Характеристика семейства
advertisement
25.11.03. источник: «Diseases of Poultry», 11-е издание, Editor in Chief Y.M. Saif, Iowa State Press, 2003 Adenovirus infections Аденовирусная инфекция. Вступление Аденовирусы являются распространенными инфекционными агентами птицы. Большинство вирусов размножаются в организме здоровых птиц, почти без проявления симптомов инфекции или вовсе без них, хотя они быстро могут взять на себя роль оппортунистических патогенных микроорганизмов, когда на здоровье организма птицы негативно влияют дополнительные факторы, в частности сопутствующие инфекции. Однако, некоторые аденовирусы (вирус геморрагического энтерита индюшек, вирус бронхита перепелок, и вирус синдрома спада яйценоскости) являются первичными патогенными микроорганизмами сами по себе, и другие постоянно развиваются в специфические заболевания, указывающие на степень виновности причинного агента, хотя результаты экспериментального заражения с целью осветить эти «намерения» патогенных микроорганизмов часто были разочаровывающими. Первый птичий аденовирус был выделен в 1949 г., когда материал взятый от коровы заболевшей актиномикозом кожи привили эмбрионам. Другими ранними случайными изолятами птичьих аденовирусов были изоляты взятые из эмбрионов зараженных вирусомсироткой. Первый изолят птичьего аденовируса от заболевших птиц был получен при вспышке респираторного заболевания у виргинских куропаток. Аденовирус человека был выделен в 1954 г по время исследования респираторного заболевания, его первоначально назвали аденоидально-фарингеально-конъюнктивальный агент, но впоследствии было принято название аденовирус. Большинство вирусов размножаются легко в птичьих клеточных культурах полученных из тканей печени или почек. Размножение происходит в ядре и сопровождается развитием внутриклеточных включений, которые могут способствовать гистопатологическому диагнозу. Общие свойства необходимые для классификации изолята как аденовируса были установлены Международным Комитетом по Таксономии Вирусов (ICTV). В этой главе формально признаются два рода: Mastadenovirus и Aviadenovirus, принадлежащие к семейству Аденовирусов, причем человеческий аденовирус 2 типа и вирус от эмбрионов зараженных вирусом-сироткой являются соответствующими типовыми разновидностями (Таблица 8.1). Аденовирусы серологически отличаются от мастаденовирусов и также по своей организации набора генов. Род содержит большинство характеризованных аденовирусов выделенных из курей, индюшек, гусей (см. аденовирусные инфекции 1 группы), и в литературе эти вирусы часто относят к подгруппе 1 птичьих аденовирусов. Однако, два из наиболее важных аденовирусов вызывающие заболевания у разновидностей птиц (то есть, геморрагический энтерит, и родственные вирусы, которых относят к подгруппе 2 (см. раздел «Геморрагический Энтерит и родственные инфекции») и вирус спада яйценоскости, который относят к подгруппе 3 9см. раздел «Синдром спада яйценоскости»)), демонстрируют существенную разницу на молекулярном уровне в отличие от аденовирусов. Эти два аденовируса в данный момент являются вирусами не определенными ни в одну группу семейства аденовирусов. Ученые предположили, что нужно создать два новых рода вируса, соответствующих подгруппам вирусов 2 и 3, и вероятно это предложение будет принято ICTV. Согласно этим рекомендациям вирус геморрагического энтерита и родственные вирусы, также птичьи аденовирусы 2 группы сплиномегалии курей (AAS) образуют один род, для которого было предложено название Siadenovirus для отображения одного из уникальных характеристик набора генов, а именно присутствие гена, шифрующего сиалидазу. Для вируса синдрома спада яйценоскости (ССЯ) вместе с некоторыми родственными аденовирусами жвачных, а также вирусом сумчатыхс подобными характеристиками набора генов предложили название Atadenovirus, что отображает высокое содержание в них аденин-тимидина (АТ) (таблица 8.1). Таблица 8.1 Классификация аденовирусов Семейство Adenoviridae Род: Mastadenovirus Аденовирусы Человек, обезьяны, КРС, млекопитающих мыши, крысы, свиньи, овцы, козы и т.д. Род: Aviadenovirus 1 группа птичьих Стандартные аденовирусы аденовирусов курей, индюшек, уток и гусей. Пять разновидностей A, B, C, D и E, 12 серотипов Предложенный род: 2 группа птичьих Вирус геморрагического Siadenovirus аденовирусов энтерита (индюшки) Заболевание селезенки (фазаны) AASV (куры) Предложенный род: 3 группа птичьих Вирус синдрома спада Atadenovirus аденовирусов яйценоскости и родственные вирусы Группа 1 аденовирусных инфекций Вступление Определение и синонимы Подгруппа 1 птичьих аденовирусов содержат род Aviadenovirus, относящимся в семейству аденовирусов. В отличие от четкой связи подгруппы 2 (геморрагический энтерит индюшек и родственные вирусы), и подгруппы 3 (синдром спада яйценоскости) аденовирусов с заболеванием, роль большинства птичьих аденовирусов подгруппы 1 как патогенных микроорганизмов определена нечетко. Примечательные исключения включают штаммы FAdV-1, что вызывают бронхит у перепелок, и штаммы FAdV-4, которые играют важную роль в этиологии синдрома гидроперикарда. Кроме того, другие штаммы могут быстро использовать возможности, которые представляются, когда здоровье птиц подрывается (например, сопутствующая инфекция другими патогенными микроорганизмами, например вирус анемии курей (ВАК) или вирус инфекционного бурсита). Штаммы нескольких разновидностей, но в частности тех, которые принадлежат к разновидностям Е, имеют особенную предрасположенность к росту в клетках печени, и в определенных обстоятельствах, которые пока точно не установлены, вызывают сильные поражения печени, что приводит к состоянию известному как гепатит с включением внутриклеточных телец. Экономическое значение С таким непостоянством их взаимосвязи с заболеваниями пока невозможно оценить общую экономическую важность вирусов 1 подгруппы. Риск для здоровья общества Так как птичий аденовирус не растет в клетках человека, он не несет опасности для здоровья общества. Этиология Классификация ICTV недавно опубликовала новые критерии для классификации аденовирусов, что существенно изменяет предыдущую классификацию аденовирусов. Отнесение разновидностей вируса к подгруппам зависит от как минимум двух ключевых критериев, которые включают вычисленное филогенетическое расстояние, рестрикцию энзимной фрагментации, круга носителей, патогенности, перекрестной нейтрализации и возможно перестройки. На основе по большей части молекулярных критериев при отдельной модели рестрикции энзимной фрагментации и на основе данных секвенирования было распознано пять разновидностей птичьих аденовирусов, обозначенных буквами А-Е (Таблица 8.2). эта классификация ставит птичьи аденовирусы в один ряд с аденовирусами млекопитающих, которые подразделены на разновидности с применением тех же критериев. Вирусы одной разновидности в дальнейшем разбиваются на серотипы на основе результатов анализов перекрестной нейтрализации. Таблица 8.2. Группа 1 птичьих аденовирусов – классификация Род Aviadenovirus (Группа 1 птичьих аденовирусов) Разновидности рода Птичий аденовирус А Серотипы: птичий аденовирус 1 (FAdV-1) (CELO, 112, QBV, Ote, H1) Птичий