сыворотке крови зависело от стадии
серозного рака яичника и было достоверно выше у пациенток во II и III стадиях
опухолевого процесса по сравнению с IV стадией.
6
Обнаружено, что в группе больных серозным РЯ и ДНЯ значения ИЛ-6 в
сыворотке крови достоверно повышались с увеличением возраста пациенток, в
постменопаузе и при наличии абортов в анамнезе.
Не выявлено различий в частоте выявления и исходных уровнях ингибитора
апоптоза sFas в сыворотке крови практически здоровых женщин, больных
серозными ДНЯ и РЯ, однако частота выявления FasL в сыворотке крови выше
указанных групп достоверно различалась. По сравнению со здоровыми женщинами
у больных серозными новообразованиями яичников FasL выявлялся чаще. Средний
уровень FasL был достоверно выше у больных серозными новообразованиями
яичников в постменопаузе, у больных серозным РЯ.
Не выявлено корреляционных зависимостей между уровнями всех изучаемых
маркеров в группе практически здоровых женщин, тогда как, у больных серозными
ДНЯ обнаружена достоверная отрицательная зависимость между ИЛ-6 и FasL и
достоверная прямая связь между FasL и sFas. У больных серозным РЯ зависимость
между уровнем ИЛ-6 и sFas отсутствовала, однако выявлена прямая достоверная
связь между ИЛ-6 и FasL в сыворотке крови.
Практическая значимость исследования.
Настоящая работа представляет практический интерес для анализа роли
ингибиторов Fas-зависимого апоптоза sFas и ИЛ-6 у больных первичными
серозными ДНЯ и РЯ при оценке клинического течения, прогноза и выбора
биологически оправданного объема операции.
Впервые определен исходный пороговый уровень FasL в сыворотке крови
больных серозными новообразованиями яичников относительно группы контроля
равный <0,2 нг/мл, который следует использовать как дополнительный маркер в
диагностике серозных новообразований яичников.
Дискриминантный анализ показал высокую эффективность использования
исходных показателей ИЛ-6, sFas в сыворотке крови больных серозными
новообразованиями яичников в дооперационной диагностике: специфичность теста
составила 93,8%, чувствительность 70%. Применение таких клинических признаков
как размер опухоли, возраст пациентки, наличие болей внизу живота повышало
7
чувствительность теста до 80%, специфичность до 100%, а общая эффективность
теста составила 95,2%.
Количественное определение ингибиторов апоптоза sFas и ИЛ-6 в сыворотке
крови у больных серозными новообразованиями яичников в сочетании с другими
клиническими и биохимическими показателями позволит дифференцированно
подходить к выбору методов лечения этой категории пациенток.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Исходные уровни sFas в сыворотке крови практически здоровых женщин,
больных серозными ДНЯ и РЯ не различались, однако отмечено достоверное
различие в частоте выявления маркера между выше указанными группами.
2. Достоверно высокие показатели ИЛ-6 обнаружены в сыворотке крови
больных серозным РЯ во II и III стадиях по сравнению с IV стадией.
3. У больных серозным РЯ и ДНЯ значения ИЛ-6 в сыворотке крови достоверно
повышались с увеличением возраста, в постменопаузе, при наличии абортов в
анамнезе.
4. Частота выявления FasL в сыворотке крови практически здоровых женщин,
больных серозными ДНЯ и РЯ достоверно различалась. При этом, средний уровень
FasL был достоверно выше у больных серозным РЯ по сравнению с контролем и
больными серозными ДНЯ.
5. Показатель FasL ≥0,2 нг/мл в сыворотке крови может быть использован как
дополнительный маркер в диагностике серозных новообразований яичников.
6. В группе контроля не выявлено корреляционных зависимостей между
уровнями всех изучаемых маркеров. У больных серозными ДНЯ обнаружена
достоверная зависимость между ИЛ-6 и FasL, а связь между FasL и sFas была
прямой и достоверной. У больных серозным РЯ зависимость между уровнем ИЛ-6 и
sFas отсутствовала, однако отмечена прямая достоверная зависимость между ИЛ-6 и
FasL в сыворотке крови.
7. Дискриминантный анализ показал высокую эффективность использования
исходных
показателей
ИЛ-6,
sFas,
FasL
в
сыворотке
крови
больных
новообразованиями яичников при дооперационной диагностике: специфичность
теста составила 93,8%, чувствительность 70%. Дополнительно применение таких
8
признаков как размер опухоли, возраст пациентки, наличие болей внизу живота
повышало чувствительность теста до 80%, специфичность до 100%, а общая
эффективность теста составила 95,2%.
8. Исходное содержание ИЛ-6 в сыворотке крови практически здоровых
женщин, больных серозными ДНЯ и РЯ достоверно различалось, при этом уровень
ИЛ-6 <2 пг/мл с вероятностью 88% указывает на отсутствие злокачественного
характера новообразования яичника, что позволяет оперировать этих пациенток с
использованием лапароскопического доступа.
Внедрение результатов исследования.
Метод исследования ингибиторов Fas-зависимого апоптоза - sFas, ИЛ-6, а
также FasL в сыворотке крови больных серозными новообразованиями яичников с
целью выбора объема и доступа при хирургическом лечении новообразований
яичников для улучшения результатов лечения внедрен в практику хирургического
отделения гинекологи больницы Ценросоюза РФ г.Москвы.
Апробация диссертации.
