влияние пиримидинов биджинелли на продукцию

Реклама
2010
ÖÈÒÎËÎÃÈß
Ò î ì 52, ¹ 3
ÂËÈßÍÈÅ ÏÈÐÈÌÈÄÈÍΠÁÈÄÆÈÍÅËËÈ ÍÀ ÏÐÎÄÓÊÖÈÞ
ÀÊÒÈÂÍÛÕ ÔÎÐÌ ÊÈÑËÎÐÎÄÀ ÏÎËÈÌÎÐÔÍÎßÄÅÐÍÛÌÈ ËÅÉÊÎÖÈÒÀÌÈ
© Þ. Â. Øàòàëèí,1, 2,* Â. Ñ. Øóáèíà,1, 2 À. Ñ. Ôèñþê3
2
1 Ïóùèíñêèé ãîñóäàðñòâåííûé óíèâåðñèòåò,
Èíñòèòóò òåîðåòè÷åñêîé è ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîôèçèêè ÐÀÍ, Ïóùèíî,
è 3 Îìñêèé ãîñóäàðñòâåííûé óíèâåðñèòåò èì. Ô. Ì. Äîñòîåâñêîãî;
* ýëåêòðîííûé àäðåñ: [email protected]
Þ. Â. Øàòàëèí, Â. Ñ. Øóáèíà, À. Ñ. Ôèñþê
Èññëåäîâàíî âëèÿíèå 6 ñèíòåòè÷åñêèõ ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè íà ïðîäóêöèþ àêòèâíûõ ôîðì
êèñëîðîäà (ÀÔÊ) ïîëèìîðôíîÿäåðíûìè ëåéêîöèòàìè. Ìåòîäîì ëþìèíîëçàâèñèìîé õåìèëþìèíåñöåíöèè ïîêàçàíî, ÷òî èññëåäóåìûå ñîåäèíåíèÿ â êîíöåíòðàöèè 10—100 ìêÌ ñòèìóëèðóþò ïðîäóêöèþ íåéòðîôèëàìè ÀÔÊ. Ïðîäóêöèÿ ÀÔÊ ñòèìóëèðîâàííûìè ÔÌÀ íåéòðîôèëàìè â ïðèñóòñòâèè 10 ìêÌ
1-(3,4-äèìåòîêñèôåíèëýòèë)-4-(àëêèë/àðèë) çàìåùåííûõ ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè óâåëè÷èâàåòñÿ íà
50—90 %. Ïîêàçàíî óâåëè÷åíèå ïðàéìèðóþùåãî âëèÿíèÿ ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè íà ïðîäóêöèþ
ÀÔÊ íåéòðîôèëàìè ïðè çàìåíå ôóðèëüíîãî ðàäèêàëà íà ôåíèëüíûé è èçîïðîïèëüíûé çàìåñòèòåëè ïðè
Ñ(4) ïèðèìèäèíîâîãî öèêëà è çàìåíå áåíçèëüíîãî çàìåñòèòåëÿ ïðè N(1) íà 3, 4-äèìåòîêñèôåíèëýòèëüíûé. Óñòàíîâëåíà âûñîêàÿ èíãèáèðóþùàÿ àêòèâíîñòü 1-(3, 4-äèìåòîêñèôåíèëýòèë)-4-(àëêèë/àðèë) çàìåùåííûõ ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè â êîíöåíòðàöèè 0.01—0.10 ìêÌ. Îáíàðóæåíî, ÷òî 1-(2-[3,4-äèìåòîêñèôåíèë]-ýòèë)-4-ôåíèë-5-êàðáýòîêñè-6-ìåòèë-3, 4-äèãèäðî-2(1H)-ïèðèìèäèíòèîí ïðè âûñîêèõ êîíöåíòðàöèÿõ (1 ìÌ è áîëåå) ñïîñîáåí âûçûâàòü ðåñïèðàòîðíûé âçðûâ íåéòðîôèëîâ áåç äîïîëíèòåëüíîé
ñòèìóëÿöèè.
Âëèÿíèå ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè íà ïðîäóêöèþ ÀÔÊ ïîëèìîðôíîÿäåðíûìè ëåéêîöèòàìè
Ê ë þ ÷ å â û å ñ ë î â à: íåéòðîôèëû, ïðîäóêöèÿ àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà, ïèðèìèäèíû Áèäæèíåëëè, ïóðèíîâûå (ïèðèìèäèíîâûå) ðåöåïòîðû.
Ï ð è í ÿ ò û å ñ î ê ð à ù å í è ÿ: ÀÔÊ — àêòèâíûå ôîðìû êèñëîðîäà; ÔÌÀ — ôîðáîë-12-ìåðèñòàò-13-àöåòàò; ËÕË — ëþìèíîëçàâèñèìàÿ õåìèëþìèíåñöåíöèÿ; DHPM — ïèðèìèäèíòèîí, ïèðèìèäèí
Áèäæèíåëëè (dihydropyrimidine).
â ïðîöåññå ïîëÿðèçàöèè íåéòðîôèëà â îòâåò íà ÷óæåðîäíûé àíòèãåí íàáëþäàåòñÿ ïåðåðàñïðåäåëåíèå ðåöåïòîðîâ
ïóðèíîâîãî (ïèðèìèäèíîâîãî) ðÿäà íà ïîâåðõíîñòè ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû (Junger, 2008).
Ðåöåïòîðû A3 ðàñïîëàãàþòñÿ ïðåæäå âñåãî âî âíóòðèêëåòî÷íûõ äåïî, ãäå îíè, ïî-âèäèìîìó, ñâÿçûâàþòñÿ ñ
ãðàíóëàìè. Ïðè âîçáóæäåíèè êëåòêè õåìîàòòðàêòàíòîì
íàáëþäàþòñÿ ïîëÿðèçàöèÿ êëåòêè è áûñòðàÿ ìîáèëèçàöèÿ
ðåöåïòîðîâ A3 íà ïåðåäíåì êðàå ïîâåðõíîñòè íåéòðîôèëà
(Chen et al., 2006). Íàïðîòèâ, ðåöåïòîðû A2a îäíîðîäíî
ðàñïðåäåëåíû ïî âñåé ïîâåðõíîñòè êëåòêè è ïðè ïîëÿðèçàöèè êëåòêè ýòî ðàñïðåäåëåíèå íå èçìåíÿåòñÿ. Ïðåäïîëàãàåòñÿ, ÷òî äåéñòâèå ðåöåïòîðîâ A2a íàïðàâëåíî íà ïîäàâëåíèå ôîðìèðîâàíèÿ ïñåâäîïîäèé ïî âñåé ïîâåðõíîñòè êëåòêè, êðîìå ïåðåäíåãî êðàÿ, ãäå ðåöåïòîðû A3
ïðîòèâîäåéñòâóþò ïîäàâëÿþùåìó äåéñòâèþ ðåöåïòîðîâ
A2a (Junger, 2008). Òàêèì îáðàçîì, âîçìîæíî, ÷òî ðåöåïòîðû A2a ìîãóò èãðàòü ðîëü â óñèëåíèè ñèãíàëîâ, ïîäàâëÿÿ äåéñòâèå Fc-ðåöåïòîðà, ñèãíàëèçèðóþùåãî â íàèáîëåå óäàëåííîé îò ïåðåäíåãî êðàÿ ÷àñòè ìåìáðàíû êëåòêè.