аденовирус В Серотипы: птичий аденовирус 5 (FAdV-5) (340, TR-22, Tipron, M2) Птичий аденовирус C Серотипы: птичий аденовирус 4 (FAdV-4) (506, J2, KR5, H2, K31, 61) Серотипы: птичий аденовирус 10 (FAdV-10) (C-2B, M11, CFA20, SA2) Птичий аденовирус D Серотипы: птичий аденовирус 2 (FAdV-2) (GAL-1, 685, SR-48, H3, P7) Птичий аденовирус 3 (FAdV-3) Птичий аденовирус 9 (FAdV-9) Птичий аденовирус 11 (FAdV-11) Птичий аденовирус E Серотипы: птичий аденовирус 6 (FAdV-6) птичий аденовирус 7 (FAdV-7) птичий аденовирус 8а (FAdV-8а) птичий аденовирус 8б (FAdV-8б) Предположительные разновидности рода аденовирусов Аденовирус уток (DAdV) Аденовирус голубей (PiAdV) Аденовирус индюшек (TAdV) Морфология Размер и плотность Вирион аденовируса представляет собой двадцатигранную структуру без оболочки, 70-90 нм в диаметре. Плотность 1,32-1,37 г/мл в цезии хлорида. Химический состав Нуклеиновая кислота является ДНК с двойной цепочкой, которая составляет 11,3-13,5% вириона, причем остальное – протеин. Другие ученые обнаружили содержание 17,3% ДНК в вирионе FAdV-1 и в свою очередь содержание ДНК на 54% из гуанин-цитозина, среднее содержание гуанин-цитозина (47-49%) с высокой канцерогенностью и (57-59%) не канцерогенных аденовирусов человека. Размножение вируса. Размножение аденовируса делится на 2 стадии. Ранняя фаза включает попадание вируса в клетку организма и перенос ДНК вируса в ядро, за чем следует транскрипция и транслокация так называемых ранних генов. Протеины зашифрованные ранними генами отвечают за изменение направления клеточных функций, чтобы облегчить размножение ДНК вируса и последующую транскрипцию и трансляцию поздних генов. Сбор вирусных протеинов в завершенные вирионы происходит в ядре, и за этим следует разрыв ядерной мембраны и высвобождение вируса с помощью разрушения клетки. Восприимчивость к химическим и физическим агентам Все изученные аденовирусы продемонстрировали типичные свойства. Они устойчивы к липидным растворителям, таким как эфир и хлороформ, натрий деоксихолят, трипсин, 2% фенол и 50% спирт. Они устойчивы к различному уровню рН между 3 и 9, но инактивируются формальдегидом в концентрации 1:1000. Их подавляют ингибиторы ДНК IuDR и BuDR. Хотя общепризнано, что аденовирусы в общем инактивируются в водном растворе после тепловой обработке при температуре 56С 30 минут, и что теплоустойчивость снижается при действии дивалентных ионов, и птичьи аденовирусы демонстрируют больше нестабильности и более теплоустойчивы. Некоторые штаммы выживают при 60С и даже 70С 30 минут. Титры инфекционности вируса FAdV-1 быстро упали после обработки 180 минут при 56С, а другой штамм FAdV-1 выжил 18 часов при 56С. Даже штаммы протестированные в одной лаборатории показали разницу в теплоустойчивости, что наводит на мысль, что разница появилась не вследствие различной технологии анализов. Гемагглютинация Вирус FAdV-1 гемагглютинирует эритроциты крыс. Оптимальная гемагглютинация эритроцитов происходит между рН 6 и 9 при температуре 20-45С. Гемагглютинин стабилен к обработке трипсином, R-назой, D-назой и нейраминидазой. Он инактивируется после 15 мин при 56С, и 0,2% раствор формальдегида снижает титры ГА в восемь раз. Кроме эритроцитов крыс большинство штаммов FAdV-1не агглютинируют эритроциты других видов. Однако, FAdV-1 агглютинирует эритроциты овец, что означает колебания в самих серотипах. Не существует доказательств гемагглютинации любым из других птичьих серотипов или аденовирусами индюшек или уток. Классификация штаммов Антигенность Гексон аденовируса является основным капсидным белком, и содержит специфические антигенные детерминанты по типу, группе или подгруппе. Птицы, зараженные птичьими аденовирусами, вырабатывают специфические для типа, группы и подгруппы антитела. Специфические для группы детерминанты имеют все вирусы 1 подгруппы, но они не присутствуют в подгруппе 2 или подгруппе 3 аденовирусов. Анализ двойной иммунодиффузии, который применяют для демонстрации реактивности специфичности к группе можно использовать для дифференциации подгрупп вирусов 1, 2 и 3. Детерминанты специфические к типу привели к возникновению антител, которые нейтрализуют вирусную инфекционность, и таким образом, анализ нейтрализации широко использовался для выделения изолятов на серотипы. Текущая классификация подгруппы 1 аденовирусов показана в таблице 8.2. Иммуногенность и защитные характеристики Нейтрализующие антитела, вырабатываемые против эпитопов специфичных к типу, должны давать защиту, но опыт на поле и в экспериментах указывает на то, что такая защита относительно короткая. Патология и эпизоотология Сфера действия и распространение Подгруппа 1 птичьих аденовирусов распространена во всем мире, и к ним восприимчивы домашние виды птиц всех возрастов. К птичьим серотипам могут быть восприимчивы другие виды птиц, но этот аспект еще не был тщательно изучен. Природные и экспериментальные организмы-носители Аденовирусы курей повсеместны в популяции птицы, что было продемонстрировано в анализах антител и по высокому уровню выделения вируса из образцов взятых из здоровых и больных птиц. Кроме заражения курей серотипы птичьего аденовируса были извлечены из индюшек, голубей, уток, фазанов. Частицы, которые вероятно являлись аденовирусами, наблюдали с помощью электронного микроскопа в тонких участках тканей взятых от пустельг, серебристых чаек и т.д. Кроме того, что индюшки заражались куриными серотипами, они также заражались аденовирусами, которые выросли в клетках индюшек, но или не росли или росли плохо в клетках птичьего происхождения. Антитела к этим вирусам широко распространены среди индюшек. Аденовирусы были выделены из гусей. Возраст организмов-носителей Некоторые вирусы вызывают смертность у однодневок, после прививки, но не у 10-дневных птиц. Вирулентность может быть связана с штаммом вируса, возрастом птицы, титром инфективности, минимальной смертельной дозой от 4 до 300000 TCID50. Перенос, носители, векторы Аденовирусы переносятся вертикально. Аденовирусы переносятся через оплодотворенные яйца и часто повторно начинают действовать в клеточных культурах подготовленных из эмбрионов или цыплят взятых из зараженного стада. Это стало одной из сильнейших мотиваций для установления беспатогенного стада. Существуют доказательства, что инфекция аденовируса может оставаться латентной и необнаруженной как минимум на протяжении одного поколения в беспатогенных стадах. Это стало одной из наиболее сильных мотиваций для определения беспатогенного стада. Хотя аденовирусы можно выделить начиная с 1 дня, вирусы обычно выделяются начиная с 3 недели. У бройлеров пиковое распространение происходит между 4 и 6 неделей. У ремонтных несушек такое распространение достигло максимального уровня через 5-9 недель после заражения, но все еще оставалось на уровне 70% после 14 недель, и шесть серотипов аденовируса были выделены из образцов взятых с четырех птицефабрик. В исследовании начатом с 8-недельными птицами распространение вируса продолжалось на высоком уровне до 14 недели, и из образцов с семи птицефабрик выделили восемь различных серотипов. Выделение двух-трех серотипов из одной птицы является нормальным. Конечно, птицы