Материалы диссертации доложены на конгрессе «Национальные дни
лабораторной медицины России» (7-9 октября Москва, 2008г.); XII Российском
онкологическом
конгрессе
(Москва,
18-20
ноября
2008г.);
Всероссийской
конференции с международным участием «Molecular Oncology» (Новосибирск, 1-3
октября 2008г.); на XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство»
(Москва, 18-22 апреля 2009г.); на XXII Международном конгрессе с курсом
эндоскопии «Новые технологии в диагностике и лечении гинекологических
заболеваний» (Москва, 8-11 июня 2009г.); на VI Международной конференции
«Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 10-11 ноября 2009г.).
Апробация диссертации проведена на совместной научной конференции
сотрудников кафедры акушерства и гинекологии лечебного факультета МГМСУ 12
апреля 2010 года.
Личный вклад.
Автор лично проводил забор материала для иммуноферментного определения
сывороточных маркеров ингибиторов Fas-опосредованного апоптоза (sFas, ИЛ-6,
FasL) у 78 первичных больных серозными новообразованиями яичников. В ходе
9
сбора материала для диссертационной работы К.А.Бахоевой были освоены методы
иммуноферментного
определения
выше
указанных
маркеров.
Диссертант
самостоятельно проводила статистическую обработку данных и их анализ с
использованием современных статистических методов.
Публикации результатов исследования.
По материалам диссертации опубликованы 10 научных работ, 3 из них в
журналах, рекомендуемых ВАК Минобрнауки.
Структура и объем работы.
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и
методы исследований», главы «Результаты собственных исследований», обсуждения
полученных результатов, выводов и указателя литературы. Общий объем
диссертации 141 страница машинописного текста. Указатель литературы содержит
108 работы отечественных и 114 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована
28 таблицами и 44 рисунками.
СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалы и методы исследования.
В исследование включено 78 больных серозными новообразованиями
яичников в возрасте от 21 до 77 лет. Из них 48 (61,5%) пациенток с серозными ДНЯ
и 30 (38,5%) – серозным РЯ. Все пациентки проходили обследование и получали
лечение в больнице Центросоюза РФ г. Москвы и в хирургическом отделении
гинекологии РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН в период с декабря 2007г. по сентябрь
2009 г.
Клинический диагноз новообразования яичника у всех пациенток установлен
впервые и подтвержден данными гистологического исследования опухоли в
соответствии с Международной гистологической классификацией опухолей (ВОЗ,
2003).
В качестве группы сравнения обследовали 40 практически здоровых женщин в
возрасте от 21 до 49 лет.
10
Всех пациенток, поступивших в стационар в плановом порядке, обследовали с
помощью общеклинических, инструментальных и специальных лабораторных
методов. Больные осмотрены терапевтом и анестезиологом, при наличии
сопутствующей
соматической
патологии
проводили
консультации
с
соответствующими специалистами.
Всем пациенткам проводили рентгенологическое и эндоскопическое
исследование желудочно-кишечного тракта (гастроскопия, колоноскопия);
УЗИ брюшной полости, органов малого таза и забрюшинного пространства с
помощью
конвергентного
аппарата
ESAOTE
с
трансабдоминальным
и
трансвагинальным электронными датчиками с частотой 3,5 5 и 7 Мгц. Всем
пациенткам выполняли эхокардиографию и исследование функции внешнего
дыхания.
У всех больных определяли в сыворотке крови маркер СА-125.
У ряда больных произведена биопсия шейки матки; гистероскопию
выполнили 17 пациенткам с использованием аппаратуры фирмы «Storz» (Германия);
раздельное диагностическое выскабливание слизистой матки.
При подозрении на РЯ больным проводили ТВ-эхографию с цветным
допплеровским картированием в режиме энергетического допплера, с анализом
кривых скоростей кровотока, характеризующих особенности неоваскуляризации
(внутриопухолевый
распространенности
или
периферический
патологического
кровоток).
процесса
С
целью
больным
РЯ
определения
проводили
рентгеновскую компьютерную томографию на РКТ «Sytek-2000» (фирма «GE»,
США).
Результаты исследования и их обсуждение.
Обследовали три группы женщин: 1 группа – практические здоровые
женщины (группа контроля) (n=40); 2 группа – больные серозными ДНЯ (n=48); 3
группа – больные серозным РЯ (n=30).
Группа больных ДНЯ состояла: из 38 (79,2%) пациенток с серозной
цистаденомой, 6 (12,5%) – с простой серозной кистой и 4 (8,3%) – с серозной
цистаденомой и кистой яичника. У 14 (29,2%) больных ДНЯ репродуктивная
функция сохранена, 34 (70,8%) пациентки были в постменопазе, средняя
11
длительность постменопаузы - 14,4 лет. Больные ДНЯ получили различные по
объему виды хирургического лечения: резекция яичника (23), надвлагалищная
ампутация матки с придатками (18), удаление придатков матки (7).
Средний возраст больных серозным РЯ составил 53,4 года, из них 6 (20%)
пациенток были в репродуктивном периоде, 24 (80%) - в постменопазе. У 2 (6,7%)
установлена II, у 20 (66,7%) – III и у 8 (26,7%) – IV стадия РЯ.
Умереннодифференцированный РЯ выявлен у 12, низкодифференцированный – у 18
пациенток, асцит обнаружен у 18 (60%) больных. Больным РЯ было проведено
хирургическое
лечение
в
различных
объемах:
29
пациенткам
выполнена
экстирпация матки с придатками и удаление большого сальника; 14 - экстирпация
матки с придатками и резекция большого сальника, у 3 - произведена лапаротомия с
биопсией большого сальника.
