ткп/рп_1 цитокины цытакiны
реклама
ТЕХНИЧЕСКИЙ КОДЕКС УСТАНОВИВШЕЙСЯ ПРАКТИКИ ТКП/РП_1 Производство лекарственных средств ЦИТОКИНЫ Вытворчасць лекавых сродкаў ЦЫТАКIНЫ Настоящий проект технического кодекса установившейся практики не подлежит применению до его утверждения Департамент фармацевтической промышленности Министерства здравоохранения Республики Беларусь Минск ТКП/РП_1 УДК МКС 11.120. 01 КП 01 Ключевые слова: цитокины, банк клеток, вектор экспрессии, клетка-реципиент, клеточная линия, эффективность Предисловие Цели, основные принципы, положения по государственному регулированию и управлению в области технического нормирования и стандартизации установлены Законом Республики Беларусь «О техническом нормировании и стандартизации». 1 РАЗРАБОТАН «ЛОТИОС» Научно-производственным республиканским унитарным предприятием ВНЕСЕН Департаментом фармацевтической промышленности Министерства здравоохранения Республики Беларусь 2 УТВЕРЖДЕН И ВВ ЕДЕН В Д ЕЙСТВИЕ пр иказом Департамента фармацевтической промышленности Министерства здравоохранения Республики Беларусь от «___» ___________ 201___ г. № _______ 3 Настоящий технический кодекс установившейся практики является принятым с изменениями руководством «Note for guidance 3AB3a Production and Quality Control of Cytokine Products derived by Biotechnological Processes» («Производство и контроль качества продуктов из цитокинов, полученных биотехнологическими способами»). 4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ Настоящий проект технического кодекса установившейся практики не подлежит применению до его утверждения Издан на русском языке II ТКП/РП_1 Содержание 1 Область применения 2 Нормативные ссылки 3 Термины и определения 4 Обозначения и сокращения 5 Общие положения 6 Общие требования к производственному процессу 6.1 Стратегии производства цитокинов 6.2 Контроль банка клеток 6.3 Производство клеточных линий 6.4 Общие требования к процедуре очистки 7 Общие требования к контролю качества лекарственных средств на основе цитокинов 7.1 Характеристика продукции после процедуры очистки 7.2 Контроль продукции «in bulk» 7.3 Контроль готовой продукции 7.4 Эталонные материалы Библиография III ТКП/РП_1 ТЕХНИЧЕСКИЙ КОДЕКС УСТАНОВИВШЕЙСЯ ПРАКТИКИ Производство лекарственных средств ЦИТОКИНЫ Вытворчасць лекавых сродкаў ЦЫТАКIНЫ Manufacture of pharmaceutical products Cytokines Дата введения 201х-хх-хх 1 Область применения Настоящий технический кодекс установившейся практики (далее – технический кодекс) распространяется на цитокины, полученные из измененных клеточных линий, а также методами генной инженерии, и биотехнологические лекарственные средства, компонентами которых они являются (например, лекарственные средства на основе интерферонов или интерлейкинов). Требования технического кодекса распространяются на все научно-исследовательские учреждения и фармацевтические предприятия, производящие биотехнологические лекарственные средства на территории Республики Беларусь. 2 Нормативные ссылки В настоящем техническом кодексе использованы ссылки на следующие технические нормативные правовые акты в области технического нормирования и стандартизации (далее – ТНПА): ТКП 030-2012 (02041) Производство лекарственных средств. Надлежащая производственная практика. Примечание - При пользовании настоящим техническим кодексом целесообразно проверить действие ТНПА по каталогу, составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочные ТНПА заменены (изменены), то при пользовании настоящим техническим кодексом, следует руководствоваться замененными (измененными) ТНПА. Если ссылочные ТНПА отменены без замены, то положение, в котором дана ссылка на них, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку. 3 Термины и определения В настоящем техническом кодексе применяют термины, установленные в ГФ РБ [1], ТКП 030, а также следующие термины с соответствующими определениями: 3.1 банк клеток (cell bank): - система банка клеток (cell bank system): Это система, посредством которой производят последовательные серии продукции с использованием клеточных культур, происходящих из одного и того же главного банка клеток (характеризуется идентичностью клеточной линии и полным отсутствием контаминации). Для приготовления рабочего банка клеток используется некоторое число контейнеров из главного банка клеток. Систему банка клеток валидируют в отношении количества пассажей или числа удвоений популяции после сверхдостигаемого количества пассажей во время обычного технологического процесса. - главный банк клеток (master cell bank): Полностью охарактеризованная культура клеток, распределенная в контейнеры за одну операцию, обрабатываемая