Автореферат диссертации - Всероссийский Научный Центр по

На правах рукописи
Полянская Оксана Сергеевна
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИНГИБИТОРА АРГИНАЗ L-НОРВАЛИНА ДЛЯ
КОРРЕКЦИИ L-NAME-ИНДУЦИРОВАННОГО ГЕСТОЗА В
ЭКСПЕРИМЕНТЕ
14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Старая Купавна - 2013
Работа выполнена в Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет»
Научные руководители:
доктор медицинских наук, профессор
Покровский Михаил Владимирович,
доктор медицинских наук
Иванова Оксана Юрьевна
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор кафедры семейной
медицины Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский
университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации
Утешев Даниил Борисович
кандидат медицинских наук, доцент, и.о. заведующего
кафедрой фармакологии Государственного бюджетного
образовательного учреждения высшего профессионального образования Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации
Пашин Евгений Николаевич
Ведущая организация:
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский
университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Защита состоится «___» ___________ 2013 года в «____» часов на заседании
диссертационного совета Д 217.004.01, созданного на базе ОАО «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ» (ОАО
«ВНЦ БАВ», 142450, Московская область, Ногинский район, г. Старая Купавна,
ул. Кирова, 23).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ОАО «ВНЦ БАВ».
Автореферат разослан «___» ___________ 2013 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
доктор медицинских наук
Яснецов Виктор Владимирович
2
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность научного исследования
Гестоз представляет собой острую, актуальную проблему современной
акушерско-гинекологической службы, что обусловлено в первую очередь высокой заболеваемостью и наличием осложнений для матери и плода. Несмотря
на значительные достижения в диагностике и лечении, гестоз по-прежнему
остается грозным заболеванием второй половины беременности. По данным
различных авторов, частота его встречаемости колеблется от 6 до 25% (Колгушкина Т.Н., 2000; Савельева Г.М., 2003; Крукиер И.И., 2009). В связи с тем,
что этиология и патогенез гестоза в настоящее время остаются до конца не выясненными, актуальной проблемой до сих пор является поиск эффективных
методов лечения этого осложнения беременности.
Многочисленные факты свидетельствуют о том, что клинические проявления гестоза обусловлены развитием патологических изменений в эндотелии
кровеносных сосудов, которые связаны с нарушением регуляции их тонуса
и реологических свойств крови (Климов В.А., 2006; Марков Х.М., 2005;
Böger R. H., 2009). В последние годы обнаружено, что пусковым моментом
развития данной патологии может являться повышение концентрации в материнской плазме метилированных аналогов L-аргинина асимметричного диметиларгинина (ADMA) и монометиларгинина (L-NMMA) (Fliser D., 2005; Perticone F., 2009; Pope A. J., 2009) , являющихся эндогенными ингибиторами эндотелиальной NO-синтазы (еNOS).
Сегодня принципы терапии гестоза заключаются в создании лечебноохранительного режима, восстановлении функции жизненно важных органов,
быстром и бережном родоразрешении. Восстановление функции жизненно
важных органов наряду с гипотензивной (сульфат магния, антагонисты кальция, β-блокаторы, центральные адреномиметики, спазмолитические препараты), инфузионно-трансфузионной и дезинтоксикационной терапией, нормализацией водно-солевого обмена, реологических и коагуляционных свойств крови, улучшением маточно-плацентарного кровотока включает в себя нормализацию структурно-функциональных свойств клеточных мембран (Савельева Г.М.,
2010). Однако существующие принципы терапии гестоза формировались без
учета целенаправленной коррекции NO-продуцирующей функции эндотелия.
С учетом того, что в настоящее время ключевую роль в патогенезе гестоза отводят эндотелиальной дисфункции, перспективным направлением воздействия на фармакологическую мишень «ADMA-еNOS» является использование
ингибиторов аргиназ. Механизм действия данных веществ заключается в блокировании фермента аргиназы, а следовательно, в нарушении превращения Lаргинина в орнитин и мочевину. Таким образом, большее количество Lаргинина расщепляется под действием NO-синтазы с образованием оксида азота. В конечном итоге механизм действия сводится к восстановлению NOсинтезирующей функции и уменьшению дисфункции эндотелия (Ming X.F.,
2009).
3
Среди фармакологических агентов, планируемых к комплексному изучению в контексте вышеизложенного, предполагается исследование эффективности ингибитора аргиназы L-норвалина (производства "WIRUD JmgH", Гамбург), центрального α-адреномиметика метилдопа («Допегит», производства
Egis, Венгрия) и блокатора кальциевых каналов амлодипина («Амлотоп», производства «Макизфарма», Россия), а также их сочетанного применения.
Работа выполнена по инициативному плану, включена в программу «Разработка и совершенствование методов ранней диагностики, лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний с целью улучшения качества и увеличения продолжительности жизни больных» на 2007–2012 гг., номер госрегистрации 0120.0710379. Исследование поддержано Грантом на поддержку научных исследований в рамках реализации федеральной целевой программы
«Научные и научно-педагогические кадры инновационной России на 2009-2013
годы», соглашение № 14.132.21.1337.
Цель исследования: провести комплексное сравнительное изучение влияния ингибитора аргиназ L-норвалина, метилдопы и амлодипина и их сочетанного использования на течение экспериментального L-NAME-индуцированного
гестоза.
Задачи исследования:
1.
Оценить развитие экспериментального L-NAME-индуцированного
гестоза с использованием результатов функциональных проб, оценки плацентарной микроциркуляции, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.
2.
Изучить влияние метилдопы на течение экспериментального LNAME-индуцированного гестоза с использованием результатов функциональных проб, оценки плацентарной микроциркуляции, биохимических маркеров и
результатов морфологических исследований.
3.
Изучить влияние амлодипина на течение экспериментального LNAME-индуцированного гестоза с использованием результатов функциональных проб, оценки плацентарной микроциркуляции, биохимических маркеров и
результатов морфологических исследований.
4.
Изучить влияние ингибитора аргиназ L-норвалина на течение экспериментального L-NAME-индуцированного гестоза с использованием результатов функциональных проб, оценки плацентарной микроциркуляции, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.
5.
Изучить влияние комбинированного применения ингибитора аргиназ L-норвалина с метилдопой на течение экспериментального L-NAMEиндуцированного гестоза с использованием результатов функциональных проб,
оценки плацентарной микроциркуляции, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.
6.
Изучить влияние комбинированного применения ингибитора аргиназ L-норвалина с амлодипином на течение экспериментального L-NAMEиндуцированного гестоза с использованием результатов функциональных проб,
оценки плацентарной микроциркуляции, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.
