kukisheva_aa - Новосибирский Государственный Аграрный

На правах рукописи
КУКИШЕВА Анна Анатольевна
ВЛИЯНИЕ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА МИКРОФЛОРУ И
ФЕРМЕНТАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ ДЕРНОВО-ПОДЗОЛИСТОЙ
ПОЧВЫ ТОМСКОЙ ОБЛАСТИ И ЧЕРНОЗЕМА ВЫЩЕЛОЧЕННОГО
АЛТАЙСКОГО ПРИОБЬЯ
03.02.08 − Экология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Новосибирск – 2011
Работа выполнена в ФГОУ ВПО Новосибирский государственный
аграрный университет.
Научный руководитель
доктор биологических наук, профессор,
заслуженный деятель науки РФ
Наплекова Надежда Николаевна
Официальные оппоненты
доктор биологических наук, профессор,
заслуженный деятель науки РФ
Цильке Регинальд Александрович
кандидат биологических наук, доцент
Логуа Марианата Ташеевна
Ведущая организация
Томский государственный университет
Защита состоится «____»_________________________в _______часов
на заседании диссертационного совета Д 220.048.03 при ФГОУ ВПО
Новосибирский государственный аграрный университет по адресу: 630039, г.
Новосибирск, ул. Добролюбова, 160.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО
Новосибирский государственный аграрный университет и на сайте:
www.nsau.edu.ru
Автореферат разослан «____ »____________________2011 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
Маренков В.Г.
2
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность работы. Долгое время считали, что микрофлора разных
типов почв не имеет принципиальных различий, однако постепенно было
установлено, что это не совсем так. Специфические экологические условия
(температура, влажность почвы, степень окультуренности и т.п.) предопределяют
особенности микрофлоры и ее жизнедеятельность в почвах (Тен Хак Мун, 1977),
поэтому изучение почвенных микроорганизмов и их активности – актуальная
проблема, требующая реализации в конкретных почвенно-климатических
условиях.
Внесение удобрений приводит к перестройке экологической обстановки, что
отражается на структуре микробного сообщества почвы и его биологической
активности. Микробное сообщество чутко реагирует на все положительные и
отрицательные изменения в почвенной среде и является индикатором
экологического состояния почвы (Звягинцев, 1987). Ряд авторов считают, что
«...более важно своевременно обнаружить не изменения содержания того или
иного вещества (элемента), а изменения состояния биоты, влекущие за собой
негативные последствия» (Структурно-функциональная…, 2003).
Таким образом, состав почвенной микрофлоры тесно связан с
экологическими факторами и существенно изменяется при применении удобрений.
Наиболее рационально изучать изменение свойств почв под воздействием
различных антропогенных и природных факторов в условиях длительных
стационарных опытов, что и определило необходимость и актуальность наших
исследований на стационарах в двух резко отличающихся почвенными и
погодными условиями зонах.
Цель исследований – изучить влияние экологических факторов
(удобрений, генетических горизонтов, погодных условий) на микрофлору и
ферментативную активность дерново-подзолистой почвы Томской области и
чернозема выщелоченного Алтайского Приобья.
Задачи исследований:
1. Изучить влияние удобрений в разных экологических условиях на
численность
основных
эколого-трофических
групп
микроорганизмов,
участвующих в круговоротах азота, серы, железа, фосфора.
2. Определить основные группы ферментов в изучаемых почвах.
3. Оценить действие удобрений на фитотоксичность почв.
Научная новизна. Получены новые сравнительные данные влияния
длительного применения удобрений на микробоценозы почв таежно-лесной и
лесостепной зон Западной Сибири. В работе впервые приводятся сведения о
влиянии удобрений на микрофлору круговоротов серы и железа.
Установлено, что внесение удобрений в различной степени воздействует на
микрофлору почв, участвующую в круговоротах азота, серы, железа, фосфора:
микробный комплекс дерново-подзолистой почвы обладает меньшей
устойчивостью к данному антропогенному фактору в 3 раза, чем чернозема
выщелоченного.
Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты
исследований расширяют сведения об изменениях микрофлоры биологических
круговоротов азота, серы, железа, фосфора под действием длительного
применения удобрений. Показано, что микрофлора, участвующая в газовых
циклах, более чувствительна к внесению удобрений, по сравнению с
микрофлорой осадочных циклов.
Информацию об изменениях в комплексе почвенных микроорганизмов
можно применять для диагностики состояния агроэкосистем и разработки
стратегии применения удобрений. Материалы диссертации используются в
учебном процессе при изучении дисциплин «Экология», «Сельскохозяйственная
экология», «Охрана окружающей среды» при подготовке специалистовагроэкологов в сельскохозяйственных вузах сибирского региона.
Защищаемые положения:
1. Длительное применение удобрений на дерново-подзолистой почве и
черноземе выщелоченном приводит к изменению структуры микробоценоза
круговоротов азота, серы, железа, фосфора.
2. Доля влияния экологических факторов (удобрений, генетических
горизонтов, погодных условий) зависит от изучаемой группы микроорганизмов.
3. Суммарная биологическая активность почвы при длительном
применении удобрений повышается независимо от типа почвы.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на: XLVI
Международной научной студенческой конференции «Студент и научнотехнический прогресс» (Новосибирск, 2008); XIII Международной экологической
студенческой конференции «Экология России и сопредельных территорий»
(Новосибирск, 2008); I региональной научно-практической конференции
«Продовольственная безопасность Среднего Приобья» (Колпашево, 2008);
Международном семинаре по прецизионным методам ведения сельского
хозяйства «Качество и точность сельскохозяйственных процессов» (Новосибирск,
2008); VII Межрегиональной конференции молодых ученых и специалистов
аграрных вузов Сибирского федерального округа «Инновационный потенциал
молодых ученых в развитии агропромышленного комплекса Сибири»
(Новосибирск, 2009); Региональной научно-практической конференции «Химия и
жизнь» (Новосибирск, 2010); IV Международной научной конференции молодых
учёных, посвящённой 40-летию СО Россельхозакадемии «Новейшие направления
развития аграрной науки в работах молодых учёных» (Новосибирск, 2010).
Публикации результатов исследований. По теме диссертации
опубликовано 14 работ, в том числе одна в издании, рекомендованном ВАК
(«Достижения науки и техники АПК»).
