Ядерные и митохондриальные антигены IgG EUROASSAY Anti

Anti-ENA ProfilPlus, Anti-M2 EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
1
___________________________________________________________________________________________
Регистрационное удостоверение ФС №2005/1125 от 18.08.2005 г.
Ядерные и митохондриальные антигены IgG EUROASSAY
Anti-ENA ProfilPlus, Anti-M2 EUROASSAY (IgG)
Набор EUROASSAY для определения IgG-аутоантител к ядерным и митохондриальным антигенам в
сыворотке или плазме крови человека методом иммуноблота
Номер по каталогу: DА 1590-1003-2 G
Набор рассчитан на 30 определений (10 × 3)
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор Anti-ENA ProfilPlus, Anti-M2 EUROASSAY (IgG) обеспечивает качественное определение in vitro
человеческих аутоантител класса IgG к семи различным антигенам: nRNP, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, Jo-1 и
М2 в сыворотке и плазме крови.
ПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ
Смешанное заболевание соединительной ткани (MCTD, Sharp-синдром), диссеминированная красная
волчанка (SLE), синдром Шегрена, прогрессирующий системный склероз, поли-/дерматомиозит, первичный
билиарный цирроз печени.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Тест Anti-ENA ProfilPlus, Anti-M2 EUROASSAY (IgG) основан на методе иммуноблотинга. Набор содержит
слайды с блотовыми стрипами (2 стрипа на каждом слайде закреплены в своих тестовых зонах). Стрипы
содержат аффинно очищенные антигены, нанесенные в виде параллельных полос, и антитела к IgG
человека. Блотовые стрипы инкубируют на первой стадии реакции с образцом разведенной сыворотки или
плазмы пациента. В случае если образец положительный, специфические антитела класса IgG (а также
классов IgA и IgM) будут связываться с соответствующими сайтами антигенов. Для обнаружения связанных
антител проводится вторая инкубация с использованием ферментного конъюгата (антитела к IgG человека,
меченные щелочной фосфатазой), который способен вызывать развитие цветной реакции.
МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Компонент
Количество
Обозначение
Слайды для микроскопа с тестовыми стрипами, покрытыми
SLIDE
10 слайдов
антигенами: nRNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, Jo-1, М2
Положительный контроль
POS CONTROL
1 × 0,2 мл
(IgG, человеческий), готов к использованию
Отрицательный контроль
NEG CONTROL
1 × 0,2 мл
(IgG, человеческий), готов к использованию
Ферментный конъюгат
CONJUGATE 10×
1 × 0,5 мл
Козьи антитела к IgG человека, конъюгированные с щелочной
фосфатазой; 10×концентрат
Буфер для образцов
1 × 60 мл
SAMPLE BUFFER
Готов к использованию
Промывочный буфер
2 × 100 мл
WASH BUFFER 10×
10×концентрат
Раствор субстрата
SUBSTRATE
1 × 4,0 мл
Нитроголубой
тетразолий/5-бром-4-хлориндолил-фосфат
(NBT/BCIP), готов к использованию
1 буклет
–
Инструкция по применению набора
Серия
Температура хранения
Для in vitro диагностики
Невскрытый набор использовать до
___________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Anti-ENA ProfilPlus, Anti-M2 EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
2
___________________________________________________________________________________________
Для проведения теста необходимы Шаблон-подложка и Кювета для промывки EUROASSAY, которые не
поставляются с данным набором. Эти приспособления можно заказать у фирмы EUROIMMUN.
Хранение и стабильность набора: Набор следует хранить при температуре от +2 °С до +8 °С. Не
замораживать. Невскрытые компоненты набора сохраняют стабильность в течение всего указанного срока
годности набора.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Примечание: Перед использованием все реагенты необходимо прогреть до комнатной температуры (+18
°С - +25 °С) в течение 30 минут. После первого использования реагенты сохраняют стабильность в течение
указанного срока годности, если они хранятся при температуре от +2 °С до +8 °С и защищены от микробной
контаминации. Прочие сведения о стабильности отдельных реагентов указаны ниже.
Слайды: Готовы к использованию. Во избежание конденсации влаги на слайдах, не вскрывайте пакет до
тех пор, пока он не прогреется до комнатной температуры. Не дотрагивайтесь руками до тестовых стрипов.
