CYTO-STAT®/ COULTER CLONE® CD8-ECD IOTest® CD8

Реклама
CYTO-STAT®/
COULTER CLONE®
CD8-ECD
IOTest® CD8-PC7
737659 – 50 тестов
737661 – 100 тестов
Ч.№ 737683-CB
Специфичность
Клон
Гибридома
Иммуноген
Подкласс иммуноглобулина
Вид
Источник
Очистка
Флуоресценция
Конъюгат
Молярная концентрация
Определение светорассеивания
МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО
НЕ ПОДЛЕЖИТ РАСПРОСТРАНЕНИЮ В США ИЛИ
КАНАДЕ
НАЗНАЧЕНИЕ
CYTO-STAT/COULTER CLONE CD8-ECD (CD8)
или IOTest CD8-PC71 являются реагентами
с флуоресцирующими мышиными моноклональными
антителами, используемыми для идентификации
и подсчёта процента CD8+ (супрессоров/
цитотоксических) лимфоцитов в цельной крови
с помощью проточной цитометрии.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ И ОБЪЯСНЕНИЕ
Популяция лимфоцитов периферической крови
человека состоит из клеток трёх типов – Т
(происходящие из тимуса), В (происходящие из
костного мозга) и нулевые клетки. Эти типы клеток при
изучении микроскопией морфологически неотличимы,
но могут быть идентифицированы по специфическим
антигенным отличиям клеточных мембран.
Можно выделить два основных типа Т-лимфоцитов,
в соответствии с их функциями и поверхностными
белками. Это индукторы (CD4+)
и супрессоры/цитотоксические (CD8+) Т-лимфоциты.2,3
CD8
Антиген CD8 обладает молекулярной массой 76 kd.1,4
В норме он экспрессируется на большей части
тимоцитов (около 80%)5 и примерно на 30-35%
Т-лимфоцитов периферической крови.4,5 CD8+
лимфоциты играют ключевую роль в регуляции
иммунного ответа за счёт своей супрессорной
и цитотоксической активности.2,3,6 CD8 связывается
с антигеном главного комплекса гистосовместимости
I класса (MHCI) на клетках-мишенях.4
КЛИНИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ
CD8
Идентификация аномальных уровней лимфоцитов
CD8+ может помочь при диагностировании и/или
прогнозировании иммунодефицитных состояний, таких
как агаммаглобулинемия, аплазия вилочковой железы
(синдром Диджорджа) и агаммаглобулинемия
швейцарского типа.7,8 Также могут оказаться
диагностически и/или прогностически значимыми
исследования, показавшие, что повышенные уровни
CD8+ клеток связаны с вирусными инфекциями,
такими как гепатит В, Эпштейна-Барра
и цитомегаловирус.9,10
CD8-ECD
CD8
SFCI21Thy2D35,6,22,23
NS/1-AG4 x BALB/c
Тимоциты человека
IgG123
Мышь
Специальная среда
Аффинная хроматография
Возбуждается светом длиной волны 486-580 nm/
светоизлучает на длине волны 610-635 nm
ECD (Фикоэритрин-Texas Red®-X)
ECD/белок 0,5-1,5
Переднее и (или) боковое
CD4/CD8
Изменения уровней CD4+ (CD4) и/или CD8+ (CD8)
лимфоцитов, связанные с заболеваниями, могут
изменить CD4/CD8 соотношение числа индукторов:
супрессоров/цитотоксических клеток. Поэтому
соотношение CD4/CD8 может оказаться полезным при
диагностировании и/или прогнозировании в качестве
индикатора состояния иммунного статуса организма.
Соотношения CD4/CD8 в сочетании с числом
CD4+ лимфоцитов являются наиболее широко
используемыми в лабораториях параметрами оценки
комплекса, связанного со СПИДом и собственно
СПИДа.9,11 Соотношения CD4/CD8 падают до нуля
у пациентов на продвинутой стадии СПИДа, когда
наличие CD4+ лимфоцитов не фиксируется вообще.9
При этом уровень CD8+ лимфоцитов может быть
нормальным, повышенным или пониженным.
Изменения соотношения CD4/CD8 и уровней CD4+
и CD8+ лимфоцитов могут появляться при таких
аутоиммунных заболеваниях, как рассеянный
склероз (MS) и системная красная волчанка (SLE).