могут распространять один серотип вместо высокого уровня нейтрализующих антител к другим серотипам. Также есть второй период, который возникает в районе пика яйценоскости, когда часто обнаруживают аденовирусы. Предположительно стресс, связанный с яйценоскостью или повышенным уровнем половых гормонов в это время вызывает реактивацию вируса. Это предполагает, что есть максимальная возможность переноса вируса через яйцо к следующему поколению. Горизонтальное распространение вируса также важно. Вирус содержится в помете, трахеальной и носовой слизи, в почках. Поэтому вирус может переноситься со всеми видами выделений, но более высокие титры обнаруживают в помете. Вирус может также присутствовать в семени, представляя потенциальный риск при использовании искусственного осеменения. Была продемонстрирована модель раннего и позднего переноса вируса. У 35-дневной птицы демонстрирующей модель позднего переноса был более низкий пиковый титр вируса содержащегося в помете с ранним спадом титров вируса, и распространение продолжалось на протяжение более короткого периода, чем у выведшихся цыплят, которые демонстрировали модель раннего переноса вируса. Горизонтальное распространение в стаде происходит в основном при помощи непосредственного контакта с фекалиями, но также достигается с помощью переноса по воздуху на короткие расстояния, причем инфекция распространяется очень медленно на протяжении нескольких недель. Эту модель также наблюдали у экспериментально зараженных и случайно зараженных беспатогенных стад, и существенно отличается от стандартной модели, обычно наблюдаемой в промышленном стаде, в котором большинство птиц в стаде часто выделяют вирус. В этих условиях вероятно, что существует много очагов инфекции вследствие реактивации латентного вируса. Промышленное стадо часто получают от разных родительских стад, каждое из которых содержит свой собственный диапазон серотипов аденовирусов. Впоследствии перекрестное заражение ведущее к смешиванию нескольких серотипов происходит когда птицы находятся вместе. Перенос по воздуху между птицефабриками не считают опасным способом заражения, а заражение через человека, передвигающееся оборудование или другие предметы может иметь место. Инкубационный период Хотя аденовирусы были связаны с многими клиническими условиями, доказательства их основной роли в заболевании является противоречивыми. Период инкубации аденовирусов короткий (24-48 ч) после заражения природным способом. Клинические симптомы Гепатит с вирусными включениями Гепатит с вирусными включениями (ГВВ) характеризуется внезапным наступлением смертности, которая достигает пика после 3-4 дней и прекращается на 5 день, но изредка смерти наблюдаются на протяжение 2-3 недель. Заболеваемость низкая, больные птицы припадают к земле, перья взъерошенные, умирают в течение 48 ч или выздоравливают. Смертность может достигнуть 10% и иногда превысить 30%. ГВВ обычно наблюдают у мясных птиц на 3-7 неделе, но также замечали у птиц с 7 дня жизни и старше 20 недель. Есть доказательства, что в интегрированном бройлерном производстве заболевание начинается у курей от определенного родительского стада. Многие различные серотипы были связаны с природными вспышками гепатита с вирусными включениями. Среди отмеченных серотипов – FAdV-1, FAdV-2, FAdV-3, FAdV-4, FAdV-5, FAdV-6, FAdV-7, FAdV-8, FAdV-10, FAdV-12. Некоторые ученые успешно воспроизвели живые поражения с базофильными внутриклеточным включениями, или поражения печени и поджелудочной железы после парентеральной прививки аденовируса молодняку. Когда 12-месячных птиц привили внутривенно вирусом FAdV-1, не было замечено клинических симптомов, но наблюдались вырождение, некроз и клеточная реакция печени, слабая клеточная реакция трахей и легких. Затем развились поражения печени после нормального заражения птиц старшего возраста, но более типичным было отсутствие результатов при нестандартном способе заражения. Вспышки курей зараженных ГВВ возрастом менее 3 недель со смертностью до 30% имели место в Австралии. ГВВ был воспроизведен путем прививки однодневкам в нос и глаза 24 изолятов, принадлежащих к серотипам 6, 7 и 8. когда эти изоляты были проанализированы с использованием рестрикции энзимов, было обнаружено, что все были вирусами FAdV-Е. Синдром гидроперикардия В 1987 г. в Пакистане было распознано новое заболевание – синдром гидроперикардия или заболевание Ангара, в течение одного года оно опустошило бройлерную промышленность Пакистана. Впоследствии заболевание было официально признано в Индии, Кувейте, Ираке, Японии и бывшем СССР. Очень тяжелая форма ГВВ была обнаружена в Южной и Центральной Америке и Мексике. Это заболевание было подобно синдрому гидроперикардия, и разница состоит только в том, что смертность и сфера действия гидроперикардия больше. Он вызывает 20-80% смертность с очень низкой заболеваемостью. Обычно смертность начинается на 3 неделе, достигает пика на протяжение 4-8 дней 4-5 недели, и затем спадает. Синдром гидроперикардия также встречается в родительском стаде и у несушек, с более низкой смертностью. Аденовирусы считаются причиной этого состояния, но некоторые ученые заявляли, что в этом могут принимать участие и другие агенты. Аденовирусная инфекция у курей Яйценоскость Некоторые ученые отмечают, что инфекция аденовируса приводит к 10% спаду яйценоскости или отрицательному воздействию на качество скорлупы. В другом исследовании после экспериментального заражения птиц четырьмя штаммами аденовируса не было замечено влияния на качество яиц, и только один штамм вируса оказал минимальное воздействие на количество производимых яиц. Аденовирусы можно выделить из промышленного стада, даже при высоком уровне производительности и плодовитости, а аденовирусные инфекции беспатогенного стада часто связаны с небольшим влиянием на яйценоскость и качество яичной скорлупы. Конверсия корма и рост. В отчетах отмечали, что инфекция аденовируса приводит к снижению потребления корма. Хотя птицы привитые аденовирусом могут иметь пониженный вес и даже высокую смертность, есть мало доказательств, чтобы предполагать, что природная инфекция вызывает снижение усвоения корма или роста. Однако, задержка роста не происходила у курей зараженных естественным способом, которых содержали в экспериментальных условиях. Куры, привитые аденовирусом, продемонстрировали снижение привеса сопровождающегося излишним отложением жира и сниженным уровнем холестерина и триглицерида. Респираторное заболевание. Подгруппу 1 птичьих аденовирусов часто выделяли из верхних и нижних дыхательных путей птицы с респираторным заболеванием. Обзор записей выделения вируса, результаты вскрытия и клинические данные на протяжение 20-летнего периода, включая сотни выделений аденовирусов продемонстрировали, что аденовирусы не играют основной роли в респираторном заболевании у птицы. Инфекционный бронхит контролировали с помощью вакцинации и в стаде курей ликвидировали Mycoplazma gallicepticum и Mycoplazma synoviae, и поражения дыхательных путей были более сильными, чем когда из дыхательных путей был выделен аденовирус. Шмидт отметил подобные факты, а также что смешанные инфекции