ОБНАРУЖЕНИЕ ВЕНЛАФАКСИНА В КРОВИ И В

Лабораторные методы исследования
3. Федоровцев А.Л., Эделев Н.С. Современные возможности
цитологических исследований объектов судебномедицинс
кой экспертизы // Вестник судебной медицины. – 2014. –
Т. 3, № 1. – С.18–22.
ОБНАРУЖЕНИЕ ВЕНЛАФАКСИНА В КРОВИ
И В БИОМАТЕРИАЛЕ
П.Р. Шмидт, Д.А. Фадеев, О.А. Черданцев
г. Кемерово
Венлафаксин (Venlafaxine) – антидепрессант при
меняемый для лечения и профилактики депрессий раз
личной этиологии, выпускаемый в таблетках. Его хими
ческое название: (R/S)1[2(диметиламино)1(4ме
токсифенил) этил] циклогексанола гидрохлорид (рис. 1).
Механизм антидепрессивного воздействия препа
рата связан с его способностью потенцировать передачу
нервного импульса в ЦНС. Венлафаксин является силь
ным ингибитором обратного захвата серотонина и но
радреналина и слабым ингибитором обратного захвата
допамина. Кроме того, венлафаксин снижает βадренер
гическую реактивность как после однократного введе
ния, так и при постоянном приеме.
Венлафаксин не обладает срод
ством к мускариновым, холинерги
ческим, Н1гистаминовым и β1ад
ренергическим рецепторам голов
ного мозга. Он не подавляет актив
ность моноаминоксидазы, не обла
дает сродством к опиатным, бен
зодиазепиновым, фенциклидино
вым или Nметилdаспартатным
рецепторам. Венлафаксин хорошо
всасывается из желудочнокишеч
ного тракта. После однократного
Рис. 1.
приема 25–150 мг, максимальная
277
АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ СУДЕБНОЙ МЕДИЦИНЫ И ЭКСПЕРТНОЙ ПРАКТИКИ
концентрация в плазме крови достигает 33–172 нг/мл в
течение приблизительно 2–4 ч. Период полувыведения
венлафаксина и дезметилвенлафаксина составляет со
ответственно 5 и 11 ч. Максимальная концентрация дез
метилвенлафаксина в плазме крови 61–325 нг/мл дос
тигается приблизительно через 4–3 ч после введения.
Связывание венлафаксина с белками плазмы крови со
ставляет 27%. Дезметилвенлафаксин и другие метабо
литы, а также неметаболизированный венлафаксин, вы
деляются почками. При многократном введении равно
весные концентрации венлафаксина достигается в те
чение 3 дней.
В практике нашей лаборатории был случай обна
ружения лекарственного препарата «Венлафаксин» в
биоматериале и в крови. Изолирование из биоматериа
ла проводили по методу Васильевой. Изолирование из
крови проводили по следующей методике. К 10 мл кро
ви добавляли 10 мл дистиллированной воды, смесь под
кисляли 10% раствором соляной кислоты до pH=2,
взбалтывали и экстрагировали 10 мл хлороформа триж
ды. Водную фазу подщелачивали 10% водным раство
ром аммиака до pH=10 и экстрагировали 10 мл хлоро
форма трижды. При изолировании венлафаксина из кро
ви и по методу Васильевой он обнаруживается в щелоч
ной вытяжке. Обнаружение проводили методом ТСХ,
ГХМС, ВЭЖХ.
ТСХ. Исследование на венлафаксин проводили на
пластинках с закрепленным слоем силикагеля «60g» (зер
нистость 5–45 мкм, связующее 12% гипса) и на плас
тинках для тонкослойной хроматографии марки «Sorbfil»
ПТСХПАУФ (зернистость 5–17 мкм, связующее си
ликазоль). Нами использовались следующие системы ра
створителей: нейтральные – хлороформ : 95% этанол
(7:3) {Rf=0.78}; щелочные – этилацетат : этанол : 25%
водный раствор аммиака (17:2:1) {Rf=0.75}; диоксан :
хлороформ : ацетон : 25% водный раствор аммиака
(19:18:2:1) {Rf=0.69}. Проявление пластинок проводили
реактивом Драгендорфа, модифицированным по Му
нье.
