Но ди вы е
реклама
Новые е метод ды о стики и лече е ния диагно УДК 612.017.1:618.19-006.6-074 ИЗМЕНЕНИЯ СЫВОРОТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ РАСТВОРИМОГО CD50 АНТИГЕНА ПРИ НЕКОТОРЫХ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ Л.В.Варшавская В работе показано, что сывороточное содержание растворимого антигена CD50 увеличивается при карциноме молочной железы, раке желудка, но снижается при раке легкого. В зависимости от стадии карциномы молочной железы, ее гистологической формы, размеров первичного опухолевого очага, от количества поражения, от наличия и локализации метастазов сывороточный уровень растворимого CD50 антигена меняется как в сторону повышения, так и в сторону понижения, что отражает сложную картину нарушений его сывороточной концентрации. Относительное содержание CD50+ мононуклеарных клеток чаще всего снижается при повышении содержания уровня растворимого CD50 антигена. Ключевые слова: растворимый CD50 антиген, CD50+ мононуклеарные клетки, карцинома молочной железы. The work proves that the serum content of the soluble CD50-antigen increases in case of breast carcinoma, gastric cancer, but decreases in case of lung cancer. Depending on the stage of the breast carcinoma, its histological form, the size of the primary tumoral focus, damage size, presence and localization of metastases, the serum level of the soluble CD50-antigen can either increase or decrease – this shows the complicated picture of the disorders of its serum concenÂàðøàâñêàÿ tration. The relative content of CD50+ mononuclear cells is usually decreased in case of the Ëþäìèëà Âèòàëüåâíà – increase of the content of the level of the soluble CD-50 antigen. e-mail: [email protected] Key words: soluble CD-50 antigen, CD50+ mononuclear cells, breast cancer. ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия» ВВЕДЕНИЕ Важную роль в поддержании гомеостаза играет иммунная система. Физиологические основы сохранения внутреннего постоянства организма, в том числе и защита от неопластических процессов, базируются на эффективной и многосторонней работе молекулярных и клеточных механизмов иммунных реакций. Межклеточные контакты являются необходимым звеном реализации адекватного иммунного ответа как на инфекционные агенты, так и на злокачественно трансформированные клетки. При этом предотвращается потенциальная опасность развития в организме огромного числа опухолей, и лишь немногие клетки обходят иммунологический контроль и дают начало опухолям, которые регистрируются клинически. Молекулярной основой формирования межклеточных контактов являются бели адгезии. Антиген CD50 является антигеном адгезии и принимает участие в инициации иммунного ответа. Растворимая форма этого белка, образующаяся путем протеолитического отщепления мембранной формы от поверхности клеток, может принимать участие в регуляции иммунного ответа на самые разные антигены, несущие признаки чужеродности, в том числе и в регуляции иммунного ответа на опухолевые агенты. Обнаружено изменение сывороточной концентрации растворимой формы антигена CD50 при заболеваниях аутоиммунной, бактериальной и вирусной природы. 33 № 2 ( 5) н о я б р ь 2 01 2 Если мембранные белки непосредственно участвуют в образовании клеточных контактов, то их растворимые формы, появляющиеся в результате шеддинга или альтернативного сплайсинга мРНК, являются потенциальными иммунорегуляторными молекулами. Физиологическая роль ряда растворимых форм молекул адгезии, в частности CD50 антигена, при неопластических процессах во многом не исследована. ЦЕЛЬ ИССЛЕ ЕДОВАНИЯ Изучение изменения уровня растворимого CD50 антигена у больных с некоторыми солидными опухолями (рак желудка, рак легкого, рак молочной железы). МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ Для исследования сывороточного содержания растворимой формы белка CD50 использовали образцы сыворотки крови 30 здоровых доноров крови, 14 больных раком желудка, 7 больных раком легкого, а также 129 образцов сыворотки крови больных раком молочной железы, проходивших лечение в Нижегородском областном онкологическом диспансере. Образцы крови больных раком желудка, легкого и молочной железы были предоставлены кафедрой онкологии Нижегородской государственной медицинской академии. Иммунофенотипирование мононуклеарных клеток периферической крови 168 женщин с гистологически подтвержденным диагнозом рака молочной железы и 30 сопостави- Новые е метод ды о стики и лече е ния диагно мых по возрасту женщин-доноров проводили в реакции иммунофлуоресценции с помощью моноклональных антител ИКО-60 (против CD50 антигена). Сывороточное содержание антигена CD50 определяли иммуноферментным методом с помощью поликлональных антител против поверхностных антигенов мононуклеарных клеток периферической крови человека и меченых пероксидазой хрена моноклональных антител ИКО-60 против CD50 протеина. РЕЗУЛЬТАТЫ Ы И ОБСУЖДЕНИЕ С помощью иммуноферментных методов, основанных на использовании моноклональных антител ИКО-60, определен сывороточный уровень растворимой формы мембранного