Повышенное соотношение CD4/CD8 и пониженные
уровни CD4+ и CD8+ лимфоцитов наблюдались
у пациентов с прогрессирующим (активным)
рассеянным склерозом.12-14 Паттерн лимфоцитарного
ответа при красной волчанке, по-видимому, отражает
активность клинической формы заболевания и степень
вовлечённости органов в процесс развития
заболевания.15-19 А именно, высокие соотношения
CD4/CD8 и повышенный процент CD4+ лимфоцитов
были обнаружены у пациентов с активной/неактивной
волчанкой при мультисистемном распространении
заболевания, включая увеличение лимфатических
узлов, но при незначительной патологии или полном
отсутствии патологии почек.15,16 Высокие соотношения
CD4/CD8, но пониженный процент CD8+ лимфоцитов
были задокументированы у пациентов со схожей
активной стадией волчаники.17 Далее, высокий
уровень CD4+ и низкий уровень CD8+лимфоцитов был
обнаружен у пациентов на активной стадии волчанки
с поражением центральной нервной системы, но при
полном отсутствии повреждения почек.18 При этом
у пациентов с активной/неактивной волчанкой,
проявляющейся в тяжёлом заболевании почек и/или
тромбоцитопенической анемией были отмечены
низкие соотношения CD4/CD8 и пониженный
процент CD4+ лимфоцитов.15,16 У других пациентов
с активной/неактивной волчанкой были отмечены как
низкий процент CD4+ лимфоцитов, так и высокий
процент CD8+.19 И наконец, нормальные соотношения
CD4/CD8 были зарегистрированы у пациентов
с широко распространившейся мультисистемной
красной волчанкой, которая часто включает в себя
поражение почек и центральной нервной системы.15,16
1 of 4
CD8-PC7
CD8
SFCI21Thy2D35,6,22,23
NS/1-AG4 x BALB/c
Тимоциты человека
IgG123
Мышь
Специальная среда
Аффинная хроматография
Возбуждается светом длиной волны 486-580 nm/
светоизлучает на длине волны 710-800 nm
PC7 (Фикоэритрин-Cy7)
PC7/белок 0,5-1,5
Переднее и (или) боковое
Высокое соотношение CD4/CD8 было обнаружено
у пациентов с аплазией вилочковой железы.7
Пониженный процент CD4+ и повышенный процент
CD8+ лимфоцитов без значительного изменения
соотношения CD4/CD8 наблюдались у пациентов со
стабильной функцией почечного аллотрансплантата
после трансплантации.20
Низкие соотношения CD4/CD8 и пониженный процент
CD4+ лимфоцитов наблюдался у пациентов во время
фенотипического восстановления после аутологичной
трансплантации очищенного костного мозга.21
ПРИНЦИПЫ ТЕСТИРОВАНИЯ
Этот тест полагается на способность моноклонального
антитела связываться с поверхностью клеток,
экспрессирующих определённые антигенные
детерминанты. CYTO-STAT/COULTER CLONE
CD8-ECD или IOTest CD8-PC7 являются мышиными
моноклональными антителами, специфичными
к поверхностному антигену клетки. Специфическое
мечение клеток достигается за счёт инкубации
цельной крови с реагентом CYTO-STAT/ COULTER
CLONE или IOTest. Красные клетки крови
подвергаются лизису, а оставшиеся белые клетки
крови анализируются с помощью проточной
цитометрии с использованием селекторов
лимфоцитов. Для каждой пробы определяется
процент положительно-окрашенных лимфоцитов.
Вторая идентичная проба цельной крови метится
изотипическим контролем CYTO-STAT/
COULTER CLONE MsIgG1-ECD или IOTest IgG1-PC7
для оценки неспецифической фоновой
флуоресценции. (Марка изотипического контроля
должна соответствовать марке моноклонального
антитела.)
РЕАКТИВЫ
Смотрите таблицу выше.
СОСТАВ РЕАГЕНТОВ
Концентрация антитела в CYTO-STAT/
COULTER CLONE – 0,5 µg/тест. Обратитесь
в сервисный центр компании Beckman Coulter, чтобы
получить концентрацию антитела в IOTest реагент.
Результирующая концентрация входящих в продукт
помимо антител реагентов составляет 0,2% БСА,
0,01 M фосфата калия, 0,15 M NaCl, 0,1% NaN3
и стабилизаторы в 0,5 mL (1 флакон) антител
CYTO-STAT/COULTER CLONE и 1,0 mL (1 флакон)
антител IOTest.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ
1. Этот реагент содержит азид натрия. Азид натрия
в кислотной среде образует азотистоводородную
кислоту, являющуюся исключительно токсичным
соединением. Во время утилизации соединения
азида следует смывать проточной водой.
