EUROLINE АNA Profile 5 IgG

ANA Profile 5 EUROLINE, EUROIMMUN AG
1
_____________________________________________________________________________________________________
Регистрационное удостоверение ФСЗ №2010/07279 от 24.06.2010 г.
Аутоантитела к ядерным антигенам Профиль 5 (IgG)
(EUROLINE АNA Profile 5 IgG)
Набор EUROLINE для определения аутоантител класса IgG к высокоочищенным ядерным антигенам в
сыворотке или плазме крови человека методом иммуноблотинга
Номер по каталогу: DL 1590-1601-5 G
Набор рассчитан на 16 определений
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор Anti-ANA Profile 5 IgG EUROLINE обеспечивает качественное определение in vitro в сыворотке
(плазме) крови человека аутоантител класса IgG к 18 различным антигенам: nRNP/Sm, Sm, RNP 70, -A, -C,
SS-A (нативный), Ro-52, SS-B, Scl-70, PM-Scl, Jo-1, CENP B, PCNA, dsDNA, нуклеосомам, гистонам,
рибосомальному белку Р и AMA-M2.
ПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ
Смешанное заболевание соединительной ткани (MCTD, Sharp-синдром), диссеминированная (системная)
красная волчанка (SLE, СКВ), синдром Шегрена, прогрессирующий системный склероз, поли/дерматомиозит, перекрестный или смешанный синдром (overlap syndrome), ограниченная форма
прогрессирующего системного склероза (CREST синдром), первичный билиарный цирроз печени.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Тест Anti-ANA Profile 5 IgG EUROLINE основан на методе иммуноблотинга. Набор содержит тестовые
стрипы, покрытые параллельными полосами высокоочищенных антигенов. Стрипы инкубируют на первой
стадии реакции с образцом разведенной сыворотки или плазмы пациента. В случае, если образец
положительный, специфические антитела класса IgG (а также классов IgA и IgM) будут связываться с
соответствующими антигенными полосами. Для обнаружения связанных антител проводится вторая
инкубация с использованием ферментного конъюгата (антитела к IgG человека, меченные щелочной
фосфатазой), который способен вызывать развитие цветной реакции.
МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ
Компонент
1.
Формат
Тестовые стрипы, покрытые антигенами:
nRNP/Sm, Sm, RNP 70, -A, -C, SS-A (нативный), Ro-52, SSB, Scl-70, PM-Scl, Jo-1, CENP B, PCNA, dsDNA, нуклеосомы,
гистоны, рибосомальный белок Р, AMA-M2
2.
Положительный контроль.(IgG, человека),
100концентрат
3.
Ферментный конъюгат
Антитела козы к IgG человека, конъюгированные с
щелочной фосфатазой; 10концентрат
Обозначение
16  1
1  0,02 мл
STRIPS
POS CONTROL 100
1  3 мл
CONJUGATE 10
4.
Буфер для образцов, готов к использованию
1  100 мл
SAMPLE BUFFER
5.
Промывочный буфер, 10концентрат
1  50 мл
WASH BUFFER 10
6.
Раствор субстрата
Нитроголубой тетразолий хлорид/5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат (NBT/BCIP), готов к использованию
1  30 мл
SUBSTRATE
7.
Лоток для инкубации
8.
Инструкция по применению набора
Серия
Для in vitro диагностики
2  8 каналов
TRAY
1 буклет
–
Температура хранения
Невскрытый набор использовать до
Следующие компоненты набора не поставляются вместе с набором, но могут быть заказаны:
ZD 9899-0130/10 – Лоток для инкубации на 30 каналов (белый)
ZD 9898-0130/10 – Лоток для инкубации на 30 каналов (черный)
ZD 9899-0148/10 – Лоток для инкубации на 48 каналов (черный)
Для создания рабочего протокола и оценки проинкубированных стрипов с использованием программного
обеспечения EUROLineScan необходимы зеленая бумага и адгезивная пленка (обращайтесь в ЗАО
«АНАЛИТИКА»):
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2012
тел.: (495)737-0363, факс: (495)737-0365, e-mail: [email protected]
ANA Profile 5 EUROLINE, EUROIMMUN AG
2
_____________________________________________________________________________________________________
ZD 9880-0101 - Зеленая бумага
ZD 9885-0116 - Адгезивная пленка приблизительно на 16 стрипов
ZD 9885-0130 - Адгезивная пленка приблизительно на 30 стрипов
Для визуальной оценки возможен заказ оценочного протокола:
ZD 1590-0101-5G – Оценочный протокол для визуальной оценки теста ANA-Profile 5 EUROLINE
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ НАБОРА
Набор следует хранить при температуре от +2 С до +8 С. Не замораживать. Невскрытые компоненты
набора сохраняют стабильность в течение всего указанного срока годности набора.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Образцы пациентов, контроли и тестовые стрипы после инкубации следует рассматривать как
инфицированные отходы и обращаться с ними соответствующим образом. Все реагенты следует
утилизировать в соответствии с действующими официальными инструкциями.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Примечание: Температуру всех реагентов необходимо довести до комнатной (от +18 С до +25 С) в
течение 30 минут перед использованием. Невскрытые реагенты стабильны до окончания срока годности
при соблюдении условий хранения (от +2 °С до +8 °С). После вскрытия реагенты стабильны в течение 12
месяцев или до конца срока годности, что наступает раньше, если ниже не оговорены особые условия.
Вскрытые реагенты необходимо также хранить при температуре от +2 °С до +8 °С и защищать от
контаминации. Прочие сведения о стабильности отдельных реагентов указаны ниже.
Стрипы, покрытые антигенами: Готовы к использованию. Во избежание конденсации влаги на стрипах, не
вскрывайте пакет до тех пор, пока он не нагреется до комнатной температуры. Вынув необходимое
количество стрипов, остальные неиспользованные стрипы немедленно плотно закройте в той же защитной
упаковке и храните при температуре от +2 С до +8 С.
Положительный контроль: Поставляется в виде 100-кратного концентрата. Для приготовления готового к
использованию контрольного раствора, необходимое количество концентрата отберите из флакона с
помощью чистой пипетки и разводится 1:101 буфером для образцов. Например, 15 мкл контрольной
сыворотки следует добавить к 1,5 мл буфера для образцов и как следует перемешать. Разведенный
контроль следует использовать до конца рабочего дня.
Ферментный конъюгат: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Для приготовления готового к
использованию разведенного раствора ферментного конъюгата отберите необходимое количество
жидкости из флакона с концентратом с помощью чистой пипетки и разведите 1:10 буфером для образцов.
Например, для проведения анализа на 1 тестовом стрипе разведите 0,15 мл концентрата ферментного
конъюгата в 1,35 мл буфера для образцов. Разведенный раствор ферментного конъюгата следует
использовать до конца рабочего дня.
Буфер для образцов: Готов к использованию.