бронхита-микоплазмыаденовируса представляли клиническую картину подобную ларинготрахеиту. Катаральный трахеит и многоочаговые пневмонические поражения, подобные поражениям при экспериментальном заражении аденовирусом, были обнаружены в 13 вспышках, что привело к выводу, что аденовирусы были существенной причиной респираторного заболевания. Экспериментальные инфекции дали неоднозначные результаты. При распылении аэрозоля, возникло слабое респираторное заболевание. После внутритрахеальной прививки обычно начиналось респираторное заболевание, но симптомов не было замечено. Тенозиновит. Аденовирусы были выделены из курей с тенозиновитом, но экспериментальная работа не подтвердила их участия. Патология Гепатит с вирусными включениями Внутриклеточные тельца находятся в гепатоцитах. Эти внутриклеточные тельца могут быть эозинофильными, крупными, круглыми или неправильной формы с прозрачной бледной оболочкой или иногда могут присутствовать базофильные включения. В случаях ГВВ в Австралии базофильные включения преобладают. Частицы вирусов были обнаружены только в клетках с базофильными включениями, и эозинофильные включения состояли из фибриллярного, зернистого материала. В Новой Зеландии поражения включали атрофию сумки Фабрициуса и щитовидной железы, бесформенный костный мозг и гепатит. Включения были эозинофильными. Описание атрофии сумки и щитовидной железы в отсутствии инфекционного бурсита – интересное явление. Синдром гидроперикардия В случаях синдрома гидроперикардия, в околосердечном мешке происходит скопление прозрачной жидкости желтоватого цвета, отек легких, опухшая и обесцвеченная печень, и увеличенные почки с расширенными канальцами, демонстрирующими дегенеративные изменения. Многочисленные участки фокального некроза существуют с мононуклеарной инфильтрацией сердца и почек. Базофильные включения присутствуют в гепатоцитах. Респираторное заболевание При вспышках возникающих при стандартном заражении единственным макроскопическим поражением является умеренный катаральный трахеит с излишней слизью. Гиперемия легких, мутные воздушные мешки, петехиальные кровоизлияния зева и глотки были описаны после экспериментального заражения. Под микроскопом обнаружили истощение ворсинок, некроз некоторых клеток эпителия, внутриклеточные тельца, и инфильтрацию мононуклеарных клеток в lamina propria. Также обнаружили многоочаговую или разбросанную кишечную пневмонию. После распыления аэрозоля в воздушных мешках наблюдались гиперплазия эпителия, отек и инфильтрация мононуклеарных клеток. Некротический панкреатит и эрозия второго желудка. Фокальный панкреатит и эрозия второго желудка присутствовали у курей в отсутствии ГВВ. Внутриклеточные включения, содержащие антиген аденовируса содержались в некротических панкреатических ацинарных клетках и клетках эпителия второго желудка. Панкреатит, связанный с аденовирусной инфекцией был отмечен у цесарок. Иммунитет Подгруппа 1 птичьего аденовируса имеет совместные специфичные к группе антигены, которые отличаются от аденовирусов человека. Есть разница в той степени, как этот антиген делится между серотипами. Например, FAdV-1 дал сильную реакцию на свою собственную антисыворотку, но антиген FAdV-1 не обнаружил антител к FAdV-2 или FAdV-4. Флуоресцентный анализ антитела на микротитры подтвердил эту разницу в титрах. После инфекции птицы быстро разработали нейтрализующие (специфические к типу) антитела, которые можно было обнаружить после 3 недель. Антитела специфические к группе также были обнаружены, но были непостоянными. Их обнаружение, вероятно, зависит от чувствительности анализа. Антитела были также обнаружены с использованием непрямой иммунофлуоресценции. Развитие нейтрализующих антител совпадает с прекращением выделения вируса. Молодняк выделяет вирус дольше из-за более медленного развития нейтрализующих антител. Было обнаружено, что птицы были устойчивы к повторному заражению тем же серотипом через 45 дней после первичного заражения. В другом исследовании птиц повторно заражали тем же штаммом после 8 недель, вызывая вторичную реакцию как нейтрализующих, так и преципитирующих антител. Выделение вируса также произошло несмотря на присутствие гуморальных антител. Пики выделения вируса были обнаружены, когда птицы достигли 2,5, 4,5 и 7,5 месяцев, что соответствует теории, что местный иммунитет длится около 8 недель, но затем убывает, позволяя вирусу размножаться снова на поверхности слизистой. Нейтрализующие антитела, вызванные инактивированной вакциной, не повлияли на выделение вируса в помете, но уменьшили фарингальные выделения, вероятно, предотвратив гематогенное распространение вируса из кишечника в глотку. Поэтому возможно, что устойчивость к инфекции обнаруживаемая после заражения существует благодаря кратковременному местному иммунитету, пока циркулирующие антитела защищают в основном против вторжения во внутренние органы. Очевидное соотношение между внешним видом циркулирующих антител и прекращением действия вируса более вероятно происходит благодаря сопутствующему развитию местного иммунитета, который более кратковременный, и гуморального иммунитета, который более постоянный. Поддержка этой гипотезы обеспечивается данными, что материнские антитела не защищают против естественного способа заражения, но защищают против внутрибрюшного заражения. Есть доказательства, что заражение несколькими штаммами птичьего аденовируса приводит к сильному истощению лимфоцитов в сумке Фабрициуса, щитовидной железе и селезенке, что вызывает иммунодепрессию. Диагноз Выделение и идентификация аденовирусов Используют образцы помета, тканей глотки, почек и затронутых органов, печени. Подготавливают 10% суспензию тканей в среде, и в случае курей прививается в клетки печени или почек эмбриона. Фибробласты эмбриона и культуры трахеальных органов менее чувствительны. Хотя использовали три пассажа, обычно достаточно два холостых пассажа длительностью 7 дней. При попытке выделить аденовирус из других видов птицы предпочтительно использовать их клетки. Подтверждение изолята вируса как аденовируса можно выполнить несколькими способами. Непосредственное обследование продукта лизиса из зараженной клеточной культуры с помощью электронного микроскопа дает быстрый и позитивный ответ и также добавляет то преимущество, что можно обнаружить парвовирус. Иммуноцитохимия (химия клеточного иммунитета) может использоваться для обнаружения антисыворотки аденовирусов в зараженных клетках путем их окрашивания антисывороткой птичьего аденовируса меченого флуоресцентной краской, например флуоресцин изотиоционат (прямая иммунофлуоресценция). Для идентификации серотипа вируса, который был выделен, широко применялись анализы нейтрализации вируса с изолятом против стандартных антисывороток ко всем известным серотипам. Подтверждение с использованием молекулярных методов также доступно и широко используется. Серология Антитела к антигену специфическому к группе можно обнаружить с использованием анализа двойной иммунодиффузии (ДИД), но его очевидная чувствительность при вспышках возникающих естественным способом часто наблюдается благодаря сложной инфекции серотипами аденовируса, что делает его