Ñîâìåñòíàÿ ðàáîòà ðåöåïòîðîâ A2a è A3 ðåàëèçóåòñÿ ïîñðåäñòâîì áîëüøîãî ðàçëè÷èÿ â àôôèííîñòè ëèãàíäîâ ê
äàííûì ðåöåïòîðàì. Òàê, íàïðèìåð, ðåöåïòîðû A2a íà íåñêîëüêî ïîðÿäêîâ áîëåå ÷óâñòâèòåëüíû ê àäåíîçèíó, ÷åì
ðåöåïòîðû A3 (Ralevic et al., 1998), ÷òî ãîâîðèò î âîçìîæ-
Íà ïðîòÿæåíèè ìíîãèõ ëåò ïðîèçâîäíûå ïèðèìèäèíà
ðàññìàòðèâàþòñÿ êàê ïîòåíöèàëüíûå áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûå âåùåñòâà. Ýòî ñâÿçàíî ñ øèðîêèì ñïåêòðîì áèîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ, êîòîðûå ïðîÿâëÿþò ñîåäèíåíèÿ
äàííîãî êëàññà, âêëþ÷àÿ àíòèâèðóñíóþ, ïðîòèâîîïóõîëåâóþ, àíòèáàêòåðèàëüíóþ è ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíóþ àêòèâíîñòè (Kappe, 2000; Huang et al., 2005). Íàèáîëåå ïåðñïåêòèâíûì ñïîñîáîì ïîëó÷åíèÿ ïðîèçâîäíûõ ïèðèìèäèíîâ ÿâëÿþòñÿ ðàçëè÷íûå ìîäèôèêàöèè ñèíòåçà
Áèäæèíåëëè, â õîäå êîòîðîãî ïîëó÷àþò ïèðèìèäèíîíû è
ïèðèìèäèíòèîíû ðàçëè÷íîãî ñîñòàâà, íàçûâàåìûå ïî
ñïîñîáó èõ ïîëó÷åíèÿ ïèðèìèäèíàìè Áèäæèíåëëè (Âäîâèíà, 2008). Íåäàâíèå èññëåäîâàíèÿ ïðîèçâîäíûõ ïèðèìèäèíà ïîêàçàëè, ÷òî äàííûå ñîåäèíåíèÿ ñïîñîáíû óñèëèâàòü îáðàçîâàíèå àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà (ÀÔÊ) â
óñëîâèÿõ îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà (Sajewicz, 2007), ñîïðîâîæäàþùåãî öåëûé ðÿä ïàòîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèé, òàêèõ
êàê âîñïàëåíèå, êàíöåðîãåíåç è äð. (Sies, 1991; Çåíêîâ è
äð., 2001).
Õîðîøî èçâåñòíî, ÷òî ôàãîöèòèðóþùèì êëåòêàì ïðèíàäëåæèò âàæíàÿ ðîëü â èììóííîì îòâåòå íà ÷óæåðîäíûå
êëåòêè. Òåì íå ìåíåå îòêðûâàþòñÿ âñå íîâûå ôàêòû â èññëåäîâàíèè ìåõàíèçìîâ òàêèõ âàæíûõ ïðîöåññîâ, êàê õåìîòàêñèñ, ôàãîöèòîç, ãåíåðàöèÿ ÀÔÊ è äåãðàíóëÿöèÿ ñïåöèôè÷åñêèõ ãðàíóë íåéòðîôèëîâ. Íåäàâíî ïîêàçàíî, ÷òî
242
Âëèÿíèå ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè íà ïðîäóêöèþ ÀÔÊ ïîëèìîðôíîÿäåðíûìè ëåéêîöèòàìè
íîñòè äîçîçàâèñèìîãî ðåãóëèðîâàíèÿ ôóíêöèîíàëüíûõ
îòâåòîâ êëåòêè ïîñðåäñòâîì àêòèâàöèè (èíãèáèðîâàíèÿ)
äàííûõ ðåöåïòîðîâ.
Íåäàâíî áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ïðè àïïëèêàöèè íà Ìàóòíåðîâñêèå íåéðîíû çîëîòîé ðûáêè ñîåäèíåíèÿ 1-(2-[3, 4äèìåòîêñèôåíèë]-ýòèë)-4-ôåíèë-5-êàðáýòîêñè-6-ìåòèë-3,
4-äèãèäðî-2(1H)-ïèðèìèäèíòèîíà íàáëþäàþòñÿ óâåëè÷åíèå ðàçìåðîâ àêòèíñîäåðæàùèõ äåñìîñîìîïîäîáíûõ
êîíòàêòîâ, óâåëè÷åíèå ÷èñëà àêòèíîâûõ ìîñòèêîâ â
ùåëè äåñìîñîìîïîäîáíûõ êîíòàêòîâ è ïîÿâëåíèå ïó÷êîâ àêòèíîâûõ âîëîêîí â èõ öèòîïëàçìå (Ïàâëèê è äð.,
2007). Ýòè äàííûå âîøëè â îñíîâó íàñòîÿùåãî èññëåäîâàíèÿ âëèÿíèÿ ñèíòåòè÷åñêèõ 5-êàðáýòîêñè-3, 4-äèãèäðîïèðèìèäèí-2(1H)-òèîíîâ (ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè)
íà ÀÔÊ-ãåíåðèðóþùóþ àêòèâíîñòü ïîëèìîðôíîÿäåðíûõ ëåéêîöèòîâ.
Ìû èññëåäîâàëè èçìåíåíèå ïðîäóêöèè ÀÔÊ ñòèìóëèðîâàííûìè è íåñòèìóëèðîâàííûìè íåéòðîôèëàìè êðîâè â ïðèñóòñòâèè 6 ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè (ïèðèìèäèíòèîíîâ, DHPM) ñ ðàçëè÷íûìè çàìåñòèòåëÿìè â 1-ì è
4-ì ïîëîæåíèÿõ.
Ìàòåðèàë è ìåòîäèêà
Èñïîëüçîâàëè ñëåäóþùèå ð å à ê ò è â û : èçîáóòàíàëü,
áåíçàëüäåãèä, óêñóñíûé àëüäåãèä, ôóðôóðîë, 2-(3,4-äèìåòîêñèôåíèë)ýòèëàìèí, áåíçèëàìèí, äèìåòèëñóëüôîêñèä
(DMSO), NaCl, CaCl2, MgCl2 è ãëþêîçà (Ðåàõèì, Ðîññèÿ);
óðîãðàôèí (Schering, Ãåðìàíèÿ); HEPES, ëþìèíîë, äåêñòðàí-500, ôèêîëë-400 è çèìîçàí À (Sigma, ÑØÀ). Èç ôèêîëëà è óðîãðàôèíà ãîòîâèëè ñìåñü ñ ïëîòíîñòüþ 1.077.
Ñðåäà äëÿ ðåãèñòðàöèè ÀÔÊ ñîäåðæàëà 150 ìÌ NaCl,
5 ìÌ HEPES, 5 ìÌ ãëþêîçû, 1 ìÌ CaCl2 è 1 ìÌ MgCl2
(pH 7.4) ïðè 37 °Ñ. Äëÿ âûäåëåíèÿ è ñóñïåíäèðîâàíèÿ
êëåòîê èñïîëüçîâàëè àíàëîãè÷íóþ ñðåäó, íî ïðè pH 7.2.
