федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Казанская государственная академия
реклама
федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» На правах рукописи КАМАЛИЕВ АЙДАР РАФАИЛОВИЧ ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПОЛИСАХАРИДНОГО ПРЕПАРАТА «ГЕМИВ» ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ КРОЛИКОВ 06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Научный руководитель доктор ветеринарных наук, доцент Асрутдинова Резиля Ахметовна Казань - 2015 2 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………… 5 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ…………………………………………. 12 1.1 Биологическая активность полисахаридов……………………. 12 1.2 Неспецифическая резистентность организма и её нарушения………………………………………………….. 1.3 Средства, используемые для повышения защитных свойств организма животных……………………… 1.4 23 31 Иммунокоррегирующая терапия при иммунодефицитных состояниях……………………………….. 35 2 ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ……………………... 52 2.1 Методология и методы исследований………………………… 52 2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ………. 62 2.2.1 Токсикологические свойства полисахаридного препарата «Гемив»…………………………………………………………. 62 2.2.1.1 Изучение острой токсичности…………………………………. 62 2.2.1.2 Изучение кумулятивных свойств……………………………… 64 2.2.1.3 Изучение хронической токсичности…………………………... 66 2.2.1.4 Изучение раздражающего и аллергизирующего действия полисахаридного препарата «Гемив»………………. 75 2.2.1.5. Изучение эмбриотоксических и тератогенных свойств……… 76 2.2.2 Эффективность применения полисахаридного препарата «Гемив» для повышения резистентности лабораторных животных………………………………………………………… 80 2.2.2.1 Влияние разных доз полисахаридного препарата «Гемив» белым крысам при экспериментальном иммунодефиците………………………………………………… 2.2.2.2 Влияние разных доз полисахаридного препарата «Гемив» 80 3 кролика при экспериментальном иммунодефиците………….. 2.2.3 Сравнительная иммуностимулирующая полисахаридного препарата 84 эффективность «Гемив» и циклоферона…………………………………………………….. 93 2.2.3.1 Результаты клинико-гематологических исследований………. 93 2.2.3.2 Результаты биохимических исследований…..………………... 97 2.2.3.3 Результаты иммунологических исследований………………... 100 2.2.4 Производственные исследования полисахаридного препарата «Гемив»…………………………………………………………... 103 2.2.4.1 Условия содержания и кормления кроликов в КФХ «МИАКРО-КАРАТАУ Фермерское хозяйство»……………… 2.2.4.2 Влияние полисахаридного препарата «Гемив» 103 на иммунокомпетентные клетки периферической крови при вакцинации кроликов против сальмонеллеза…......................... 2.2.4.3 Ветеринарно-санитарная оценка мяса кроликов 107 после введения полисахаридного препарата «Гемив» на фоне иммунизации против сальмонеллеза 2.2.4.4 Биологическая оценка мяса кроликов…………………………. 113 115 2.2.4.5 Микроструктура отдельных внутренних органов кроликов после применения полисахаридного препарата «Гемив» на фоне иммунизации……………………………………………… 116 2.2.5 Экономическая эффективность разработанных мероприятий 140 3 ЗАКЛЮЧЕНИЕ…………………………………………………. 143 ПРЕДЛОЖЕНИЕ ПРОИЗВОДСТВУ………………………….. 152 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ……………………………………... 153 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ……………. 154 СПИСОК ИЛЛЮСТРИРОВАННОГО МАТЕРИАЛА……….. 177 ПРИЛОЖЕНИЯ…………………………………………………. 181 Приложение А: ВРЕМЕННЫЕ ПРАВИЛА по применению полисахарида «Гемив» для повышения неспецифической 4 резистентности, иммунной реактивности……………………... 182 Приложение Б: Справка об использовании материалов диссертации (ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет»)……………………………………….. 185 Приложение В: Справка об использовании материалов диссертации (ФГБОУ ВПО «Чувашская государственная сельскохозяйственная академия»)……………………………. 186 Приложение Г: Справка об использовании материалов диссертации (ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»)…... 187 Приложение Д: Акт производственного испытания иммуностимулирующей активности полисахарида «Гемив» при вакцинации кроликов против сальмонеллеза (КФХ «МИАКРО-КАРАТАУ Фермерское хозяйство»)…………….. 188 Приложение Е: Справка о внедрении в производство научных исследований…………………………………………. 190 Приложение Ж: Акт проведения ветеринарно-санитарной экспертизы мяса кроликов……………………………………… 191 5 ВВЕДЕНИЕ Одной из важнейших задач для эффективного ведения животноводства является сохранение здоровья молодняка. В условиях ведения промышленного животноводства молодняк подвергается воздействию различных неблагоприятных факторов, таких как нарушение норм кормления, скученность содержания, нарушение микроклимата и санитарного состояния помещений, а также воздействие патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (Выдрин В.Л. Заболеваемость скота в зависимости от условий содержания и кормления / Выдрин В.Л. [и др.] // Ветеринария. – 1998. - № 1. – C. 42; Захаров П.Г., Петров Н.И. Профилактика и лечение болезней новорожденных телят / П.Г. Захаров, Н.И. Петров - С.-Петербург: "Петролазер", 2001. - 48 с.). Все эти факторы негативно влияют на иммунный статус животных и приводят к возникновению заболеваний (Климов В.В. Иммунная система и основные формы иммунопатологии / В.В. Климов, Е.Н. Кологривова, НА. Черевенко [и др]. Ростов-на-Дону: Феникс, 2006. - 224 с.; Федоров Ю.Н. Иммунологический фактор как причина желудочно-кишечных заболеваний у телят / Ю.Н. Федоров // Предложения ученых по профилактике желудочно-кишечных болезней телят до месячного возраста: материалы круглого стола отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии. – Москва. - 2000. - С. 36 - 37). Поэтому восстановление иммунологических нарушений – актуальная задача, так как большинство хронических, соматических, инфекционных болезней у животных сопровождается вторичной иммунологической недостаточностью. Алгоритмизация иммунокоррекции (иммуномодуляции) предполагает использование фармакологических средств, которые способны увеличивать (иммуностимуляция) или снижать (иммуносупрессия) уровень иммунного ответа. (Федоров Ю.Н. Клинико-иммунологическая характеристика и иммунокррекция иммунодефицитов животных / Ю.Н. Федоров // Ветеринария. -№2. – 2013. – С.7-8). 6 На сегодняшний день имеется большой выбор новых коммерческих готовых или находящихся на стадии разработки и испытаний иммуностимуляторов, иммуномодуляторов, предназначенных для разных видов животных, направленных на инициацию различных типов иммунного ответа, сочетающих в себе различные уровни показателей эффективности и безопасности. В настоящее время полисахариды рассматриваются как перспективный комплекс биологически активных веществ для создания новых лекарственных средств с целью коррекции различных нарушений иммунной системы. Таким образом, в настоящее время применение полисахарида микробного происхождения в сочетании с базисной терапией против инфекционных болезней разных видов животных является актуальной задачей, которое требует изучения и изыскания новых, более эффективных биологических препаратов и внедрения их в ветеринарную практику. Степень разработанности проблемы. Состояние иммунной системы, как и любого другого органа, характеризуется комплексом морфологических, функциональных и клинических показателей, присущих иммунной системе в норме и они определяют иммунный статус (Боряев Г.И. Влияние минеральных элементов на иммунный статус бычков / Г.И. Боряев, А.Ф. Блинохватов, Ю.Н. Федоров и [др.] // Ветеринария.-1999. - №12. - С.36 - 38). Изменение какоголибо одного или нескольких показателей свидетельствует о нарушении иммунного статуса, т.е. отклонении его от норм, и трактуется как иммунодефицит (Морякина С.В. Патология репродуктивной функции у молочных коров / С.В. Морякина // Зоотехния.-2008.-№2.-С.16.). В центре внимания научного поиска остается проблема острой недостаточности эффективных лекарственных препаратов при иммунодефицитах, высокая их стоимость на фармакологическом рынке сдерживает проведение соответствующих профилактических и лечебных мероприятий. Поэтому исследования по определению токсических, иммуностимулирующих свойств полисахарида микробного происхождения «Гемив», лабораторных и других животных весьма актуальны. проводимых на 7 Тема работы является составной частью научных исследований, проводимых кафедрой зоогигиены ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана». Цель и задачи исследований. Исходя из вышеизложенного, целью настоящей работы являлось изучение фармако-токсикологических свойств полисахарида микробного происхождения «Гемив» и эффективность его применения для повышения неспецифической резистентности кроликов. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: 1. Определить токсичность и безвредность полисахаридного препарата «Гемив» на организм лабораторных животных; 2. Разработать оптимальную схему применения и выявить дозу, при которой достигается наиболее высокая продуктивность животных; 3. Экспериментально определить иммуностимулирующую активность полисахаридного препарата «Гемив»; 4. Изучить влияние полисахаридного препарата «Гемив» на морфологический и биохимический состав крови и естественную резистентность кроликов на фоне вакцинации против сальмонеллеза; 5. Провести ветеринарно-санитарную оценку мяса кроликов полученного после применения полисахаридного препарата «Гемив»; 6. Рассчитать экономическую эффективность применения полисахаридного препарата «Гемив» при вакцинации кроликов против сальмонеллеза. Научная новизна работы. Впервые изучены фармако-токсикологические свойства полисахаридного препарата микробного происхождения «Гемив», влияние его на клинико – биохимические показатели животных. Установлено положительное влияние на среднесуточные приросты животных, иммунологические показатели. Изучена гистоморфология тканей и органов кроликов получавших полисахаридный препарат «Гемив» на фоне иммунизации против сальмонеллеза. 8 Теоретическая проведенных и практическая исследований полисахаридного препарата значимость установлена «Гемив» для доза и работы. схема повышения На основе применения резистентности, продуктивности кроликов. Основные результаты исследований включены во «Временные правила по применению полисахаридного препарата «Гемив» в ветеринарии», утвержденным начальником Главного управления ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан А.Г. Хисамутдиновым (от 07 апреля 2015 года). Основные положения, вытекающие из материалов диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедрах фармакологии и токсикологии, эпизоотологии, микробиологии, зоогигиены, физиологии и патофизиологии ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»; на факультете биотехнологии и ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет»; на кафедре морфологии, акушерства и терапии факультета ветеринарной медицины и зоотехнии ФГБОУ ВПО «Чувашская государственная сельскохозяйственная академия». Методология и методы исследований. Исследования проводились с использованием следующих методов: 1) токсикологических - определение острой токсичности (ЛД50) при однократном пероральном и внутримышечном введении, хронической и эмбриональной токсичности при многократном введении, кумулятивных, аллергизирующих, раздражающих свойств. Для выявления аномалий развития исследовали внутренние органы и скелет извлеченных эмбрионов по методу Вильсона и Даусона (Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Л. Медицина. 1963. - С. 152; Медвед Л.И., Каган Ю.С., Спын Е.И. (1964); Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Минздрав РФ ЗАО «ИИА «Ремедиум», 2005.- 829 с.). 9 2) клинических – проведение ежедневного клинического осмотра крыс и кроликов с определением общего состояния: температуры тела, частоты сердечных сокращении и дыхательных движений в минуту; изменение массы тела, визуальный осмотр кожи, волосяного покрова, слизистых оболочек; 3) морфологических – взятие крови у опытных и контрольных животных осуществляли следующим путем: из хвостовой артерии у белых крыс, из ушной вены у подопытных кроликов. Гематологические показатели определяли по общепринятым методам (А.А. Кудрявцев с соавт., 1974): содержание гемоглобина – гемометром Сали; подсчет эритроцитов и лейкоцитов в 1 см3 проводили в камере Горяева. При изготовлении мазков крови и выведении лейкоформулы пользовались указаниями по гематологическим исследованиям (А. А. Кудрявцев с соавт., 1974 и Г. А. Симонян с соавт., 1995); 4) биохимических - содержание в сыворотке крови общего белка определяли с нефелометрически. помощью Используя рефрактометра шкалу RL-3, Рейсса, белковых показания фракций рефрактометра переводили в проценты белка (И. М. Карпуть, 1993); общий кальций и неорганический фосфор – унифицированным колориметрическим методом с помощью набора реагентов «Ольвекс диагностикум»; активность трансаминаз (АлАТ-аланинаминотрансфераза и АсАТ-аспартатаминотрансфераза) – унифицированным методом Райтмана Френкеля, щелочную фосфатазу по методу Бодански (И.П. Кондрахин, Н.В. Курилов, А.Г. Малахов, 1985); 5) иммунологических - определение в сыворотке крови специфических противосальмонеллезных антител в реакции гемагглютинации (РГА) со специфическими антигенами, БАСК определяли по методике О. В. Смирновой и Т. А. Кузьминой. 6) ветеринарно-санитарных – определение качества мяса кроликов проводили физико-химическими исследованиями, в соответствии ГОСТ 20235.074 Мясо кроликов. Методы отбора образцов. Органолептические методы определения свежести. – М.: Стандартинформ, 2010. – 8 с., ГОСТ 20235.1-74 10 Мясо кроликов. Методы химического и микроскопического анализа свежести мяса. – М.: Государственный стандарт Союза ССР, 1981. – 6 с. 7) математических – обработку экспериментально полученного цифрового материала проводили методом вариационной статистики с применением критерия достоверности по Стьюденту на персональном компьютере с использованием программного пакета Microsoft Excel, 2007. Основные положения, выносимые на защиту: 1. Полисахаридный соединением, не препарат обладает «Гемив» является местно-раздражающим, малотоксичным аллергизирующим, кумулятивным, эмбриотоксическим и тератогенным свойствами; 2. Полисахаридный препарат «Гемив» позволяет повышать неспецифическую резистентность организма при иммунодефицитных состояниях; 3. Применение «Гемив» способствует увеличению среднесуточных приростов, не оказывает отрицательного влияния на вкусовые, физикохимические свойства мяса кроликов и дает значительный экономический эффект чем препарат «Циклоферон». Степень достоверности и апробация результатов. Научные выводы и практические предложения теоретически и экспериментально обоснованы, что подтверждается фактическими данными. Они логически вытекают из содержания работы, согласуются с поставленными целью и задачами. Основные всероссийской результаты диссертации научно-практической представлены конференции и обсуждены «Актуальные на проблемы научного и кадрового обеспечения инновационного развития АПК» (г. Казань, 2012 г.); международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны» (г. Санкт-Петербург, 2013 г.); международной научно-практической конференции «Научное и кадровое обеспечение инновационного развития агропромышленного комплекса», посвящённой 140-летию КГАВМ (г. Казань, 2013 г.); в материалах международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию образования Иркутской государственной сельскохозяйственной академии и 10- 11 летию первого выпуска ветеринарных врачей «Фундаментальные и прикладные исследования в ветеринарии и биотехнологии 10-11 декабря 2014 г., Издательство «Перо» г. Москва, 2014, С. 73-77; в Ученых записках Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана, Том 221(1), Казань, 2015. С.102-104; в материалах VI международной научно-практической конференции «Актуальные направления фундаментальных и прикладных исследований» (22 - 23 июня 2015 г., North Charleston, USA. Том 2). Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе 7 статей в журналах, рекомендованных ВАК России. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 193 страницах, состоит из введения, обзора литературы, основного содержания работы, включающая методологию и методы исследования, результатов собственных исследований, заключения, предложений производству, списка сокращеий, списка использованной литературы, списка иллюстрированного материала и приложений. Работа иллюстрирована 19 таблицами, 27 рисунками. Список литературы включает 203 источников, в том числе 43 на иностранных языках. 12 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Биологическая активность полисахаридов В настоящее время в клинической и превентивной медицине широкое применение нашли препараты на основе полисахаридов, полученных из высших (пектины) и низших растений (альгинаты, каррагинаны), вторичного сырья животного происхождения (хитозан), грибов (крестин) и др. (Ning L. Enhancement of the antioxidative potential of heart, liver, spleen and kidney cells and erythrocytes of mice by the polysaccharide krestin / L. Ning, Z. Mei, C. Yuan // Med. Sci. Res. 1996. Vol. 24, Iss 9. P. 615 – 616; Thakur B.R. Chemistry and uses of pectin – a review / B.R. Thakur, R.K. Singh, A.K. Handa // Critical Rev. Food Sci. Nutr. 1997. Vol. 37, № 1.P. 47 – 73, Koide S.S. Chitin-chitosan: properties, benefits and risks / S.S. Koide // Nutr.Res. - 1998. - Vol. 18, -№ 6.- P. 1091 – 1101.). Полисахариды – полимеры состоящие из одного или пяти-шести различных остатков моносахаридов, связанных гликозидными связями, образующие линейные, разветвленные или свернутые в α-спираль цепи, разделяются на гомои гетерополисахариды. Запасающие полисахариды (крахмал, инулин, фруктан) формируют основу энергетических запасов организма, а структурные – образуют клеточные стенки и межклеточное вещество тканей растений. 1. Инкрустирующие полисахариды и водорастворимые пектины – структурные гетерополисахариды могут содержать аминосахара, полипептидную цепь и 20-30% уроновых кислот, выполняют рецепторные функции и скрепляют клетки и ткани между собой. 2.Водонерастворимый пектин - структурный полисахарид, связывает поверхностные слои клеточной оболочки, с гемицеллюлозой, имеет большую величину молекулярной массы и содержит в своем составе единичные полипептидные цепи, немного аминосахаров и 30-50% уроновых кислот. 13 3.Пектовая кислота - структурный полисахарид имеющий в своем составе 60-80% уроновых кислот и являющийся полиуроновой кислотой. Молекулы пектовой кислоты разветвлены и этерифицированы остатками спиртов и фенолов. Пектины и пектовая кислота в силу особенностей строения, состава, величины молекулярной массы, рецепторным и антигенным свойствам в составе растительного организма проявляют высокую биологическую активность при действии на животных. Полисахариды экстрагируют из воздушно-сухих растений дистиллированной водой, 1% растворами щавелевокислого аммония, соляной кислоты, 25% раствором щелочи, осаждают из экстрактов 96% этанолом и очищают этанолом, эфиром, ацетоном, переосаждением, диализом или электродиализом. Растительное сырье предварительно обрабатывают 40-60% растворами этанола удаляя из него экстрактивные вещества и окрашенные молекулы (Сычев И. А. Иммуннокоррегирующее, антианемическое и адаптогенное действие полисахаридов из донника лекарственного / И. А. Сычев, А. А. Подколзин, В. И. Донцов [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 1996. – № 6. – С. 661 – 663; Афанасьев В. А. Влияние полисахаридов ромашки аптечной на функциональное состояние иммунной системы при охлаждении / В. А. Афанасьев, И. Л. Бровкина, Л. Г. Прокопенко // Человек и его здоровье: Сб. науч. работ. Курск, 1999. - Вып. 2. - С. 71 - 73; Сычев И. А. Экспериментальное изучение антиоксидантной активности полисахаридов донника желтого и их действия на Na+,K+-АТФ / И. А. Сычев, И. А. Донцов, Т. Ю. Колосова // Материалы межрегиональной научно практической конференции «Социально-гигиенический мониторинг здоровья населения». – Рязань, 2000. – С. 204 - 207). Полисахариды – полимеры, построенные не менее чем из 11 моносахаридных единиц. Они могут состоять из одного или нескольких типов моносахаридов. гетерополисхариды. Соответственно различают гомополисахариды и 14 Полисахариды – обязательные компоненты всех организмов, составляют большую часть углеводов, встречающихся в природе, преобладающую долю в биомассе растений, а следовательно, и основную массу органического вещества на Земле. Полисахариды встречаются в виде самостоятельных полимеров, а также в комплексах с нуклеиновыми кислотами, белками, липидами, фосфатом. Разнообразны они по мономерному составу и структуре. Особым разнообразием отличаются полисахариды микроорганизмов. Некоторые из них близкие или идентичные полисахаридам растений и животных. Но подавляющее большинство микробных полисахаридов имеет уникальную структуру, специфическую для вида или для серологической группы вида. В микробных гликанах часто обнаруживаются ранее неизвестные моносахара, которые не встречаются ни у животных, ни у растений (Аркадьева З.А. Промышленная микробиология / З.А. Аркадьева, А.М. Безбородова, И.Н. Блохина. Под.ред. Егорова. - М: Высшая школа, 1989 – 688 с). Полисахариды микроорганизмов. являются Многие важнейшими физиологические, компонентами биохимические клеток и иммунохимические особенности полисахаридов определяются их распределением в клетке: наружная и цитоплазматическая мембрана, цитоплазма, выделение в виде внеклеточных слизей в окружающую среду (экзополисахариды) ( Мальцева, Н.Н. Экзополисахариды олигонитрофильных бактерий как фактор, обуславливающий образование микробных сообществ почвы / Н.Н. Мальцева. — Киев: Наукова думка, 1981. 242 с.; Захарова, И.Я. Методы изучения микробных полисахаридов / И .Я. Захарова, Л.B. Косенко. - Киев: Наукова думка, 1982. 192 с.; Гринберг, Т.А. Микробный синтез экзополисахаридов на СГС2 соединениях / Т.А. Гринберг, Т.П. Пирог, Ю.Р. Малашенко. — Киев.: Науковадумка, 1992.-211 с.; Sutherland, J.W. Microbial exopolysaccharides. Industrial polymers patent and future potential / J.W. Sutherland, D.C. Ellwood // Microbial. Technol. Curr. State Future Prospects: 29 Soc. Gen. Microbial. Cambridge etc., 1979. -P. 107-150.). 15 За рубежом основной промышленный микробный полисахарид – ксантан (продуцент – углевод окисляющие фитопатогенные бактерии X.Canpestris). Каждый новый микробный полисахарид, представляющий практический интерес, прежде всего, сравнивают по физико-химическим и реологическим свойствам с ксантаном. Несмотря на достигнутые успехи в области биотехнологии микробных полисахаридов, число их, выпускаемые промышленностью, крайне невелико; проблема поиска новых экономических способов их получения стоит попрежнему остро. Изучение состава и свойств микробных полисахаридов дает ключ к разработке рациональных методов их выделения, созданию оптимально готовых форм и композиций на их основе, что в итоге расширяет выбор полисахаридов и области их эффективного использования. Экономические расчеты показывают, что переоборудование действующих предприятий под выпуск микробных полисахаридов, вместо строительства новых объектов, снижает стоимость производства полисахаридов почти втрое. Соединение этих путей представляется весьма перспективным. В этом случае проблемы, связанные с выделением, исследованием состава и свойств микробных полисахаридов, становятся особенно актуальны, так как их решение дает возможность выбрать общее направление поиска практически ценных полисахаридов микроорганизмов с учетом особенностей их производства и применения (Дерябин В.В. Выделение, состав и свойства микробных полисахаридов: дис. в форме научного доклада. д-ра хим. наук: 03.00.23 / Дерябин Владимир Викторович. – М., 1991. – 50 с.) Несмотря на различия в методах получения, химической структуре для полисахаридов свойственно близкое проявление физиологических эффектов: сорбции радионуклидов, тяжелых металлов, бактерий и бактериальных токсинов, нормализации липидного обмена при гиперлипидемии различной этиологии, активации секретирующей и моторной функции кишечника, регуляции иммунитета, модуляции эндокринной системы, оптимизации функционирования гепато-билиарной системы (Лазарева Е.Б. Опыт и перспективы использования 16 пектинов в лечебной практике / Е.Б. Лазарева, Д.Д. Меньшиков // Антибиотики и химиотерапия. - 1999. - Т. 44, - № 2. - С. 37 - 40). Полисахариды и их модифицированные производные широко применяются в медицинской плазмозаменители и фармацевтической практике. крови (Бородин Ю.И. Они используются Фармакологические как средства, стимулирующие дренажную функцию лимфатической системы / Ю.И. Бородин, А.А. Зыков // Фармакология и токсикология. - 1989. - Т. 52. - № 2. - С. 106 - 110; Усманов Т.И. Исследование распределения заместителей в карбоксиметиловых эфирах полисахаридов методом ЯМР13С. / Т.И. Усманов, У.Г. Каримова, А.А. Сарымсаков // Высокомолекулярные соединения. - 1990. - Т.32, - № 6. - С. 1176-1183; Патент РФ № 2012564, МКИ5 С 08 В 11/12. Усманов Т.И., Каримова У.Г., Сарымсаков А. Способ получения карбоксиметил-целлюлозы. // РЖ Химия реф. № 2Ф38П 1996;.) и антикоагулянтные препараты (Simionescu C.I. Polymeres bioactifs. IX. Derives de la cellulose des group emends reactive / C.I. Simionescu, S. Dumitriu, J. Rouzaher // Cellul. Chem. And Tech-nol. - 1982. - V. 16, - N1. P. 67-75; Bamford С. H. Studies of the esterifi-cation of dextran: Routes to bioactive polymers and graft copolymers / С. H. Bamford, I. P. Middleton, К. G. Al-Lamec // Polymer. - 1986. - V. 27. - N- 12. - P. 1981-1985; McAuslan B.R. Enhanced in vitro fibrinolysis activity of immobilized plasmin on collagen beads / B.R. McAuslan, G. Johnson // J. Biomed. Mater.Res. -1987. -V.21, - N 7. - P. 921 – 935; Quan Jinying Производство и возможности использования модифицированной карбоксиметил гемицеллюлозы / Jinying Quan, Peiqing Wang // Linchanhuaxueyugongye - Chem. And Ind. Forest Prod. - 1997. - N4. - C. 25-31; Zeller S. Analysis of position of O-CMgroops in partially O-carboxymethyled cellulose by the reductive-cleavage method / S.G. Zeller, G.W. Griesgraber, G.R. Grau // Carbohydrate Research. 1991. - V.211. P. 41 - 45), обнаруживают антивирусную (Lechner M.D. Biodegradable cross linked polysaccharide absorbent for aqueous solutions and body fluids / M.D. Lechner, W. Lazik // Chem. Abstr., 1998. – P 129: 97265h.), иммуномоделирующую, противоопухолевую (Патент 5895804 США, МПК6 С 08 G 63/48, С 08 G 63/91.LeeS.P., Pauls S.P., Solarek D.B. Термореактивные полисахариды // РЖ 17 Химия, - реф. № ЗФ26П2000.; Heinze Т. Studies on the synthesis and characterization of car-boxym ethyl cellulose / Т. Heinze, K. Pfeiffer // Appl. Macromol. Chem. and Phys. 1999.- № 266. - P. 37 - 35.;) и другие виды биологической активности (Аркадьева Г.Е. Биологическая активность некоторых микробных полисахаридов: дис. д-ра биол. наук. - Л., 1974; Жестков В.А. Разработка антианемических препаратов на основе декстрана и изучение их в эксперименте: автореф. дис. канд. биол. наук. - ML, 1975; Захарова И .Я. Методы изучения микробных полисахаридов. / И .Я. Захарова, Л.В. Косенко. - Киев: Наукова Думка, 1982. – С. 95 - 106; VladA. Immobilization of urease on KM-cellulose /A. Vlad, D. Florin, O. Severian [ et all.] // Biotechnol. and Bioengin. -1989. -V. 34, - N 3. - P. 283 - 290). Полисахариды могут составлять до 80 % сухого веса растения. В состав клеточных стенок растений входят целлюлоза, гемицеллюлозы и пектины (пектиновые вещества). Кроме того, в растениях содержатся резервные полисахариды (крахмалы, инулин и т.д.), камеди и слизи. Целлюлоза и резервные полисахариды – нейтральные полимеры, построенные из остатков нейтральных моносахаридов. Остальные группы включают как нейтральные полисахариды, так и кислые, содержащие остатки глюкуроновых кислот (Оводов Ю.С. Полисахариды цветковых растений: структура и физиологическая активность / Ю.С. Оводов // Биоорганическая химия. - 1998. - Т. 24. - № 7. - С. 483 – 501). Полисахариды представляют интерес и как группа неспецифических транспортных макромолекул, так как эти полимеры способны обеспечивать эффективную направленную доставку действующего лекарственного вещества к биомишеням (Глозман О. М. Производные декстрана. XII. Присоединение производных у-аминомасляной кислоты к декстрану / О. М. Глозман, Л.A. Журенко, В.В. Шавырина [и др.] // Журнал общ. химии. 1980. Т. 50. № 7. С. 1640 - 1648.; Niemela K. Identification of the products of hydrolysis of carboxymetyl cellulose / K. Niemela, E. Sjostrom // Carbohydrate Research. 1988. V. 180. - P. 43 - 52.; Xu J. Immobilization of trypsin on sefarose derivatives using various covalent bonding methods / J. Xu, S. Qi, Zh. Yyan // Shengwu Gongcheng Xuebao. - 1993. V.9,№1. - P. 69 - 73). Они в наибольшей степени отвечают 18 требованиям, предъявляемым к матрицам при создании физиологически активных полимеров (ФАП). Полисахариды, как правило, не токсичны, не вызывают аллергических реакций, легко выводятся из организма. Химическая фиксация лекарственных субстанций на полисахаридной матрице позволяет создавать препараты пролонгированного действия с низкой токсичностью и необходимым балансом липофильно-гидрофильных свойств (Глозман О. М. Производные декстрана. XII. Присоединение производных у аминомасляной кислоты к декстрану /О. М. Глозман, Л.A. Журенко, В.В. Шавырина [и др.] // Журнал Общ.химии. - 1980. - Т. 50. - № 7. - С. 1640 - 1648.; Коршак В.В. Полимеры в процессах иммобилизации и модификации природных соединений. / В.