антигена CD50 при опухолях разной этиологии. Сывороточный уровень растворимого антигена CD50 в норме составил 342,2±10,0 U/ml. Являясь физиологическими, такие концентрации обеспечивают регуляцию процессов межклеточной адгезии в здоровом организме. При исследовании сывороточного содержания антигена CD50 при неоплазиях представленные значения были использованы в качестве нормы. При раке желудка сывороточный уровень растворимого антигена CD50 в сравнении с нормой был повышен в 2 раза (р<0,05). Рак легкого, наоборот, сопровождался понижением сывороточного содержания этого белка в 2 раза (р<0,05). Карцинома молочной железы характеризовалась статистически достоверным увеличением сывороточного уровня растворимого антигена в 1,7 раза. В связи тем, что наиболее выраженные изменения были зарегистрированы при карциноме молочной железы, исследование роли растворимой формы CD50 антигена в регуляции иммунофизиологических реакций организма при неопластических процессах в дальнейшем проводилось на примере карциномы молочной железы. Был изучен характер изменений сывороточной концентрации растворимой формы мембранного белка адгезии – CD50 антигена на разных стадиях карциномы молочной железы. На I и II стадиях неопластического процесса его содержание статистически достоверно не отличалось от нормы. На III стадии обнаруживалось статистически достоверное повышение сывороточного уровня растворимого антигена CD50 на 40,6%. На IV стадии опухолевого процесса сывороточный уровень растворимого антигена CD50 был на 21,6% выше нормы. Таким образом, содержание растворимого CD50 антигена не менялось на I и II стадиях рака молочной железы, но повышалось при последующем развитии неопластического процесса. Относительное содержание CD50-положительных мононуклеарных клеток периферической крови при карциноме молочной железы изменялось в сторону понижения. Если на I и III стадиях снижение было статистически недостоверным, то на II и IV стадиях относительное содержание CD50положительных клеток падало статистически достоверно в сравнении с нормой, снижаясь с 49,7±3,9% до 42,9±1,7 и 42,7±1,6% соответственно. Концентрация растворимого CD50 антигена у больных с инфильтрирующей протоковой или инфильтрирующей 34 № 2 ( 5) н о я б р ь 2 01 2 дольковой формой опухоли не отличалась от нормы. При комбинированной гистологической форме опухоли сывороточный уровень растворимого CD50 антигена повышался в 1,9 раза. Относительное содержание CD50-положительных клеток не отличалось от нормы при всех изученных гистологических формах карциномы молочной железы. Обнаружено статистически достоверное повышение сывороточного содержания растворимого CD50 антигена при карциноме молочной железы, сопровождающейся очагами некроза и воспаления, эмболией кровеносных и лимфатических сосудов, и понижение его уровня при врастании опухоли в кожу и окружающие ткани. Морфологические особенности, связанные с опухолевым ростом, ассоциированы, таким образом, с альтерацией сывороточного уровня растворимого антигена CD50, проявляющейся как в повышении его концентрации, так и в понижении. Относительное содержание CD50-положительных клеток имело иной характер изменений. Наличие очагов некроза и воспаления приводило к снижению среднего содержания CD50-положительных клеток в 1,6 раза. Достоверные изменения выявлены также при врастании опухоли в окружающие ткани. Единичные очаги поражения не сопровождались статистически достоверным изменением среднего уровня CD50 антигена. В то же время мультицентрический рост приводил к статистически достоверному падению сывороточного содержания растворимого антигена CD50. Если в норме его содержание равнялось 342,8±56,1 U/ml, то в случае мультицентрического роста оно понижалось в среднем до 212,2±43,8 U/ml. Аналогичным образом менялось относительное количество CD50-положительных клеток периферической крови. При мультицентрическом росте опухоли происходило статистически достоверное снижение количества CD50-положительных клеток на 29,3%. При моноцентрическом характере поражения количество CD50-положительных мононуклеарных клеток не менялось. Сывороточный уровень растворимого CD50 антигена статистически достоверно повышался при метастазах в мягкие ткани и кости скелета. Однако содержание CD50положительных клеток периферической крови при этом не менялось. Различающиеся локализации метастазов не приводили к статистически достоверным изменениям в относительном содержании CD50-положительных клеток за исключением метастазов в печень, когда количество CD50положительных клеток падало в 1,6 раза. Хорошо известно, что иммунный ответ имеет дозозависимый характер и может различаться в зависимости от количества чужеродного антигенного материала. Сывороточный уровень растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы может значительно различаться при разной массе опухолевых клеток. Увеличение опухолевой массы при множественной миеломе сопровождается повышением сывороточной концентрации растворимого CD50 антигена и растворимых молекул HLA I класса. Новые е метод ды о стики и лече е ния