278
0,3
0,8
1
2
13
215
216
210
103
104
116
40
42
59
166
155
184
1823
1847
1788
1640
1666
1611
1819,18
1798.52
1825,57
Венлафаксин
Биоматериал
Кровь
220/210 230/210 240/210 250/210 260/210 280/210 300/210
Объем
удержи9
вания,
мкл
Объект
Таблица 1.
Спектральные отношения, умноженные на 1000
Угол,
град.
Лабораторные методы исследования
ВЭЖХ. Извлечения ис
следовали методом эффек
тивной жидкостной хрома
тографии на хроматографе
«Милихром
А02»
ЗАО
«Econova» в следующих усло
виях: колонка 75х2 мм, запол
нена обращеннофазовым
сорбентом «ProntoSIL1205
C18»; детектирование при
длинах волн 210 (опорная),
220, 230, 240, 250, 260, 280,
300 нм; элюция 5% раствором
ацетонитрила в растворе «А»,
поставляемый
фирмой
«Econova» и содержащем 0,2
моль/л перхлората лития и
0,005 моль/л хлорной кисло
ты, 800 мкл; от 5 до 69% аце
тонитрила в растворе «А» с
плавным изменением кон
центрации до 2700 мкл, далее
100% ацетонитрил до 3000
мкл; скорость элюирования
100 мкл в мин; период детек
тирования 0,18 с. Обработку
хроматограммы проводили в
программе «МультиХром».
На хроматограммах (при обра
ботке задавали следующие
параметры: доверительное
окно удерживания – 10%; ме
тод вычисления спектров –
наилучшей чистоты; отчет о
возможных кандидатах, раз
решенных только по времени
– да; только кандидатов с уг
лом меньшим 5,00°.) наблю
279
АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ СУДЕБНОЙ МЕДИЦИНЫ И ЭКСПЕРТНОЙ ПРАКТИКИ
дали следующие результаты (табл. 1).
ГХМС. Также извлечения и ацетилированные из
влечения исследовали на венлафаксин на хроматографе
Agilent Technologies 7890A с массселективным детекто
ром Agilent 5975С. Ацетилирование извлечений, выпа
ренных досуха, проводили смесью 40 мкл пиридина и 60
мкл уксусного ангидрида при 70 °C в течение 30 мин с
последующем выпариванием досуха в токе воздуха аце
тилирующей смеси. Извлечение, выпаренный досуха, и
сухой остаток ацетилированного извлечения растворя
ли в 200 мкл этилацетата, и 1 мкл раствора вводили при
помощи автосемплера в хроматограф в следующих усло
виях: кварцевая капиллярная колонка длиной 30 м, диа
метром 0,25 мм, толщиной пленки 0,25 мкм фазы HP
5MS. Хроматографирование проводили при постоянном
давлении газаносителя гелия равном 117,211 кПа; деле
ние потока 1:5, постоянной температуре испарителя рав
ной 280 °C и переменной температуре колонки: термо
статирование при 100 °C в течение 1 мин с последующим
повышением температуры со скоростью 10 °C в минуту
до 325 °C с последующим термостатированием в тече
ние 5 минут. Режим работы MSD: ионизация электрон
ным ударом при 70 эВ; сканирование ионов по полному
ионному потоку от 45 до 570 m/z; температура анализа
тора 150 °C; температура источника ионов 230 °C. Обра
ботка полученной хроматограммы осуществлялась
Enhanced Chem Station Agilent Technologies. Идентифи
кацию проводили по времени удерживания, характер
ному массспектру по базе данных из библиотек. На хро
матограммах наблюдали пик со временем удерживания
14,782 мин, идентифицированный по характерным
ионам m/z 58,0; 91,0; 134,0; 179,0 и 202,0 как венлафак
син с вероятностью 95%. Ацетилированыый венлафак
син с вероятностью 90% и временем удерживания 15,256
мин идентифицировали по тем же ионам.
Таким образом, применяемые в нашей лаборато
рии физикохимические методы анализа позволяют
идентифицировать венлафаксин в биоматериале.
280