Промывочный буфер: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Необходимое количество
концентрата следует отобрать из бутыли чистой пипеткой и растворить 1:10 деионизированной или
дистиллированной водой. Например, для проведения анализа на 1 стрипе к 1 мл концентрата следует
добавить 9 мл дистиллированной воды. Готовый разведенный промывочный буфер следует использовать
до конца рабочего дня.
Раствор субстрата: Готов к использованию. После отбора необходимого количества реагента из флакона
немедленно вновь закройте его, так как раствор чувствителен к свету.
Предостережение: Используемая контрольная сыворотка была проверена на антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 и
вирусу гепатита С, а также на наличие HBsAg, методами иммуноферментного анализа и непрямой
иммунофлуоресценции и показала отрицательный результат. Тем не менее, все используемые материалы
следует считать потенциально опасными и обращаться с ними, соблюдая необходимые меры
предосторожности. Некоторые из реагентов ядовиты (буферы и раствор субстрата). Избегайте контакта с
кожей.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ ОБРАЗЦОВ ПАЦИЕНТОВ
Материал образцов: Сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин или цитрат) крови человека.
Стабильность: Образцы пациентов, предназначенные для исследования этим методом, можно хранить до
14 дней при температуре от +2 оС до +8 оС. Разведенные образцы необходимо использовать в течение
одного рабочего дня.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2012
тел.: (495)737-0363, факс: (495)737-0365, e-mail: [email protected]
ANA Profile 5 EUROLINE, EUROIMMUN AG
3
_____________________________________________________________________________________________________
Разведение образцов: Образцы пациентов разводят 1:101 буфером для образцов. Например: разведите
15 мкл образца в 1,5 мл буфера для образцов и тщательно перемешайте на вортексе (пипетки для этого не
подходят).
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ
Предварительная обработка стрипов
Выньте из упаковки требуемое количество тестовых стрипов и поместите каждый стрип в отдельную пустую
лунку пластикового лотка. При этом должен быть виден номер стрипа, указанный в его нижней части.
Заполните лунки пластикового лотка для инкубации в соответствии с количеством исследуемых образцов
буфером для образцов (по 1,5 мл буфера на одну лунку). Инкубируйте 5 минут при комнатной температуре
на шейкере-качалке. Затем аспирируйте всю жидкость из каждой лунки.
Инкубация с образцом (1 стадия)
Внесите в каждую лунку по 1,5 мл разведенного образца сыворотки или плазмы и инкубируйте при
комнатной температуре (от +18 С до + 25 С) в течение 30 минут на шейкере-качалке.
Промывка
Аспирируйте жидкость из каждой лунки и затем промойте 3 раза по 5 минут, добавляя по 1,5 мл
разведенного промывочного буфера на лунку.
Инкубация с конъюгатом (2 стадия)
Внесите в каждую лунку по 1,5 мл разведенного ферментного конъюгата (меченные щелочной фосфатазой
антитела к IgG человека). Инкубируйте в течение 30 минут при комнатной температуре (от +18 С до + 25
С) на шейкере-качалке.
Промывка
Аспирируйте жидкость из каждой лунки и затем промойте 3 раза по 5 минут, добавляя по 1,5 мл
разведенного промывочного буфера на лунку.
Инкубация с субстратом (3 стадия)
Внесите в каждую лунку по 1,5 мл раствора субстрата. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной
температуре (от +18 С до + 25 С) на шейкере-качалке.
Остановка реакции
Аспирируйте жидкость из каждой лунки и затем промойте 3 раза по 1 минуте деионизированной или
дистиллированной водой.
Оценка
Поместите тестовый стрип в оценочный протокол, высушите на воздухе и оцените результат теста.
Для автоматической инкубации с использованием прибора EUROBlotMaster выберите программу Euro01
AAB EL30.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Регистрация результатов реакции
Для оценки проинкубированных тестовых стрипов мы рекомендуем использовать программное
обеспечение EUROLineScan. После промывки дистиллированной или деионизованной водой, поместите с
помощью пинцета проинкубированные влажные тестовые стрипы на покрытое адгезивной пленкой поле
зеленого оценочного протокола. Пока стрип влажный, его можно двигать по пленке. Осторожно прижмите
их листом фильтровальной бумаги и оставьте сохнуть на воздухе. После высыхания тестовые стрипы
прочно зафиксируются на пленке. Протокол с сухими стрипами следует отсканировать на планшетном
сканере и оценить с помощью программы EUROLineScan. Для получения более полной информации о
программе обратитесь к инструкции пользователя EUROLineScan. В программе EUROLineScan тест ANAProfile 5 EUROLINE имеет код Ana5.
Для визуальной оценки поместите проинкубированные стрипы на оценочный протокол. Возможен заказ
протокола (каталожный номер ZD 1590-0101-5 G).
Примечание: На стрипах расположена контрольная полоса. Интенсивное окрашивание этой
контрольной полосы свидетельствует о правильности проведения инкубации. Отсутствие
окрашивания полосы антигена интерпретируется как отрицательный результат.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2012
тел.: (495)737-0363, факс: (495)737-0365, e-mail: [email protected]
ANA Profile 5 EUROLINE, EUROIMMUN AG
4
_____________________________________________________________________________________________________
Антигены и их размещение на стрипах: Тестовые стрипы EUROLINE покрыты следующими антигенами:
nRNP/Sm: Нативный U1-nRNP, очищенный аффинной
хроматографией из тимуса теленка и кролика.
Sm: Нативный антиген Sm, очищенный аффинной
хроматографией из селезенки и тимуса быка. Антиген Sm
содержит ядерные белки snRNP-частиц. Основным
компонентом препарата антигена является белок D.
RNP 70, -A, -C : Рекомбинантный белок U1-nRNP.
Соответствующая кДНК человека была экспрессирована в
клетках
насекомых
с
использованием
системы
бакуловируса или в клетках E.coli (RNP 70).
SS-A: Нативный антиген SS-A, очищенный аффинной
хроматографией из селезенки и тимуса быка.
Ro-52: Рекомбинантный антиген Ro-52 (белок 52 кДа).
Соответствующая кДНК человека была экспрессирована в
клетках
насекомых
с
использованием
системы
бакуловируса.
nRNP/Sm
Sm
RNP 70, -A, -C
SS-A
Ro-52
SS-B: Нативный антиген SS-B, очищенный аффинной
хроматографией из тимуса теленка и кролика.
SS-B
Scl-70: Нативный антиген Scl-70 (ДНК-топоизомераза I),
очищенный аффинной хроматографией из тимуса быка и
кролика.
Scl-70
PM-Scl: Рекомбинантный антиген PM-Scl. Соответствующая
кДНК была экспрессирована в клетках насекомых с
использованием системы бакуловируса.
PM-Scl
Jo-1: Нативный антиген Jo-1 (гистидил-тРНК- синтетаза),
очищенный аффинной хроматографией из тимуса теленка и
кролика.
Jo-1
CENP B: Рекомбинантный белок В центромеров.
Соответствующая кДНК человека была экспрессирована в
клетках
насекомых
с
использованием
системы
бакуловируса.