Больные серозным РЯ в предоперационном периоде получили 4-6 курсов
полихимиотерапии, а через 2-3 недели после операции получали адъювантную
химиотерапию (6-8 курсов) по следующим схемам: цисплатин + циклофосфан (20
больных); карбоплатин (AUC 6) + циклофосфан (4); цисплатин + адриамицин +
циклофосфан (10); таксол с карбоплатином (AUC 6) или цисплатином 75 мг/м2.
Таблица 1.
Клинические признаки у больных серозными ДНЯ и РЯ
ДНЯ
РЯ
Клинические признаки
P
(n=48)
(n=30)
Симптом боли внизу живота
26 (54,2%)
6 (20,0%)
0,001
Менархе >13,0 лет
0
6 (20,0%)
0,001
Размер новообразования, см
9,0
5,5
0,024
(медиана)
Длительность анамнеза болезни,
9,0
2,0
0,04
годы (медиана)
Возраст, годы (медиана)
57
54
0,6
Число родов в анамнезе
36 (75,0%)
28 (93,3%)
0,43
Число абортов в анамнезе
28 (58,3%)
20 (66,7%)
0,7
ДНЯ достоверно чаще протекают с симптомом абдоминальных болей
(р=0,001), возраст менархе достоверно ниже (р=0,0001), размер выявленного
новообразования и длительность анамнеза достоверно больше (р=0,024 и р=0,04
соответственно), чем при РЯ (табл. 1).
12
Наиболее часто в анамнезе больных серозными ДНЯ и РЯ отмечали
следующие гинекологические заболевания: миома матки (31 больная), эрозия шейки
матки (18), хронический аднексит (14), киста яичника (13), аденомиоз (11). Реже
отмечена внематочная беременность (3), бесплодие (3), гидросальпинкс (1),
поликистоз яичников (1), кровотечение в постменопаузе (1), гиперплазия (1) и
полипоз эндометрия (1).
Специальные лабораторные методы исследования. Концентрацию ИЛ-6
определяли в сыворотке крови иммуноферментным методом с использованием
реактивов компании «R&D» (США), а sFas и FasL - реактивами фирмы «Bender
MedSystems» (Австрия) у 78 больных серозными ДНЯ и РЯ до лечения (исходно) и
у 40 практически здоровых женщин.
Статистический анализ результатов проводили методами однофакторного и
многофакторного
дисперсионного
анализа
(А.Петри
и
соавт.,
2009)
с
использованием пакета программ Statistica for Windows, Release 4.3, STARSOFT Inc.
Результаты собственных исследований и их обсуждение
Содержание ИЛ-6 в сыворотке крови больных серозными ДНЯ, РЯ и в
контроле. ИЛ-6 выявлен в сыворотке крови у всех 48 больных ДНЯ, у 30 больных
РЯ и у 30 из 40 (75%) практически здоровых женщин. У 35% женщин в контроле
содержание ИЛ-6 в сыворотке крови не превышало 1 пг/мл, у 52,5% - находилось в
пределах от 1 до 2 пг/мл, и только у 12,5% - уровень цитокина был выше 2 пг/мл. В
то же время, из 48 больных ДНЯ у 11 (22,9%) значения ИЛ-6 были менее 1 пг/мл, у
22 (45,8%) – колебались от 1 до 2 пг/мл, у 15 (31,3%) – концентрация цитокина была
выше 2 пг/мл. У всех 30 больных серозным РЯ значения ИЛ-6 превышали 2 пг/мл.
Анализ полученных данных, указал на тот факт, что у женщин с новообразованием
яичника исходные значения ИЛ-6 в сыворотке крови <2 пг/мл с высокой
вероятностью указывают на доброкачественный характер процесса (р=0,0001).
Вероятность выявления значений ИЛ-6 ≥2 пг/мл составила 31,3% у больных
ДНЯ и, следовательно, диагностическая ценность показателей цитокина в сыворотке
крови в области значений от 2 пг/мл и более при дооперационном распознавании
доброкачественного и злокачественного характера новообразования яичников
следует считать недостаточной.
13
Распределение содержания ИЛ-6 в сыворотке крови женщин в контроле и при
ДНЯ не показало достоверных различий (р=0,09). Для клинической практики можно
рекомендовать пороговое значение ИЛ-6 в сыворотке крови <2 пг/мл, которое
указывает на отсутствие злокачественного характера процесса в яичнике с
вероятностью более 88%.
Средний уровень ИЛ-6 при ДНЯ был в 1,7 раз выше по сравнению с
контролем (2,40,4 и 1,40,1 пг/мл, соответственно), а исходный показатель
цитокина у больных РЯ высокодостоверно возрастал по медиане в 3,8-4,1 раза по
сравнению с больными ДНЯ и группой контроля (табл. 2).
Таблица 2.
Статистические характеристики содержания ИЛ-6 в сыворотке крови
обследованных групп женщин
Уровень ИЛ-6 в сыворотке крови (пг/мл)
Обследованные Количество
Медиана
Пределы
группы
наблюдений
M [95%ДИ]
ИЛ-6
колебания ИЛ-6
Контроль
40
1,4 [1,1-1,6]
1,2
0,7-3,2
ДНЯ
48
2,4 [1,6-3,2]
1,3
0-13,2
РЯ
30
6,3 [5,5-7,1]
4,9
2,1-10,1
Примечание: р1vs2=0,02; p1vs3=0,0001; p2vs3=0,0001.
Следовательно, определение исходного уровня ИЛ-6 в сыворотке крови
женщин может служить только дополнительным маркером при выявлении
доброкачественного или злокачественного характера процесса в яичниках.