ненадежным для обнаружения инфекции в беспатогенных стадах. Однако, использование тривалентного антигена, включающего три серотипа аденовируса, повышает чувствительность анализа ДИД. Анализ непрямой иммунофлуоресценции намного более чувствительный и быстрый, также недорогой, но его интерпретация требует некоторого предварительного обучения и опыта. ELISA используется для обнаружения антител специфических к группе, он недорогой и чувствительный. Антитела специфические к типу обычно обнаруживали с использованием анализа нейтрализации сыворотки, но для этого также использовали ELISA. Основная проблема с серологическими анализами для аденовирусов – это интерпретация результатов. Антитела специфические к аденовирусам присущи для здоровых и заболевших птиц, и птицы часто заражаются несколькими серотипами. Генотип вируса может представлять больший интерес, чем серотип, для прогнозирования способностей вызывать заболевание. Более того, присутствие гуморальных антител не дает указания на состояние местного иммунитета на поверхности слизистой. Стратегии вмешательства Методика содержания Так как вирус анемии курей и инфекционного бурсита могут усилить патогенность аденовирусов, первый шаг должен представлять контроль или ликвидацию этих двух вирусов. Аденовирусы устойчивы к инактивации, и хотя возможно уничтожить их из большинства птичником с контролируемыми условиями с непроницаемыми полами и потолками, которые можно сделать воздухонепроницаемыми, необходимость ликвидации аденовируса из промышленного стада сомнительна. Это потому что вирус эффективно переносится вертикально через оплодотворенные яйца, так что аденовирус почти несомненно будет занесен в последующее стадо. Поэтому эффективный контроль должен начинаться на уровне прародительского стада. Более того, опыт с беспатогенным стадом показал, что горизонтальное распространение также является большой проблемой, и будет очень трудно содержать промышленное стадо, которое бы не имело инфекции аденовируса. Вакцинация По мере накопления доказательств, что некоторые генотипы могут быть основными патогенными микроорганизмами, возможность вакцинации становится все более привлекательной. Титры материнских антител 1/64 или более были успешными в предотвращении развития ГВВ, но птицы испытали некоторую задержку роста. Вакцина подготовленная с помощью инактивации гомогенатов печени зараженных птиц широко использовалась с явным успехом в Пакистане для контроля синдрома гидроперикардия. Синдром спада яйценоскости Вступление Определение и синонимы Вирус синдрома спада яйценоскости (ССЯ) является единственным членом подгруппы 3 птичьих аденовирусов. Он серологически не связан с подгруппой 1 и 2 вирусов, и распознан только один серотип, хотя при анализе рестрикции эндонуклеазы были продемонстрированы варианты. Вирус ССЯ стад основной причиной потерь в производстве яиц во всем мире. Он вызывается аденовирусом, вероятно заносящимся в стадо курей через зараженную вакцину. Заболевание характеризуется кладкой яиц с тонкой скорлупой, или вовсе без скорлупы внешне здоровыми птицами. Если это состояние установлено у родительского стада, то его скорее всего наблюдают как неспособность достигнуть производственных задач и изменения яичной скорлупы менее очевидны. С момента его признания стало очевидным, что случайные вспышки ССЯ происходят в результате того, что птица заражается посредством прямого или непрямого контакта с зараженной дикой или домашней вводно-водной птицей. История Состояние курочек-несушек было описано датским ученым в 1976 г., и тогда были выделены гемагглютинирующие аденовирусы. С помощью серологического исследования с одним из этих изолятов и обследования, было возможно установить модель заболевания. Вирус переносится вертикально через яйцо, а горизонтальный перенос от стада к стаду не являлся чертой заболевания. Вирус часто оставался латентным, пока птицы приближались к пику яйценоскости. Из-за отсутствия антител к вирусу у курей перед 1974 и неспособности вируса расти в клетках млекопитающих, а также плохого роста в клетках индюшек и оптимального роста в клетках уток было сделано предположение, что, вероятно, это аденовирус уток. Это предположение быстро подтвердили путем выделения вируса ССЯ из нормальных уток и демонстрации наличия антител во многих стадах уток. Значение для здоровья общества Вирус затрагивает только птицу, не влияет на здоровье общества. Этиология Классификация Вирус ССЯ классифицирован как аденовирус на основе морфологии, размножения и химического состава. Вирус не отнесли к 11 птичьим и 2 индюшачьим прототипам аденовирусов с использованием анализа нейтрализации сыворотки (НС) или ингибирования гемагглютинации (ИГ). Хотя антигены птичьих аденовирусов специфических к группе не были обнаружены с помощью иммунодиффузии или иммунофлуоресценции в вирусных препаратах ССЯ, присутствие распространенных антигенных детерминант были показаны в экспериментах, в которых антитела птичьих аденовирусов специфических к группе, которые развились в курах после прививки вирусами подгруппы 1., и они были повторно стимулированы после последовательной прививки вирусом ССЯ. Секвенирование генома вируса ССЯ показало существенную разницу в подгруппе 1 птичьих аденовирусов. Эта разница включает меньший размер набора генов и высокое содержание АТ. Также хотя некоторые ранние гены аденовирусов недостает в вирусе ССЯ, были идентифицированы другие гены, которые не имеют очевидной гомологии с известными протеинами птичьих аденовирусов. Вирус ССЯ имеет схожесть по своим генетическим характеристикам с овечьим аденовирусов и в некоторой степени к коровьему. Эта группа существенно отличается от аденовирусов млекопитающих, и от вирусов птицы подгруппы 1и 2, чтобы его можно было классифицировать как отдельный род аденовируса, которым дали имя Atadenovirus, чтобы отразить высокое содержание АТ. Хотя первичные изоляты вируса ССЯ получили от курей, сегодня признано, что вирус произошел от уток, и его разновидность обозначают как тип 1 аденовируса уток (DadV-1). Морфология Ультраструктурная Очищенные препараты вируса из градиентов цезий хлорида показали типичную морфологию аденовируса, треугольные поверхности которых имеют 6 капсомеров по краю, и одну 25-нм файбер-протеин, которая выступает из каждой вершины. В неочищенных препаратах детали структуры поверхности неясны. Хотя частицы вирусов – аденовирусы с хорошо обозначенными капсомерами с полыми центрами, возможно отличить их от обычных аденовирусов в некоторых препаратах для электронного микроскопа. В тонких участках клеток печени зараженного эмбриона в ядрах видны частицы вирусов размером 70-75 нм. Частицы 68-80 нм в диаметре были описаны в ядрах эпителиальных клеток слизистой яйцевода. Вирус ССЯ имеет одну нитку на пентон, в отличие от вирусов подгруппы 1, которые имеют два файбер-протеина. Размер и плотность Размер вируса ССЯ в отрицательно окрашенных препаратах – от 76 до 80 нм. Эти размеры попадают в пределы размеров аденовирусов. Химический состав Мечение Р3-тимидином и ингибирование йодо-деоксиуридином показало, чтовирус ССЯ содержал ДНК. Молекулярный вес ДНК оценили как 22,6 х 106 . вирус ССЯ имеет 13 структурных полипептидов, как минимум 7 из которых соответствуют полипептидам птичьего аденовируса. Гемагглютинация Вирус ССЯ агглютинировал эритроциты курей, уток, индюшек, гусей и т.