Ñ è í ò å ç ï è ð è ì è ä è í î â Á è ä æ è í å ë ë è.  ëàáîðàòîðèè îðãàíè÷åñêîãî ñèíòåçà Îìñêîãî ãîñóäàðñòâåííîãî óíèâåðñèòåòà èì. Ô. Ì. Äîñòîåâñêîãî ñèíòåçèðîâàëè
6 çàìåùåííûõ ïèðèìèäèíîâ (DHPM) (ñòðóêòóðû ïðèâåäåíû íà ðèñ. 1). Èññëåäóåìûå DHPM ñèíòåçèðîâàëè ïî
ìîäèôèöèðîâàííîìó ìåòîäó ñèíòåçà Áèäæèíåëëè ñ èñïîëüçîâàíèåì ñîîòâåòñòâóþùèõ àëüäåãèäîâ (èçîáóòàíàëü,
áåíçàëüäåãèä, óêñóñíûé àëüäåãèä, ôóðôóðîë), àìèíîâ
(2-(3,4-äèìåòîêñèôåíèë)ýòèëàìèí, áåíçèëàìèí) è àöåòîóêñóñíîãî ýôèðà (Srinivas et al., 2004). Ñòðóêòóðû DHPM ïîäòâåðæäåíû äàííûìè ýëåìåíòíîãî àíàëèçà ñ ïîìîùüþ èíôðàêðàñíîé è ÿäåðíîìàãíèòíîé (H1 è Ñ13) ñïåêòðîñêîïèè.
Ä ë ÿ â û ä å ë å í è ÿ ê ë å ò î ê èñïîëüçîâàëè êðîâü çäîðîâûõ ñàìöîâ êðûñ ëèíèè Âèñòàð (íîðìàëüíûå íåéòðîôèëû) è êðûñ ñ èíäóöèðîâàííûì çèìîçàíîì À àñåïòè÷åñêèì
âîñïàëåíèåì (èíäóöèðîâàííûå íåéòðîôèëû). Êëåòêè èñïîëüçîâàëè â êîíöåíòðàöèè 1$106 êë./ìë. Àñåïòè÷åñêîå
âîñïàëåíèå âûçûâàëè ââåäåíèåì â áðþøíóþ ïîëîñòü æèâîòíîãî 0.5 ìë ðàñòâîðà çèìîçàíà A (5 ìã/ìë) åæåäíåâíî â
òå÷åíèå 7 ñóò (Doherty, 1985). ×åðåç 3 ñóò ïîñëå îêîí÷àíèÿ ââåäåíèÿ çèìîçàíà êðûñ çàáèâàëè ìåòîäîì äåêàïèòàöèè è îòáèðàëè êðîâü äëÿ âûäåëåíèÿ íåéòðîôèëîâ.
Ïîëèìîðôíîÿäåðíûå ëåéêîöèòû (ÏÌßË) âûäåëÿëè
èç öåëüíîé êðîâè ïî ñòàíäàðòíîìó ìåòîäó (Ëîáàøåâñêèé,
1983) : ãåïàðèíèçèðîâàííóþ êðîâü ïåðåìåøèâàëè â ñîîòíîøåíèè 5 : 1 c 9%-íûì ðàñòâîðîì äåêñòðàíà-500 â
0.15 Ì NaCl è âûäåðæèâàëè â òå÷åíèå 60 ìèí ïðè 37 °Ñ
äëÿ ñåäèìåíòàöèè ýðèòðîöèòîâ. Çàòåì íà ðàñòâîð ôèêîëëà-óðîãðàôèíà (4 ìë) îñòîðîæíî íàñëàèâàëè 7 ìë ïëàçìû
243
îáîãàùåííîé ëåéêîöèòàìè, è öåíòðèôóãèðîâàëè â òå÷åíèå 30 ìèí ïðè 400 g. Ïîñëå öåíòðèôóãèðîâàíèÿ ê îñàäêó,
ñîäåðæàùåìó ãðàíóëîöèòû, äîáàâëÿëè 1 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû è ïåðåìåøèâàëè â òå÷åíèå 20 ñ äëÿ ãèïîòîíè÷åñêîãî ëèçèñà îñòàâøèõñÿ ýðèòðîöèòîâ, ïîñëå ÷åãî
âîññòàíàâëèâàëè îñìîòè÷íîñòü ðàñòâîðà äîáàâëåíèåì
1 ìë 0.3 Ì NaCl. Êëåòêè äâàæäû îòìûâàëè ðàñòâîðîì
0.15 Ì NaCl, öåíòðèôóãèðóÿ 10 ìèí ïðè 400 g. Ïîëó÷åííóþ ôðàêöèþ ñóñïåíäèðîâàëè â ñðåäå ðåãèñòðàöèè
(pH 7.2).  ïîëó÷åííîé ôðàêöèè êëåòîê ñîäåðæàíèå íåéòðîôèëîâ ñîñòàâëÿëî íå ìåíåå 96 %.
Ïðîäóêöèþ ÀÔÊ ôàãîöèòàìè èññëåäîâàë è ì å ò î ä î ì ë þ ì è í î ë ç à â è ñ è ì î é õ å ì è ë þ ì èí å ñ ö å í ö è è (Ë Õ Ë). Èçìåðåíèÿ ïðîâîäèëè íà ìèêðîïëàíøåòíîì ðèäåðå Tecan Infinite F200 (Øâåéöàðèÿ) â
ñòàíäàðòíûõ 96-ëóíî÷íûõ ïëàíøåòàõ. Äëÿ èçó÷åíèÿ âëèÿíèÿ DHPM íà ðàçâèòèå ðåñïèðàòîðíîãî âçðûâà ôàãîöèòàìè èñïîëüçîâàëè ñóñïåíçèþ ÏÌßË, ñòèìóëèðîâàííûõ
ÔÌÀ (ôîðáîë-12-ìèðèñòàò-13-àöåòàò, 0.56 ìêÌ), â ñðåäå
ðåãèñòðàöèè (200 ìêë), ñîäåðæàùåé ëþìèíîë (250 ìêÌ).
Èñõîäíûå ðàñòâîðû DHPM ãîòîâèëè â DMSO. Êîíå÷íûå êîíöåíòðàöèè âåùåñòâ â ñðåäå ñîñòàâëÿëè
10–3—10–8 Ì. Êîíöåíòðàöèÿ DMSO â ñðåäå ðåãèñòðàöèè
ÀÔÊ íå ïðåâûøàëà 1 % îò îáùåãî îáúåìà ïðîáû
(210 ìêë).
Äåéñòâèå DHPM îöåíèâàëè ñëåäóþùèì îáðàçîì: ôàãîöèòèðóþùèå êëåòêè (1 ìëí/ìë) èíêóáèðîâàëè â òå÷åíèå
5 ìèí ïðè 37 °C â ñðåäå ðåãèñòðàöèè ñ äîáàâëåíèåì
DHPM. Çàòåì ê ñóñïåíçèè ÏÌßË äîáàâëÿëè ðàñòâîð
ÔÌÀ (0.56 ìêÌ) è ðåãèñòðèðîâàëè ËÕË ïðè 425 íì. Èçìåíåíèå èíòåíñèâíîñòè ËÕË ïîä äåéñòâèåì DHPM îöåíèâàëè ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëüíûì çíà÷åíèÿì ËÕË
ñóñïåíçèè ôàãîöèòîâ (áåç äîáàâêè DHPM) : IËÕË =
= (IDHPM+ÔÌÀ/IDMSO+ÔÌÀ)$100 %, ãäå IËÕË — ðåãèñòðèðóåìîå
çíà÷åíèå ËÕË, IDHPM+ÔÌÀ — èíòåíñèâíîñòü ËÕË ñóñïåíçèè ÏÌßË â ïðèñóòñòâèè DHPM è ÔÌÀ, IDMSO+ÔÌÀ — èíòåíñèâíîñòü ËÕË ñóñïåíçèè ÏÌßË â ïðèñóòñòâèè DMSO
(â îáúåìå, ýêâèâàëåíòíîì DHPM) è ÔÌÀ.