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 157 страницах
машинописного текста, состоит из введения, 6 глав, выводов, списка
использованной литературы, включающего 230 наименований, в том числе 16
иностранных авторов. Работа содержит 31 таблицы, 15 рисунков.
Автор выражает глубокую благодарность и признательность академику
РАСХН Гамзикову Геннадию Павловичу за помощь в выборе объектов
исследования и научному руководителю, доктору биологических наук,
профессору Наплековой Надежде Николаевне.
4
2. ОБЪЕКТЫ, УСЛОВИЯ И МЕТОДЫ ПРОВЕДЕНИЯ
ИССЛЕДОВАНИЙ
Для сравнительной оценки влияния удобрений на микрофлору и
ферментативную активность почвы были отобраны образцы почв с вариантов
стационарных длительных опытов по изучению систем применения удобрений в
разных экологических условиях:
 дерново-подзолистая почва (год закладки опыта 1948 г., Нарымская ГСС,
подтайга), варианты: 1) контроль (без удобрений); 2) (NPK)120; 3) (NPK)90 + 40 т/га
навоза;
 чернозем выщелоченный (год закладки опыта 1942 г., Западно-Сибирская
овощная станция, лесостепь), варианты: 1) контроль (без удобрений); 2) N56P81K66;
3) N56P81K66 + 6 т/га компоста.
Агроклиматические условия Томской области существенно различались за
годы исследований: 2006 и 2008 гг. характеризовались как теплые – температура
за вегетационный период была выше на 0,9 и 0,5 0С соответственно. Количество
выпавших осадков в 2006 г. было вдвое меньше, чем в 2008 г. Таким образом,
лимитирующим фактором в развитии микроорганизмов являлось увлажнение
почвы.
Июнь 2006 г. в Алтайском крае по температурному режиму был жарким и
сухим. Температура воздуха составила 20 0С, осадков выпало меньше
многолетних значений на 23,7 мм (норма – 54 мм). В целом вегетационный
период 2006 г. оказался холоднее предыдущих годов, с дефицитом осадков во
всех месяцах, кроме июля.
Микробиологические анализы проводили на кафедре агроэкологии и
микробиологии Новосибирского государственного аграрного университета по
методам, рекомендованным ВНИИСХМ (Ежов, 1974; Методы.., 1966). Общее
количество бактерий, использующих органический азот, учитывали на
мясопептонном агаре (МПА) и питательном бульоне; бактерий, использующих
минеральный азот, и актиномицетов – на крахмалоаммиачном агаре (КАА);
нитрифицирующих бактерий – на среде Виноградского для нитрификаторов;
аэробных азотфиксирующих микроорганизмов – на безазотистой среде Эшби;
анаэробных азотфиксаторов – на среде Виноградского для клостридий;
денитрифицирующих микроорганизмов – на среде Березовой; олигонитрофилов –
на голодном агаре (ГА); целлюлозолитических микроорганизмов – на агаре
Гетчинсона; пигментных фотосинтезирующих серобактерий – на среде Ван-Ниля;
бесцветных серобактерий – на среде Боргарта; тионовых бактерий – на среде
Бейеринка; десульфофикаторов – на среде Старкей; микроорганизмов,
минерализующих органический фосфор, – на среде Менкиной; разрушающих
минеральный фосфор – на среде Муромцева; микроорганизмов, окисляющих
железо, – на среде Лиске; восстанавливающих Fe+3 в Fe+2 – по методу Молиша;
микроскопических грибов – на подкисленной среде Чапека. Видовой состав
доминирующих микроорганизмов определяли по руководствам Н.А.
Красильникова (1949), Н.Н. Наплековой (1983), К.С. Bergey (1974).
Ферментативную активность изучали по следующим методам: каталазную
активность – по методу А.Ш. Галстяна (1956); для определения амилазы
5
использовали методику Н.А. Красильникова, В.В. Котелева для фосфатазы (1959)
в нашей модификации, с точной дозировкой крахмала. Активность разложения
целлюлозы хлопчатобумажной ткани определяли по потере массы целлюлозы,
заложенной на определенный срок в почву, протеолитическую активность − по
уменьшению массы азотосодержащих веществ желатины (Наплекова, 2001).
Фитотоксичность почвы определяли методом почвенных пластинок (Берестецкий,
1971), используя в качестве критерия процент всхожести семян редиса сорта
Жара.
Полученные
экспериментальные
данные
обработаны
методом
дисперсионного анализа с использованием пакетов прикладных программ
SNEDECOR (Сорокин, 2004), рассчитано стандартное отклонение.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Микробиологические превращения в круговороте азота дерновоподзолистой почвы при длительном внесении удобрений
Биологическое состояние почвы характеризуется численностью основных
групп микроорганизмов, выполняющих определенные функции. Одним из
важных факторов, влияющих на размножение микроорганизмов, является
наличие минеральных и органических веществ. Установлено, что в дерновоподзолистой почве в слое 0-20 см общая численность микроорганизмов в
контроле составила 6,22 (2006 г.) и 14,64 (2008 г.) млн КОЕ/г почвы. Внесение
минеральных
удобрений
увеличило
численность
до
14,45-17,26,
органоминеральных – 15,83-22,43 млн КОЕ/г почвы и положительно повлияло на
развитие всех групп микроорганизмов.
Численность микроорганизмов, развивающихся за счет минеральных
источников азота (КАА) и являющихся показателем развития минерализационных
процессов в почве, определяла доза вносимых минеральных туков (рис.1).
1
2
3
Рис. 1. Численность микроорганизмов дерново-подзолистой почвы в слое
0-20 см: 1 – контроль; 2 – (NPK)120; 3 – (NPK)90 +40 т/га навоза
6
В варианте (NPK)120 содержание минерализаторов увеличилось в слое 0-20
см в 1,6-3,8; (NPK)90+ 40 т/га навоза – в 2,9-3,4 раза по отношению к контролю.
Наибольшая их численность отмечена в варианте (NPK)120 в 2008 г. − 63,7 млн
КОЕ/г почвы.
При использовании только минеральных удобрений зафиксирована
тенденция к снижению содержания аммонифицирующих бактерий по сравнению
с совместным внесением минеральных и органических. (NPK)90 + 40т/га навоза
стимулировали
рост
численности
микроорганизмов,
ассимилирующих
органические формы азота (МПА), их содержание увеличилось в 2,6 (2006 г.) и
1,3 раза (2008 г.) по сравнению с контролем. В соответствии с характером
распределения органических веществ по почвенному профилю число
аммонификаторов убывает с глубиной. Среди микроорганизмов, выделенных на
МПА, преобладают неспороносные формы.