Рекомендуется соблюдение этих
предосторожностей для избежания образования
отложений в металлических трубах, что может
создавать взрывоопасные условия. При попадании
в глаза или на кожу, тщательно промойте водой.
2. Не используйте антитело после даты истечения
срока годности, указанной на этикетке.
3. С пробами и всеми материалами, с ними
соприкасающимися, следует работать как
с потенциально передающими инфекцию
и утилизировать их с соответствующими мерами
предосторожности.
4. Никогда не пипетируйте ртом и избегайте контакта
проб с кожей и слизистыми оболочками.
5. Минимизируйте воздействие яркого света на
реагент при хранении или инкубации.
6. Инкубация или центрифугирование в течение
времени и при температурах, отличных от
указанных могут привести к искажению
результатов.
7. Избегайте бактериального загрязнения реагентов,
так как оно может привести к ошибочным
результатам.
8. При попадании в организм существует опасность
отравления.
9. При попадании на кожу немедленно промойте
большим количеством воды.
10. При сборе данных без помощи автоматического
анализа и пользуясь при этом системами
проточной цитометрии FC 500 с программным
обеспечением CXP, убедитесь, что значение
"Events" (события) выставлено на 100% для всех
точечных диаграмм.
11. Следуйте надлежащей лабораторной практике
(GLP) при работе с реагентом.
12. Перед сообщением результатов, перепроверьте
все гистограммы.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
Не требуется. Реагенты с моноклональными
антителами CYTO-STAT/COULTER CLONE и IOTest не
требуют разведения или центрифугирования
и используются прямо из флакона. Все реагенты
перед использованием следует довести до 20-25°C.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Невскрытый реагент сохраняет стабильность до
истечения срока годности, указанного на этикетке, при
хранении при температуре 2-8°C. Открытый реагент
сохраняет стабильность в течение 90 дней после
вскрытия при хранении при температуре 2-8°C. Сразу
после использования верните реагент к 2-8°C.
Избегайте замораживания и воздействия света.
ПРИЗНАКИ РАЗРУШЕНИЯ
Любое внешнее изменение реагентов* или
значительные колебания значений, полученных на
контрольных пробах, могут указывать на разрушение
реагентов, и в таком случае их не следует
использовать.
* Нормальный внешний вид реагентов
Помеченные ECD: Прозрачная жидкость, окрашенная
от розового до красногоцвета
Помеченные PC7: Прозрачная жидкость, окрашенная
от фуксинно-красного до фиолетового цвета.
ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
ВНИМАНИЕ: Стабильность проб крови очень
изменчива. Для оптимальных результатов начинайте
анализ в течение 6 часов после венепункции.
Непомеченная, предохраняемая от свёртывания кровь
до начала процедуры должна храниться при
температуре 20-25°C. Не охлаждайте.
Заберите венепункцией в асептических условиях
пробу венозной крови в пробирку для забора крови,
используя соответствующий антикоагулянт
(рекомендуется ЭДТА). За подробной информацией
о сборе цельной крови венепункцией и влияющих на
него условиях, обратитесь к опубликованному Clinical
and Laboratory Standards Institute "Procedures for the
Collection of Diagnostic Blood Specimens by
Venipuncture (H3), Approved Edition". Для каждого теста
требуется 100 µL цельной крови. Соберите достаточно
крови (от 1 до 2 mL на пробирку) для проведения
тестов и постановки контроля, и храните аутологичную
плазму на случай необходимости разведения пробы.
Следует провести подсчёт белых клеток крови.
