ImmunoComb ® Poultry Chlamydophila psittaci Antibody Test Kit 50PCP103 Инструкция по применению 30 тестов I. НАЗНАЧЕНИЕ Этот набор разработан для определения титров IgG антител к к Chlamydophila psittaci (ранее известный как Chlamydia psittaci) в птичьих стадах. II. Что такое ImmunoComb® ИммуноКомб представляет собой автономный портативный комплект, основанный на принципе твердофазного иммуноферментного анализа. Чувствительный тест, который определяет уровень антител в плазме, сыворотке и цельной крови. ImmunoComb® гарантирует получение результатов анализа в течение 38 минут. III. Как работает ImmunoComb® В тест-системе ImmunoComb® используется метод непрямого твёрдофазного иммуноферментного анализа (ИФА). ИммуноКомб представляет собой пластиковую карточку в виде Гребня, на который нанесены очищенные антигены Chlamydophila psittaci. Образцы от кур и индеек (диски насыщенные цельной кровью, сыворотка, плазма) вносятся в отдельные ячейки ряда А Проявочной ванны. Образцы Положительного и Отрицательного контролей, поставляемые в составе набора, вносятся в отдельные ячейки ряда А. Далее Гребень вставляется в ячейки с образцами (Ряд А), антитела из образцов связываются с антигенами нанесенными на зубцы Гребня. Каждая Проявочная Ванна может использоваться для анализа индивидуальных образцов или групп до 10 образцов птиц, при этом от Гребня отламывается необходимое количество зубцов и используется соответствующее количество столбцов в Проявочной Ванне. Каждый анализ должен проводиться совместно с положительным и отрицательным контролем. Гребень переносится в следующую ячейку (ряд B), где вымываются несвязавшиеся антитела. Гребень вставляется в следующую ячейку (ряд С), которая содержит антитела к IgG антителам птицы, помеченные ферментом (конъюгат). В то время пока гребень погружен в конъюгат, связанные на зубцах гребня антитела будут помечены ферментом. После еще двух промывок (ряд D и E) Гребень переносится в следующую ячейку (ряд F), где проходит ферментативная реакция. Эта реакция приводит к изменению цвета, интенсивность которого указывает на количество антител, присутствующих в каждом образце. Интенсивность серо-фиолетовых точек на каждом зубце должна переводиться в уровни антител в каждом образце при помощи калибровочной шкалы CombScale. IV Меры предосторожности и хранение Хранить набор при температуре 2-8°С. Не допускать замораживания. Перед проведением теста выдержите все компоненты набора и исследуемые образцы при комнатной температуре примерно 60-120 минут (или инкубируйте Проявочную Ванну 22 минуты при 37°C). Исследование проводите при комнатной температуре (20-25°C). Избегайте проливания и перекрестного контаминирования растворов. Перемешивайте реагенты путем переворачивания проявочной ванны несколько раз до использования. Не смешивайте реагенты из разных наборов или разных ячеек одного набора. Не касайтесь зубцов Гребня. При использовании проявочной ванны вскрывайте покрытие каждой ячейки строго следуя указаниям в инструкции. Не срывайте все защитное алюминиевое покрытие единовременно. Набор ImmunoComb® содержит инактивированный биологический материал. Обращение и утилизация набора возможна только строго в соответствии с принятыми санитарно-гигиеническими нормами. V Состав комплекта Компоненты Тест на 30 исследований A. Гребень (в алюминиевой оболочке) 3 B. Проявочная ванна, разделенная на отсеки AF, которые подразделяются на 12 лунок. Пластины отсеков предварительно заполнены раствором реагентов. 3 C. Лист перфорированной бумаги с дисками для работы с цельной кровью. 3 D. Ланцет для взятия крови 4 E . Одноразовый пинцет 1 F. Цветовая палитра CombScale 1 G. Сыворотки для положительного отрицательного контроля и 1 VI Процедура анализа Анализ проводится при температуре 20°-25°C. При использовании образцов сыворотки: Подготовьте образцы сыворотки/плазмы. Внесите 5 мкл. образца при помощи пипетки или капиллярной трубки. Используя поставляемый с набором пинцет, вскройте защитное фольговое покрытие ряда А Проявочной Ванны. Вскрывайте только необходимое количество ячеек. Внесите образцы (5 мкл) в каждую ячейку. Перемешайте, аккуратно набирая и выпуская раствор несколько раз. Перейдите к шагу 5. При использовании образцов с дисками пропитанными кровью. Проколите одну из вен птицы. Возьмите перфорированный диск и напитайте его кровью. Используя пинцет, поставляемый в наборе, вскройте защитное покрытие ряда А из фольги . Вскрывайте только необходимое количество ячеек. Выдавите диск пропитанный кровью. Вставьте его в ячейку ряда А, полностью погрузив в реактив. Подождите 60 минут для извлечения антител. Возьмите 5 мкл сыворотки положительного контроля (C+), входящей в состав набора, и влейте в ячейку рядом с лункой