Средняя численность анаэробных аммонификаторов в верхних горизонтах,
выявленная методом предельных разведений, составляла 75,4-99,2 млн КОЕ/г
почвы. В вариантах с внесением удобрений интенсивность развития
микроорганизмов на питательном бульоне выше в среднем в 1,4 раза в
подпахотном горизонте по сравнению с контролем.
Также изменялось содержание актиномицетов − активных минерализаторов
трудноразлагаемого органического вещества. Применение (NPK)90+40 т/га навоза
повысило суммарное содержание актиномицетов в слое 0-50 см до 10,4-21,8 % от
общей численности микроорганизмов (в контроле – 4,3-16,0 %).
Среди мицелиальных форм преобладали грибы, отмечено, что развитие
грибов в исследуемой почве увеличивалось в ряду: контроль < (NPK)90+40 т/га
навоза < (NPK)120. Наибольшее содержание микроскопических грибов
наблюдалось в варианте с длительным применением минеральных удобрений,
вероятно, в результате значительного подкисления почвы, их численность
составила 47-54 (2006 г.), 40,1-60,0 тыс. КОЕ/г почвы (2008 г.).
Таблица 1. Влияние удобрений на интенсивность микробиологических
процессов дерново-подзолистой почвы
Вариант
Слой,
[Гр]/ [Акт]*10-2
Кмин
Колиг
см
Контроль
(NPK)120
(NPK)90+40
т/га навоза
0-20
20-40
0-20
20-40
0-20
20-40
2006г.
2,3
3,1
3,4
3,6
1,2
1,0
2008г.
2,7
2,0
1,7
1,5
0,7
1,0
2006г.
3,0
1,1
2,0
2,0
3,5
3,8
2008г.
1,3
1,7
4,7
2,9
3,3
2,0
2006г.
12,7
3,9
3,7
3,1
2,9
3,2
2008г.
12,0
13,2
5,0
3,1
2,0
1,5
Грибная микрофлора является доминирующей в разложении растительных
остатков, поступающих в почву. При этом отношение [грибы]/ [актиномицеты] в
варианте (NPK)90+40 т/га навоза ниже, чем в контроле и (NPK)120 (табл.1), что
позволяет судить о высокой окультуренности почвы.
7
Направленность и активность основных микробиологических процессов
круговорота азота определяли по коэффициентам минерализации (К мин) и
олиготрофности (Колиг). Соотношение числа микроорганизмов, растущих на КАА,
к числу микроорганизмов, растущих на МПА (КАА/МПА), значительно больше
единицы, что свидетельствует об интенсивной минерализации растительных
остатков, особенно активно этот процесс осуществлялся в вариантах с
удобрениями − Кмин 2,0- 4,7 (см. табл.1).
При длительном внесении удобрений сужается отношение числа
олигонитрофильных микроорганизмов к числу микроорганизмов, растущих на
МПА. В контрольном варианте преобладают группы микроорганизмов, растущих
на бедных средах (Колиг.12,0-12,7), на фоне внесения удобрений численность таких
микроорганизмов лучше сбалансирована с численностью выделяющихся на
богатых средах (см. табл. 1), что указывает на направленность
микробиологических процессов в сторону повышения плодородия.
Одна из основных ветвей круговорота азота – микробы-азотфиксаторы.
Наши наблюдения проводились за группой свободноживущих фиксаторов азота
Аzotobaсter chroococcum и Clostridium рasteurianum.
Установлено, что азотобактер в дерново-подзолистой почве встречается
редко (табл. 2). Число почвенных комочков, обросших азотобактером на среде
Эшби, составляло 5,0-36,7 % в зависимости от фона удобренности и
генетического горизонта, что связано с чувствительностью этого азотфиксатора к
кислотности почвы. Кроме того, наличие подвижного азота в почве при
применении удобрений увеличивает количество связанного азота в среде и
подавляет усвоение молекулярного азота азотобактером. Погодные условия 2008
г. способствовали увеличению численности Аz. сhroococcum в варианте
(NPK)90+40 т/га навоза, так как он предъявляет высокие требования к влажности
почвы.
Таблица 2. Численность азотфиксаторов в дерново-подзолистой почве
Вариант
Слой,
см
Контроль
0-20
20-40
0-20
20-40
0-20
20-40
(NPK)120
(NPK)90+40
т/га навоза
НСР05 фактор А
(фон удобренности)
Фактор В (слой)
Частные средние АВ
Аzotobaсter,%
2006г.
20,0±5,0
20,0±5,0
0±0,0
13,3±2,9
10,0±0,0
5,0±0,0
3,9
3,2
5,5
Олигонитрофилы,%
2008г.
23,3±2,9
15,0±0,0
13,3±2,9
16,7±2,9
35,0±5,0
2008г.
75,0±5,0
90,0±10,0
100,0±0,0
100,0±0,0
100,0±0,0
2006г.
2,5±1,1
15,0±4,3
1,1±0,4
4,5±1,3
0,4±0,0
2008г.
9,5±2,1
12,8±1,3
6,1±0,9
7,9±1,6
7,9±2,1
36,7±2,9 100,0±0,0 100,0±0,0
3,7
10,2
4,68
3,5±0,6
2,4
8,8±2,5
2,3
2,0
3,4
1,9
3,3
3,0
5,3
2006г.
93,3±7,6
71,7±17,6
100,0±0,0
74,0±5,3
100,0±0,0
Clostridium, тыс.
8,3
14,4
5,74
6,12
В дерново-подзолистой почве наиболее многочисленной группой
несимбиотических азотфиксаторов являются бактерии pода Clostridium, которые,
в отличие от Azotobacter, обладают значительной толерантностью к повышенной
8
почвенной кислотности. Исследования показали, что в вариантах с внесением
удобрений наблюдается тенденция к снижению численности этих
микроорганизмов (см. табл. 2), так как систематическое применение удобрений
уменьшает плотность изучаемой почвы (Кенжегулова, 2008), что приводит к
развитию аэробных процессов, и количество анаэробных азотфиксаторов из рода
Clostridium снижается.
