ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖИРОРАСТВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ А И Е В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ МЕТОДОМ ВЭЖХ С УФ-ДЕТЕКТОРОМ Хлякина Д.М., Мелихова Е.В. Липецкий государственный технический университет, г. Липецк, Россия e-mail: dashytka702@yandex.ru Витамины занимают особое место среди биологически активных веществ таких, как антибиотики, гормоны, гликозиды и другие, поскольку активно участвуют в обмене веществ и каталитических процессах, повышающих защитную функцию организма. Избыток или недостаток водо- или жирорастворимых витаминов в организме человека может негативно влиять на его здоровье [1]. Известно большое количество гостированных методик определения витаминов: титриметрические, спектрофотометрические, хроматографические, и другие, однако каждый из этих методов анализа имеет ряд недостатков [2-5]. Высокоэффективная жидкостная хроматография является одним из наиболее распространенных методов определения жирорастворимых витаминов, благодаря возможности одновременно разделять и определять компоненты сложных по составу смесей. В связи с появлением большого количества витаминизированных продуктов питания, а также проблемой фальсификации лекарственных средств, возникает необходимость контроля за содержанием витаминов. В данной работе проводилось определение витаминов А и Е в пищевых продуктах методом ВЭЖХ с УФ-детекцией. Определение проводилось на жикостном хроматографе LC10 фирмы Shimadzu (Япония) с градиентным насосом, термостатируемой ячейкой, спектрофотометрическим детектором, колонкой Nucleosil C18 150х4,6 мм (Macherey-Nagel, США). Для выбора оптимальных условий хроматографирования было рассмотрено влияние таких параметров, как состав элюента, скорость подвижной фазы, температура колонки. Оценка выбора условий хроматографического определения жирорастворимых витаминов осуществлялась по следующим характеристикам: степень разделения (Rs), коэффициент селективности (α), число теоретических тарелок (N), коэффициент асимметрии пиков (As) и высота, эквивалентная теоретической тарелке (Н). В работе для осуществления поставленной задачи проводили анализ как индивидуальных витаминов, так и их смеси в этаноле с концентрацией 50 мкг/мл. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора при длине волны 285 нм, которая по литературным данным является общей для всех витаминов. Подтверждающими пиками для витаминов являлись следующие: витамин А – максимум при длине волны 325 нм, витамин Е – 292 нм. В качестве неизменного параметра выступал объем вводимой пробы, который составил 10 мкл, длина колонки и неподвижная фаза. В качестве элюента был выбран ацетонитрил:метанол:дихлорметан и рассмотрено влияние различных соотношений элюента на хроматографические характеристики. Скорость потока варьировалась в диапазоне 0,3-1,2 мл/мин, а температура в диапазоне 25-85 ºС. Верхний предел температуры был выбран из технических рекомендаций эксплуатации колонки, которые позволяют нагрев до 85 ºС. В результате исследования для определения витаминов А и Е были подобраны следующие условия: скорость потока подвижной фазы – 0,8 мл/мин; температура колонки – 35 ºС, состав элюента – ацетонитрил:метанол:дихлорметан в соотношении 50:45:5. На основе полученных данных были построены градуировочные зависимости, линейный в диапазоне 1-50 мкг/мл для витамина А и 1-100 мкг/мл для витамина Е. предел обнаружения составил 0,4 мкг/мл для витамина А и 0,3 мкг/мл для витамина Е. Для анализа реальных образцов была разработана методика пробоподготовки, поскольку данная часть анализа является самой трудоемкой, долгой и вносит наибольшую ошибку в результаты. Известные методы пробоподготовки включают в себя стадию щелочного гидролиза витаминов, жидкостную экстракцию органическим растворителем, осаждение белков, мешающих хроматографическому определению, упаривание экстракта досуха и растворение в 1 мл подвижной фазы. Наибольшие потери отмечаются на стадии экстракции, поэтому было рассмотрено влияние природы экстрагентов, объема экстрагентов и числа ступеней экстракции на степень извлечения. В результате исследований были подобраны следующие условия экстракции: в качестве экстрагента с лучшей стороны себя показал этилацетат, объем экстрагента 30 мл, число ступеней экстракции – 4. С помощью разработанной методики пробоподготовки удалось повысить степень извлечения до 86%. На основе разработанной методики было проведено определение витаминов А и Е в образце детской овсяной каши фирмы «Агуша». Полученная хроматограмма представлена на рисунке 1. Рисунок 1. – Хроматограмма экстракта витаминов А и Е, полученная в результате анализа реального объекта. Содержание витаминов было найдено по градуировочному графику и пересчитано с учетом разбавлений и взятой навески. Результаты представлены в таблице 1. Таблица 1. – Результаты определения жирорастворимых витаминов в реальном объекте (n=3; P=0,95). Определяемое Полученный результат, Заявленное содержание, Sr Ошибка, вещество мг/100 г продукта мг/100 г продукта % Витамин А 0,39±0,02 0,4 0,02 2,5 Витамин Е 7,41±0,37 7,5 0,02 1,2 Результаты, представленные в таблице 1, показывают, что ошибка определения витаминов очень мала: в случае витамина А составила 2,5%, в случае витамина Е-1,2%, что является несомненным достоинством метода ВЭЖХ. 1) Смирнов В.А. Климочкин Ю.Н. Витамины и коферменты: учебное пособие. Самара: Самар. гос. техн. ун-т. 2008. Ч.2. 91 с. 2) ГОСТ 30627.1-98. Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина А (ретинола). 3) ГОСТ 30627.3-98. Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина Е (токоферола). 4) Eitenmiller R.R., Ye L., Landen W.O. Vitamin Analysis for the Health and Food Sciences // Boca Raton. N.Y. 2008. 664 р. 5) European Pharmacopoeia: Supplement. Strasbourg: Council of Europe. 2001. 3rd ed. 1705 p.