Îöåíêó âëèÿíèÿ DHPM íà ÀÔÊ-ãåíåðèðóþùóþ àêòèâíîñòü ôàãîöèòîâ áåç äîïîëíèòåëüíîé ñòèìóëÿöèè
(â îòñóòñòâèå ÔÌÀ) îïðåäåëÿëè àíàëîãè÷íûì îáðàçîì:
IËÕË = (IDHPM/IDMSO+ÔÌÀ)$100 %, ãäå IDHPM — èíòåíñèâíîñòü
ËÕË ñóñïåíçèè ÏÌßË â ïðèñóòñòâèè DHPM. Ôîíîâûì
çíà÷åíèåì ËÕË âî âñåõ ýêñïåðèìåíòàõ ñëóæèëî çíà÷åíèå
ËÕË ñóñïåíçèè ÏÌßË â ïðèñóòñòâèè DMSO (â îáúåìå,
ýêâèâàëåíòíîì DHPM).
Ñ ò à ò è ñ ò è ÷ å ñ ê ó þ î á ð à á î ò ê ó ðåçóëüòàòîâ ïðîâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì ïðîãðàììû MS Excel 2003. Íà
ðèñóíêàõ ïðåäñòàâëåíû ñðåäíèå çíà÷åíèÿ âåëè÷èí è èõ
ñòàíäàðòíûå îòêëîíåíèÿ. Ðàçëè÷èÿ ñ÷èòàëè äîñòîâåðíûìè ïðè P 7 0.05.
Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå
Èññëåäóåìûå ïðèìèäèíû Áèäæèíåëëè (DHPM) áûëè
ðàçäåëåíû íà äâå ãðóïïû.  ïåðâóþ âîøëè ÷åòûðå ïèðèìèäèíà (DHPM01, DHPM02, DHPM03 è DHPM04), èìåþùèå â 1-ì ïîëîæåíèè 2-(3, 4-äèìåòîêñèôåíèë)-ýòèëüíûé
ôðàãìåíò è ðàçëè÷íûå çàìåñòèòåëè â 4-ì ïîëîæåíèè
(èçîïðîïèëüíûé, ôåíèëüíûé, ìåòèëüíûé è ôóðèëüíûé).
Âî âòîðóþ ãðóïïó âîøëè äâà ïèðèìèäèíà (DHPM05 è
DHPM06), èìåþùèå â 1-ì ïîëîæåíèè áåíçèëüíûé è â 4-ì
ïîëîæåíèè èçîïðîïèëüíûé è ôåíèëüíûé çàìåñòèòåëè
(ðèñ. 1).
244
Þ. Â. Øàòàëèí, Â. Ñ. Øóáèíà, À. Ñ. Ôèñþê
Ðèñ. 1. Ñòðóêòóðà ñèíòåòè÷åñêèõ ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè (DHPM).
DHPM01 — ýòèë-1-[2-(3, 4-äèìåòîêñèôåíèë)ýòèë]-6-ìåòèë-4-èçîïðîïèë-3, 4-äèãèäðî-2(1Í)- ïèðèìèäèí-5-êàðáîêñèëàò; DHPM02 — ýòèë-1-[2-(3,
4-äèìåòîêñèôåíèë)ýòèë] -6-ìåòèë-4-ôåíèë-3, 4-äèãèäðî-2(1Í) -ïèðèìèäèí-5-êàðáîêñèëàò; DHPM03 — ýòèë-1-[2-(3, 4-äèìåòîêñèôåíèë)ýòèë]-6- ìåòèë-4-(2-ôóðèë)-3, 4-äèãèäðî-2(1Í)-ïèðèìèäèí-5-êàðáîêñèëàò; DHPM04 — ýòèë-1-[-2-(3, 4-äèìåòîêñèôåíèë)ýòèë]- 6-ìåòèë-4-ìåòèë-3, 4-äèãèäðî-2-(1Í)-ïèðèìèäèí-5-êàðáîêñèëàò; DHPM05 — ýòèë-1-áåíçèë-6-ìåòèë-4- èçîïðîïèë-3, 4-äèãèäðî-2(1Í)- ïèðèìèäèí-5-êàðáîêñèëàò; DHPM06 —
ýòèë-1-áåíçèë-6-ìåòèë-4-ôåíèë-3, 4-äèãèäðî-2(1Í)-ïèðèìèäèí-5-êàðáîêñèëàò.
Ðèñ. 2. Èçìåíåíèå ïðîäóêöèè àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà (ÀÔÊ) íåéòðîôèëàìè êðîâè çäîðîâûõ êðûñ ïðè äåéñòâèè ôîðáîëîâîãî
ýôèðà (ÔÌÀ, 0.56 ìêÌ) â ïðèñóòñòâèè ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè â ðàçíîé êîíöåíòðàöèè.
Ïðîäóêöèþ ÀÔÊ îöåíèâàëè ïî èçìåíåíèþ ëþìèíîëçàâèñèìîãî õåìèëþìèíåñöåíòíîãî îòâåòà (ËÕË) ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëþ.
Âëèÿíèå ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè íà ïðîäóêöèþ ÀÔÊ ïîëèìîðôíîÿäåðíûìè ëåéêîöèòàìè
Äëÿ òîãî ÷òîáû èñêëþ÷èòü âëèÿíèå DHPM íà ËÕË,
ñíà÷àëà ïðîâåëè èññëåäîâàíèÿ íà áåñêëåòî÷íîé áèîõèìè÷åñêîé ìîäåëüíîé ñèñòåìå, ñîäåðæàùåé ïåðåêèñü âîäîðîäà, ëþìèíîë è ïåðîêñèäàçó õðåíà (Øàòàëèí, è äð., 2008).
Âûÿñíèëè, ÷òî â äàííûõ óñëîâèÿõ èññëåäóåìûå DHPM íå
âëèÿþò íà ËÕË-îòâåò. Ýòè äàííûå ñâèäåòåëüñòâóåò â
ïîëüçó òîãî, ÷òî äàííûå âåùåñòâà è èõ âîçìîæíûå ìåòàáîëèòû, îáðàçóþùèåñÿ â ïðîöåññå îêèñëåíèÿ, íå ÿâëÿþòñÿ ïðîîêñèäàíòàìè èëè àíòèîêñèäàíòàìè, êîòîðûå âëèÿëè áû íà õåìèëþìèíåñöåíöèþ (äàííûå íå ïðåäñòàâëåíû).
Èññëåäîâàíèå âëèÿíèÿ DHPM íà ÀÔÊ-ãåíåðèðóþùóþ àêòèâíîñòü ÏÌßË ïîêàçàëî, ÷òî âñå èññëåäóåìûå
ñîåäèíåíèÿ â êîíöåíòðàöèè 10—100 ìêÌ îêàçûâàþò
ïðàéìèðóþùåå âëèÿíèå íà ïðîäóêöèþ ÀÔÊ, òîãäà êàê
DHPM â áîëåå íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ ëèáî íå âëèÿëè íà
ïðîäóêöèþ ôàãîöèòàìè ÀÔÊ, ëèáî èíãèáèðîâàëè åå
(ðèñ. 2). Íàèáîëåå ñèëüíîå ïðàéìèðóþùåå âëèÿíèå íà ãåíåðàöèþ ÀÔÊ êëåòêàìè îêàçàëè ñîåäèíåíèÿ, ñîäåðæàùèå â 1-ì ïîëîæåíèè äèìåòîêñèôåíèëýòèëüíûé ôðàãìåíò (DHPM01, DHPM02 è DHPM03), òîãäà êàê âåùåñòâà ñ áåíçèëüíûì ôðàãìåíòîì (DHPM05 è DHPM06) â
äàííîì ïîëîæåíèè ïðîÿâèëè çíà÷èòåëüíî ìåíüøóþ àêòèâíîñòü. Ïðîäóêöèè ÀÔÊ â ïðèñóòñòâèè DHPM01 â êîíöåíòðàöèè 10 ìêÌ óâåëè÷èâàëàñü íà 82 ± 9 %, òîãäà êàê
äëÿ DHPM05 è DHPM06 äàííîå óâåëè÷åíèå íå ïðåâûøàëî 37 ± 12 % (10 ìêÌ) è 26 ± 8 % (100 ìêÌ) ñîîòâåòñòâåííî.