CENP B
PCNA: Рекомбинантная РНК (36 кДа). Соответствующая
кДНК человека была экспрессирована в клетках насекомых
с использованием системы бакуловируса.
PCNA
dsDNA: Высокоочищенная нативная двухцепочечная ДНК,
выделенная из молок лосося.
dsDNA
Нуклеосомы: Нативные нуклеосомы, очищенные из тимуса
теленка.
Нуклеосомы
Гистоны: Смесь индивидуально очищенных
разных типов, выделенных из тимуса теленка.
Гистоны
гистонов
Рибосомальный белок Р: Нативные рибосомальные белки
Р, очищенные аффинной хроматографией из тимуса
теленка и кролика.
Rib. P-Protein
AMA-M2: Нативный антиген М2 (пируватдегидрогеназный
комплекс), очищенный из сердца свиньи.
AMA-M2
Контроль
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2012
тел.: (495)737-0363, факс: (495)737-0365, e-mail: [email protected]
ANA Profile 5 EUROLINE, EUROIMMUN AG
5
_____________________________________________________________________________________________________
В зависимости от интенсивности сигнала, результаты можно разделить следующим образом:
Сигнал
Нет сигнала
Окраска полосы очень слабая
Окраска полосы от умеренной до
интенсивной
Окраска полосы очень интенсивная,
сравнимая с окраской контрольной
полосы
Интенсивность сигнала
EUROLINEScan
0-5
6-10
11-25 или 26-50
Результат
0
(+)
+, ++
Отрицательный
Пограничный
Положительный
> 50
+++
Сильно-положительный
Результаты, попадающие в пограничный диапазон (от 6 до 10), следует расценивать как повышенные, но
отрицательные.
Параллельно с определением аутоантител к ядерным антигенам с помощью набора EUROLINE, всегда
рекомендуется выполнять также непрямой иммунофлуоресцентный тест. С одной стороны, это
обеспечивает проверку достоверности в качестве защиты от ложноположительных результатов, с другой
стороны – благодаря использованию клеток HЕp-2 EUROIMMUN и, в особенности, замороженных срезов
ткани печени приматов, иммунофлуоресцентный тест обеспечивает выявление более широкого спектра
аутоантител к клеточному ядру, так как в настоящее время не все ядерные антигены присутствуют в тесте
EUROLINE.
ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТА
Калибровка: Реактивность каждого антигена стандартизовали с помощью референтных сывороток
человека CDC-ANA с номерами лотов от #1 до #11 контрольного центра “Center for Disease Control”
(Атланта, США). Данные по реактивности сывороток CDC, полученные с помощью набора ANA Profile
EUROLINE фирмы EUROIMMUN, суммированы в нижеприведенной таблице:
Антиген
nRNP/Sm
Sm
SS-A
Ro-52
SS-B
Scl-70
PM-Scl
Jo-1
CENP-B
PCNA
DsDNA
Нуклеосомы
Гистоны
риб. P-белок
М2
CDC-1
Гомоген
ный/rim
CDC-2
Крапчатый
/SS-B
CDC-3
Крапчатый
CDC-4
RNP
CDC-5
Sm
CDC-6
Ядрышковый
CDC-7
SS-A
CDC-8
Центромерный
CDC-9
Scl-70
CDC-10
Jo-1
CDC11
РМ-Scl
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Пол.
Пол.
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Специфичность этих сывороток была исследована контрольным центром “Center for Disease Control” по
результатам реакции иммунофлуоресценции (субстрат: клетки HЕp-2 EUROIMMUN и срезы ткани печени
приматов), двойной иммунодиффузии или противоточного иммуноэлектрофореза (сыворотка не в любом
случае бывает моноспецифичной).
Диапазон определения: Метод EUROLINE является качественным, диапазон определения не задан.
Диапазон измерения результатов в единицах интенсивности окрашивания программы EUROLineScan
применим только для разведения образца 1:101, предусмотренного методикой данного теста.
Перекрестные реакции: Качество используемых антигенных субстратов (антигенов и источников
антигенов) гарантирует высокую специфичность наборов EUROLINE. Данный набор EUROLINE
специфически определяет антитела класса IgG к nRNP/Sm, Sm, RNP 70, -A, -C, SS-A (нативный), Ro-52, SSB, Scl-70, PM-Scl, Jo-1, CENP B, PCNA, dsDNA, нуклеосомам, гистонам, рибосомальному белку Р и AMA-M2.
Перекрестных реакций с другими аутоантителами не обнаружено.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2012
тел.: (495)737-0363, факс: (495)737-0365, e-mail: [email protected]
ANA Profile 5 EUROLINE, EUROIMMUN AG
6
_____________________________________________________________________________________________________
Интерференция: Не отмечено изменения аналитических характеристик при исследовании в данном
наборе гемолизированных, липемических или желтушных образцов с концентрациями гемоглобина вплоть
до 5 мг/мл, триглицеридов – до 20 мг/мл и билирубина – до 0,4 мг/мл.
Вариации результатов в разных опытах и в одном опыте: Вариации результатов в разных опытах
оценивали многократным повторным исследованием одних и тех же охарактеризованных образцов в
течение нескольких дней, вариации в одном опыте – многократным исследованием охарактеризованных
образцов в течение одного дня. В каждом случае интенсивность полос находилась в пределах
установленного диапазона. Таким образом, данный тест EUROLINE показывает очень высокую
воспроизводимость в пределах одной постановки и между постановками.
Чувствительность и специфичность
nRNP/Sm: Для обнаружения аутоантител к RNP/Sm чувствительность 100% (сравнительно с методом ИФА)
была определена при использовании 22 образцов сыворотки пациентов со смешанным заболеванием
соединительной ткани (MCTD). Специфичность составила 100% по образцам сыворотки от здоровых
доноров крови (n=50) и 96% - по панели сывороток больных ревматическими заболеваниями, отличными от
СКВ (синдром Шегрена n=14, склеродерма n=18, полимиозит n=25).
Sm: Для обнаружения аутоантител к Sm чувствительность 100% (сравнительно с методом ИФА) была
определена при использовании 45 образцов сыворотки пациентов с СКВ. Специфичность составила 100%
по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50) и 100% - по панели сывороток больных
ревматическими заболеваниями, отличными от СКВ (синдром Шегрена n=14, склеродерма n=18,
полимиозит n=25).
SS-A: Для обнаружения аутоантител к SS-A чувствительность 100% (сравнительно с методом ИФА) была
определена при использовании 14 образцов сыворотки пациентов с синдромом Шегрена. Специфичность
составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50) и 95% - по панели сывороток
больных ревматическими заболеваниями, отличными от СКВ (склеродерма n=18, MCTD n=22).
Ro-52: Для обнаружения аутоантител к Ro-52 чувствительность 100% (сравнительно с методом Вестернблота) была определена при использовании 103 образцов сыворотки пациентов с СКВ и синдромом
Шегрена (СКВ n=23, синдром Шегрена n=77, красная волчанка новорожденных n=3). Специфичность
составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=65). Антитела к Ro-52 не
специфичны к какому-либо определенному заболеванию, их можно обнаружить в образцах пациентов,
страдающих от миозита, склеродермы и других ревматических заболеваний (11-16), например,
аутоантитела к Ro-52 были обнаружены в 7 из 20 образцов пациентов со склеродермой.