ПРОЦЕДУРА
ИММУННОФЛУОРЕСЦЕНТНОГО
МЕЧЕНИЯ КЛЕТОЧНОЙ ПОВЕРХНОСТИ
МОНОКЛОНАЛЬНЫМИ АНТИТЕЛАМИ
CYTO-STAT/COULTER CLONE ИЛИ
IOTEST
ПРЕДОСТАВЛЕННЫЕ МАТЕРИАЛЫ
CYTO-STAT/COULTER CLONE CD8-ECD
Моноклональное антитело,
Ч.№ 737659 - 50 тестов (0,5 mL)
ИЛИ
IOTest CD8-PC7 Моноклональное антитело,
Ч.№ 737661 - 100 тестов (1,0 mL)
ТРЕБУЕМЫЕ, НО НЕ ПРЕДОСТАВЛЯЕМЫЕ
МАТЕРИАЛЫ
Агент лизиса эритроцитов (по необходимости):
Система реагентов COULTER® IMMUNOPREP™ для
рабочей станции COULTER Q-PREP™,
Ч.№ 7546946 - 100 тестов
Разбавитель (при необходимости) аутологичная
плазма
ИЛИ
Система реагентов COULTER IMMUNOPREP для
рабочих станций COULTER MULTI-Q-PREP™ или
TQ-Prep™, Ч.№ 7546999 - 300 тестов
Разбавитель (по требованию) аутологичная плазма
Флуоросферы Flow-Count™, Ч.№ 7547053
(дополнительный реагент)
Изотипический контроль MsIgG1-ECD
ИЛИ
Изотипический контроль IOTest IgG1-PC7
Ч.№ 737662
Клетки контроля COULTER CYTO-TROL™
Ч.№ 6604248
ИЛИ
Клетки контроля IMMUNO-TROL™, Ч.№ 6607077
ИЛИ
Низкочисленные клетки контроля IMMUNO-TROL,
Ч.№ 6607098
Фосфатный буферизированный физиологический
раствор (PBS), Ч.№ 6603369
тест-пробирки 12 х 75 mm
Пробирки для забора крови с антикоагулянтом
(рекомендуется ЭДТА)
Пипетки для переноса
Вихревой смеситель
2 of 4
Центрифуга
Проточный цитометр (Обратитесь к главе Требуемое
оборудование)
Счётчик клеток или гемацитометр
Фильтры к проточному цитометру EPICS™ XL™/
XL- MCL™ с полосой пропускания 755 nm,
Ч.№ 3814358, и фильтр, блокирующий лазер в 500 nm,
Ч.№ 3814357, для фиксирования PC7 флуоресценции
ТРЕБУЕМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ
Проточный цитометр, который обеспечивает
намагничивание и замеряет испускание
светорассеивания и флуоресценцию, как указано
в таблице на странице 1 и применимо для Вашего
специфического продукта. Пользователи должны
обратиться к руководствам изготовителя прибора за
специфическими инструкциями для установки
напряжения фотоэлектронного умножителя
и флуоресцентной компенсации до проведения
анализа.
ПРОЦЕДУРА
1. Оптимальное мечение достигается при количестве
белых клеток крови в пределах
3-10 х 103 клеток/µL. При числах белых клеток
крови, превышающих 10 х 103 клеток/µL
необходимо разбавление, а при числах белых
клеток крови ниже 3 х 103 клеток/µL необходимы
центрифугирование и ресуспензирование для
получения чисел в пределах 3-10 х 103 клеток/µL.
При использовании системы реагентов
COULTER IMMUNOPREP в качестве разбавителя
рекомендуется использовать аутологичную плазму.
Аномальные пробы
a. Большое число белых клеток крови
(>10 x 103 клеток/µL) следует разбавить до
получения чисел в диапазоне
3-10 x 103 клеток/µL.
b. Малое количество белых клеток крови
(<3 x 103 клеток/µL) – Используйте метод
лейкоцитных плёнок
1) Центрифугируйте кровь при 20-25°C на
500 x g в течение 5 минут.
2) Отберите лейкоцитную плёнку пастеровской
пипеткой, забрав частично красные клетки
крови и немного плазмы, чтобы быть
уверенным, что все белые клетки крови
извлечены.
3) Полностью ресуспензируйте клетки,
несколько раз перемешав пастеровской
пипеткой.
4) Определите концентрацию клеток,
используя счётчик клеток или гемацитометр.
5) Доведите разбавителем концентрацию
клеток до 10 x 103 клеток/µL. Добавьте
100 µL к антителу и следуйте стандартной
процедуре.
2. Вместе с каждой пробой следует прогонять
соответствующий изотипический контроль. Для
каждой пробы промаркируйте две тест-пробирки
12 x 75 mm, одну под моноклональные антитела
и другую под изотипический контроль. Добавьте
в каждую тест-пробирку по 100 µL пробы венозной
крови. Следует избегать загрязнения края или
стенок тест-пробирок кровью, потому что это может
привести к неполному лизису.
3. Добавьте 10 µL реагента CYTO-STAT/
COULTER CLONE CD8-ECD в маркированные
пробирки. Или же добавьте в маркированные
текст-пробирки по 10 µL реагента IOTest CD8-PC7
или IOTest IgG1-PC7.
4. Аккуратно смешайте, пользуясь вихревым
смесителем. При использовании системы
реагентов COULTER IMMUNOPREP инкубируйте
реакционные смеси при 20-25°C в течение
10-12 минут.
