Reticulum II Staining Kit

Реклама
Один 22 мл флакон реактива Reticulum II Silver A содержит карбонат серебра в
концентрации менее 1,5%.
Reticulum II Staining Kit
860-024
Один 22 мл флакон реактива Reticulum II Reducer содержит 0,4% формальдегид.
05279399001
Один 22 мл флакон реактива Toner содержит хлорид золота в концентрации
менее 1%.
Один 22 мл флакон реактива Fixer II содержит 2% тиосульфат натрия.
75
Один 22 мл флакон Nuclear Fast Red Counterstain содержит 1 % ядерный быстрый
красный, 5,0% сульфат алюминия..
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор Reticulum II Staining Kit предназначен для качественного гистологического
окрашивания, которое визуализирует ретикулярные волокна в зафиксированных
формалином и залитых парафином тканях.
8 вставок во флакон с соломинками.
Результаты должны интерпретироваться квалифицированным патологоанатомом
с учетом данных гистологического исследования, соответствующих клинических
данных и сравнения с контрольными образцами.
Восстановление, смешивание, разведение и титрация не требуются. Дальнейшее
разведение реактивов может привести к ненадлежащему качеству окрашивания.
Подобные изменения могут вноситься в процедуру только после валидации
пользователем.
Данный продукт предназначен для диагностики in vitro (IVD).
Разбавление концентрированного раствора, смешивание,
разведение и титрование
Реактивы, входящие в состав данного набора, поставляются в оптимальной
концентрации для использования с аппаратами автоматической окраски препаратов
Первоочередная задача применения данного набора состоит в том, чтобы облегчить BenchMark Special Stains и аппаратами автоматической окраски препаратов NexES
Special Stains. Эти реактивы не оптимизированы для ручного окрашивания или для
дифференциальную диагностику определенных типов опухолевой ткани. В
некоторых видах опухолей ретикулярная сеть занимает определенное положение по использования с другими аппаратами автоматической окраски препаратов.
отношению к собственно опухолевым клеткам. Окрашивание ретикулярной сети
Необходимые, но не входящие в комплект материалы и
можно использовать для выявления болезненных состояний таких органов, как
реактивы
печень, почки и селезенка, посредством визуализации аномальной для данного
1.
Контрольный образец ткани
органа картины ретикулярной ткани. В нормально функционирующей печени
волокна выглядят как отчетливые цепочки или пряди, однако в некротической или
2.
Предметные стекла (с положительным зарядом)
циррозной печени волокна не образуют цельной структуры, а представляют собой
3.
Сушильный шкаф, способный поддерживать температуру 70C  5C
разрозненные фрагменты.1
4.
Аппарат автоматической окраски препаратов BenchMark Special Stains или
Набор Reticulum II Staining Kit использует модифицированную методику
аппарат автоматической окраски препаратов NexES Special Stains
окрашивания Gordon and Sweets Stain.2 Реактив Oxidizer, содержащий перманганат
5.
Объемные реактивы для аппарата автоматической окраски препаратов
калия, окисляет ткань, тем самым усиливая окрашиваемость ретикулярных волокон.
BenchMark Special Stains:
Обесцвечивающий состав Decolorizer, содержащий щавелевую кислоту, позволяет

Раствор BenchMark Special Stains Deparaffinization Solution (10X)
удалить избыток перманганата. Сенсибилизирующий состав Sensitizer, содержащий
железоаммонийные квасцы, добавляют для образования металлокомплексного

Жидкое покровное стекло BenchMark Special Stains Liquid Coverslip
соединения. Далее действуют окрашивающим составом Reticulum II Silver A,

Раствор BenchMark Special Stains Wash Solution (10X)
производя замену иона железа в металлокомплексном соединении на ион серебра.
6.
Объемные реактивы для аппарата автоматической окраски препаратов NexES
Восстанавливающая композиция Reducer переводит серебро в видимую
Special Stains:
восстановленную форму. Для достижения лучшего контраста и чистоты тона
применяют тонирующий реагент Toner, содержащий хлорид железа. Фиксаж Fixer,

