д.и. заболотный, а.в. лупырь, о.ф. мельников особенности

Реклама
УДК 616.216-002-006:616-097
Д.И. ЗАБОЛОТНЫЙ, А.В. ЛУПЫРЬ, О.Ф. МЕЛЬНИКОВ
ОСОБЕННОСТИ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА
ПРИ ПОЛИПОЗНОМ РИНОСИНУCИТЕ
Ин-т отоларингологии им. проф. А.И. Коломийченко АМН Украины,
Харьк. мед. ун-т МЗ Украины
ОСОБЕННОСТИ ГУМОРАЛЬНОГО
ИММУНИТЕТА ПРИ ПОЛИПОЗНОМ
РИНОСИНУCИТЕ
Заболотний Д.І., Лупирь А.В., Мельников О.Ф. (Київ)
Резюме
HUMORAL IMMUNITY FEATURES BY
POLYPOUS RHINOSINUSITIS
Zabolotnyj D.I., Lypyr A.V., Mel’nikov O.F. (Kyiv)
Summary
Вивчено стан місцевого та системного гуморального імунітету у хворих на поліпозний риносинусит до та після лікування у порівнянні з показниками імунітету у здорових донорів. Встановлено, що
захисні розчинні фактори (секреторний імуноглобулін А, гама-інтер-ферон, лактоферон) ротоглоткового
секрету у хворих мають тенденцію до зниження та
частково відновлюються після лікування. В сироватці
крові має місце підвищення концентрації інтерлейкіну 1, гама-інтерферону та лактоферону, антитіл до
білкових антигенів сполучної тканини та мікробних
антигенів. Вивчено паралелізм у вмісті антистрептококових і антисполучнотканинних антитіл до та після
лікування.
Ключові слова: поліпозний риносинусит; місцевий, системний імунітет; антитіла; цитокіни, лактоферін.
It was studied the state of local and systemic humoral immunity in patients with polypous rhinosinusitis
before and after treatment in comparison with immunity
indices in healthy donors. It is recovered that safe dissoluble factors (secretory antibody A, γ-interferon, lactoferon) of the fauces secretion in patients have the tendency to decreasing and partly renovate after treatment.
In blood serum there is the 1 interleukin, γ -interferon
and laktoferon concentration increasing, antibodies to the
albumen antigens of compound tissue and microbe antigens. It is studied the parallelism in the antistreptococcic
and antitissueconnecting antibodies contents before and
after treatment.
В реализации рецидивирующего течения полипозного риносинусита многие авторы отдают предпочтение состоянию иммунных механизмов, определяющих взаимоотношение между микроорганизмами и специфическими и неспецифическими факторами
иммунитета [2, 5, 12]. Важнейшим компонентом этой сложной системы взаимоотношений является состояние гуморального
иммунитета, как местного, так и системного,
во многом определяющее эффективность
лечения при различных риносинуситах [7,
15, 19]. По современным взглядам, оценка
гуморального иммунитета включает уровни
иммуноглобулинов различных классов, ан-
тител к микроорганизмам и их антигенам, а
также к собственным тканям, концентрацию
цитокинов различной направленности, ферментов и продефенсинов [4, 6, 24].
В настоящем сообщении представлены результаты сравнительного изучения
уровней некоторых цитокинов, антител к
микробным и тканевым антигенам, иммуноглобулинов различных классов и лактоферрина в сыворотке крови и ротоглоточном секрете больных хроническими полипозными риносинуситами до и после комбинированной терапии, а также указанных
гуморальных факторов иммунитета в сыворотке здоровых лиц.
Ринологія, №2, 2006
Key words: pulpous rhinosinusitis; local, systemic
immunity; antibodies; cytokines; laktoferron.
11
ПРОБЛЕМИ ДІАГНОСТИКИ ТА ЛІКУВАННЯ
12
ных проведена с использованием критерия
«U» (Вилкоксонна-Манна-Уитни), согласно
рекомендаций Е.В. Гублера [3].
Результаты исследований
Исследование ротоглоточного секрета
у больных ХПР показало (рис. 1), что концентрация секреторного иммуноглобулина
класса А снижена, а мономерной формы
этого белка и IgG повышена. Проведенное
лечение достоверно снижало уровень мономерной формы IgА, повышало уровень
секреторной формы, не изменяя концентрацию IgG.