 òî æå âðåìÿ ñóùåñòâåííûå èçìåíåíèÿ â ïðàéìèðóþùåì äåéñòâèè DHPM íàáëþäàëèñü ïðè çàìåíå çàìåñòèòåëÿ â 4-ì ïîëîæåíèè ïèðèìèäèíîâîãî êîëüöà. Ïðè
ýòîì çàìåñòèòåëè ðàñïîëàãàþòñÿ â ñëåäóþùèé ðÿä: èçîïðîïèëüíûé (DHPM01, óâåëè÷åíèå ËÕË íà 81 ± 11 %) >
ôåíèëüíûé (DHPM02, óâåëè÷åíèå ËÕË íà 6
3 ± 13 %) > ôóðèëüíûé (DHPM03, óâåëè÷åíèå ËÕË íà 59
± 12 %) > ìåòèëüíûé (DHPM04, óâåëè÷åíèå ËÕË íà 35 ±
) 12 %).
Ìåõàíèçì äåéñòâèÿ äàííûõ DHPM äî êîíöà íåÿñåí,
òåì íå ìåíåå ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî èññëåäóåìûå ñîåäèíåíèÿ ïîäîáíî ïðèðîäíûì ïèðèìèäèíàì (ïóðèíàì)
âëèÿþò íà ðàçíûå ïîäòèïû ïèðèìèäèíîâûõ (ïóðèíîâûõ)
ðåöåïòîðîâ (P1 è P2), îêàçûâàÿ ïðîòèâîïîëîæíîå âëèÿíèå
íà ôóíêöèè ôàãîöèòèðóþùèõ êëåòîê êðîâè (Cronstein,
1994; Bullough et al., 1995; Liang et al., 1995; Fredholm,
1997; Seil et al., 2008). Íàïðèìåð, àäåíîçèí â íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ ñòèìóëèðóåò ÀÔÊ-ãåíåðèðóþùóþ àêòèâíîñòü êëåòîê, óñèëèâàåò ôàãîöèòîç, à òàêæå àäãåçèþ ôàãîöèòîâ ê ýíäîòåëèþ ïîñðåäñòâîì àêòèâàöèè ðåöåïòîðîâ À1
è À3, â òî âðåìÿ êàê ïðè âûñîêèõ êîíöåíòðàöèÿõ àäåíîçèí
äåéñòâóþò íà ðåöåïòîð À2à, â ðåçóëüòàòå ÷åãî âûøåïåðå÷èñëåííûå ôóíêöèè èíãèáèðóþòñÿ (Liang et al., 1995). Ðÿäîì àâòîðîâ ïîêàçàíî, ÷òî ôóíêöèîíàëüíûå èçìåíåíèÿ
ôàãîöèòîâ êðîâè â ðåçóëüòàòå äåéñòâèÿ êàê íà ñåìåéñòâî
ðåöåïòîðîâ P1 (âêëþ÷àÿ A1 è A3), òàê è íà ñåìåéñòâî P2 ñîïðîâîæäàþòñÿ ïîëèìåðèçàöèåé àêòèíîâîãî öèòîñêåëåòà
êëåòîê (Seifert et al., 1989; Verghese et al., 1996; Zalavary et
al., 1996a). Âëèÿíèå íà àêòèíîâûé öèòîñêåëåò êëåòêè îäíîãî èç èññëåäóåìûõ ïèðèìèäèíîâ ìû íàáëþäàëè ðàíåå
(Ïàâëèê è äð., 2007).
Àêòèâàöèÿ ðàçëè÷íûõ ïîäòèïîâ ïèðèìèäèíîâûõ (ïóðèíîâûõ) ðåöåïòîðîâ îäíèì è òåì æå àãîíèñòîì ìîæåò
âûçûâàòü ðàçëè÷íûå ýôôåêòû, ÷òî áûëî ïðîäåìîíñòðèðîâàíî ïðè èññëåäîâàíèè ïðîäóêöèè ÀÔÊ íåéòðîôèëîâ â
ïðèñóòñòâèè òðîìáîöèòîâ (Bengtsson et al., 1996). Àâòîðû
ïîêàçàëè íåçíà÷èòåëüíîå èíãèáèðîâàíèå ËÕË-îòâåòà ïðè
ñîîòíîøåíèè íåéòðîôèëû : òðîìáîöèòû â äèàïàçîíå
245
Ðèñ. 3. Âëèÿíèå ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè (1 ìÌ) íà ïðîäóêöèþ ÀÔÊ ïîêîÿùèìèñÿ (à) è èíäóöèðîâàííûìè (á) íåéòðîôèëàìè êðûñ.
I — íà ôîíå ñòèìóëÿöèè íåéòðîôèëîâ ôîðáîëîâûì ýôèðîì (ÔÌÀ,
0.56 ìêÌ); II — áåç ñòèìóëÿöèè íåéòðîôèëîâ ÔÌÀ. Èíäóöèðîâàííûå
íåéòðîôèëû ïîëó÷àëè îò êðûñ, êîòîðûì â òå÷åíèå 7 ñóò ââîäèëè çèìîçàí
A. Êîíòðîëåì ñëóæèëà èíòåíñèâíîñòü ËÕË-îòâåòà íåéòðîôèëîâ çäîðîâûõ æèâîòíûõ ïðè ñòèìóëÿöèè 0.56 ìêÌ ÔÌÀ (ñì. ðàçäåë «Ìàòåðèàë è
ìåòîäèêà»).
1 : 1—1 : 10, à ïðè äàëüíåéøåì óâåëè÷åíèè ýòîãî ñîîòíîøåíèÿ ËÕË-îòâåò óâåëè÷èâàëñÿ âäâîå. Òàêæå îòìå÷àëîñü
2-êðàòíîå âîçðàñòàíèå ôàãîöèòàðíîé àêòèâíîñòè è
1.5-êðàòíîå óâåëè÷åíèå ñîäåðæàíèÿ âíóòðèêëåòî÷íîãî
ïîëèìåðíîãî àêòèíà. Ïðè ýòîì â äðóãîé ñåðèè ýêñïåðèìåíòîâ ýòèõ àâòîðîâ ïðèñóòñòâèå òðîìáîöèòîâ âûçûâàëî
òîëüêî èíãèáèðîâàíèå ðåñïèðàòîðíîãî âçðûâà íåéòðîôèëîâ (Zalavary et al., 1996b). Ïðîòèâîðå÷èâîñòü ïîëó÷åííûõ àâòîðàìè äàííûõ, ïî-âèäèìîìó, ñâÿçàíà ñ ðàçëè÷èåì
ôóíêöèîíàëüíîãî ñîñòîÿíèÿ âûäåëÿåìûõ íåéòðîôèëîâ, à
èìåííî ñ ðàçëè÷íûì óðîâíåì ýêñïðåññèè ïóðèíîâûõ (ïèðèìèäèíîâûõ) ðåöåïòîðîâ. Íà ìîäåëè àñåïòè÷åñêîãî âîñïàëåíèÿ, èíäóöèðîâàííîãî ââåäåíèåì â áðþøíóþ ïîëîñòü æèâîòíîãî ðàñòâîðà çèìîçàíà À, íàìè áûëà ïðåäïðèíÿòà ïîïûòêà îáúÿñíèòü ïîäîáíûå äàííûå.