Вскрыв упаковку в первый раз, слайды необходимо немедленно использовать (проводить инкубацию). Не
используйте слайды, если герметичность упаковки нарушена.
Шаблон-подложка для проведения реакции: Проверьте работу шаблона-подложки: вся ли поверхность в
зоне проведения реакции гидрофильна и вся ли поверхность вокруг этой зоны гидрофобна? Промойте
обычным хозяйственным моющим раствором с детергентом. Если необходимо, протрите впитывающей
бумагой (например, бумажным полотенцем) и промойте большим количеством воды. Время от времени
дезинфицируйте, погружая шаблон на 1 час в дезинфицирующий раствор (например, в 3% раствор
Sekusept Extra, “Henkel”).
Положительная и отрицательная контрольные сыворотки: Готовы к использованию.
Ферментный конъюгат: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Отберите необходимое количество
жидкости из флакона с концентратом с помощью чистой пипетки и разведите 1:10 буфером для образцов.
Например, для проведения анализа на 1 слайде, разведите 30 мкл концентрата ферментного конъюгата в
270 мкл буфера для образцов. Разведенный раствор ферментного конъюгата следует использовать до
конца рабочего дня.
Буфер для образцов: Готов к использованию.
Промывочный буфер: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Необходимое количество
концентрата следует отобрать из бутыли чистой пипеткой и растворить (1:10) дистиллированной водой.
Например, для каждой постановки анализа, к 20 мл концентрата следует добавить 180 мл воды. Готовый
разведенный промывочный буфер следует использовать до конца рабочего дня.
Раствор субстрата: Готов к использованию. После отбора необходимого количества реагента из флакона
немедленно вновь закройте его, так как раствор чувствителен к свету.
Предостережение: Использованная контрольная сыворотка была проверена на наличие HBsAg и антител
к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 методами иммуноферментного анализа и непрямой иммунофлуоресценции и при этом
показала отрицательный результат. Тем не менее, все используемые материалы следует считать
потенциально опасными и обращаться с ними, соблюдая необходимые меры предосторожности.
Некоторые из реагентов ядовиты (буфер, раствор субстрата). Избегайте контакта с кожей.
Утилизация отходов: Образцы пациентов, контроли и слайды после инкубации следует рассматривать как
инфицированные отходы и обращаться с ними соответствующим образом. Остальные реагенты не нужно
собирать отдельно, если это не оговорено в действующих официальных инструкциях.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ ОБРАЗЦОВ ПАЦИЕНТОВ
Материал образцов: Сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин или цитрат) крови человека.
Стабильность: Образцы пациентов, предназначенные для исследования этим методом, можно хранить до
14 дней при температуре от +2 оС до +8 оС. Разведенные образцы необходимо использовать в течение
одного рабочего дня.
Разведение образцов: Образцы пациентов разводят 1:101 буфером для образцов. Например: разведите
10 мкл сыворотки в 1,0 мл буфера для образцов и тщательно перемешайте на вортексе (пипетки для этого
не подходят).
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ: техника TITERPLANE
Техника TITERPLANE разработана фирмой EUROIMMUN с целью стандартизации иммунологических
анализов: образцы вначале наносят в виде капель на горизонтальную поверхность специального шаблонаподложки в зону проведения реакции. Затем на шаблон, в специальные углубления, помещают слайды,
повернутые иммуноблотовыми стрипами к реакционной зоне, поэтому все стрипы сразу приходят в
___________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Anti-ENA ProfilPlus, Anti-M2 EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
3
___________________________________________________________________________________________
соприкосновение с каплями жидкости и отдельные реакции начинаются одновременно. Расположение и
высота капель точно заданы геометрией всей системы. Все наносимые жидкости находятся в огороженном
пространстве, поэтому не нужна обычно используемая в таких случаях ”влажная камера”. Шаблон-подложку
можно использовать многократно и инкубировать, таким образом, любое количество образцов, размещая
их рядом или один за другим, в идентичных условиях.
Нанесение
Нанесите 50 мкл разведенного образца пациента в каждую зону проведения реакции шаблона-подложки.
Уберите пузырьки воздуха. Разместите таким образом до начала инкубации все образцы, участвующие в
данной постановке теста. Для удобства нанесения используйте многоканальную пипетку или шаблон.
