Иммунный статус детей с рецидивирующими заболеваниями

Иммунопатология, аллергология, инфектология
Immunopathology, allergology, infectology
2012, №1:611
ИММУННЫЙ СТАТУС
УДК 616.2053.4:612.017.1071
Иммунный статус детей с рецидивирующими заболеваниями ЛОР–
органов
С.В. Зыблева*, П.Д. Новиков**
* Республиканский научнопрактический центр радиационной медицины и экологии человека, Гомель,
Беларусь
** Витебский государственный медицинский университет, Витебск, Беларусь
The immune status of children with relapsing diseases of the
otorhinolaringological organs
S.V.Zybleva*, P.D.Novikov**
* State institution the republican research center for radiation medicine and human ecology, Gomel, Belarus
** State Medical University, Vitebsk, Belarus
Аннотация
Summary
Проведена оценка иммунного статуса у 24 детей в возра
сте 26 лет из группы часто и длительно болеющих с ре
цидивирующими заболеваниями ЛОРорганов, включа
ющая в себя иммунофенотипирование лейкоцитов по
маркерам: СD3, CD4, CD8, CD16, CD56, CD11a, CD14,
CD18, CD19, CD22, CD25, CD28, CD40, CD45, CD71,
CD95, CD154, HLADR, LPS. В результате исследования
выявлено, что рецидивирующие заболевания ЛОР орга
нов у детей сопровождаются изменениями относительно
го количества CD3+CD8+CD28+, LPS+CD19+ субпопуляций
лимфоцитов, и нейтрофилов, экспрессирующих CD11a
и CD18 рецепторы.
The estimation of the immune status at 24 children in the age
of 26 years from group with relapsing diseases of the
otorhinolaringological organs, including immunophenotype
of leukocytes (on receptors СD3, CD4, CD8, CD16, CD56,
CD11a, CD14, CD18, CD19, CD22, CD25, CD28, CD40,
CD45, CD71, CD95, CD154, HLADR, LPS) were
investigeted. As a result of research it is revealed, that
relapsing diseases of the otorhinolaringological organs children
are accompanied by changes of relative quantity
CD3 +CD8 +CD28 +, LPS +CD19 + subpopulations of
lymphocytes and neutrophils with CD11a and CD18 receptors.
Ключевые слова
Key words
Частые респираторные заболевания, дети, иммунный статус.
Relapsing respiratory diseases, children, the immune status.
Введение
При рецидивирующих респираторных забо
леваниях инфекция может быть как причиной
иммуннологической недостаточности, так и ее
следствием. У детей в условиях онтогенеза им
мунной системы и незрелости основных звень
ев иммунитета клинические маркеры инфекци
онного синдрома весьма разнообразны [1,2,3].
Оценка иммунного статуса современными ме
тодами иммунофенотипирования с использова
нием двойных и тройных меченых монокло
нальных антител (МКАТ), позволяющих оце
нивать различные субпопуляции и популяции
иммунокомпетентных клеток, экспрессию мар
керов активации, функциональную активность
клеток, апоптоз различных клеточных субпопу
ляций, поиск новых лабораторных маркеров
иммунных нарушений, позволит оценить взаи
мосвязи между лабораторными показателями
и клиническими маркерами инфекционного
6
Immunopathology, Allergology, Infectology 2012 N°1
Иммунный статус: Иммунный статус детей с рецидивирующими заболеваниями ЛОР–органов
синдрома, изучить закономерности формиро
вания нарушений иммунитета, что является
важной задачей клинической иммунологии
[1,3,4].
Целью исследования работы явилась оценка
иммунного статуса детей из группы часто и
длительно болеющих с рецидивирующими за
болеваниями ЛОР органов и детей конт
рольной группы.
Материалы и методы
Было обследовано 24 ребенка в возрасте 26
лет из группы часто и длительно болеющих де
тей с рецидивирующими заболеваниями ЛОР
органов. В опытную группу были включены
дети, у которых эпизоды инфекции верхних ды
хательных путей протекали с осложнением со
стороны ЛОР органов: синусит, аденоидит, отит
(соответственно J.01, J.35, Н.6567), не имеющие
на момент осмотра клинических данных в
пользу инфекционного процесса. Контрольную
группу составили 20 здоровых детей не болев
шие по данным анамнеза и формы 112У в тече
ние месяца до обследования острыми инфекци
онными заболеваниями. Для обследованных
получены информированные согласия от роди
телей на проведение дополнительных исследова
ний.