д. Гемагглютинин (ГА) устойчив к нагреванию при 56С. После 16 ч при 56С наблюдался спад титров ГА в четыре раза, и на протяжение 4 дней титры оставались стабильными, но после 8 ч при 56С не было обнаружено ГА. ГА выжил нагревание при 60С, но был уничтожен при нагревании до 70С 30 мин. Активность ГА оставалась стабильной долгий период при 4С и устойчивой к обработке трипсином, 2-меркаптоэтанолом, этиленэдиаминететрауксусной кислотой (ЭДТК), папаином, фицином и 0,5% формальдегида при 37С 1 час, но титры сильно снизились при обработке йодат калием и 0,5% глутаральдегидом. Однако, очищенный растворимый ГА был уничтожен при обработке трипсином. Альфа-химотрипсин уничтожил рецептор вируса на эритроцитах курей, а трипсин и нейраминидаза не имели успеха. Размножение вируса Вирус ССЯ размножается в ядре зараженных клеток таким же способом как и птичьи аденовирусы подгруппы 1. внутриклеточные тельца наблюдались в гематоксилине и окрашенных эозином препаратах зараженных вирусом клеточных культур, в эпителиальных клетках воронки маточной трубы, канальцах матки, мешке матки, перешейке матки, и в слизистой носа и селезенке экспериментально зараженных курей. На участках повышенной тонкости клеток зараженных вирусом ССЯ исследованных под электронным микроскопом в ядре были видны частицы аденовируса и включения типа 1-4 подобные другим птичьим аденовирусам. Восприимчивость к химическим и физическим агентам Вирус ССЯ был стабилен при обработке хлороформом и различной кислотностью рН 3-10. вирус инактивировался при нагревании 30 минут при 60С, выжил на протяжение 3 ч при 56С, и был стабилен в присутствии моновалентных, но не дивалентных катионов. Инфекционность не была продемонстрирована после обработки 0,5% формальдегида или 0,5% глутаральдегида. Классификация штаммов Только один серотип вируса ССЯ был распознан. С использованием анализа рестрикции эндонуклеазы, однако, было возможно разделить различные изоляты на три генотипа. В одну группу входили изоляты, которые делались на протяжение 11-летнего периода от зараженных европейских курей, и во вторую группу входили вирусы выделенные от уток в Великобритании. Один вирус выделили из курей в Австралии. Лабораторные системы вирус-хозяин Вирус ССЯ размножается до высоких титров в почках, печени и клетках-фибробластах эмбрионов уток, а также в клетках печени эмбрионов курей, плохо размножался в клеткахфибробластах эмбрионов курей. Патогенность Хотя все куриные изоляты вируса ССЯ имеют подобную вирулентность, изоляты от уток из США не подействовали на яйценоскость курей или повлияли только на размер яиц. Изоляты от уток и курей в Европе повели себя подобным образом у курей. Патология и эпизоотология Сфера действия и распространение Вирус ССЯ был выделен из курей в Австралии, Бельгии, Китае, Франции, Великобритании, Венгрии, Индии, Израиле, Италии, Японии, Северной Ирландии, Сингапуре, Южной Африке и Тайване. Природные и экспериментальные носители Хотя вспышки заболевания были замечены только у несушек, вероятно, что природные носители вируса ССЯ – утки и гуси. ГИ антитела вируса ССЯ широко распространены среди одомашненных уток и домашних гусей. В исследовании с утками в Атлантическом миграционном маршруте США антитела были найдены у множества птиц. Антитела также были обнаружены у мускусных уток и других птицах. Так как вирус ССЯ первоначально переносился вертикально у курей, часто его связывали с определенными породами курей. Однако, различные породы одинаково восприимчивы к экспериментальному заражению, хотя анализ природных вспышек наводит на мысль, что на родительское стадо и тяжелые породы, несущие коричневые яйца инфекция вируса более сильно воздействует, чем не курочек несущих белые яйца. Когда заражал две породы курочек, несущих коричневые и белые яйца, яйценоскость снижалась у породы несущей белые яйца. У коричневых несушек наблюдалось небольшое снижение яйценоскости, но больше яиц получали с дефектами скорлупы. Одна коричневая порода несла почти в три раза больше яиц, чем белая порода курочек-несушек. К инфекции вируса ССЯ восприимчивы куры всех возрастов. Занесение вируса ССЯ в производство повлияло на яйценоскость курочек всех возрастом. Однако появление заболевание в период пика производства может случиться вследствие повторной активизации латентного вируса. Перенос, переносчики и векторы Теперь возможно разделить вспышки ССЯ на три типа. В первоначально наблюдаемой классической форме заболеванием заражалось прародительское стадо, и основным способом распространения был вертикальный через оплодотворенное яйцо. Хотя количество зараженных эмбрионов было вероятно низким при таком типе заражения, побочное распространение вируса было очень эффективным. Во многих случаях куры зараженные in ovo не выделяли вирус или развили ГИ антитела до тех пор пока стадо достигло яйценоскости более чем 50%. На этой стадии вирус повторно активизировался и выделялся, что приводило к быстрому распространению вследствие многочисленным очагам инфекции. Возможно, возникнув вследствие классической форме ССЯ вирус укоренился в промышленных стадах курочек- несушек в некоторых районах. В Индии, например, было заражено 32,6% домашней птицы. Эта эндемичная форма часто связана с обычной установкой для упаковки яиц. Нормальные яйца и яйца с дефектами скорлупы, снесенные в период роста вируса в матке, содержали вирус внутри и снаружи. Это привело к заражению лотков для яиц. Помет также содержал вирус, но это выделение вируса было периодическим, и вирус часто присутствовал с низкими титрами. У взрослых птиц присутствие вируса в помете вероятно происходит вследствие заражения экссудатом яйцевода. Кроме непосредственного переноса от птицы к птице есть доказательства, что распространение может произойти, когда птиц перевозят в плохо помытых грузовиках или когда неиспользованный корм перевозят с птицефабрики на птицефабрику. Также есть доказательства, что иголки или ножи используемые для вакцинации или кровопускания при несоответствующей стерилизации могут переносить инфекцию. Побочное распространение вируса происходит медленно и скачкообразно, что занимает до 11 недель. Распространение вируса между птицами, содержащимися на подстилке, обычно происходит быстрее. Распространение вируса ССЯ от домашних или дики уток, гусей или других диких птиц курочкам через питьевую воду зараженную пометом является причиной третьего типа вспышек заболевания. этот тип заболевания очень важен в некоторых районах, и такие случаи довольно случайные, но всегда есть опасность, что зараженное стадо станет фокусом эндемической инфекции. Клинические симптомы После экспериментального заражения большинство ученые обнаружили первые симптомы ССЯ после 7-9 дней, но в некоторых экспериментах симптомы заболевания не появлялись до 17 дня после заражения. Первый симптом – потеря пигмента яиц. За этим быстро следует кладка яиц с тонкой, мягкой скорлупой или вовсе без нее. Яйца с тонкой скорлупой часто были с неровной