Òàê, â ïðîöåññå àêòèâàöèè íåéòðîôèëîâ íàáëþäàåòñÿ
ïåðåðàñïðåäåëåíèå ïóðèíîâûõ (ïèðèìèäèíîâûõ) ðåöåïòîðîâ (Junger, 2008), ÷òî äîëæíî ïðèâîäèòü ê èçìåíåíèþ
ËÕË â ïðèñóòñòâèè àãîíèñòîâ (àíòîãîíèñòîâ) ðåöåïòîðîâ À2a è À3. Ïðè èññëåäîâàíèè âëèÿíèÿ ñèíòåòè÷åñêèõ
DHPM íà ïðîäóêöèþ ÀÔÊ íåéòðîôèëàìè íàìè áûëè îáíàðóæåíû ñóùåñòâåííûå ðàçëè÷èÿ â ËÕË-îòâåòàõ êëåòîê,
âûäåëåííûõ èç çäîðîâîãî æèâîòíîãî è æèâîòíîãî ñ èíäóöèðîâàííûì çèìîçàíîì õðîíè÷åñêèì âîñïàëåíèåì.
246
Þ. Â. Øàòàëèí, Â. Ñ. Øóáèíà, À. Ñ. Ôèñþê
Èç ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè òîëüêî DHPM02 â âûñîêîé êîíöåíòðàöèè (1 ìÌ) óâåëè÷èâàë ïðîäóêöèþ ÀÔÊ
(ËÕË-îòâåò) íåéòðîôèëàìè, âûäåëåííûìè èç êðîâè çäîðîâîãî æèâîòíîãî áåç äîïîëíèòåëüíîé ñòèìóëÿöèè ÔÌÀ
(ðèñ. 3). Îäíàêî èíäóöèðîâàííûå íåéòðîôèëû, âûäåëåííûå èç êðîâè æèâîòíîãî ñ èíäóöèðîâàííûì çèìîçàíîì
âîñïàëåíèåì, óñèëèâàëè ïðîäóêöèþ ÀÔÊ â îòñóòñòâèå
ñòèìóëÿöèè ÔÌÀ ïðè äåéñòâèè íå òîëüêî DHPM02, íî è
DHPM03 (ðèñ. 3). Íà ôîíå ñòèìóëÿöèè ÔÌÀ èíòåíñèâíîñòü ËÕË âîçðàñòàëà ïðè äåéñòâèè DHPM01, DHPM02 è
DHPM03 íà 32, 16 è 28 % ñîîòâåòñòâåííî. Îáíàðóæåííûå
èçìåíåíèÿ, ïî-âèäèìîìó, ñâÿçàíû ñ àêòèâàöèåé ïóðèíåðãè÷åñêèõ ðåöåïòîðîâ À2à, À3 è P2Y2, êîòîðûå ïðåèìóùåñòâåííî ýêñïðåññèðóþòñÿ â íåéòðîôèëàõ (Junger, 2008).
Àêòèâàöèÿ ðåöåïòîðà À2à â ïðîòèâîïîëîæíîñòü àêòèâàöèè ðåöåïòîðà À3 ïðèâîäèò ê óâåëè÷åíèþ êîíöåíòðàöèè âíóòðèêëåòî÷íîãî öÀÌÔ, èíãèáèðóåò ïðîòåèíêèíàçó
Ñ è ðåñïèðàòîðíûé âçðûâ íåéòðîôèëîâ. Àêòèâàöèÿ ðåöåïòîðà P2Y2 ïðèâîäèò ê ñòèìóëÿöèè ôîñôîëèïàçû Cb2,
ôîðìèðîâàíèþ èíîçèòîëòðèôîñôàòà, ìîáèëèçàöèè âíóòðèêëåòî÷íîãî Ca2+ è àêòèâàöèè ðàçëè÷íûõ ñèãíàëüíûõ
ïóòåé, âêëþ÷àÿ ôîñôîëèïàçó PLA2, Ca2+-çàâèñèìûé
K+-êàíàë è PKC (Ralevic et al., 1998). Òàêèì îáðàçîì, äîçîçàâèñèìàÿ àêòèâàöèÿ (èíãèáèðîâàíèå) ïèðèìèäèíîâûõ
(ïóðèíîâûõ) ðåöåïòîðîâ ìîæåò ïðèâîäèòü ê óñèëåíèþ
èëè îñëàáëåíèþ ïðîäóêöèè ÀÔÊ íåéòðîôèëàìè. Â ïîëüçó äàííîãî óòâåðæäåíèÿ ãîâîðèò òî, ÷òî â ïðîöåññå âîñïàëåíèÿ ïîêîÿùèåñÿ íåéòðîôèëû ïðåòåðïåâàþò ðÿä èçìåíåíèé â ðåçóëüòàòå àêòèâàöèè (Ïîöåëóåâà è äð., 2005), ïðè
ýòîì, ïî-âèäèìîìó, ñóùåñòâåííî èçìåíÿåòñÿ ýêñïðåññèÿ
ïèðèìèäèíîâûõ (ïóðèíîâûõ) ðåöåïòîðîâ (Junger, 2008).
Ñ äðóãîé ñòîðîíû, äåéñòâèå ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè ìîæåò áûòü îáóñëîâëåíî ñâÿçûâàíèåì è ñ äðóãèìè ðåöåïòîðàìè. Ñðåäè ñòðóêòóðíûõ àíàëîãîâ èññëåäóåìûõ
âñòðå÷àþòñÿ àíòàãîíèñòû àäðåíîðåöåïòîðîâ (Nagarathnam et al., 1999; Barrow et al., 2000). Ïîñëåäíèå ïðèñóòñòâóþò íà ïîâåðõíîñòè ôàãîöèòèðóþùèõ êëåòîê (Barrow
et al., 2000) è ìîãóò áûòü ìèøåíÿìè DHPM. Ïîõîæóþ
ñòðóêòóðó èìåþò ïèðèìèäèíû — áëîêàòîðû êàëüöèåâûõ
êàíàëîâ (Atwal et al., 1991; Rovnyak et al., 1992; Grover et
al., 1995), êîòîðûå ó÷àñòâóþò â ðåãóëÿöèè óðîâíÿ âíóòðèêëåòî÷íîãî êàëüöèÿ è, ñëåäîâàòåëüíî, ÿâëÿþòñÿ âàæíûì
çâåíîì â ôîðìèðîâàíèè ÀÔÊ-ãåíåðèðóþùåãî îòâåòà êëåòîê. Ñòîèò îáðàòèòü âíèìàíèå è íà òîò ôàêò, ÷òî ìàêñèìàëüíîå ñòèìóëèðóþùåå âëèÿíèå íà ÀÔÊ-ãåíåðèðóþùóþ
àêòèâíîñòü ÏÌßË îêàçûâàþò íàèáîëåå ãèäðîôîáíûå ñîåäèíåíèÿ â âûñîêèõ êîíöåíòðàöèÿõ, è, ñëåäîâàòåëüíî, â
ýòîì ñëó÷àå íåëüçÿ èñêëþ÷àòü íåñïåöèôè÷åñêîå äåéñòâèå
èññëåäîâàííûõ ñîåäèíåíèé, íàïðèìåð èõ âëèÿíèå íà âÿçêîñòü ìåìáðàíû, ÷òî ìîæåò ïðèâîäèòü ê èçìåíåíèþ åå
ïðîíèöàåìîñòè è êîíôîðìàöèè ðåöåïòîðîâ.