Материалом для исследования служили
клетки периферической крови и сыворотка
крови.
Определение иммунофенотипа лейкоци
тов и лимфоцитов проводилось на основе мо
ноклональных антител (МКАТ) фирмы
“Beckman Coulter”, Франция к СD3 (Fitc),
CD4(Fitc, PE), CD8 (PC5, PE), CD56+16 (PE),
CD11a (PE), CD14, CD18 (Fitc), CD19, CD22
(Fitc), CD25(PC5), CD28(PC5), CD40(PE),
CD45 (Fitc, PC5), CD71 (Fitc), CD95 (PE),
CD154 (PE), HLADR (PC5), фирмы “Sigma”
LPS (Fitc), с использованием проточного ци
тофлуориметра «PAS» (производства фирмы
Partec, Германия) с применением двух и трехпа
раметрического анализа согласно инструкции
производителя.
Определение в сыворотке крови иммуногло
булинов G, M, A, Е и С3, С4компонентов ком
племента проводилось турбодиметрическим
методом с помощью автоматического анализа
тора «Architect c8000» («Abbott», США); фаго
цитоз определяли стандартным методом, вы
числяли ФЧ и ФИ [1].
Статистические методы. Статистическую
обработку полученных данных проводили на
Иммунопатология, Аллергология, Инфектология 2012 N°1
ПЭВМIBM с использованием пакета приклад
ных статистических программ «Statistica» вер
сии 6.0. Результаты считали статистически зна
чимыми при достигнутом уровне значимости
менее 0,05. Описательная статистика качествен
ных признаков представлена абсолютными и
относительными частотами, а количественных
признаков в формате: медиана (интерквар
тильный размах) – Me [LQ/UQ]. Проверка ги
потез о виде распределения количественных
признаков осуществлялась с помощью крите
рия ШапироУилка.
Для сравнения значений использовался ме
тод числовых характеристик (по критерию
МаннаУитни и Вилкоксона) с оценкой распре
деления переменных. Связь показателей с помо
щью корреляционного анализа оценивали по
методу Спирмана и Кендала [5].
С целью сравнения групп по полу проводил
ся анализ таблиц сопряженности с использова
нием двустороннего точного критерия Фишера.
Статистически значимых различий по этому
показателю между группами (р=0,43) также не
выявлено. Полученные результаты указывают
на сопоставимость групп по полу и возрасту,
что позволяет проводить дальнейший анализ
данных.
Результаты и обсуждения
Проведенные исследования фенотипа лим
фоцитов у детей выявили следующие измене
ния (табл.1.).
Из таблицы 1 следует, что статистически до
стоверно более высокое относительное содер
жание CD3CD8+ у пациентов с рецидивирую
щими заболеваниями ЛОР органов (3,8%
[2,8%4,8%]) по сравнению с контрольной
(2,65% [1,9%4,05%]) группой (р=0,0468). В ли
тературе обсуждается вопрос о функциональ
ных свойствах субпопуляции CD3 CD8 +, им
приписываются функции Tхелпер3лимфоци
тов, Тсупрессоров, NКподобной активности.
Не исключают также, что эти клетки способны
модифицировать свой фенотип при изменении
цитокинового фона [1,4 ].
Абсолютное содержание CD3+CD8 +CD28+
лимфоцитов достоверно не отличалось, хотя их
процентное отношение имело статистически
достоверное (р=0,02) отличие в сторону повы
шения по сравнению со здоровыми (табл.2).