SS-B: Для обнаружения аутоантител к SS-B чувствительность 100% (сравнительно с методом ИФА) была
определена при использовании 14 образцов сыворотки пациентов с синдромом Шегрена. Специфичность
составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50) и 97% - по панели сывороток
больных ревматическими заболеваниями, отличными от СКВ (склеродерма n=18, MCTD n=22).
Scl-70: Для обнаружения аутоантител к Scl-70 чувствительность 100% (сравнительно с методом ИФА) была
определена при использовании 18 образцов сыворотки пациентов со склеродермой. Специфичность
составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50) и по панели сывороток больных
ревматическими заболеваниями, отличными от СКВ (MCTD n=22, синдром Шегрена n=14, миозит n=25).
PM-Scl: Из 20 пациентов с полимиозитом у 14 в реакции непрямой иммунофлуоресценции (клетки HЕp2/печень приматов) обнаружена позитивная составляющая по ядрышку. Специфичность составила 100% по
образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50) и 99% - по панели сывороток больных
ревматическими заболеваниями, отличными от СКВ (MCTD n=22, синдром Шегрена n=14, склеродерма
n=18).
Jo-1: Для обнаружения аутоантител к Jo-1 чувствительность 100% (сравнительно с методом ИФА) была
определена при использовании 5 образцов сыворотки пациентов с миозитом. Специфичность составила
100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50) и 99% по панели сывороток больных
ревматическими заболеваниями, отличными от СКВ (склеродерма n=38, MCTD n=22, синдром Шегрена
n=14).
CENP B: Из 20 пациентов со склеродермой у 19, обнаруживших в реакции непрямой
иммунофлуоресценции (клетки HЕp-2/печень приматов) позитивную составляющую по центромерам,
обнаружены аутоантитела к CENР B (чувствительность 95%). Специфичность составила 100% по образцам
сыворотки от здоровых доноров крови (n=50) и 97% - по панели сывороток больных ревматическими
заболеваниями, отличными от СКВ (MCTD n=22, синдром Шегрена n=14, миозит n=25).
PCNA: Из 20 пациентов, обнаруживших в реакции непрямой иммунофлуоресценции (клетки HЕp-2/печень
приматов) позитивную составляющую по типу циклин I, у 13 обнаружены аутоантитела к РСNA.
Специфичность составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50) и 99% - по
сывороткам пациентов с СКВ, негативных по циклину I (n=83).
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2012
тел.: (495)737-0363, факс: (495)737-0365, e-mail: [email protected]
ANA Profile 5 EUROLINE, EUROIMMUN AG
7
_____________________________________________________________________________________________________
dsDNA: Для обнаружения аутоантител к dsDNA чувствительность 94% (сравнительно с методом ИФА)
была определена при использовании 36 образцов сыворотки пациентов с СКВ. Специфичность составила
100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50) и 100% - по панели сывороток больных
ревматическими заболеваниями, отличными от СКВ (синдром Шегрена n=14, склеродерма n=18).
Нуклеосомы: Для обнаружения аутоантител к нуклеосомам чувствительность 97% (сравнительно с
методом ИФА) была определена при использовании 34 образцов сыворотки пациентов с СКВ.
Специфичность составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50) и по панели
сывороток больных ревматическими заболеваниями, отличными от СКВ (синдром Шегрена n=14,
склеродерма n=18).
Гистоны: Для обнаружения аутоантител к гистонам чувствительность 78% (сравнительно с методом ИФА)
была определена при использовании 41 образца сыворотки пациентов с СКВ. Специфичность составила
100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50) и 97% - по панели сывороток больных
ревматическими заболеваниями, отличными от СКВ (синдром Шегрена n=14, склеродерма n=18).
Рибосомальный белок Р: Для обнаружения аутоантител к рибосомальному белку Р чувствительность
82% (сравнительно с методом ИФА) была определена при использовании 49 образцов сыворотки
пациентов с СКВ. Специфичность составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови
(n=50) и по панели сывороток больных ревматическими заболеваниями, отличными от СКВ (синдром
Шегрена n=14, склеродерма n=18).
АМА М2: Для обнаружения аутоантител к АМА М2 чувствительность 100% (сравнительно с методом ИФА)
была определена при использовании 26 образцов сыворотки пациентов с первичным билиарным циррозом
печени. Специфичность составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50) и 99% по панели сывороток пациентов с другими заболеваниями печени (аутоиммунный гепатит n=28,
токсическое поражение печени n=38, вирусные гепатиты В/С n=69).
Диапазон референтных значений: Диапазон референтных значений определяли, используя группу
здоровых доноров крови (n=50). Все доноры крови дали отрицательную реакцию.
Антигены nRNP и Sm принадлежат к группе малых рибонуклеопротеинов (snRNP, small nuclear
ribonucleoproteins), состоящих из низкомолекулярной РНК с высоким содержанием уридина (U-РНК или URNP) в комплексе с различными белками (с молекулярной массой 9–70 кДа). В этих растворимых ядерных
рибонуклеопротеиновых комплексах компонент РНК, в зависимости от его поведения при хроматографии,
имеет обозначения от U1 до U6. Белковый компонент содержит шесть различных сердцевинных или
коровых (core) белков (В, В’, D, E, F, G), U1-nRNP содержит дополнительные специфические для ядерных
рибонуклеопротеинов белки (70 К, А, С). Антитела к U1-nRNP направлены против одного или нескольких из
этих белков. Напротив, антитела к антигену Sm могут взаимодействовать также с одним или с несколькими
коровыми белками. Частицы U-nRNP участвуют в сплайсинге пре-мРНК – они отщепляют некодируемые
последовательности мРНК (интроны) и вставляют кодируемые последовательности мРНК (экзоны),
создавая мРНК.
Критерии интерпретации результатов по RNP 70, -A, -C: Мембранный чип содержит белки RNP 70, -A, -C
рибонуклеопротеина U1-nRNP, которые используются для дифференциации результатов по nRNP/Sm.
Анти - nRNP/Sm
Анти - Sm
Анти - U1-nRNP 70, -A, C
по крайней мере одна
положительная полоса
положительный
отрицательный
положительный
отрицательный
отрицательный
положительный
положительный
по крайней мере одна
положительная полоса
положительный
отрицательный
положительный
отрицательный или
положительный
отрицательный
Оценки нет, т.к.