4
Научная новизна исследования
В работе впервые разработан комплекс методических подходов для оценки морфофункциональных нарушений, возникающих при моделировании экспериментального L-NAME-индуцированного гестоза, соответствующего
ADMA-подобной патологии у беременных женщин. Показано, что экспериментальный L-NAME-индуцированный гестоз у животных характеризуется развитием выраженной артериальной гипертензии, нарушениями плацентарной микроциркуляции, деструктивными изменениями в плаценте, протеинурией и морфологическими гипертензивно обусловленными изменениями в почечной ткани. Параллельно развивается комплекс изменений, характерных для эндотелиальной дисфункции, выражающейся в изменении соотношений сосудистых реакций на ацетилхолин (АХ) (эндотелийзависимая вазодилатация) и нитропруссид (НП) (эндотелийнезависимая вазодилатация) с увеличением коэффициента
эндотелиальной дисфункции (КЭД) в 2,4 раза, выраженным спазмом мелких
артерий в плаценте и почках и резким снижением показателей биохимических
маркеров (Тоtal NO, экспрессия еNOS).
Препараты, входящие в стандартную гипотензивную терапию гестоза
(центральный α2-адреномиметик метилдопа и блокатор кальциевых каналов
амлодипин), уменьшают морфофункциональные нарушения при коррекции LNAME-индуцированного гестоза у крыс, однако выраженность этого эффекта
не достигает целевого уровня.
В работе впервые показано, что ингибитор аргиназ L-норвалин в дозе
10 мг/кг/сут, вводимый однократно внутрижелудочно с 14 по 20 сутки беременности, оказывает выраженное протективное действие при коррекции экспериментального L-NAME- индуцированного гестоза у крыс, заключающееся в
нормализации плацентарной миркоциркуляции и КЭД, предотвращении протеинурии, в восстановлении в полной мере содержания нитрит-ионов NOx и экспрессии eNOS, улучшении морфологической картины в плаценте и почках.
Комбинация ингибитора аргиназ L-норвалина с препаратами, входящими
в стандартную гипотензивную терапию гестоза, при коррекции морфофункциональных нарушений у крыс с экспериментальным L-NAME-индуцированным
гестозом, оказывает наиболее выраженный эффект за счет воздействия на различные звенья патогенеза.
Научно-практическая значимость
В работе обоснована эффективность применения ингибитора аргиназ Lнорвалина в качестве монотерапии и в сочетании с метилдопой и амлодипином
при экспериментальном L-NAME-индуцированном гестозе. Показано, что
использование L-норвалина позволяет нормализовать плацентарную
микроциркуляцию, предотвратить альбуминурию, а также восстановить регуляцию сосудистого тонуса, предотвратить снижение NO-продуцирующей
функции эндотелия. Полученные данные позволяют рекомендовать
целенаправленные клинические испытания L-норвалина для профилактики и
лечения гестоза как в монотерапии, так и в сочетании с препаратами стандартной гипотернзивной терапии.
5
Внедрение результатов научных исследований
На основании данных диссертационного исследования запланировано
проведение целенаправленных клинических исследований ингибитора аргиназ
L-норвалина, а также его комбинаций с препаратами, входящими в стандартную гипотензивую терапию гестоза.
Материалы диссертационного исследования, касающиеся эндотелиопротективной активности L-норвалина, включены в состав документов для промышленного выпуска нового оригинального препарата, содержащего в своём
составе L-аргинин и L-норвалин (ООО «Новосибхимфарм»).
Полученные результаты используются в учебных программах кафедр
фармакологии, клинической фармакологии Курского государственного медицинского университета, кафедры фармакологии Орловского государственного
университета и кафедры фармхимии и фармакогнозии, фармакологии и фармацевтических дисциплин, биохимии и фармакологии Белгородского государственного университета, кафедры фармакологии Воронежской медицинской
академии.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Моделирование экспериментального L-NAME-индуцированного гестоза у беременных животных характеризуется морфофункциональными нарушениями, типичными для клинических проявлений гестоза.
2. Введение препаратов, входящих в стандартную гипотензивную терапию гестоза, – метилдопы и амлодипина - животным с экспериментальным гестозом приводило к коррекции морфофункциональных нарушений, однако целевого уровня не достигало. Использование ингибитора аргиназ L-норвалина
оказывало более выраженный протективный эффект в сравнении с препаратами, входящими в стандартную гипотензивную терапию гестоза.
3. Комбинированное использование ингибитора аргиназ L-норвалина с
препаратами, входящими в стандартную гипотензивную терапию гестоза, оказывает наиболее выраженный эффект в сравнении с применением их в монотерапии за счет воздействия на различные звенья патогенеза.
Апробация работы. Материалы работы доложены на итоговых научных
сессиях и конференциях молодых ученых Курского государственного медицинского университета в 2010, 2011 и 2012 гг., ХVII национальном конгрессе «Человек и лекарство», II Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация – потенциал будущего», III Всероссийском научно-практическом семинаре «Методологические аспекты экспериментальной и клинической фармакологии» (Волгоград, 2011), X
итоговой научно-практической конференции клинических ординаторов, интернов, молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной
медицины» НИУ БелГУ, конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» (Франция, Париж, 2012), конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» (Россия, Сочи, 2012), IV
съезде фармакологов России «Инновации в современной фармакологии» (Казань, 2012). Апробация диссертации проведена на заседании Института последипломного образования Федерального государственного автономного образо6
вательного учреждения высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет».
Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в выборе
направления исследования, постановке цели и поиске путей её достижения.
Проанализированы отечественные и зарубежные источники по теме
диссертации, на основании чего выдвинуты рабочие гипотезы о возможных
фармакотерапевтических стратегиях и биологических моделях для
исследования эндотелиопротективной активности выбранных веществ и
препаратов. Вклад автора является определяющим и заключается в
непосредственном участии на всех этапах исследования. Доля личного участия
90%.
В опубликованных работах, выполненных в соавторстве, автором лично
проведена разработка дизайна и протокола
исследования, определены
ключевые критерии оценки морфофункциональных нарушений при
моделировании исследуемой патологии и оценки эффективности вводимых
тестируемых препаратов. При непосредственном участии автора проводилось
выведение животных из эксперимента с регистрацией физиологических
показателей и проведением функциональных проб on-line с помощью
программного комплекса "AcqKnowledge версии 3.8.1", забор тканей и органов
для биохимического и морфологического исследований, биохимические и
морфологические исследования, статистическая обработка полученных данных,
научное обоснование, обобщение и представление полученных результатов.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 23 печатных работы,
из них 9 в российских рецензируемых научных журналах, включённых в
перечень изданий, рекомендованных ВАК для публикаций результатов
диссертаций. В работах полностью отражено содержание диссертации.
Получено 3 патента РФ на изобретения.
