ПОКАЗАТЕЛИ ЕСТЕСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ

347
ПОКАЗАТЕЛИ ЕСТЕСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА НОРОК НА ФОНЕ
ПРИМЕНЕНИЯ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА СУБАЛИН
И.В. Гашкова, И.И. Окулова, И.А. Домский, З.Н. Бельтюкова, Ю.А. Березина
ВНИИОЗ им. проф. Б.М. Житкова, Киров, [email protected]
Одним из ответственных периодов в процессе выращивания норок является период отъема молодняка от самок. При этом организм щенков испытывает существенную стрессовую нагрузку,
снижается интенсивность роста,
возникают дисбактериозы, возрастает восприимчивость организма к
возбудителям инфекционных заболеваний, что, в итоге, выражается
существенными
материальными
издержками производителя.
В связи с этим в последние годы в ветеринарной практике возрос интерес к пробиотическим добавкам, в частности, к биопрепарам из живых микробных культур,
которые используют в сочетании с
различными иммуностимуляторами, антивирусными веществами и
цитокинами, среди которых наиболее широко представлены препараты интерферона. Однако этот
подход усложняет технологию производства и повышает цену, что
часто делает такие комплексные
препараты нерентабельными, поэтому в реальной практике они
имеют ограниченное применение.
Альтернативой такому подходу является одно из перспективных
направлений разработки новых
биопрепаратов - непосредственная
модификация
пробиотических
штаммов путем клонирования генов антивирусных белков. Это
направление в течение ряда лет
широко разрабатывается в ГНЦ ВБ
«Вектор», где были созданы
штаммы микроорганизмов, продуцирующие цитокины, в частности
Bacillus subtilis 2335/рВМВ 105,
продуцирующий
альфа
2
интерферон
(Патент
РФ
№
1839459). Созданный на его основе
пробиотик субалин, наряду с иммуномодулирующим эффектом и
высокой антибактериальной активностью, обладает антивирусными
свойствами (Чудновская Н.В. и др.,
1995; Белявская В.А. и др., 2002).
Субалин является иммоболизированной высушенной споровой биомассой бактерий Bacillus subtilis
(сенная палочка), штамм 2335/105
ВКПМ В4759, содержащий рекомбинантную плазмиду с геном интерферона
α-2
человека
(В.А.Белявская,1992).
Лечебный
эффект Субалина обусловлен: во-
первых, антагонистическим действием к широкому спектру патогенных и
условно-патогенных
микроорганизмов,
возбудителей
желудочнокишечных заболеваний (Aeromonas hydrophila, Shigella, Salmonella,
Escherichia coli, Klebsiella,Staphylococcus aureus, Candida tropicalis,
Proteus, Shygolla sonne,Staphylococcus typhimirium, Candida albicans и
др.), за счет Bacillus subtilis штамма 2335; во-вторых, антивирусной активностью за счет продуцирования в организме плазмидой рВМВ 105,
входящей в состав штамма, необходимого количества эндогенного альфа-2 интерферона. Субалин отличается от антибиотиков следующими
свойствами: нулевым сроком ожидания, т. е. реализацию товарной продукции можно осуществлять сразу же после курса лечения или профилактики; отсутствием привыкания, т.к. препарат не вызывает образования
резистентных штаммов; безвредностью в концентрациях, тысячекратно
превышающих рекомендуемые.ы испытания
Цель работы. Изучить влияние лечебно-профилактического препарата субалин на показатели естественной резистентности норок.
Материалы и методы исследований. Исследования на норках проведены на базе лаборатории ветеринарии ГНУ Всероссийского научноисследовательского института охотничьего хозяйства и звероводства
(ГНУ ВНИИОЗ) им. проф. Б.М. Житкова Россельхозакадемии, ООО звероплемзавода «Вятка» Кировской области.
По принципу аналогов были сформированы две группы норок темнокоричневого окраса в возрасте 2,5 месяцев (n=20). В составе основного
рациона норки опытной группы получали субалин в дозе 0,5 х 109 КОЕ
на зверя 1 раз в сутки в течение 5 дней, повторный цикл применения через 10 суток. Контрольную группу животных составили звери, получавшие стандартный рацион. Для изучения влияния биопрепарата на показатели естественной резистентности у норок из каждой группы на 30-е
сутки эксперимента брали из хвостовой вены кровь, утром, до кормления.
Гематологические методы. С целью определения количества эритроцитов, лейкоцитов, лимфоцитов, гемоглобина использовали гематологический анализатор “РСЕ-90 Vet” (USA). Лейкограмму подсчитывали согласно общепринятым методикам, описанным в соответствующих руководствах В.А. Берестова (1980, 2005).
Биохимические методы. Белковые фракции сыворотки крови определяли нефелометрическим методом по В.Я. Антонову (1971). Определение общего белка сыворотки крови осуществляли на полуавтоматическом анализаторе «Biochim SA» с использованием коммерческого набора.
Иммунологические методы. Лизоцимную активность сыворотки крови исследовали по В.Г. Дорофейчуку (1968). Опсоно-фагоцитарную реакцию ставили по А.С Лабинской (1978). Определение бактерицидной активности сыворотки крови проводили по методу Кузьминой Т.А. и Смирновой О.В. (1966).
