68 иммунные изменения в периферической крови беременных

68
УДК 618.3-06.616.98:578.825.11
ИММУННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ
БЕРЕМЕННЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ ОБОСТРЕНИЕ В ПЕРИОД
ГЕСТАЦИИ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
М.Т. Луценко, А.С. Соловьева
Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН
[email protected]
Установлено, что при обострении герпес-вирусной инфекции во время гестации
происходят тяжелые изменения в иммунной системе беременных. Обострение герпесвирусной инфекции сопровождается снижением в периферической крови содержания
IL-2 и резким повышением IL-1, NK CD16, а также TNFα.
Ключевые слова: иммунные показатели, герпес, интерлейкины.
IMMUNE CHANGES IN PERIPHERAL BLOOD PREGNANT,
TRANSFERRED AN AGGRAVATION DURING THE PERIOD
GESTAZEI A HERPES-VIRUS INFEKTION
M.T. Lutsenko, A.S. Solovieva
Far Eastern Research Center for Physiology and Respiratory Pathology of SB RAMS
[email protected]
It is established that at an aggravation of a herpes-virus infection in time gestation occur
heavy to changes to immune system pregnant. An aggravation herpes-virus infection it is
accompanied by decrease in peripheral blood of the contents IL-2 and sharp increase IL-1,
NK CD16 and TNFα.
Key words: immune parameters, herpes, interleukine.
Гуморальный иммунный ответ подразумевает продукцию специфических антител
при обострении
во время
беременности
герпес-вирусной инфекции.
в ответ на воздействие чужеродного антиге-
Иммунная реакция начинается с рас-
на. Основную роль в этой реакции играют
познавания чужеродного антигена и связы-
B-лимфоциты, которые под влиянием анти-
вания его со специфическим рецептором
генного стимула дифференцируются в анти-
на мембране зрелого лимфоцита. Такие
телопродуценты. При этом в содружество
специфические рецепторы предсуществуют
к B-лимфоцитам подключаются T-хелперы
на мембранах лимфоцитов уже до встре-
и антигенпрезентирующие клетки [2, 3, 4].
чи с антигеном [1]. Связывание антигена
Задачей настоящего исследования явля-
с антигенраспознающим рецептором акти-
ется показать участие и характер функцио-
визирует лимфоцит и усиливает его проли-
нирования основных иммунных факторов
ферацию, что приводит к накоплению клона
фундаментальные исследования №2, 2010
69
антигенспецифических лимфоцитов и при-
ведены с учетом требований Хельсинской
обретению
функций.
декларации Всемирной ассоциации «Эти-
Антиген в конечном итоге обречен на эли-
ческие принципы проведения научных ме-
минацию с участием в этом процессе фа-
дицинских исследований с участием чело-
гоцитарных клеток NK-лимфоцитов [5, 6].
века» с поправками 2000 г. и «Правилами
Ключевой момент специфического иммун-
клинической практики в Российской Феде-
ного ответа — это ответ CD4-лимфоцитов
рации», утвержденными Приказом Минз-
хелперов на распознавание антигена. Диф-
драва РФ от 19.06.2003 г. №266.
ими эффекторных
ференцировка CD4-лимфоцитов контроли-
Изучение иммунного статуса беремен-
руется цитокинами, образующиеся в ходе
ных осуществляли с помощью стандарт-
воспалительной реакции в присутствие IL-
ных и унифицированных тестов 1-го и 2-го
12 и IL-γ. CD-лимфоциты дифференциру-
уровней по Р. Хаитову. IL-2 определяли
ются в воспалительные TH-клетки, которые
с использованием моноклональных анти-
начинают продуцировать IL-2 и IL-γ.