Структура и объём работы. Диссертация состоит из введения, обзора
литературы, материалов и методов, результатов исследования и их обсуждения,
выводов и списка литературы, включающего 173 источника, из них
47 отечественных и 126 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 129
страницах машинописного текста, содержит 14 таблиц, 44 рисунка.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Моделирование L-NAME-индуцированного гестоза
Эксперимент выполнен на 350 белых крысах-самках линии Wistar массой
250–300 г. Для исследования взяты крысы без внешних признаков заболевания,
прошедшие карантинный режим вивария Белгородского государственного университета. В ходе эксперимента животные содержались в условиях стандартной экспериментальной биологически чистой комнаты, температура
воздуха составляла 22-24 С, освещение – 12 ч/12 ч светлый/темный цикл,
все крысы получали гранулированный корм и фильтрованную водопроводную
воду. Все исследования проводили в одно и то же время суток во второй половине дня с соблюдением принципов, изложенных в «Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных
7
целей» (Страсбург, 1986). Для формирования групп беременных животных с
заданными сроками, находящимся на раздельном содержании самкам (3 животных) подсаживали самцов (2 животных) на 24 часа. Затем животных рассаживали и через 14 суток в условии эфирного сна пальпаторно определяли
наличие беременности. В наших экспериментах беременность наступала в 3040%. ADMA-подобный агент - неселективный блокатор NO-синтазы N-нитроL-аргинин-метиловый эфир (L-NAME) вводили внутрибрюшинно в дозе
25 мг/кг/сут в течение семи дней (14-20 сутки беременности). По данным литературы, такой умеренно пролонгированный среднедозовый режим введения LNAME вызывает блокаду NO-синтазы в эндотелии плацентарных сосудов, что
приводит к деструктивным изменениям в тканях плаценты, артериальной гипертензии и протеинурии.
Оценка степени развития эндотелиальной дисфункции при моделировании патологии
Развитие эндотелиальной дисфункции у экспериментальных животных, а
также степень ее коррекции исследуемыми препаратами и их комбинациями
оценивали по расчетному коэффициенту эндотелиальной дисфункции (КЭД).
Формула расчета коэффициента эндотелиальной дисфункции впервые предложена в лаборатории кардиофармакологии НИИ экологической медицины коллективом авторов под руководством профессора М.В. Покровского.
Предложенный коэффициент эндотелиальной дисфункции является отношением площади треугольника над кривой восстановления АД в ответ на
введение НП (30 мкг/кг) (SНП) к площади треугольника над кривой восстановления АД в ответ на введение АХ (40 мкг/кг) (SАХ):
S
КЭД = НП
SАХ
Оценка плацентарной микроциркуляции
Для получения данных о состоянии микроциркуляции в плаценте на 21
сутки беременности, под наркозом, в 5 точках измеряли уровень микроциркуляции на расстоянии 1 мм от края плацентарного диска. Для получения данных
о состоянии микроциркуляции в плаценте использовали оборудование производства компании "Biopacsystems": полиграф MP100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) LDF100C и инвазивным игольчатым датчиком
TSD144, который устанавливался непосредственно на проекцию плацентарного
диска. Регистрация и обработка результатов ЛДФ производились с помощью
программы "AcqKnowledge версии 3.8.1"; значения микроциркуляции выражались в перфузионных единицах (ПЕд) - среднее из 5 измерений.
Исследование протеинурии
Сбор мочи у интактных и опытных групп крыс проводился с использованием специальных метаболических клеток. Животное помещалось в клетку на
12 часов с обеспечением свободного доступа к воде.
Определение биохимических маркеров эндотелиальной дисфункции
Использована модификация метода определения стабильных метаболитов
NO, позволяющая после депротеинизации сыворотки крови проводить одноэтапное количественное определение суммарных нитратов и нитритов (Метель8
ская В.А., Гуманова Н.Г., 2005). Принцип метода заключается в одновременном
восстановлении нитратов в нитриты в присутствии хлористого ваннадия и реакции диазотирования с последующим развитием окраски. Уровень экспрессии
эндотелиальной синтазы оксида азота (e-NOS) определяли в клеточном лизате
по методу Хендриксона (Метельская В.А., Гуманова Н.Г., 2002).
Морфологические методы оценки изменений в плаценте и почках
при моделировании L-NAME-индуцированного гестоза
Для морфологического подтверждения развития моделируемых патологических процессов и комплексной оценки эффективности препаратов проведено гистологическое исследование (во всех сериях эксперимента), почек и
плаценты. Материал фиксирован в 10% формалине с последующей заливкой в
парафин. Срезы почек производили перпендикулярно основной оси органа через лоханку. Гистологические срезы плаценты производили в строго вертикальном направлении через середину плацентарного диска с захватом всех слоев плаценты и стенки рога матки. Изучение микропрепаратов, фотопротоколирование и морфометрию проводили на микроскопе Leica DM4000B с системой
видеорегистрации и обработки изображений. При всех морфологических исследованиях использовали окраску гематоксилином и эозином. Для возможности сравнения морфологические изменения оценивали в рангах. Иммуногистохимическим исследованием определяли экспрессию эндотелиальной NOсинтазы (eNOS).
Обоснование доз исследуемых фармакологических агентов и дазайн
эксперимента
В рамках данной работы проведено исследование эндотелиопротективной
активности ряда фармакологических агентов.
Метилдопа («Допегит», производства Egis, Венгрия) вводился в дозе
0,043 г/кг ×2 р/сут внутрь с 14 по 20 сутки беременности. Доза соответствует
суточной дозировке для человека 1000 мг/сут, пересчитана с учётом соотношения поверхности тела биологического объекта к его массе по общепринятой
формуле межвидового переноса доз И. П. Улановой.
Амлодипин («Амлотоп», производства «Макизфарма», Россия) вводили в
дозе 0,5 мг/кг/сут однократно внутрь с 14 по 20 сутки беременности. Доза выбрана в соответствии с литературными данными, где описано эффективное гипотензивное и кардиопротективное действие препарата в экспериментах, ранее
проведённых в нашей лаборатории.
L-норвалин ("WIRUD JmgH", Гамбург) вводился в дозе 10 мг/кг/сут
внутрь однократно с 14 по 20 сутки беременности. Согласно данным современных исследователей, именно начиная с этой дозировки L-норвалин способен ингибировать фермент аргиназу (Ming X. F., 2009).
При комбинированном применении препаратов использовались те же дозы, пути и продолжительность введения.
Дизайн эксперимента состоит из следующих блоков:
1. Контрольная группа (животные с пероральным введением NaCl в эквивалентных дозах с 14 по 20 сутки беременности).
9
2. Моделирование экспериментального L-NAME-индуцированного гестоза (животные с внутрибрюшинным введением L-NAME в дозе 25 мг/кг/сут с 14
по 20 сутки беременности).
3. Оценка эффективности коррекции морфофункциональных нарушений
с использованием метилдопы (0,086 г/кг/сут), амлодипина (0,5 мг/кг).
4. Оценка эффективности коррекции морфофункциональных нарушений
с использованием ингибитора аргиназ L-норвалина (10 мг/кг).
5. Оценка эффективности коррекции морфофункциональных нарушений
с использованием комбинации ингибитора аргиназ L-норвалина (10 мг/кг) с метилдопой (0,086 г/кг/сут) и амлодипином (0,5 мг/кг)
Протокол эксперимента состоит из следующих разделов:
1.
Спаривание животных и пальпаторное определение факта беременности на 14 сутки.
2.
Моделирование L-NAME-индуцированного гестоза у беременных
крыс (с 14 по 20 сутки) и его коррекция с помощью метилдопы, амлодипина, Lнорвалина, и их сочетаний в течение 7 суток.
3.