вместе таким образом, чтобы обеспечить единообразие, и сохраняемая таким способом, чтобы обеспечить стабильность. Обычно главный банк клеток хранят при температуре минус 70 оС или ниже. - рабочий банк клеток (working cell bank): Культура клеток, происходящая из главного банка клеток и предназначенная для подготовки клеточных культур, используемых в технологическом процессе. Обычно рабочий банк клеток хранится при температуре минус 70 оС или ниже. 3.2 валидация (validation): Действия, которые в соответствии с принципами надлежащей производственной практики доказывают, что определенная процедура, процесс, оборудование, исходные материалы, деятельность или система действительно приводят к ожидаемым результатам. 4 ТКП/РП_1 3.3 производственная клеточная культура (production cell culture): Культура клеток, взятая из одной или более емкостей производственного рабочего банка клеток, которая в производственном процессе способна продуцировать необходимый цитокин. 3.4 индуктор (inducer): Вещество, добавленное к клеточной культуре, и стимулирующее продукцию цитокина. 3.5 стимулятор (enhancer): Любое вещество, добавляемое к инициированной клеточной культуре, которое повышает конечный выход цитокина. 3.6 один сбор клеток (single harvest): Биологический материал, полученный с одного производственного цикла. 3.7 раствор очищенного цитокина (purifed cytokine solution): Раствор цитокина, полученного из одного сбора клеток, прошедшего смоделированный процесс очистки. 3.8 очищенный раствор цитокина «in bulk» (purifed cytokine bulk solution): Любой очищенный раствор цитокина или смесь растворов двух или более серий очищенного раствора цитокина. 3.9 смешанный раствор цитокина «in bulk» (formulated cytokine bulk solution): Очищенный раствор цитокина «in bulk», к которому добавлены наполнители, например, стабилизаторы. 3.10 конечный объем (final bulk): Смешанный раствор цитокина «in bulk» (или конечный биологический материал), находящийся в емкости, из которой заполняют конечные контейнеры. 3.11 конечная партия (final lot): Совокупность герметизированных конечных контейнеров, однородных по отношению к возможности контаминации в процессе наполнения или приготовления конечной продукции. 3.12 клеточная культура (cell culture): Клетки, выделенные из многоклеточных организмов и растущие in vitro. 3.13 непрерывная клеточная линия (Continuouss cell line): Клеточная линия, имеющая бесконечную способность к росту. 3.14 контаминация: Нежелательное попадание в сырье, промежуточную продукцию, первичную упаковку, активный фармацевтический ингредиент или на контактирующие с ними поверхности посторонних веществ или микроорганизмов. 3.15 контроль качества: Проведение проверок или испытаний на соответствие требованиям спецификаций. 3.16 критерии приемлемости: Численные пределы, интервалы или другие соответствующие диапазоны для оценки результатов испытаний. 3.17 примесь: Любой компонент, входящий в промежуточную продукцию или АФИ, наличие которого является нежелательным. 3.18 продукция: Общий термин, используемый для обозначения промежуточной продукции и активных фармацевтических ингредиентов. 3.19 производство: 1. Все операции по закупке материалов и продукции, приготовлению, фасованию, упаковыванию, контролю качества, выдаче разрешения на выпуск, хранению, распространению (дистрибуции) лекарственных средств и по соответствующему контролю. 3.20 спецификация: Перечень испытаний, ссылок на аналитические методы и соответствующие критерии приемлемости (допустимые пределы, интервалы (диапазоны) или другие критерии для описанных испытаний). В спецификации задается ряд критериев, которым должны соответствовать АФИ, препараты на их основе и готовое лекарственное средство для использования по назначению. 4 Обозначения и сокращения В настоящем техническом кодексе применяют следующие обозначения и сокращения: ДНК: Дезоксирибонуклеиновая кислота. рДНК: Рекомбинантная дезоксирибонуклеиновая кислота. МЕ: Международные единицы. GMP: Good manufacturing practice (надлежащая производственная практика). 5 Общие положения 5.1 Цитокинам присваивают названия в соответствии с международными соглашениями. Адекватные наименования эквивалентны международному наименованию на языке страны происхождения. 5.2 Методами получения цитокинов в промышленных масштабах являются: культивирование либо измененной клеточной линии, продуцирующей специфические цитокины, либо прокариотических или эукариотических клеток, в том числе и млекопитающих, в которые методом рДНК были внесены гены соответствующих цитокинов. Масштабное производство цитокинов посредством данных процедур может оказывать влияние на качество получаемой продукции и обуславливает особое внимание к вопросам контроля. Особое внимание также следует уделять промежуточному контролю и 5 ТКП/РП_1 обеспечению постоянства производственного процесса. Данный подход является общим к контролю качества всех биотехнологических лекарственных средств. 