тел фирмы ООО «Протеиновый контур»
Материалы и методы исследования
(Санкт-Петербург);
Всего обследовано 210 беременных в воз-
IFNγ, IL-1, IL-4, IL-8 — c использованием
расте от 18 до 35 лет, находящихся на раз-
наборов моноклональных антител фирмы
личных этапах. Исследования проводились
ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск); TNFα —
на базе стационара акушерского отделе-
c использованием
ния клиники Дальневосточного научного
кин» (Санкт-Петербург). Все исследования
центра физиологии и патологии дыхания
проводились на анализаторе иммунофер-
СО РАМН. Все исследования были про-
ментных реакций «Униплан» АИФР-01,
иммуноглобулины
наборов
ООО «Цито-
Таблица 1
Активность интерлейкинов у беременных с герпес-вирусной инфекцией, пг/мл
Интерлейкины
IL-1
IL-2
IL-4
IL-8
TNFα
ИФНα
ИФНγ
Обострение
в I триместре
(1:12800)
80,0±1,9
p<0,001
15,0±2,9
p<0,001
35,5±1,1
p<0,001
102,5±5,8
p<0,001
90,4±2,8
p<0,001
52,0±1,4
p<0,001
450,0±0,001
p<0,001
Через 1 мес.
после обострения
18,6±1,2
p<0,001
529,5±12,3
p<0,001
28,9±0,9
p<0,01
12,6±2,0
p<0,05
13,7±0,6
51,5±1,6
p<0,001
130,2±2,1
p<0,05
Обострение
в III триместре
(1:12800)
74,95±1,4
p<0,001
101,0±2,0
p<0,001
33,0±1,8
p<0,001
44,0±0,9
p<0,001
51,5±1,9
p<0,001
60,4±2,2
p<0,001
480,5±20
p<0,001
Контроль
14,7±0,5
38,4±0,9
24,5±1,2
18,0±0,6
12,0±0,7
44,0±1,1
138,9±2,4
Примечание: p<0,05; p<0,01; р<0,001 — статистически достоверные различия по сравнению с контролем
фундаментальные исследования №2, 2010
70
Одновременно
на пике герпес-вирусной воспалительной
проводились исследования на проточном
реакции у беременных составило 42,6±1,2
цитофлюориметре «Beckman Coulter Epics
(контроль — 50,0±1,4 %). В перифери-
XL-MCL» (USA). Титр антител к вирусу
ческой крови увеличивается содержа-
герпеса определяли иммуноферментным
ние NK CD16 до 15,8±0,7 (контроль —
методом (ИФА) на спектрофотометре «Stat-
10,0±0,1%) (табл. 2). В присутствии IL-4
Fax-2100» (США).
CD-лимфоциты дифференцируются в хел-
ЗАО «Пикон»
(Москва).
Полученные данные
перы TH-2, которые начинают продуциро-
При обострении герпес-вирусной ин-
вать IL-4, IL-5, IL-6 и TNFα. В силу этих
фекции (титр антител — 1:12800) количе-
обстоятельств запускается реакция гу-
ство IL-2 увеличивается в периферической
морального иммунного ответа — синтез
крови до 101,0±2,0 пг/мл. После стиха-
специфических антител иммуноглобули-
ния процесса содержание IL-2 снижается
нов.
до 38,4±0,9 пг/мл. Аналогичная картина
Продукция иммуноглобулинов при обо-
наблюдается и в адрес INFγ. На высо-
стрении герпес-вирусной инфекции вы-
те обострения герпес-вирусной инфек-
глядит
ции количество γ-интерферона возрастает
обострении увеличивается до 2,72 усл.
до 480,5±20,0 пг/мл. Через месяц после
ед. (контроль — 1,81 усл. ед.), IgG остает-
воспаления
ся в пределах — 13,1 усл. ед., а IgA сни-
содержание
его снижается
следующим
образом:
IgM при
до 138,9±2,4 пг/мл (табл. 1). Следует от-
жается
при герпес-вирусной
инфекции
метить, что содержание CD4-лимфоцитов
до 1,18 усл. ед. (контроль — 2,13 усл. ед.).