Помещение животных на 20 сутки в метаболическую клетку и сбор
суточной мочи с последующим определением протеинурии.
4.
На 21 сутки беременности в условиях наркоза хлоралгидратом
вскрытие брюшной полости и оценка плацентарной микроциркуляции.
5.
Оценка эндотелийзависимых и эндотелийнезависимых реакций артериального давления на внутривенное одномоментное введение ацетилхолина
и нитропруссида натрия.
6.
Взятие венозной крови, грудного отдела аорты для определения
биохимических маркеров. Взятие почек и плаценты для патоморфологических
исследований.
Статистическая обработка результатов исследования
Цифровые данные обрабатывали методами вариационной статистики: вариационные ряды проверяли на нормальность распределения, при его соблюдении количественные величины характеризовали средней арифметической (М) и
ошибкой средней (m), статистическую значимость количественных величин
оценивали по критерию Стьюдента (t); полуколичественные величины выражали медианой (Ме), а статистическую значимость различий между ними характеризовали с помощью непараметрического критерия Хи-квадрат (χ2). Все расчеты выполнены с помощью пакета статистических программ Microsoft Excel
7.0.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Исследование динамики функциональных, биохимических и морфологических показателей при моделировании L-NAME-индуцированного гестоза
Введение ADMA-подобного агента – L-NAME небеременным самкам не
приводило к статистически значимым изменениям (рис.1).
При введении L-NAME беременным самкам наблюдались морфофункциональные изменения, по своим проявлениям соответствующие критериям кли10
нической картины гестоза у женщин. Блокада NO-синтазы, вызванная 7дневным введением L-NAME беременным крысам, приводила к статистически
значимому (p<0,05) повышению систолического и диастолического АД
с
125,0±6,3 мм рт. ст. и 82,0±5,8 мм рт. ст. до 183,1±9,4 мм рт. ст. и
136,7±7,4 мм рт. ст. соответственно (рис. 1), нарушению взаимоотношений вазодилатирующих и вазоконстрикторных механизмов регуляции сосудистого
тонуса, о чем свидетельствуют результаты сосудистых проб на эндотелийзависимое (ацетилхолин) и эндотелийнезависимое (нитропруссид натрия) расслабление и увеличение КЭД с 1,28±0,23 у интактных беременных животных до
3,06±0,32 (р<0,05).
Моделирование гестоза приводило к значительному снижению показателя микроциркуляции в плаценте с 425,90±39,55 до 237,50±38,18 ПЕд (р<0,05).
КЭД
3,5
180
0,5
0
0
Небеременные
интактные
Небеременные
+L-NAME
Беременные
интактные
Небеременные Небеременные
интактные
+L-NAME
Беременные+LNAME
150
100
50
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
1,88±0,19*
Протеинурия, г/л
1,6
210,0±21,08*
200
425,9±39,6y
Микроциркуляция, ПЕд
250
Беременные+
L-NAME
1,8
400
300
Беременные
интактные
2
450
350
1,28±0,23y
1
1,30±0,15y
1,5
0,90±0,10у
20
2,5
0,98±0,12y
125±6,3y
82,0±5,8y
40
ДАД
2
80
60
3
САД
136,7±7,4*
134,2±5,8y
100
87,7±3,8y
120
131,4±4,7y
АД, мм рт. ст.
140
89,1±4,6y
160
3,06±0,32*
183,1±9,4*
200
0
0
Беременные интактные
Беременные интактные
Беременные+L-NAME
Беременные+L-NAME
Рис. 1. Значения АД, КЭД, микроциркуляции в плаценте и протеинурии при моделировании L-NAME-индуцированного гестоза. (М±m; n=10).
Примечание. *- р<0,05 в сравнении с интактными беременными крысами;
y
- р<0,05 в сравнении с беременными крысами с L-NAME.
У интактных беременных крыс 12-часовой диурез составил 5,6±1,2 мл,
что соответствовало нормальным показателям у животных массой 250 300 г при незначительной протеинурии, значения которой соответствов али 0,90±0,10 г/л, т.е. до 1,0 г/л. Моделирование L-NAMEиндуцированного гестоза не оказывало существенного влияния на суточный диурез. Однако при анализе мочи обнаружено умеренно выраженное
увеличение протеинурии со значениями 1,88±0,19 г/л (p<0,05) (рис. 1).
NO-продуцирующая функция эндотелия исследована на основании данных увеличения экспрессии eNOS (в процентах от контроля) и содержания нитрит-ионов NOx в сыворотке крови. Обнаружено, что моделирование L-NAMEиндуцированного гестоза приводило к резкому снижению экспрессии eNOS и
содержания нитрит-ионов (NOx), соответственно в 1,9 и 1,8 раза (рис. 2).
11
1,00
0,50
Небеременные
+L-NAME
Беременные
интактные
112,2±6,99
40
20
0,00
Небеременные
интактные
60
61,4±4,46*
1,33±0,09*
eNOS, %
80
104,6±3,9y
100
2,35±0,21y
2,16±0,13y
1,50
2,24±0,15y
NOx, мкмоль/дЛ
2,00
107,2±4,38y
120
2,50
0
Беременные+LNAME
Небеременные
интактные
Небеременные
+L-NAME
Беременные
интактные
Беременные+LNAME
Рис.2. Концентрация NOx в сыворотке крови и экспрессия eNOS при моделировании LNAME-индуцированного гестоза. (М±m; n=10).
Примечание. *- р<0,05 в сравнении с интактными беременными крысами;
y
- р<0,05 в сравнении с беременными крысами с L-NAME.
Гистологическая картина почек у интактных беременных крыс (21 сутки
беременности) была следующей: клубочки умеренно полнокровны, базальная
мембрана не утолщена, воспалительные изменения в интерстиции клубочков и
пирамид отсутствуют; спастические и гипертрофические изменения мелких артерий и артериол не обнаружены (рис. 3). У крыс с экспериментальным гестозом в клубочках почек выявлены признаки ишемического повреждения в виде
их малокровия, а также дистрофические изменения базальной мембраны капилляров клубочков с её утолщением в виде проволочных петель (рис. 4).
При гистологическом исследовании плаценты интактных беременных
крыс отмечается равномерное кровенаполнение капилляров ворсин и межкапиллярных пространств, относительно мономорфная структура трофобласта,
непрерывность перехода от ворсинчатого слоя в трофобластический слой (рис.
5). Экспрессия eNOS в плаценте у интактных животных выявляется в капиллярах ворсин, преимущественно на низком и среднем уровнях, а также в мелких
сосудах трофобластического и децидуального слоев. По результатам количественного анализа удельная площадь иммунореактивного вещества при реакции на eNOS составила 5,4+0,2%.
Б
А
Рис. 3. Структура почки интактных животных.
Примечание: а – мелкая артерия в корковом веществе без признаков гипертрофии
стенок, её эндотелий не поврежден; в – базальная мембрана капилляров клубочка не утолщена, клеточная воспалительная реакция отсутствует.
Окраска гематоксилином и эозином. Х 280.