Инкубация с образцом (1 стадия)
Начните все реакции одновременно, поместив слайды в соответствующие углубления шаблона-подложки.
Следите, чтобы каждый образец контактировал с блотовым стрипом на слайде и чтобы отдельные образцы
не соприкасались друг с другом. Инкубируйте при комнатной температуре (от +18 °С до +25 °С) в течение
30 минут на шейкере циркуляторного типа при скорости 300 об/мин.
Промывка
Ополосните слайды в течение 5 секунд под струей промывочного буфера (используйте стакан или колбу) и
вставьте их в стеклянную рамку промывочной кюветы. После размещения всех слайдов перенесите рамку в
кювету и промывайте в течение 15 минут.
Нанесение
Нанесите 50 мкл разведенного ферментного конъюгата (щелочная фосфатаза, конъюгированная с
антителами к IgG человека) в каждую зону проведения реакции (к тому времени очищенную) шаблонаподложки. Количество нанесенных капель должно соответствовать количеству исследуемых образцов.
Инкубация с конъюгатом (2 стадия)
Извлеките слайды из промывочного буфера, протрите досуха только задний и нижний край и поместите
слайды в соответствующие углубления шаблона-подложки. Следите, чтобы каждая капля жидкости
контактировала с блотовым стрипом на слайде. Инкубируйте при комнатной температуре (от +18 °С до +25
°С) в течение 30 минут на шейкере циркуляторного типа при скорости 300 об/мин.
Промывка
Повторите процедуру промывки, используя свежую порцию промывочного буфера и промывая в течение 15
минут.
Нанесение
Нанесите 50 мкл раствора субстрата в каждую зону проведения реакции (к тому времени очищенную)
шаблона-подложки. Количество нанесенных капель должно соответствовать количеству исследуемых
образцов.
Инкубация с субстратом (3 стадия)
Извлеките слайды из промывочного буфера, протрите досуха только задний и нижний край и поместите
слайды в соответствующие углубления шаблона-подложки. Следите, чтобы каждая капля жидкости
контактировала с блотовым стрипом на слайде. Инкубируйте при комнатной температуре (от +18 °С до +25
°С) в течение 10 минут на шейкере циркуляторного типа при скорости 300 об/мин.
Промывка
Ополосните слайды деионизированной или дистиллированной водой. Высушите на воздухе в течение 15
минут.
Визуальная оценка результатов реакции
Отметьте интенсивность окрашивания полос в тестовой зоне стрипов.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Антигены и их размещение на стрипах:
nRNP/Sm
Scl-70
Sm
Jo-1
SS-A
М2
SS-B
Контрольная полоса (антитела к IgG человека)
___________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Anti-ENA ProfilPlus, Anti-M2 EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
4
___________________________________________________________________________________________
Интерпретируют интенсивность окрашивания полос на блотовых стрипах. Внимание: Перед оценкой
результатов мембрана должна быть полностью высушена. Положительный результат реакции на
контрольной полосе (в нижней части правого стрипа) свидетельствует о правильно проведенной инкубации.
В случае положительного результата анализа (наличие антител к соответствующим антигенам) в зоне
расположения антигена появляется синее окрашивание. Интенсивность сигнала зависит от титра антител в
образце, с которым проводилась инкубация стрипа.
В зависимости от интенсивности сигнала, результаты можно разделить на отрицательные, промежуточные
и положительные.
Сигнал
Результат
Нет сигнала
Отрицательный
Окраска полосы очень слабая
Промежуточный
Окраска полосы от умеренной до интенсивной
Положительный
Окраска полосы очень интенсивная, сравнимая с окраской контрольной полосы
Сильно-положительный
Параллельно с определением аутоантител к растворимым ядерным антигенам с помощью набора
EUROASSAY, всегда следует выполнять также непрямой иммунофлуоресцентный тест. С одной стороны,
это обеспечивает проверку достоверности в качестве защиты от ложноположительных результатов, с
другой стороны – благодаря использованию клеток HЕp-2 EUROIMMUN и, в особенности, замороженных
срезов ткани печени приматов, иммунофлуоресцентный тест обеспечивает выявление более широкого
спектра аутоантител к клеточному ядру, так как в настоящее время не все ядерные антигены присутствуют
в тесте EUROASSAY.
ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТА
Калибровка: Реактивность каждого антигена стандартизовали с помощью референтных сывороток
человека CDC-ANA с номерами от #1 до #10 контрольного центра “Center for Disease Control” (Атланта,
США). Данные по реактивности сывороток CDC, полученные с помощью набора Anti-ENA ProfilPlus, AntiM2 EUROASSAY (IgG) фирмы EUROIMMUN, суммированы в нижеприведенной таблице:
Антиген
CDC-1
CDC-2
CDC-3
CDC-4
CDC-5
CDC-6
CDC-7
CDC-8
Гомог.
Испещр.
Испещр.
RNP
Sm
Ядрыш
-ковое
SS-A
Центро
мерное
CDC9
CDC-10
Jo-1
Scl-70
/rim
/SS-B
NRNP/Sm
Пол.
Отр.
Пол.
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Sm
Пол.
Отр.
Пол.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
SS-A
Отр.
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
SS-B
Отр.
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Scl-70
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Jo-1
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Специфичность этих сывороток была исследована контрольным центром “Center for Disease Control” по
результатам реакции иммунофлуоресценции (субстрат: клетки Hep-2 EUROIMMUN и срезы ткани печени
приматов), двойной иммунодиффузии или противоточного иммуноэлектрофореза (сыворотки не в любом
случае бывают моноспецифичными).
Антигены: На иммуноблотовые стрипы были раздельно нанесены следующие антигены:
nRNP/Sm:
кролика.
Нативный U1-nRNP, очищенный аффинной хроматографией из селезенки теленка и
Sm:
Нативный Sm, очищенный аффинной хроматографией из селезенки и тимуса быка.
SS-A:
Нативный SS-A, очищенный аффинной хроматографией из селезенки и тимуса быка.
SS-B:
Нативный SS-B, очищенный аффинной хроматографией из тимуса теленка и кролика.
Scl-70:
Нативный Scl-70, очищенный аффинной хроматографией из тимуса быка и кролика.
Jo-1:
Нативный Jo-1, очищенный аффинной хроматографией из тимуса теленка и кролика.
М2:
Нативный М2 (пируват-дегидрогеназный комплекс), очищенный из сердца свиньи.
___________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Anti-ENA ProfilPlus, Anti-M2 EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
5
___________________________________________________________________________________________
Диапазон определения: Метод EUROASSAY является качественным, диапазон определения не дается.
Принято, что предельный титр антител наблюдается при разведении образца 1:101.
Перекрестные реакции: Качество используемых антигенных субстратов
(антигенов и источников
антигенов) гарантирует высокую специфичность наборов EUROASSAY. Данный набор EUROASSAY
специфически определяет антитела класса IgG к nRNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, Jo-1 и М2.
Перекрестных реакций с другими аутоантителами не обнаружено.
Интерференция: Не отмечено изменения аналитических характеристик при исследовании в данном тесте
EUROASSAY гемолизированных, липемических или желтушных образцов с концентрациями гемоглобина
вплоть до 5 мг/мл, триглицеридов – до 20 мг/мл и билирубина – до 0,4 мг/мл.
Вариации результатов в разных опытах и в одном опыте: Вариации результатов в разных опытах
оценивали многократным повторным исследованием одних и тех же охарактеризованных образцов в
течение нескольких дней, вариации в одном опыте – многократным исследованием охарактеризованных
образцов в течение одного дня. В каждом случае интенсивность полос находилась в пределах
установленного диапазона. Таким образом, данный тест EUROASSAY показывает очень высокую
воспроизводимость в пределах одной постановки и между постановками.
Специфичность
Специфичность данного набора EUROASSAY для всех исследованных антигенов составляет 100%. В
качестве референтных систем использовали ИФА тесты EUROIMMUN Anti-ENA ProfilPlus, Anti-M2 и тест
непрямой иммунофлюоресценции (IIFT с обнаружением антиядерных антител с использованием клеток
HЕp-2 и срезов ткани печени приматов).
Чувствительность
Чувствительность данного набора EUROASSAY для всех исследованных антигенов составляет 100%. В
качестве референтных систем использовали ИФА тесты EUROIMMUN Anti-ENA ProfilPlus 1, Anti-M2 и тест
непрямой иммунофлюоресценции (обнаружение антиядерных антител с использованием клеток Hep-2 и
срезов ткани печени приматов).