Таблица 2
Показатели клеточного иммунитета у беременных с обострение герпес-вирусной
инфекции с различной интенсивностью титра антител, % (метод лазерной
проточной цитофлюориметрии)
CD3+,
CD19+, CD3─ CD3+, CD19─
CD4+
B-лимфоциты T-лимфоциты
Т-хелперы
I триместр
(титр
антител —
1:12800)
II триместр
(титр
антител —
1:3200)
III
триместр
(титр
антител —
1:1800)
Контроль
CD3─,
CD3+, CD8─
CD16+
Т-супрессоры
NK
CD3+,
CD56+
T-NK
CD3─,
CD25+
CD3+
HLA DR
12,5±0,4
p<0,001
8,4±0,4
p<0,001
14,3±0,8
p<0,001
52,1±1,2
p<0,001
42,6±1,2
p<0,001
9,5±0,9
p<0,001
15,8±0,7
p<0,001
14,4±0,8
p<0,001
15,4±0,8
p<0,05
62,2±1,4
p<0,001
48,5±0,9
p<0,001
13,7±1,4
p<0,001
12,8±0,3
p<0,001
13,1±0,4 11,14±0,8 8,1±0,9
p<0,001 p<0,001 p<0,001
15,8±1,1
p<0,05
65,0±1,3
p<0,001
46,9±0,6
p<0,001
18,1±1,1
p<0,001
11,8±0,5
p<0,01
12,0±0,2
p<0,001
8,7±0,7
p<0,001
5,8±0,8
p<0,001
19,6±1,2
70,9±0,9
50,0±1,4
20,0±1,5
10,0±0,1
12,0±0,1
2,0±0,1
4,5±0,6
Примечание: р<0,05, р<0,01, р<0,001 — статистически достоверные различия по сравнению с контролем
фундаментальные исследования №2, 2010
71
Выработка IgG и IgA остается сниженной, несмотря на обострение инфекции.
Нарушения
специфического
клеточно-
стрения его выработка восстанавливается
до 529,5±12,3 пг/мл.
Количество
Т-хелперов
снижает-
обоснованного иммунного ответа могут
ся с 50,0±1,4% (контроль) до 42,6±1,2%
быть следствием вмешательства инфекци-
при обострении герпес-вирусной инфекции
онного начала, которое препятствует транс-
(табл. 2).
крипции антител, а также складывается
Макрофаги принимают самое активное
ситуация, когда нарушается экспрессия им-
участие в неспецифической защите от ви-
муноглобулинов на клеточных мембранах.
руса герпеса, запуская иммунный ответ.
Возбудители герпеса способны снижать
На мембране микрофагов экспрессированы
экспрессию антигенов МНС I и II классов
различные рецепторы для захвата микро-
адгезионных молекул ICAM-I и LFA3.
организмов: манозный рецептор (MMR),
Заключительная часть нарушений связана
scavenger-рецептор
с генетическими или приобретенными де-
для бактериальных
фектами продукции иммунокомпетентных
(CD14).
(MSR);
рецепторы
липополисахаридов
клеток или их функций. Среди факторов,
Экспрессия всех этих рецепторов регули-
предрасполагающих к развитию иммуноде-
руется воспалительными цитокинами. Экс-
фицитов, наиболее вероятными нужно счи-
прессией их определяется роль макрофагов
тать генетические дефекты и факторы окру-
как барьера на пути проникновения и рас-
жающей среды. Следует обратить особое
пространения в организме различных воз-
внимание на социальные причины: алкого-
будителей.
лизм, наркомания, табакокурение, которые
Взаимодействие микроорганизма с ма-
могут стать провоцирующими в обострении
крофагами
влечет
за собой
несколько
персистирующих инфекций организма.
следствий. Микроорганизм захватывается
Вследствие токсического действия про-
и переваривается внутри макрофага (рису-
дуктов возбудителя на лимфоидную систе-
нок 1 а,б). Макрофаги помимо этого анти-
му подавляется не только секреторная ак-
гена презентуют на поверхность клеточной
тивность иммунокомпетентных клеток, но и
мембраны, в силу чего осуществляется вза-
снижается уровень их образования.
имодействие его с Т-лимфоцитами (схема
Так, при высокой степени агрессивно-
1).
сти герпес-вирусной инфекции (титр анти-
На мембране макрофагов экспрессирова-
тел — 1:12800) подавляется выработка
ны рецепторы для многих регулирующих
В-лимфоцитов до 14,3±0,8% (контроль —
цитокинов, главным среди которых являет-
19,6±1,2). Следовательно, выработка IL-2
ся TNFγ.
