Лабораторная работа 18 Изучение ферментов дыхания растений Принцип метода: дегидрогеназы — это ферменты, активирующие и отщепляющие водород от окисляемого субстрата. Обнаружение дегидрогеназ основано на их способности передавать водород какому-нибудь акцептору, который, восстанавливаясь, меняет свою окраску. В качестве акцептора водорода берут метиленовую синь, переходящую в восстановленном состоянии в бецветную лейкоформу. Цель работы: провести экспериментальное определение активности дегидрогеназ — дыхательных ферментов. Ход работы: с семян набухшего гороха снять кожуру. Семена поместить в две пробирки. В одну из них налить воду и довести до кипения, чтобы убить ткани семян. После охлаждения воду слить и обе партии горошин (кипяченые и непрокипяченные) залить 1% раствором метиленовой сини для окрашивания. Через 5…10 мин. синь из пробирок слить, семена промыть водопроводной водой. После промывания все семена должны иметь темно-синюю окраску. Окрашенные семена залить отстоянной водопроводной водой, пробирки закрыть резиновыми пробками, то есть создать анаэробные условия, и поместить их в термостат или водяную баню с оптимальной для работы дегидрогеназ температурой (около 30…35 °С). Через 1,5…2 ч можно заметить, что непрокипяченные семена теряют синюю окраску. Это происходит потому, что дегидрогеназы, участвующие в дыхании клеток, активировали и сняли водород с дыхательного материала, а затем передали его на метиленовую синь, которая восстановилась и обесцветилась. Если с обесцвеченных семян слить воду, то на воздухе они снова синеют, так как лейкоформа метиленовой сини окисляется. Семена в контрольной пробирке остаются синими, поскольку при кипячении дегидрогеназы разрушились. Аналогичные опыты можно провести с любым неокрашенным растительным материалом. После проведения опыта зарисовать живые и мертвые семена, описать и объяснить полученный результат. Оборудование и материалы: 1) набухшие семена гороха посевного (Pisum sativum L.); 2)пробирки с пробками; 3) метиленовая синь; 4) водяная баня.