5.3 Общие требования к производству биотехнологических лекарственных средств (ТКП 030, [2]) распространяются и на производителей лекарственных средств на основе цитокинов. Нежелательно использовать в производстве такие вещества, как, например, пенициллин или другие бета-лактамовые антибиотики, которые могут спровоцировать аллергические реакции у отдельных людей. 5.4 Особое внимание должно быть уделено качеству реагентов, используемых в производстве, включая компоненты ферментационной или культуральной среды. Качество должно соответствовать фармакопейным и другим нормативным требованиям, установленным законодательством. Спецификации на реагенты в обязательном порядке должны быть приложены к документации по контролю качества. 5.5 Испытания на активность, аномальную токсичность, пирогенность, стерильность и ряд других, которые проводятся для лекарственных средств, полученных традиционными методами, так же применимы к лекарственным средствам, полученным биотехнологическими способами. 5.6 Основными факторами, существенно влияющими на безопасность и эффективность лекарственных средств на основе цитокинов являются: - использование измененной клеточной линии, особенно неопластического происхождения, в качестве субстрата для производства специфических цитокинов, обуславливает риск существования потенциальной онкогенности контаминированной гетерогенной ДНК. В настоящее время считают, что использование измененных клеточных линий может быть одобрено для использования при производстве биологических продуктов только в определенных случаях (например, при получении интерферонов из человеческой лимфобластоидной клеточной линии Намальва), когда продукция может быть подвергнута тщательной очистке. - цитокины, кодируемые встречающимися в природе генами, выделенными из чужеродных организмов, могут структурно, биологически и иммунологически отличаться от своих природных аналогов. Такие изменения могут возникать или на генетическом и посттрансляционном уровнях, или в процессе производства и очистки. С тех пор как продукты из цитокинов стало возможным получить манипуляциями с встречающимися в природе генами или химически синтезом из таковых, некоторые из них могут обладать полностью новой структурой. Такие продукты могут обладать улучшенными биологическими свойствами и/или минимизированными нежелательными характеристиками по сравнению с аналогами естественно-природного происхождения. Однако они могут обладать также непредсказуемыми и нежелательными свойствами. - используемый технологический процесс может оказывать влияние на природу и диапазон возможных контаминантов. Примером такого рода могут служить эндотоксины, выделяемые бактериальными клетками или возможные онкогенные свойства продуктов, выделенных из измененных клеток млекопитающих. Таким образом, продукты из цитокинов могут содержать потенциально опасные вещества, которые должны удаляться в процессе очистки. - непредсказуемая изменчивость клеточной культуры в процессе производства может привести к явлениям, которые благоприятствуют экспрессии других генов в системе «хозяин-вектор» или вызывают изменения в полипептиде. Такие изменения могут привести к уменьшению выхода продукции и/или качественному и количественному различию примесей, находящихся в ней. Следовательно, процедуры для обеспечения постоянства условий производства, а также постоянства готовой продукции, очень важны. - следует учитывать, что примеси цитокинов можно обнаружить в некоторых биологически активных веществах, для производства которых использовали активированные клетки (например, в вирусных вакцинах, для производства которых применяли клетки человека или обезьяны). В отдельных случаях конечная продукция может состоять из смеси цитокинов. Например, лекарственные средства на основе интерферона, полученные из лейкоцитов или фибробластов человека, содержат также примесь других цитокинов, способных влиять на иммуномодулирующую активность. - трудности контроля качества и стандартизации лекарственных средств на основе цитокинов связаны с наличием перекрестной активности у разных цитокинов, присутствием в растворах различных изоформ, белков и рецепторов. 5.7 Для отдельных лекарственных средств на основе цитокинов могут существовать свои особенности, которые необходимо учитывать и рассматривать индивидуально. 