В группе контроля не выявили линейной связи между возрастом и
содержанием ИЛ-6 в сыворотке крови, как и у больных ДНЯ. Тогда как, при РЯ эта
зависимость была прямой и достоверной (rs=0,52; p=0,003). Стало быть, при
серозном РЯ с увеличением возраста пациенток исходный уровень ИЛ-6
повышается.
Проведена оценка исходного содержания ИЛ-6 в сыворотке крови больных и
здоровых женщин в 4 возрастных группах (табл. 3). Среди всех возрастных групп
обследованных женщин у больных РЯ обнаружены достоверно высокие исходные
показатели ИЛ-6 в сыворотке крови по сравнению с группами контроля и ДНЯ. У
больных серозными ДНЯ достоверные различия в показателях ИЛ-6 выявлены
только при сравнении пациенток в возрасте <30 и ≥70 лет (р=0,04). Больные РЯ в
14
возрасте <30 и ≥70 лет также достоверно отличались по исходной концентрации
ИЛ-6 (р=0,043).
Таблица 3.
Статистические характеристики содержания ИЛ-6 в сыворотке крови
обследованных групп женщин с учетом возраста
Уровень ИЛ-6 в сыворотке крови
(пг/мл)
Возраст
Группа
N
Пределы
(годы)
Медиана
M [95%ДИ]
колебания
ИЛ-6
ИЛ-6
1
<30
32
1,3 [1,1-1,5]
1,2
0,7-3,2
Контроль
2
30-49
8
1,6 [1,1-1,5]
1,1
0,8-3,1
3
<30
6
1,3 [0,8-1,8]
1,3
0,8-1,8
4
30-49
8
1,7 [1,1-2,4]
1,4
1,2-3,0
ДНЯ
5
50-69
22
2,4 [0,8-4,0]
1,2
0-13,2
6
12
3,4 [1,9-4,8]
2,8
1,1-7,2
70
7
<30
6
5,2 [4,0-6,5]
5,8
3,7-6,2
8
30-49
4
5,4 [4,3-6,4]
5,4
4,8-5,9
РЯ
9
50-69
14
6,2 [4,9-7,6]
6,5
2,1-10,1
10
6
8,3 [6,7-9,8]
7,6
6,7-10,1
70
Примечание: р1vs7=0,003; p2vs8=0,003; p3vs7=0,001; p4vs8=0,005; p5vs9=0,0001;
p6vs10=0,0001.
Отметим, что у практически здоровых женщин в возрасте <30 лет частота
выявления высоких (≤2 пг/мл) значений ИЛ-6 в сыворотке крови составила 9,4%,
при ДНЯ – 0%. В группе женщин в возрасте от 30 до 49 лет эти частоты составили
соответственно 25 и 25%. В группе больных ДНЯ в возрасте от 50 до 69 лет частота
выявления высоких значений ИЛ-6 составила 22,7%, а от 70 лет и старше – 66,7%.
При РЯ все значения цитокина были ≥2 пг/мл.
Таким образом, диагностическая информативность сывороточного ИЛ-6 у
пациенток с серозными новообразованиями яичников в возрасте от 70 лет и старше
снижалась.
Не обнаружено достоверных различий в содержании ИЛ-6 у больных с учетом
фазы менструального цикла, а внутри групп больных серозными ДНЯ и РЯ
исходные уровни ИЛ-6 в репродуктивном периоде и постменопаузе не различались.
Не обнаружили достоверных различий в исходном содержании ИЛ-6 в сыворотке
крови больных с наличием или отсутствием симптома болей внизу живота. Не
15
выявили зависимости между максимальным размером первичной опухоли у
больных ДНЯ, РЯ и исходными уровнями ИЛ-6.
Таблица 4.
Уровень ИЛ-6 в сыворотке крови больных серозными ДНЯ и РЯ с учетом
максимального размера опухоли
Уровень ИЛ-6 в сыворотке крови (пг/мл)
Возраст
Пределы
Группа
N
Медиана
(годы)
M [95%ДИ]
колебания
ИЛ-6
ИЛ-6
1
<4,0
4
1,1 [0,6-1,6]
1,1
0,8-1,4
2
4,0-7,9
16
2,4 [1,3-3,5]
1,6
0,8-7,2
ДНЯ
3
8,0-11,9
10
4,2 [0,6-7,8]
1,4
0-13,2
4
18
1,6 [1,2-2,1]
1,2
0,8-3,4
12,0
<4,05
10
6,5 [4,6-8,5]
7,2
2,1-10,1
6
4,0-7,9
8
5,7 [4,9-6,6]
5,6
4,8-6,9
РЯ
7
8,0-11,9
8
5,5 [4,5-6,4]
5,9
3,7-6,5
8
4
8,7 [6,0-11,4]
9,0
6,7-10,1
12,0
Примечание: р1vs3=0,04; p6vs8=0,047; p3vs7=0,001; p7vs8=0,03; p1vs5=0,0003; p2vs6=0,002;
p4vs8=0,0001.
Провели дисперсионный анализ содержания ИЛ-6 в сыворотке крови больных
ДНЯ и РЯ с учетом максимального размера опухоли (табл. 4). Так, при ДНЯ среднее
содержание ИЛ-6 повышалось с увеличением размера опухоли, однако при крупном
размере новообразования (более 12 см) уровень ИЛ-6 существенно снижался. При
РЯ выявлена обратная закономерность – среднее содержание ИЛ-6 незначительно
снижалось с повышением размера опухоли, однако при крупных (более 12 см)
размерах опухоли уровень ИЛ-6 в сыворотке крови достоверно повышался.
