Амилаза ЭРБА, Cистемный Реагент CNP- G 3 Метод Применение Реагент предназначен для in vitro диагностики альфа-амилазы в сыворотке и плазме. Клиническое значение В организме человека альфа-амилаза имеет различное происхождение: панкреатическая амилаза синтезируется поджелудочной железой и выходит в кишечный тракт, слюнная амилаза синтезируется в слюнных железах и секретируется в слюну. Активность альфа-амилазы в сыворотке имеет большое значение для дифференциальной диагностики острого или хронического панкреатита Повышение Активность амилазы в сыворотке увеличивается в 1-2 раза при почечной недостаточности. Акивность альфа - амилазы наиболее часто измеряется для диагностики острого панкреатита, когда ее уровень в сыворотке увеличивается во много раз. Не панкреатические причины увеличения активности амилазы сыворотки: паратит, рак слюных желез или бронхов, непроходимость кишечника, перитонит, диабетический кетоацидоз, алкогольная интоксикация, острый аппендицит, мочевые камни, перфорация пептической язвы, патология билиарного тракта. Метод CNP-G 3 Кинетический. Принцип реакции 2-хлор - 4 –нитрофенил - мальтогептазид (CNP-G3) является прямым субстратом для определения активности альфа-амилазы. Реакция катализируется непосредственно альфа-амилазой и не требует дополнительных ферментов. амилаза 10 CNP-G3 9-CNP + CNP-G2 + 9мальтотриозид + глюкоза Образовавшийся 2-хлор-4 –нитрофенол измеряется при 405 нм, скорость его образования, пропорциональна активности альфа-амилазы в образце. Состав реагентов MES буфер Кальция хлорид Натрия хлорид Калия тиоционад 2-Хлор-4-нитрофенил-мальтотриозид Азид натрия 50 ммоль/л 3,81 ммоль/л 300 ммоль/л 450 ммоль/л 0.91 ммоль/л 13,85 ммоль/л Меры предосторожности Набор реагентов предназначен для in vitro диагностики профессионально обученным лаборантом. Реагенты содержат азид натрия (0,9 г/л) в качестве консерванта. Не глотать. Избегать попадания на кожу и слизистые. Не пипетировать ртом, так как слюна содержит альфа-амилазу. Первая помощь При приеме внутрь следует прополоскать рот водой, выпить 0,5 л воды и вызвать рвоту. При попадании в глаза быстро промыть их проточной водой. При попадании на кожу необходимо промыть теплой водой с мылом. Во всех серьезных случаях обратиться к врачу. Приготовление рабочих реагентов Реагенты готовы к использованию. Представительство Erba Lachema в Российской Федерации 109029 г.Москва, ул.Нижегородская 32, корп.15, офис503 тел. +7 (495) 961 45 22, e-mail: [email protected], www.lachema.ru Хранение и стабильность Не вскрытые реагенты стабильны до достижения указанного срока годности , если хранятся при 2-8°C. Определение не пригодности реагента - Замутнение - Проверить попадание значений контролей в допустимый интервал Образцы Сыворотка без гемолиза или гепаринизированная плазма. Антикоагулянты, такие как EDTA, цитрат, оксалат не использовать, так как они ингибируют активность альфа-амилазы. Стабильность альфа-амилазы в сыворотке 2 месяца, если хранится при 2-8°C и 7 дней при 15-25°C. Рекомендуется проводить анализ со свежеприготовленными образцами. Дополнительные материалы необходимые для работы Анализатор с контролем температуры 37 ± 0.5°C Контрольный материал Калибратор Принадлежности к анализатору (например, микрочашечки) Калибровка Мы рекомендуем для калибровки использовать XL МультиКалибратор и Лионорм Калибратор, Кат.№ 10003200. Коэффициент пересчета Е/л х 0,017 = мккат/л Контроль качества Для проведения контроля качества рекомендуются контрольные сыворотки: Лионорм ГУМ Н, Кат.№10003204, Лионорм ГУМ П, Кат.№10003206 Специфичность / Влияющие вещества Аскорбиновая кислота до 62 мг/дл, Билирубин до 40 мг/дл и Триглицериды до 4000 мг/дл не влияют на результаты. Нормальные величины Сыворотка / Плазма (37°C) До 80 Е/л (1,33 мккат/л) Приведенные диапазоны величин следует рассматривать как ориентировочные. Каждой лаборатории необходимо определять свои диапазоны. Воспроизводимость Внутрисерийная N Уровень – 1 Уровень– 2 20 20 Межсерийная N Уровень– 1 Уровень – 2 20 20 Среднеарифметич еское значение (Е/л) 247.1 260.8 SD Е/л CV (%) 2.5 2.6 1.0 1.0 Среднеарифметич еское значение (Е/л) 58.3 142.9 SD Е/л CV (%) 1.3 2.3 2.2 1.6 Представительство Erba Lachema в Российской Федерации 109029 г.Москва, ул.Нижегородская 32, корп.15, офис503 тел. +7 (495) 961 45 22, e-mail: [email protected], www.lachema.ru Сравнение методов Сравнение было проведено на 40 образцах с использованием ЭРБА реагентов (у) и имеющихся в продаже реагентов с коммерчески доступной методикой (х). Результаты: y = 0.973x - 0.080 Е/л r = 0.989 (r – коэффициент корреляции) Линейность Реакция линейна до 1500 Е/л (25 мккат/л) Чувствительность Нижний предел определения – 3,6 Е/л (0,06 мккат/л) Утилизация использованных материалов В соответствии с существующими в каждой стране правилами для данного вида материала Фасовка Кат.№ XSYS003 Амилаза Реагент -1 5 x 22 мл Литература 1. J. F. Ziva, and P. R. Pannall, “Plasma Enzymes in Diagnosis” in Clinical Chemistry in Diagnosis and Treatment. Lloyd London 1979 : Chapter XV : 341-2. 2. Foo, Y.A. and Brosalki, S.B. Ann. Clin. Biochem. 1986; 23: 624-37. 3. Bais, R. Am. Jnl. of Clin. Path. 1982; 78 : 184-8. 4. Clinical, Chemistry lnfobas: A Scientific & ManagementCyclopedia. Pesce-Kaplan Publishers 1996; 2619-2620. 5. Shepherd, MDS. and Mazzachi, RD. The Clin. Biochem. 1983; 4 : 61-7. 6. Young, D.S.Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests Third Edition 1990; 3 : 34-6. 7. Tietz, Textbook of Clinical Chemistry. Burtis CA and Ashwood, ER (Eds). Second Edition, WB Saunders Company, 1994. 8. Wachtel, M. et al, Creaction and verification of Reference Intervals. Laboratory Medicine 1995; 26 : 593-7. 9. National Committee for Clinical Laboratory Standards. User evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. NCCLS, 1984, NCCLS Publication EP5-T. Протоколы для работы на автоматических биохимических анализаторах серии XL «Эрба Лахема с.р.о.», Чешская Республика могут быть получены по запросу. Представительство Erba Lachema в Российской Федерации 109029 г.Москва, ул.Нижегородская 32, корп.15, офис503 тел. +7 (495) 961 45 22, e-mail: [email protected], www.lachema.ru