12
А
Г
В
Б
Рис. 4. Почка беременной крысы с гестозом (21 сутки беременности): а, б – спазм артериолы; в – плазматическая артериола; г – клубочек с гипертрофированным темным пятном; д
– клубочки малокровны, базальные мембраны капилляров
резко утолщены и имеют вид
проволочных петель (мембранозная
гломерулопатия).
Окраска гематоксилином и
эозином. Х 280.
Д
А
Б
Рис. 5. Структура плаценты интактных животных.
Примечание. А - спонгиозный (ворсинчатый) слой; Б - слой гигантоклеточного трофобласта; Окр. гематоксилином и эозином. Микрофото. Х 200.
А
Б
Рис. 6. Патоморфологические изменения плаценты при моделировании гестоза: а дилатация и неравномерное кровенаполнение сосудов на границе ворсинчатых структур и
трофобластического слоя, децидуального слоя, отек, б - очаги мукоидных изменений трофобластического слоя, дистрофические изменения трофобласта. Окр. гематоксилином и
эозином. Микрофото. Х 200.
13
Морфологическая картина плаценты при L-NAME-индуцированном гестозе проявлялась в виде ишемии ворсин и интервиллезных пространств и
слушиванием эндотелия в сосудах плаценты (рис. 6). В отдельных случаях это
приводило к появлению очагов некроза децидуальных клеток в ткани плаценты. На внешней поверхности плаценты наблюдали массивные отложения фибрина. При иммуногистохимическом исследовании в данной серии экспрессия
eNOS в эндотелии капилляров практически не выявлялась.
Интегральная характеристика балльной оценки изменения морфологических показателей при моделировании L-NAME-индуцированного гестоза представлена в табл. 1.
Таблица 1
Комплексная оценка патоморфологических изменений в сосудах почек и
плаценты при моделировании L-NAME-индуцированного гестоза
(Баллы 0-6; n=10)
Серия экспериментов
Комплексная оценка в баллах
Интактные беременные самки
0-1
L-NAME
5-6*
Примечание. * - р<0,05 в сравнении с интактными беременными самками, по критерию χ2.
Таким образом, вышеизложенное свидетельствует о том, что внутрибрюшинное введение L-NAME с 14 по 20 сутки беременности в дозе 25 мг/кг вызывает у крыс комплекс функциональных, биохимических и морфологических
изменений, связанных с развитием дефицита NO вследствие блокады NOсинтазы. На 21 беременности сутки развивалась выраженная артериальная гипертензия и эндотелиальная дисфункция, резко уменьшался уровень нитритионов и экспрессия NO-синтазы. При лазердопплерфлоуметрическом исследовании обнаружены нарушения плацентарной микроциркуляции, сопровождавшиеся протеинурией. Морфологически обнаруживались признаки ишемических повреждений почек и плаценты. Описанный симптомокомплекс соответствует патофизиологическим нарушениям, возникающим при развитии гестоза
у беременных женщин.
Исследование влияния метилдопы (0,086 г/кг/сут) и амлодипина
(0,5 мг/кг) на течение экспериментального L-NAME-индуцированного гестоза
Введение метилдопы в суточной дозе 0,086 г/кг приводило к снижению
артериального давления, значение которого было близко к целевому (р<0,05),
но на соотношение реакций эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой вазодилатации существенного влияния не оказывало (табл. 2).
В группах животных с использованием амлодипина в дозе 0,5 мг/кг
наблюдалась иная динамика исследуемых показателей. Отмечено улучшение
взаимоотношений реакций эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой вазодилатации до уровня, сопоставимого с уровнем в группе интактных животных
(КЭД 1,48±0,21). Артериальное давление имело тенденцию к снижению, однако
статистически значимого отличия от уровня контрольной группы животных не
достигало (табл. 2).
14
Метилдопа (0,086 г/кг/сут) и амлодипин (0,5 мг/кг) не предотвращали
снижения микроциркуляции, вызванного моделированием L-NAMEиндуцированного гестоза, и ее уровень составил 242,6±10,9 и 202,8±18,47 ПЕд
соответственно, что достоверно не отличалось от значений у беременных самок
с моделированием гестоза (237,5±38,2 ПЕд) и было существенно ниже значений микроциркуляции у интактных беременных крыс (425,9±39,6 ПЕд) (табл.
2). Обнаружено, что метилдопа и амлодипин не восстанавливают уровень нитрит-ионов и экспрессию e-NOS, однако приводят к нормализации протеинурии
(табл. 2).
Таблица 2
Результаты коррекции L-NAME-индуцированного гестоза у крыс
с использованием метилдопы (0,086 г/кг/сут) и амлодипина (0,5 мг/кг)
(М±m; n=10)
Показатель
САД,
мм рт. ст.
КЭД,
усл. ед.
Микроциркуляция,
ПЕд
Группа
Протеинурия,
(г/л)
ДАД,
мм рт. ст.
Интакт125±6,3
1,28±0,23 425,9±39,6 0,90±0,1
ные
82,0±5,8
L-NAME 183,1±9,4* 3,06±0,32* 210,0±21,1* 1,88±0,19*
136,7±7,4*
L-NAME+ 135,4±2,8x 2,8±0,01
242,6±10,9 0,96±0,06x
метилдопа 101,4±3,8x
L-NAME+
165,7±6,8 1,48±0,21x 202,8±18,5 0,79±0,11x
амлодипин 123,5±6,3
Концентрация
нитритионов,
мкмоль/дл
2,35±0,21
Экспрес-сия
eNOS, %
1,33±0,09*
61,4±4,46*
1,32±0,09
64,5±3,01
1,40±0,09
66,4±3,76
112,2±6,99
Примечание здесь и в табл.4 и 5: САД, ДАД – систолическое и диастолическое артериальное
давление (мм рт. ст.); КЭД – коэффициент эндотелиальной дисфункции (у.е.);
* - p<0,05 в сравнении с интактными беременными самками,
х
– p<0,05 в сравнении с группой L-NAME,
y
– p<0,05 в сравнении с монотерапией препаратами стандартной терапии гестоза
Морфологические исследования обнаружили снижение ишемических изменений в почках и плаценте под влиянием метилдопы и амлодипина. Мелкие
артерии коркового вещества почки с умеренными признаками гипертрофии
мышечного слоя. Капилляры почечных клубочков полнокровны, базальные
мембраны не утолщены, отмечалась некоторая гиперплазия клеток темного
пятна. Не наблюдались клиновидные участки некроза, атрофии паренхимы с
коллапсом стромы, ее лимфоидной инфильтрацией. Отсутствовали диффузные
изменения почечных телец в виде сморщивания, гиалиноза и склероза, гиалиноз и склероз артерий. Морфологическая картина плаценты при L-NAMEиндуцированном гестозе на фоне применения метилдопы и амлодипина отличалась от таковой в группе контрольных животных менее выраженными некротическими явлениями в плаценте и уменьшением фибринозных отложений на
внешней ее поверхности. Интегральная оценка патоморфологических
изменений представлена в таблице 6.