6 Общие требования к производственному процессу 6.1 Стратегии производства цитокинов 6 ТКП/РП_1 6.1.1 Производство цитокинов из измененных клеточных линий При данном способе производства необходимо наличие полного описания биологических характеристик измененной клеточной линии и любых добавляемых веществ, таких как индуктор, стимулятор или других (например, антибиотиков), используемых в производстве. Информация должна содержать: - документацию, касающуюся происхождения клеточной линии и природы любых установленных состояний донора, таких как, например, лимфома Беркитта, инфекционный мононуклеоз в активной стадии, вирусная или микоплазменная инфекция в целом; - данные, позволяющие установить подлинность клеточной линии; - данные о характеристиках развития клеточной линии; - данные, документально подтверждающие стабильность клеточной линии в используемых условиях культивирования, особенно если клетки были пассированы в течение длительного либо неопределенного периода. - доказательства того, что сыворотка, если она включена в среду для культивирования культуры клеток, не содержит бактерий, грибов, микоплазмы и вирусов. 6.1.2 Производство цитокинов методами генной инженерии – стратегия клонирования и экспрессии При данном способе производства необходимо иметь сведения о: - векторе экспрессии и клетке-хозяине. Приводят характеристику клетки-хозяина, вектора экспрессии, используемых в производстве. В нее включают подробности происхождения и идентификации гена, который клонируют, а также конструкцию, генетику и структуру вектора экспрессии. Также описывают метод, которым вектор внедряют в клетку-хозяина, и состояние вектора внутри хозяина. Объединение вектора и клетки-хозяина может быть постоянным, что обеспечивает длительную экспрессию продукта, либо самоограничивающимся, например, когда вектором является приемлемый цитопатогенный вирус. - последовательности клонированных генов. Предоставляют все подробности нуклеотидной последовательности вносимого гена и фланкирующего контрольного участка вектора экспрессии. Четко идентифицируют все соответствующие экспрессированные последовательности. Последовательность ДНК клонированного гена подтверждают на стадии посевной серии и сразу же после промышленной ферментации. В достоверных системах, например, когда множественные копии гена внедрены в геном постоянной клеточной линии, они могут не подходить для установления последовательности гена на производственном уровне. - экспрессии. Детально описывают методику, по которой активируют экспрессию соответствующего гена и контролируют ее в процессе производства. 6.2 Контроль банка клеток 6.2.1 Существенным условием является то, чтобы производство было основано на четко определенной системе банков клеток, включающей главный банк клеток и рабочий банк клеток производителя. В процессе создания банка клеток никакие другие клеточные линии нельзя выращивать одновременно в одних и тех же лабораторных помещениях или одним и тем же персоналом. Для всех материалов банка клеток следует полностью указать происхождение, условия хранения и предполагаемый срок жизнеспособности при ожидаемой интенсивности использования. Необходимо обратить внимание на стабильность системы экспрессии «хозяин-вектор» в клеточном банке согласно условиям хранения и восстановления. Обязательно уведомлять о любой установленной нестабильности. Новые клеточные банки следует полностью охарактеризовать. 6.2.2 Критической точкой в контроле является необходимость полной характеристики материалов банка клеток. Когда для производства используют клетки высших эукариотов, для подтверждения идентичности банка клеток вполне пригодны отличительные маркеры клеток, такие, как специфические изоферменты, иммунологические параметры или данные кариологии. Также, в случае использования микробиологических культур, для формирования основы идентификации можно использовать их специфические фенотипические свойства. 6.2.3 Необходимо представить доказательства того, что клеточный банк свободен от случайных инфекционных агентов (вирусных, бактериальных, грибных или микоплазмы). Особое внимание следует уделить вирусам, которые обычно могут инфицировать те виды, из которых получают клеточную линию. 6.2.4 Определенные клеточные линии содержат эндогенные вирусы, например, ретровирусы, которые нельзя легко удалить. Экспрессия таких организмов, в соответствии с многообразием свойств, известных как причина таких явлений, должна быть испытана и приведена в отчетных данных. 7 ТКП/РП_1 6.2.5 Необходимо привести доказательства того, что процесс очистки способен удалить и/или инактивировать любые вирусы, присутствующие в банке как эндогенный агент или как часть вектора экспрессии. 