ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ “CANDIDA - IgM”

“CANDIDA - IgM”
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Положительными считаются те исследуемые сыворотки, ОП которых превышает ОПкрит.
При визуальной оценке результатов отрицательными считаются пробы бледно-желтого
цвета или бесцветные как К-, положительными – пробы желтого или ярко-желтого цвета.
При положительных результатах с сыворотками в разведении 1:100 при необходимости
проводят их дальнейшее титрование путем последовательных двухкратных разведений
раствором РПР-С.
Титром сыворотки считается последнее разведение сыворотки, ОП которого превышает
ОПкрит.
Для постановки окончательного диагноза рекомендуется исследование цервикальных
смывов, мазков, на наличие кандидоза методом ИФА; Совокупность результатов ИФА,
клиники и эпидемиологии инфекции позволяет ставить окончательный диагноз кандидоза.
ФОРМА ВЫПУСКА
В набор тест-системы входят:
1. Планшет с иммобилизованным антигеном
Candida albicans
2. Контрольная положительная сыворотка (К+),сухая
3. Контрольная отрицательная сыворотка (К-)
4. Раствор для предварительного разведения сывороток (РПР-С)
5. Разводящий буферный раствор для сывороток (РБР-С)
6. Разводящий буферный раствор для конъюгата (РБР-К)
7. Конъюгат (антитела против иммуноглобулинов M
человека с пероксидазой хрена )
8. Концентрат фосфатно-солевого буферного раствора
с твином (ФСБ-Т), 25-ти кратный
9. Хромоген ТМБ в DMSO
10. Буферный раствор для субстрата (БРС)
11. Стоп-реагент (раствор серной кислоты)
Тест-система представляет собой набор реагентов для выявления антител к антигенам
Candida albicans в сыворотках крови методом иммуноферментного анализа: планшет с
иммобилизованным антигеном Candida albicans; положительная контрольная сыворотка (К+),
содержащая антитела к антигену Candida albicans, сухая; отрицательная контрольная
сыворотка К-, не содержащая антител , жидкая, бесцветная; раствор для предварительного
разведения сывороток (РПР-С), жидкий; разводящий буферный раствор для сывороток (РБРС), жидкий синего цвета; разводящий буферный раствор для конъюгата (РБР-К), жидкий
зеленого цвета; антитела против иммуноглобулинов M человека с пероксидазой хрена
(конъюгат), жидкий, синего цвета; концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с
твином (ФСБ-Т); хромоген ТМБ в DMSO; буферный раствор для субстрата с перекисью
водорода (БРС); стоп-реагент.
Набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая контрольные сыворотки.
Комплектуется всеми необходимыми реагентами, кроме дистиллированной воды.
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест-система предназначена для выявления иммуноглобулинов класса M к антигенам
Candida albicans в сыворотке (плазме) крови человека и может быть использована в
клинических и эпидемиологических исследованиях, а также службой крови для выявления
носителей Candida albicans ( с подтверждением другими методами ).
1 планшет
1 флакон,
1 флакон, 1,0 мл
1 флакон, 13 мл
1 флакон, 11мл
1 флакон, 13 мл
СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
1 флакон, 0,25 мл
1 флакона, 26 мл
1 флакон, 0,7 мл
1 флакон, 13 мл
1 флакон, 6 мл
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ
Тест-систему хранят при температуре 2-8 0С.
Транспортирование осуществляют всеми видами крытого
температурных условиях. Срок годности 6 месяцев со дня выпуска.
транспорта
в
тех
же
ИНСТРУКЦИЯ
ПО ПРИМЕНЕНИЮ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ КЛАССА M К АНТИГЕНАМ Candida albicans.
Для выявления иммуноглобулинов класса M к возбудителю Candida albicans возможно
использование сыворотки (плазмы) крови как свежеприготовленной, так и хранившейся при
температуре 2-8 0С до 7 дней, либо замороженной при температуре минус (20+3) 0С в течение
3 месяцев.
Сыворотки, содержащие осадок, перед анализом должны быть очищены
центрифугированием. Нельзя использовать термоинактивированные, а также сыворотки с
добавлением азида натрия. Контаминированная микробами, гемолизированная или богатая
липидами сыворотка (плазма) может давать ошибочные результаты. Избегать повторных
циклов замораживания и оттаивания образцов.
Не допускается тестирование пула,
содержащего несколько образцов сывороток.
Для отбора исследуемых проб и компонентов
тест-системы
используется
автоматическая пипетка типа "Джилсон" или аналогичная с погрешностью измерения объемов
не более 5%.
Следует избегать загрязнения растворов, планшет механическими, химическими
примесями и микроорганизмами. В работе использовать только чистые (новые) наконечники
для пипеток.
Внимание: несмотря на то , что тест-система содержит инактивированные контрольные
сыворотки, с системой следует обращаться как с потенциально инфекционным материалом:
работать в резиновых перчатках, не пипетировать ртом, все использованные материалы
подвергать обработке раствором этилового спирта с объемной долей 70% или раствором
перекиси водорода с массовой долей 6% с последующей выдержкой при температуре 20-22о С
не менее 2 часов.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ И ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Внимание: Перед использованием набора все компоненты тест-системы необходимо
выдержать не менее 30 минут при температуре 18-25оС.
При постановке ИФА нельзя использовать компоненты из наборов разных серий или
смешивать их при приготовлении растворов.
1. Подготовка исследуемых образцов.