Референтный интервал
Интервал нормальных значений был определен на 50 здоровых донорах крови. Все доноры показали
отрицательный результат при использовании данного набора EUROASSAY.
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Антигены
Антигены nRNP и Sm принадлежат к группе малых рибонуклеопротеидов (snRNP, small nuclear
ribonucleoproteins), состоящих из низкомолекулярной РНК с высоким содержанием уридина (U-РНК или URNP) в комплексе с различными белками (с молекулярной массой 9–7- кДа). В этих растворимых ядерных
рибонуклеопротеиновых комплексах компонент РНК, в зависимости от его поведения при хроматографии,
имеет обозначения от U1 до U6. Белковый компонент содержит семь различных сердцевинных или
коровых (core) белков (В, В’, D, E, F, G), U1-nRNP содержит дополнительные специфические для ядерных
рибонуклеопротеидов белки (70 К, А, С). Антитела к U1-nRNP направлены против одного или нескольких из
этих белков. Напротив, антитела к антигену Sm могут взаимодействовать также с одним или с несколькими
коровыми белками. Частицы U-nRNP участвуют в сплайсинге пре-мРНК – они отщепляют не кодируемые
последовательности мРНК (интроны) и вставляют кодируемые последовательности мРНК (экзоны),
создавая мРНК.
Нативный антиген SS-A – малый рибонуклеопротеид, состоящий из одной или нескольких (до пяти)
молекул РНК (Y1, Y2, Y3, Y4, Y5; от 80 до 112 оснований) и белка с молекулярной массой 60 кДа. С этим
комплексом бывает также связан белок Ro-52 с молекулярной массой 52 кДа. По-видимому, SS-A участвует
в процессинге мРНК до молекул, активно участвующих в трансляции. Сыворотка, позитивная по этому
антигену, содержит антитела к нативному SS-A (т. е. содержащему белок 60 кДа) и вдобавок – может
содержать антитела к белку Ro-52. Отдельно реакции антител с Ro-52 невозможно оценить как SS-Aпозитивные или специфичные для СКВ или синдрома Шегрена, так как с Ro-52 могут давать перекрестные
ложноположительные реакции антитела к другим различным аутоантигенам (например, к Jo-1).
Антиген SS-B представляет собой фосфопротеин с молекулярной массой 48 кДа. В клеточном ядре он
выполняет функцию белка-хелпера для РНК-полимеразы III.
Антиген Scl-70, как было установлено, является ферментом ДНК-топоизомеразой-I. Молекулярная масса
нативного антигена составляет 100 кДа. Вначале методом Вестерн-блота был обнаружен только продукт
метаболизма этого антигена с молекулярной массой 70 кДа. ДНК-топоизомераза-I находится в
нуклеоплазме и, в особенно высокой концентрации, в ядрышке. Фермент участвует в репликации и
транскрипции двуспиральной ДНК.
___________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Anti-ENA ProfilPlus, Anti-M2 EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
6
___________________________________________________________________________________________
Антиген Jo-1 идентичен гистидил-тРНК-синтетазе, цитоплазматическому фосфопротеину с молекулярной
массой 50 кДа. Он действует в цитоплазме, присоединяя аминокислоту гистидин к соответствующей
транспортной РНК.
Антиген М2 - Показано, что антигенная система М2 представляет собой три биохимически связанных
мультиферментных комплекса внутренней мембраны митохондрий, катализирующих реакции
окислительного декарбоксилирования пирувата, 2-окси-глутарата и 2-оксикислот с разветвленной цепью.
Идентифицированы шесть белковых антигенов, относящихся к М2: антиген Е2 (74 кДа), антиген Protein Х
(55 кДа), альфа-субъединица Е1 (45 кДа) и бета-субъединица Е1 (36 кДа) пируватдегидрогеназного
комплекса; антиген Е2 (51 кДа) комплекса дегидрогеназы 2-оксикислот с разветвленной цепью и антиген Е2
(51 кДа) 2-оксиглутаратдегидрогеназного комплекса. Ферменты Е2 отвечают за перенос ацетильных групп к
коэнзиму А, функция белка Х, являющегося субъединицей пируватдегидрогеназного комплекса,
неизвестна.
