VAXXITEK® HVT+IBD векторная вакцина, разработанная

VAXXITEK® HVT+IBD
векторная вакцина, разработанная для контроля
болезни Марека и болезни Гамборо по всему миру
Michel Bublot
Сербия, 10 сентября 2013 г
Фабрициева сумка
 Фабрициева сумка:
(Jeurissen et al., 1994; Poultry Sci Review 5:183; Davison, Kaspers,
Schat & Kaiser (2008) Avian Immunology; Academic press)
 Первичный лимфоидный орган:
 Стволовые клетки лимфоцитов  зрелые B-лимфоциты
(разнообразие антител)
 Вторичный лимфоидный орган:
 B-лимфоциты  плазмоциты  антитела
 Инволюция начинается с 8-10 недели  6-7 месяцев
Инфекционная бурсальная болезнь
 “ИББ – одно из наиболее экономически значимых
заболеваний птицы, которое поражает коммерческое
птицеводство по всему миру”

Source: B. Delmas
(Müller et al., 2012; Avian Pathol. 41:133)
 Вирус ИББ реплицируется в:

(Müller et al., 1979; Zentralbl Veterinarmed B. 26:345)
 макрофагах, ассоциированных с тканями
кишечника
 пролиферирующих В-лимфоцитах бурсы
Стволовые клетки лимфоцитов  зрелые В-клетки
(разнообразие антител )
Source: B. Delmas
Эволюция полевых штаммов вируса ИББ
Классические
вирулентные
(F52/70)
Высоковирулентные
Антигенные
варианты
Контроль ИББ с использованием классических
вакцин
Горячие
Иммунокомплекс
Средние
Мягкие
Ограниченность классических вакцин против
ИББ
Дилемма ЭФФЕКТИВНОСТЬ/БЕЗОПАСНОСТЬ
Потребность
мягкие
+
в новой
Безопасность
вакцине
средние
средние +/горячие
-
Эффективность в
присутствии материнских
антител
+
Недостатки классических вакцин против ИББ:
 Сложности пероральной
вакцинации

Иммунодепрессия (горячие/
средние + штаммы, включая
иммунокомплекс)
 Иммунный провал
Zootechnica international
Почему HVT выбран в качестве вектора?
- Вектор на основе вируса оспы птиц
оказался неэффективным
- Является вакциной против болезни
Марека с 1971
- Проверенная практикой безопасность
- Нет передачи от цыпленка цыпленку
- Введение вакцины в инкубатории: in ovo
или в суточном возрасте
- Одна инъекция индуцирует пожизненный
иммунитет
- Слабая чувствительность к материнским
антителам
- Лимфотропный/системный вирус
Геном вируса ИББ
bp
0
5’
2000
1000
3000
Source: B. Delmas
VP2 = Поверхностный белок
капсида
Сегмент A
3’
VP5
VP2
VP4
Arg-Arg
5’
Сермент B
VP3
Lys-Arg
3’
VP1
Source: B. Delmas
Кассета для экспрессии VP2
TRL
L P N1 E
BamHI (1)
UL
D
R
B
N2 H
SphI (973)
C
IRL IRS US TRS
QK1MK2 J
SphI (3285)
G
I
F O
StyI (4757)
A
StyI (4905)
vHVT13
=
polyA
IBDV VP2
promoter
Faragher 52/70
Экспрессирующая кассета
HVT+IBD
O
BamHI
map
BamHI
(5833)
История разработки
HVT+IBD
Исследования
Разработка

