Signal Код № 25972 (мембранная тест-кассета проточного типа) Тест для быстрого качественного определения

Signal-HCV
Код № 25972
(мембранная тест-кассета проточного типа)
Тест для быстрого качественного определения
антител к гепатиту С в сыворотке или плазме крови человека.
ВВЕДЕНИЕ
Вирус гепатита С (ВГС), с недавних пор рассматриваемый как фактор парентерально
распространяемых ни-А ни-В гепатитов (НАНВГ), вызывает в 50% случаев развитие
хронического заболевания печени. После переливания крови от доноров с ВГСположительной реакцией у 88% реципиентов наблюдается развитие НАНВГ и
сероконверсия (появление специфических антител в сыворотке).
ВГС может распространяться также среди наркоманов через внутривенное употребление
наркотиков, передаваться через сексуальные контакты и через прием внутрь продукции,
изготовленной из крови или загрязненной кровью.
Вирус гепатита С представляет собой вирус, содержащий одноцепочечную РНК и
имеющий структурное сходство с представителями рода Flavvirus. С ВГС связывают
криптогенный цирроз, гепатоцеллюлярную карциному, аутоиммунные заболевания
печени и ряд внепеченочных нарушений таких, как гломерулонефрит, полиартериит и
криоглобулинемия.
Скрининг крови доноров на вирус гепатита С с использованием рекомбинантных
антигенов помогает идентифицировать доноров крови, кажущихся здоровыми, но однако
являющихся носителями ВГС и соответственно могущих передавать инфекцию.
Недавно методы с использованием рекомбинантной ДНК были применены для
расшифровки генома ВГС. Геном кодирует три структурных белка, а именно капсидный
белок и оболочечные гликопротеины Е1 и Е2, и другие неструктурные белки, а именно
NS2, NS3, NS4 и NS5. Несколько из этих компонентов вирусной частицы были выбраны
для создания чувствительного и специфичного теста.
ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Рекомбинантные антигены (NS3, NS4, NS5 и капсидный белок) вируса гепатита С
сорбированы в виде пятна на мембрану тестового устройства. Если в исследуемой
сыворотке или плазме имеются антитела к ВГС, они связываются с этими антигенами и
тем самым оказываются прикрепленными к твердой фазе на мембране. Несвязавшиеся
антитела уходят через мембрану, смываясь промывочным буфером. Антитела к ВГС,
закрепившиеся на мембране, становятся видимыми после реакции с частицами
Коллоидного Золотого Сигнального Реагента, покрытыми Протеином А. Появление двух
фиолетово-красных пятен (одного, предназначенного служить производственным
контролем, и другого, соответствующего рекомбинантным антигенам ВГС) говорит о том,
что реакция положительна.
Встроенный контроль, размещенный отдельным пятном на пористой мембране,
выполняет роль контроля за качеством тестовой системы и правильным проведением
теста, и это пятно должно всегда появляться в «контрольной зоне» мембраны (около
буквы С) независимо от того, имеются или нет антитела к ВГС в сыворотке/плазме.
ОБРАЗЦЫ
Для тестирования могут использоваться сыворотка или плазма крови. Для
кратковременного хранения образцы можно держать при 2 – 8оС. При необходимости
длительного хранения образцы следует хранить замороженными при температуре –20оС и
ниже. Не следует использовать образцы с признаками гемолиза или чем-либо
загрязненные. Не допускается повторное замораживание/размораживание образцов. Не
используйте образцы, инактивированные тепловой обработкой.
Обращение с замороженными образцами.
Лучше использовать свежие образцы, чем оттаявшие после замораживания. Тем не менее,
можно получить нормальные результаты и после хранения образцов в замороженном
состоянии, если соблюдать следующие правила:
Дайте возможность образцу разморозиться полностью и затем осторожно размешайте его.
Отцентрифугируйте образец в течение 10 минут и используйте для работы только
прозрачную надосадочную часть образца.
Если после выполнения описанных выше шагов внесение образца в лунку тестового
устройства приведет к появлению темно-красного фона на мембране, это тестирование
придется повторить, используя свежий образец.
РЕАГЕНТЫ/ПРИНАДЛЕЖНОСТИ
1.
Test Device. Тестовое устройствоа, на мембране которого имеются антигены ВГС и
Контрольный Реагент, нанесенные в виде двух отдельных пятен).
2.
Wash Buffer. Промывочный буфер.
3.
Colloidal Gold Signal Reagent. Коллоидный Золотой Сигнальный Реагент.
4.
Одноразовые пластиковые капельницы
НЕОБХОДИМЫЕ, НО НЕ ВОШЕДШИЕ В СОСТАВ НАБОРА, МАТЕРИАЛЫ
— одноразовые перчатки
— 5%-ный раствор гипохлорита натрия или кальция для протирания и дезинфекции
пролитых реагентов и образцов
— одноразовые мусорные мешки для сбора отходов и использованных принадлежностей
Наборы принадлежностей, которые можно заказать дополнительно.
SPAN код № 270202
Пластиковый штатив 1 шт.
Мешок для биологически опасных отходов 10 шт.
Одноразовые перчатки 10 пар
Таблетка дезинфицирующего вещества 10 шт.
Шнур для завязывания 10 шт.
SPAN код № 270202А
Мешок для биологически опасных отходов 10 шт.
Одноразовые перчатки 10 пар
Таблетка дезинфицирующего вещества 10 шт.