6.3. Производство клеточных линий 6.3.1 В рамках одного производственного участка не рекомендуется осуществлять одновременное культивирование более одной клеточной линии, в противном случае процесс следует проводить в закрытых резервуарах с применением эффективных барьеров, препятствующих заражению случайными агентами или другими клеточными линиями. Если другие клеточные линии культивируют параллельно, следует сохранять соответствующие записи и представлять доказательства отсутствия кросс-контаминации между ними. 6.3.2 Производство на конечной стадии культивирования. - необходимо представлять подробные данные о процессе ферментации, включая описание культуры, используемой при производстве продукции. - при каждом цикле производства непосредственно перед сбором культуры следует проверять наличие, степень и природу микробиологической контаминации. Обязательно предоставляют детальную информацию, подтверждающую адекватную чувствительность методов обнаружения микроорганизмов и обосновывающую допустимые уровни различных видов контаминантов. - должны быть определены максимально разрешенные количества генераций для производства, основанные на информации, включающей стабильность системы «клетка-хозяин\вектор» на серийных посевных стадиях и на высших уровнях производства. Необходимо представить данные о стабильности выхода продукции. - необходимо разработать критерии для выбраковки партий клеточных культур. - отслеживают характеристики клетки-хозяина/вектора в конце производственных циклов. Может быть важна детальная информация о количестве копий плазмид и степени удержания вектора экспрессии внутри клетки-хозяина, а также ограничение картирования вектора, содержащего внедряемый ген. 6.3.3 Производство непрерывной культуры. - мониторинг производственного процесса необходим на всем протяжении жизненного цикла культуры. Требуемая периодичность мониторинга и его тип зависят от различных факторов, включая природу продукции и системы экспрессии. Информация должна быть получена на основе анализа молекулярной целостности экспрессированного гена, фенотипических и генотипических характеристик клетки-хозяина после длительного культивирования. - необходимо привести доказательства того, что выход продукции не выходит за установленные пределы, а также что его качественные характеристики соответствуют установленным требованиям. - допуск собранной культуры для дальнейшего использования в производственном процессе должен быть четко определен в прикладываемом графике мониторинга. - период непрерывного культивирования должен быть четко определен на основании информации, включающей данные о стабильности системы и постоянстве характеристик продукции до и после этого периода. В случае длительного непрерывного культивирования клеточную линию и получаемую продукцию следует оценить заново через определенные интервалы, установленные на основе информации о стабильности системы и характеристиках продукции. - необходимо четко определить понятие «серии» продукции для дальнейшего использования в процессе производства. - регулярные испытания на микробную контаминацию должны проводиться согласно стратегии сбора клеток. - должны быть определены критерии отбраковки и досрочного завершения культивирования. 6.4 Общие требования к процедуре очистки 6.4.1 Следует детально описать методы, используемые для очистки продукции. Процедуры, требующие применения аффинной хроматографии, например, с использованием моноклональных антител, необходимо совмещать с соответствующими мероприятиями, позволяющими убедиться, что данные вещества или любые другие возможные контаминанты, обусловленные их использованием, не ставят под угрозу качество и безопасность конечной продукции. 6.4.2 Следует всесторонне исследовать способность процедуры очистки удалять нежелательные белки, нуклеиновые кислоты, вирусы и другие примеси, происходящие из клеток-хозяина, а также подтверждать воспроизводимость процесса очистки, его возможность удалять специфические контаминанты при сохранении постоянного состава очищаемой продукции. 6.4.3 Желательно провести предварительное лабораторное исследование, имитирующее производственный процесс, с использованием, например, тщательно отобранного набора вирусов, которые проявляют физико-химические свойства, соотносящихся с таковыми в течение процесса очистки, или радиоактивно меченных ДНК, специально смешанных с неочищенным препаратом 8 ТКП/РП_1 (спайкинг). На каждой стадии очистки необходимо устанавливать понижающий фактор для подобных контаминантов, используя, если необходимо, концентрации ДНК и вирусов выше предполагаемых при обычном производстве. 