15
Исследование эффективности ингибитора аргиназ L-норвалина
(10 мг/кг) при L-NAME-индуцированном гестозе
Обнаружено, что L-норвалин в дозе 10 мг/кг не предотвращал развитие
артериальной гипертензии при моделировании L-NAME-индуцированного
гестоза у крыс (табл. 4), но снижал КЭД до 1,51±0,15, тогда как в группе
беременных самок, получавших L-NAME, он составлял 3,06±0,32. Снижение
КЭД на фоне сохранения артериальной гипертензии свидетельствует с одной
стороны о том, что КЭД имеет самостоятельное значение, а с другой - о том,
что L-NAME-индуцированный гестоз вовлекает в патогенетический процесс
не только нитроергическую систему, но и все элементы гуморального и
нейрогенного контуров регуляции системы кровообращения.
Введение L-норвалина (10 мг/кг) вызывало существенное
улучшение уровня микроциркуляции до средних значений
455,7±41,5 ПЕд, что было достоверно выше, чем у беременных самок с
гестозом (p<0,05). Обнаружено, что L-норвалин вызывал нормализацию протеинурии, увеличение экспрессии eNOS (табл. 4) и практически полностью
восстанавливал содержание нитрит-ионов (NOx) до значений у интактных
животных (табл. 4).
Таблица 4
Результаты коррекции L-NAME-индуцированного гестоза у крыс с использованием L-норвалина (10 мг/кг) (М±m; n=10)
Показатель
Группа
Интактные
L-NAME
L-NAME+
L-
Микроциркуляция,
ПЕд
Протеинурия,
(г/л)
125±6,3
1,28±0,23 425,9±39,6
82,0±5,8
183,1±9,4* 3,06±0,32* 210,0±21,1*
136,7±7,4*
194,5±8,3 1,51±0,15x 455,7±41,5x
САД,
мм рт. ст.
ДАД,
мм рт. ст.
КЭД,
усл. ед.
Экспрессия
eNOS, %
0,90±0,1
Концентрация нитрит-ионов,
мкмоль/дл
2,35±0,21
1,88±0,19*
1,33±0,09*
61,4±4,46*
0,90±0,06x
2,10±0,14 x
108,9±5,41 x
112,2±6,99
146,4±8,2
Примечание: см. примечание к табл. 2
норвалин
При морфологическом исследовании почек и плаценты также обнаружен
протективный эффект L-норвалина. Мелкие артерии коркового вещества почки
без признаков гипертрофии мышечного слоя. Капилляры почечных клубочков
полнокровны, базальные мембраны не утолщены, симптом «проволочных
петель» отсутствует. При морфологическом исследовании плаценты на
внешней поверхности наблюдались слабые отложения фибрина, ворсины и
интервиллезные пространства полнокровны. Интегральная характеристика
балльной оценки морфологических показателей представлена в таблице 6, из
которой следует, что L-норвалин достоверно снижал интегральную оценку в
баллах (2-3) в сравнении с данными при L-NAME-индуцированном гестозе.
16
Исследование эффективности комбинированного использования
L-норвалина (10 мг/кг) с метилдопой (0,086 г/кг/сут) и амлодипином
(0,5 мг/кг) при моделировании L-NAME-индуцированного гестоза
В первую очередь обращает на себя внимание тот факт, что L-норвалин
(10 мг/кг), не обладая собственным гипотензивным эффектом, в комбинации
как с метилдопой (0,086 г/кг/сут), так и в комбинации с амлодипином
(0,5 мг/кг), потенцировал их гипотензивные эффекты. В обоих случаях наблюдалось выраженное снижение артериального давления (табл. 5). Следует обратить внимание на то, что наиболее эффективное снижение артериального давления по сравнению со всеми сериями экспериментов наблюдалось при комбинированном использовании L-норвалина и метилдопы.
Сочетанное использование L-норвалина с препаратами стандартной гипотензивной терапии гестоза, как представлено в табл. 4, оказывало выраженное эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного гестоза. С учетом описанных сведений о благоприятном влиянии сочетанного использования L-норвалина и метилдопы на значение артериального давления
при моделировании L-NAME-индуцированного гестоза, возможно предположить, что в основе эффективности предложенной комбинации лежит влияние
на два разных патогенетических звена. С одной стороны, ингибитор аргиназ Lнорвалин компенсирует нарушения выработки NO в эндотелии, а с другой центральный α2-адреностимулятор метилдопа стимулирует центральные симпатические ядра, что приводит к уменьшению периферического тонуса сосудов.
Использование L-норвалина в комбинации с метилдопой не приводило к
изменению КЭД по сравнению с его монотерапией, но оставляло значение КЭД
ниже по сравнению с нелечеными животными.
При комбинированном применении L-норвалина и препаратов стандартной гипотензивной терапии гестоза амлодипина и метилдопы, которые в монотерапии не улучшали микроциркуляцию в плаценте, наблюдалось потенцирование эффектов, что выразилось в повышении значений показателей микроциркуляции до уровня интактных животных (табл. 5). При этом, в отличие от животных с L-NAME-индуцированным гестозом, на ЛДФ-кривой в большей степени проявлялись кардиальные и дыхательные волны, что свидетельствует о
нормализации динамической составляющей микроциркуляции и косвенно
предполагает улучшение реологической составляющей.
Комбинированное использование L-норвалина с метилдопой и амлодипином у животных с моделированием L-NAME-индуцированного гестоза нормализовывало протеинурию, практически полностью восстанавливало концентрацию нитрит-ионов и показатели экспрессии еNOS до уровня интактных животных (табл. 5).
При морфологическом исследовании почек и плаценты также обнаружен
протективный эффект комбинированного использования L-норвалина и препаратов, входящих в стандартную гипотензивную терапию гестоза. Микроскопическое исследование почек у животных, получавших комбинированное лечение, выявило картину, которая резко отличалась от картины в контрольной
17
группе беременных крыс. Мелкие артерии коркового вещества почки без признаков гипертрофии мышечного слоя. Капилляры почечных клубочков полнокровны, базальные мембраны не утолщены, симптом «проволочных петель» отсутствует.
Таблица 5
Результаты исследования эффективности комбинированного использования L-норвалина (10 мг/кг) с метилдопой (0,086 г/кг/сут) и амлодипином
(0,5 мг/кг) при моделировании L-NAME-индуцированного гестоза
(М±m; n=10)
Показатель
Группа
Интактные
L-NAME
САД,
мм рт. ст.
КЭД,
усл. ед.