Уровень неспецифического защитного
Белка-лактоферрина в РС (рис. 2) после
проведенного лечения не имел достоверной
тенденции к увеличению, тогда как содержание γ- интерферона, также сниженное у
больных более, чем в 2,5 раза (рис. 3), достоверно повышалось, хотя не достигало
контрольных значений. Таким образом,
проведенные исследования местного иммунитета у больных ХПР свидетельствуют о
недостаточности как специфических (секреторный IgA), так неспецифических (лактоферрин) и регуляторно-защитных (γ-интерферон) факторов.
1,6
1,4
1,2
1
г/л
Материалы и методы
Обследовано 44 больных хроническим полипозным риносинуситом (ХПР) в
период рецидивирования роста полипов перед их удалением, из этой группы 28 человек в межрецидивном периоде после лечения, а также 22 здоровых донора. Возраст
обследованных был от 22 до 47 лет, в группе больных преобладали женщины (57%).
Всем пациентам с ХПР проводилась
полипэтмоидэктомия и последующая эндоназальная иммунизация бактериальной аутовакциной, как это было описано нами ранее [8]. Исследовали наиболее важные защитные факторы РС, такие как содержание
секреторной и мономерной форм иммуноглобулина А (метод радиальной иммунодиффузии, реактивы фирмы «Микрофлора»,
Россия), уровня лактоферрина и γ-интерферона (метод иммуноферментного анализа, реактивы фирм «Протеиновый контур» и
«Вектор-Бест», Россия). Ротоглоточный
секрет получали натощак в одно и тоже
время без очистки ротовой полости и зубов
и без стимуляции слюноотделения. Центрифугировали при 150 g в течение 10 мин
и в течение 5 ч проводили иммунологические исследования.
В сыворотке крови исследовали уровни лактоферрина и цитокинов: гамма-интерферона (γ-ИФН), интерлейкинов 1, 2, 6 методом ИФА с использованием реактивов
ООО «Протеиновый контур» (СПб, Россия)
и анализатора АИФ-0,1ц (Беларусь). Иммуноглобулины классов М, G, А исследовали
методом радиальной иммунодиффузии в
геле [9] с использованием моноспецифических сывороток производства НПО «Микроген» и ГНЦ «Клиническая иммунология»
(РФ). Антитела к антигенам клебсиеллы,
золотистого стафилококка определяли в реакции пассивной агглютинации (РПГА) с
использованием латекса, наборы ЛАТЕСТ
(Ин-тут иммунологии, Москва, РФ), уровень антистрептолизина-О (АСЛ-О) исследовали в реакции нейтрализации [18]. Антитела к соединительной ткани изучали
также в РПГА путем сорбции на тиннинизированных эритроцитах барана аллогенного антигена, полученного из соединительной ткани небных миндалин по Сole [16].
Статистическая обработка полученных дан-
0,8
0,6
0,4
0,2
0
sIgA
Контроль
IgA
ХПР до
IgG
ХПР после
Рис. 1. Содержание иммуноглобулинов в
ротоглоточном секрете больных ХПР до и после
лечения и у лиц контрольной группы
Ринологія, №2, 2006
9
8
7
мкг/мл
6
5
4
3
2
1
0
Контроль
ХПР до
ХПР после
Рис. 2. Содержание лактоферрина в ротоглоточном секрете обследованных лиц
35
30
пкг/мл
25
20
15
10
5
0
Контроль
ХПР до
ХПР после
Рис. 3. Концентрация γ-интерферона в РС
обследованных больных
Проведенные исследования подкрепляют мнение о том, что после удаления полипов из полости носа и околоносовых пазух необходимо проведение мероприятий,
способствующих восстановлению локального иммунитета слизистой верхних дыхательных путей, снижению уровня микробного фактора [5, 14].
При исследовании гуморальных цитокиновых факторов иммунитета сыворотки
больных ХПР было установлено, что концентрация ИЛ1β и γ-интерферона была более высокой, чем у лиц контрольной группы, тогда как уровень интерлейкинов 2 и 6
был таким же, как у лиц контрольной группы. Концентрация лактоферрина в сыворотке больных до лечения была достоверно более высокой, чем у лиц контрольной группы. Комбинированное лечение не влияло на
содержание интерлейкинов 2 и 6, γинтерферона, нормализовало содержание
интерлейкина 1 и лактоферрина (табл.).