1995: 1ая публикация – Darteil et al.,

1992-1996: vHVT001  vHVT013

1997-2001: более 120 исследований

2002: 1 разрешение для выведения на рынок в ЕС
Virology 211, 481-490
(подкожное введение)
Более 10 лет научноисследовательских работ прежде,
чем вывести вакцину на рынок
Клеточно-ассоциированная
вакцина HVT
~ 100X
Цитопатический эффект
~1X
Клеточная культура в
роллерных бутылях
~100 000X
Электронная
микроскопия
Репликация VAXXITEK in vitro
Ген VP2
ядро
цитоплазма
Ген HVT
CEF cells
Белок VP2
Антитела к VP2
вируса ИББ
VP2 экспрессируется в
инфицированных Vaxxitek
клетках (CEF)
97 KDa
VP2
66 KDa
39.2 KDa
VP2
26.6 KDa
20.1 KDa
Иммунопреципитация
Иммуноблотинг
MW vHVT13 HVT
12.5 KDa
F52/70 849VB BacVPX MW
HVT
антитела к HVT
Двойная иммунофлуоресценция
И VAXXITEK HVT + IBD … «родился»!
Живая векторная вакцина
Ген VP2
Ген HVT
Нейтрализующие
антитела
VP2 белок
Иммунитет
•Гуморальный
•Клеточный
Против болезни Марека
Против ИББ
Решает ли она
3 проблемы
живых вакцин
против ИББ?
Вакцинация в инкубатории
 Автоматически in ovo
 Полуавтоматические
подкожные инъекции в
суточном возрасте
 Accuvac
Превосходная безопасность VAXXITEK для бройлеров
• Бройлеры без материнских антител к ИББ
• Живые – перорально на 14 день жизни;
Иммунокомплекс in ovo; VXTK in ovo и п/к
• Баллы по результатам гистопатологии: 1 - 4
• Степень поражения в баллах на 21 день :
3 балла
1 балл - норма
HVT+IBD
мягкие, средние, горячие, иммунокомплекс
Высоковирулентные вирусы ИББ (vvIBD)
Эффективность на СПФ-цыплятах
100
100
Защита (%)
100
Вакц.
Контроль
80
вакцинированные
60
40
20
(10/16 пало)
(18/20 пало)
6*
0
0 1е заражение
(2 нед после вакцинации)
2е заражение
(8 нед. после вакцинации)
*1/5 выживших птиц с поражением бурсы в 2 балла
контрольные
Полная защита СПФ цыплят против vvIBDV
M. Bublot - Vectored-IBD vaccine
Эффективность для бройлеров
(подкожное введение)
VAXXITEK
Контроли
2,5
100
90
80
2
70
60
1,5
50
40
1
30
20
0,5
10
0
D7
D14
Vaxxitek
D21
Challenge Controls
Заражение классическим ИББ
0
D7
D14
Vaxxitek
D21
Challenge Controls
Заражение вариантами ИББ США
100
90
80
70
•Ранняя защита
60
50
40
30
20
10
0
D21
D42
Vaxxitek
Challenge Controls
Заражение vvIBD
•Широкий спектр
защиты
•Длительная защита
Широкий спектр защиты
 Эффективность против всех штаммов вируса ИББ
F52/70
STD
F 91168
I 77165
CA 2009
Азия
Африка
Латинская Америка
Del-E; Ph-B24;
AL-2; AL-10;
AVS-EL;
 35 млрд доз Vaxxitek использовано в 73 странах
Эффективность при вакцинации бройлеров на производстве
•Цель: Сравнить эффективность классических средних
вакцин против ИББ и вакцины VAXXITEK в производственных
условиях против заражения vvIBDV
(Vaccine, vol 27 n°4, 22 January 2009, 592-596)
• Производство: ИФА и отношение масса бурсы/масса тела
• Лаборатория: заражение vvIBDV* на день 30
Группа
Вакцинация
D0
D17
D24
Ферма A
Vaxxitek п/к
-
-
Ферма B
-
средн. DW
Средн. DW
* vvIBDV 77165 (IZS Forli- Italy; Av Dis 2007, 51(4), 863-72)
Мониторинг антител к VAXXITEK на производстве
Классический ИФА
ИФА Synbiotics IBD+
BROILERS
ProFLOK® Plus IBD Ab test
BROILERS
ProFLOK® IBD Ab test
8000
Interm.
6000
4000
Vaxxitek
2000
0
Mean ELISA titer
Mean ELISA titer
Vaxxitek
12000
10000
10000
8000
6000
4000
2000
Interm.
0
day 1
day 17
day 26
day 45
day 56
Intermediate IBDV vaccine on day 17 and day 24
