VitriFreeze medium VitriThaw medium Введение
advertisement
VitriFreeze medium VitriThaw medium VitriFreeze medium – набор сред для витрификации человеческих эмбрионов VitriThaw medium – набор сред для оттаивания человеческих эмбрионов VitriFreeze medium и VitriThaw medium стерилизованы стерильной фильтрацией Введение Витрификация - это способ хранения при экстремально низкой температуре без предварительного замораживания. Может быть более популярным, чем традиционная медленная заморозка. Из-за различности результатов после медленной разморозки бластоцист, витрификация представлена как альтернативный метод. Успех витрификации достигнут благодаря быстроте процедуры. Практика нескольких лет витрификации бластоцист и эмбрионов явилась результатом большого числа беременностей. Для завершения отработки технологии витрификации бластоцист, используются витрификационные наборы «High Security» CryoBioSystem (Франция). Набор состоит из пластикового держателя, соломинки и капиллярной трубки со специальным желобком, который позволяет легко набирать и сохранять бластоцисты в очень малом объеме витрификационного раствора, проводить более быструю заморозку и разморозку, в сравнении с результатами, достигнутыми с использованием в жидком азоте запечатанных пластиковых соломинок 0.25 мл. Общая информация VitriFreeze medium и VitriThaw medium (VitriFreeze/Thaw) – это наборы сред для витрификации и оттаивания человеческих эмбрионов. VitriFreeze medium и VitriThaw medium (VitriFreeze/Thaw) - ДМСО/ этиленгликолевая базовая витрификационная среда, содержащая фосфатный буфер, сахарозу, фиколь, человеческий альбумин, тестированный на HIV и гепатит. VitriFreeze medium и VitriThaw medium (VitriFreeze/Thaw) не содержат антибиотиков. VitriFreeze medium / VitriThaw medium (VitriFreeze/Thaw) и эмбриональные культуры VitriFreeze medium и VitriThaw medium используются в комбинации со средами FertiPro для культивирования, такими как FertiCult Flushihg, FertiCult IVF/FIV, FertiCult G 3 medium как до замораживания и так и после оттаивания. Материалы, включенные в набор VitriFreeze medium 1флакон – 5мл – VitriFreeze Pre-incubation medium - пре-инкубационная среда 1флакон – 1 мл – VitriFreeze Freezing medium1 – замораживающая среда 1 этап 1флакон – 1 мл – VitriFreeze Freezing medium2 – замораживающая среда 2 этап VitriThaw medium 1флакон – 5 мл – VitriThaw Thawing1 - Оттаивающая среда 1 этап 1флакон – 1 мл – VitriThaw Thawing 2 - Оттаивающая среда 2 этап 1флакон – 1 мл – VitriThaw Thawing 3 - Оттаивающая среда 3 этап 1флакон – 1 мл – VitriThaw Thawing 4 - Оттаивающая среда 4 этап Материалы, не включенные в набор Планшеты с лунками (e.g. Nunc 144 444) Замораживающая ёмкость с жидким азотом Водяная баня 37°С Дозирующие пипетки Держатель Набор для витрификации «High Security Vitrification kit», CryoBioSystem Ламинарный шкаф микроскоп таймер Метод Убедитесь, что все среды хорошо размешены перед использованием. Проверьте, нет ли взвесей или помутнения. При наличии осадка не использовать Процедура проводится в ламинарном потоке, во избежание загрязнения растворов Тщательно ознакомьтесь с инструкцией перед началом работы Подготовка к процедуре В четырех- луночной чашке заполните первую лунку по 300 мкл VitriFreeze Pre-incubation medium , вторую – VitriFreeze Freezing medium1 и в третью – VitriFreeze Freezing medium2. Далее откройте столько соломинок, сколько необходимо для витрификации, имея в виду, что 1 соломинка удерживает до 2-х эмбрионов. Поочередно разложите составные части соломинок в ламинарном шкафу для упрощения их дальнейшего использования в процедуре. Подготовка к замораживанию Перенесите эмбрионы из среды, где они находятся в витрификационные растворы по следующей схеме Замораживающая процедура Время нахождения эмбрионов в витрификационных растворах: Стадия Ранние бластоцисты, морулы Бластоцисты увеличенные Бластоцисты увелич+ искуств. сморщенные* Pre-incubation medium - пре-инкубационная среда 2 мин. Freezing medium1 – замораживающая среда 1 этап 2 мин. Freezing medium 2 – замораживающая среда 2 этап 30 сек. Температура 2 мин. 3 мин. 30 сек. 37˚С 2 мин. 2 мин. 30 сек. Комн. температ. Комн. температ. *Примечание: Для сокращения негативного эффекта от бластоцель при витрификации, увеличенные бластоцисты должны быть редуцированны с помощью пипетки до начала процедуры витрификации. Витрификация 1. Используя дозирующую пипетку, поместите максимум 2 бластоцисты, подходящего объёма, в растворе «ВЗ 2»приблизительно 0.3 мкл, в желобок капилляра. 2. Поместите капилляр желобком с эмбрионами внутрь в открытую часть витрификационной соломинки и запечатайте, следуя инструкции 3. Опустите запечатанную соломинку в жидкий азот Оттаивание 1. Извлеките соломинку из вскрытой системы, следуя инструкции. 2. Немедленно поместите соломинку в предварительно нагретую витрификационную жидкость Thawing1 - Оттаивающая среда 1 этап - 37˚С и оставьте на 3 минуты 3. Перенесите в Thawing 2- Оттаивающая среда 2 этап (37˚С) и оставьте на 2 минуты 4. Перенесите в Thawing 3- Оттаивающая среда 3 этап (37˚С) и оставьте на 2 минуты 5. Наконец поместите в Thawing 4- Оттаивающая среда 4 этап (37˚С) и промывайте в течение 1 минуты 6. Перенесите в среду для бластоцист для дальнейшего культивирования Хранение Хранить при температуре 2-8˚С Предостережения Все человеческие органические материалы должны рассматриваться как потенциально инфицированные. Обращайтесь со всеми экземплярами как способными передавать ВИЧ и гепатит. Соблюдайте меры предосторожности! Все компоненты крови должны рассматриваться как потенциально инфицированные. Источники материалов, из которых эти компоненты получены, показали отрицательный результат при тестировании на антитела HIV, HBc, HCV и HTLV 1/2 и отрицательную реакцию на HbsAg, HCV RNA и HIV-1 RNA и сифилис. Известные на сегодняшний день методы подтверждают, что продукты, полученные из крови человека, не переносят какие-либо инфекции. VitriFreeze medium и VitriThaw medium не содержат антибиотиков. Всегда работайте в ламинарном потоке во избежание контаминации. Влияние длительного хранения витрифицированных эмбрионов с использованием данной среды на деторождение - не установлено. Не использовать при помутнении!