Жидкое покровное стекло Liquid Coverslip (Low Temperature)
содержащий тиосульфат, останавливает реакцию и вымывает из среза ионы

Раствор Special Stains Wash (10X)
серебра, не вступившие в реакцию. Для получения контрастного фона применяется
контраст Nuclear Fast Red Counterstain (ядерный быстрый красный).
7.
Ксилол или другие очищающие реактивы (гистологической степени очистки)
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ И ПОЯСНЕНИЯ
ПРАВИЛА ПРИМЕНЕНИЯ
Данный набор оптимизирован для использования совместно с аппаратами
автоматической окраски препаратов BenchMark Special Stains компании VENTANA и
аппаратами автоматической окраски препаратов NexES Special Stains компании
VENTANA. Реактивы наносятся на ткань на предметных стеклах и распределяются
по всему срезу. Эффект окрашивания основан на аффинности между серебром и
окисленными гликопротеинами.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДИКА
Входящие в комплект поставки реактивы
Флаконы с реактивами поставляются в футлярах со штрих-кодом, которые
вставляются в лоток для реактивов аппарата автоматической окраски препаратов.
Каждый набор содержит достаточное количество реагентов для проведения
75 тестов:
Один 27 мл флакон Oxidizer содержит перманганат калия в концентрации менее 1%.
Один 22 мл флакон Decolorizer содержит щавелевую кислоту в концентрации
менее 1%.
8.
9.
10.
11.
Спиртосодержащий реагент или этанол (гистологической степени очистки)
Деионизированная или дистиллированная вода
Синтетическая среда для заливки
Покровное стекло
Хранение и обращение
Набор Reticulum II Staining Kit следует хранить при температуре 2–30°C, за
исключением реактива Reticulum II Silver A, который следует хранить при
температуре 2–8°C. Условия хранения указаны на этикетке флакона. Перед
началом использования охлажденные реактивы следует довести до комнатной
температуры.
При хранении в надлежащих условиях реактивы сохраняют стабильность вплоть
до даты истечения срока годности, указанной на флаконах. Настоятельно не
рекомендуется использовать раствор после истечения срока годности. Какихлибо явных признаков негодности данных реактивов не существует, поэтому
одновременно с окрашиванием исследуемых образцов следует производить окраску
контрольных образцов. Ухудшение окрашивания положительных контрольных
образцов может указывать на нестабильность реактивов. В этом случае немедленно
свяжитесь с представительством Ventana.
Один 27 мл флакон реактива Sensitizer содержит 2% ферро-аммоний сульфат.
2012-07-10
FT0700-440d
1/4
15332RU Rev G
Отбор образцов и подготовка к анализу
3.
Компания Ventana рекомендует собирать и хранить образцы согласно документу
M29-T2, изданному комитетом CLSI.3 В качестве фиксатора тканей рекомендуется
использовать 10% нейтральный буферный формалин.2
Рекомендованный протокол
1.
2.
Параметры автоматизированных процедур можно выводить на дисплей,
распечатывать и редактировать в соответствии с описанием, приведенным в
Приготовьте срезы микротомом, обычно толщиной от 3 до 5 мкм, и перенесите руководстве по эксплуатации аппарата.
их на предметные стекла.
Следующая процедура обладает достаточной гибкостью для работы со срезами
Предметные стекла можно высушить в аппарате BenchMark Special Stains
разной толщины и размеров, а также для учета предпочтений пользователя.
либо использовать альтернативный метод без аппарата.
Рекомендуется провести несколько пробных окрашиваний по этим протоколам,
чтобы оптимизировать процедуру окрашивания в соответствии с предпочтениями

При выборе аппарата BenchMark Special Stains для сушки предметных
пользователя.
стекол перейдите к шагу 3.