Vaxxitek SC on day 1
Антитела против белка VP3
вируса ИББ
day 1
day 17
day 26
day 45
day 56
Intermediate IBDV vaccine on day 17 and day 24
Vaxxitek SC on day 1
Антитела против белка VP2
вируса ИББ
Антитела, индуцированные VAXXITEK,
выявляемые специальным набором ИФА IBD+
* PROFLOK is a registered trademark of Synbiotics Corporation in United States of America and elsewhere.
Коммерческие бройлеры на производстве– масса бурсы
Bursa/body weight ratio (*1000)
3,5
3
2,5
2
farm A
farm B
1,5
1
A: Vaxxitek D0
(инкубаторий)
B: средние живые
аттенуированные D17/D24
0,5
0
17
26
45
age (days)
Отношение масса бурсы/масса тела на 45 день гораздо
выше у цыплят, вакцинированных VAXXITEK
Le Gros et al. Vaccine, vol 27 n°4, 22 January 2009, 592-596
Защита против экспериментального заражения vvIBD
в лаборатории
Source: Merial
Незараженный контроль
Source: Merial
Зараженный контроль
HVT+IBD
93%
Source: Merial
A: Vaxxitek HVT+IBD
6%
Source: Merial
B: Классическая вакцина
Мониторинг антител к VAXXITEK на производстве
BROILERS
ProFLOK® Plus IBD Ab test
Mean ELISA titer
12000
Vaxxitek
заражение
10000
8000
6000
4000
2000
Средняя .
Иммунный
провал
0
day 1
day 17
day 26
day 45
day 56
Intermediate IBDV vaccine on day 17 and day 24
Vaxxitek SC on day 1
Иммунный провал отсутствует у
птицы, вакцинированной VAXXITEK
Коммерческие несушки + vvIBD
Группа
Вакцина
Выбор
времени
Заражение
Д42
Клинические
признаки(†)
1
Средняя A
D17 & D25
да
2/15 (2)
2
Средняя B
D17 & D25
да
2/15 (2)
3
Средняя + C
D17
да
2/15 (1)
4
Vaxxitek
D1
да
0/15 (0)
5
-
-
да
15/15 (2)
6
-
нет
Bursal/Body weight ratio
0/15 (0)
Только
VAXXITEK
обеспечил
защиту против
vvIBD
P. Masi, IZS Forli, Italy, Zootecnica 50, nov 08
Коммерческие несушки + vvIBD
ИФА PROFLOCK Plus IBD
Иммунный
провал
Только VAXXITEK был способен
индуцировать антитела к VP2 до
заражения на 42 день
P. Masi, IZS Forli, Italy, Zootecnica 50, nov 08
Вакцина против ИББ на основе иммунокомплекса (Icx)
• Разработана для введения в суточном возрасте или in ovo (Sharma , середина
-80х)
• Средний + (Winterfield 2512) штамм должен быть эффективным для
птицы с материнскими антителами
• Добавлены антитела для усиления безопасности: в «оптимальной»
концентрации
• День 9: отсутствие поражений бурсы БЕЗОПАСНОСТЬ
• День 21: наличие поражений бурсы ЭФФЕКТИВНОСТЬ
• Лицензия USDA в 1995
• Антитела Icx и материнские ат снижают репликацию W2512 в бурсе
• Но :
• Поражение бурсы необходимо для эффективности  слабая
безопасность
• Существует ли иммунный провал?
Иммунокомплекс и Vaxxitek
12000
BROILERS
ProFLOK® Plus IBD Ab test
Mean ELISA titer
10000
8000
6000
4000
Immunity
gap
2000
0
day 1
day 21
Immune complex IBDV vaccine in ovo
day 42
Vaxxitek in ovo
Векторная вакцина
на основе HVT:
• Постоянное
производство белка
VP2
• Более ранняя
индукция
протективных
антител
Иммунокомплекс:
• 1ое - репликация в
бурсе
• 2ое - индукция
антител
Prandini et al. (2008; Zootecnica, Sept 2008)
Совершенствование вакцин против ИББ
Классические Иммунокомплекс HVT векторная
ИББ
1995
вакцина
1970s
2006
Введение в
инкубатории
-
+
+
Безопасность
-
-
+
Отсутствие иммунного
провала
-
-
+
Значительное улучшение наступило с векторной вакциной на
основе HVT
Как VAXXITEK избегает интерференции с материнскими
антителами к вирусу ИББ?