Уровень нейтрофилов, несущих рецепторы
адгезии CD11a и CD18 был статистически дос
товерное выше относительных (р=0,0169 и
р=0,0059 соответственно) показателей у детей с
7
С.В. Зыблева, П.Д. Новиков
Таблица 1. Показатели абсолютного и относительного содержания субпопуляций лейкоцитов и лимфоцитов у
детей с рецидивирующими заболеваниями ЛОР органов и группы контроля
Показатели
Группы обследованных
Me [LQ/UQ] в %
Опытная
группа (n=24)
Абсолютное колво х 109 кл/л
Me [LQ/UQ]
Группа
Опытная
Группа
контроля (n=20) группа (n=24)
контроля (n=20)
Лейкоциты
Лимфоциты
CD3+
CD3 +CD4+
CD3 +CD8+
CD4 +CD8+
CD19+
CD3CD16+CD56+
CD3+CD16+CD56+
CD3CD4+
CD3CD8+
CD22+
67,2
[63,971,9]
38,38
[31,641,3]
21,8
[19,2024,6]
1,70
[1,302,10]
17,80
[15,320,5]
10,9
[7,815,5]
2,1
[1,33,1]
0,7
[0,51,2]
3,8*
[2,84,8]
16,3
[14,719,5]
67,9
[65,0572,6]
36,46
[32,139,45]
21,36
[20,123,25]
1,8
[1,352,1]
17,1
[13,7519,75]
11,86
[8,213,35]
2,35
[1,753,25]
1,25
[0,552,1]
2,65
[1,94,05]
15,35
[13,117,2]
7,2
[6,38,7]
3,43
[2,824,52]
2,3
[1,922,95]
1,24
[1,01,7]
0,87
[0,650,91]
1,7
[1,32,1]
0,57
[0,430,74]
0,33
[0,210,48]
0,08
[0,040,11]
0,02
[0,020,03]
0,12
[0,090,17]
0,54
[0,410,64]
7,4
[6,69,6]
3,44
[2,894,27]
2,43
[2,032,94]
1,32
[0,921,62]
0,8
[0,660,94]
1,8
[1,352,1]
0,56
[0,490,75]
0,36
[0,260,6]
0,09
[0,060,13]
0,05
[0,020,08]
0,11
[0,080,16]
0,52
[0,430,61]
Примечания: * отличие от контроля с p<0,05.
рецидивирующими заболеваниями ЛОР орга
нов (нейтрофилы11a+: 99,7% [99,3%100,0%] и
нейтрофилы18+: 99,7% [99,2%99,9%] по срав
нению со здоровыми (99,15% [98,75%99,5%] и
98,75% [97,85%99,25%] соответственно (табл.
3). Повидимому, это обстоятельство и повы
шенная экспрессия CD28 на CD3+CD8+ лимфо
цитах (p=0,03) у исследуемой группы по сравне
нию с контролем свидетельствует о более высо
ком уровне активационных процессов в иссле
дуемой группе на фоне отсутствия клиничес
кой манифестации. Возможно, что поддержа
ние высокого уровня активности иммуноком
петентных клеток не может продолжаться бес
конечно долго и снижение их функциональной
активности должно приводить к рецидивам за
болевания [1,4,6].
8
Относительное количество, несущих рецеп
тор к липополисахариду (ЛПС), CD19+LPS +В
лимфоцитов было статистически достоверно
снижено по сравнению с контрольной группой
(p=0,032) при отсутствии достоверных отличий
относительного содержания Т и Влимфоци
тов в обеих группах, что может свидетельство
вать о том, что нарушения иммунного статуса
у детей с рецидивирующими респираторными
заболеваниями носят не столько количествен
ный, сколько функциональный характер нару
шений.
Сравнение показателей гуморального имму
нитета и фагоцитоза детей с рецидивирующи
ми заболеваниями ЛОРорганов и контрольной
группой не выявило статистически достоверных
отличий (табл. 4).