ВАЖНО: Если капли реагента остаются у края тестпробирки, их следует удалить, иначе нелизированные
красные кровяные клетки могут загрязнить образец
и исказить результаты. Для их удаления можно
использовать ватную палочку.
5. Лизируйте красные кровяные клетки в каждой из
тест-пробирок, следуя рекомендуемой для
выбранного метода лизиса процедуре (система
реагентов COULTER IMMUNOPREP с рабочей
станцией COULTER Q-PREP, MULTI-Q-PREP или
TQ-Prep). Проба CD8-ECD готова к анализу
проточной цитометрией. Для подготовки CD8-PC7,
следуйте указаниям ниже.
Продолжение подготовки CD8-PC7
6. Центрифугируйте пробы в течение 4-x минут при
400 x g при комнатной температуре.
7. Аспирируйте или отфильтруйте надосадочную
жидкость и размешайте на вихревом смесителе.
8. Ресуспензируйте клеточный осадок, добавив 1 mL
PBS.
Анализ прочной цитометрией
ВНИМАНИЕ: Если лазер на проточном цитометре не
верно выровнен или неправильно установлены
селекторы, результаты могут оказаться ошибочными.
Анализируйте клетки на проточном цитометре,
правильно выровненном и использующем селектор
лимфоцитов в соответствии с руководством по
прибору.
ПРОЦЕДУРА КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА
В качестве положительного контроля для обеспечения
правильных условий работы следует использовать
клетки контроля COULTER CYTO-TROL
(Ч.№ 6604248), клетки контроля IMMUNO-TROL
(Ч.№ 6607077) или низкочисленные клетки контроля
IMMUNO-TROL (Ч.№ 6607098). Или же в качестве
положительного контроля для обеспечения
правильных условий работы можно прогнать пробу от
нормального здорового донора. Следует установить
нормальные диапазоны на основе локальной
популяции нормальных доноров.
Специфическое и/или неспецифическое связывание
Fc-фрагмента антител с моноцитами и гранулоцитами
пробы можно исключить с помощью правильного
селектора лимфоцитов на проточном цитометре.
Для исключения из подсчёта неспецифического
связывание Fc-фрагмента антител с лимфоцитами
в каждой пробе используют соответствующий
изотипический контроль CYTO-STAT/
COULTER CLONE. Ярко флуоресцирующая
положительно-окрашенная популяция лимфоцитов
измеряется в селекторах, установленных для
исключения неспецифической флуоресценции низкого
уровня.
Неспецифическая флуоресценция, превышающая по
интенсивности фон (когда курсор установлен на
исключение селекцией 98 ±1% неспецифического
окрашивания), обычно ограничивается у нормальных
пациентов 1-2%. В случае с неопластическими
заболеваниями могут быть получены более высокие
значения. Если для любой контрольной пробы
фоновый уровень, зашкаливающий за курсор,
превышает 1-2%, результаты теста могут быть
ошибочными.
мечением и анализированием. Не охлаждайте.
Долго хранившиеся или охлаждённые пробы могут
дать аномальные результаты. Для гарантии
максимальной жизнеспособности следует
немедленно проанализировать помеченные
клетки.
2. Особые проблемы могут возникнуть с отдельными
пациентами из-за изменённых или очень низких
значений отдельных клеточных популяций.
3. Эти реагенты не следует разбавлять, разводить на
аликвоты или замораживать. Использовать
в соответствии с упаковкой.
4. Эти реагенты предназначены только для
использования в проточной цитометрии.
5. Эти реагенты созданы для использования
с препаратами цельной крови. Не рекомендуется
использовать со свежими или замороженными
препаратами мононуклеарных клеток.
6. Аномальные состояния здоровья не всегда
представлены аномальными процентами
отдельных популяций лейкоцитов. Анализ крови
пациента в таком состоянии может давать такие же
проценты лейкоцитов, как и у здорового человека.
Пользуйтесь результатами теста совместно
с клиническими и иными диагностическими
данными.
7. Часть красных клеток крови может не пройти лизис
в следующих случаях: наличие ядросодержащих
красных клеток крови, аномальных концентраций
белков или при гемоглобинопатиях. Это может
привести к ошибочно пониженным результатам
из-за учёта нелизированных красных клеток крови
как лейкоцитов.
8. Продолжительное воздействие агентов лизиса на
клетки может привести к разрушению белых клеток
крови.