Вакцина = замороженные инфицированные клетки

Клеточно-ассоциированный HVT мало чувствителен к
материнским антителам против болезни Марека
6

Белок VP2 находится в цитоплазме
5
IBD SN Titre (log10)

HVT персистирует в организме
вакцинированного хозяина
4
3
2
1
0
0
4
8
12
16
20
24
28
32
36
Age (weeks)
Клетки, инфицированные VAXXITEK=vHVT13
Живая аттенуированная
вакцина против ИББ
VP2
Ядро
vHVT13
МАТ
цитоплазма
МАТ
Source: B. Delmas
40
44
48
52
56
60
6
Эффективность VAXXITEK против болезни Марека для
СПФ-цыплят против vvMD
● Д0: вакцинация (30 СПФ-цыплят в группе)
● Д9 : Заражение vvMDV RB1B
(интраперитонеально)
● Д79 : Вскрытие
Положительные
по БМ
Невакцинированные
Вакцина
28/30
NA
Vaxxitek (п/к)
7/29
74.1%*
HVT (п/к)
6/30
78.6%
*: 93% при тех же условиях заражения, в ассоциации с CVI988
Защита против болезни Марека такая же, как у
HVT. Совместимость с Rispens
Ключевые факторы успеха
 Транспортировка и хранение вакцины
Source: Merial
 Подготовка вакцины
 Совместимость с Rispens
 Не совместима с HVT и другими HVT-векторамиs
Source: Merial
 Введение вакцины

1 пропущенная при вакцинации птица= 1
незащищенная птица
 Полная доза
Source: Merial
 Здоровье цыплят
Source: Merial
 Анемия кур
 Стресс, корма, …
Source: Merial
Вектор HVT для ньюкаслской болезни

Morgan et al. (1992) Avian Dis. 36:858
 БЕЗОПАСНОСТЬ: великолепная
 ЭФФЕКТИВНОСТЬ:
 Слабая местная защита
 Медленное начало: 4 недели
 Необходимость живой вакциы: инкубаторий +птичник
 Защищает ли живая+HVT-ND лучше, чем
живая+инактивированная?
Вакцина
Защита на 8 день
после вакцинации
Защита на 22 день
после вакцинации
Защита на 63 день
после вакцинации
HVT-ND
30%
65%
100%
HVT-ND + живая ND
100%
100%
100%
живая ND
100%
80%
40%
Контроль
60%
0%
10%
Hein et al. (2008) 8th Intl MD meeting, Townsville, Australia
Эффективность против ньюкаслской болезни на
бройлерах: сравнение HVT-ND и инактивированной (п/к)
•
•
•
Суточные цыплята-бройлеры (JA957)
Д0: вакцинация
Д7 и Д14: заражение, штамм Chimalhuacan (Mexico, генотип V)
Вакц.1
Вакц 2
(ороназально) (п/к)
Д7 Зараж. Д14 Зараж.
Защита
Защита
Shed.
D5
Shed.
D7
Shed.
D9
AVINEW
Gall-ND
DO
0%
100%
0/10
2/10
0/10
AVINEW
HVT-ND
0%
78%
6/8
7/8
4/8
Live 2
HVT-ND
0%
80%
-
-
-
AVINEW
-
20%
89%
-
-
-
-
-
0%
0%
-
-
-
Ранняя защита на более низком уровне в группе
HVT-ND+живая, чем в группе инактив.+живая
Сравнение HVT-IBD и HVT-ND
Замещение живой
вакцины
Адекватный
иммунитет
Решение лучше,
чем классические
вакцины
HVT-ND
HVT-IBD
НЕТ
ДА
Живая вакцина необходима
НЕТ
Нет местного иммунитета,
Низкий уровень гуморального
иммунитета
ДА
НЕТ
живая+инактивированная ND
индуцирует более широкий
спектр иммунитета (антитела)
ДА
Заключение – Vaxxitek HVT+IBD
Безопасность
« мягкие »
vHVT13
« средние »
HVT+IBD
« горячие »
 Вакцина “High Tech”
Эффективность
 Вакцинация в инкубатории: 1 инъекция
 Единственная вакцина против ИББ, которая:
 БЕЗОПАСНА: отсутствуют поражение бурсы и
иммуносупрессия
 ЭФФЕКТИВНА: отсутствует иммунный провал
 Полностью замещает классические вакцины
Спасибо за
внимание!
Acknowledgements
MERIAL R&D
(N. Pritchard & F.-X Le Gros)
MERIAL Tech. Services (S. Lemiere, F. Prandini, E. Montiel, M. Lee)
Numerous external collaborators worldwide
Командная работа для решения
ваших проблем!