ДАД,
мм рт. ст
125±6,3
82,0±5,8
183,1±9,4*
136,7±7,4*
135,4±2,8x
Микроциркуляция,
ПЕд
Протеинурия,
(г/л)
Концентрация
нитритионов,
Экспрессия
eNOS, %
1,28±0,23
425,9±39,6
0,90±0,1
мкмоль/дл
2,35±0,21
3,06±0,32*
210,0±21,1*
1,88±0,19*
1,33±0,09*
61,4±4,46*
0,96±0,06x
1,32±0,09
64,5±3,01
0,79±0,11x
1,40±0,09
66,4±3,76
0,90±0,06x
2,10±0,14x
108,9±5,41x
1,04±0,04x
2,19±0,17xy
112,6±4,57xy
0,98±0,11x
2,11±0,17xy
116,1±5,77xy
2,8±0,01
242,6±10,9
L-NAME+
x
метилдопа 101,4±3,8
1,48±0,21x 202,8±18,5
L-NAME+ 165,7±6,8
амлодипин 123,5±6,3
1,51±0,15x 455,7±41,5x
L-NAME + 194,5±8,3
L-норвалин 146,4±8,2
1,50±0,25xy 394,2±25,8xy
L-NAME + 120,1±2,9x
x
метилдопа+ 92,4±3,3
L-норвалин
1,69±0,07x 398,6±18,4xy
L-NAME + 156,3±2,0xy
амлодипин
108,9±4,6xy
L-норвалин
Примечание: см. примечание к табл. 2
112,2±6,99
В плаценте отмечали мономорфную структуру слоев без очаговых изменений, умеренное кровенаполнение спонгиозного слоя. На внешней поверхности плаценты наблюдались лишь следы отложения фибрина.
Интегральная оценка - 1-2 балла, что явилось лучшим значением в
нашем исследовании (табл. 6). Удельная площадь иммунореактивного вещества
при реакции на eNOS в серии комбинированного использования L-норвалина и
метилдопы не отличалась от площади интактного уровня и составила 5,1+0,1%.
Таким образом, при морфологическом исследовании почек и плаценты
обнаружено выраженное протективное действие сочетанного использования Lнорвалина и препаратов, входящих в стандартную гипотензивную терапию гестоза, заключающееся в приближении морфологической картины к таковой у
интактных беременных животных.
18
Таблица 6
Влияние комбинированного использования L-норвалина (10 мг/кг) с
метилдопой (0,086 г/кг/сут) и амлодипином (0,5 мг/кг) на комплекс патоморфологических изменений (Баллы 0-6).
Серия экспериментов
Комплексная оценка в баллах
0-1
5-6*
3х
3-4х
2-3х
1-2xy
2xy
Интактные беременные самки
L-NAME
L-NAME + метилдопа
L-NAME + амлодипин
L-NAME + L-норвалин
L-NAME + метилдопа + L-норвалин
L-NAME + амлодипин + L-норвалин
Примечание: * - p<0,05 в сравнении с интактными беременными самками, х – p<0,05 в сравнении с группой L-NAME, y – p<0,05 в сравнении с монотерапией препаратами стандартной гипотензивной терапии гестоза, по критерию χ2.
ВЫВОДЫ
1. Моделирование экспериментального L-NAME-индуцированного гестоза у крыс самок путем введения в течение с 14 по 20 сутки беременности Nнитро-L-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг/сут характеризуется комплексом нарушений, соответствующих клиническому проявлению гестоза, с развитием выраженной артериальной гипертензии, протеинурии и снижением уровня микроциркуляции в плаценте в 2 раза, с увеличением коэффициента эндотелиальной дисфункции в 2,4 раза, уменьшением уровня стабильных метаболитов оксида азота в 1,8 раза, экспрессии eNOS в 1,9 раза. Морфологически обнаруживались комплексные изменения в плаценте и почках.
2. Метилдопа в дозе 0,086 г/кг/сутки на модели гестоза оказывал выраженное гипотензивное действие и способствовал нормализации протеинурии.
Однако в полной мере не предотвращал развитие деструктивных изменений в
плаценте, эндотелиальной дисфункции, снижения концентрации стабильных
метаболитов NO и экспрессии eNOS.
3. Амлодипин в дозе 0,5 мг/кг/сут не проявлял гипотензивного действия
при экспериментальном гестозе, предотвращал повышение КЭД. При этом
микроциркуляция в плаценте, концентрация стабильных метаблитов NO, экспрессия eNOS и морфологическая картина патологических изменений плаценты и почек существенно не менялись.
4. Ингибитор аргиназ L-норвалин в дозе 10 мг/кг оказывал значительное
эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного гестоза, что выражалось в восстановлении эндотелийзависимого расслабления сосудов и снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции почти до уровня
интактных животных, улучшении плацентарной микроциркуляции, а также в
восстановлении в полной мере содержания нитрит-ионов NOx и экспрессии
eNOS, нормализации протеинурии. Морфологические исследования обнаружили предотвращение под влиянием L-норвалина развития нарушений в сосудистом эпителии почечных артерий и изменений ишемического генеза в пла19
центе. Однако монотерапия L-норвалином не приводила к снижению артериального давления.
5. Комбинированное использование L-норвалина (10 мг/кг) и метилдопы
(0,086 г/кг/сут) приводило к полному предотвращению развития артериальной
гипертензии, эндотелиальной дисфункции (снижение значений КЭД, восстановление NOx и экспрессии eNOS), нарушения микроциркуляции в плаценте и
протеинурии и к существенной нормализации морфологической картины в
плаценте и почках.
6. Комбинированное использование L-норвалина (10 мг/кг) с амлодипином (0,5 мг/кг) так же обладало протективным действием на модели экспериментального гестоза, выраженность которого сопоставима с комбинацией Lнорвалина с метилдопой.
Список работ, опубликованных по теме диссертации
1.
Фармакологическая коррекция L-аргинином «ADMA-ENOSассоциированных мишеней» при экспериментальной преэклампсии / М. В. Покровский, Т. Г. Покровская, В. В. Гуреев [и др.] // Кубанский научный медицинский вестник. – 2010. – № 1. – С. 85-92.
2.
Реалии и перспективы фармакологической коррекции ADMAeNOS-ассоциированных путей при преэклампсии / М. В. Покровский, Н. Г. Филиппенко, В. В. Гуреев [и др.] // Рациональная фармакотерапия в кардиологии. – 2010. – № 6 (6). – С. 882-887.
3.
Пути коррекции NO-дефицитного состояния при патологии беременных в эксперименте / В. В. Гуреев, М. В. Покровский, О. С. Полянская [и
др.] // Научные ведомости Белгородского государственного университета.
Сер. Медицина. Фармация. – 2011. – № 4 (99), вып. 13/2. – С. 40–43.
4.
Фармакологическая коррекция ADMA-eNOS-ассоциированных
мишеней при преэклампсии / М. В. Покровский, Т. Г. Покровская, В. В. Гуреев
[и др.] // Акушерство и гинекология. – 2011. – № 2. – С. 16-20.
5.
Влияние L-аргинина, витамина В6 и фолиевой кислоты на показатели эндотелиальной дисфункции и микроциркуляции в плаценте при моделировании L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота / М. В. Покровский,
О. О. Новиков, В. В. Гуреев [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2011. – Т. 152, № 7. – С. 77-80.
6.
Использование L-аргинина в коррекции эндотелиальной дисфункции при экспериментальной преэклампсии / М. В. Покровский, Т. Г. Покровская, В. В. Гуреев [и др.] // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 2012. – Т. 75, № 2. – С. 14-16.
7.
Коррекция экспериментального гестоза тадалафилом / М. В. Покровский, В. В. Гуреев, А.А. Должиков [и др.] // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер.: Медицина. Фармация. – 2012.