диагно Чтобы определить, каким образом сывороточная концентрация растворимого антигена CD50 зависит от опухолевой массы при карциноме молочной железы, нами был проанализирован его сывороточный уровень у больных, имеющих различный объем первичного опухолевого очага. При опухоли диаметром до 1 см зарегистрировано статистически недостоверное увеличение сывороточного содержания CD50 антигена. Однако при диаметре опухоли до 2 см его средний уровень достоверно повышался в 1,3 раза (табл.). Наличие опухолевого очага от 2 до 5 см сопровождалось повышением относительной концентрации растворимого CD50 уже в 1,5 раза, а при опухоли большего диаметра средняя концентрация сывороточного антигена увеличивалась в 2,0 раза. Таким образом, увеличение диаметра первичного опухолевого очага сопровождалось выраженным повышением сывороточного содержания растворимой формы мембранного антигена CD50. ТАБЛИЦА Относительное содержание CD50+ мононуклеарных кллеток крови и растворимого ан нтигена CD50 при разных размерах первичного очага опухоли Показатель Норма Растворимый CD50 CD50+ клетки 342± 10,0 49,7± 3,9 Диаметр первичного очага опухоли (см) до 1 1-2 2-5 5-8 и более 367,4± 436± 524,0± 689,0± 48,9 51,2* 43,6* 75,8* 37,2± 41,1± 36,9± 25,8± 1,7* 2,0* 1,7* 0,8* Примечание: *- различия статисти ически достоверны ы в сравнении с нормой (р<0,05). Содержание CD50+ мононуклеарных клеток статистически достоверно снижалось по сравнению с нормой. Наиболее выраженное падение содержания CD50 мононуклеарных клеток отмечалось при опухоли диаметром 8 см. Наряду с максимальным снижением количества CD50положительных клеток в крови больных, имеющих опухолевый очаг более 8 см, наблюдалось и наиболее выраженное повышение содержания растворимого CD50 антигена. Вероятно, это является следствием повышенной скорости шеддинга молекул CD50 с мембраны иммунокомпетентных клеток, в результате которого происходит снижение плотности экспрессии на мембране клеток этого белка и соответствующее снижение количества CD50-положительных клеток. ЗАКЛЮЧЕНИ ИЕ На основании вышеизложенного можно сказать, что сывороточная концентрация растворимого антигена CD50 и относительное содержание CD50-положительных мононуклеарных клеток периферической крови зависят от степени 35 № 2 ( 5) н о я б р ь 2 01 2 распространенности опухолевого процесса и ряда морфологических признаков, характеризующих опухоль. В целом, изменение сывороточного уровня растворимого антигена CD50 и относительного содержание CD50положительных мононуклеарных клеток имеет сложный характер. При этом повышение сывороточного уровня растворимой формы мембранного белка CD50 часто сопровождается снижением экспрессии мембранной формы антигена CD50, выражающейся в уменьшении относительного количества CD50 антиген мононуклеарных клеток. Известно, что мембранный CD50 антиген обладает конститутивным характером экспрессии. При постоянной скорости синтеза, характерной для конститутивных белков, повышенный шеддинг CD50 антиген антигена может привести к снижению экспрессии мембранной формы данного антигена и, соответственно, уменьшению относительного содержания CD50положительных клеток. Сниженное количество CD50положительных клеток свидетельствует о нарушениях в механизмах инициации и реализации иммунного ответа, в том числе иммунного ответа на опухоль, что можно рассматривать в качестве еще одного показателя, отражающего формирование иммунной недостаточности. Повышенный уровень растворимого CD50 также способен к блокаде инициации иммунного ответа, взаимодействуя с LFA-1 на антигенпрезентирующих клетках и мешая тем самым нормальной адгезии, а следовательно, и взаимодействию клеток, участвующих в реализации противоопухолевого иммунитета. ЛИТЕРАТУРА А 1. Boon T., Cerrotini J.C. Tumor antigens recognized by T lymphocytes. Annu. Rev. Immunol. 1994. V. 12. Р. 337-366. 2.Markel G., Wolf D., Hanna J., Gazit R. et al. Pivotal role of CEACAMI protein in the inhibition of activated decidual lymphocyte functions. J. Clin. Invest. 2002. V. 110. Р. 943-953. 3.Вязьмина Е.С. Особенности иммунного ответа организма на Treponema Pallidum: Автореферат дисс. канд. биол. наук. Москва. 2002. 22 с. 4. Птицына Ю.С., Копнина Е.О., Борнякова И.А. и др. Исследование уровня растворимого СD38 антигена при вирусных инфекциях. Russian Journal of Immunology. 1999. V. 4. Р.153-153. 5.Птицына Ю.С., Королева В.В., Крыжанова М.А. и др. Растворимые формы дифференцировочных антигенов как естественные регуляторные факторы иммунитета. Естественные факторы защиты в профилактике и лечении экологически обусловленных заболеваний: материалы научной конференции. Н. Новгород. 2000. 84-85 с. 6. Новиков В.В. Растворимые дифференцировочные антигены. Материалы Европейской школы онкологов. М. 1999. 10-14 с. 7. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999. 608 с. 8. Голенков А.К., Митина Т.А., Новиков В.В. и др. Клиническое значение растворимых молекул адгезии (ICAM- 3) апоптоза (sCD95) и sHLA класса I при лимфопролиферативных заболеваниях. Российский биотерапевтический журнал. 2002. № 1. 60-64 с.