При исследовании уровня иммуноглобулинов было установлено их повышенное
содержание в классах М и G у больных ХПР
(рис. 4) и снижение IgM до уровня нормы
после проведенного лечения.
Титры антител к микробным антигенам золотистого стафилококка (протеин А),
клебсиеллы (протеогликаны), гемолитического стрептококка (стрептолизин-О) были
повышенными во всех группах (рис. 5).
Комбинированная терапия достоверно снижала титры антител к протеогликанам клебсиеллы и стрептолизину-О. На этом же рисунке представлены данные по содержанию
антител к антигенам соединительной ткани,
и динамика изменений их титра полностью
соответствует таковому по стрептолизину-О
(рис. 6).
Содержание лактоферрина и цитокинов в сыворотке крови обследованных лиц
Группы
Контроль
ХПР до
ХПР после
ИЛ-1 (пкг/мл)
ИЛ-2 (пкг/мл)
ИЛ-6 (пкг/мл)
γ-интерферон
(пкг/мл)
Лактоферрин
мкг/мл
40 (20-61)
82,5* (10-390)
55,5 (40-105)
2,5 (1-3,5)
3,3 (1-4)
3,3 (1-4)
2,1 (1-3)
2,5 (1-3)
2,7 (0,7-4)
30,5 (15-400)
79,5* (35-100)
41,5 (18-60)
1,2 (0,5-3)
3,7* (2-5,5)
1,1 (0,9-3)
Примечание: * - статистически значимо по отношению к контролю (р<0,05).
Ринологія, №2, 2006
13
ПРОБЛЕМИ ДІАГНОСТИКИ ТА ЛІКУВАННЯ
18
16
14
12
г/л
10
8
6
4
2
0
IgM
Контроль
IgG
ХПР до
IgA
ХПР после
можно
рассматривать
как
защитноприспособительные реакции системного
иммунитета [1, 4, 20]. Повышение уровня
лактоферрина и интерлейкина 1β в сыворотке свидетельствует о достаточно напряженных процессах иммунных и воспалительных реакций [13, 17] и коррелирует с
повышенным уровнем антител к микробным антигенам. Одновременное повышенное содержание антител к антигенам аллогенной соединительной ткани подкрепляет
мнение, высказанное ранее [2], о возможной
патогенетической связи между реакцией
организма на микробные и аутотканевые
антигены, обусловливающей рецидивы в
течении полипозного риносинусита.
Рис. 4. Иммуноглобулиновый спектр сыворотки
крови больных ХПР и лиц контрольной группы
(классы М, G, А).
7
Логарифм (2) титра
антител
10
Логарифм (2) титра антител
9
8
7
6
5
4
5
4
3
2
1
0
Cole
ХПР до
3
АСЛ-0
ХПР после
Контроль
2
1
АСЛ-0
0
Стафилококк
Клебсиелла
Контроль
Стрептококк
ХПР до
Cole
Cole
Хпр после
Рис. 5. Содержание антител к микробным и
соединительнотканному (Сole) антигенам в сыворотке крови обследованных.
Результаты проведенных исследований сыворотки крови больных ХПР свидетельствуют о том, что у больных полипозным риносинуситом имеются отклонения в
содержании цитокинов, иммуноглобулинов,
антител к микробным и тканевым антигенам, которые, с современной точки зрения,
14
6
Рис. 6. Профиль изменений в содержании
антистрептококковых и антитканевых антител у
больных ХПР до и после лечения
Полученные нами данные о параллельном снижении под влиянием комбинированной терапии титров антител к стрептолизину-О и антигенам соединительной
ткани при одновременной нормализации
маркеров острого воспаления (лактоферрин
и интерлейкин-1) являются доказательством
реальности иммунопатологического механизма рецидивирования полипов.
Ринологія, №2, 2006
1.
Азнабаева Л.Ф., Н.А. Арефьева, А.Х. Салахова
Продукция цитокинов клетками иммунной
системы у больных различными формами
хронического риносинуита // Вестн. отоларингологии. - 2001. - №2. - С. 8-12.