7 Общие требования к контролю качества лекарственных средств на основе цитокинов 7.1 Характеристика продукции после процедуры очистки 7.1.1 Полное описание характеристик цитокинов, осуществляемое химическими и биологическими методами является необходимым условием их производства. Подробная характеристика очищенной продукции является необходимой, если природа системы экспрессии не позволяет охарактеризовать ген на стадии производства. 7.1.2 Необходимо использование широкого диапазона аналитических методов, отражающих различные физико-химические свойства молекулы, такие как размер, заряд, изоэлектрическая точка, аминокислотный состав и гидрофобность. 7.1.3 Желательно включать тесты, подтверждающие, что продукция имеет желаемую конформационную структуру и агрегатное состояние. Примерами таких методов являются: электрофорез в полиакриламидном геле, изоэлектрическое фокусирование или аффинная хроматография, картирование белков, аминокислотный анализ, светорассеяние, УФ-спектроскопия, круговой дихроизм и другие спектроскопические методы. 7.1.4 Важная информация может быть получена с использованием иммунохимических методик. Биологическая и иммунологическая характеристика должна включать максимально возможный диапазон методик, применимых к предполагаемой биологической активности, клиническому использованию, способу применения и продолжительности терапии. Специфическую активность высокоочищенного продукта выражают определенной величиной: единицы активности/вес продукта. 7.1.5 Должна быть получена полная информация о последовательности, адекватно характеризующей генный продукт. Степень необходимой верификации последовательности определяется объемом других испытаний. Для одних целей будет достаточно частичной верификации последовательности и картирования белков, для других же будет нужна полное определение последовательности. Необходимо обратить внимание на возможное наличие N-терминального метионина, сигнальной или лидерной последовательностей, а также других возможных N– и Стерминальных модификаций (для частных случаев ацетилирования, аминирования или частичной деградации экзопептидазами). Должны быть указаны случаи других посттрансляционных модификаций, например гликозилирования. Необходимо учитывать, что подобные модификации часто отличаются от таковых, найденных в природных аналогах и могут оказывать влияние на биологические и фармакологические свойства продукции. 7.1.6 Необходимо приведение данных о контаминантах, которые могут присутствовать в конечной продукции. В спецификации необходимо указать уровень контаминации, считающийся приемлемым, а также критерии приемки или выбраковки промышленной серии. Важно, чтобы подходы, использующиеся для доказательства чистоты, охватывали как можно более широкий диапазон методов, включая физико-химические и иммунологические. Особое внимание следует уделить тестированию на контаминацию вирусами, нуклеиновыми кислотами и другими нежелательными примесями, происходящими от клеток-хозяина, а также веществами, которые могут быть привнесены в процессе производства или очистки. 7.2 Контроль продукции «in bulk» 7.2.1 Для подтверждения стабильности качества продукции по показателям подлинности, чистоты и эффективности должен быть выполнен всесторонний контроль первоначальных серий. Впоследствии может быть применено меньшее количество аналитических тестов. 7.2.2 Установление стабильности состава Для установления стабильности состава необходимо охарактеризовать достаточное количество последовательных серий раствора очищенного цитокина «in bulk» настолько тщательно, насколько это возможно. Испытания должны включать биологические, химические и иммунологические методы для установления качественных и количественных характеристик цитокина, а также обнаружения и нормирования примесей. Должны быть задокументированы любые выявляемые различия между сериями. Данные, полученные после таких исследований, следует использовать в качестве основы для разработки спецификации на продукцию. 7.2.3 Подлинность Набор тестов, применяемых для характеристики очищенного цитокина (см. п. 7.1), необходимо использовать для подтверждения подлинности продукции каждой партии. 7.2.4 Чистота 9 ТКП/РП_1 Следует определять чистоту каждой партии, которая не должна выходить за пределы, установленные в спецификации. Методы анализа должны включать чувствительные и достоверные методики определения ДНК от клетки-хозяина, и применяться для каждой партии продукции, полученной из непрерывной линии трансформированных клеток млекопитающих. Необходимо установить четкие верхние пределы содержания ДНК в такой продукции. Рекомендуется также выполнять тестирование на содержание ДНК для каждой серии продукции, полученной из любых других эукариотических клеток, и устанавливать предельные значения содержания ДНК, пока не будет получена дальнейшая информация о безопасности продукции. Необходимо проводить тесты на выявление ДНК прокариотической системы экспресии (т.