поверхностью, с бумаго-подобной текстурой или зернистые образования на скорлупе на одном конце яйца. Если яйца с дефектами были отбракованы, это значит, что плодовитость и выводимость не были затронуты, и не было долгосрочного воздействия на качество яиц. Если птицы были заражены на поздней стадии производства яиц, насильственная линька стада восстанавливает производство до нормального уровня. Спад яйценоскости был очень быстрым или длительным на протяжение нескольких недель. Вспышки ССЯ обычно длились 4-10 недель, и яйценоскость снизилась до 40%, однако, часто позже на стадии кладки наблюдалось восстановление кладки, поэтому общее количество потерянных яиц достигало 10-16/птицу. Если заболевание возникло вследствие повторной активизации латентного вируса, спад неожиданно произошел, когда яйценоскость была между 50% и пиковым уровнем. При естественных вспышках описывались маленькие яйца, но при экспериментальном заражении не было замечено воздействия на размер яиц. Описывали водянистые белки в некоторых случаях. Возраст во время заражения может иметь значение, однако, птицы, зараженные в 1 день, несли на вид нормальные яйца кроме пониженного качества белка и меньшего размера. Если некоторые птицы приобрели антитела перед тем как латентный вирус повторно активизировался, наблюдаются различные клинические симптомы. Можно заметить неспособность достигнуть прогнозируемой яйценоскости, и начало яйцекладки может задержаться. Если сделать тщательное исследование, обычно можно установить, что есть ряд клинических эпизодов классического ССЯ. Предположительно, присутствие ССЯспецифических антител замедляет распространение вируса в организме птицы. Подобную картину часто наблюдали у птиц, содержащихся в клетках, где распространение вируса может быть медленным и ССЯ нельзя подозревать. В других обстоятельствах затронутые птицы остаются здоровыми. Хотя в некоторых стадах наблюдались потеря аппетита, болезненность, это не постоянные симптомы. Кратковременная диарея, описываемая некоторыми авторами появлялась вследствие экссудата из яйцевода. Вирус ССЯ не вызывает клинического заболевания у растущих цыплят на поле. Оральное заражение восприимчивых однодневок привело к повышенной смертности в первую неделю жизни, но не было роста смертности во многих стадах курей от родительского стада зараженного инфекцией. Патология Макроскопические поражения При естественных вспышках ССЯ неактивные яичники и атрофированные яйцеводы часто были единственными распознаваемыми поражениями, и они присутствовали непостоянно. В одной вспышке наблюдался маточный отек. Отсутствие поражений может отражать трудности в отборе птиц, которые могут иметь острое заболевание. После экспериментального заражения вирусом ССЯ присутствие экссудата в мешке матки обычно наступает на 9-14 день. Также наблюдаются слабая форма спленомегалии, мягкие неоплодотворенные яйца, и яйца в различной стадии образования в брюшной полости. Микроскопические поражения Основные патологические изменения произошли в мешке матки. Размножение вируса в ядрах эпителиальных клеток дало внутриклеточные включения с 7 дня после заражения. Многие затронутые клетки слущивались в просвет, и наблюдалась быстрая и сильная воспалительная реакция, которая охватывала макрофаги, клетки плазмы, лимфоциты, а также различным количеством гетерофил в lamina propria и эпителии. Внутриклеточные тельца не были замечены после третьего дня анормальной кладки яиц, но вирусные антигены сохранялись до 1 недели. Патогенез инфекционного процесса Экспериментальное оральное заражение взрослых курочек вирусом ССЯ привело к вирусемии с ограниченным размножением вируса в слизистой носа. На 3-4 день после заражения размножение вируса происходило в лимфатических тканях во всем организме, в особенности в селезенке и щитовидной железе. Кроме того, вирус затрагивал воронку яйцевода. На 7-20 день после заражения в мешке матки был обнаружен достаточный уровень размножения вируса, причем в других частях яйцевода уровень размножения был низким. Это размножение было связано с резко выраженной воспалительной реакцией в мешке матки, и кладкой яиц с дефектной скорлупой. В отличие от аденовирусов подгруппы 1 и 2 вирус ССЯ не размножается в слизистой кишечника, и содержание вируса в помете происходит вероятно вследствие заражения экссудата яйцевода. Иммунитет После экспериментального заражения вирусом ССЯ антитела были обнаружены с помощью непрямой пробы с флюоресцирующими антителами, ELISA, анализов ГИ через 5 дней после заражения и анализа двойной иммуннодиффузии после 7 дней. Антитела достигли пика через 4-5 недель, и иммунопреципитирующие антитела были более временными. Птицы продолжали выделять вирус ССЯ в присутствии высокого уровня ГИ антител, но у некоторых птиц, которые выделяли вирус, не выработались антитела. Антитела передавались эмбрионам через желточный мешок, и молодняк имел высокие титры ССЯ. Эти антитела имели период полураспада 3 дня. Активная выработка антител не стимулировалась пока куры не достигли 4-5 недель, когда материнские антитела были почти необнаруживаемыми. Когда заболевание ликвидировали, было обнаружено, что некоторые стада, которые не имели обнаруживаемых антител, что было проверено после тестирования ГИ, тем не менее, внезапно заболели ССЯ. Это значит, что некоторые куры заразились in ovo и у них развилась скрытая инфекция, но не выработались антитела. С началом яйцекладки вирус повторно активизировался и произошло выделение вируса. Неизвестно, у всех ли кур развились антитела к этому моменту, но вероятно, что нет, потому что менее чем 100% птиц зараженного стада имели антитела. Если у всего стада развивается иммунитет к вирусу ССЯ76 перед тем как они начинают нестись, это повлияет на производство яиц. Диагноз Выделение и идентификация вируса ССЯ Наиболее чувствительная среда для выделения вируса – оплодотворенные яйца уток или гусей полученные от стада, не имеющего вируса ССЯ или клеточные культуры гусей и уток. Если они недоступны, нужно использовать клетки курей. Клетки печени эмбрионов курей были более чувствительны, чем клетки почек, и фибробласты эмбрионов были нечувствительны. Оплодотворенные куриные яйца не подходят. Полагаться на смерть эмбриона или цитопатический эффект, как на показатель выделения вируса ССЯ, не следует. Аллантоисную жидкость от привитых гусиных или утиных яиц или поверхностную жидкость от зараженных клеточных культур нужно проверить после каждого пассажа на присутствие вируса ССЯ ГА, с использованием птичьих эритроцитов. (для этого подходит суспензия с 0,8% куриных эритроцитов). В качестве альтернативы можно использовать иммунофлуоресценцию с применением меченых антисыворотки вируса ССЯ, для обнаружения присутствия вируса в клетках. Коньюгированная антисыворотка к птичьим аденовирусам не обнаружит вирус ССЯ. Если для выделения использовать клетки уток, потребуется как минимум 2 пассажа, и с куриными клетками 2-5 пассажей перед тем как объявить образец отрицательным. Необходимость экстенсивных пассажей возникает частично вследствие плохого роста вируса при первичном выделении в куриных клетках, и частично из-за того, что титры вируса в