3.
4.
5.
Если аппарат не используется, высушите предметные стекла в течение
не менее 30 минут при температуре около 70°C. После сушки дайте им
остыть.
Распечатайте соответствующие штрих-коды на этикетках.
Перед депарафинизацией наклейте этикетки со штрих-кодами на матовый
конец предметных стекол (порядок наклейки этикеток описан в инструкции к
аппарату).
Рекомендованный протокол для аппарата автоматической окраски препаратов
BenchMark Special Stains и аппарата автоматической окраски препаратов
NexES Special Stains указан в разделе «Инструкция по применению».
ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Извлеките срезы из прибора после завершения операции окрашивания.
Для диагностики in vitro (IVD).
Относительно рекомендованного способа утилизации препарата
проконсультируйтесь с местными или государственными органами власти.
Материалы человеческого или животного происхождения следует
обрабатывать как биологически опасные материалы и уничтожать, соблюдая
все необходимые меры предосторожности. При работе с образцами тканей и
при их утилизации следует соблюдать все обычные предосторожности.
Не допускайте микробного загрязнения реагентов. Контаминация может
привести к ошибочным результатам.
Данные реактивы могут вызвать раздражение. Не допускайте попадания
реактивов в глаза или на слизистые оболочки. При попадании реактивов в
глаза и слизистые оболочки промойте их большим количеством воды. Не
вдыхайте пары реагентов и не глотайте сами растворы.
Реактив Oxidizer считается вредным для водных организмов и может
оказывать долгосрочный негативный эффект на водные среды обитания.
Реактив Reticulum II Reducer является легковоспламеняющимся и
раздражающим веществом. При контакте с кожей может стать причиной
сенсибилизации.
Реактив Fixer II является легковоспламеняющимся веществом.
Реактив Nuclear Fast Red Counterstain (ядерный быстрый красный) может
вызвать раздражение глаз.
Более подробная информация содержится в сертификате безопасности
материала, а также в руководстве по условным обозначениям и фразам риска
на сайте www.ventana.com.
В табл. 1 необходимо выбрать протокол депарафинизации и сушки для аппарата
BenchMark Special Stains.
Tабл. 1. Рекомендованный протокол окрашивания для набора Reticulum II Staining
Kit в аппарате автоматической окраски препаратов BenchMark Special Stains.
Этап протокола
Депарафинизация
Прогрев
2.
3.
Снимите крышечку с флакона и поместите в него вставку с соломинкой. После
открытия флакона вставку с соломинкой следует оставить во флаконе.
Во время использования реактива мягкую крышечку следует поместить в
ячейку на держателе для реактивов.
Когда реактив не используется, закройте флакон мягкой крышечкой.
Методика окрашивания
1.
2.
Загрузите реактивы и микропрепараты в аппарат автоматического
окрашивания.
Проведите окрашивание, следуя рекомендованному протоколу (см. табл. 1 или
табл. 2) и процедуре, описанной в инструкции к аппарату.
2012-07-10
FT0700-440d
2/4
Выберите температуру и время прогрева.
Выберите время прогрева от 8 до 16 минут:
Оптимизировать
интенсивность
контрастного окрашивания
(Nuclear Fast Red
Counterstain)
Выберите время прогрева от 4 до 16 минут:
Без контрастного красителя
Если Nuclear Fast Red Counterstain не
трубуется, выберите No Counterstain.