Immunopathology, Allergology, Infectology 2012 N°1
Иммунный статус: Иммунный статус детей с рецидивирующими заболеваниями ЛОР–органов
Таблица 2. Показатели абсолютного и относительного содержания субпопуляций лейкоцитов и лимфоцитов,
экспрессирующие рецепторы активации и апоптоза, у детей с рецидивирующими заболеваниями ЛОР органов
и группы контроля
Показатели
CD3+HLADR+
CD3+CD4+CD25+
CD3HLADR+
CD3+CD95+
CD3+CD4+CD95+
CD3+CD8+CD28+
CD71+
CD40+
CD154+
Группы обследованных
Me [LQ/UQ] в %
Опытная
Группа
группа (n=24)
контроля (n=20)
Абсолютное колво х 109 кл/л Me [LQ/UQ]
Опытная
Группа
группа (n=24)
контроля (n=20)
1,60
[1,202,20]
5,40
[4,107,80]
18,1
[15,620,7]
14,0
[10,818,8]
9,40
[7,7012,5]
29,15*
[24,834,35]
1,9
[1,22,5]
20,3
[17,225,2]
6,3
[3,212,9]
0,05
[0,040,09]
0,13
[0,110,2]
0,57
[0,420,72]
0,38
[0,290,81]
0,20
[0,130,37]
0,71
[0,470,88]
0,07
[0,040,11]
0,65
[0,520,84]
0,20
[0,120,35]
1,8
[1,33,3]
5,5
[4,657,7]
17,5
[14,3519,8]
16,3
[14,020,0]
10,6
[8,314,2]
23,8
[17,4530,8]
2,1
[1,73,15]
20,1
[16,821,9]
11,4
[5,7518,0]
0,07
[0,050,11]
0,14
[0,10,22]
0,56
[0,480,8]
0,54
[0,280,83]
0,24
[0,160,32]
0,50
[0,380,69]
0,08
[0,060,11]
0,66
[0,570,8]
0,4
[0,230,54]
Примечания:* отличие от контроля с p<0,05; ** отличие от контроля с p<0,01
Таблица 3. Показатели абсолютного и относительного содержания субпопуляций лейкоцитов и лимфоцитов,
экспрессирующие рецепторы адгезии и липополисахаридные рецепторы, у детей с рецидивирующими заболе
ваниями ЛОР органов и группы контроля
Показатели
нейтрофилы
CD11a+
CD18+
моноциты
CD11a+
CD18+
лимфоциты
CD11a+
CD18+
LPS+CD19+
LPS+CD3+
Группы обследованных
Me [LQ/UQ] в %
Опытная
Группа
группа (n=24)
контроля (n=20)
Абсолютное колво х 109 кл/л Me [LQ/UQ]
Опытная
Группа
группа (n=24)
контроля (n=20)
99,70*
[99,3100,0]
99,7**
[99,299,9]
99,15
2,81
[98,7599,5]
[2,134,44]
98,75
2,84
[97,8599,25] [2,134,35]
2,88
[2,33,75]
2,87
[2,323,67]
95,3
[92,197,7]
97,40
[93,998,7]
95,1
[91,2596,6]
97,4
[95,598,3]
0,36
[0,270,49]
0,36
[0,270,5]
0,44
[0,270,56]
0,44
[0,280,58]
46,1
[40,254,4]
98,3
[97,999,5]
0,2*
[0,10,4]
0,85
[0,51,35]
43,5
[34,650,4]
98,6
[96,4599,0]
0,4
[0,250,45]
1,1
[0,91,6]
1,70
[1,122,55]
3,37
[2,774,50]
0,01
[0,0040,02]
0,03
[0,020,06]
1,46
[1,241,82]
3,32
[2,874,02]
0,01
[0,010,019]
0,04
[0,030,06]
Примечания:* отличие от контроля с p<0,05; ** отличие от контроля с p<0,01.
Иммунопатология, Аллергология, Инфектология 2012 N°1
9
С.В. Зыблева, П.Д. Новиков
Корреляционный анализ с определением
ранговой корреляции Спирмана позволил уста
новить статистически достоверно более высо
кие корреляционные коэффициенты между
CD19+ и CD3HLADR+ субпопуляциями лим
фоцитов (r=0,98 p=0,0000) группы с рецидиви
рующими ЛОР заболеваниями (табл. 5) по
сравнению с показателями контрольной груп
пы (r=0,68 p=0,0008). Также было установлено
наличие статистически значимой прямой зави
симости (r=0,56 p=0,003) между CD154 + и
CD3+CD4+CD95+ субпопуляциями Тлимфоци
тов и отсутствие таковой связи в контрольной
группе.
Выводы
1. У детей в возрасте 26 лет с рецидивирую
щими заболеваниями ЛОР органов досто
верно повышен относительный уровень
нейтрофилов, экспрессирующих рецепто
ры адгезии CD18 (p=0,0059) и CD11a
(p=0,0169), по сравнению со здоровыми
детьми. Также достоверно повышено отно
сительное содержание субпопуляции
CD3 + CD8 + CD28 + лимфоцитов (p=0,02),
что указывает на избыточную активацию
иммунной системы даже в период клини
ческого выздоровления.