Статистические методы. Статистическая обработка цифровых материалов проведена на персональном компьютере с использованием пакета статистических программ «Statgnaphics» и «HG» по Стьюденту (Воробьев, 1962, Лакин, 1981).
Результаты исследований. Исследованиями крови норок до применения субалина установлено снижение содержания гемоглобина в сравнении с физиологической нормой. Введение в рацион норок биопрепарата оказывает положительное влияние на гемопоэз, у животных опытной
группы зарегистрировано достоверное увеличение в крови содержания
гемоглобина в 1,3 раза по сравнению с аналогами из контроля (таблица 1).
Данные таблицы 1 также свидетельствуют, что у зверей опытной группы имеется тенденция к достоверному увеличению в пределах физиологической нормы числа лейкоцитов в 1,5 раза, лимфоцитов – в 1,6 раза,
сегментоядерных нейтрофилов – в 1,1 раза и снижению количества палочкоядерных нейтрофилов в 1,3 раза по сравнению с соответствующи-
348
ми
показателями
контрольной
группы животных.
В ходе иммунологических и
биохимических исследований сыворотки крови установлено положительное влияние субалина на
иммунный статус норок. У зверей
опытной группы по сравнению с
контролем произошло достоверное
повышение бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови в 1,7 раза и в 1,3 раза, при постановке опсоно-фагоцитарной реакции нейтрофилов показатель
Штритера увеличился в 1,3 раза
(таблица 2). При исследовании
белкового состава сыворотки крови
отмечено, что у норок контрольной
группы содержание γ - и β- глобулинов ниже физиологической нормы, в то же время применение
биопрепарата вызывало нарастание иммунитета у опытных зверей,
сопровождающееся увеличением
вышеуказанных фракций в 1,9 раза
и в 1,3 раза соответственно
(Р<0,001) (таблица 3).
Заключение. Проведенные научные исследования свидетельствуют
о том, что применение субалина не оказывало отрицательного влияния
на морфологические показатели крови.
Биопрепарат оказывал стимулирующее влияние на лейкопоэз, фагоцитарную активность крови, лимфоцитопоэз и, следовательно, на гуморальный и клеточный иммунитет, так как происходит одновременное повышение количества γ-глобулинов, возрастает бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови. Следовательно, субалин оказывает
иммуномодулирующее действие и повышает естественную резистентность организма у норок в пределах физиологических возможностей и их
устойчивость к действию неблагоприятных факторов внешней среды.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Экспериментальная оценка биобезопасности генно-инженерных бактерий на модели штамма Bacillus subtilis, продуцирующего интерферон /
В. А. Белявская [и др.] // Журнал микробиологии. 2001а. № 2: С. 16–20.
Биологические эффекты интерферона, продуцируемого рекомбинантными бактериями препарата-пробиотика Субалин / В. А. Белявская [и
др.] // Журнал микробиологии. 2003. № 6. С. 102–109.
Benedettini G., Delibero G., Pierotti R. Immunomodulation by Bacillus subtilis
spores. Boll. Ist. Sieroter. Milan. 1983; 62: 509–516.
Fais S. Lymphocyte activation by Bacillus subtilis spores. Boll. Ist. Sieroter.
Milan.1987; 66: 391–394
Таблица 1
Гематологические показатели у норок
Показатели:
9
Лейкоциты, 10 /л
12
Эритроциты, 10 /л
9
Лимфоциты,10 /л
Гемоглобин, г %
Нейтрофилы, %:
палочкоядерные
сегментоядерные
лимфоциты
эозинофилы
моноциты
базофилы
Опытная группа(n=20)
9,98±0,88**
6,93±0,02***
4,7±0,09***
137,5±4,54*
Контрольная группа (n=20)
6,6 ± 0,891
6,216±0,04
3,0±0,045
111,3±6,34
4,4±0,09***
51,6±0,1***
39,4±0,4**
1,0±0,05***
2,4±0,01***
1,2±0,06***
5,8±0,04
49,7±0,02
37,6±0,6
3,3±0,02
1,2±0,07
2,4±0,04
Р * - <0,01; * - <0,05; ** - <0,001***
Таблица 2
Иммунологические показатели сыворотки крови норок
Показатели:
Бак. активность, %
Лизоц.активность,%
ОФР, %
Опытная группа (n=2)
37,2 ± 1,24 ***
35,4 ± 1,16***
16,9 ± 1,64*
Контрольная группа(n=10)
21,6±0,94
26,2±0,73
12,3±0,25
Р * - <0,01; ** - <0,05; *** - <0,001.
Таблица 3
Биохимические показатели сыворотки крови
Показатели:
Общий белок, г/л
Альбумины, %
α-глобулины, %
β-глобулины, %
γ-глобулины, %
Р * - <0,01; ** - <0,05; *** - <0,001.
Опытная группа(n=20)
88,42±1,03**
50,83±2,23*
23,58±0,04***
9,89±0,37***
15,95±0,18***
Контрольная группа(n=20)
85,43±0,77
60,02±2,15
23,03±0,07
7,46±0,28
8,61±0,70