9. Результаты, полученные с помощью проточной
цитометрии могут быть ошибочными если лазер на
не верно выровнен или неправильно установлены
селекторы.
10. Из-за недопустимой вариабельности, выявляемой
при сравнении методик различных лабораторий
для определения абсолютного количества
лимфоцитов, необходимо провести оценку
точности используемого метода.24
ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Пробы крови были собраны в популяции практически
здоровых мужчин и женщин. Эта популяция включала
взрослых разной расовой принадлежности и разных
возрастов. Клетки были помечены реагентами
с моноклональными антителами CYTO-STAT/
COULTER CLONE CD8-ECD или IOTest CD8-PC7.
Нормальные значения для CD8+ клеток получены
с помощью проточной цитометрии
(COULTER EPICS XL-MCL с использованием
селектора лимфоцитов) для цельной крови и даны
в последующей таблице. Эти значения предлагаются
только в качестве примера. В каждой лаборатории
следует установить собственные ожидаемые значения
на основе проб от здоровых доноров из местного
населения.
ЦЕЛЬНАЯ КРОВЬ
n Минимальное Максимальное Среднее
±1 SD
CYTO-STAT/
COULTER CLONE
CD8-ECD %CD8+
Лимфоцитов
20
18
41
28,9 ±6,9
IOTest CD8-PC7
%CD8+ Лимфоцитов
15
18
48
33,7 ±8,3
ОГРАНИЧЕНИЯ
1. Для достижения оптимальных результатов следует
помечать пробы крови в течение 6 часов после их
отбора. Отберите пробы при комнатной
температуре в пробирки для забора крови перед
3 of 4
ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
СПЕЦИФИЧНОСТЬ
Моноклональное антитело SFCI21Thy2D3 (CD8)
связывает неполиморфный домен молекулы MHC
класса I. SFCI21Thy2D3 (CD8) было соотнесено с CD8
во время первого семинара HLDA по антигенам
дифференцианции лейкоцитов человека.14
ЛИНЕЙНОСТЬ
Для проверки линейности окрашивания CD8-ECD
и CD8-PC7, были сконцентрированы клетки
позитивного контроля (клетки контроля CYTO-TROL).
По этому диапазону были измерены соответствующий
диапазон CD8-ECD позитивных клеток, от 7 до 7 100
клеток, и процент CD8+ клеток. По этому диапазону
были измерены соответствующий диапазон CD8-PC7
позитивных клеток, от 9 до 9 123 клеток, и процент
CD8+ клеток. Были помечепомечены аликвоты
и вычислена линейная регрессия между ожидаемыми
и полученными значениями. Параметры уравнения
линейной регрессии можно использовать как для
определения линейности, так и диапазона измерений.
CD8 клетки
Линейная Линейно (Протестированный
2
диапазон x103)
регрессия
сть (R )
Специфичность
CD8-ECD
Y=1,0016x + 22,5 0,9998
0,007 - 7,1
CD8-PC7
Y=0,9965x + 1,12 0,9999
0,009 - 9,1
СХОДИМОСТЬ
В пределах прогона (в рамках одной лаборатории)
CD8-ECD и CD8-PC7
В один день на одном и том же проточном цитометре
было проведено 10 измерений процента мечения
положительной мишени (лимфоциты периферической
крови). Полученные результаты приведены
в следующей таблице:
Концентрация
CD8-ECD лимфоциты
CD8-PC7 лимфоциты
Число
10
10
Среднее (%)
28
26
SD
1,0
0,7
CV (%)
3,5
2,6
Межлабораторная CD8-ECD и CD8-PC7
В один день и для одной и той же положительной
мишени (лимфоциты периферической крови) было
проведено 10 измерений процента помеченных клеток
двумя представителями технического персонала;
препараты анализировались на двух разных
цитометрах. Полученные результаты приведены
в следующей таблице:
CYTO-STAT/COULTER CLONE CD8-ECD
Лаборатория/Прибор
n
CD8+
1 XL-MCL
2 XL-MCL
10
10
28
28
Средний
%±1 SD
1,0
1,0
%CV
Средний
%±1 SD
0,7
0,5
%CV
3,5
3,7
IOTest CD8-PC7
Лаборатория/Прибор
n
CD8+
1 XL-MCL
2 XL-MCL
10
10
26
27
2,6
1,9
ПРИМЕРЫ
Нижеприведённые графики являются
однопараметрическими представлениями (Отношение
количества к интенсивности флуоресценции)
лизированной пробы нормальной цельной крови.