показыва-
Среди продуктов секреции макрофагов
ют исследования, при вспышке герпес-
главное место занимают противовоспали-
вирусной инфекции содержание IL-2 в пе-
тельные продукты: IL-1, IL-6, TNF, IL-8,
риферической крови снижается до 15,0±2,9
а также противовоспалительные цитокины:
пг/ мл, и только через месяц, после обо-
IL10, TGF. Продукты макрофагов обеспечи-
снижается
в организме.
Как
фундаментальные исследования №2, 2010
72
фундаментальные исследования №2, 2010
73
а
б
Макрофаги периферической крови беременных, перенесших обострение герпес-вирусной
инфекции: а — макрофаг, поглотивший большое количество продуктов тканевого распада и возбудителей инфекционного процесса. Увел. ×5000; б — фагосома, внутри которой
остатки непереваренного продукта. Электронная микроскопия. Увел. × 25000
вают адгезию лейкоцитов к эндотелию сосу-
В период обострения герпес-вирусной
дов и последующую трансэндотелиальную
инфекции
миграцию — TNF, IL-8.
ской крови отмечается увеличение IL-1
На инфекционное начало (герпес-вирус­
у беременных
в перифериче-
до 80,0±1,9 пг/мл (контроль — 14,7±0,5).
ная инфекция) клетки отвечают спонтанным
Дисфункция макрофагов становится след-
синтезом IL-1. IL-1 входит в группу проти-
ствием дефектов гуморальных факторов.
вовоспалительных цитокинов со способ-
Снижение защитных факторов макрофагов
ностью стимулировать Т- и В-лимфоциты,
наступает вследствие подавления активно-
усиливать клеточную пролиферацию, ини-
сти миэлопероксидазы, глюкоза-6-сульфата,
циировать или супрессировать экспрессию
дегидрогеназы, кислой и щелочной фосфа-
отдельных генов. С повышением уровня
таз. У беременных при обострении герпес-
этого цитокина в крови происходит актива-
вирусной инфекции содержание фермента
ция эндотелиальных клеток с повышением
глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы снижается
на их поверхности адгезионных молекул,
до 36,39±1,95 МЕ/л109 эритроцитов (кон-
активация нейтрофилов, синтез коллагенов.
троль — 79,4±2,1 МЕ/л109 эритроцитов).
фундаментальные исследования №2, 2010
74
При этом одновременно в периферической
крови нарастает содержание TNFα.
Выводы
Вспышка
3. Луценко М.Т. Вирусные заболевания
дыхательной системы беременной и проблемы фетоплацентарной
герпес-вирусной
инфекции
во время беременности является тяжелым
недостаточно-
сти // Бюл. физиол. и патол. дыхания. —
2003. — Вып.13. — С. 7–12.
осложнением для иммунной системы орга-
4. Луценко М.Т., Соловьева А.С. Ме-
низма. Прежде всего подавляется выработ-
ханизмы изменений иммунной системы
ка антител к вирусному антигену: снижает-
у беременных с герпес-вирусной инфекци-
ся процентное содержание В-лимфоцитов
ей. — Благовещенск: ДНЦ ФПД СО РАМН,
и секреция IL-2. Подавляется активность
2007. — 170 с.
фагоцитарной активности. Наряду с этим
5. Лыков А.П., Козлов В.А. Натураль-
в периферической крови увеличивается со-
ные киллеры и гемопоэз // Иммунология. —
держание патологически действующих ком-
2001. — №1. — С. 10–14.
понентов: TNFα, IL-1, IL-4, IL-8.
6. Новицкий В.В., Наследникова И.О.
Список литературы
Изменения продукции иммунорегулятор-
1. Ершов Ф.И., Наровлянский М.В., Ме-
ных цитокинов мононуклеарами крови
зенцева М.В. Ранние цитокиновые реакции
при хронической герпес-вирусной инфек-
при вирусных инфекциях // Цитокины и вос-
ции // Клин. лабор. диагностика. — 2005. —
паление. — 2004. — Т.3. — Вып. 3 (1). —
№5. — С. 43–45.
С. 3–8.
2. Исаков В.А., Борисова В.В., Исаков Д.В. Герпес: патогенез и лабораторная
диагностика. — СПб.: Лань, 1999. — 190 с.
фундаментальные исследования №2, 2010