тканях могут колебаться особенно если птица, поставленная в лабораторию не находится на стадии заболевания, когда титры вируса максимальные. Отбор образцов Из-за отсутствия явных клинических симптомов и часто медленного распространения инфекции может быть очень трудно отобрать зараженных птиц для выделения вируса или для серологии. Данные о том, что анормальные яйца содержат вирус и что эти яйца несутся после того как у птицы развились антитела ССЯ, дало рациональный подход к диагнозу. Чтобы выделить вирус анормальные яйца можно скармливать взрослым серонегативным курочкам-несушкам. После того эти птицы также начнут нести анормальные яйца, их нужно забить, и сделать попытку выделения вируса из сумки Фабрициуса. Для серологического диагноза у всех птиц в клетках, где несли анормальные яйца, нужно взять образцы крови. Если птицы выращиваются на подстилке, нужно отобрать образцы по всему птичнику, так как обычно невозможно определить какие птицы несут анормальные яйца в таких условиях. Серология ГИ, ELISA, DID, IFA,анализы представляют одинаковую чувствительность. Когда птиц заражают одинаковым количеством серотипов аденовирусов, однако, с последующим стимулированием высокого уровня перекрестно реагирующих антител, наблюдалась позитивная реакция на ELISA, DID, IFA, но не на анализ ГИ или SN. Дифференциальный диагноз Синдром спада яйценоскости нужно подозревать в любой ситуации, когда не удается достичь прогнозируемого уровня яйценоскости или есть спады яйценоскости, особенно у здоровых птиц, и когда есть изменения скорлупы или это все происходит одновременно. Яйца без скорлупы обычно являются признаком ССЯЮ но это часто пропускают, потому что яйца поедаются птицами. Поэтому нужно рано утром проверять на предмет наличия яиц, еще до того как их съедят куры. Если птиц содержат на подстилке, при внимательном поиске можно обнаружить оболочки яиц. Хотя яйца без скорлупы, с мягкой и тонкой скорлупой – характерные признаки, яйца неправильной формы и с образованиями не являются признаками заболевания. в зараженном стаде, в котором произошло вертикальное заражение, большинство случаев, если не все, возникают рядом с пиком яйценоскости, но в любом возрасте стадо может заразиться посредством бокового распространения. Хотя симптомы ССЯ характерные, диагноз нужно ставить не только на основе клинической картины, но и подтвердить его с помощью анализа ГИ перед тем как рассматривать необходимость вакцинации. Стратегия вмешательства Процедуры содержания Так как классический ССЯ распространяется в первую очередь вертикально через яйцо, ремонтное стадо нужно брать от незараженного стада. Эндемический ССЯ часто связан с одной станцией упаковки яиц, на которой зараженные поддоны были основным фактором в распространении заболевания. Вирус также присутствует в помете, и боковое распространение возможно, потому что вирус устойчивый инактивации. Существуют доказательства переноса вируса через персонал и транспорт, и поэтому необходимо принимать меры по санитарной обработке. У зараженных птиц развивается вирусемия, и таким образом, важно, чтобы иглы для прививок вакцинами и другое оборудование было стерилизованным между применением к разным птицам. Если зараженные и незараженные стада родительского стада сосуществуют, нужно использовать отдельные инкубатории, персонал и транспорт. Если это невозможно, то нужно использовать отдельные закладочные и выводные машины, и выведение должно быть запланировано на различные дни недели. Минимальные возможные предосторожности (которые не рекомендуются) – это использовать отдельные выводные машины и разделать стадо по полам, вакцинировать и отправлять незараженное стадо перед обработкой потенциально зараженных цыплят. В некоторых странах, особенно там, где питьевую воду для птиц берут из запруд, озер или рек, вирус ССЯ очень распространен. Эти вспышки удалось контролировать при помощи использования воды из колодцев или хлорирования воды. Ликвидация ССЯ ликвидировали успешно на родительской птицефабрике в Северной Ирландии. Метод был основан на нескольких предположениях: 1. Цыплята, полученные из яиц зараженных ССЯ могут иметь скрытую инфекцию и у них не смогут развиться антителе 2. вирус повторно активируется и будет выделяться во время пика яйценоскости, разовьются антитела ССЯ, что предотвратит или снизит дальнейшее выделение вируса 3. боковое распространение небольшое Программа ликвидации вируса была основана на элитном прародительсокм стаде в возрасте от 40 недель. На этой стадии эти стада несли анормальные яйца и имели ГИ ССЯ антитела. Цыплят выведшихся из яиц, разделили на небольшие группы числом около 100 (отделили с помощью сетки). 10-25% цыплят были протестированы с помощью ГИ на антитела ССЯ в интервалы около 6 недель. Если обнаруживали одну или две позитивных реакции, то этих птиц убирали, произвели анализы 100% птиц в загоне и 100% птиц из прилегающих загонов дважды через недельные интервалы. Если были обнаружены позитивные реакции или позитивные реакции продолжали появляться в одном загоне, целый загон был изъят и произвели анализы прилегающих загонов. На 40 неделе 100% птиц были проанализированы с помощью ГИ анализа, и яйца были собраны для следующего поколения. Эта программа была успешной, и впоследствии прародительское и родительское стадо не содержало инфекции. Вакцинация Типы вакцины Инактивированная вакцина с масляным адъювантом широко используется и обеспечивает хорошую защиту против клинического ССЯ. Птиц вакцинируют в период 14-16 недель. Если вакцинируют незараженных птиц, можно ожидать титры ГИ ССЯ 8-9 log2. Если стадо ранее подвергалось вирусу ССЯ, то можно обнаружить титры 12-14 log2. Реакцию антител на ГИ можно обнаружить по седьмому дню после вакцинации, причем максимальные титры достигаются между второй и пятой неделей. Иммунитет, обеспеченный вакциной длится как минимум 1 год. Хотя хорошо вакцинированные птицы защищены от заболевания и не выделяют вирус ССЯ, а плохо вакцинированные птицы с низкими титрами ССЯ выделяли вирус после экспериментального заражения. Вакцинация на поле Если есть вероятность вертикального или бокового переноса вируса ССЯ, стадо, находящееся в опасности, можно защитить вакцинацией в период гровер. Если заражаются птицы более одного птичника на птицефабрике с разновозрастным стадом вследствие бокового распространения вируса, нужно тщательно оценить ситуацию перед тем как вакцинировать здоровых птиц во время кладки. Несомненно, что здоровых птиц можно защитить с помощью вакцинации, но стоимость вакцинации совмещенная с эффектом перемещения птиц, чтобы доставить инактивированную вакцину, нужно тщательно взвесить экономическую выгоду извлекаемую вследствие защиты. Возможно ограничить распространение вируса с помощью соблюдения правил гигиены. Особенно важно помнить, что зараженное яйцо представляет более опасный источник вируса. Лечение Для лечения синдрома спада яйценоскости использовали различные виды лечения (например, добавление витаминов и повышение уровня кальция или протеина в рационе), но в контролируемых экспериментах это не продемонстрировало никакого эффекта. Поэтому, пока не существует успешного лечения ССЯ.