последнего образца. Перемешайте содержимое в ячейке. Выполните аналогичные операции с также входящей в состав набора сыворткой отрицательного контроля (C-) в следующей ячейке. Извлеките Гребень из защитной упаковки и вставьте его (печатной стороной с надписями к себе), держа за верхнюю часть, в ряд А. Не прикасайтесь к зубцам Гребня. Перемешайте содержимое лунок, аккуратно покачивая Гребень от себя – к себе и двигая Гребень вверх-вниз, не вынимая из ячеек. Оставьте Гребень в ячейках ряда А для инкубации на 10 минут. Повторите это действие, по меньшей мере дважды, и для остальных рядов. При частичном использовании Гребня отломите нужное количество зубцов, включая положительный и отрицательный контрольные зубцы. Сохраняйте для дальнейшего использования оставшиеся неиспользованными зубцы запечатанными в своих оригинальных упаковках. В каждых последующих исследованиях следует использовать только новые (нераспечатанные) лунки пластины. Проколите с помощью пинцета крышки необходимого количества лунок в ряде B. Аккуратно стряхните избыток жидкости на ткань (проводите данную процедуру для остальных рядов). Вставьте Гребень в лунки ряда B (первая промывка) и инкубируйте 2 минуты, стряхните избыток жидкости и перенесите Гребень в ряд C (связывание с конъюгатом), инкубируйте в течение 10 минут. Установите гребень в ряд D (вторая промывка) на 2 минуты, затем в ряд E (третья промывка) на 2 минуты и ряд F (цветная реакция) на 10 минут, что позволит проявлению цветной реакции для обработки. По завершении инкубации гребня в ряде F перенесите его обратно в ряд Е (остановка реакции) на 2 минуты для фиксации проявившегося цвета. VII. Чтение результатов по шкале CombScale Когда Гребень полностью высохнет, совместите его с калибровочным цветом на шкале CombScale, входящей в комплект. Найдите точку пурпурно-серого цвета на CombScale, которая наиболее близко соответствует цвету точки Положительного Контроля. Двигая желтую линейку, найдите отметку С+, появившуюся в окошке над цветом, который вы только что нашли. Держите линейку в таком положении на протяжении всего чтения результатов. Этот шаг фактически калибрует С+ и S3, с которым и будут сравниваться точки. Интенсивность пурпурно-серого цвета, полученного на диагностических точках, оценивается по шкале от 1 до 6, путём сравнения результатов теста с цветовым результатом точки Положительного контроля, который всегда оценивается как 3 , а так же при помощи шкалы CombScale. Прочитайте каждую из исследуемых точек на каждом зубце отдельно: Выберите наиболее подходящий цветовой тон и читайте значения, появившиеся в жёлтых окнах. Другой способ чтения результатов — это использование прибора CombScan. Это программа, которая использует компьютер и TWAIN совместимый сканер. Когда Гребень помещается в сканер, программа считывает цветовой результат в числовом значении. CombScan помогает лаборатории в чтении результатов ImmunoComb и сохранении данных. Программа устанавливается бесплатно по запросу. VIII. Чтение и интерпретация результатов. Оценивайте результаты по каждой точке отдельно. Нижняя точка ImmunoComb® предназначена для теста на Chlamydophila psittaci. Уровень иммуноглобулина С. psittaci определяется путем сравнения интенсивности цвета каждого образца по отношению к образцам положительного контроля (С+). Инструкция по интерпретации результатов с помощью шкалы соответствия COMBSCALE приведена в разделе VII. См. иллюстрации 9 и 10 для получения подробной информации. Результаты сыворотки/плазмы крови с одинаковой или более яркой цветовой интенсивностью, чем Положительный контроль, считаются положительными. Анализы крови с дисков считаются положительными при S2. Отрицательный контроль состоит из не-иммунной сыворотки и должен рассматриваться как ноль (S=0). Сыворотки с интенсивностью цвета, оценённые как S0 или S1 считаются отрицательными. Образцы анализов крови с дисков оценённые как S1, считаются подозрительными. Для помощи в интерпретации результатов, пожалуйста, обратитесь к примеру использованного Гребня и замечаниям ниже. Внимание! Статистическая погрешность подобна другим анализам ИФА. Поэтому, ошибка в одном окне цветовой гаммы не приведет к неправильному диагнозу. Пример использованного Гребня Номер образца Результат анализа 1,5 Высокая положительная реакция на C. psittaci. 2,7 Положительная реакция на C. psittaci. 3 Низкая реакция C. psittaci - считается отрицательным. В случае использования дисков с кровью, считается подозрительным. 4 Негативная реакция на C. psittaci. 6 Высокий цвет фона с положительной реакцией. 8 Недействительный тест. 9 Высокий цвет фона. Недействительный тест. 10 Нет точки внутреннего контроля. Недействительный тест. 11 Положительный контроль. 12 Отрицательный контроль.