Для проведения анализа используют образцы сыворотки или плазмы крови объемом не
менее 20 мкл.
Скрининг исследуемых сывороток проводят в разведении 1:100. Для этого готовится
предварительное разведение исследуемых сывороток 1:10, т.е. в лунки вспомогательного
планшета (в набор не входят) вносят по 90 мкл РПР-С и по 10 мкл исследуемых сывороток.
Тщательно перемешивают пипетированием, при этом РПР-С меняет свой цвет.
2. Приготовление реагентов.
Внимание: перед использованием РБР-С и РБР-К тщательно перемешать, так как в
процессе хранения в них возможно выпадение осадка.
2.1. Приготовление ФСБ-Т.
Содержимое флакона с ФСБ-Т разводят до 650+5 мл дистиллированной водой. При
наличии во флаконе с ФСБ-Т визуально определяемого осадка солей, флакон с концентратом
подогреть при температуре 40-42оС до полного растворения солей.
ФСБ-Т предназначен для промывания планшета.
Хранение: при температуре 2-8 0С до 2-х недель.
2.2. Приготовление положительной и отрицательной сывороток: (К+) и (К-).
Контрольная отрицательная сыворотка готова к применению.
Хранение: в течении срока годности набора при температуре 2-8 0С.
Контрольную положительную сыворотку развести в 1 мл дистиллированной воды.
Хранение: при температуре 2-8 0С до 2-х недель.
2.3. Приготовление рабочего раствора конъюгата.
Раствор конъюгата готовят перед использованием. Конъюгат разводят раствором РБР-К
в соотношении 1 : 80 ( 12,5 мкл конъюгата на 1 мл РБР-К)
Хранение: Разведенный конъюгат хранят при температуре 2-8 о С до 24 часов.
2.4. Приготовление раствора субстрата ТМБ.
Раствор хромогена готовят непосредственно перед использованием. Раствор ТМБ в
DMSO вносят в БРС в отношении 1:20 в защищенном от света месте ( 50 мкл ТМБ на 1 мл
БРС).
Хранение: Разведенный раствор не хранят.
Примечание.
Во избежание ложных результатов при раскапывании субстратной смеси:
а) не касайтесь стенок лунок наконечниками;
б) избегайте образования аэрозолей и попадания субстратной смеси на внутренний фильтр
пипетки;
в) при использовании кюветы для внесения субстратной смеси, промывайте ее
дистиллированной водой и не используйте для других растворов;
г) если субстратный раствор окрасился в голубой (синий) цвет, значит произошла
контаминация, этот раствор не пригоден;
д) посуду и пипетки (наконечники), контактирующие с раствором ТМБ, НЕЛЬЗЯ
отмывать с применением синтетических моющих средств, поскольку даже их следы ведут к
разложению ТМБ в ходе реакции.
ПРОВЕДЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
Проведение первой реакции
В лунки планшета А1 и В1 внести по 100 мкл К+, в лунки С1 и Д1 внести по 100
мкл К-. В остальные лунки планшета внести по 90 мкл разводящего буферного раствора для
сывороток (РБР-С). Лунку H1 оставить с РБР-С для контроля конъюгата. В остальные лунки
планшета внести предварительно разведенные сыворотки объемом по 10 мкл и тщательно
перемешать пипетированием. Таким образом, исследуемые сыворотки при скрининге
разбавляются в 100 раз.
Планшет закрыть крышкой или клейкой лентой, поместить во влажную камеру и
инкубировать 30 мин при температуре 37 0С.
По окончании инкубации содержимое лунок собрать в сосуд с дезинфицирующим
раствором. Планшет промыть 5-кратно раствором ФСБ-Т, остатки влаги удалить, постукивая
планшетом по фильтровальной бумаге.
Проведение второй реакции
После промывания и удаления влаги внести в каждую лунку планшета по 100 мкл
раствора конъюгата в рабочем разведении. Планшет закрыть, поместить во влажную камеру
при температуре 37 0С и инкубировать 30 мин.
По окончании времени инкубации планшет 5-кратно промыть раствором ФСБ-Т.
Раствор ФСБ-Т из лунок тщательно удалить постукиванием по фильтровальной бумаге.
Проведение ферментативной реакции
Внести в каждую лунку планшета свежеприготовленный раствор хромогена ТМБ в БРС
объемом по 100 мкл. Планшет поместить на 15 мин в защищенное от света место при
температуре 370С.
Реакцию остановить внесением в каждую лунку стоп-реагента объемом по 50 мкл и
измерить оптическую плотность.
Внимание: стоп-реагент представляет собой раствор серной кислоты с концентрацией
0,9 моль/л. В случае попадания на кожу раствора хромогена или стоп-реагента необходимо
их немедленно смыть водой с мылом.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Результаты анализа регистрируют на спектрофотометре измеряя оптическую плотность
(ОП) при длине волны 450 нм. Нулевой уровень ("бланк") задают по воздуху. Измерение
проводят сразу или в течение 20 мин после остановки реакции.
Результаты учитывают только в том случае, если среднее значение ОП в лунках с
контролем конъюгата (ОПкк) не превышает 0,15, в лунках с К- среднее значение ОП (ОПК-) не
более 0,2, а в лунках с К+ среднее значение ОП (ОПК+) не менее чем в 4 раза превышает
ОПК-.
Для оценки результатов анализа вычисляется критический уровень оптической
плотности (ОПкрит.):
ОПкрит. = ОПк- + 0,2