Окрашивание было проведено конъюгированными
антителами IOTest CD8-PC7 (Ч.№ 737661). Селектор
настроен на лимфоциты. Показан изотипический
контроль мышиного PC7-конъюгированного IgG1
(Ч.№ 737662).
Получение данных и их анализ в случае CD8-PC7
были проведены на проточном цитометре Cytomics
FC 500.
ЛИМФОЦИТЫ
CD8-PC7
Окрашивание было проведено конъюгированными
моноклональными антителами CYTO-STAT/
COULTER CLONE CD8-ECD (Ч.№ 737659). Селектор
настроен на лимфоциты. Был использован
изотипический контроль мышиного ECDконъюгированного IgG1, но здесь он не приводится.
Получение данных и их анализ в случае CD8-ECD
были проведены на проточном цитометре
COULTER EPICS XL-MCL.
ЛИМФОЦИТЫ
ИЗБРАННЫЕ ИСТОЧНИКИ
1. McMichael, A.J., ed.: Leukocyte Typing III, White Cell
Differentiation Antigens: 1987. Oxford: Oxford
University Press, p. 202, 206.
2. Morimoto, C., Letvin, N.L., Distaso, J.A., Aldrich, W.R.,
and Schlossman, S.F.: 1985. The isolation and
characterization of the human suppressor inducer T
cell subset. J. Immunol. 134: 1508-1515.
3. Morimoto, C., Letvin, N.L., Distaso, J.A., Brown, H.M.,
and Schlossman, S.F.: 1986. The cellular basis for the
induction of antigen-specific T8-suppressor cells. Eur.
J. Immunol. 16: 198-204.
4. Reinherz, E.L., Meuer, S.C., and Schlossman, S.F.:
1983. The delineation of antigen receptors on human
T lymphocytes. Immunol. Today 4: 5-8.
5. Reinherz, E.L., Hussey, R.E., Fitzgerald, K., Snow, P.,
Terhorst, C., and Schlossman, S.F.: 1981. Antibody
directed at a surface structure inhibits cytolytic but not
suppressor function of human T lymphocytes. Nature
294: 168-170.
6. Meuer, S.C., Schlossman, S.F., and Reinherz, E.L.:
1982. Clonal analysis of human cytotoxic T
lymphocytes: T4+ and T8+ effector T cells recognize
products of different major histocompatibility complex
regions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79: 4395-4399.
7. Reinherz, E.L., Cooper, M.D., and Schlossman, S.F.:
1981. Abnormalities of T cell maturation and regulation
in human beings with immunodeficiency disorders. J.
Clin Invest. 68: 699-705.
8. Schmidt, R.E.: 1989. Monoclonal antibodies for
diagnosis of immunodeficiencies. Blut 59: 200-206.
9. de Martini, R.M. and Parker, J.W.: 1989. Immunologic
alterations in human immunodeficiency virus infection:
A review. J. Clin. Lab. Anal. 3: 56-70.
10. Collier, A.C., Meyers, J.D., Corey, L., Murphy, V.L.,
Roberts, P.L., and Handsfield, H.H.: 1987.
Cytomegalovirus infection in homosexual men.
Relationship to sexual practices, antibody to human
immunodeficiency virus, and cell-mediated immunity.
Am. J. Med. 82: 593-601.
11. Taylor, J.M.G., Fahey, J.L., Detels, R., and Giorgi,
J.V.: 1989. CD4 percentage, CD4 number and CD4:
CD8 ratio in HIV infection: Which to choose and how
to use. J. AIDS 2: 114-124.
12. Morimoto, C., Hafler, D.A., Weiner, H.L., Letvin, N.L.,
Hagan, M., Daley, J., and Schlossman, S.F.: 1987.
Selective loss of the suppressor-inducer T-cell subset
in progressive multiple sclerosis. Analysis with anti2H4 monoclonal antibody. N. Engl. J. Med. 316: 67-72.
13. Reinherz, E.L., Weiner, H.L., Hauser, S.L., Cohen,
J.A., Distaso, J.A., and Schlossman, S.F.: 1980. Loss
of suppressor T cells in active multiple sclerosis.
Analysis with monoclonal antibodies. N. Engl. J. Med.
303: 125-129.
14. Weiner, H.L., Hafler, D.A., Fallis, R.J., Johnson, D.,
Ault, K.A., and Hauser, S.L.: 1984. Altered blood T-cell
subsets in patients with multiple sclerosis. J.
Neuroimmunol. 6: 115-121.