В сохранении и пополнении запасов азота в почве большую роль играет
олигонитрофильная микрофлора. Отмечено, что в дерново-подзолистой почве
олигонитрофилы распространены обильно, применение удобрений незначительно
увеличивает их численность (см. табл.2).
При интенсивном окультуривании в дерново-подзолистой почве появляются
нитрифицирующие бактерии, отсутствующие в неудобренной почве, так при
внесении (NPK)120 рост нитрификаторов отмечен в разведении 10-3, что
соответствует 10-45 тыс. КОЕ/г почвы. Внесение органического вещества навоза
не обеспечило существенного повышения нитрификационной способности,
численность нитрификаторов составила 9,1-38,0 тыс./г почвы.
Денитрификаторы в почве работают активно, в вариантах с внесением азота
выявлена высокая их численность. В 2008 г. развитие денитрификаторов было
активнее за счет повышенной влажности почвы. Численность этих
микроорганизмов в варианте (NPK)90+40 т/га навоза составила 90,4-106,7 млн
КОЕ/г почвы (в контроле – 69,6-75,5 млн КОЕ/г почвы).
Установлено, что в развитии микроорганизмов круговорота азота
определяющим фактором послужило внесение удобрений. Множественный
дисперсионный анализ показал, что доля их влияния на бактерии, усваивающие
минеральный азот, составила 45,4, актиномицеты – 42,5, клостридии – 25,5,
олигонитрофилы – 34,3, грибы – 46,4 %. Наиболее чувствительными к изменению
погодных условий оказались аммонификаторы и денитрификаторы, доля влияния
года исследования составила 44,3 и 68,3 % соответственно. На рост и развитие
азотобактера повлияла совокупность факторов, как климатических, так и
антропогенных – 32,7 %.
3.2. Влияние длительного применения удобрений на микрофлору
круговорота серы в дерново-подзолистой почве
При участии микроорганизмов осуществляется полный круговорот серы в
природе.
В
контрольной
дерново-подзолистой
почве
доминируют
микроорганизмы, восстанавливающие серу (табл. 3).
Восстановление органических соединений серы наблюдается при
минерализации белковых веществ анаэробными аммонификаторами Pseudomonas,
Bacillus, Clostridium с выделением H2S, поэтому в верхних горизонтах почвы во
всех вариантах активно идет восстановительный процесс. Особенно интенсивно
он протекает при внесении удобрений в подпахотном слое.
Другая группа восстановителей соединений серы – десульфофикаторы.
Отмечено, что применение удобрений незначительно повлияло на развитие
десульфофикаторов. Пределы толерантности этих микроорганизмов во всех
9
вариантах варьируют от 3,1 до 5,3 млн КОЕ/г почвы, увеличиваясь вниз по
профилю.
Совместное применение минеральных и органических удобрений
сбалансировало восстановительный и окислительный процессы в круговороте
серы за счет активного развития серобактерий и тионовых бактерий (см. табл. 3).
Для развития серобактерий необходимо наличие в среде сероводорода, а как
отмечалось ранее, внесение органического вещества с навозом и растительными
остатками способствует обильному выделению сероводорода, поэтому в варианте
(NPK)90+40 т/га навоза отмечено увеличение численности бесцветных
серобактерий в 3,2-4,7 раза по сравнению с неудобренной почвой.
Таблица 3. Численность микроорганизмов круговорота серы, млн КОЕ/г
почвы
Вариант
Слой
почвы,
см
Контроль
(NPK)120
(NPK)90+40
т/га навоза
0-20
20-50
0-20
20-48
0-20
20-35
НСР05 фактор А (фон
удобренности)
Фактор В (слой)
Частные средние АВ
Бесцветные
серобактерии
Тионовые
бактерии
Десульфофикаторы
Анаэробные
аммонификаторы
16,9±1,6
12,4±3,0
18,9±2,9
20,4±2,7
54,4±5,5
58,2±5,5
0,3±0,05
1,2±0,2
45,6±4,2
56,3±6,2
78,3±5,2
93,2±6,2
4,7±0,3
5,3±0,4
3,1±0,2
3,9±0,5
3,9±0,3
4,9±0,7
99,2±10,2
75,4±12,7
82,7±6,7
104,7±9,5
74,5±5,6
124,8±5,3
4,8
5,7
0,5
11,2
3,9
6,8
4,6
8,0
0,4
0,8
9,2
15,9
В вариантах с внесением минеральных удобрений отдельно и на фоне
навоза хорошо развивались тионовые бактерии, приводящие к накоплению в
почве доступной для растений формы серы, их численность в слое 0-20 см
составила 45,6-78,3 млн КОЕ/г почвы (в контроле – 0,3).
3.3. Микрофлора круговорота железа при длительном внесении
удобрений на дерново-подзолистой почве
В почвах подзолистой зоны биологическое превращение железа имеет
большое значение для почвообразования. Железо, содержащееся в
неорганических соединениях, разрушается в почве микроорганизмами,
выделяющими сильные кислоты. Как было отмечено ранее, применение
удобрений приводит к развитию нитрифицирующих бактерий, выделяющих в
среду азотистую и азотную кислоты и тионовых бактерий (см. табл. 3),
образующих серную кислоту, которые, взаимодействуя с неорганическими
восстановленными соединениями железа, переводят его в доступное для растения
окисное состояние. Таким образом, длительное применение удобрений
способствует вовлечению неорганических соединений железа в биологический
круговорот.
10
Комплексные органические соединения железа представлены в почве
гуминовыми соединениями, которые активно разлагаются в вариантах с
применением удобрений. Особенно интенсивно этот процесс протекает в слое 2040 см, численность микроорганизмов при минеральной системе питания – 25,6,
при органоминеральной – 78,3 млн КОЕ/г почвы (табл. 4). В результате активного
окисления и накопления окислов железа происходит отложение железа, которое
взаимодействует с бактериальными слизями и образует комплексные соединения.
Таблица 4. Микрофлора круговорота железа,
млн КОЕ/г почвы
С глубиной во всех
вариантах наблюдается активКонтроль
0-20
ное восстановление Fe3 в Fe2.
20-40
В горизонте А2В образованные
(NPK)120
0-20
на среде Молиша хлопья
20-40
имели ярко-коричневую окрас(NPK)90+40 т/га
0-20
ку. Наиболее активно процесс
навоза
20-40
восстановления железа отмеНСР05 фактор А (фон удобренности)
4,1
чался в слое 80-114 см, что
Фактор В (слой)
3,3
объясняется распределением
Частные средние АВ
5,8
окислов железа по профилю,
максимальное содержание которых в иллювиальных горизонтах. Этот процесс в
дерново-подзолистой почве приводит к оглеению.