8 минут, светлое окрашивание волокон

16 минут, темное окрашивание волокон

4 минуты, светлое окрашивание

16 минут, темное окрашивание
Tабл. 2. Рекомендованный протокол окрашивания для набора Reticulum II Staining
Kit в аппарате автоматической окраски препаратов NexES Special Stains.
Этап обработки
Метод
Депарафинизация
1.
2.
Подготовка флакона с реактивом
1.
Выберите депарафинизацию для
автоматического удаления парафина.
Оптимизировать
интенсивность серебристого
(Reticulum II Silver A)
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
Перед началом использования во флакон с реагентом следует поместить вставку и
соломинку.
Метод
Проведите депарафинизацию и регидратацию
препаратов в соответствии с
рекомендованными процедурами, принятыми в
вашей лаборатории.
Перед загрузкой микропрепаратов в аппарат
автоматизированного окрашивания их следует
поместить в раствор Special Stains Wash
Solution (1X). Загрузку препаратов в аппарат
окрашивания рекомендуется проводить не
позднее, чем через час. Если такой возможности
нет, препараты можно до 24 часов хранить в
деионизированной или дистиллированной воде
при условии того, что ткань находится в
холодильнике и не пересыхает.
Опции
Температура
37°C либо 60°C
Время
4–12 минут для Reticulum II Silver A
Counterstain
(контрастное
окрашивание)
Светлое или темное
Предварительно запрограммированный протокол
Протокол для 37°C
Номера протокола должны начинаться с 3ХХ
Протокол для 60°C
Номера протокола должны начинаться с 6ХХ
15332RU Rev G
препаратов и обеспечение достоверности положительных и отрицательных
контролей.
Рекомендуемая процедура обработки после выполнения
автоматического окрашивания
1.
2.
Удалите остатки раствора для покровных стекол со слайдов, промыв их двумя
свежими порциями 95%-го спирта.
Выполните дегидратацию и просветление препарата. Затем накройте его
постоянным покровным стеклом.
РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Аппарат автоматической окраски препаратов BenchMark
Special Stains
1.
ПРОЦЕДУРЫ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА
Примером положительного контроля может быть зафиксированная формалином и
залитая в парафин ткань с определенными ретикулярными волокнами (печень,
селезенка, почка или лимфоузлы).2 В качестве контроля следует использовать
свежие образцы тканей, полученные в ходе вскрытия, биопсии или хирургических
операций. Образцы следует как можно скорее подготовить или зафиксировать по
точно такой же процедуре, что используется для исследуемых образцов. С
использованием таких образцов должен контролироваться весь процесс
исследования, начиная от подготовки ткани и заканчивая окрашиванием.
Использование срезов тканей, обработанных по процедуре, отличной от исследуемого
образца, позволяет контролировать качество всех реактивов и этапов окраски, за
исключением фиксации и обработки тканей. В качестве отрицательных контролей
могут использоваться клеточные компоненты или другие элементы тканей.
Тесты на контрольных тканях следует выполнять при каждом использовании
данного набора для окрашивания.
2.
3.
Аппарат автоматической окраски препаратов NexES
Special Stains
Набор для окрашивания Reticulum II Staining Kit проходит проверку в процессе
производства с целью убедиться, что ретикулярные волокна окрашиваются в
черный цвет на розовато-красном фоне.
1.
Заведомо положительные контроли следует использовать только для проверки
правильности самой процедуры окрашивания обработанных тканей и качества
реактивов, но не для постановки конкретного диагноза на основании исследуемых
образцов.
Если в какой-либо партии препаратов не наблюдается положительного окрашивания
заведомо положительных структур тканей, результаты окрашивания данной партии
исследуемых образцов следует считать недостоверными. Если наблюдается
положительное окрашивание заведомо отрицательных структур тканей, результаты 2.
окрашивания данной партии также следует считать недостоверными.
В случае получения необъяснимых расхождений в результатах окрашивания
контрольных образцов следует немедленно обратиться в местное
представительство. Если результаты контроля качества не соответствуют
спецификациям, результаты, полученные на образцах пациента, следует считать
недействительными. В таком случае необходимо определить и устранить причину
несоответствия и повторно проанализировать образцы тканей пациента.
Общие ограничения
2.
3.
Гистологическое окрашивание является многоступенчатым диагностическим
процессом, который требует от персонала специальной подготовки по выбору
необходимых реактивов и тканей, фиксации, обработке и подготовке