У больных ДНЯ частота выявления повышенных значений ИЛ-6 составила 0%
при размере опухоли менее 4,0 см, 37,5-40% при размере опухоли от 4,0 до 12,0 см,
27,8% при размере опухоли более 12,0 см. Таким образом, диагностическая
ценность определения исходного содержания ИЛ-6 в сыворотке крови повышается в
группе больных серозными ДНЯ при размерах новообразования менее 4,0 см и
более 12,0 см.
Не выявлено связи исходных уровней ИЛ-6 в сыворотке крови больных РЯ и
ДНЯ с учетом длительности анамнеза болезни, числа родов и абортов в анамнезе.
Вместе с тем, содержание ИЛ-6 в сыворотке крови больных простыми
серозными кистами яичников было достоверно ниже по сравнению с серозной
16
цистаденомой (медианы 0,9 и 1,4 пг/мл соответственно; р=0,01). Однако, уровни
цитокина у больных простыми серозными кистами не отличались от его значений у
практически здоровых женщин.
Содержание ИЛ-6 в сыворотке крови больных РЯ было достоверно выше в III
стадии по сравнению с IV (р=0,006), при низкодифференцированных опухолях по
сравнению с умереннодифференцированными (p<0,01), при наличии асцита, чем без
такового (p=0,001).
Таким образом, при концентрации ИЛ-6 в сыворотке крови пациенток с
серозными
новообразованиями
яичников
менее
2
пг/мл
вероятность
злокачественного характера опухолевого процесса составила менее 12%. У больных
серозным РЯ и ДНЯ исходные значения ИЛ-6 в сыворотке крови достоверно
повышались с увеличением возраста, а у больных РЯ при наличии асцита, при
низкодифференцированных опухолях, в постменопаузе и при наличии абортов в
анамнезе. Диагностическая способность сывороточного ИЛ-6 наиболее высока при
размерах опухоли яичника менее 4,0 см и более 12,0 см и наиболее низкая у
больных в возрасте старше 70 лет.
Содержание sFas в сыворотке крови больных серозным РЯ, ДНЯ и в
контроле. sFas выявлен в сыворотке крови у всех практически здоровых женщин, у
42 (87,5%) больных ДНЯ и у 26 (86,7%) больных РЯ.
У 14 (35%) здоровых женщин содержание sFas не превышало 50 пг/мл, у 8
(20%) - находилось в пределах от 50 до 100 пг/мл, у 12 (30%) – в пределах 100-200
пг/мл и только у 6 (15%) женщин содержание показателя было выше 200 пг/мл.
Верхняя пороговая граница рассчитанного референтного интервала содержания sFas
в сыворотке крови в группе контроля составила 230 пг/мл.
Из 48 больных серозными ДНЯ у 6 (12,5%) sFas не был выявлен, у 20 (41,7%) значения sFas были менее 100 пг/мл, у 14 (29,2%) – находились в пределах от 100 до
200 пг/мл, у 4 (8,3%) – в пределах от 200 до 300 пг/мл и у 4 (8,3%) - выше 300 пг/мл.
Частота выявления sFas в сыворотке крови больных ДНЯ выше порогового его
уровня составила 12,5%.
У 4 (13,3%) больных серозным РЯ sFas не выявлен, у 14 (46,7%) его значения
не превышали 100 пг/мл, у 4 (13,3%) – были в пределах от 100 до 200 пг/мл и у 4
17
(13,3%) – в диапазоне от 200 до 300 пг/мл, у 4 (13,3%) - превышали 300 пг/мл.
Частота выявления sFas у больных серозным РЯ выше его порогового значения и
составила 26,7%, различия в группах достоверны. Диагностическая ценность sFas
при дооперационном распознавании серозных ДНЯ и РЯ недостаточна. Среднее
содержание sFas в сыворотке крови больных ДНЯ и РЯ достоверно выше по
сравнению с контролем (табл. 4).
Таблица 4.
Статистические характеристики sFas у больных серозными
новообразованиями яичников и в контроле
Уровень sFas в сыворотке крови (пг/мл)
Число
наблюдений
Пределы
Группа
Медиана
(частота
M [95%ДИ]
колебания
sFas
выявления)
sFas
Контроль
40 (100%)
94,3 [74,6-113,9]
72,9
31,7-274,0
ДНЯ
42 (87,5%)
152,1 [114,4-189,8]
103,8
45,4-506,3
РЯ
26 (86,7%)
174,5 [112,0-237,0]
88,0
40,0-611,2
Примечание: р1vs2=0,022; p1vs3=0,0058; p2-3=0,4.
При этом, среднее содержание показателя sFas в сыворотке крови больных РЯ
не отличалось достоверно от этого маркера при ДНЯ (табл. 4).
Во всех группах обследованных женщин отмечена тенденция к повышению
исходного содержания sFas с увеличением возраста, а при ДНЯ эти различия
статистически достоверны. Вместе с тем, у больных РЯ в возрасте ≥70 лет значения
sFas в сыворотке крови, напротив, снижались. Показано, что медианы показателя у
больных в возрасте <30 и ≥70 лет практически не различались и составили 73,5 и
78,0 пг/мл соответственно (табл. 5).
Таблица 5.