результат
отрицательный по анти nRNP/Sm
Результат
Наличие антител к U1-nRNP в
соответствии с проявившимися
полосами
Наличие антител к нативному
комплексу U1-nRNP
Наличие антител к U1-nRNP и Sm в
соответствии с проявившимися
полосами
Наличие антител к Sm
Сомнительный результат. Не
исключена неспецифическая
реакция с белками 70, -A, -C
рибонуклеопротеина U1-nRNP
Нативный антиген SS-A – малый рибонуклеопротеин, состоящий из одной или нескольких (до пяти) молекул
РНК (Y1, Y2, Y3, Y4, Y5; от 80 до 112 оснований) и белка с молекулярной массой 60 кДа. Полоса SS-A в
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2012
тел.: (495)737-0363, факс: (495)737-0365, e-mail: [email protected]
ANA Profile 5 EUROLINE, EUROIMMUN AG
8
_____________________________________________________________________________________________________
наборе EUROLINE состоит из нативного антигена SS-A. С комплексом SS-A/Ro бывает также связан белок
Ro-52 с молекулярной массой 52 кДа, но не всегда, этот вопрос дискутируется в литературе.
Отдельно реакции антител с Ro-52 невозможно оценить как SS-A-позитивные или специфичные для
СКВ или синдрома Шегрена, так как они могут иметь место при множестве различных аутоиммунных
заболеваний.
Мы рекомендуем интерпретировать результаты теста EUROLINE с учетом результатов скринингового теста
на ANA (клетки HЕp-2/ срезы печени приматов) следующим образом:
IIFT
Клетки HЕp-2
Отрицательный ответ по ANA
Положительный ответ по ANA
Положительный ответ по ANA
EUROLINE
Ro-52 (52 кДа,)
SS-A (60 кДа)
Положительный
ответ
Положительный
ответ
Положительный или
отрицательный ответ
Отрицательный
ответ
Отрицательный
ответ
Положительный
ответ
Результат
Отрицательный по анти-SS-A
Отрицательный по анти-SS-A
Положительный по анти-SS-A
В различных исследованиях было показано, что сыворотки, позитивные по антителам к SS-A, всегда
содержат антитела к нативному антигену SS-A (к входящему в его состав белку с молекулярной массой 60
кДа) и могут дополнительно иметь антитела к Ro-52. Например, в исследовании, организованном фирмой
EUROIMMUN в Японии, были исследованы 103 пациента с СКВ (n=26) и синдромом Шегрена (n=77); они
были охарактеризованы предварительно как положительные по антителам к SS-A методом двойной
иммунодиффузии. Из всех образцов 102 сыворотки реагировали с полосой нативного SS-A и 90 сывороток
дополнительно взаимодействовали с полосой Ro-52. Но ни одна из сывороток не показала положительную
реакцию с одной только полосой Ro-52. Это исследование ясно показывает, что антитела к нативному SS-A
могут быть достоверно обнаружены с помощью нативного антигена SS-А. В некоторых редких случаях и в
прогнозируемых случаях волчаночного синдрома у новорожденных полоса Ro-52 на блотовом стрипе
может обеспечить получение дополнительной важной информации.
Антиген SS-B представляет собой фосфопротеин с молекулярной массой 48 кДа. В клеточном ядре он
выполняет функцию белка-хелпера для РНК-полимеразы III.
Антиген Scl-70, как было установлено, является ферментом ДНК-топоизомеразой-I. Молекулярная масса
нативного антигена составляет 100 кДа. Вначале методом Вестерн-блота был обнаружен только продукт
метаболизма этого антигена с молекулярной массой 70 кДа. ДНК-топоизомераза-I находится в
нуклеоплазме и, в особенно высокой концентрации, в ядрышке. Фермент участвует в репликации и
транскрипции двуспиральной ДНК.
Антиген PM-Scl представляет собой комплекс из 11-16 полипептидов с молекулярной массой от 20 до 110
кДа. Основными антигенами являются два полипептида с молекулярной массой 75 и 100 кДа, известные как
PM-Scl-75 и PM-Scl-100. 90-98% сывороток, позитивных по аутоантителам к PM-Scl, взаимодействуют с PMScl-100 и 50-63% сывороток – с PM-Scl-75. Два антигена не зависят один от другого и не вызывают
перекрестных реакций. PM-Scl локализован в основном в ядрышке, но существует также в нуклеоплазме.
Функция этого полипептидного комплекса до сих пор не объяснена полностью. Считается, что PM-Scl
играет роль в сплайсинге рРНК 5,85 и некоторых Usn-РНК.
Антиген Jo-1 идентичен гистидил-тРНК-синтетазе, цитоплазматическому фосфопротеину с молекулярной
массой 50 кДа. Он действует в цитоплазме, присоединяя аминокислоту гистидин к соответствующей
транспортной РНК.
Четыре различных белка были идентифицированы как аутоантигены центромеров: центромерный белок-А
(17 кДа), центромерный белок-В (80 кДа), центромерный белок-С (140 кДа) и центромерный белок-D (50
кДа). Все сыворотки, проверенные предварительно в тестах непрямой иммунофлуоресценции и
показавшие наличие аутоантител к центромерам, показали в данном тесте реакцию, по крайней мере, с
центромерным белком В.
PCNA, proliferating cell nuclear antigen (ядерный антиген пролиферирующих клеток), с молекулярной
массой 36 кДа, экспрессируется в зависимости от стадии клеточного цикла. Его активная тримерная форма
является кофактором ДНК-полимераз и участвует в регуляции процессов репарации ДНК. В реакции
непрямой иммунофлуоресценции (клетки HЕp-2/печень приматов) аутоантитела к PCNA дают картину
окрашивания, получившую название cyclin I. Во всех интерфазных клетках половина ядер демонстрирует
яркую, тонкогранулированную основную флуоресценцию, из которой исключено ядрышко. Такая же картина
флуоресценции наблюдается и у другой половины ядер, но интенсивность свечения раз в 10 ниже.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2012
тел.: (495)737-0363, факс: (495)737-0365, e-mail: [email protected]
ANA Profile 5 EUROLINE, EUROIMMUN AG
9
_____________________________________________________________________________________________________
Антитела к ДНК разделяются на два различных типа: антитела к нативной, двуспиральной ДНК (dsDNA) и
антитела к денатурированной, одноцепочечной ДНК (ssDNA). Антитела, реактивные по отношению к
двуспиральной ДНК, распознают основные эпитопы дезокси-рибозно-фосфатного скелета двойной спирали
и поэтому реагируют как с двухцепочечной, так и с одноцепочечной ДНК. С другой стороны, антитела,
реактивные по отношению к ssDNA, распознают полимеры с пуриновыми и пиримидиновыми основаниями,
которые не доступны в двухцепочечной молекуле.
Нуклеосомы являются высокоорганизованными функциональными субъединицами хромосом, состоящими
из нуклеосомных гистонов (типы Н1, Н2А, Н2В, Н3 и Н4) и dsDNA. Сердцевина нуклеосомы состоит из
тетрамера Н3-Н3-Н4-Н4, который с двух боков имеет по димеру Н2А-Н2В. Этот гистоновый октамер
(коровая частица) окружен двумя витками двойной спирали ДНК (в сумме 146 пар оснований). В интактном
хроматине непрерывная нить ДНК соединяет нуклеосомы в цепочку, похожую на нитку бус, каждая
нуклеосомная бусина отделена от следующей линкерной последовательностью ДНК (linker DNA) длиной от
0 до 80 нуклеотидных пар в зоне расположения гистона Н1.