Вариант
Слой, см
Микроорганизмы,
окисляющие железо
7,9±0,5
15,7±2,9
12,4±1,5
25,6±1,5
45,7±5,3
78,3±4,7
3.4. Микрофлора круговорота фосфора в дерново-подзолистой почве
при длительном внесении удобрений
Микроорганизмам принадлежит важная роль в мобилизации фосфора
почвы, в превращении трудноусвояемых и трудномобилизируемых фосфорных
соединений в доступную для растений форму (Блинов, 2003).
Отмечено, что в зависимости от вида внесенных удобрений произошло
перераспределение групп микроорганизмов круговорота фосфора.
Дерново-подзолистая почва содержит больше минеральных фосфатов в
виде алюмосиликатов, поэтому активнее идет растворение минеральных
соединений фосфора при помощи органических и минеральных кислот
микроорганизмов по сравнению с минерализацией органического (табл. 5).
С возрастанием количества фосфора в почве при систематическом внесении
(NPK)120 численность бактерий, участвующих в превращении фосфорных
соединений, снижается т.к. происходит конкуренция фосфотазноактивных
культур с ионами фосфора при их значительном содержании в почве.
При совместном внесении минеральных и органических удобрений
наблюдается
тенденция
увеличения
численности
микроорганизмов,
минерализующих органический фосфор до 73,2 млн КОЕ/г почвы, или на 10,9 %
по отношению к контролю в слое 0-20 см (66,0 млн).
Закономерность
перераспределения
физиологических
групп
микроорганизмов при внесении удобрений в 2008 г. повторилась. В варианте
11
(NPK)120 численность микроорганизмов на среде Менкиной составила 21,9, на
среде Муромцева – 68,5 млн КОЕ/г почвы; при внесении (NPK)90+40 т/га навоза –
84,2 и 56,3 млн КОЕ/г почвы соответственно.
Таблица 5. Численность микроорганизмов круговорота фосфора, млн КОЕ/г
почвы
Вариант
Слой, см
Минерализующие
органический фосфор
Контроль
0-20
66,0±4,6
20-50
60,0±4,0
(NPK)120
0-20
6,3±1,9
20-48
13,7±2,9
(NPK)90
0-20
73,2±6,5
+40 т/га навоза
20-35
66,7±5,6
НСР05 фактор А (фон удобренности)
5,7
Фактор В (слой)
4,7
Частные средние АВ
8,1
Растворяющие
минеральный фосфор
100,0
99,1±10,0
51,9±1,8
73,8±9,6
18,8±1,4
12,0±2,3
7,3
5,9
10,3
Определение таксономического состава микроорганизмов круговорота
фосфора показало доминирование микроскопических грибов.
Таким образом, установлено, что на развитие микроорганизмов,
растворяющих минеральные и минерализующие органические фосфаты,
удобрения оказывают существенное воздействие: доля влияния фона
удобренности 69,2 и 83,0 % соответственно.
3.5. Ферментативная активность дерново-подзолистой почвы в
агроценозах с длительным применением удобрений
Систематическое применение удобрений способствует изменению
активности каталазы исследуемой почвы. При внесении минеральных удобрений
отмечена тенденция к незначительному снижению каталазной активности (табл.
6).
Таблица 6. Каталазная и амилазная активность дерново-подзолистой почвы
при длительном применении удобрений
Вариант
Слой, см
Контроль
0-20
20-50
0-20
20-48
0-20
20-35
(NPK)120
(NPK)90+
40/га навоза
Каталаза
мл О2 / 5 мин
37,0±4,3
34,0±4,3
34,5±3,4
40,0±4,3
89,0±4,8
40,0±3,5
Амилаза
мг крахмала /г почвы
3,8±0,2
3,2±0,4
3,9±0,1
5,9±0,3
4,5±0,1
8,2±0,4
5,2
4,3
7,4
0,36
0,29
0,51
НСР05 фактор А (фон удобренности)
Фактор В (слой)
Частные средние АВ
12
В варианте (NPK)90+40/га навоза обогащение почвы каталазой в пахотном
слое было в 2,4 раза выше, чем в контроле, это свидетельствует о том, что
органические удобрения хорошо оструктуривают почву, делая ее более рыхлой,
усиливают аэрацию почвы и окислительные процессы в ней.
При определении амилазной активности почвы установлено, что внесение
удобрений способствует увеличению массы разложившегося крахмала в 1,2-2,6
раза по сравнению с контролем. То есть микроорганизмы, осуществляющие
гидролиз крахмала, увеличивают свою физиологическую активность при
применении удобрений.
Аммонифицирующие микроорганизмы, как аэробные так и анаэробные,
являются продуцентами протеазы. Активное протеолитическое действие
проявляется, главным образом, в верхней части профиля почвы, в нижней части −
резко снижается (рис.2). При внесении минеральных удобрений отдельно и
совместно с органическими происходит увеличение активности протеазы,
разложение желатины составляет 48,3-48,9 и 77,2-52,4 % соответственно в
верхних горизонтах.
Рис. 2. Изменение протеолитической активности дерново-подзолистой
почвы под влиянием удобрений
Для сравнительной оценки состояния почвы различных фонов используется
показатель
целлюлозолитической
активности,
как
наиболее
точно
характеризующий ее биологическое состояние.
В контрольной почве клетчатка разрушается значительно слабее, чем в
вариантах с удобрениями (рис. 3), и процесс ее разложения осуществляет главным
образом грибная микрофлора, доминирующим видом является Dematium.
При внесении минеральных удобрений отдельно и совместно с
органическими разложение целлюлозы за месяц увеличилось на 30 и 46 %
соответственно по отношению к контролю. В этом процессе наряду с грибами
участвуют бактерии рода Sporocytophaga.
Целлюлозолитическая активность почвы заметно уменьшается с глубиной.
13
Разложение целлюлозы,%
Рис. 3. Изменение целлюлозолитической активности дерново-подзолистой
почвы: 1 – контроль, 2 − (NPK)120, 3 − (NPK)90 + 40 т/га навоза
3.6. Влияние длительного внесения удобрений на фитотоксичность
дерново-подзолистой почвы
Одним из надежных тестов, дающих достоверные результаты при оценке
степени токсичности почв, является показатель прорастания семян тест-культуры
в почвенных образцах (Биоиндикация.., 1988).