2. Безбах Д.І. Імунологічні зміни в генезі поліпозного риносинуїту та методи їх корекції:
Автореф. дис. канд. мед. - Київ, 2002. - 158 с.
3. Гублер Е.В. Математические методы анализа
и распознавания патологических процессов. Л.: Медицина, 1978. - 294 с.
4. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и
аллергология. - Киев: Полиграф-Плюс. - 2006.
– 481 с.
5. Заболотный Д.И., Мельников О.Ф., Безбах
Д.И., Сидоренко Т.В. Типа аллергических реакций на различные микробные и аутканевые
антигены у больных полипозным риносинуитом // Журн. вушних, носових і горлових хвороб. - 2001. - №3. - С. 204-206.
6. Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунная недостаточность. - М.: Мед. книга, 2003. - 442 с.
7. Козлов В.С. Роль и значение интраназальных
кортикостероидов в лечении риносинуитов //
Рос. ринология. - 2003. - №3. - С. 20-24.
8. Лупырь А.В., Заболотный Д.И., Мельников
О.Ф. гуморальные факторы иммунитета секрета из ротовой части глотки у больных полипозным риносинуитом при различных схемах
послеоперационного лечения // Ринологія. 2005. - №4. - С. 42-46.
9. Мельников О.Ф., Кобицкий М.М.,Казанец
И.В., Кунах Т.Г., Калуцкий И.В., Бондарчук
А.В. Определение иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии в зоне низких концентраций // Імунологія та алергологія.
- 2003. - №3. - С. 13-15.
10. 10. Melnikov O.F., Zabolotny D.I. Concept of
diagnosing secondary immunodeficiency states
based on determination immunoglobulins in secretions // Proc. of the 2 world cpngress of im-
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
munopathology & respiratory allergy. - 2004,
Moscow, 14-17 May. - abstr. 33.
11.Останин А.А., Черных Е.Р. Сравнительная
оценка уровня 17 цитокинов в сыворотке и
цельной крови здоровых доноров методом
проточной цитофлюорометрии // Цитокины и
воспаление. - 2005. - Т.4. - №2. - С. 25-29.
Рязанцев С.В. Этиопатогенетическая теория
полипозных риносинуитов // Рос. ринология. 1999. - №1. - С. 21-23.
Трунов А.Н., Кудрявцева И.В. К вопросу о
диагностической ценности лактоферрина //
ИБ-Новости Вектор-Бест. - Лактоферрин. 2000. - Вып. 2. - С. 1-3.
Филатов С.В. Клинические аспекты повышения эффективности лечения хронических полипозных этмоидитов // Журн. вушних, носових і горлових хвороб. - 2004. - №3с. - С. 9395.
Хмельницкая Н.М., Рязанцев С.В., Кокряков
В.Н., Воробьев К.В., Алешина Г.М. и др.
Оценка иммунного статуса слизистых оболочек при хроническом риносинуите // Вестн.
оториноларингологии. - 1998. - №4. - С. 47-49.
Яковенко В.Д. Эксперимантально- клиническое обоснование аллергодиагностики хронического тонзиллита: Автореф. дис. ... канд.
мед. наук. – Киев, 1985. - 26 с.
Cogos C.A., Drosou E., Bassaris H.P., Scoutelis
A. Proversus antiinflammatory cytokine profiles
in pathients with severe sepsis // J.Infect. Dis. 2000. - V.181. - N1. - P. 176-180.
Kabat A.,Meyer V. Экспериментальная иммунохимия. - М.: Мир, 1968. - 556 с.
Meltzer E. Intranasal cjrticosteroids in the treatment of rhinisinusitis // Fam. Prac. Recert. - 2002.
- V.24, №1. - P. 26-32.
Virant F.S. Mechanism of chronic rhinosinusitis:
how cells, cytokines & mediatirs create clinical
disease // 56th manual meeting of American Academy of Allergy. - San-Diego. - 2000. - absr. 32.
Поступила в редакцию 21.08.06.
© Д.И. Заболотный, А.В. Лупырь, О.Ф. Мельников, 2006
Ринологія, №2, 2006
15
Скачать