обзоре - Лабораторная Диагностика

Бубеев Н.Н., [email protected]
СОВРЕМЕННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ
ОПРЕДЛЕНИЯ ГЕНОТИПА
АНТИГЕНОВ ЭРИТРОЦИТОВ И
ТРОМБОЦИТОВ.
ЗАО «Лабораторная Диагностика»
локусов дает хорошие предпосылки для
развития
генетических
технологий
в
трансфузиологии.
Потребность в разработке простого,
надежного
и
производительного
метода
Введение.
генотипирования антигенов эритроцитов и
Молекулярные методы определения
HPA постепенно росла, и в конце 1990-х
антигенов
эритроцитов
тромбоцитов
годов был запущен Европейский Проект
используются уже более 20 лет. Первая
Генотипрования Крови (BloodGen Project) с
система
участием ведущих европейских институтов и
групп
крови,
и
которая
была
охарактеризована с помощью молекулярно-
биотехнологических
компаний.
Целью
генетических методов, была система MNS
проекта было масштабное генотипирование
(1986), затем были описаны группы AB0 и
доноров в Европейском Союзе (ЕС) и за его
Rh (1990). На октябрь 2012 года описано
пределами и создание коммерческой панели,
более 300 эритроцитарных антигенов 33
пригодной для клинического применения.
групп крови и 33 тромбоцитарных антигенов
В этом обзоре описаны технологии
– Human Platelet Antigen (HPA), большинство
генетического определения групп крови и
из которых являются результатом точечных
тромбоцитарных антигенов.
мутаций - Single Nucleotide Polymorphism
(SNP),
которые
аминокислоты
приводят
замене
Преимущества генотипирования по
первичной
структуре
попытки
внедрения
Использование генетических методов
молекулярных методов для определения
в трансфузиологии уже сейчас позволяет
групп крови были восприняты скептически,
упростить решение задач, которые не могут
однако
системы
быть реализованы с помощью серологии:
(HLA)
определение групп крови у пациентов,
антигена.
Первые
пример
антигенов
показал,
в
к
полиморфной
лимфоцитов
что
исключено
в
человека
ближайшее
полное
время
не
замещение
сравнению с серологическими методами.
подверженных
хроническим
и
множественным трансфузиям; неинвазивное
серологических методов определения групп
определение
крови и HPA генотипированием. Активное
диагностика неонатальной тромбоцитопении
развитие
разработка
(генотипирование по HPA); определение
программного
редких фенотипов групп крови в условиях
обеспечения и постоянное пополнение баз
отсутствия соответствующих антисывороток
данных
и многие другие. Кроме того, генетические
биоинформатики,
специализированного
полиморфизмов
тех
или
иных
резус-фактора
107078, Москва, ул. Новая Басманная, дом 12, стр. 2, к. 103, ЗАО «Лабораторная Диагностика»
телефон: +7 (495) 788-14-25 факс: +7 (495) 788-14-23 [email protected]
www.LD.ru
плода;
методы позволяют проводить виртуальный
анализе с помощью специальных сканеров.
(или
что
Метод позволяет определить генотип одного
и
образца по всем известным локусам, однако,
материальные затраты на подбор пары
малопроизводителен. Анализ одного чипа
донор-реципиент.
(образца) занимает два рабочих дня.
компьютерный)
существенно
кросс-матч,
сокращает
временные
Технология мультиплексного анализа
Технологии генотипирования:
Секвенирование – дорогой и самый
сложный
для
Используется
интерпертации
для
полиморфизмов
описания
при
Одна
xMAP.
метод.
технологий
новых
множества
разработке
коммерческих панелей.
самых
эффективных
одновременного
маркеров
в
определения
одном
образце.
Принцип метода основан на специфическом
связывании
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с
из
ДНК
образца
иммобилизованными
с
на
зондами,
микросферах,
специфических
окрашенных в разные цвета с последующим
праймеров (SSP), с последующим анализом
их анализом на проточном флуоресцентном
на
анализаторе.
использованием
агарозном
современных
аллель
геле.
Прародитель
всех
высокопроизводительных
методов, подходит для определения малого
количества
образцов
по
Технология
определять до 500 аллельных вариантов 96
образцов за 4-5 часов.
нескольким
Заключение
антигенам.
Все перечисленные выше технологии
Мультиплексная ПЦР в реальном
реализованы в разных коммерческих наборах
времени – принципиальной особенностью
и
является
американскими
анализ
позволяет
мониторинг
накопления
и
продуктов
также автоматическая
интерпретация
количественный
ПЦР,
регистрация
полученных
некоторые
из
них
сертифицированы
и
европейскими
а
регулирующими структурами. В Российской
и
Федерации зарегистрирована только одна
результатов.
тест-система,
основанная
на
технологии
Методика позволяет использовать смесь
ПЦР-SSP. Темпы развития современных
праймеров
технологий
для
одновременной
позволяют
прогнозировать
амплификации разных фрагментов ДНК в
активное внедрение молекулярных методов в
одной пробе. Этот метод не требует стадии
службы крови, как за рубежом, так и в нашей
электрофореза.
стране,
что
позволит
выйти
на
Гибридизация на микрочипе – метод
принципиально новый уровень диагностики
основан на специфическом связывании ДНК
и предотвращения заболеваний, связанных с
образца
несовместимостью
с
микрочипе
иммобилизованными
матрицами
и
на
последующим
по
антигенам
крови.
107078, Москва, ул. Новая Басманная, дом 12, стр. 2, к. 103, ЗАО «Лабораторная Диагностика»
телефон: +7 (495) 788-14-25 факс: +7 (495) 788-14-23 [email protected]
www.LD.ru
клеток