Рис. 4. Влияние удобрений
на фитотоксические свойства дерново-подзолистой
почвы: 1 – контроль
(фильтр); 2 – контроль (без
удобрений); 3 – (NPK)120; 4
– (NPK)90 + 40 т/га навоза
Фитотоксичность дерново-подзолистой почвы на фоне удобрений
изменялась. Внесение (NPK)120снизило всхожесть на 20%, а (NPK)90 + 40 т/га
навоза  на 8,9%. Согласно применяемому методу, фитотоксичной считается
почва, снижающая всхожесть на 20-30 %. Таким образом, можно считать, что
фитотоксичность почвы повышается только при отдельном внесении
минеральных удобрений. В этом варианте отмечалась и более высокая
численность грибов, что позволяет предполагать наличие тесной связи между
численностью микроскопических грибов и фитотоксичностью почвы (рис.4), так
как среди них могли усиленно размножаться фитопатогенные и фитотоксичные
виды.
14
Среди грибов отмечены Fusarium, Alternaria, Penicillium с различной
окраской мицелия, Mucor, Chaetomium, Stachybotrys, Trichoderma. При внесении
минеральных удобрений плотность фитотоксичных грибов (Fusarium, Alternaria,
Penicillium) возрастала и составляла 14-31% от общей численности микромицетов.
3.7. Микробиологические превращения в круговороте азота чернозема
выщелоченного при длительном внесении удобрений
Черноземы представляют основу пахотных угодий всей Западной Сибири,
поэтому изучение состава и функциональной деятельности микробного населения
является важным вопросом (Хмелев, 2009).
Во всех вариантах опыта выявлена высокая численность микроорганизмов,
усваивающих органический азот (табл. 7). При внесении минерального удобрения
наблюдается тенденция к увеличению численности аммонификаторов на 18,3-22,0
%, при органоминеральной системе численность этих микроорганизмов
достоверно увеличивается на 45,9-54,4 % по отношению к контролю. Это
указывает на то, что микробиологические процессы направлены на мобилизацию
азотсодержащих компонентов. Наряду с этим, высокое содержание грибов и
актиномицетов свидетельствует о глубоких процессах минерализации
органического вещества, особенно в вариантах с удобрениями.
Таблица 7. Численность агрономически важных групп микроорганизмов
в черноземе выщелоченном, КОЕ/г почвы, n = 3
Вариант
Слой,
см
Бактерии на
МПА
Микроорганизмы на КАА
бактерии
актиномицеты
млн
Контроль
N56P81K66
N56P81K66
+6 т/га
компоста
Грибы
тыс.
Общее
число
микроорганизмов
млн
0-20
24-39
0-20
24-34
0-21
181,0±27,3
184,3±42,1
214,1±19,7
224,9±18,2
264,0±33,3
182,5±25,8
137,1±25,1
202,8±30,7
197,5±26,6
279,3±32,0
20,4±6,5
17,0±2,7
20,3±4,9
21,8±6,1
27,6±6,3
28,0±6,6
37,0±8,9
64,3±11,2
40,7±7,5
54,7±5,7
201,43
201,34
234,46
246,74
291,65
21-32
284,6±36,2
211,2±22,0
44,8±6,0
39,7±8,0
329,44
НСР05 фактор А (фон удобренности)
Фактор В (слой)
Частные средние АВ
41,1
33,5
58,1
Длительное внесение удобрений на орошаемом черноземе привело к
увеличению численности минерализаторов азота по всему профилю. Так, при
внесении N56P81K66 количество микроорганизмов на КАА увеличилось на 11,144,1%, на фоне N56P81K66+6 т/га компоста  на 53,0-54,0 % по сравнению с
контролем в верхних горизонтах (см. табл.7).
С глубиной численность микроорганизмов, усваивающих минеральный и
органический азот, снижается постепенно, так как частые ежегодные поливы (до
15
3-5 раз и более за сезон) способствуют промыванию микроорганизмов в более
глубокие слои.
Таблица 8. Численность азотфиксаторов
чернозема выщелоченного
Вариант
Контроль
N56P81K66
N56P81K66+
6 т/га компоста
Слой,
см
Azotobaсter,%
0-20
66,7±5,8
24-39
62,0±2,9
0-20
73,2±2,9
24-34
60,0±0,0
0-21
93,3±2,9
21-32
87,3±2,5
В
условиях
орошения
и
при
высоком температурном режиме создаются
благоприятные условия
для
развития
Az.
сhroococcum. Внесение
минеральных удобрений практически не
оказало влияния на
развитие азотобактера,
увеличению численности этого
Олигонитрофилы,%
70,0±5,0
82,0±3,5
90,0±8,7
96,0±3,6
100,0±0,0
100,0±0,0
НСР05 фактор А (фон удобренности) 4,1
Фактор В (слой)
3,4
Частные средние АВ
5,8
5,7
4,7
8,1
применение N56P81K66+6 т/га компоста привело к
азотфиксатора (табл.8).
Олигонитрофилы в черноземе распространены обильно, внесение
удобрений незначительно увеличивает их численность.
Значительная интенсивность аммонификации приводит к хорошему
развитию нитрификаторов. Процесс нитрификации зависит от физических
свойств, структуры и влажности почвы. В условиях орошения влажность почвы
поддерживали на уровне 70% на делянках моркови, что благоприятно
сказывалось на развитии нитрифицирующих бактерий, рост которых в контроле
отмечен до 10-3 разведения, в вариантах с внесением удобрений – до 10-4. С
глубиной численность нитрификаторов остается также высокой, возможно,
вследствие их миграции вглубь почвенного профиля с нисходящим током воды.
Газообразные потери азота при денитрификации возрастали в ряду
контроль > N56P81K66 > N56P81K66+6 т/га компоста.
Таким образом, микробное сообщество чернозема выщелоченного,
отвечающее за основные ветви круговорота азота, наиболее чувствительно к
совместному внесению минеральных и органических удобрений.
3.8. Влияние удобрений на микрофлору круговорота серы чернозема
выщелоченного
Во всех вариантах хорошо развивались бактерии, окисляющие серу,
проводящие к накоплению ее в почве в доступной для растений форме, их
численность в контроле составила 5,4; N56P81K66 – 5,7; N56P81K66+6 т/га компоста –
7,6 млн КОЕ/г почвы.
