Мухина Ю.И, Подгорная О.И.*, Ефремова ... Halisarca dujardini *- Институт цитологии РАН
advertisement
Мухина Ю.И, Подгорная О.И.*, Ефремова С.М. Маркирование клеток личинок губки Halisarca dujardini с помощью поликлональных антител *- Институт цитологии РАН Проблемы клеточной дифференциации и реорганизации личинок губок во время метаморфоза являются дискуссионными уже более ста лет. Ультраструктурный анализ метаморфоза не дает убедительного ответа на вопрос, принимают ли участие поверхностные клетки личинок в организации дефинитивных структур губки. Для прослеживания их судьбы нужны надежные маркеры этих и других клеток губки. Разделение клеток личинок губок в градиенте перколла позволило получить 5 морфологически разных категорий клеток. В результате электрофоретического разделения белков каждой фракции были выявлены их мажорные белки. Для дальнейшей работы были выбраны мажорные белки 68 кД фракции 2 (жгутиковые клетки личинки), 58 кД фракции 5 (колленцитоподобные клетки личинки) и 18 кД фракции 7 взрослой губки (эозинофильные клетки). К этим белкам были получены поликлональные антитела (АBL2, ABL5, ABB7, соответственно). В качестве вторых антител использовались антитела к иммуноглобулинам крысы (для клеток фракции 2) и морской свинки (для фракций 5 и 7), конъюгированные с флюоресцеин-изотиоцианатом. Иммуноцитохимический анализ препаратов диссоциированных клеток и целых личинок показал, что ABL2 взаимодействуют с белками в апикальной области жгутиковых клеток личинки, ABL5 взаимодействуют с гранулами колленцитоподобных клеток, а ABB7, полученные к белкам эозинофильных клеток взрослой губки, связываются с гранулами тех же клеток в составе личинки. ABL2 и ABL5 при иммуноблотинге электрофоретически разделенных белков целых личинок реагировали с белками 68 кД и 58 кД соответственно. ABB7 окрашивали несколько дискретных зон, с основной зоной 70 кД. Вероятно, белок 18 кД, содержащийся в гранулярных эозинофильных клетках взрослой губки, синтезируется в виде высокомолекулярного предшественника, который в дальнейшем подвергается процессингу. Связывания антител ABL2 (к белкам поверхностных жгутиковых клеток) с белками взрослой губки не происходило. Таким образом, можно считать полученные антитела надежным маркером клеток, принимающих участие в процессе метаморфоза личинок и последующем развитии губок.