Статистические характеристики sFas в сыворотке крови здоровых женщин,
больных серозными ДНЯ и РЯ с учетом возраста
Уровень sFas в сыворотке крови (пг/мл)
Возраст,
Группа
N
Пределы
годы
M [95%ДИ]
Медиана
колебания
1
<30
32
84,0 [70,1-97,8]
72,9
42,0-162,6
Контроль
2
30-49
8
135,4 [43,7-227,1]
117,9
31,7-274,0
3
<30
6
114,1 [66,6-161,7]
103,8
69,4-169,1
4
30-49
8
101,8 [36,0-167,6]
79,7
45,4-180,3
ДНЯ
5
50-69
22 139,7 [78,7-200,6]
91,8
55,0-506,3
12 229,8 [134,3-325,3]
211,2
45,4-425,4
706
18
<307
6
73,5 [72,6-74,4]
8
30-49
4
214,5 [94,2-334,8]
РЯ
9
50-69
14 211,6 [95,3-327,9]
10
6
126,6 [0-278,4]
70
Примечание: р3vs6=0,04; p7vs9=0,029.
73,5
214,5
126,0
78,0
73-74
149-280
40-611,2
60-344,1
У больных ДНЯ достоверные различия в показателе sFas выявлены только при
сравнении пациенток в возрасте до 30 и старше 70 лет (р=0,04). Больные РЯ
достоверно различались по исходному уровню sFas только в возрасте до 30 лет и в
диапазоне от 50 до 70 лет (р=0,029).
Следует отметить, что у здоровых женщин в возрасте до 30 лет частота
выявления значений sFas выше его порогового уровня составила 0%, старше 30 лет
– 25%. В группе больных ДНЯ в возрасте до 70 лет частота выявления значений sFas
выше порогового уровня составила 5,6%, у больных старше 70 лет - 33,3%. У
больных РЯ частота выявления показателей sFas выше его порогового уровня не
зависела от возраста и колебалась в пределах 20-35%.
Исходный уровень sFas у больных новообразованиями яичников не зависел от
фазы менструального цикла. Обнаружили достоверно низкий уровень sFas в
сыворотке крови больных ДНЯ с наличием болей внизу живота по сравнению с
пациентками, у которых боли отсутствовали (медианы соответственно 69,0 и 169,5
пг/мл). У больных РЯ не отмечено связи уровней sFas с наличием симптома
абдоминальных болей.
В группе больных ДНЯ обнаружена обратная корреляционная зависимость
между максимальным размером первичной опухоли и содержанием sFas в
сыворотке крови (rs=-0,47; p=0,001). В то же время, у больных РЯ не выявлено
зависимости исходных значений sFas от размера первичной опухоли (rs=0,25;
p=0,18).
Не обнаружено достоверных различий в исходных уровнях sFas в сыворотке
крови больных РЯ и ДНЯ с учетом длительности анамнеза заболевания, числа родов
и абортов. Исходный уровень sFas не был связан со стадией серозного РЯ, степенью
дифференцировки опухоли и наличием асцита.
Таким образом, наименьшие концентрации sFas выявлены в группе контроля,
а наибольшие – у больных РЯ, при этом уровни sFas в контроле и у больных РЯ
19
различались достоверно, а у последних отмечена тенденция к повышению
содержания этого показателя при увеличении стадии заболевания и максимального
размера опухоли. При этом, диагностическая способность сывороточного sFas
недостаточна для использования его в клинической практике при новообразованиях
яичников.
Содержание FasL в сыворотке крови больных серозным РЯ, ДНЯ и в
контроле. FasL выявлен в сыворотке крови только у 2-х (5,0%) здоровых женщин, у
10 (31,3%) – с ДНЯ и у 24 (80,0%) - при РЯ (р=0,001), а медиана FasL у больных
серозным РЯ достоверно выше, чем серозными ДНЯ (табл. 6).
Верхняя пороговая граница референсного интервала содержания FasL в
сыворотке крови женщин группы контроля составила 0,2 нг/мл. Частота выявления
FasL в сыворотке крови здоровых женщин выше указанного порогового значения
составила 5%, у больных ДНЯ - 12,5%, а при РЯ - 73,3%, различия между группами
высокодостоверны
(р=0,0001).
Следовательно,
вероятность
распознавания
доброкачественного и злокачественного процесса в яичниках по данным исходного
уровня FasL достаточна высока. Стало быть, определение исходного уровня FasL в
сыворотке крови в дооперационной диагностике характера новообразования
яичников может быть полезно в дополнение к другим общепринятым методам
диагностики. При этом, исходные уровни FasL выше 0,2 нг/мл с большей
вероятностью указывают на злокачественный характер новообразования.
Таблица 6.
Статистические характеристики FasL в сыворотке крови здоровых женщин,
больных серозными ДНЯ и РЯ
Уровень FasL в сыворотке крови
Частота
Частота
(нг/мл)
выявления
Группа
выявления
FasL >0,2
Пределы
FasL
M [95%ДИ] Медиана
нг/мл
колебания
Контроль
2 (5,0%)
2 (5,0%)
0,36 [0,2-0,5]
0,361
0,33-0,39
(n=40)
ДНЯ
10 (31,3%)
4 (12,5%)
0,5 [0,1-0,8]
0,22
0,05-1,2
(n=32)
РЯ
24 (80,0%)
22 (73,3%)
1,2 [0,9-1,6]
1,13
0,2-2,8
(n=30)
Примечание: p2vs3=0,001.
20
Подводя итоги данного раздела исследования отметим, что при подозрении на
новообразование яичника определение исходного уровня FasL в сыворотке крови
можно использовать как дополнительный дифференциально-диагностический
маркер с целью выявления характера новообразования с учетом его порогового
уровня равного 0,2 нг/мл. Показано, что частота выявления и максимальное
значение FasL не изменялось достоверно с возрастом у больных серозным РЯ и
ДНЯ. Не обнаружили достоверных различий в частоте выявления FasL у больных
серозными новообразованиями яичников в 1-й и 2-й фазах менструального цикла.