Гистоны являются основными связанными с ДНК белками с молекулярной массой от 11,2 кДа до 21,5 кДа.
Они выполняют функцию стабилизации двойной спирали ДНК и могут также играть роль в механизмах
генной регуляции. Существует 5 различных типов гистонов: Н1, Н2А, Н2В, Н3 и Н4. Гистоны участвуют в
формировании высокоорганизованных структур нуклеосом.
Рибосомальный белок Р состоит из 3 белков 60S-субъединицы рибосом. Эти белки называются Р0
(молекулярная масса 38 кДа), Р1 (19 кДа) и Р2 (17 кДа). Основной антигенный эпитоп расположен с Сконца, содержащего во всех трех белках идентичную последовательность из 17 аминокислотных остатков.
Показано, что антигенная система М2 представляет собой три биохимически связанных мультиферментных
комплекса
наружной
мембраны
митохондрий,
катализирующих
реакции
окислительного
декарбоксилирования
пирувата,
2-окси-глутарата
и
2-оксикислот
с
разветвленной
цепью.
Идентифицированы семь белковых антигенов, относящихся к М2: антиген Е2 (74 кДа), антиген Protein Х (55
кДа), альфа-субъединица Е1 (45 кДа) и бета-субъединица Е1 (36 кДа) пируватдегидрогеназного комплекса;
антиген Е2 (51 кДа) комплекса дегидрогеназы 2-оксикислот с разветвленной цепью и антиген Е2 (51 кДа) 2оксиглутаратдегидрогеназного комплекса. Ферменты Е2 отвечают за перенос ацетильных групп к коэнзиму
А, функция белка Х, являющегося субъединицей пируватдегидрогеназного комплекса, неизвестна.
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Антинуклеарные антитела (АНА) направлены против различных компонентов клеточного ядра
(биохимических веществ с клеточном ядре), такие как нуклеиновые кислоты, белки клеточного ядра и
рибонуклеопротеины. Эти антитела характерны для разных заболеваний, особенно имеющих
ревматоидную форму. Распространенность антинуклеарных антител при различных воспалительных
ревматоидных заболеваниях колеблется между 20% и 100%, наименьшая встречаемость при
ревматоидном артрите колеблется между 20% и 40%. Таким образом, дифференциальная диагностика
АНА незаменима как при выявлении индивидуальных ревматических заболеваний, так и при диагностике
других аутоиммунных патологий.
Ревматоидные заболевания:
 Смешанные заболевания соединительной ткани (синдром Шарпа)
 Системная красная волчанка (СКВ)
 Синдром Шегрена (первичный синдром Шегрена)
 Системная склеродермия (СС) прогрессирующий системный склероз
 Лимитированная (ограниченная) форма прогрессирующего системного склероза (CREST синдром)
 Поли-/дерматомиозит
 Ревматоидный артрит
U1-nRNP
(Уридин-1-низкомолекулярный рибонуклеарный белок)
Антиген
U1-nRNP
Заболевание
Распространенность
Синдром Шарпа
95%-100%
СКВ
15%-40%
Системная склеродермия
2%-12%
Поли-/дерматомиозит
12%-16%
Антитела к U1-nRNP направлены против одного или более коровых белков 70К, А или С.
Высокие титры антител к U1-nRNP с чувствительностью 95-100% характерны для синдрома Шарпа,
многосимптоматического и многоформного смешанного заболевания соединительной ткани, сочетающего
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2012
тел.: (495)737-0363, факс: (495)737-0365, e-mail: [email protected]
ANA Profile 5 EUROLINE, EUROIMMUN AG
10
_____________________________________________________________________________________________________
признаки ревматоидного артрита, СКВ, системной склеродермии и полимиозита. Эта патология пока еще не
выделена как самостоятельное заболевание. Титр антител коррелирует с клинической активностью
заболевания. Антитела к U1-nRNP находят также у 15%-40% пациентов с системной красной волчанкой, у
2%-12% с системной склеродермией и у 12%-16% с полимиозитом.
Sm
(Sm – антиген Смит, по имени пациента). Рибонуклеарный антиген клеточного ядра, который участвует в
сплайсинге пре-мРНК. Sm принадлежат к группе малых рибонуклеопротеинов (snRNP, small nuclear
ribonucleoproteins), состоящих из низкомолекулярной РНК с высоким содержанием уридина (U-РНК или URNP) в комплексе с различными белками (с молекулярной массой 9–70 кДа)
Антиген
Заболевание
Распространенность
Sm
СКВ
5%-40%
Антитела к Sm имеют высокую специфичность (более 90%) к системной красной волчанке и могут быть
выявлены в 5%-40% случаев. Распространенность среди представителей европеоидной расы находится на
уровне 5%-10%. В других этнических группах, например, среди арабов (20%-42%), китайцев (около 30%)
или чернокожих африканцев (около 30%), этот показатель гораздо выше, поэтому во многих американских
исследованиях фигурируют цифры на уровне 20%-40%.
SS-A (Ro)
(Растворимое вещество А или вещество А синдрома Шегрена или антиген Роберта – по имени пациента;
цитоплазматический белковый комплекс, состоящий из одной молекулы РНК (Y1, Y2, Y3, Y4 или Y5) и
белковой субъединицы с молекулярной массой 60 кДа).
Антиген
SS-A (Ro)
Заболевание
Распространенность
Синдром Шегрена
40%-95%
СКВ
20%-60%
КВ новорожденных
95%-100%
Антитела к SS-A направлены к белковой субъединице в 60кДа и связаны с различными аутоиммунными
заболеваниями. Наиболее часто они встречаются у пациентов с синдромом Шегрена (от 40% до 95%
случаев), а также при системной красной волчанке (от 20% до 60% случаев) и при первичном билиарном
циррозе (20%) и иногда при аутоиммунном гепатите и вирусном гепатите. Кроме этого, практически в 100%
случаев неонатальной красной волчанки у новорожденных могут быть найдены антитела к антигену SS-A.
Они поступают через плацентарный барьер к плоду и являются причиной воспалительных реакций, а также
могут вызывать врожденную атриовентрикулярную блокаду, в случае наличия антител к SS-A у матери, а
особенно в случае наличия у нее еще и антител к SS-B (La). Дифференциальная диагностика антител к SSA от антител к антигену Ro-52 (белок 52 кДа, RING-зависимая E3 лигаза) имеет решающее диагностическое
значение, так как было обнаружено, что антитела к Ro-52 не являются болезнь-специфическими, а
выявляются также при миозитах, системной склеродермии, других коллагенозах, неонатальной красной
волчанке, первичном билиарном циррозе, при аутоиммунном гепатите и вирусном гепатите.
