Клеточный биочип

Клеточный биочип
для ранней диагностики лейкозов
детей и взрослых
Актуальность
•  Лейкемия составляет 1/3 всех детских онкологических
заболеваний
•  В первый год болезни умирает более 25% больных
Методы диагностики
Диагностика онкогематологических заболеваний возможна только при
использовании комплекса диагностических методов, наиболее
распространенные из которых – иммунофенотипирование и
морфологическое исследование в мазке.
Морфологическое
исследование
стандартного мазка
Иммунофенотипирование
(определение
поверхностных CDантигенов) с помощью
проточной цитометрии
Постановка задачи
Современные методы не позволяют проводить иммунофенотипирование и
полноценное морфологическое исследование на одних и тех же клетках.
Клеточный биочип простой и дешевый метод, позволяющий совместить элементы
иммунофенотипирования с полноценным морфологическим
исследованием.
Возможности метода
Проточная Стандартный Клеточный
цитометрия
мазок
биочип
Определение содержания
основных групп лейкоцитов
+
+
+
Возможность исследования
морфологии
-
+
+
Определение доли клеток,
несущих определенный
поверхностный антиген
+
-
+
Определение коэкспрессии
+
-
+/-*
Простота и дешевизна
-
+
+
* Возможно с помощью дополнительного исследования на биочипе
Принцип работы биочипа
1.  Антитела к CD антигенам лейкоцитов
иммобилизуются на прозрачной
подложке.
Принцип работы биочипа
1.  Антитела к CD антигенам лейкоцитов
иммобилизуются на прозрачной
подложке.
2.  Суспензия лейкоцитов наносится на
биочип для инкубации.
Принцип работы биочипа
1.  Антитела к CD антигенам лейкоцитов
иммобилизуются на прозрачной
подложке.
2.  Суспензия лейкоцитов наносится на
биочип для инкубации.
Принцип работы биочипа
1.  Антитела к CD антигенам лейкоцитов
иммобилизуются на прозрачной
подложке.
2.  Суспензия лейкоцитов наносится на
биочип для инкубации.
Принцип работы биочипа
1.  Антитела к CD антигенам лейкоцитов
иммобилизуются на прозрачной
подложке.
2.  Суспензия лейкоцитов наносится на
биочип для инкубации.
Принцип работы биочипа
1.  Антитела к CD антигенам лейкоцитов
иммобилизуются на прозрачной
подложке.
2.  Суспензия лейкоцитов наносится на
биочип для инкубации.
3.  Лейкоциты оседают на поверхность
биочипа и реагируют с
иммобилизованными антителами.
Принцип работы биочипа
1.  Антитела к CD антигенам лейкоцитов
иммобилизуются на прозрачной
подложке.
2.  Суспензия лейкоцитов наносится на
биочип для инкубации.
3.  Лейкоциты оседают на поверхность
биочипа и реагируют с
иммобилизованными антителами.
4.  После отмывки остаются области со
специфически связанными клетками.
Принцип работы биочипа
1.  Антитела к CD антигенам лейкоцитов
иммобилизуются на прозрачной
подложке.
2.  Суспензия лейкоцитов наносится на
биочип для инкубации.
3.  Лейкоциты оседают на поверхность
биочипа и реагируют с
иммобилизованными антителами.
4.  После отмывки остаются области со
специфически связанными клетками.
5.  Эти клетки могут быть окрашены для
морфологического исследования.
Принцип работы биочипа
«Карта» биочипа
2
2
3
3
4
4
5
5
8 10
8 10
16 19 20 21 22 23
16 19 20 21 22 23
Положительный
контроль
Отрицательный
контроль
7 38 45 56 IgM mIgG
7 38 45 56 IgM mIgG
10 µm
Принцип работы биочипа
«Карта» биочипа
2
2
3
3
4
4
5
5
8 10
8 10
16 19 20 21 22 23
16 19 20 21 22 23
1. Доля клеток с заданным
поверхностным антигеном:
определяется по плотности
связывания клеток, нормированной на
положительный контроль
7 38 45 56 IgM mIgG
Антиген
Доля
клеток,
%
CD45
100
CD8
CD19
7 38 45 56 IgM mIgG
10 µm
Положительный
Принцип работы биочипа
«Карта» биочипа
2
2
3
3
4
4
5
5
8 10
8 10
16 19 20 21 22 23
16 19 20 21 22 23
1. Доля клеток с заданным
поверхностным антигеном:
определяется по плотности
связывания клеток, нормированной на
положительный контроль
7 38 45 56 IgM mIgG
Антиген
Доля
клеток,
%
CD45
100
CD8
39
CD19
7 38 45 56 IgM mIgG
10 µm
Положительный
Принцип работы биочипа
«Карта» биочипа
2
2
3
3
4
4
5
5
8 10
8 10
16 19 20 21 22 23
16 19 20 21 22 23
1. Доля клеток с заданным
поверхностным антигеном:
определяется по плотности
связывания клеток, нормированной на
положительный контроль
7 38 45 56 IgM mIgG
7 38 45 56 IgM mIgG
10 µm
Положительный
Антиген
Доля
клеток,
%
CD45
100
CD8
39
CD19
20
Принцип работы биочипа
«Карта» биочипа
2
2
3
3
4
4
5
5
8 10
8 10
16 19 20 21 22 23
16 19 20 21 22 23
1. Доля клеток с заданным
поверхностным антигеном:
определяется по плотности
связывания клеток, нормированной на
положительный контроль
7 38 45 56 IgM mIgG
7 38 45 56 IgM mIgG
2. Исследование
морфологии клеток,
несущих на поверхности
заданный поверхностный
антиген.
10 µm
Антиген
Доля
клеток,
%
CD45
100
CD8
39
CD19
20
Пример 1. Иммунофенотипирование:
заболевание существенно изменяет долю клеток с определенным
поверхностным антигеном
СD5
СD19
СD45
Плотность заполнения пятен антител: больной хроническим В- лимфолейкозом (х20)
СD5
СD19
СD45
Плотность заполнения пятен антител: здоровый донор (х20)
Применение 2. Исследование морфологии:
заболевание приводит к появлению клеток характерного «вида»
Пациент: М. Материал: кровь
Диагноз: хронический В-клеточный
лимфолейкоз
Здоровый донор
1
1
2
CD19
x100
1.  Зрелые лимфоциты средних размеров
2.  Иммунобласты
CD19
x100
Применение 2. Исследование морфологии:
заболевание приводит к появлению клеток характерного «вида»
Здоровый донор
CD19
x100
Пациент: К. Материал : кровь
Диагноз: волосатоклеточный
лейкоз
CD19
x100
Этапы диагностики онкогематологических
заболеваний
1
2
3
•  Поликлиника
•  Общий анализ крови, мазок крови
•  Врач-гематолог
•  Детальное исследование морфологии клеток крови
в мазке, иммуноцитохимия
•  Специализированный гематологический центр
•  Полный комплекс диагностических методов: мазок,
иммуноцитохимия, проточная цитометрия,
исследование мутаций.