15. Smolen, J.S., Chused, T.M., Leiserson, W.M., Reeves,
J.P., Alling, D., and Steinberg, A.D.: 1982.
Heterogeneity of immunoregulatory T-cell subsets in
systemic lupus erythematosus. Am. J. Med. 727: 783790.
16. Smolen, J.S., Morimoto, C., Steinberg, A.D., Wolf, A.,
Schlossman, S.F., Steinberg, R.T., Penner, E.,
Reinherz, E.L., Reichlin, M., and Chused, T.M.: 1985.
Systemic lupus erythematosus: delineation of
subpopulations by clinical, serologic and T cell subset
analysis. Am. J. Med. Sci. 289: 139-147.
17. Morimoto, C., Reinherz, E.L., Schlossman, S.F., Shur,
P.H., Mills, J.A., and Steinberg, S.D.: 1980. Alterations
in immunoregulatory T cell subsets in active systemic
lupus erythematosus. J. Clin. Invest. 66: 1171-1174.
18. Raziuddin, S., Nur, M.A., and Alwabel, A.A.: 1989.
Selective loss of the CD4+ inducers of suppressor T
cell subsets (2H4+) in active systemic lupus
erythematosus. J. Rheumatol. 16: 1315-1319.
19. Sato, K., Miyasaka, N., Yamaoka, K., Okuda, M., Yata,
J., and Nishioka, K.: 1987. Quantitative defect of
CD4+2H4+ cells in systemic lupus erythematosus and
Sjogren's syndrome. Arthritis Rheum. 30: 1407-1411.
20. Ramos, E.L., Turka, L.A., Leggat, J.E., Wood, I.G.,
Milford, E.L., and Carpenter, C.B.: 1989. Decrease in
phenotypically defined T helper inducer cells
(T4+4B4+) and increase in T suppressor effector cells
(T8+2H4+) in stable renal allograft recipients.
Transplantation 47: 465-471.
21. Pedrazzini, A., Freedman, A.S., Andersen, J., Heflin,
L., Anderson, K., Takvorian, T., Canellos, G.P.,
Whitman, J., Coral, F., Ritz, J., and Nadler, L.M.: 1989.
Anti-B-cell monoclonal antibody-purged autologous
bone marrow transplantation for B-cell non-Hodgkin's
lymphoma: Phenotypic reconstitution and B-cell
function. Blood 74: 2203-2211.
22. Reinherz, EL, Kung, PC, Goldstein, G and
Schlossman, SF: 1979. A monoclonal antibody with
selective reactivity with functionally mature human
4 of 4
thymocytes and all peripheral human T cells. J
Immunol 123: 1312 -1317.
23. Reinherz, E.L., Haynes, B.F., Nadler, L.M., and
Bernstein, I.D., eds.: Leukocyte Typing II, Human T
Lymphocytes: 1986. New York: Springer-Verlag,
p. 8-9.
24. Koepke, J.A. and Landay, A.L.: 1989. Precision and
accuracy of absolute lymphocyte counts. Clin Immunol
Immunopathol. 52: 19-27.
ФОРМА ПОСТАВКИ ПРОДУКТА
CYTO-STAT/COULTER CLONE CD8-ECD
Моноклональное антитело,
Ч.№ 737659 - 50 тестов (0,5 mL)
IOTest CD8-PC7 Моноклональное антитело,
Ч.№ 737661 - 100 тестов (1,0 mL)
ECD продаётся по патентным лицензиям 4 542 104
и 4 520 110.
ТОВАРНЫЕ ЗНАКИ
Логотип Beckman Coulter, COULTER, COULTER
CLONE, CYTO-STAT, CYTO-TROL, EPICS, Flow-Count,
IMMUNOPREP, IMMUNO-TROL, IOTest,
MULTI-Q-PREP, Q-PREP, TQ-Prep, XL, и XL-MCL
являются товарными знаками Beckman Coulter, Inc.
За дополнительной информацией или при получении
повреждённой продукции обращайтесь в сервисный
центр компании Beckman Coulter по телефону
800-526-7694 (в США или Канаде) или свяжитесь
с локальным представителем компании
Beckman Coulter.
Beckman Coulter, Inc.
250 S. Kraemer Blvd.
Brea, CA 92821
www.beckmancoulter.com
Beckman Coulter Ireland Inc.
Mervue Business Park,
Mervue, Galway,
Ireland (353 91 774068)
Printed in USA
Made in USA
© 2010 Beckman Coulter, Inc.
Все права защищены.
Скачать