SS-B (La)
(Растворимое вещество B или вещество B синдрома Шегрена или антиген Лейна – по имени пациента,
фактор терминации транскрипции в клеточном ядре для РНК-полимеразы III).
Антиген
SS-B (La)
Заболевание
Распространенность
Синдром Шегрена
40%-95%
СКВ
10%-20%
КВ новорожденных
75%
Антитела к SS-B находят почти исключительно у женщин (29:1) при синдроме Шегрена (от 40% до 95%
случаев), при СКВ (от 10% до 20%) и красной волчанке новорожденных (75%). При синдроме Шегрена в
основном встречается комбинация антител к SS-A и SS-B.
Scl-70
(Фермент ДНК-топоизомераза I, находится в нуклеоплазме и в особенно высоких концентрациях в ядрышке,
играет важную роль в репликации и транскрипции двойной спирали ДНК).
Антиген
Scl-70
Заболевание
Системная склеродермия (СС)
- диффузная форма
- ограниченная (лимитированная) форма
Распространенность
25%-75%
40%-65%
5%-15%
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2012
тел.: (495)737-0363, факс: (495)737-0365, e-mail: [email protected]
ANA Profile 5 EUROLINE, EUROIMMUN AG
11
_____________________________________________________________________________________________________
Системная склеродермия (СС) проявляется в двух формах, которые не всегда возможно четко различить:
диффузная кожная и ограниченная кожная формы. Антитела к Scl-70 выявляются у 25%-75% пациентов с
СС, с распространенностью 40%-65% при диффузной форме и 5%-15% при ограниченной форме.
PM-Scl
(Антиген PM-Scl представляет собой комплекс из 11-16 полипептидов с молекулярной массой от 20 до 110
кДа, локализован в основном в ядрышке и участвует в формировании рибосомальной РНК. Основными
антигенами являются два полипептида с молекулярной массой 75 и 100 кДа, известные как PM-Scl-75 и PMScl-100. Эти два антигена не зависят один от другого и не вызывают перекрестных реакций. Считается, что
PM-Scl играет роль в сплайсинге рРНК 5,85 и некоторых U-snРНК.
Антиген
PM-Scl
Заболевание
Распространенность
Системная склеродермия, включая перекрестный синдром
10-20%
Полимиозит (ПМ)/ СС перекрестный синдром
18%
Системная склеродермия (положительная по антителам к PM/Scl-75)
10%
Системная склеродермия (положительная по антителам к PM/Scl-100) 7%
Сыворотки пациентов с системной склеродермией, включая перекрестный синдром, положительных по
аутоантителам к PM-Scl, в 90-98% реагируют с PM-Scl-75 или в 50-63% с PM-Scl-100. Специфичность при
этом составляет 99% (PM-Scl100) и 98% (PM-Scl75), а чувствительность 6,6% и 11,8% соответственно.
Аутоантитела к PM-Scl обнаруживаются у 18% пациентов с перекрестным синдромом системная
склеродермия/полимиозит. В таком случае антитела в основном направлены к обоим основным антигенам,
PM-Scl75 и PM-Scl100. В случае прогрессирующего системного склероза распространенность антител к PMScl75 составляет 10%, а к PM-Scl100 – 7%.
Jo-1
(Цитоплазматическая гистидил-тРНК-синтетаза)
Антиген
Заболевание
Распространенность
Jo-1
Полимиозит / дерматомиозит
25%-35%
Антитела к Jo-1 выявляются при полимиозите и дерматомиозите в 25%-35% случаев. Они часто связаны с
одновременно текущим интерстициальным фиброзом легкого / фиброзным альвеолитом.
Центромеры
(Четыре различных белка были идентифицированы как аутоантигены центромеров: CENP A –
центромерный белок-А (17 кДа), CENP B – центромерный белок-В (80 кДа), CENP С – центромерный белокС (140 кДа), CENP D – центромерный белок-D (50 кДа).
Антиген
Центромеры
Заболевание
Распространенность
Системная склеродермия, ограниченная форма (CREST синдром) 80%-95%
Системная склеродермия, диффузная форма
8%
Первичный билиарный цирроз
10%-30%
Аутоантитела к центромерам (АСА) обнаруживаются у 80-95 % пациентов с ограниченной формой
прогрессирующего системного склероза (CREST-синдром – название, составленное из аббревиатур
входящих в него симптомов: кальциноз, синдром Рейно, дискинезия пищевода, склеродактилия и
телеангиэктазия). При этом они выявляются только у 8% пациентов с диффузной формой СС, но также
встречаются у 10%-30% пациентов с первичным биллиарным циррозом.
PCNA
(Ядерный антиген пролиферирующих клеток, Циклин I, вспомогательный фактор репарационной ДНКполимеразы дельта с молекулярной массой 36 кДа. Играет ключевую роль в регуляции клеточного цикла:
он появляется с началом S-фазы. Белок разрушается в середине фазы G2.)
Антиген
Заболевание
Распространенность
PCNA
СКВ
3%
Антитела к PCNA являются специфичными для СКВ, их специфичность составляет 99%. Однако
распространенность антител составляет всего 3%.
dsDNA
(Двуспиральная ДНК, нативная ДНК)
Антиген
dsDNA
Заболевание
СКВ
Распространенность
40-90%
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2012
тел.: (495)737-0363, факс: (495)737-0365, e-mail: [email protected]
ANA Profile 5 EUROLINE, EUROIMMUN AG
12
_____________________________________________________________________________________________________
Выявление антител к дезоксирибонуклеиновой кислоте (ДНК) играет важную роль в диагностике системной
красной волчанки (СКВ). Антитела к ДНК можно разделить на два типа: антитела к двуспиральной
(нативной) ДНК (dsDNA, nDNA) и антитела к односпиральной (денатурированной) ДНК (ssDNA). Антитела к
двуспиральной ДНК направлены в основном к внешним эпитопам дезоксирибозофосфатного остова
двойной спирали и поэтому реагируют как с двуспиральной, так и с односпиральной ДНК. С другой стороны,
антитела к односпиральной ДНК направлены к эпитопам пуриновых или пиримидиновых оснований. Однако
они могут распознавать также и эпитопы дезоксирибозофосфатного остова.
Антитела к dsDNA специфичны для системной красной волчанки (СКВ). Степень распространенности
антител к двуспиральной ДНК составляет от 20 до 90% в зависимости от метода определения и активности
заболевания. Антитела к нативной ДНК иногда выявляются у пациентов с другими аутоиммунными
заболеваниями, инфекциями и в редких случаях у здоровых пациентов. Следует отметить тот факт, что у
85 % изначально здоровых пациентов, но у которых были обнаружены антитела к dsDNA, в течение первых
пяти лет после обследования развилась системная красная волчанка. Однако отрицательный результат
при выявлении антител к dsDNA не может полностью гарантировать отсутствие СКВ.
Нуклеосомы
(Функциональные субъединицы хромосом в клеточном ядре, состоящие из гистонов и dsDNA).
Антиген
Заболевание
Распространенность
Нуклеосомы
СКВ
40-70%
Антитела к нуклеосомам обнаруживают в сыворотке пациентов с системной красной волчанкой (СКВ).