препарата, а также интерпретации результатов окрашивания.
На результаты окрашивания влияет методика отбора, хранения и подготовки
пробы ткани. Вариации параметров обработки тканей и технических процедур
могут привести к значительной вариабельности результатов окрашивания,
вследствие чего необходимо регулярное проведение окрашивания
контрольных образцов (см. раздел «Процедуры контроля качества»).
Ненадлежащее выполнение фиксации, замораживания, оттаивания,
высушивания, нагрева или резки тканей, а также загрязнение образца
другими тканями и жидкостями может привести к появлению артефактов или
получению ложноотрицательных результатов.
Клиническая интерпретация любого положительного окрашивания или его
отсутствия должна проводиться с учетом анамнеза, морфологии и иных
гистопатологических критериев. Такая интерпретация должна проводиться
квалифицированным патологоанатомом, который обязан быть знаком с
характеристиками используемого красителя и методикой, используемой для
приготовления микропрепарата. Окрашивание должно проводиться в
сертифицированной и лицензированной лаборатории под контролем
патоморфолога, который несет ответственность за просмотр окрашенных
2012-07-10
FT0700-440d
3/4
Воспроизводимость результатов окрашивания набором Reticulum II Staining Kit
в пределах подхода определялась путем окрашивания 100 препаратов в 8
разных блоках ткани печени и блоках гепатоцеллюлярной карциномы.
Микропрепараты оценивались по системе критериев пригодности или
непригодности на предмет результатов окрашивания (общая равномерность и
качество окрашивания), диагностической ценности окрашивания (можно ли на
основании окрашивания определить патологию) и качества контрастного
окрашивания. Результаты показали, что все 100 препаратов соответствовали
всем критериям.
Воспроизводимость результатов окрашивания набором Reticulum II Staining Kit
между подходами определялась в ходе окрашивания 20 микропрепаратов в
каждом подходе на 5 аппаратах автоматического окрашивания (по одному
подходу на аппарат). Микропрепараты оценивались по критериям пригодности
или непригодности на предмет результатов окрашивания, диагностической
ценности и качества контрастного окрашивания. Значительных вариаций
интенсивности окрашивания между препаратами не обнаружено.
ВЫЯВЛЕНИЕ И УСТРАНЕНИЕ ПРОБЛЕМ
1.
ОГРАНИЧЕНИЯ
1.
Воспроизводимость между разными аппаратами: На 5 разных аппаратах
BenchMark Special Stains набором Reticulum II Staining Kit было окрашено
100 микропрепаратов тканей печени. Препараты оценивались на предмет
качества окрашивания по системе критериев пригодности или непригодности.
Значительных вариаций интенсивности окрашивания между препаратами не
обнаружено.
Воспроизводимость между подходами: На 5 аппаратах BenchMark Special
Stains в течение 5 дней набором Reticulum II Staining Kit было окрашено по
100 микропрепаратов тканей печени. Препараты оценивались на предмет
качества окрашивания по системе критериев пригодности или непригодности.
Значительных вариаций интенсивности окрашивания между препаратами не
обнаружено.
Была также проведена проверка на предмет совместимости набора
Reticulum II Staining Kit с другими реактивами, входящими в состав наборов
для специального окрашивания. Каких-либо нежелательных химических
реакций не наблюдалось.
2.
3.
На качество и интенсивность окрашивания может влиять толщина среза ткани.
Если качество окрашивания неудовлетворительное, свяжитесь с местным
представительством для получения поддержки.
На препаратах тканей с признаками некроза или автолиза может
обнаруживаться неспецифическое окрашивание.
Если не произошло нормального окрашивания положительного контроля,
убедитесь, что на слайд правильно наклеена этикетка с соответствующим
штрих-кодом. Если проблем с этикеткой не обнаружено, но при этом
окрашивание не произошло (либо произошло неправильное окрашивание),
свяжитесь с местным представительством.
ССЫЛКИ
1.
2.
3.
Sheehan DC, Hrapchak BB. Theory and Practice of Histotechnology, 2nd edition.
St. Louis, MO: C.V. Mosby Company; 1980:181-188.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition.
Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). CLSI Web site.
http://www.clsi.org/. Загружено 3 ноября 2011 года.
15332RU Rev G
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНАЯ СОБСТВЕННОСТЬ
BENCHMARK, NexES, VENTANA, а также логотип VENTANA являются товарными
знаками компании Roche.
© 2012 Ventana Medical Systems, Inc.
КОНТАКТНАЯ ИНФОРМАЦИЯ
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventana.com
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
2012-07-10
FT0700-440d
4/4
15332RU Rev G
Скачать