В. Коршак, М.Н. Штильман. - М.: Наука, 1984. 671 с.; Алюшин М.Т. Современное состояние научных исследований по применению полимеров в фармации / М.Т. Алюшин, И.С. Грицаенко, М.В. Каменская // Научн. тр. ВНИИ Фармации. 1990. - Вып.28. с. 5 - 11.; Рустамов Я.И. Особенности технологии синтеза натрий карбоксиметил целлюлозы из различных сырьевых материалов./ Я.И. Рустамов, Ф.М. Садыков, Г.А. Карамамедов [и др.] // Химическая промышленность. - 1997. - №9. - С 606 610). В последнее время большое внимание уделяется поиску и изучению средств, оказывающих влияние на иммунные реакции организма. Многие исследователи связывают фитопрепаратов с иммуномодулирующие полисахаридами свойства (Мельникова Т.И., растений Николаев и В.О. Сравнительная иммунофармакологическая оценка растительных экстрактов с полифенольными и полисахаридными комплексами / Т.И. Мельникова, В.О. Николаев // Фармация в ХХI веке: инновации и традиции – СПб, 1999. С.179; Кузьмина А.А. Разработка фитопрепаратов для профилактике и лечения заболеваний органов дыхания у детей: автореф. канд. фарм. наук: 15.00.02 и 14.00.25 / Кузьмина А.А. - СПб, 2000. – 29 с.). Некоторые фракции растительных полисахаридов оказывают влияние на факторы гуморального иммунитета: повышают количество лизоцима и титр комплемента в сыворотке крови (Басс-Шадхам Х.Ф., Зейдака А.А. Биологическая 19 активность полисахаридных фракции, выделенных из лишайника Cetraria islandica. В книге: Новые иммунореагирующие препараты и иммунологические методы. Рига. 1978. С. 9 - 14., Демидов В.К., Басс-Шадхан Х.Ф. Морфологическая характеристика лимфатических узелков и печени крыс линии Вистар, получавших полисахариды из лишайника В Cetrariaislandica. книге: Новые иммунореагирующие препараты и иммунологические методы. - Рига, 1978.С.17 - 18.). Эти же полисахариды, выделенные в чистом виде, оказывают в опытах “in vitro” и “in vivo” на модели фагоцитоза иммуномодулирующие действия (Lawery S.D. Biological role of lichen substances / S.D. Lawery // Bryologist. - 1986. V 89, 2. - P 112 – 122; Ingolfsdottin K. In vitro inhibition of 5-lipoxygen as ebyprotolichester in coccid from Cetrariaislandica / K. Ingolfsdottin, W. Breu, S. Huneek, [et. all.] // Phytomedicine. 1994 a. № 1 P. 187 – 191.). Полисахариды некоторых растений стимулируют физическую работоспособность, увеличивая при этом мышечную массу животных. Как правило, полисахариды растений не обладают токсичностью, пирогенностью, аллергенностью (Сычев И.А. Лечебные свойства препаратов водорастворимых полисахаридов из растений донника желтого / И.А. Сычев, А.К. Рачков // Инф. Листок ЦНТИ г. Рязани. Иммуннокоррегирующее, - 1993. - № антианемическое 169. и - 3с; Сычев адаптогенное И. А. действие полисахаридов из донника лекарственного / И. А. Сычев, А. А. Подколзин, В. И. Донцов [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 1996. – № 6. – С. 661-663; Сычев И.А. Изучение противовоспалительного действия полисахаридов Донника желтого / И.А. Сычев, В.М. Смирнов, Т.Ю. Колосова // Российский медико-биологический вестник им. Академика И.П. Павлова. - Рязань: РГМУ, 2003. - № 1 - 2. - С. 58 - 63; Сычев И.А. Влияние полисахарида Донника желтого пектин на некоторые свойства иммунной системы животных / И.А. Сычев // Российский медико-биологический вестник им. Академика И.П. Павлова. - Рязань: РГМУ, 2004. - № 1 - 2. - С. 75 - 82;Сычев И.А. Механизм повышения неспецифической резистентности организма под действием 20 полисахарида Донника желтого / И.А. Сычев, В.М. Смирнов, Г.В. Порядин // монография. - Рязань, 2006. – С. 13). Многие полисахариды, выделенные из низших, высших растений и животных, нашли применение в медицинской и ветеринарной практике, при этом основное внимание исследователей фармакологическом эффекте, (элиминация желудочно-кишечный через как было сфокусировано дезинтоксикационная тракт на таком энтеросорбция радионуклидов, тяжелых металлов, бактериальных токсинов и др.) (Гнидой И.М. Пищевые волокна в лечении заболеваний гепатобилиарной системы у детей / И.М. Гнидой, И.И. Дихтярюк // Педиатрия. - 2000. - № 5. - С. 97). В ряду веществ, способных восстанавливать функциональную активность иммунокомпетентных клеток, особое место отводится растительным полисахаридам, которые могут не только модулировать различные свойства иммунной системы, но и обладают способностью к сорбции радионуклидов, тяжелых металлов и бактерий, нормализации липидного обмена, активации секретирующей и моторной функций кишечника (Lahaye M. Sea weed dietary fibers: structure, physicochemical and biological properties relevant to intestinal physiology / M. Lahaye, B. Kaeffer // Sciences and Aliments. - 1997. - Vol. 17. - P. 563 – 584; Kilpatric D.C. Immunological aspects of the potential role of dietary carbohydrates and lectinsin human health / D.C. Kilpatric // Eur. J. Nutr. 1999. Vol. 38. - P. 107 - 117; Roshade SouzaM.C. Antioxidant activities of sulfated polysaccharides from brown and red seaweeds / M.C. Roshade Souza, C.T. Marques, C.M. Guerra Dore // J. Appl. Phycol. - 2007. - Vol. 19. - P. 153 - 160). Реакция иммунной системы на пероральное введение полисахаридов не носит общего характера. Иммунотропное действие некоторых растительных полисахаридов можно отнести к феномену пищевой толерантности, а ряда других – к явлению усиления иммунного ответа (Звягинцева Т.Н. Структура и иммунотропное действие 1,3;1,6-β-D-глюканов / Т.Н. Звягинцева, Н.Н. Беседнова, Л.Л. Елякова // Владивосток: Дальнаука, 2002; - 160 с.; PopovS.V. Effects of polysaccharides from Silen vulgaris on phagocytes / S.V. Popov, G.Yu.Popova, 21 R.G. Ovodova // Int. J. Immunopharmacol. - 1999. - Vol. 21. - P. 617 – 624).Интересно отметить, что такие растительные полисахариды, как инулин, крахмал, декстрин, макромолекулярные полисахариды из тиса (Taxuscupsidata L.), сассафраса (Sassafrasalbitum Nees.), мандарина (Citrusreticulate Blan.), корней брионии (Bruoniaalba L.), камеди акации (Acaciasp.), амилопектин яблок, полисахариды кукурузы (Zeamays L.) способны образовывать специфические антитела и повышать титр пропердина в сыворотке крови, что, в свою очередь, играет роль в увеличении специфической резистентности животных к инфекциям (Турова А.Д. Биологическая активность полисахаридов растительного происхождения / А.Д. Турова, А.С. Гладких // Фармакология и токсикология.- 1965. - Т. 28. Выпуск 4. - С. 498 - 504). У природных полисахаридов пектинов выявлен положительный эффект на некоторые показатели иммунитета - на Т-лимфоциты и фагоцитарную активность нейтрофилов, состояние иммунной системы при перитоните. Показано, что у однократно облученных животных пектины способствуют восстановлению форменных элементов крови (Новикова Н.В. Окружающая среда и здоровье человека / Н.В. Новикова. - Бишкек, 1992. – С. 81-85). Исследованиями полисахарид ВРПК Лаксаевой Е.А., (водорастворимый Сычева И.А. полисахаридный установлено, что комплекс) ирги обыкновенной способствует увеличению среднего корпускулярного объема эритроцитов максимально на 19,4% и среднего содержания корпускулярного гемоглобина в них максимально на 6,02 % по сравнению с контролем на 3-5 сутки опыта. Все это увеличивает приток кислорода к органам и тканям и способствует повышению физической работоспособности подопытных животных (Лаксаева Е.А. Влияние полисахарида обыкновенной ирги на кровь здоровых животных / Е.А. Лаксаева, И.А. Сычев // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. - 2010. - №3.- С.155 - 162). Полисахариды растений обладают широким спектром биологической активности (Макарова В.Г. Полисахариды аронии черноплодной и их фармакологическое действие / В.Г. Макарова [и др.] // Клинико-физиологические 22 материалы диагностики и коррекции физического состояния организма. Под ред. проф. М.Ф. Сауткина.- Рязань, 1995. - С. 83 - 86; Макарова В.Г. Фармакологическое действие полисахаридов некоторых плодовых и ягодных растений / В.Г. Макарова [и др.] // Вопросы диагностики и коррекции физического состояния организма / под ред. проф. М.Ф. Сауткина и проф. В.А. Кирюшина.- Рязань, - 1996. - С. 83 - 87; Демидов Д.А. Послеоперационное лечение перитонита пектиносодержащим препаратом в эксперименте и клинике / Д.А. Демидов, Т.С. Попова, Т.П. Газина // Вестник восстановительной медицины: Диагностика. Оздоровление. Реабилитация: орган Ассоциации специалистов восстановительной медицины // Российский центр восстанов. медицины и курортологии МЗ РФ. - М.: Ассоц. специалистов восст. медицины.-2005.-№ 4. С.47 - 52; Иванычева Ю.Н. Исследование биологически активных полисахаридов, выделенных из лекарственного растения Geranium pretense L., применяемого при различных нарушениях обмена веществ / Ю.Н. Иванычева, Г.И. Чурилов // Материалы научной конференции Рязанского государственного медицинского университета имени академика И.П. Павлова. - Рязань: РГМУ, 2005.- Ч.1.С.20-22; Сычев И.А. Механизм противовоспалительного действия полисахаридов Донника желтого / И.А. Сычев // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. - 2008. - №2. - С.95 - 101).Они повышают неспецифицескую резистентность здоровых животных, стимулируют физическую работоспособность, уровень обмена веществ, активируют процессы иммунопоэза и гемопоэза, обладают противовоспалительным, выраженным антианемическим, противорадиационным, антиоксидантным действием (Сычев И.А. Действие полисахаридов донника желтого на систему кроветворения в норме и при патологии/ И.А. Сычев, В.М. Смирнов, Г.В. Порядин // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. - 2007.- № 1. С. 50 - 58; Сычев И.А. Действие полисахаридов донника желтого на систему крови облученных животных / И.А. Сычев, В.М. Смирнов, Т.Ю. Колосова // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2006. - № 1. - С. 51 - 55; Чурилов Г.И. Исследование моносахаридного состава 23 водорастворимых полисахаридов герани луговой / Г.И. Чурилов, Ю.Н. Иванычева // Материалы ежегодной научной конференции Рязанского государственного медицинского университета имени академика И.П. Павлова. Рязань: - РязГМУ,2006. - Ч.1. - С. 16 - 18). В статье А.Г. Краснолобова, Е.А. Лаксаевой, Е.Г. Мартынова есть данные о ранозаживляющем действии водорастворимых полисахаридов (ВРПС), выделенных из зрелых плодов растений ирги обыкновенной. Установлено, что ВРПС ирги обыкновенной ускоряют процесс регенерации кожи при химическом ожоге на 60%, уменьшают площадь раневой поверхности у подопытных крыс к концу недели на 50%, а также активируют процессы пролиферации, синтеза коллагеновых волокон, микроциркуляционного русла в области раневой поверхности у подопытных животных, относительно контроля (Краснолобов А.Г. Ранозаживляющее действие водорастворимых полисахаридов ирги обыкновенной / А.Г. Краснолобов, Е.А. Лаксаева, Е.Г. Мартынов // Российский медикобиологический вестник имени академика И.П. Павлова. – Выпуск 2. – 2010. – С. 125 - 129). Существуют данные о влиянии полисахаридов донника на активность системы мембранного транспорта клеток и на изменение проницаемости клеточных мембран при повышении активности АТФ-азы (Донцов В.И. Социально-гигиенический мониторинг здоровья населения: / В. И. Донцов, И. А. Сычев, Т. Ю. Колосова // Материалы межрегион. науч. - практ. конф. Под ред. В. Г. Макаровой, В. А. Кирюшина. – Рязань, 2000. – С. 204 - 207). 1.2 Неспецифическая резистентность организма и её нарушения Иммунная система выполняет важную функцию по сохранению постоянства внутренней среды организма, осуществляемую путем распознавания чужеродных веществ антигенной природы (Топурия Л.Ю. Структурно- функциональная и клиническая оценка влияния иммуномодуляторов природного 24 происхождения на организм животных: автореф. дис. д-ра биол. наук: 16.00.02. / Лариса Юрьевна Топурия – Оренбург, 2008. - 46 с.) Под резистентностью понимают устойчивость организма к действию физических, химических и биологических агентов, способных вызвать патологическое состояние. Резистентность организма зависит от условий кормления и содержания, функций, регулирующих систем (нервной, эндокринной и иммунной), изменений внешней среды. Травмы, болезни, авитаминозы, отравления, физические переутомления отрицательно влияют на резистентность. Кроме того, уровень физиологического развития оказывает влияние на резистентность. Чем ниже организовано животное, тем оно более устойчиво к воздействию патогенных факторов. Уровень реактивности у животных, характеризующая резистентность к различным вредным воздействиям, может как понижаться (гипо- или ареактивность), так и повышаться (гиперреактивность) (Мкртчан Ш.А. Рекомендации по использованию естественной резистентности животных при индустриализации животноводства в Алтайском крае / Ш.А. Мкртчан // -Барнаул, 1977. - 20с.; Лапшин С.А. Взаимосвязь биохимических и физиологических показателей материнского организма с внутриутробным ростом ягнят / С.А.Лапшин // Методы повышения продуктивности с.-х. животных.- Саранск, 1980.-С.124-133.; Лысов В.Ф. Здоровый молодняк-основа высокопродуктивного стада / В.Ф. Лысов, Л.Г. Замарин, А.И.Чернышев. - Казань, 1988. - 165с.; Плященко С.И. Получение и выращивание здоровых телят / С.И. Плященко, В.Т. Сидоров, А.Ф. Трофимов.- Минск: Ураджай, 1990. - 222 с.). Иммунная система животных сформировалась в процессе эволюции позвоночных и служит для обеспечения защиты организма от чужеродных агентов как экзогенной, так и эндогенной природы. Эти функции осуществляются специализированными клетками-лимфоцитами, макрофагами и их продуктами, широко распространенными по организму с преимущественной локализацией в лимфоидных органах ( Петров В.А. Роль микробного фактора в этилогенезе и частота одновременно протекающих субклинического мастита и эндометрита у коров / В.А. Петров, А. Парахин // Мат. межд. МПК. – Воронеж, 2002. - 25 С.483-485). Иммунная система характеризуется, прежде всего, специфичностью её реакций и существованием иммунологической памяти. В норме иммунная система способна отвечать только на чужеродные антигены. Связывание чужеродного антигена с лимфоцитом вызывает иммунный ответ, направленный против этого антигена. При этом некоторые из лимфоцитов дифференцируются в клетки памяти, и при вторичном воздействии другого иммуногена, иммунный ответ развивается быстрее и сильнее. Оптимальный иммунный ответ реализуется только при Т- и В-клеточной кооперации. Изучение динамики Т- и Влимфоцитов в онтогенезе, в различные физиологические периоды и при патологических процессах позволяет судить о способности организма к иммунному ответу клеточного и гуморального типа ( Федоров Ю.Н. Иммунодефицит домашних животных / Ю.Н. Федоров, О.