е., происходящих от вектора или плазмид). Для лекарственных средств, предназначенных для длительного применения или вводимых в высоких дозах, необходимо также определение остаточных клеточных белков, методами с соответствующей чувствительностью (на уровне ppm) и установление приемлемых пределов содержания. 7.2.5 Активность Необходимо устанавливать активность каждой серии продукции из цитокинов (в единицах биологической активности на мл), используя, когда это возможно, соответствующие национальные и международные эталонные образцы, калиброванные в единицах биологической активности (см. раздел 7.1.4). Кроме того, следует привести данные о специфической активности (единицы биологической активности на единицу массы продукта). Для стандартизации определения специфической активности необходимо наличие высокоочищенного эталонного образца. Рекомендуется установить корреляцию между измерениями активности, включающими в себя биологические испытания, и результатами, полученными физико-химическими методами испытаний, и представить эту информацию. Если это возможно, партии продукции необходимо охарактеризовать высокоточными физико-химическими методами, а с помощью биологических испытаний подтвердить, что продукция обладает биологической активностью в заявляемых пределах. 7.3 Контроль готовой продукции Производитель отбирает образцы каждой финальной серии для следующих тестов: 7.3.1 Стерильность Стерильность контролируют согласно ГФ РБ [1]. 7.3.2 Подлинность В лекарственном средстве необходимо идентифицировать соответствующий цитокин подходящими методами. В данном случае используются иммуноферментный анализ и нейтрализационные методы. 7.3.3 Активность Испытания на активность проводят биологическими методами, если не показана возможность других подходов. Параллельно проверяют соответствующие эталонные образцы. Эти испытания выполняют для репрезентативной выборки из всей партии готовой продукции. Статистический анализ данных должен доказать, что полученное среднее значение активности находится в приемлемых границах степени достоверности. 7.3.4 Испытания на аномальную токсичность Каждую партию готовой продукции проверяют на аномальную токсичность согласно ГФ РБ [1]. 7.3.5 Пирогенность Каждую партию готовой продукции проверяют на наличие пирогенов в соответствии с ГФ РБ [1]. Необходимо учитывать, что некоторые цитокины могут сами по себе вызывать реакцию пирогенности in vitro, что следует принимать в расчет. 7.3.6 Испытание на наличие консервантов/примесей В каждой партии готовой продукции устанавливают количество консервантов/примесей. Используемые методы и допустимые концентрации должны быть утверждены регуляторным органом. 7.3.7 Влажность Для лиофилизированной продукции критерии приемлемости для влажности, в расчете на один контейнер, должны быть утверждены регуляторным органом. 7.3.8 Цветность, прозрачность и рН Требования к цветности, прозрачности и рН раствора цитокина в упаковке должны быть утверждены регуляторным органом. 7.4 Эталонные материалы Для использования в качестве химического и биологического эталонного материала серия продукции из цитокина, предпочтительно, та, которая была клинически аттестована, должна быть полностью охарактеризована, исходя из ее химического состава, чистоты, эффективности и биологической активности, включая, при необходимости, полное аминокислотное секвенирование. 10 ТКП/РП_1 В случае необходимости, биологическую активность продукции из цитокина и ее физические характеристики, включая аминокислотную последовательность, сравнивают с теми же показателями высокоочищенной продукции из молекул, встречающихся в природе. 11 ТКП/РП_1 Библиография [1] Государственная фармакопея Республики Беларусь (ГФ РБ II). – 2-е изд., Том 1. Молодечно: «Типография «Победа», 2012 [2] GMP for Biological products, 1992, WHO Technical Report Series, N 822, р.р. 22-30 12 ТКП/РП_1 Директор научно-производственного республиканского унитарного предприятия «ЛОТИОС» (УП «ЛОТИОС»), д.м.н., профессор Гапанович В.Н. Зав. отделом экспериментальной медицины и фармации УП «ЛОТИОС», к.б.н., доцент Мельнова Н.И. Заместитель директора по научной работе УП «ЛОТИОС», к.б.н. Заведующий отделом промышленной биотехнологии УП «ЛОТИОС», к.б.н. Андреев С.В. Белявский К.М. Старший научный сотрудник отдела экспериментальной медицины и фармации УП «ЛОТИОС» Кизино Т.Ф. Младший научный сотрудник отдела экспериментальной медицины и фармации УП «ЛОТИОС» Рожкова У.В. 13