2. Статистически достоверно снижена экспрес
сия рецепторов к липополисахариду на
CD19+Влимфоцитах в группе с рецидивиру
ющими заболеваниями ЛОР органов по
сравнению с контролем (p=0,032).
3. Изменение CD3+CD8+CD28+, LPS+CD19+суб
популяций лимфоцитов, а также нейтрофи
лов, несущих рецепторы CD18 и CD11a, важных показателей клеточного иммуните
та, указывают на необходимость проведения
иммунокорригирующей терапии рецидиви
рующих респираторных заболеваний ЛОР
органов у детей из группы часто и длительно
болеющих и могут служить критериями из
лечения. Об этом свидетельствует и отсут
ствие различий традиционных показателей
гуморального иммунитета (ЦИК, С/, имму
ноглобулинов) в сравниваемых группах.
Таблица 4. Показатели гуморального иммунитета и фагоцитоза у детей с рецидивирующими заболеваниями
ЛОР органов и группы контроля
Показатели
Группы обследуемых (Me [LQUQ])
Опытная группа (n=24)
Группа контроля (n=20)
ЦИК
IgG
IgA
IgM
IgE
C3
C4
ФИ
ФЧ
35,0 [22,052,0]
9,37 [7,911,03]
0,83 [0,591,31]
1,01 [0,871,32]
38,6 [8,8154,1]
1,09 [0,971,27]
0,23 [0,190,29]
64,0 [51,081,0]
6,0 [5,08,0]
30,0 [22,040,4]
9,29 [6,749,95]
0,8 [0,581,08]
1,12 [0,831,33]
24,2 [2,676,5]
1,14 [1,061,19]
0,23 [0,210,27]
68,0 [57,077,0]
6,0 [5,08,0]
Таблица 5. Уровень корреляции между относительным количеством лейкоцитов и лимфоцитов периферической
крови у детей опытной и контрольной групп
Субпопуляции лимфоцитов
и лейкоцитов
Коэффициент корреляции, r (p)
Контрольная группа (n=20)
Опытная группа (n=24)
CD19+ / CD3HLADR+
CD19+ / CD40+
CD40+ / CD3HLADR+
CD154+/CD3+CD4+CD95+
+0,68 (р=0,0008)
+0,70 (р=0,001)
+0,58 (р=0,01)
0,13 (р=0,6)
+0,99 (р=0,0000)
+0,79 (р=0,00003)
+0,80 (р=0,00001)
+0,56 (р=0,003)
10
Immunopathology, Allergology, Infectology 2012 N°1
Иммунный статус: Иммунный статус детей с рецидивирующими заболеваниями ЛОР–органов
Литература
1. Новиков Д.К. Новиков П.Д. Клиническая иммунопа
тология. Москва, 2009: 448 с.
2 . Порядин Г.В., Салмаси Ж.В., Казимирский А.Н.
Активационные маркеры лимфоцитов как показате
ли дизрегуляции иммунной системы при воспале
нии. Патологич. физиология и эксперимент. тера
пия, 2006; № 1: 2–7.
3. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Оценка иммунного статуса чело
века в норме и при патологии. Иммунология 2001; № 4: 4–6.
4. Ярилин А.А. Симбиотические взаимодействия клеток
иммунной системы. Иммунология 2001; 4: 1620.
5. Халафян А.А. Статистический анализ данных. М., 2006.
6. Don M. Recurrent respiratory infections and phagocytosis in
childhood. Pediatr. Int. 2007; 49: 4047.
Сведение об авторах:
Зыблева Светлана Валерьевна, врачиммунолог
246000 Беларусь, Гомель, ул. Ильича, 290. Республиканский научнопрактический центр радиационной медицины и экологии человека, отделение иммуно
патологии и аллергологии
Тел.: (80232) 389708, факс (80232378097)
Email: [email protected]
Новиков Павел Дмитриевич, д.м.н., профессор кафедры клинической иммунологии и аллергологии ВГМУ
210023 Витебск, пр. Фрунзе 27
Тел.: (80232) 225380
Поступила 4.12.2011 г.
Иммунопатология, Аллергология, Инфектология 2012 N°1
11