Ассоциированные заболевания
Высокие титры антител к U1-nRNP характерны для смешанного заболевания соединительных тканей
(MCTD) или для Шарп-синдрома (Scharp syndrome). Доля этих аутоантител составляет 95% - 100%. Титр
антител коррелирует с клинической активностью заболевания. Антитела к U1-nRNP находят также в 30% 40% случаев у пациентов с диссеминированной красной волчанкой (disseminated lupus erythematodes) и
почти всегда в комбинации с антителами к Sm.
Антитела к Sm имеют высокую специфичность к диссеминированной красной волчанке. Вместе с
антителами к двухцепочечной ДНК (dsDNA) они могут считаться патогномоничными признаками этого
заболевания, но встречаются только у 20% - 40% пациентов.
Антитела к SS-A связаны с различными аутоиммунными заболеваниями. Наиболее часто – у пациентов с
синдромом Шегрена (Sjörgen’s syndrome от 40% до 80% случаев), но также при диссеминированной
красной волчанке (от 30% до 40% случаев) и при первичном билиарном циррозе (20%) и иногда при
активном хроническом гепатите. Кроме этого, практически в 100% случаев красной волчанки у
новорожденных (neonatal lupus erythematodes) могут быть найдены антитела к антигену SS-A. Они
поступают через плацентарный барьер к плоду и являются причиной воспалительных реакций. У
новорожденных младенцев они могут также вызывать врожденную блокаду сердца (congenital heart
block).
Антитела к SS-B находят почти исключительно у женщин (29:1) при синдроме Шегрена (от 40% до 80%
случаев), но также при диссеминированной красной волчанке (от 10% до 20%). При синдроме Шегрена в
основном встречается комбинация антител к SS-A и SS-B.
Антитела к Scl-70 находят в 25% - 75% случаях у пациентов с прогрессирующим системным склерозом
(диффузная форма), в зависимости от использованных методов проверки и степени активности
заболевания (Scl = склеродерма). Они не встречаются при ограниченной склеродерме.
Антитела к Jo-1 превалируют при полимиозите (25% - 35%). Они часто связаны с интерстициальным
легочным фиброзом.
Антитела к М2 являются маркерами для серологической диагностики первичного билиарного цирроза
печени. Наиболее известные антигены системы М2 – это фермент Е2 и белок Х пируватдегидрогеназного
комплекса. Более того, антитела к М2 были обнаружены также – в основном в низких титрах – при других
хронических заболеваниях печени (частота встречаемости 30%) и при других аутоиммунных заболеваниях,
подобных прогрессирующему системному склерозу (7-25%). Были также сообщения о больных с
одновременным наличием диагнозов прогрессирующего системного склероза и первичного билиарного
цирроза печени.
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.
Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования
сверьте номер и дату издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящем переводе (см.
внизу справа). При несовпадении номеров или дат обратитесь в «Аналитику» за новым переводом, либо
руководствуйтесь оригиналом инструкции.
Anti-ENA_PROFILPlus, Anti-M2_IgG_EUROASSAY_DA_1590-2G_rus.doc
05.11.2003
05.02.2007 14:42
Оригинал
DA_1590-2G_A_UK_C03.doc
Version:
___________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Anti-ENA ProfilPlus, Anti-M2 EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
7
___________________________________________________________________________________________
Техника TITERPLANE
слайд
шаблон-подложка
Нанести
по 50 мкл образца
разведенные образцы
Инкубировать (1)
30 мин на циркуляторном
шейкере (300 об/мин)
Промыть,
ополаскивая 5 сек
и промывая 15 мин в кювете
промывочный буфер
Нанести
по 50 мкл конъюгата
ферментный конъюгат
Инкубировать (2)
30 мин на циркуляторном
шейкере (300 об/мин)
Промыть,
ополаскивая 5 сек
и промывая 15 мин в кювете
промывочный буфер
Нанести
по 50 мкл субстрата
раствор субстрата
Инкубировать (3)
10 мин на циркуляторном
шейкере (300 об/мин)
Промыть,
ополоснуть дистиллированной
или деионизированной водой
высушить на воздухе
Оценить
интенсивность
окрашивания
визуально
___________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]