А. Верховский. – М., 1996. - 94 с.). Изучению естественной резистентности организма животных с учетом кормления, содержания и возрастных особенностей посвящено большое количество работ. В настоящее время установлено, что организм реактивен на любом этапе онтогенеза, однако проявление этой реактивности на разных стадиях неодинаково (Коротков, В.М. Гомеостаз естественной резистентности организма телят / В.М.Коротков, А.Ф.Кузнецов // Физиологические и биохимические основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных, птиц и пушных зверей: сборник научных трудов. Ленинградский ветеринарный институт. Ленинград, 1989. - С.100-102. - USSN 0135-3195; Емельянов А.М. Физиологические особенности новорожденных животных и пути повышения их резистентности / А.М. Емельянов, В.Г. Серебренников // Бюро научнотехнической информации агропромышленного комитета Свердловской области. Свердловск, 1990. - 109с.; Воронин Е. С. Профилактика диареи телят лактобактерином: Инфекционные болезни телят / Воронин Е.С., Девришов Д.А. Кишинев, 2003. - С.7-9.; Доми И.А. Особенности клеточного иммунитета телят / Доми И.А. // Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях: 26 Материалы Междунар. науч.-произ. конфер., посвящ. 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ.-Краснодар, 2006. - С.395 - 397). Изучению посвящено иммунобиологической большое количество реактивности исследований. организма Она у животных новорожденных формируется постепенно и достигает полноценной выраженности только на определенном уровне физиологического развития (Васильева Е.А. Клиническая биохимия сельскохозяйственных животных / Е.А. Васильева. - М.: Россельхозиздат, 1982. - 254 с.; Курочка, Н.Е. Влияние технологических приемов выращивания на иммунологический статус ягнят / Н.Е.Курочка, М.М. Мирсаитов // Актуальные проблемы ветеринарии в промышленном животноводстве. - Труды ВИЭВ. - М., 1984. - Т.60. - С.105 - 109; Немченко М.И. Гипогаммаглобулинемия новорожденных телят / М.И.Немченко // Ветеринария. - 1984. - №5.-С.52 - 54, Могиленко А.Ф. Иммунный статус молодняка крупного рогатого скота при внутренних незаразных болезнях и его коррекция: автореф. дис. д-ра вет. наук: 16:00:01/ Могиленко Анатолий Филимонович. Витебский ветеринарный институт - Витебск, 1990. - С. 37). Состояние иммунной системы, как и любого другого органа, характеризуется комплексом морфологических, функциональных и клинических показателей, присущих иммунной системе в норме и они определяют иммунный статус (Боряев Г.И. Влияние минеральных элементов на иммунный статус бычков / Г.И. Боряев, А.Ф. Блинохватов, Ю.Н. Федоров и [др.] // Ветеринария.-1999. №12. - С.36 - 38).Изменение какого-либо одного или нескольких показателей свидетельствует о нарушении иммунного статуса, т.е. отклонении его от норм, и трактуется как иммунодефицит (Морякина С.В. Патология репродуктивной функции у молочных коров / С.В. Морякина // Зоотехния.-2008.-№2.-С.16.). Проблема иммунодефицита представляет интерес для ветеринарных врачей в связи с неуклонным ростом инфекционно-воспалительных заболеваний, склонных к хроническому течению на фоне низкой эффективности проводимой базовой терапии, бактериальных и вирусных заболеваний, обусловливающих высокий уровень заболеваемости, и даже смертности (Петрянкин Ф.П. 27 Использование иммуностимуляторов для повышения физиологического статуса молодняка / Ф.П. Петрянкин, О.Ю. Петрова // Ветеринарный консультант - 2007. № 20. - С.18 - 20). Иммунодефициты широко распространены при инфекционной патологии у животных. Это обстоятельство необходимо учитывать при проведении вакцинопрофилактики. В связи с этим, большой интерес представляет изучение взаимодействия неспецифических механизмов защиты и специфических факторов иммунитета при проведении вакцинации. Знание его закономерностей позволит вносить коррективы в сроки профилактических вакцинаций для достижения более напряженного иммунитета против инфекционных болезней животных (Трошева Г.А. Взаимосвязь факторов естественной устойчивости организма птиц и иммунитета при вакцинации / Г.А. Трошева, Н.Р. Есакова // Ветеринария.-2000. - №8. - С.24-27). Считается, многочисленное введение вакцин может привести к антигенной перегрузке и параличу иммунного ответа. Теория и практика вакцинации свидетельствуют, что эти опасения сильно преувеличены. В организме существует огромное количество субпопуляций лимфоцитов с различной специфичностью, они могут реагировать даже на субстанции, которых нет в природе. Здоровый организм со сформировавшейся иммунной системой реагирует практически на все вакцины, приготовленные из тех видов микроорганизмов, которые циркулируют в окружающей среде. Паралич иммунного реагирования может наступить в случае непрекращающегося инфекционного процесса на фоне длительной циркуляции возбудителя и его антигенов, выраженной интоксикации и пр. (Медуницин Н.В. Лечебные вакцины и иммунотерапия инфекционных болезней / Н.В. Медуницин // Эпидемиология и инфекционные болезни.-2002. - №4. - С. 52 - 56). Первичные иммунодефициты (ПИД) – заболевания, основу которых составляет генетически обусловленная неспособность организма реализовать определенные звенья иммунного ответа, необходимые для элиминации чужеродных агентов из организма и развития адекватных воспалительных 28 реакций (Кондратенко И.В. Первичные иммунодефициты / И.В. Кондратенко, А.А. Бологов. - М., 2005. – С. 35 – 83; Conley M. E. Diagnostic criteria for primary immunodeficiency’s. PAGID (Pan-American Group for Immunodeficiency) and ESID (European Society for Immunodeficiency’s) / M. E. Conley, L. D. Notarangelo, A. Elzioni // Clin. Immunol. – 1999. – Vol. 93. – P. 190 – 197; Geha R. S. Primary immunodeficiency diseases: an update from the International Union of Immunological Societies Primary Immunodeficiency Diseases Classification Committee / R. S. Geha, L. D. Notarangelo, J. L. Casanova [et all.] // J. Allergy Clin. Immunol. – 2007.Vol. 120.– P. 776 – 794). Стрессовые иммунодефициты вызываются длительным воздействием на организм стрессорных факторов (стрессоров), которые условно делят на физические (большие физические нагрузки, жара, холод, стихийные бедствия, травмы, хирургические операции, транспортировка животных), химические (интоксикация), биологические (инфекционный процесс), психоэмоциональные (у человека) — воздействующие на психику и вызывающие сильные эмоции (информационные перегрузки, социальная и политическая нестабильность, конфликты на работе и семье, постоянный страх и неуверенность в завтрашнем дне, потеря близких). Стресс, являясь вначале адаптацией организма к неблагоприятным воздействиям, может перейти в стадию истощения, когда изменения, происходящие в организме, в том числе и в иммунной системе, зачастую становятся необратимыми (White B.T. Effects of temperature stress son grow the performance and bacon quality in grow-finish pigs house dattwo densities / B.T. White // Journal of Animal Science. – 2008. - Vol.86, Iss.8.-P.1789-1798). Первичные, генетически детерминированные, и вторичные иммунные дефициты, возникающие под влиянием факторов окружающей среды физической, химической или биологической природы, являются предметом изучения экологической иммунологии (Шуканов А.А. К проблеме иммунодефицита и повышения резистентности животных / А.А. Шуканов, Н.К. Кириллов, Ф.П. Петрянкин // Известия Национальной академии наук и искусств Чувашской республики. - Чебоксары, - 1996.- № 4. - С.43 - 53). 29 Под экологическим иммунодефицитом чаще понимают иммунные дефициты у человека и животных, вызванные прежде всего физическими и химическими факторами, в том числе антропогенного характера (Бочкарев В.Н. Приобретенные иммунодефицитные состояния у крупного рогатого скота в зоне экологического неблагополучия / В.Н. Бочкарев [и др.] // Ветеринарная патология. - 2003 - № 2.- С.8 -14). По мнению учёных Р.В. Петрова, А.В.Жарова и др. иммунодефицит - это не просто отсутствие или снижение иммунного ответа, это генетически обусловленная неспособность организма осуществлять функцию того или иного звена иммунного реагирования (антителообразование, клеточный иммунитет) (Петров Р.В. Иммунодиагностика иммунодефицитов / Р.В.Петров, Р.М.Хаитов, В.П.Пинегин // Иммунология. - 1997. - №4. – С.4-7; Жаров А.В. Роль иммунодефицитов в патологии животных / А.В. Жаров // Ветеринарная патология.-2003.-№3(7). - С.7-12). Принято считать, что основной функцией иммунной системы являются слежение за постоянством антигенного состава человека и высших животных, распознавание и как экзогенных (микробы), так и эндогенных (перерожденные клетки) чужеродных макромолекулярных структур. Это положение не вызывает никаких сомнений. Но параллельно с этим иммунная система и особенно факторы врожденного иммунитета принимают активные участие в восстановлении постоянства внутренней среды организма практически при любых его нарушениях. Эти нарушения возникают не только под влиянием микробов. Травмы и практически все механические повреждения тканей после удара, разреза, сдавления или размозжения, ожоги, переохлаждение, химические агенты типа сильных кислот и щелочей, ультрафиолетовое облучение и ионизирующая радиация, недостаток кислорода – вот далеко неполный список повреждающих агентов, нарушающих постоянство внутренней среды организма (Schlueter C. Angiogenetic signaling through hypoxia: HMGBI: an angiogenetic switch molecule / C. Schlueter, H. Weber, B. Meyer [et all.] // Am. J. Pathol. – 2005. – Vol. 166. – P. 1259 – 1263; KonoH. How dying cells alert the immune system to danger / H. Kono, 30 K. L. Rock // Annu. Rev. Immun. – 2008. – Vol. 8. – P. 279 – 289; Rock K. L. The inflammatory response to cell death / K. L. Rock, H. Kono // Annu. Rev. Pathol.– 2008. – Vol. 3. – P. 99 – 126). Со слов И. М. Донника (Донник И.М. Оценка иммунологического статуса крупного рогатого скота из районов экологического неблагополучия / И.М. Донник // Экологические проблемы патологии, фармакология и терапия животных: Матер. Междунар. координационного совещания (19-23 мая 1997 г.): Сборник научных трудов / ВНИВИПФиТ. – Воронеж, 1997 – С.70 – 71), под влиянием экологических факторов у животных происходит угнетение иммунной системы, что в свою очередь оказывает влияние на формирование поствакцинального иммунитета и общую резистентность организма. Лекарственные средства, как отмечает В.Я. Ратников (Ратников В.Я. Совершенствование способов защиты иммунной системы при медикаментозных иммуносупрессиях / В.Я. Ратников, Г.М. Рассохина // Диагностика, лечение и профилактика инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария: Материалы юбилейной научной конференции, посвященной 50-летию Центра военно-технических проблем биологической защиты НИИ микробиологии МО РФ, 30 апреля-1 июня 1999 г. - Екатеринбург, 1999. - С.208-209) являются одним из наиболее распространенных факторов, способных модифицировать течение иммунных реакций. Медикаментозные иммуносупрессии вносят свой вклад в рост общего числа вторичных иммунодефицитов, отмеченных в последние годы. Среди препаратов, вызывающих подавление иммунитета, особое место занимают глюкокортикоиды, которые относятся к разряду классических, так называемых больших, иммунодепрессантов. С. М. Дурдыевым установлено, что новорожденным ягнятам свойственна незрелость иммунной системы. У каракульских овец им отмечаются следующие иммунодефицитные периоды: ранний возрастной (до молозивный) с более выраженным риском; второй период с менее выраженным риском (5-30-дневный возраст) и третий – дизадаптивный период или патологическое состояние латентной формы (4-месячный возраст) (Дурдыев С. М. Гипертермия и 31 иммунологическая реактивность каракульских овец / С.М. Дурдыев // Экологические проблемы патологии, фармакология и терапия животных: Матер.междунар. координационного совещания (19-23 мая 1997г.): Сборник научных трудов / ВНИВИПФиТ. – Воронеж, 1997 – С.71 – 72). Ослабленная иммунная система и низкий уровень неспецифической резистентности под влиянием различных неблагоприятных факторов не в состоянии противостоять вирусам, бактериям и даже грибам высокой патогенности. Поэтому в настоящее время, наряду с совершенствованием технологии кормления и содержания животных, актуальной задачей является повышение неспецифической резистентности и специфического иммунитета животных с применением иммунокорректоров широкого спектра действия (Басова Н.Ю. Респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота инфекционной этиологии в условиях Северного Кавказа: автореф. дис. д-ра ветеринарных наук: 16.00.03. / Басова Наталья Юрьевна. - Краснодар,2002. - 42с.; Урбан В.П. Иммунные и стимулирующие препараты из крови животных и перспективны их применения / В.П. Урбан // Новые фармакологические средства в ветеринарии: тез.докл. 1-й межвуз.научн.-проф. - Ленинград, 1989. - С.68-69; Яковлев Ю.Ю. Иммуномодулирующие свойства глутоксима свиней с парвовирусной инъекцией: автореф. дис. канд. вет. наук: 16.00.04/ Яковлев Юрий Юрьевич. - Троицк, 2004. - 18с.). 1.3 Средства, используемые для повышения защитных свойств организма животных В настоящее время как одно из перспективных направлений повышения защитных сил организма используются иммуномодуляторы, воздействующие непосредственно на иммунобиологического активизацию статуса адаптационных организма животных способностей (Дорожкин и В.И. Особенности естественной резистентности и обмена веществ телят под действием иммунокорректоров /В.И. Дорожкин, Р.А. Асрутдинова // Материалы 111 Съезда 32 фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации», Санкт-Петербург. - 2011. - С. 156 - 159; Вишневская Т. Анализ гематологических показателей у кроликов в условиях стресса и его иммунокоррекции / Т. Вишневская // Ветеринария сельскохозяйственных животных. - 2013. - №1. - С. 13 - 16). Иммуномодуляторы - это лекарственные препараты, восстанавливающие в терапевтических дозах функции иммунной системы (эффективную иммунную защиту). Следовательно, иммунологический эффект иммуномодуляторов зависит от исходного состояния иммунитета больного: эти лекарственные средства снижают повышенные и повышают сниженные показатели иммунитета. В соответствии с названием иммуностимуляторы – это такие лекарственные препараты, которые преимущественно усиливают иммунитет, доводя сниженные показатели до их нормальных значений (Лесков В.П. Иммуностимуляторы / В.П. Лесков // Аллергия, астма и клиническая иммунология. - 1999. - №4. -С.12-25). Главной мишенью применения иммуномодулирующих препаратов являются вторичные иммунодефициты, которые характеризуются частыми, рецидивирующими, трудно поддающимися лечению инфекционно- воспалительными процессами всех локализаций и любой этиологии. В основе любого хронического инфекционно-воспалительного процесса лежат те или иные изменения в иммунной системе, которые и служат одной из причин существования этого процесса. Исследование параметров иммунной системы может не всегда выявить эти изменения, поэтому при наличии в организме хронического больному инфекционно-воспалительного иммуномодулирующие препараты процесса даже в можно том назначать случае, если иммунодиагностическое исследование не выявит существенных отклонений в иммунном статусе (Хаитов Р.М. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение / Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. - 2003. №4. - Т. 24. - С.196-203). Одним из ведущих направлений экспериментальной и клинической иммунологии является поиск средств и способов избирательного воздействия на 33 отдельные этапы развития иммунного ответа, а также на отдельные субпопуляции клеток иммунной системы (Земсков В.М. Принципы дифференцированной иммунокоррекции / В.М. Земсков, А.М. Земсков // Иммунология.- 1996. - №3. С.4 - 6; Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Основные представления об иммунотропных лекарственных средствах // Иммунология. - 1996. - № 1. - С. 4 - 9). Наиболее перспективный подход к решению данной проблемы – создание иммуностимуляторов на основе эндогенных биологически активных веществ. В этом контексте особый интерес представляют исследования иммунорегуляторных пептидов (Гомазков О.В. Успехи современной биологии / О.В. Гомазков //. – 1996.-Т.116. - №1. - С.60-68). Как показали дальнейшие наблюдения и исследования, один из этих факторов, в частности иммунодефицитное состояние организма животных, можно успешно корректировать научно-обоснованным назначением иммуностимуляторов и использовать их для повышения защитных сил организма и, следовательно, для повышения эффективности химиопрепаратов (Андреева Н.Л. Ростостимулирующие свойства иммуностимуляторов / Н.Л. Андреева // Тез. Докл. 2-ой межвуз.науч. – практ. конф. «Новые фармакологические средства в ветеринарии» - Л., 1990. – С 32; Придыбайло Н.Д. Иммунодефициты у сельскохозяйственных животных, профилактика и лечение их иммуномодуляторами: Обзорная информация. – ВНИИТИ, Агропром – М.,1991. – 44 с; Андреева Н.Л., Войтенко В.Д. Иммуностимуляторы в ветеринарии / Н.Л. Андреева, В.Д. Войтенко // Матер.ХVIII междунар. межвуз. научн – практич. конф. «Новые фармакологические средства в ветеринарии». СПб. – 2006. – С. 87 – 88;). Следует заметить, что одним из первых в ветеринарии такую корректировку выполнил В.Д. Соколов и соавторы в 1977 (Сколов В.Д. Применение аэрозолей неомицина и продигиозана при пуллорозе – тифе птиц / В.Д. Сколов, В.В. Шорников, Ф.С. Киржаев // Тез.третьей Всесоюзной конференции по аэрозолям. М., 1977. – С. 57 – 58) антибиотикотерапии пуллороза - тифа во время вывода цыплят, применив для этой цели продигиозан (бактериальный полисахарид) и неомицина сульфат. 34 Состояние иммунной системы, как и любого другого органа, характеризуется комплексом морфологических, функциональных и клинических показателей, присущих иммунной системе в норме и они определяют иммунный статус (Боряев Г.И. Влияние минеральных элементов на иммунный статус бычков/ Г.И. Боряев, А.Ф. Блинохватов, Ю.Н. Федоров [и др.] // Ветеринария.1999. - №12. - С.36 – 38.). Изменение какого-либо одного или нескольких показателей свидетельствуют о нарушении иммунного статуса, т.е. отклонении его от норм, и трактуется как иммунодефицит (Морякина С.В. Патология репродуктивной функции у молочных коров / С.В. Морякина // Зоотехния. - 2008. - №2. - С.16.). На сегодняшний день иммуностимуляторы по классификации относятся к следующим группам: 1. Синтетические препараты: левамизол, этимизол, стимаден, изамбен, метилурацил, камизол, димефосфон и др. 2. Препараты бактериальной природы: продигиозан, пирогенал, полирибонат. 3. Средства из органов и тканей животных: препараты тимуса (тималин, Тактивин, тимоген), агаро – тканевый препарат, натрия нуклеинат и др. 4. Растительные средства: эраконд, фоспренил, элеутерококк, женшень, эхинацея, лимонник и др. Все препараты в большей или меньшей степени: - корректируют иммунный статус организма, повышают устойчивость к неблагоприятным факторам, усиливают иммунный ответ при вакцинации; - активируют защитные силы организма, тем самым способствуя повышению эффективности многих лекарственных средств и, прежде всего, антимикробных, противовирусных и антипаразитарных препаратов; - способствуют лучшему заживлению ран, регенерации; - обладают ростостимулирующими свойствами; стимулируя процессы 35 - оказывают адаптогенное действие и корректируют (ослабляют) воздействие стресс – факторов на организм. 1.4 Иммунокоррегирующая терапия при иммунодефицитных состояниях Наиболее широко в ветеринарии апробированы, используются в клинической практике и при изготовлении многих комбинированных средств такие иммуностимуляторы, как эраконд, тимоген, стимаден и фоспренил (Соколов В.Д. Иммуностимуляторы в ветеринарии / В.Д. Соколов, Н.Л. Андреева, А.В.Соколов// Ветеринария. – 1992. - № 7 – 8. – С. 49 – 50; Андреева Н.Л. Иммуностимуляторы в ветеринарии / Н.Л. Андреева // Материалы XVIII междунар. межвуз. науч. – практич. конф. «Новые фармакологические средства в ветеринарии». – СПб, 2006. – С. 87 – 88; Андреева Н.Л. Иммуностимуляторы, повышающие эффективность химиопрепаратов / Н.Л. Андреева, В.Д. Войтенко // Международный вестник в ветеринарии. – 2010. - № 1. – С. 42). В ранее проведенных опытах на лабораторных животных, цыплятах, поросятах и плотоядных Войтенко В.Д. установил, что одновременное применение с химиопрепаратами иммуностимуляторов стимадена, тимогена и эраконда повышает бактериальных и эффективность вирусных лечения инфекциях больных (Войтенко животных В.Д. при Повышение эффективности антибиотикотерапии / В.Д. Войтенко // Новые ветеринарные препараты и кормовые добавки. Экспресс – информ. 2003 – Выпуск 14 – С. 8 – 9.; Войтенко В.Д. иммуностимуляторов Терапевтическая и пневмонина эффективность при химиопрепаратов, бронхопневмонии поросят / В.Д. Войтенко // Матер. 1 междун., межвуз. науч.-практ. конф. аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент в науке.» СПб. – 2003. С. 6 – 8.; Войтенко В.Д. Аэрозоли неомицина в сочетании с иммуностимуляторами при экспериментальном колибактериозе цыплят / В.Д. Войтенко // Международный вестник ветеринарии. СПб, 2004. - № 1. – С. 58 – 60.; Войтенко В.Д. Целесообразность повышения эффективность химиотерапевтических средств / 36 В.Д. Войтенко // Фармакология практическому здравоохранению. – Матер. 111 съезд фармакологов России. Том 7. – 2007. – С. 1 – 1641). Исследованиями В.Д. Войтенко, проведенными с целью изучения эффективности фторхинолона байтрила и антибиотика – доксициклина при экспериментальном колибактериозе цыплят с профилактической и лечебной целями, применив препараты отдельно и в сочетании с фосфопренилом в качестве иммуностимулятора, установлено их положительное влияние на организм (Войтенко В.Д. Повышение эффективности байтрила и диоксициклина с помощью иммуностимулятора фоспренил / В.Д. Войтенко // Международный вестник ветеринарии. – 2012. - № 1. – С. 29 – 32). Понятие “иммунологический адъювант” введено в литературу G. Ramon в 20-х годах прошлого столетия.(RamonG. Surl a toxine or surrana toxine diphtheriques / RamonG. // Ann. Inst. Pasture. – 1924. - Vol. 38. – P. 1 – 7). По определению, адъювант должен усиливать иммунную реакцию, специфичную в отношение антигена, введенного совместно с адъювантом. Действительно, повышение интенсивности иммунной реакции в отношение антигена – это один из типичных результатов влияния адъювантов на иммунную реакцию, хотя и не единственный возможный. Обычно под интенсивностью иммунной реакции понимают максимальную концентрацию (амплитуду) антител или максимальное количество Т-клеток, специфичных в отношении целевого антигена. Иммунизация животного или человека антигеном в сочетании с адъювантом, как правило, приводит к накоплению в организме иммунизированного более высокой концентрации антител, специфичных к антигену, чем при введении только антигена без адъюванта, так же больших количеств лимфоцитов, способных реагировать на данный антиген. Адъюванты классифицируют по природе или механизму действия. По природе различают следующие основные классы адъювантов: гели, микрочастицы, масляные эмульсии, липосомы, виросомы, вирусоподобные частицы, липополисахариды, гликолипид, липопептиды, пептидогликаны, полисахариды, синтетические полимеры, нуклеиновые кислоты, фрагменты 37 нуклеиновых кислот, синтетические олигонуклеотиды, белковые адъюванты (холерный и дифтерийный токсины, желатин и др.), цитокины и хемокины, белки теплового шока (Атауллаханов Р. И. Адъюванты в составе вакцин. Сообщение 1. Микро- и нано- частицы. / Р. И. Атауллаханов, Р.М. Хаитов // Иммунология. – 2011. – Т. 32, - №. – С. 37 – 45). Один из простых способов классификации по механизму действия – это распределение адъювантов на средства доставки антигенов и иммуностимуляторы. (Mutwiri G. Innate immunity and new adjuvants / G. Mutwiri, V.Gerdts, M. Lopez [et all.] // Rev. Scient. Techn.( Int.OfficeEpizoot.). – 2007. – Vol. 26, N 1.– P. 147 – 156). В настоящее время ведется разработка и испытание несколько десятков новых адъювантов. По механизму действия их делят на две группы. (Fraser C. K. Impoving vaccines by incorporating immunological coadyuvants / C. K. Fraser, K. R. Diener, M. P Brown [et all.] // Expert Rev. Vaccines. – 2007. – Vol. 6. – P. 559 – 578.; Ulmer J. B. Vaccine manufacturing: challenges and solutions / J. B. Ulmer, U. Valley, R. Rappuoli // Nat. Biotechnol. – 2006. – Vol. 24. – P. 1377 – 1383.; Петров Р.В. Конъюгированные полимер-субъединичные иммуногены и вакцины / Р.В. Петров, В.А.Кабанов, Р.М. Хаитов [и др.] // Иммунология. – 2002. – Т. 23, - №. 6 – С. 324 – 328). В первую группу входят соли алюминия, разного рода эмульсии, сапонины и катионовые липиды. Вторую группу представляют природные и синтетические агонисты TLRs, костстимулирующие молекулы. В России разработан цитокины, хемокины, и внедрен в практику препарат полиоксидоний, который обладает свойствами адъювантов как первой, так и второй группы. (Петров Р.В. Конъюгированные полимер-субъединичные иммуногены и вакцины / Р.В. Петров, В.А.Кабанов, Р.М. Хаитов [и др.] // Иммунология. – 2002. – Т. 23, - №.6 – С. 324 – 328; Петров Р. В. Коррекция иммунодефицитных состояний с помощью иммуномодулятора полиоксидоний / Р. В. Петров, Р. М. Хаитов, Т. Б. Мастернак [и др.] // Аллергия, астма и клиническая иммунология. – 2009. - № 9, - С. 3 – 7). 38 Нуклеотиды – вездесущие молекулы, имеющие широкий диапазон многообразных эффектов в различных тканях, известны как внеклеточные мессенджеры уже более 30 лет. В настоящее время определены разнообразные физиологические функции нуклеотидов (нейротрансмиссия, вазодилатация, регенерация и др.). Объектом нуклеотидной регуляции являются и клетки иммунной системы, которые отвечают на нуклеотидные стимулы пролиферацией, дифференцировкой, хемотаксисом, секрецией цитокинов, высвобождением лизосомальных компонентов и генерацией реактивных радикалов кислорода или оксида азота. Кроме того, нуклеотиды действуют как ростовые факторы на гемопоэтические клетки-предшественники, что делает перспективным их использование в качестве регуляторов гемопоэза. Эффекты нуклеотидов проявляются при их связывании с пурринергическими (Р2) рецепторами на поверхности клеток. Значительное внимание к нуклеотидной регуляции в последние годы определяется тем, что доказана регуляторная роль нуклеотидов в таких процессах, как воспаление, ишемия, заживление ран, ответ на стрессовые воздействия. В нашей стране используют иммуномодуляторы, воздействующие на метаболизм нуклеотидов (деринат), механизм действия которых не может быть осмыслен без учета нуклеотидной регуляции иммунитета (Серебрянная Н. Б. Нуклеотиды как регуляторы иммунного ответа / Н. Б. Серебрянная // Иммунология. – 2010.-Т.31, - №.3 – С. 273 – 281). В статье Бригадирова Ю.Н. и других (Бригадиров Ю.Н. Применение иммуномодуляторов при вакцинации поросят против сальмонеллёза и их влияние на показатели неспецифической резистентности и биохимический статус / Ю.Н. Бригадиров, И.Т. Шапошников, О.А. Манжурина [и др.] // Ветеринарный врач. - 2012. - №5. - С.39 - 42) приведены данные об использовании иммуномодуляторов при вакцинации поросят против сальмонеллеза и их влияние на показатели неспецифической резистентности и иммунный статус. Результаты исследований показали, что новые иммуномодулирующие препараты селетон и аминоселетон, созданные методом криофракцинирования, обладают выраженным стимулирующим влиянием на конечную эффекторную функцию гуморального 39 иммунитета – выработку поствакцинальных антител у поросят к сальмонеллезному антигену, при этом сами иммуномодуляторы приводят к повышению общей реактивности организма, нормализации биохимического статуса животных, но в сочетании с вакцинацией способствуют направленной стимуляции специфического гуморального иммунитета. Проведенными исследованиями установлено, что новые иммуностимулирующие препараты селетон и аминоселетон, созданные методом криофракцинирования, обладают выраженным стимулирующим влиянием на конечную эффекторную функцию гуморального иммунитета – выработку поствакцинальных антител у поросят к сальмонеллезному антигену, при этом сами иммуномодуляторы приводят к повышению общей реактивности организма, нормализации биохимического статуса животных, но в сочетании с вакцинацией способствуют направленной стимуляции специфического гуморального иммунитета. Для определения специфического клеточного иммунного ответа применяют реакцию торможения миграции лейкоцитов (Rodriguez-Sosa M.MacrophageMigrationInhibitoryFactorplaysacriticalroleinmediatingprotectionagainst thehelminthparasitetaeniacrassiceps / M. Rodriguez-Sosa, L. E. Rosas, J. R.David [et all.] // Infect. Immun. - 2003; - N. 71: 1247 – 1254). Недостатком метода является сложность стандартизации и некоторая субъективность в оценке результатов, так же существует довольно много дополнительных факторов, способных маскировать результаты. Известен метод оценки секреторной активности клеток путем определения иммуноферментных пятен – ELISPOT (Scheiben bogen C.Quantization of antigen-reactive T cells in peripheral blood by IFN gamma-ELISPOT assay and chromiumre lease assay: afour-center comparative trial / C. Scheiben bogen, P. Romero, L. Rivoltini [etall.] // J. Immunol. Methods. - 2000; N. 244. P. 81-90), однако для этого требуется довольно большой объем крови для исследования (по оценки разных авторов антигенспецифических 10–40 мл). Т-лимфоцитов с Существует метод использованием определения МНС-пептидных тетрамеров ( AltmanJ.D. Phenotypic analysis of antigen-specific T lymphocytes / J.D. Altman, P.A.Moss, P.J. Gouldre [et all.] // Science. - 1996.- N. 274. Р. 9 - 6), в 40 этом случае основной проблемой является HLA – рестрикция, т.