– №10 (129), вып. 18/2. – С. 146-151
8.
Коррекция ADMA-подобного гестоза в эксперименте с помощью
ингибитора аргиназы L-норвалина и препаратов, входящих в стандартную схе20
му лечения / В. В. Гуреев, О. С. Полянская, А. А. Должиков // Курский научнопрактический вестник «Человек и его здоровье». – 2012. – № 2. – С. 14-20.
9.
Полянская, О. С. Перспективы фармакологической коррекции LNAME-индуцированного гестоза в эксперименте с помощью ингибитора аргиназ L-норвалина и ингибитора фосфодиэстеразы 5 тадалафила / О. С. Полянская
// Фундаментальные исследования. – 2012. – № 10. – С. 96-98.
10. L-NAME–индуцированный гестоз у крыс / А. А. Барсук, В. В. Гуреев, М. В. Покровский [и др.] // XVII Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство»: сб.
материалов конгр.; тез. докл. (Москва, 12-16 апр. 2010 г.). – М., 2010. – С. 575576.
11. L-аргинин в профилактике развития L-NAME-индуцированного гестоза у крыс / В. В. Гуреев, А. А. Барсук, Е. В. Проскурякова [и др.] // XVII Рос.
нац. конгр. «Человек и лекарство»: сб. материалов конгр.; тез. докл. (Москва,
12-16 апр. 2010 г.). – М., 2010. – С. 601-602.
12. Cочетанное использование L-аргинина и амлодипина в коррекции
L-NAME-ндуцированного гестоза в эксперименте / М. В. Покровский, Г. А. Лазарева, А. А. Барсук, Е. В. Проскурякова, В. В. Гуреев [и др.] // XVII Рос. нац.
конгр. «Человек и лекарство»: сб. материалов конгр.; тез. докл. (Москва, 12-16
апр. 2010 г.). – М., 2010. – С. 704.
13. Амлодипин в коррекции L-NAME-ндуцированного гестоза крыс /
Е. В. Проскурякова, А. А. Барсук, В. В. Гуреев [и др.] // XVII Рос. нац. конгр.
«Человек и лекарство»: сб. материалов конгр.; тез. докл. (Москва, 12-16 апр.
2010 г.). – М., 2010. – С. 707.
14. Полянская, О. С. Коррекция резвератролом ADMA-подобного гестоза у крыс / О. С. Полянская, В. В. Гуреев, А. А. Барсук [и др.] // Биотехнология и биомедицинская инженерия : материалы III Всерос. науч.-практ. конф. с
междунар. Участием, посвящ. 75-летию Курск. гос. мед. ун-та. – Курск: Изд-во
КГМУ, 2010. – С. 219-220.
15. Полянская, О. С. Коррекция эндотелиальной дисфункции рекомбинантным эритропоэтином при ADMA-подобной модели гестоза / О. С. Полянская, В. В. Гуреев, И. В. Медведев [и др.] // Молодежная наука и современность: материалы 76-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых с междунар. участием (Курск, 19-20 апр. 2011 г.). – Курск: Изд-во КГМУ, 2011. – С.
293.
16. Полянская, О. С. Коррекция L-NAME-индуцированного гестоза в
эксперименте с помощью L-норвалина / О. С. Полянская, В. В. Гуреев,
И. В. Медведев [и др.] // Молодежная наука и современность : материалы 76-ой
Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых с междунар. участием (Курск,
19-20 апр. 2011 г.). – Курск: Изд-во КГМУ, 2011. – С. 51.
17. Полянская, О. С. Коррекция микроциркуляции в плаценте рекомбинантным эритропоэтином при ADMA-подобной модели гестоза / О. С. Полянская, А. А. Барсук, С. В. Жуков [и др.] // Молодежная наука и современность :
материалы 76-ой Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых с междунар.
участием (Курск, 19-20 апр. 2011 г.). – Курск: Изд-во КГМУ, 2011. – С. 51.
21
18. Полянская, О. С. Использование ингибитора аргиназы L-норвалина
в коррекции L-NAME-индуцированного гестоза у крыс / О. С. Полянская,
М. В. Покровский, В. В. Гуреев // Вестник ВолгГМУ: приложение (Материалы
III Всеросс. науч.-практ. семинара для молодых ученых «Методологические аспекты экспериментальной и клинической фармакологии»). – Волгоград: Изд-во
ВолгГМУ, 2011. – С.69-70.
19. Полянская, О. С. Перспективы использования дистантного прекондиционирования в коррекции развития ADMA-подобного гестоза у крыс /
О. С. Полянская, Т. В. Корогодина, В. В. Гуреев // Молодая фармация – потенциал будущего : материалы II Всерос. науч. конф. студентов и аспирантов
(Санкт-Петербург, 18-19 апр. 2012 г.). – СПб., 2012. – С. 6-7.
20. Сравнительная эндотелиопротективная активность ингибиторов аргиназ / П. И. Лосенок, И. Н. Ершов, В. А. Куликовская [и др.] // Инновации в
современной фармакологии: материалы IV съезда фармакологов России (Казань, 2012 г.). – Казань, 2012. – С. 120.
21. Полянская, О. С. Коррекция экспериментального гестоза с помощью ингибитора аргиназ L-норвалина и ингибитора фосфодиэстеразы 5 тадалафила / О. С. Полянская, В. В. Гуреев, О. Ю. Иванова // Успехи современного
естествознания. – 2012. – № 10. – С. 90-91.
22. Полянская, О. С. Исследование влияния коротких эпизодов ишемии-реперфузии на течение ADMA-подобного гестоза / О. С. Полянская,
В. В. Гуреев, О. Ю. Иванова // Успехи современного естествознания. – 2012. –
№ 10. – С. 94.
23. Новые подходы к фармакологической коррекции гестоза : метод.
рекомендации / В. В. Гуреев, О. С. Полянская. – Курск: Изд-во КГМУ, 2012. –
96 с; ил.
Патенты РФ на изобретения
1.
Пат. 2449381 Российская Федерация. Способ коррекции эндотелиальной дисфункции L-норвалином при ADMA-подобной модели гестоза /
М. В. Покровский, В. В. Гуреев, Т. Г. Покровская [и др.] ; заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет
Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию». – №
2010144195/14; опубл. 27.04.2012, Бюл. № 12. – 4 с.
2.
Пат. 2453000 Российская Федерация. Способ коррекции нарушения
микроциркуляции в плаценте при ADMA-подобной модели гестоза / М. В. Покровский, В. В. Гуреев, Т. Г. Покровская [и др.] ; заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию». – №
2010144193/14; опубл. 10.06.2012, Бюл. № 16. – 4 с.
3.
Пат. 2449783 Российская Федерация. Способ коррекции L-NAME
индуцированного дефицита оксида азота L-норвалином в эксперименте /
М. В. Покровский, Т. Г. Покровская, С. А. Цепелева [и др.] ; заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет»
Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию». – №
2010132488/15; опубл. 10.05.2012, Бюл. № 13. – 4 с.
22