Вместе тем, частота выявления уровней FasL >0,2 нг/мл в сыворотке крови больных
серозными ДНЯ и РЯ в постменопаузе составила соответственно 0 и 68,4%
(р=0,001), в* репродуктивном периоде - 33,3 и 80,0%.
Таким образом, диагностическая информативность исходного уровня FasL
>0,2 нг/мл в сыворотке крови была наибольшей при РЯ в постменопаузе. Кроме
того,
обнаружение
FasL
в
сыворотке
крови
женщин
с
серозными
новообразованиями яичников в концентрации >0,2 нг/мл с высокой вероятностью
указывает на злокачественный характер опухолевого процесса независимо от
репродуктивной функции.
При размерах новообразования более 8,0 см частота выявления уровней FasL
>0,2 нг/мл при ДНЯ и РЯ составила соответственно 50 и 100%, а при размерах
опухоли менее 8,0 см - 12,5 и 55,6%. При этом, длительность анамнеза болезни и
наличие абортов не были связаны с частотой выявления FasL у пациенток с ДНЯ. У
больных РЯ, напротив, частота выявления FasL в концентрации >0,2 нг/мл в
сыворотке крови при наличии абортов повышалась почти в 2 раза. Частота
выявления
и
более
высокие
уровни
FasL
(>2,0
нг/мл)
отмечены
при
генерализованной стадии серозного РЯ. Анализ уровней FasL в сыворотке крови с
учетом наличия асцита и степени дифференцировки РЯ не выявил достоверных
различий.
Таким образом, частота значений FasL >2 нг/мл минимальна в контроле, а
максимальна – у больных серозным РЯ. Различия в содержании FasL в контроле, у
больных серозными ДНЯ по сравнению с серозным РЯ достоверны.
21
Связь содержания ИЛ-6, sFas и FasL в сыворотке крови больных
серозным РЯ, ДНЯ и в контроле. В группе контроля не выявлено корреляционных
зависимостей между уровнями всех изучаемых маркеров. Однако у больных ДНЯ
обнаружена обратная достоверная зависимость между ИЛ-6 и FasL (rs=-0,41; p=0,02)
и положительная зависимость между FasL и sFas (rs=0,51; p=0,003). В группе
больных серозным РЯ выявлена прямая достоверная зависимость между ИЛ-6 и
FasL (rs=0,39; p=0,03).
Больные серозным РЯ характеризуются одновременным повышеннием
значений как ИЛ-6, так и sFas при пониженном содержании FasL, либо
повышенными уровнями ИЛ-6 и FasL при пониженном значении sFas.
Дискриминантный анализ показал высокую эффективность использования
всех
трех
маркеров
(ИЛ-6,
sFas,
FasL)
в
сыворотке
крови
больных
новообразованиями яичников при дооперационной диагностике, специфичность
теста составила 93,8%, чувствительность 70,0%. Применение других клинических
признаков – размера опухоли, возраста пациенток, наличия болей внизу живота
повышало чувствительность теста до 80,0%, представительность до 100%, а общая
эффективность теста составила 95,2%, что является очень хорошим результатом.
Отметим, что данным тестом ошибочно были отнесены к группе ДНЯ больные
серозным РЯ в возрасте до 30 лет. Таким образом, целесообразно определение
исходно всех 3-х выше указанных маркеров в сыворотке крови женщин с
подозрением на новообразование яичника.
Выводы
1. Средний уровень ИЛ-6 в сыворотке крови здоровых женщин, больных
серозными ДНЯ и РЯ достоверно различался и составил соответственно 1,4, 2,4 и
6,3 пг/мл, а при концентрации менее 2 пг/мл указывал на отсутствие
злокачественного характера опухолевого процесса в яичниках с вероятностью 88%.
При этом, показатели ИЛ-6 у больных серозными ДНЯ и РЯ повышались с
увеличением возраста, в постменопаузе и при наличии абортов в анамнезе.
2. У больных простыми серозными кистами яичников уровень ИЛ-6 составил 0,9
пг/мл и не отличался от такового в контроле, но был достоверно ниже при серозной
цистаденоме яичника (2,6 пг/мл), а при серозной аденокарциноме яичника зависел
22
от стадии опухолевого процесса и был достоверно ниже во II и III стадиях (5,5
пг/мл), чем в IV (8,3 пг/мл).
3. Частота выявление и уровни sFas в сыворотке крови здоровых женщин,
больных серозными ДНЯ и РЯ не различались.
4. Частота выявления FasL в сыворотке крови здоровых женщин, больных
серозными ДНЯ и РЯ достоверно различалась и составила 5, 31,3 и 80%
соответственно. Средний уровень FasL был достоверно выше у больных серозной
аденокарциномой по сравнению с контролем и серозными ДНЯ (1,2, 0,36 и 0,5 нг/мл
соответственно). Показатель FasL >0,2 нг/мл может быть использован как
дополнительный маркер в диагностике серозных новообразований яичников,
информативность теста выше у больных в постменопаузе, при наличии
абдоминальных болей, родов и абортов в анамнезе.
5. Не выявлено корреляционных зависимостей между уровнями изученных
маркеров в контроле, тогда как у больных серозными ДНЯ обнаружена достоверная
отрицательная корреляция между показателями ИЛ-6 и FasL (rs=-0,41; p=0,02) и
достоверная положительная между FasL и sFas (rs=0,51; p=0,003), а у больных
серозной аденокарциномой яичника обнаружена прямая достоверная зависимость
между ИЛ-6 и FasL (rs=0,4; p=0,03).