е. необходимость совпадения HL. Aтетрамера и пациента; из-за высокой степени полиморфизма системы HLA это весьма затруднительно. Кроме того, создание тетрамеров дорого и требует очень высокой квалификации. Также используют для определения цитолитических CD8+-T-клеток реакцию специфической дегрануляции (Betss M.R., Brenchley J.M., Price D.A., De Rosa S.C., Douek D.C., Roederer M. et all. Sensitive and viable notification of antigen –specific CD8 + T cells by a flow cytometric assay for degranulation / M.R. Betss, J.M. Brenchley, D.A. Price [et all.] // J. Immunol. Methods. - 2003; 281: - P. 65 – 78; Pashenkov M.V., Murugina N.E., Murugin V.V., Pinegin B.V. Detection and characterization no fcytolytic CD8+ andCD4+ T cells / M.V. Pashenkov, N.E. Murugina, V.V. Murugin [et all.] // Immunology Russ. 2010; 31: P. 4-12), например, для оценки эффективности лечения больных меланомой специфической вакциной (Rubio V. Ex vivo identification, is olation and analysis of tumor cytolytic T cells / V. Rubio, T.B. Stuge, N. Singh [et all.] // Nat. Med. 2003; N.9.- Р. 1377-82). Отечественный иммуностимулятор полимурамил представляет собой комплекс муропептидов, состоящий из трех основных компонентов: β-N-ацетилD-глюкозаминил-(1-4)-N-ацетил-D-мурамоил-L-аланил-D-изоглютаминил-мезодиаминопимелиновой кислоты (ГМтри), β-N-ацетил-D-глюкозаминил-(1-4)-Nацетил-D-мурамоил-L-аланил-D-изоглютаминил-мезо-диаминопимелоил – D- аланина (ГМтетра) и диамера ГМтера (диГМтетра), в котором мономерные остатки ГМтетра соединены амидной связью между карбоксильной группой терминального D-аланина одного остатка ГМтетра и α-аминогруппой мезодиаинопимелиновой кислоты другого остатка ГМтетра. Фаза l клинических испытаний показала хорошую переносимость и безопасность препарата в дозе до 400 мгк при однократном введении и до 1 мг при курсовом введении. Препарат усиливал способность лейкоцитов крови вырабатывать активные формы кислорода и убивать S.aureus, вызывал повышение сывороточных уровней Среактивного белка, а также цито-и хемокинов, участвующих во врожденном иммунном ответе (MIP-1β, IL-6). Таким образом, иммуностимулятор плимурамил 41 в испытанных дозах хорошо переносится, безопасен и оказывает иммуностимулирующее действие, что является основанием как для исследования безопасности более высоких доз, так и для клинических испытаний фаз II/III у пациентов с инфекционно-воспалительными заболеваниями (Пащенков М. В. Результаты фазы I клинических испытаний иммуномодулятора полимурамила / М.В. Пащенков, Б А. Субихина, Голубева Н. М. [и др.] // Иммунология. – 2011. – Т. 32, №. 6 – С. 315 – 321). В литературе давно утвердили о том, что инфекционные болезни являются моноэтиологичными заболеваниями. Однако на практике вирусные заболевания у мелких домашних животных редко протекают в виде моноинфекции. Как правило, на фоне имеющегося иммунодефицита, сопровождающего вирусную инфекцию, развиваются вторичные (секундарные) инфекции, которые тоже нередко полиэтиологичны. Помимо состояния иммунной системы хозяина, большое значение в развитии секундарных инфекций отводят биологическим свойствам и активности возбудителей, а также внешним стрессорным факторам. Так, респираторные вирусы повышают восприимчивость слизистых оболочек дыхательных путей к стафилококкам, стрептококкам и другим микроорганизмам, энтеровирусы оказывают аналогичное действие на чувствительность кишечного тракта к сальмонеллам и шигеллам. Впрочем, у мелких домашних животных, встречаются и чисто бактериальные инфекции. При последних хорошо зарекомендовало себя подключение к комплексной схеме лечения сальмозана – иммуномодулятора бактериального происхождения. Сальмозан, полученный и всесторонне исследованный в НИИЭМ имени Р.Ф. Гамалеи РАМН, представляет собой очищенный полисахарид из О-антигена брюшнотифозных бактерий. Препарат повышает образование антител, фагоцитарную активность лейкоцитов и макрофагов, резистентность клебсиеллами, титр к лизоцима в инфекциям, эширихиями, крови, стимулирует неспецифическую вызванным сальмонеллами, листериями, стафилококками, бруцеллами, риккетциями, возбудителями туляремии и некоторых других заболеваний (Туманян М.А. 42 Успехи иммунологии / М.А. Туманян, А.П. Дуплищева, М.С. Гордеева. – М., 1977). Так называемые гуморальной естественные составляющей антитела врожденного (ЕАТ) иммунитета, являются частью представленной в основном низкоаффинными антителами, присутствующими в организме без явной антигенной стимуляции. Мишенями ЕАТ являются как экзо-, так и эндогенные антигены, в том числе и бактериального происхождения, что определяет функцию ЕАТ как элементов первой линии иммунной защиты против патогенов. Кроме того, показано участие ЕАТ в клиренсе продуктов катаболизма. Уровень ЕАТ в крови довольно высок, а репертуар стабилен в течение всей жизни; отклонения свидетельствуют о развитии патологии. Все это указывает на важную роль ЕАТ в гомеостазе. ЕАТ являются важным регуляторным компонентом сети идиотип - антиидиотипических взаимодействий, оказывающим стимулирующее или супрессорное влияние на все звенья иммунной системы. В образе рассматриваются гипотезы образования ЕАТ, их функции, роль в иммунном ответе, а также значение при некоторых патологиях (Зиганшина М.М. Естественные антитела как ключевой элемент механизма, поддерживающего гомеостаз в иммунной системе / М.М Зиганшина, Н.В. Бовин, Г.Т. Сухих // Иммунология. – 2013. – Т. 34, № 5. - С. 277 – 281). Связь между пренатальным воздействием на органы иммунной системы плода и их функционированием в постнатальном периоде изучена недостаточно хорошо. Цель исследования ученых – изучить структурно – функциональные изменения органов иммунной системы при развитии системного воспалительного ответа у потомства самок мышей C57BL/6, перенесших воздействие на иммунную систему в ранние сроки беременности до начала формирования органов иммунной системы плода. Установлено, что перинатальное воздействие приводит к изменениям реагирования тимуса и селезенки на введение LD50 липополисахарида E.coli и менее выраженному системному воспалительному ответу, что обуславливает большую выживаемость животных. Акцидентальная инволюция тимуса потомства развивается медленнее. Морфофункциональные 43 изменения селезенки выражены в меньшей степени, что связано с замедленным развитием селезенки как органа иммунной системы. Применение иммуномодуляторов телятам в первые сутки после рождения способствует созданию оптимального метаболитического состояния, на фоне которого происходит формирование более высокого уровня неспецифического и специфического иммунитета, что является основой повышения их устойчивости к антигенному прессингу в первые дни жизни (Андреева А.В. Естественная резистентность и микро-биоценоз кишечника телят при применении БАВ / А.В. Андреева, Ю.Ф. Арсланова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана. - 2011. - Т.207. - С. 37-42.; Андреева А.В., Николаева О.Н. Использование фитопробиотических композиций на основе лактобактерий и лекарственного растительного сырья в комплексе с полисолями микроэлементов для профилактики желудочно-кишечных заболеваний у телят / А.В. Андреева, О.Н. Николаева // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана. 2008. - Т.191. - С. 23-28.; Хазиахметов Ф.С. Основные результаты использования пробиотиков серии Витафорт при выращивании телят / Ф.С. Хазиахметов, А.А. Башаров // Вестник БГАУ. - № 2. - 2012. - С. 17-19). Стимуляция иммунной системы материнского организма на ранних сроках беременности до начала формирования органов иммунной системы плода приводит к изменениям их реагирования на введение ЛПС (липополисахаридов) и менее выраженному системному воспалительному ответу, что обусловливает большую выживаемость животных. Структурно – функциональные изменения тимуса потомства свидетельствуют о менее выраженной акцидентальной инволюции вследствие более медленной реакции на стресс. Морфофункциональные изменения селезенки выражены в меньшей степени и имеют свои особенности, связанные с замедлением превращения селезенки из органов кроветворения в орган иммунной системы. Происходит нарушение кооперации клеток в маргинальной зоне лимфатических узелков, что обусловлено 44 отсутствием миграции нейтрофилов. (Обернихин С.С. Структурно – функциональные изменения органов иммунной системы при развитии системного воспалительного ответа у потомства самок мышей, перенесших стимулирующее воздействие на иммунную систему в ранние сроки беременности / С.С. Обернихин, Н.В. Яглова // Иммунология. – 2014. – Т. 35, №3. – С. 8 – 12). К лекарственным иммуномодулирующими средствам, свойствами, обладающим без сомнения, выраженными следует отметить интерфероны и индукторы интерферонов (Ершов Ф.И. Антивирусные препараты: Справочник / Ф. И. Ершов. - М.: Медицина, 1998. - 186 с.). В настоящее время в медицине широко известны пробиотики нового поколения, которые не только оказывают пробиотическое действие, но и содержат штаммы микроорганизмов, способные продуцировать интерферон. Интерферон –α при введении перорально проявляет выраженные иммуноадъювантные свойства (Tompkins W.A. Immunomodulation and therapeutic effects of the oral use of interferon – alpha: mechanism of action / W.A. Tompkins //J. Interferon Cytokine Res. 1999. 19(8): 817 – 828.). Система интерферона (ИФН) играет одну из центральных ролей в иммунорегуляции, включает механизмы врожденного и адаптивного иммунного ответа, является первой линией защиты от вирусных и других внутриклеточных инфекций, участвует в поддержании гомеостаза организма. ИФН и их индукторы, являясь центральными пусковыми молекулами системы ИФН, эффективно предупреждают самые ранние негативные процессы взаимодействия носителей чужеродной информации с организмом и занимают приоритетное место среди современных средств антивирусной и противораковой терапии (Наровлянский А.Н. Интерфероны: Перспективные направления исследований / А.Н. Наровлянский, Ф.И. Ершов, А.Л. Гинцбург // Иммунология. – 2013. – Т. 34, №. – С. 168 – 175). Проведено исследование межлинейных морфофункциональных различий реакции иммунной системы у мышей BALA/c и C57BL/6 с преобладанием соответственно Th-2- и Th-1-типа иммунного ответа на введение низкой дозы (250 45 мк/кг) липополисахарида (ЛПС). Введение ЛПС независимо от преобладания Th1- или Th-2-типа иммунного ответа приводит к увеличению уровня кортизола в сыворотке крови, адаптивным изменениям в системе перекисного окисления липидов и ферментов антиоксидантной защиты, увеличению процентного содержания нейтрофилов в крови и их функциональной активации, гиперплазии В- и Т-зон селезенки и к переходящему снижению (на 1-е сутки) продукции спленоцитами ИЛ-6 и ФНОα. На 1-е сутки после введения ЛПС у мышей обеих линий отмечается повышение уровня эндотоксина в периферической крови, которое сопровождается снижением уровня антител к нему. У мышей C57BL/6 в отличие от BALA/c на 1-е сутки после введения ЛПС снижается уровень продукции спленоцитами ИЛ-4, а уровень антител к ЛПС на 14-е сутки не повышается, что обусловлено поляризацией иммунного ответа на ЛПС поTh-1типу. Таким образом, изменения иммунной системы при адаптивной реакции на введение низкой дозы ЛПС у мышей обеих линий характеризуется гиперплазией В- и Т-зон селезенки, снижением на 1-е сутки уровня антител к ЛПС в сыворотке крови, снижением уровня продукции спленоцитами провоспалительных цитокинов ФНОα и ИЛ-6. (Диатроптов М.Е. Морфофункциональные изменения иммунной системы мышей BALA/c и C57BL/6 при воздействие низкой дозы липополисахарида / М.Е. Диатроптов, С.Н. Макарова, Серебряков С.Н. [и др.] // Иммунология. – 2011. – Т. 32, - №.3 – С. 135 – 138). По результатам исследователей можно сказать, что использование иммуннокоррегирующих веществ имеет важное научно-практическое значение при профилактике и лечении иммунодефицитов. Применение иммуномодуляторов или средств повышающих иммунитет является основным методом для иммунокоррекции. В настоящее время среди различных нарушений механизмов иммунитета важнейшее значение приобретает проблема иммунодефицитов у животных, особенно вторичных иммунодефицитных состояний (Асадуллина И. Показатели гуморального иммунитета кроликов при ассоциативной болезни и после 46 патогенетической терапии / И. Асадуллина, В. Галимова // Ветеринария сельскохозяйственных животных. - 2011.- №11.- С. 27-30.). Широкое использование в ветеринарии неспецифических средств для повышения общей и специфической резистентности организма, коррекции иммунитета, профилактики и лечения больных позволит снизить заболеваемость и в начальной мере повысить продуктивность животных (Доверишов Д.А. Т-активин при ОРЗ телят. Применение биотехнологии в животноводстве и вет. медицине: / Д.А. Доверишов, Е.С. Воронин // Всесоюзн. научно-техн. конф.: Тез.докл. - М., 1988. – С. 36-37; Belokrinitskaya T.E. / Effect of erythro cytology peptides on theeritropoiesis system and immunity in vivo and in vitro / T.E. Belokrinitskaya, B. I. Kuznik, V. Kh. Khavinson // Molecular mechanisms to modern medicine. Montreal. – 1994.-Р. 120; Асрутдинова Р.А. Способ защиты здоровья поросят/ Р.А. Асрутдинова // Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана.-Казань.2010.-С.25-29). В настоящее время как одно из перспективных направлений повышения защитных сил организма используются иммуномодуляторы, воздействующие непосредственно на активизацию адаптационных способностей и иммунобиологического статуса организма животных (Вишневская Т. Анализ гематологических показателей у кроликов в условиях стресса и его иммунокоррекции / Т. Вишневская // Ветеринария сельскохозяйственных животных. - 2013. - №1. - С. 13-16.). Исследования Н.Д. Придыбайло (Придыбайло, Н. Д. Иммунодефициты у сельскохозяйственных животных и птиц.Профилактика и лечение их иммуностимуляторами / Н. Д. Придыбайло // – М.: ВАСХНИЛ, 1991. – 43 с.) показали, что разнообразие веществ со сходной иммуностимулирующей активностью, химическая структура которых часто не имеет ничего общего, затрудняет изучение механизма их действия. Трудно предположить, что у сотен известных стимуляторов иммунного ответа есть сотни различных механизмов действия. 47 В настоящее время многочисленный арсенал иммуномодуляторов подразделется на три основные группы: тканевые препараты (белки сыворотки крови, иммуноглобулины и их фрагменты, препараты тимуса, костного мозга, селезенки, интерфероны, липиды и т.д.); препараты микробного происхождения (микробные липополисахариды, полисахариды, микобактериальные фракции, пептидогликаны, нуклеиновые кислоты и т.д.); синтетические препараты (производные левомизола, флуоренона, пурина, пиримидина, природные и синтетические полиэлектролиты и т.д.). (Воронин Е.С. Иммуномодуляторы в ветеринарии / Е.