Èòàê, íàìè îáíàðóæåíî èçìåíåíèå ÀÔÊ-ãåíåðèðóþùåé àêòèâíîñòè ÏÌßË â ïðèñóòñòâèè ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè â çàâèñèìîñòè îò èõ õèìè÷åñêîé ñòðóêòóðû. Ïîêàçàíî íàëè÷èå äîçîçàâèñèìîãî ýôôåêòà àêòèâàöèè (èíãèáèðîâàíèÿ) ÀÔÊ-ãåíåðèðóþùåé àêòèâíîñòè ÏÌßË
êðîâè. Îáíàðóæåíà ñïîñîáíîñòü ñèíòåòè÷åñêèõ ïèðèìèäèíîâ âûçûâàòü èíäóêöèþ ðåñïèðàòîðíîãî âçðûâà ó íåéòðîôèëîâ, âûäåëåííûõ èç êðîâåíîñíîãî ðóñëà êðûñ ñ èíäóöèðîâàííûì çèìîçàíîì âîñïàëåíèåì.
Ïîëó÷åííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î âîçìîæíîì
âëèÿíèè ñèíòåòè÷åñêèõ ïèðèìèäèíîâ íà ÀÔÊ-ãåíåðèðóþùóþ àêòèâíîñòü ôàãîöèòîâ êðîâè â çàâèñèìîñòè îò èõ
ôóíêöèîíàëüíîãî ñîñòîÿíèÿ. Òàêèì îáðàçîì, èñïîëüçîâàíèå ïðåïàðàòîâ ïèðèìèäèíîâîãî ðÿäà, íàïðèìåð òàêèõ
êàê ïåíòîêñèë, ìåáðîí è ôòîðàôóð, íà ôîíå âîñïàëåíèÿ
ìîæåò ïðîâîöèðîâàòü óñèëåíèå ïðîäóêöèè ÀÔÊ è ïðèâîäèòü ê ðàçëè÷íûì ïàòîëîãè÷åñêèì ñîñòîÿíèÿì. Òåì íå
ìåíåå èññëåäîâàíèå ìåõàíèçìîâ äåéñòâèÿ ñèíòåòè÷åñêèõ
ïèðèìèäèíîâ ïîçâîëèò ñîçäàâàòü ýôôåêòèâíûå èììóíîñòèìóëèðóþùèå àãåíòû, îáëàäàþùèå ñåëåêòèâíûì äåéñòâèåì íà îïðåäåëåííûå òèïû ïèðèìèäèíîâûõ (ïóðèíîâûõ) ðåöåïòîðîâ.
Ðàáîòà âûïîëíåíà ïðè ôèíàíñîâîé ïîääåðæêå Ðîñîáðàçîâàíèÿ â ðàìêàõ àíàëèòè÷åñêîé âåäîìñòâåííîé
öåëåâîé ïðîãðàììû «Ðàçâèòèå íàó÷íîãî ïîòåíöèàëà âûñøåé øêîëû» (¹ 2.1.1/791 è 2.1.1/6872).
Ñïèñîê ëèòåðàòóðû
Âäîâèíà Ñ. Â., Ìàìåäîâ Â. À. 2008. Íîâûå âîçìîæíîñòè
êëàññè÷åñêîé ðåàêöèè Áèäæèíåëëè. Óñïåõè õèìèè. 77 (12) :
1091—1128.
Çåíêîâ Í. Ê., Ëàíêèí Â. Ç., Ìåíüùèêîâà Å. Á. 2001. Îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ. Áèîõèìè÷åñêèå è ïàòîôèçèîëîãè÷åñêèå àñïåêòû. Ì.: Íàóêà. 340 ñ.
Ëîáàøåâñêèé À. Ë. 1983. Âûäåëåíèå ïîëèìîðôíîÿäåðíûõ
ëåéêîöèòîâ èç ìàëûõ îáúåìîâ êðîâè ïîñëå îñàæäåíèÿ äåêñòðàíîì. Ëàá. äåëî. 11 : 28—31.
Ïàâëèê Ë. Ë., Áåçãèíà Å. Í., Øóáèíà Â. Ñ., Øàòàëèí Þ. Â.,
Ïîöåëóåâà Ì. Ì., Ìîøêîâ Ä. À. 2007. Âëèÿíèå 3, 4-äèãèäðî-2(1H)-ïèðèìèäèíòèîíà íà óëüòðàñòðóêòóðó è ôóíêöèþ Ìàóòíåðîâñêèõ íåéðîíîâ çîëîòûõ ðûáîê. Ìîðôîëîãèÿ. 131
(1) : 31—36.
Ïîöåëóåâà Ì. Ì., Ïóñòîâèäêî À. Â., Êîâàëåâà Å. Â., Øàòàëèí Þ. Â., Åâòîäèåíêî Å. Â. 2005. Öèòîòîêñè÷åñêîå äåéñòâèå
ïîëèìîðôíîÿäåðíûõ ëåéêîöèòîâ íà îïóõîëåâûå è íîðìàëüíûå
êëåòêè in vitro è in vivo. Öèòîëîãèÿ. 47 (1) : 57—63.
Øàòàëèí Þ. Â., Íàóìîâ À. À., Ïîöåëóåâà Ì. Ì. 2008.
Ñðàâíèòåëüíàÿ õàðàêòåðèñòèêà àíòèîêñèäàíòíûõ ñâîéñòâ ãèïîêñåíà è äóðîõèíîíà ìåòîäîì õåìèëþìèíåñöåíöèè. Áèîôèçèêà. 53 (1) : 100—107.
Atwal K. S., Swanson B. N., Unger S. E., Floyd D. M., Moreland S., Hedberg A., O’Reilly B. C. 1991. Dihydropyrimidine calcium channel blockers. 3. 3-Carbamoyl-4-aryl-1, 2, 3, 4-tetrahydro-6-methyl-5-pyrimidinecarboxylic acid esters as orally effective
antihypertensive agents. J. Med. Chem. 34 : 806—811.
Barrow J. C., Nantermet P. G., Selnick H. G., Glass K. L., Rittle K. E., Gilbert K. F., Steele T. G., Homnick C. F., Freidinger R. M., Ransom R. W., Kling P., Reiss D., Broten T. P.,
Schorn T. W., Chang R. S., O’Malley S. S., Olah T. V., Ellis J. D.,
Barrish A., Kassahun K., Leppert P., Nagarathnam D., Forray C.
2000. In vitro and in vivo evaluation of dihydropyrimidinone C-5
amides as potent and selective alpha(1A) receptor antagonists for
the treatment of benign prostatic hyperplasia. J. Med. Chem. 43 :
2703—2718.
Bengtsson T., Zalavary S., Stendahl O., Grenegard M. 1996.
Release of oxygen metabolites from chemoattractant-stimulated neutrophils is inhibited by resting platelets: role of extracellular adenosine and actin polymerization. Blood. 87 (10) : 4411—4423.
Bullough D. A., Magill M. J., Firestein G. S., Mullane K. M.
1995. Adenosine activates A2 receptors to inhibit neutrophil adhesion and injury to isolated cardiac myocytes. J. Immunol. 155
(5) : 2579—2586.