Восстановительный процесс также идет достаточно интенсивно.
Десульфофикаторы, восстанавливающие серу, – анаэробы, поэтому численность
их увеличивается вниз по профилю. При совместном внесении минеральных и
органических удобрений прослеживается тенденция к снижению численности
16
этих микроорганизмов в 1,4 раза по сравнению с контролем (3,2-8,2 млн КОЕ/г
почвы), поскольку компост улучшает условия аэрации почвы
Обобщая полученные данные, можно сделать вывод, что численность
микроорганизмов круговорота серы в черноземе выщелоченном невысокая, и
длительное применение удобрений незначительно влияет на их развитие.
3.9. Микрофлора круговорота фосфора чернозема выщелоченного при
длительном внесении удобрений
В черноземных почвах на органические формы фосфатов приходится 60-80
% от его общего количества (Почвоведение, 2004), поэтому в контроле
преобладают микроорганизмы, минерализующие органический фосфор (табл.9).
Длительное систематическое внесение N56P81K66 увеличивает численность
микроорганизмов, разрушающих минеральный фосфор, в 1,8-2,3 раза.
При внесении N56P81K66+6 т/га компоста активизируется развитие
микроорганизмов, минерализующих органический фосфор, их численность в
верхних горизонтах составила 86,8-102,1 млн КОЕ/г почвы. Наряду с этим
происходит
снижение
численности
микроорганизмов,
растворяющих
минеральный фосфор в 1,2 раза по сравнению с контролем.
Таблица 9. Микроорганизмы круговорота фосфора, млн КОЕ/г почвы
Вариант
Контроль
N56P81K66
N56P81K66+6 т/га
компоста
Слой, см
0-20
24-39
0-20
24-34
0-21
21-32
Растворяющие
минеральный фосфор
46,4±8,4
33,2±6,5
86,0±8,8
76,0±9,0
39,7±8,4
35,4±5,4
НСР05 Фактор А (фон удобренности)
В (горизонт)
Частные средние АВ
9,9
8,1
14,0
Минерализующие
органический фосфор
79,3±10,7
52,6±8,8
49,8±7,3
33,8±7,0
102,1±16,4
86,8±12,3
13,7
11,2
19,4
Численность микроорганизмов, осуществляющих круговорот фосфора,
резко уменьшается вниз по профилю.
Определение таксономического состава микроорганизмов показало
доминирование бактерий и актиномицетов, осуществляющих круговорот фосфора
в черноземе выщелоченном.
3.10. Ферментативная активность чернозема выщелоченного при
длительном внесении удобрений
Чернозем выщелоченный обладает высокой каталазной активностью. При
внесении минеральных удобрений отдельно и совместно с органическими
несколько снижается активность каталазы, количество О2 /5 мин – 42,5-54,0 (в
контроле 61,5).
17
Применение N56P81K66+6 т/га компоста увеличило активность амилазы на 57
% по сравнению с контролем (3,5 мг крахмала/г почвы). Внесение минеральных
удобрений также стимулировало разложение крахмала.
Заметная активизация ферментативных процессов при длительном
систематическом внесении удобрений прослежена в отношении протеазы. В
контроле протеолитическая активность довольно низкая – 22,6 %. В вариантах с
внесением удобрений она увеличивается до 64,4 (N56P81K66) и 83,3 % (N56P81K66+6
т/га компоста), что связано с увеличением подвижного азота в почве и активным
развитием аммонифицирующих микроорганизмов. Вниз по профилю активность
протеазы постепенно снижается.
Целлюлозолитическая активность чернозема выщелоченного изначально
высокая (55,2-87,3 %), но внесение удобрений и благоприятный режим влажности
способствуют
увеличению
численности
целлюлозоразрушающих
микроорганизмов до 90,7-96,7 (N56P81K66); 99,0-99,3 (N56P81K66+6 т/га компоста).
Качественный состав целлюлозоразрушающих микроорганизмов в
черноземах достаточно многочисленный − Cytopfaga, Sorangium nigrescens, S.
compositum, Sporocytofaga myхocoсcoides, Staсhybotrys, Сhaetomium globosum.
Таким образом, длительное применение минеральных удобрений отдельно
и совместно с органическими на черноземе выщелоченном способствует
заметному повышению его ферментативной активности.
3.11. Фитотоксичность чернозема выщелоченного при внесении
удобрений
Почва опытного участка как в контроле, так и в вариантах с длительным
применением удобрений не проявляла фитотоксических свойств. Внесение
удобрений незначительно увеличило процент всхожести семян редиса до 95
(N56P81K66) и 88 (N56P81K66+ 6/га компоста), в контрольном варианте – 82 %.
ВЫВОДЫ
1. На развитие микроорганизмов исследуемых почв оказывают влияние как
климатические факторы, так и внесение удобрений, что приводит к перестройке
экологической обстановки в почвах разных зон, отражается на структуре
микробного сообщества почвы и его биологической активности. Пределы
изменчивости микробного комплекса дерново-подзолистой почвы – 1,1-5,3,
чернозема выщелоченного – 1,1-2,3 раза.
2. В круговороте азота наиболее чувствительны к действию удобрений
микроорганизмы, участвующие в процессах азотфиксации, нитрификации и
минерализации органического вещества. Лимитирующим фактором для развития
аммонифицирующих и денитрифицирующих микроорганизмов, наряду с
внесением удобрений, является влажность почвы. В черноземе выщелоченном в
условиях оптимизации водного режима развитие этих групп микроорганизмов
определяется фоном удобренности.
3. В контрольной дерново-подзолистой почве преобладают восстановительные
процессы в круговороте серы и железа. Длительное внесение минеральных
18
удобрений отдельно и совместно с органическими стимулирует развитие
серобактерий, тионовых бактерий и микроорганизмов, окисляющих железо, что
приводит к сбалансированности процессов окисления и восстановления в верхних
горизонтах. В черноземе выщелоченном численность микроорганизмов
круговорота серы невысокая, длительное применение удобрений незначительно
влияет на их развитие.
4. В круговороте фосфора в исследуемых почвах происходит
перегруппировка микробных сообществ на фоне внесения удобрений.