С. Воронин, Д.А. Дервишов // Проблемы экологии в вет. медицине: тез.докл. всероссийской науч.-техн.конф. - М., 1989. - С. 15.). Препараты растительного происхождения из чеснока, элеутерококка, пустырника, женьшеня, эфирных масел, борщевика и других растений находят широкое применение в качестве иммуностимуляторов у животных (Гугушвили Н.Н. Динамика изменения клеточного и гуморального иммунитета у коров при беременности и после родов / Н.Н. Гугушвили // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук - 2003. - №6. - С. 64 - 66). В настоящее время растительные полисахариды рассматриваются как перспективный комплекс биологически активных веществ для создания новых лекарственных средств коррекции различных нарушений иммунной системы, а также комплексной терапии злокачественных новообразований (Лопатина К.А. Растительные полисахариды в комплексной терапии перевиваемых опухолей / К.А. Лопатина, Т.Г. Разина, Е.П. Зуева [и др.] // Бюллетень эксперим. биологии и медицины. - 2006. - Приложение № 1. - С. 30 — 35, Furusawa E. / Anti-tumor potential of a polysaccharide rich substance from the fruit juice of Morinda citrifolia (Noni) on sarcoma 180 asci test unmoor in mice. // E. Furusawa, A.Hirasumi, S. Story [et all].// Phytother. Res. - 2003. - V. 17. - № 10. - P. 1158 - 1164). Применение иммуностимуляторов при вакцинации усиливает иммунный ответ организма, что увеличивает вероятность успешного проведения вакцинации (Артемов Б.Т. Влияние некоторых экологических факторов на общую резистентность и специфическую реактив-ность животных / Б.Т. Артемов, 48 Л.И. Ефанова,. О.А. Манжурина // Вестник ВГАУ: науч. докл. и сообщения. Воронеж: ВГАУ, 1998. - Вып. 1. - С. 188 - 194). Выявлена достоверная эффективность защитного действия отечественных иммуномодуляторов ридостина, полирибоната, глюкозо-мурамилдипептида пептидогликана-160 при экспериментальных инфекциях вируса восточного энцефаломиелита лощадей (альфа вирусная инфекция) и вируса клещевого энцефалита (флави профилактики вирусная достоверно инфекция) возрастает при у мышей. сочетанном Эффект экстренной применении этих отобранных иммуномодуляторов со специфическими вакцинами. При альфа вирусной инфекции сочетанное действие специфической вакцины и ридостина сопровождалось увеличением уровня специфического гуморального иммунитета (специфические антитела) и клеточного иммунитета (адоптивный перенос иммунных лимфоцитов). Сочетанное использование специфической вакцины и иммуномодулятора ридостина рекомендовано для клинических испытаний при клещевом энцефалите в очаге инфекции. В последние годы возрастает интерес исследователей к использованию иммуномодуляторов для повышения общей резистентности организма к вирусам. Низкая иммуногенность и защитная эффективность инактивированных вирусных вакцин связана в первую очередь с введением в организм недостаточных количеств антигенного раздражителя. Поэтому вынужденно прибегают к многократным вакцинациям для индукции специфического иммунитета. Другим способом усиления иммуногенности вакцин является применение иммуномодуляторов (Баринский И.Ф. Изучение эффективности использования отечественных иммуномодуляторов, а так же сочетанного их действия со специфическими вакцинами при экспериментальных арбовирусных инфекциях / И.Ф. Баринский, А.А. Лазаренко, Л.М. Алимбарова // Иммунология. - 2012. - № 4. - С.181-183). Интенсивность иммунного ответа на введение вакцины зависит от многих факторов, таких как функциональное состояние организма, его генетические особенности, а также от свойств самой вакцины (возбудителя, схемы введения, 49 технологии производства). Известно, что при высокой степени очистки антигена его иммуногенная активность снижается. Стремление создать вакцины из гомогенных высокоочищенных антигенов часто приводит к необходимости использования адъювантов. В настоящее время для стимуляции вакцинального процесса в качестве адъювантов используют различные иммуномодуляторы, отличающиеся по происхождению и механизму действия (Кетлинский С.А. Цитокины. / С.А. Кетлинский, А.С. Симбирцев. - СПб: Фолиант, 2008. - 552 с., Медуницын Н.В. Вакцинология. / Н.В. Медуницын. - М.: Триада - Х, 1999.-272 с.). В последние годы возрос интерес исследователей к использованию иммуномодуляторов для повышения общей резистентности организма к вирусам. Это предопределяет эффект использования иммуномодуляторов, особенно в сочетании со специфическими убитыми вакцинами для лечения и профилактики как острых, так и персистентных вирусных инфекций, и, таким образом, коррекции вторичных иммунодефицитных состояний И.Ф. использования Изучение эффективности организма (Баринский отечественных иммуномодуляторов, а так же сочетанного их действия со специфическими вакцинами при экспериментальных арбовирусных инфекциях / И.Ф. Баринский, А.А. Лазаренко, Л.М. Алимбарова // Иммунология. - 2012. - № 4. - С. 181 - 183). Иммуномодуляторы микробного происхождения условно можно разделить на три поколения. Первым препаратом, разрешенным в начале 50-х годов в США и странах Европы для медицинского применения в качестве иммуностимулятора, была вакцина БЦЖ, обладающая выраженной способностью усиливать факторы как врожденного, так и приобретенного иммунитета. В то время главной целью применения БЦЖ как иммуностимулятора была активация противоопухолевого иммунитета и лечение злокачественных заболеваний (Werner G.H., Immunostimulat in agents: what next? Are view of the irpresent and potential applications / G.H. Werner, P. Jolles // Eur. J. Immunol.-1996. - Vol. 242. - P. 1 - 19). Главной мишенью в организме для иммуномодуляторов микробного происхождения являются фагоцитарные клетки. Под влиянием этих иммуномодуляторов происходит усиление функциональных свойств фагоцитов: 50 повышаются фагоцитоз и внутриклеточный киллинг поглощенных бактерий, а также продукция провоспалительных цитокинов, необходимых для инициации гуморального и клеточного иммунитета. Следствием этого могут быть усиление продукции антител, активация образования антигенспецифических Т-хелперов и Т-киллеров (Хаитов Р.М. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение / Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. - 2003. - № 4. - Т - 24. С. 196 - 203). В течение десятилетия представлялось, что антиген, адсорбированный на частицах гидроокиси алюминия, представляет собой депо, из которого в течение многих недель происходит высвобождение антигена, что и обеспечивает усиленный иммунный ответ. Это представление не подтвердилось (Hogen Esch H. Mechanisms of stimulation of the immune response by aluminum adjuvants / H. Hogen Esch // Vaccine. – 2002. – Vol. 20. - Suppl. 3. – S34-S39; Brewer J. M. How do aluminum adjuvants work? / J. Brewer // Immunol. Lett. – 2006. – Vol. 102. - N 1. – P. 10 – 15; Hem S. L. Relationship Between physical and chemical properties of aluminium containing adjuvants and immune potentiation / S. L. Hem, H. Hogen Esch // Expert Rev. Vaccines. – 2007. – Vol. 6. – P. 685 – 698). В исследованиях Никитиной Т.Н. и других (Никитина Т.Н. Изучение иммуноадъювантного действия цитокинов на экспериментальных моделях / Т.Н. Никитина, Ж.И. Авдеева, Н.А. Алпатова // Цитокины и воспаление. -2010. Т. 9. - №3. - С. 19 - 24) у животных с индуцированной циклофосфаном иммуносупрессией при первичной иммунизации антигенами с цитокинами или реиммунизированных на фоне введения цитокинов, наблюдается более выраженный иммунный ответ по сравнению с иммунодефицитными животными, иммунизированными без цитокинов. У экспериментальных животных отмечен более высокий уровень сероконверсии и большая частота встречаемости высоких титров антител. Иммуноадъювантное действие цитокинов на иммуногенную активность вакцины выявляется также в группах контрольных животных без индуцированной иммуносупрессии. 51 Эффект иммуностимуляторов гораздо более кратковременен по сравнению с эффектом вакцин, однако развивается практически немедленно и относительно неизбирателен, что является несомненным преимуществом, например, при угрозе биологической атаки, если возбудитель неизвестен. (Пащенков М.В. Результаты фазы клинических I испытаний иммуномодулятора полимурамина / М.В. Пащенков, А.С. Будихина, Н.М. Голубева [и др.] // Иммунология. – 2011. – Т. 32. - № 6. – С. 315). Применение иммунотропных препаратов преследует цель повышения уровня активности иммунной системы. Вакцины, создавая специфическую защиту от конкретных видов инфекций, оказывают сильное неспецифическое действие, стимулируя многочисленные факторы естественной резистентности (Рыбченко И.Н. Научные и практические аспекты применения иммуностимулирующих препаратов для повышения иммунной реактивности животных / И.Н. Рыбченко // Ветеринарный врач. – 2011. - № 5. – С. 37). Таким образом, поиск эффективных и недорогих иммуностимуляторов, оказывающих при этом минимум побочных действий, является актуальной задачей (Пащенков М.В. Результаты фазы I клинических испытаний иммуномодулятора полимурамина / М.В. Пащенков, А.С. Будихина, Н.М. Голубева [и др.] // Иммунология. – 2011. – Т. 32. - № 6. – С. 315). В современных условиях развития животноводства в России, на фоне резкого увеличения количества хронических инфекций, вторичных иммунодефицитов и недоступности эффективных антибактериальных препаратов и других средств, использование препаратов, повышающих резистентность организма к инфекционным агентам, является актуальной проблемой. 52 2 ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 2.1 Методология и методы исследования Работа выполнялась с 2012 по 2015 год в условиях кафедры зоогигиены ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» и в условиях КФХ «МИАКРО- КАРАТАУ Фермерское хозяйство» Республики Татарстан. Экспериментальные и научно - производственные опыты проводили в соответствии с установленными требованиями к эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период работы и учета результатов. При постановке опытов были биохимические, использованы фармакологические, физиологические, физиологические, гистологические, токсикологические, клинические, иммунологические морфологические, и другие методы исследований. Опыты были поставлены в соответствии со схемой 1(рис. 1). Для проведения исследований использовали опытную серию образца полисахаридного препарата «Гемив», произведенного ЗАО «Петрохим» в Белгородской области, соответствующего по качественным показателям стандартам предприятия. В экспериментах применения по изучению полисахаридного фармако-токсикологических препарата «Гемив» для свойств повышения неспецифической резистентности было использовано 300 белых крыс, 112 крысят-отъёмышей и 96 кроликов породы советская шиншилла (таблица 1). Перед проведением лабораторных экспериментов все опытные животные в течение 14 дней находились под наблюдением. В период проведения опытов условия кормления и содержания для каждого вида подопытных и контрольных животных поддерживали согласно существующим зоогигиеническим нормам. Животных подбирали по принципу аналогов с учётом породы, пола, возраста, живой массы и состояния здоровья. Токсические свойства полисахаридного препарата «Гемив» изучали путем определения острой, хронической и субхронической токсичности, местно- 53 раздражающего и аллергенного действия (Г.Н. Першин и др., 1971; Л.П. Маланин и др., 1988; Р.У. Хабриев, 2005; Б.И. Любимов, М.И. Миронов, 1988; В.В. Гацура, 1974). Так же, изучены всевозможные отдаленные последствия в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве» утвержденными ГУВ СССР (1988). Об общем действии полисахарида судили по изменению поведения животных, появлению у них после введения препарата тех или иных признаков, не наблюдавшихся в параллельном контроле после применения физиологического раствора. Определение острой токсичности проводили на белых крысах по методике Г.Н Першина (1971) Испытуемый полисахарид вводили внутрижелудочно и внутримышечно. Препарат готовили ex tempera растворяя в физиологическом растворе. В желудок препарат лабораторным животным вводили натощак при помощи шприца и присоединенной к нему иглы с напаянной свинцовой оливой на конце. Внутримышечное введение исследуемого полисахаридного препарата «Гемив» испытывали на 6 группах лабораторных животных по 10 крыс в каждой. Опытным группам вводили полисахаридный препарат «Гемив» в виде водной суспензии в объёме 1 мл. В контроле животным однократно вводили физиологический раствор. При изучении кумулятивных свойств использовали метод «субхронической токсичности», предложенный Lim и соавт. (1961). В опыте по изучению кумулятивного действия использовали 20 белых крыс обоего пола массой 180-200 г. Крысам опытной группы вводили препарат в максимально вводимой дозе - 126 мг/кг массы тела. В каждые последующие 4 сутки дозу препарата увеличивали в полтора раза. Крысам контрольной группы внутримышечно вводили 1 мл изотонического раствора натрия хлорида. В течение опыта наблюдали за общим состоянием подопытных животных. С учетом отсутствия гибели животных, как при выявлении кумулятивных свойств исследуемого полисахарида, так при изучении параметров острой токсичности с применением 54 максимально вводимой дозы, коэффициент кумуляции был определен как отношение суммарной дозы к максимально вводимой дозе в опыте по изучению острой токсичности (Р.У. Хабриев, 2005). Параметры хронической токсичности изучали по общепринятым методикам на 40 белых крысах. Опыт проводили на клинически здоровых белых крысах обоего пола живой массой 85-90 г. Животных в группы подбирали по принципу аналогов. В процессе опыта у всех животных ежедневно определяли клинический статус, при этом особое внимание обращали на общее состояние, состояние волосяного покрова и видимых слизистых оболочек, потребление корма и воды. У подопытных животных до начала введения препаратов и на 10, 20 сутки опыта проводили взятие крови для морфологического и биохимического анализа. Перед экспериментом определяли первоначальную массу каждого животного, затем вводили препарат. Повторные измерения проводили на 10, 20 дни опыта, оценивая прирост массы тела животных, а после умерщвления массу внутренних органов. Аллергизирующее действие выявляли на кроликах методом накожных аппликаций препарата в нативном виде в течение 14 суток. В контрольной группе применяли воду для инъекций. До сенсибилизации, перед применением максимальной дозы и после неё учитывали массу тела, ректальную температуру и определяли степень покраснения кожи. О наличии у препарата раздражающих свойств судили по появлению на месте аппликации гиперемии, отека, утолщения кожной складки и расчесов. Опыт проводили по методике Б.И. Любимова, М.