Однако значение их как характерных маркеров СКВ до сих пор было ограничено, т. к. около 70% сывороток
пациентов с системной склеродермией реагировало также с обычно использовавшимися препаратами
нуклеосом. В тест-системе EUROLINE фирмы EUROIMMUN в качестве антигена используется новый,
высокоочищенный препарат нуклеосом. С помощью этой системы антитела к нуклеосомам обнаруживаются
при СКВ со специфичностью, близкой к 100%. Никаких реакций с сыворотками пациентов со склеродермой,
синдромом Шегрена или полимиозитом не обнаружено.
Гистоны
(Ядерные белки, типов Н1, Н2А, Н2В, Н3, Н4, которые вместе с двухцепочечной ДНК формируют
нуклеосомы, функциональные субъединицы хромосом клеточного ядра).
Антиген
Гистоны
Заболевание
Распространенность
Лекарственно-индуцированная
красная 95-100%
волчанка
СКВ
50%
Ревматоидный артрит
15-50%
Аутоантитела могут образовываться к любому из пяти типов белка. Наиболее часто встречаются антитела к
Н1 и
Н2В типу гистонов. Эти антитела постоянно находят при лекарственно-индуцированной
(прокаинамидом, гидралазином, изониазидом и другими) красной волчанке (с частотой 95%). У порядка 5075% пациентов, получающих прокаинамид и у 25-30% – гидралазин появляются антинуклеарные антитела
без развития симптомов СКВ в результате длительной терапии. У трети этих пациентов обнаруживаются
антитела к гистонам и после терапии, длительность которой может различаться, возникают симптомы
лекарственно-индуцированной красной волчанки: полиартралгия, плеврит и перикрдит.
Антинуклеарные антитела могут оставаться на протяжении нескольких лет после отмены приема
препарата, вызвавшего их образование, симптомы же постепенно затухают. Антитела к гистонам также
встречаются у
50% пациентов с диссеминированной красной волчанкой и у 5-50% пациентов с
ревматоидным артритом.
Рибосомальные Р-белки
(Рибосомальный антиген Р состоит из трех белков рибосомальной субъединицы 60S. Эти белки названы Р0
(молекулярная масса 38 кДа), Р1 (19 кДа) и Р2 (17 кДа). Главный иммунореактивный эпитоп расположен на
карбоксильном конце всех трех белков и состоит из идентичной последовательности 17 аминокислот.)
Антиген
Рибосомальные Р белки
Заболевание
СКВ
Распространенность
10%
Антитела к рибосомальным белкам Р специфичны для системной красной волчанки (СКВ). Фирмой
EUROIMMUN были проведены исследования образцов сыворотки крови 360 пациентов с системной
красной волчанкой (СКВ, systemic lupus erythematosus, SLE), протестированных многофакторным анализом,
а также 79 пациентов с другими коллагенозами (прогрессирующим системным склерозом, синдромом
Шёгрена, дерматомиозитом/ полимиозитом, смешанным заболеванием соединительной ткани (MCTD,
Sharp-синдром)) и 206 здоровых доноров крови. Во всех этих образцах определяли наличие антител к
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2012
тел.: (495)737-0363, факс: (495)737-0365, e-mail: [email protected]
ANA Profile 5 EUROLINE, EUROIMMUN AG
13
_____________________________________________________________________________________________________
рибосомальным белкам Р (ARPA). ARPA были выявлены у 34 (9,4%) из 360 пациентов с СКВ и у 3 (12,5%)
из 24 пациентов с Sharp-синдромом. У двух из этих трех пациентов также были обнаружены антитела к
двуспиральной ДНК (dsDNA), являющиеся серологическим признаком компонентов волчанки. Ни в одном
случае прогрессирующего системного склероза, синдрома Шёгрена или дерматомиозита/ полимиозита, а
также у здоровых доноров крови ARPA не были выявлены. Степень проявления СКВ не коррелировала с
титром антител ARPA. Среди больных СКВ распространенность ARPA у пациентов с нарушениями ЦНС,
нефритом или гепатитом была практически такой же, как и у пациентов без этих нарушений. ARPA
присутствуют и у больных СКВ с другими проявлениями. Однако эти антитела несколько чаще встречаются
у пациентов с психозами, хотя различие статистически недостоверно.
АМА М2
(Фермент Е2 и белок Х пируватдегидрогеназного комплекса являются главными анти-митохондриальными
М2 антигенами)
Антиген
Заболевание
Распространенность
АМА-М2
Первичный билиарный цирроз печени (ПБЦП)
> 90%
Высокие титры антител к АМА М2 характерны для первичного билиарного цирроза печени, при котором
предпочтительными антигенами являются фермент Е2 и белок X пируватдегидрогеназного комплекса.
Заболевание встречается преимущественно у женщин (> 90%) в возрасте 40 –60 лет. Частота
встречаемости ПБЦП в разных частях мира оценивается как 4-31 случаев на миллион в год.
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.
Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования
сверьте номер и дату издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящем переводе (см.
внизу справа). При несовпадении номеров или дат обратитесь в ЗАО «Аналитика» за новым переводом,
либо руководствуйтесь оригиналом инструкции.
DL1590-1601-5G_ANA Profile 5 (IgG) EUROLINE.doc
2/5/2012 16:53:00
Оригинал DL_1590-5G_A_UK_C04.doc
Version:12/12/2011 12:21:24
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2012
тел.: (495)737-0363, факс: (495)737-0365, e-mail: [email protected]
ANA Profile 5 EUROLINE, EUROIMMUN AG
14
_____________________________________________________________________________________________________
EUROIMMUN ANA Profile 5 EUROLINE (IgG)
Протокол исследования
Предварительная обработка:
Поместите тестовые стрипы в лунки лотка для инкубации и внесите
в каждую лунку 1,5 мл буфера для образцов
5 мин
Шейкер рокерного типа
1. Инкубация образца:
Аспирируйте жидкость, внесите в лунку
1,5 мл разведенного образца сыворотки (1:101)
30 мин
Шейкер рокерного типа
Промывка: 3  5 мин
Аспирируйте жидкость, промойте 3 раза по 5 минут
1,5 мл разведенного промывочного буфера
2. Инкубация с конъюгатом:
Аспирируйте жидкость, внесите в лунку
1,5 мл ферментного конъюгата (1:10)
30 мин
Шейкер рокерного типа
Промывка: 3  5 мин
Аспирируйте жидкость, промойте 3 раза по 5 минут
1,5 мл разведенного промывочного буфера
3. Инкубация с субстратом:
Аспирируйте жидкость, внесите в лунку
1,5 мл раствора субстрата
10 мин
Шейкер рокерного типа
Остановка реакции:
Аспирируйте жидкость, промойте 3 раза по 1,5 мл
дистиллированной водой
Оценка
EUROLineScan
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2012
тел.: (495)737-0363, факс: (495)737-0365, e-mail: [email protected]