Chen Y., Corriden R., Inoue Y., Yip L., Hashiguchi N., Zinkernagel A., Nizet V., Insel P. A., Junger W. G. 2006. ATP release guides neutrophil chemotaxis via P2Y2 and A3 receptors. Science.
314 : 1792—1795.
Cronstein B. N. 1994. Adenosine, an endogenous anti-inflammatory agent. J. Appl. Physiol. 76 (1) : 5—13.
Doherty N. S., Poubelle P., Borgeat P., Beaver T. H., Westrich G. L., Schrader N. L. 1985. Intraperitoneal injection of zymosan
in mice induces pain, inflammation and the synthesis of peptidoleukotrienes and prostaglandin E2. Prostaglandins. 30 : 769—789.
Âëèÿíèå ïèðèìèäèíîâ Áèäæèíåëëè íà ïðîäóêöèþ ÀÔÊ ïîëèìîðôíîÿäåðíûìè ëåéêîöèòàìè
Fredholm B. B. 1997. Purines and neutrophil leukocytes. Gen.
Pharmacol. 28 : 345—350.
Grover G. J., Dzwonczyk S., McMullen D. M., Normandin D. E., Parham C. S., Sleph P. G., Moreland S. 1995. Pharmacologic profile of the dihydropyrimidine calcium channel blockers SQ
32,547 and SQ 32,926 [correction of SQ 32,946]. J. Cardiovasc.
Pharmacol. 26 : 289—294.
Huang Y., Yang F., Zhu C. 2005. Highly enantioselective Biginelli reaction using a new chiral ytterbium catalyst: asymmetric
synthesis of dihydropyrimidines. J. Amer. Chem. Soc. 127 :
16 386—16 387.
Junger W. G. 2008. Purinergic regulation of neutrophil chemotaxis. Cell. Mol. Life Sci. 65 : 2528—2540.
Kappe C. O. 2000. Biologically active dihydropyrimidones of
the Biginelli-type-a literature survey. Eur. J. Med. Chem. 35 :
1043—1052.
Liang B. T., Haltiwanger B. 1995. Adenosine A2a and A2b receptors in cultured fetal chick heart cells. High- and low-affinity coupling to stimulation of myocyte contractility and cAMP accumulation. Circ. Res. 76 : 242—251.
Nagarathnam D., Miao S. W., Lagu B., Chiu G., Fang J.,
Dhar T. G. M., Zhang J., Tyagarajan S., Marzabadi M. R.,
Zhang F., Wong W. C., Sun W., Tian D., Wetzel J. M., Forray C.,
Chang R. S. L., Broten T. P., Ransom R. W., Schorn T. W.,
Chen T. B., O’Malley S., Kling P., Schneck K., Bendesky R., Harrell C. M., Vyas K. P., Gluchowski C. 1999. Design and synthesis of
novel a1a adrenoceptor-selective antagonists. 1. Structure—activity relationship in dihydropyrimidinones. J. Med. Chem. 42 :
4764—4777.
Ralevic V., Burnstock G. 1998. Receptors for purines and pyrimidines. Pharm. Rev. 50 : 413—492.
Rovnyak G. C., Atwal K. S., Hedberg A., Kimball S. D., Moreland S., Gougoutas J. Z., O’Reilly B. C., Schwartz J., Malley M. F.
1992. Dihydropyrimidine calcium channel blockers. 4. Basic 3-sub-
stituted-4-aryl-1,4-dihydropyrimidine-5-carboxylic acid esters. Potent antihypertensive agents. J. Med. Chem. 35 : 3254—3263.
Sajewicz W. 2007. Toxicity of pyrimidine derivatives under
oxidative stress conditions: chemiluminescence-based assays in
systems containing erythrocytes, mitochondria or blood plasma.
Pharmacol. Rep. 59 : 206—215.
Seifert R., Burde R., Schultz G. 1989. Activation of NADPH
oxidase by purine and pyrimidine nucleotides involves G proteins
and is potentiated by chemotactic peptides. Biochem. J. 259 :
813—819.
Seil M., Fontanils U., Etxebarria I. G., Pochet S., Garcia-Marcos M., Marino A., Dehaye J. P. 2008. Pharmacological evidence
for the stimulation of NADPH oxidase by P2X(7) receptors in mouse submandibular glands. Purinergic Signal. 4 (4) : 347—355.
Sies H. 1991. Oxidative stress: from basic research to clinical
application. Amer. J. Med. 91 : S31—S38.
Srinivas K. V. N. S., Das B. 2004. Iodine catalyzed one-pot
synthesis of 3,4-dihydropyrimidin-2(1H)-ones and thiones: a simple and efficient procedure for the Biginelli reaction. Synthesis. 13 :
2091—2094.
Verghese M. W., Kneisler T. B., Boucheron J. A. 1996. P2U
agonists induce chemotaxis and actin polymerization in human neutrophils and differentiated HL60 cells. J. Biol. Chem. 271
(26) : 15 597—15 601.
Zalavary S., Grenegard M., Stendahl O., Bengtsson T. 1996a.
Release of oxygen metabolites from chemoattractant-stimulated neutrophils is inhibited by resting platelets: role of extracellular adenosine and actin polymerization. J. Leukocyte Biol. 60 : 58—68.
Zalavary S., Grenegard M., Stendahl O., Bengtsson T. 1996b.
Platelets enhance Fc(gamma) receptor-mediated phagocytosis and
respiratory burst in neutrophils: the role of purinergic modulation
and actin polymerization. J. Leukocyte Biol. 60 (1) : 58—68.
Ïîñòóïèëà 6 X 2009
INFLUENCE OF BIGINELLI PYRIMIDINE ON PRODUCTION REACTIVE OXYGEN
SPECIES BY POLYMORPHONUCLEAR LEUKOCYTES
Yu. V. Shatalin,1, 2,* V. S. Shubina,1, 2 A. S. Fisyuk3
1
247
Pushchino State University, 2 Institute of Theoretical and Experimental Biophysics RAS, Pyshchino,
and 3 F. M. Dostoevsky Omsk State University;
* e-mail: [email protected]
The effect of 6 synthetic Biginelli pyrimidines on production of reactive oxygen species by polymorphonuclear neutrophils was investigated. It has been shown by method of luminol-dependent chemiluminescence
that test compounds in a concentrations of 10—100 ìM stimulate production of reactive oxygen species. An increase in the reactive oxygen species production by stimulated neutrophils in the presence of 10 ìM 1-(3, 4-dimetoxyphenyl)ethyl-4(alkyl/aryl) substituted Biginelli pyrimidines was 50—90 %. An increase in the priming
effect of Biginelli pyrimidines on reactive oxygen species production by neutrophils was noted in the case of
replacement of phuryl radical by phenyl and alkyl radicals at C(4) pyrimidine cycle and in the case of replacement benzyl radical at N(1) by 3, 4-dimetoxyphenyl radical. It has been revealed a high inhibitory effect of 1-(3,
4-dimetoxyphenylethyl)-4(alkyl/aryl) substituted Biginelli pyrimidine in concentration 0.01—0.10 ìM. It has
been found that high concentration of ethyl-1-[2-(3, 4-dimethoxyphenyl)ethyl]-6- methyl-4-phenyl-2-thioxo-1,
2, 3, 4-tetrahydropyrimidine -5-carboxylate (1 mM and more) is able to cause respiratory burst of neutrophils
without additional stimulation.
K e y w o r d s: neutrophils, reactive oxygen species production, Biginelli pyrimidine, purine (pyrimidine)
receptors.
Скачать