6. Дискриминантный анализ показал высокую эффективность использования
исходных показателей маркеров (ИЛ-6, sFas, FasL) в сыворотке крови больных
новообразованиями яичников в дооперационной диагностике: специфичность теста
составила 93,8%, чувствительность 70,0%. Применение других клинических
признаков – максимального размера первичной опухоли, возраста пациенток,
наличия симптома боли внизу живота повышало чувствительность теста до 80,0%,
специфичность до 100%, а общая эффективность теста составила 95,2%.
Практические рекомендации
1. Показатель FasL ≥0,2 нг/мл может быть использован как дополнительный
маркер в диагностике серозных новообразований яичников, а информативность
этого теста выше у больных в постменопаузе, с симптомом болей внизу живота,
наличием родов и абортов в анамнезе.
23
2. Обнаружена высокая эффективность использования исходных показателей
маркеров (ИЛ-6, sFas, FasL) в сыворотке крови больных новообразованиями
яичников в дооперационной диагностике: представительность теста составила
93,8%, чувствительность 70,0%. Применение других клинических признаков –
максимального размера первичной опухоли, возраста пациенток, наличия симптома
боли внизу живота повышало чувствительность теста до 80,0%, специфичность до
100%, общая эффективность теста составила 95,2%.
Список работ, опубликованных по теме диссертации
1. Бахоева К.А., Высоцкий М.М., Лякина Л.Т., Ермилова В.Д., Манухин И.Б.
Сравнительный анализ уровней растворимого Fas-антигена и Fas-лиганда в
сыворотке крови больных новообразованиями яичников и у практически здоровых
женщин. В материалах конгресса «Национальные дни лабораторной медицины
России» (7-9 октября Москва, 2008г.) // Клиническая лабораторная диагностика.2008.-№9.-с.23-23.
2. Высоцкий М.М., Бахоева К.А., Аббасова Г.С., Лякина Л.Т., Дигаева М.А.,
Ермилова В.Д., Манухин И.Б. Растворимый Fas-антиген в сыворотке крови больных
с новообразованиями яичников // В материалах XII Российского онкологического
конгресса (Москва, 18-20 ноября 2008г.).-М.-2008.-с.198-199.
3. Бахоева К.А., Высоцкий М.М., Аббасова С.Г., Лякина Л.Т., Ермилова В.Д.,
Манухин И.Б. Уровни растворимого Fas-антигена в сыворотке крови больных
новообразованиями яичников // В материалах Всероссийской конференции с
международным участием «Молекулярная онкология» (Новосибирск, 1-3 октября
2008г.).-Новосибирск.-2008.-с.79-80.
4. Дигаева М.А., Высоцкий М.М., Бахоева К.А., Крюк Ю.В., Аббасова С.Г.,
Манухин И.Б., Тулеуова А.А., Липкин В.М. Сравнительный анализ уровней
растворимого Fas у больных раком и доброкачественными новообразованиями
яичников // В материалах XVI Российского национального конгресса «Человек и
лекарство» (Москва, 6-10 апреля 2009г.).-2009.-с.86.
5. Аббасова С.Г., Высоцкий М.М., Овчинникова Л.К., Обушева М.Н.,
Дигаева М.А., Бритвин Т.А., Бахоева К.А., Карабекова З.К., Казанцева И.А.,
24
Мамедов У.Р., Манухин И.Б., Давыдов И.М. Онкологические заболевания и
растворимый Fas // Бюлл. Экспер. Биол. Мед.-2009.-том 148, №10.-с.442-446.
6. Манухин И.Б., Бахоева К.А., Овакимян М.А. Сравнительный анализ уровней
растворимого Fas и фактора роста эндотелия сосудов в сыворотке крови больных
серозными новообразованиями яичников // В материалах XXII международного
конгресса с курсом эндоскопии «Новые технологии в диагностике и лечении
гинекологических заболеваний» (Москва, 8-11 июня 2009г.).-М.-2009.-с.59-60.
7. Дигаева М.А., Бахоева К.А., Крюк Ю.В., Высоцкий М.М., Аббасова С.Г.,
Кузнецов В.В. Фактор роста эндотелия сосудов и растворимый Fas в сыворотке
крови больных новообразованиями яичников // В материалах Международной
конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва 10-11 ноября
2009г.).-М.-ММА им. Сеченова И.М.-2009.-с.81-82.
8. Высоцкий М.М., Дигаева М.А., Бахоева К.А., Крюк Ю.В., Кушлинский
Д.Н., Аббасова С.Г., Кузнецов В.В., Лактионов К.П. Маркеры ангиогенеза, Fasзависимого апоптоза и лептин в сыворотке крови больных раком и
доброкачественными новообразованиями яичников // Вопросы биологической,
медицинской и фармацевтической химии.-2009.-№6.-с.25-29.
9. Высоцкий М.М., Дигаева М.А., Кушлинский Н.Д., Аббасова С.Г.,
Лактионов К.П., Ермилова В.Д., Бахоева К.А., Крюк Ю.В., Манухин И.Б. sFas,
лептин и VEGF в сыворотке крови больных раком и доброкачественными
новообразованиями яичников // Бюлл. Экспер. Биол. Мед.-2009.-том 148, №11.с.564-568.
10. Высоцкий М.М., Дигаева М.А., Крюк Ю.В., Шарашинидзе О.А., Бахоева
К.А., Кушлинский Д.Н., Галдава Д.Г., Манухин И.Б., Адамян Л.В. Сывороточные
маркеры у больных новообразованиями яичников // В материалах XVII Российского
национального конгресса «Человек и лекарство» (Москва, 12-16 апреля 2010г.).-М.2010.-с.70.