Шнур для завязывания 10 шт.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Наборы следует хранить при 2 – 8оС. При соблюдении этого условия реагенты стабильны
до срока годности, указанного на упаковке.
Перед тем, как распечатать тестовое устройство, дайте ему возможность достичь
комнатной температуры.
Тестовое устройство следует помещать на сухое место вдали от прямого света.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
1. Не используйте реагенты после истечения срока годности.
2. Не совмещайте при проведении конкретного теста тестовое устройство и реагенты из
партий с разными номерами.
3. Закрывайте флаконы с реагентами только крышками от этих флаконов. Перепутывание
флаконов и крышек может привести к взаимному загрязнению реагентов.
4. Остатки образцов, использованные тестовые устройства и одноразовые
принадлежности должны выбрасываться в специально приготовленный для этой цели
контейнер и должны рассматриваться как отходы, представляющие биологическую
опасность. Этот контейнер по окончании работы должен быть или сожжен, или выброшен
после автоклавирования в течение 30 минут при 121оС или дезинфекции с помощью 5%ного раствора гипохлорита натрия или кальция.
5. Все реагенты должны наноситься с помощью капельницы на мембрану тестового
устройства осторожно и точно в область внутреннего нижнего круга; капельницу при этом
следует держать вертикально.
6. После очередного прикапывания какого-либо реагента на мембрану проследите, когда
наступит полное его впитывание в мембрану, подождите 30 секунд и только тогда
производите следующее прикапывание.
7. Интервал между последовательными прикапываниями не должен быть чрезмерно
долгим, т.е. не должен приводить к высыханию мембраны, что может вызвать
расплывание пятна или ложный положительный результат.
8. Подвергайте дезинфекционной обработке и выбрасывайте использованные тестовые
устройства немедленно после применения, обращаясь с ними как с потенциальными
источниками биологической опасности.
9. Шаги в проведении теста должны выполняться последовательно в соответствии с
инструкцией.
10. Прочтение и интерпретация результата дожны производиться не позднее 30-ти минут
после завершения процедуры теста.
ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ
1. Обращайтесь с исследуемыми образцами как с агентами, способными переносить
инфекцию.
2. Не курите, не принмайте пищу или напитки в месте, где ведется работа с образцами или
реагентами теста.
3. Приступая к тестированию, наденьте одноразовые перчатки, с которыми после
окончания работы распорядитесь по правилам обращения с отходами, представляющими
собой биологическую опасность. После того, как работа закончена и вы сняли перчатки,
тщательно вымойте руки.
ПРОВЕДЕНИЕ ТЕСТА
После каждого шага дайте возможность реагенту или образцу полностью впитаться и
пройти через мембрану, потом подождите 30 секунд и приступайте к следующему шагу.
а) Напишите на тестовом устройстве номер образца и положите устройство на
горизонтальную поверхность.
б) Добавьте 2 капли (100 мкл) промывочного буфера в центр мембраны тестового
устройства и дайте ему полностью впитаться в мембрану.
в) Через 30 секунд, удерживая капельницу в вертикальном положении, добавьте 2 капли
(100 мкл) исследуемого образца и дайте ему полностью впитаться в мембрану
(используйте одноразовые пластиковые капельницы, прилагаемые к набору).
г) Через 30 секунд добавьте 2 капли (100 мкл) промывочного буфера и дайте ему
полностью впитаться в мембрану.
д) Через 30 секунд добавьте 2 капли (100 мкл) Сигнального Реагента и дайте ему
полностью впитаться в мембрану.
е) Через 30 секунд добавьте 3 капли (150 мкл) промывочного буфера и дайте ему
полностью впитаться в мембрану.
ж) Через 2 минуты можно оценивать предварительный результат, если требуется срочная
информация.
з) Окончательный результат теста должен оцениваться через 10 минут.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Положительный результат. Если появятся два фиолетово-красных пятна — одно в
«контрольной зоне» (около буквы С) и другое в «зоне тестирования» (около буквы Т), —
это означает, что исследуемый образец содержит антитела к вирусу гепатита С.
Отрицательный результат. Если появится одно фиолетово-красное пятно и только в
«контрольной зоне» (около буквы С) мембраны, это означает, что исследуемый образец не
содержит антител к вирусу гепатита С.
Внимание: Окраска пятен блекнет со временем.
Недействительный результат. Если в результате проведения теста не появилось ни
одного пятна и фоновая окраска мембраны отсутствует или приобрела равномерный
розовато-фиолетовый оттенок, это говорит об ОШИБКЕ. Это может случиться из-за
неправильного проведения теста или из-за того, что образец или какой-либо из реагентов
испортился. Если получен такой результат, то тестирование следует повторить с
использованием свежего образца и нового тестового устройства.
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ И СПЕЦИФИЧНОСТЬ
На примере панели из 60 образцов сыворотки с подтвержденным наличием в них антител
к вирусу гепатита С было продемонстрировано, что чувствительность теста достигает
100%. Сравнительная оценка специфичности на большой выборке образцов из банка
крови (n = 805) показала, что она составляет 100%.
КОМПЛЕКТАЦИЯ
Набор из 10 тестов Набор из 50 тестов
(25972)
(25972А)
10 штук
50 штук
Реагент 1. Test device
Мембрана тестового устройства
Реагент 2. Wash buffer
14,0 мл
Промывочный буфер
Реагент 3 Signal Reagent
20,75 мл
Сигнальный реагент
Принадлежности:
20 штук
Одноразовые пластиковые капельницы
120 мл
32 мл
100 штук