Минеральные удобрения приводят к увеличению численности микроорганизмов,
растворяющих минеральные труднодоступные фосфаты (доля влияния 69,2 %), а
органоминеральные – к усилению развития микроорганизмов, минерализующих
органический фосфор (доля влияния 83,0 %).
5. В почвах разных экологических зон прослеживается закономерность
увеличения их ферментативной активности при длительном внесении удобрений.
Установлено, что совместное внесение минеральных и органических удобрений
увеличивает амилазную активность в 1,2-1,6, протеолитическую – 3,7-5,0,
целлюлозолитическую – 1,8-2,0 раза по сравнению с неудобренным фоном.
6. При длительном применении минеральных удобрений на дерновоподзолистой почве отмечено снижение сопротивляемости микробоценоза к
данному антропогенному фактору и, как следствие, проявление почвой
фитотоксических свойств. Микробный комплекс чернозема выщелоченного
обладает большей устойчивостью – фитотоксический эффект при внесении
удобрений не выявлен.
ПРЕДЛОЖЕНИЕ
При определении действия удобрений целесообразно проводить
комплексную оценку их влияния на состояние отдельных звеньев микробоценозов
основных биофильных элементов. В качестве критериев могут быть использованы
изменения структуры микробных сообществ и их фитотоксическая активность.
Публикации по материалам диссертации
1. Кукишева А.А. Влияние длительного применения органических и минеральных
удобрений на микрофлору дерново-подзолистой почвы Томской области /А.А. Кукишева
//Качество и точность сельскохозяйственных процессов: материалы Междунар. семинара по
прецизионным методам ведения сельского хозяйства (23-28 сентября 2007 г.). – Новосибирск,
2008. – С. 67-70.
2. Сапронова Ю.Ф. Результаты воздействия длительного применения удобрений на
биологическую активность чернозема выщелоченного в условиях Алтайского Приобья /Ю.Ф.
Сапронова, А.В. Смирнова, А.А. Кукишева //Экология России и сопредельных территорий:
материалы XIII МЭСК. – Новосибирск, 2008. – С.133.
3. Кукишева А.А. Влияние длительного применения удобрений на уреазную активность
дерново-подзолистой почвы Томской области /А.А. Кукишева // Новейшие направления
развития аграрной науки в работах молодых ученых: тр. III Междунар. науч.-практ. конф.
молодых ученых (17-18 апреля 2008 г.). – Кемерово, 2008. – С. 35-37.
4. Ковалева Т.В. Экологичность длительного применения удобрений на дерновоподзолистой почве Томской области /Т.В. Ковалева, Т.А. Манько, А.А. Кукишева //Студент и
19
аграрная наука: материалы II Всерос. студ. конф. (23-25 апреля 2008 г., Башкирский ГАУ). –
Уфа, 2008. – С.35.
5. Наплекова Н.Н. Микрофлора биогеохимических циклов в агроценозах с длительным
систематическим применением удобрений на дерново-подзолистых почвах /Н.Н. Наплекова,
А.А. Кукишева // Материалы V съезда Всерос. о-ва почвоведов им. В.В. Докучаева (18-23
августа). – Ростов-н/Д, 2008. – С. 121.
6. Кукишева А.А. Влияние длительного применения удобрений на разложение целлюлозы
микроорганизмами дерново-подзолистой почвы в условиях Томской области /А.А. Кукишева
//Научное и инновационное обеспечение АПК Сибири: материалы VI Межрегион. конф.
молодых ученых и специалистов аграрных вузов Сиб. федерал. округа (18-21 июня, 2008 г.). –
Барнаул, 2008. – С. 33-35.
7. Кукишева А.А. Влияние удобрений на аммонифицирующие группы микроорганизмов
некоторых почв Западной Сибири /А.А. Кукишева //Проблемы региональной экологии в
условиях устойчивого развития: материалы Всерос. науч.-практ. конф. с международным
участием (25-27 ноября 2008 г.). – Киров, 2008. – С. 223-225.
8. Кукишева А.А. Трансформация углерода в дерново-подзолистой почве при длительном
внесении удобрений /А.А. Кукишева, Т.В. Ковалева //Химия и жизнь: сб. тез. регион. науч.практ. конф. Новосиб. гос. аграр. ун-т. – Новосибирск, 2009. – С.98-99.
9. Манько Т.А. Ферментативная активность чернозема выщелоченного и дерновоподзолистой почвы при длительном применении удобрений /Т.А. Манько, А.А. Кукишева
//Достижения и перспективы студенческой науки: докл. студ. науч. конф. (19 марта 2009 г.,
Новосибирск). – Новосибирск, 2009. – С. 64-68.
10. Кукишева А.А. Изменение микробоценоза дерново-подзолистых почв при длительном
применении удобрений /А.А. Кукишева, Н.Н. Наплекова//Достижения науки и техники АПК. –
2009. - № 4. – С. 14-16.
11. Кукишева А.А. Изменение состава микробного сообщества круговорота азота дерновоподзолистых почв Западной Сибири при длительном применении удобрений /А.А. Кукишева,
А.С. Гамзова // Инновационный потенциал молодых ученых в развитии агропромышленного
комплекса Сибири: материалы VII Межрегион. конф. молодых ученых и спец. аграр. вузов Сиб.
федерал. округа (3-5 июня 2009 г.). – Новосибирск, 2009. – С.62-65.
12. Гамзова А.С. Микрофлора круговорота железа дерново-подзолистой почвы при
длительном применении удобрений /А.С. Гамзова, А.А. Кукишева //Химия и жизнь: сб. тез.
регион. науч.-практ. конф. Новосиб. гос. аграр. ун-т. – Новосибирск, 2010. – С.121-124.
13. Кукишева А.А. Мониторинг дерново-подзолистых почв Томской области /А.А.
Кукишева // Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых учёных:
Материалы IV междунар. науч. конф. молодых учёных, посвящ. 40-летию СО
Россельхозакадемии (22-23 апреля, 2010 г.). – Новосибирск, 2010. – С. 105-109.
14. Кукишева А.А. Биоразнообразие микроорганизмов, использующих минеральный и
органический азот в дерново-подзолистой почве при длительном применении удобрений /А.А.
Кукишева, Н.Н. Наплекова //Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с
окружающей средой: V Межрегион. конф. молодых ученых (28сентября – 1 октября 2010 г.). –
Саратов: Научная книга, 2010. – С.26.
20