И. Миронова (1988). Выявление раздражающих свойств изучаемого полисахаридного препарата «Гемив» на слизистую оболочку глаза проводили на кроликах по методам В. Гацура (1974). Подопытным животным 2 капли полисахаридного препарата «Гемив» в 0,5% водной суспензии с помощью глазной пипетки вносили под правое веко. О наличии у полисахарида раздражающих свойств судили по покраснении конъюнктивы, слезотечения и появления расчесов. 55 Фармако-токсикологическая характеристика и эффективность полисахаридного препарата «Гемив» для повышения неспецифической резистентности кроликов Токсикологические свойства полисахаридного препарата «Гемив» Острая и хроническая токсичность Аллергизирующие и раздражающие свойства Кумулятивные и эмбриотоксические свойства Клиникофизиологические, морфобиохимические показатели крови Влияние полисахаридного препарата «Гемив» на морфологические и биохимические показатели крови животных при экспериментальном иммунодефиците Эффективность применения полисахаридного препарата «Гемив» белым крысам Эффективность применения полисахаридного препарата «Гемив» кроликам Иммуностимулирующие свойства полисахаридного препарата «Гемив» Результаты клиникогематологических исследований Результаты биохимических исследований Результаты иммунологических исследований Производственные исследования полисахаридного препарата «Гемив» Условия Экономическая эффективность разработанных мероприятий содержания и кормления кроликов в КФХ «МИАКРОКАРАТАУ Фермерское хозяйство» Влияние полисахаридного препарата «Гемив» на иммунокомпетентные клетки периферической крови и титр антител при вакцинации кроликов против сальмонеллеза Ветеринарно-санитарная оценка мяса кроликов после проведения иммунизации с полисахаридным препаратом «Гемив» Биологическая оценка мяса кроликов Гистологические исследование внутренних органов кроликов при иммунизации 56 Таблица 1– Перечень проведенных исследований № Наименование опыта п/п Объект Количество исследования животных, голов 1. Определение острой токсичности Белые крысы 140 Белые крысы 40 Белые крысы 40 Белые крысы 40 Белые крысы 20 Кролики 12 Белые крысы 20 Крысята- 92 полисахаридного препарата «Гемив» 2. Определение хронической токсичности «Гемив» 3. Морфологический и биохимический анализ крови после длительного введения «Гемив» 4. Патологоанатомическое вскрытие лабораторных животных после применения «Гемив» 5. Изучение кумулятивного действия 6. Определение раздражающего и аллергизирующего действия полисахаридного препарата «Гемив» 7. Определение эмбриотоксического и тератогенного действия «Гемив» 8. Постнатальное развитие крысят отъемыши 9. Эффективность применения Белые крысы 80 полисахаридного препарата Кролики 24 Кролики 24 «Гемив» 10. Иммуностимулирующие свойства полисахаридного препарата Гемив» 57 Продолжение таблицы 1 11. Производственные исследования Кролики 36 Кролики 24 Крысята- 20 полисахаридного препарата «Гемив» 12. Ветеринарно-санитарная оценка мяса кроликов после проведения иммунизации полисахаридным препаратом «Гемив» 13. Биологическая оценка мяса кроликов отъемыши 14. Гистокартина внутренних органов Кролики 36 Эмбриотоксическое действие препарата изучали на белых крысах. Крысы были разделены на 2 группы по 10 самок. Первая группа служила контролем, второй группе самок внутримышечно вводили исследуемый полисахаридный препарат «Гемив» в дозе 126 мг/кг живой массы. Самок подсаживали к самцам и на следующий день исследовали влагалищный мазок. День обнаружения спермы считали первым днем беременности. Препараты вводили, начиная с первого дня беременности и вводили до дня предшествующего родам. Крыс содержали в одинаковых условиях, следили за их поведением во время беременности. На 20-е cутки беременности часть самок подвергали эвтаназии, вскрывали брюшную полость и в яичниках подсчитывали количество желтых тел, в матке – места имплантации эмбрионов, число живых, мертвых и резорбированных плодов. У плодов определяли массу тела, наличие или отсутствие анатомических аномалий, антропометрические размеры. Тератогенностью полисахарида считали наличие у плодов анатомических пороков и задержку их развития. Влияние препаратов на постнатальное развитие изучали начиная со дня рождения крысят (Методические указания по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ, 1986; Ф.Н. Субботин с соавт., 1972). После 58 родов оценивали среднее количество крысят на одну самку, массу крысят с первого дня рождения до 30 дневного возраста, летальность крысят в первые три дня после рождения, а также сроки отлипания ушных раковин, появления первичного волосяного покрова, открытие глаз. На основании проведенных исследований были определены оптимальные дозы применения полисахаридного препарата «Гемив» на белых крысах и кроликах. Нами был разработан режим и дозировка применения полисахаридного препарата «Гемив». В эксперименте отправной точкой при подборе испытуемых доз полисахаридного препарата «Гемив» служила 126 мг/кг живой массы, после введения которой были получены положительные результаты. В качестве фактора, вызывающего иммунодефицитное состояние использовали препарат циклофосфан (иммунный статус и показатели неспецифической резистентности изучали путем моделирования иммунодефицитного состояния). В дальнейших исследованиях изучали влияние полисахаридного препарата «Гемив» на организм кроликов при применении с вакциной против сальмонеллеза. С целью изучения влияния полисахаридного препарата «Гемив» на формирование иммунитета у кроликов и эффективности специфической профилактики сальмонеллёза, при двукратной вакцинации, было сформировано три группы кроликов по 12 животных в каждой. В качестве иммунокоррегирующего препарата для сравнительного анализа мы применяли циклоферон, который является низкомолекулярным индуктором интерферона, что определяет широкий спектр его биологической активности (в том числе противовирусной, иммуномодулирующей, противовоспалительной, антипролиферативной, противомикробная и противоопухолевой). противохламидийная Установлена высокая активность препарата за счет активации системы иммунитета. Опыты проводили на кроликах, живой массой 4,5 -5,0 кг. Кролики всех групп прививали инактивированной вакциной против сальмонеллеза в дозе 1 мл двукратно с интервалом в 7 дней при применении полисахаридного препарата 59 «Гемив» и циклоферона. Животным первой группы вводили «циклоферон» – в дозе 125 мг/гол в объеме 1 мл, второй группы – полисахаридный препарат «Гемив» в дозе 1 мл/гол в 0,5 % концентрации (с содержанием сахаров 0,7 ммоль/л). Кроликам третьей группы иммуностимулирующие препараты не вводили (контрольная группа – двукратная инъекция инактивированной вакцины против сальмонеллеза в дозе 1 мл с интервалом 7 дней). За подопытными животными вели постоянное клиническое наблюдение. При этом производили взвешивание, а также определяли температуру тела у животных. В сыворотках крови у подопытных животных определяли общий белок и белковые фракции, а также активность отдельных ферментов, в частности, аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы. Через две недели после вакцинации у подопытных кроликов определяли уровень противосальмонеллезных антител в реакции гемагглютинации (РГА). В качестве антигена использовали инактивированные культуры сальмонелл с концентрацией 1 млрд. м.к./мл. Гистологические исследования по оценке влияния полисахаридного препарата «Гемив» при иммунизации против сальмонеллеза на органы и ткани кроликов проводили на 14 и 21 сутки после начала применения испытуемого соединения. Для выполнения морфологических исследований кусочки печени, почек и селезенки подопытных и контрольных животных фиксировали в 10 %ном нейтральном водном растворе формальдегида, этанол-формальдегиде (9:1). Обезвоженные в спиртах восходящей плотности кусочки органов и тканей уплотняли заливкой в парафин. Изготовленные гистологические срезы толщиной 6-8 мкм окрашивали гематоксилин-эозином (Меркулов М.И., 1969). В ходе изучения микроструктурных изменений в органах и тканях кроликов проводили фотографирование наиболее выраженных изменений. Морфологические исследования были выполнены на кафедре патологической анатомии и гистологии ФГБОУ ВПО КГАВМ под руководством заведующего кафедрой, д-ра ветеринарных наук, профессора Залялова И.Н. 60 Наряду с этим проведены патоморфологические исследования органов и тканей лабораторных животных, использованных при определении острой и хронической токсичности испытуемого полисахаридного препарата «Гемив». О качестве мяса после применения препаратов судили по результатам ветеринарно-санитарной экспертизы, включающей в себя органолептическую и дегустационную оценку мяса и жира, а также физико-химические показатели мяса кроликов. Органолептическое исследование для установления степени свежести мяса кроликов проводили по ГОСТ 20235.0-74 (Мясо кроликов. Методы отбора образцов. Органолептические методы определения свежести). Определение физико-химических показателей в мясе кроликов на наличие аммиака и солей аммония, активность мышечной пероксидазы, кислотное число жира, содержание амино-аммиачного азота; определение концентрации водородных ионов (рН) проводили в соответствии с ГОСТ 20235.1-74 (Мясо кроликов. Методы химического и микроскопического анализа свежести мяса). Во время морфологический проведения состав экспериментов крови, выводили у животных определяли лейкоформулу, содержание биохимических показателей. Гематологические показатели определяли общепринятыми методами (А.А. Кудрявцев с соавт., 1974): содержание гемоглобина – гемометром Сали, подсчет эритроцитов и лейкоцитов в 1 мм3 проводили в камере Горяева. При изготовлении мазков крови и выведении лейкоформулы пользовались указаниями по гематологическим исследованиям (А. А. Кудрявцев с соавт., 1974 и Г. А. Симонян с соавт., 1995). Количество Т-клеток подсчитывали в реакции спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК), общую популяцию В-лимфоцитов – в реакции комплементарного розеткообразования (ЕАС-РОК) с эритроцитами, образующими иммунные комплексы с комплементом, по методу M. Jondaletal. (1972) в модификации Р.В. Петрова с соавт. (1984). 61 Биохимические исследования состояли из определения в сыворотке крови общего белка с нефелометрически. помощью рефрактометра Используя шкалу RL-3, Рейсса, белковых показания фракций - рефрактометра переводили в проценты белка (И. М. Карпуть, 1993). В сыворотке крови определяли: общий кальций и неорганический фосфор – унифицированным колориметрическим методом с помощью набора реагентов «Ольвекс диагностикум», активность трансаминаз (АлАТ – аланинаминотрансфераза и АсАТ – аспартатаминотрансфераза) – унифицированным методом Райтмана Френкеля, щелочную фосфатазу по методу Бодански (И.П. Кондрахин, Н.В. Курилов, А.Г. Малахов, 1985). По результатам производственных испытаний проводили расчет экономической эффективности применения полисахаридного препарата «Гемив»» в кролиководстве. Экономическую эффективность применения «Гемив» с вакциной против сальмонеллеза рассчитали по И.Н. Никитину и др. (2012) с учетом действующих цен. Результаты исследований подвергали математической обработке на ПК с использованием программного комплекса Microsoft Excel 2007, с вычислением средних арифметических (М), их среднестатистических ошибок (m) и критерия достоверности (р); цифровые данные оценивали с применением степени достоверности по Стъюденту. 62 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.2 2.2.1 Токсикологические свойства полисахаридного препарата «Гемив» Для оценки токсических свойств полисахаридного препарата «Гемив» определяли острую аллергизирующие, и хроническую раздражающие и токсичность, эмбриотоксические кумулятивные, свойства. Перед проведением лабораторных экспериментов все опытные животные в течение 14 дней находились на карантине. В период проведения опытов условия кормления и содержания для поддерживали каждого согласно вида подопытных существующим и контрольных зоогигиеническим животных нормативам. Животных подбирали в группы по принципу аналогов с учетом пола, возраста, живой массы и состояния здоровья. Перед проведением опыта по изучению токсичности препарата, животных взвешивали и с учетом их живой массы, рассчитывали требуемое количество вещества. 2.2.1.1 Изучение острой токсичности Острую токсичность полисахаридного препарата «Гемив» вычисляли статистическим методом Кербера. Полисахаридный препарат «Гемив» применяли внутрижелудочно (перорально) и внутримышечно. Перорально полисахарид вводили при помощи атравматического зонда, в объёме, максимально – допустимом – 5 мл. Исследуемый полисахарид вводили однократно в виде водной суспензии. Перед началом эксперимента животные всех групп были выдержаны на голодной диете. Подопытных животных допускали к корму через 6 часов после введения препарата, водопой при этом не ограничивали. После введения препарата за животными вели наблюдение в течение 30 суток. При внутрижелудочном введении полисахаридного препарата «Гемив» по принципу аналогов было сформированы группы лабораторных животных с живой 63 массой 165 - 180 г. Крысам опытных групп полисахарид вводили в разных дозах от 19 до 1140 мг/кг в виде раствора. Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили физиологический раствор. Внутримышечное введение исследуемого полисахаридного препарата «Гемив» испытывали на 6 группах лабораторных животных по 10 крыс в каждой. Водную суспензию полисахаридного препарата «Гемив» вводили однократно из расчета на килограмм живой массы. Опытным группам вводили полисахаридный препарат «Гемив» в виде водной суспензии в объеме 1 мл. Контролным животным однократно вводили физиологический раствор. Установлено, что при внутрижелудочном и внутримышечном введении во всех испытанных дозах, полисахаридный препарат «Гемив» не вызывал гибели у крыс и не оказывал никакого токсического действия на организм лабораторных животных. В связи с этим не удалось установить величину ЛД50, поскольку введение максимальной дозы не вызвало каких – либо изменений в общем состоянии и поведении подопытных животных. Животные охотно поедали корм, были активны, адекватно реагировали на тактильные, звуковые, болевые и световые раздражители. Волосяной покров был чистым, блестящим. Слизистые оболочки рта, глаза, влагалища были естественно - розового цвета. В конце эксперимента, после декапитации под эфирным наркозом проводили патологоанатомический осмотр внутренних органов. При этом в них не наблюдали каких-либо изменений и отклонений в развитии, а их абсолютная и относительная масса практически не отличалась от показателей контрольной группы. Массы внутренних органов контрольных и опытных групп животных, получавших полисахарид, после патологоанатомического вскрытия, представлены в таблице 2. Из полученных результатов исследований следует, что полисахаридный препарат «Гемив» не обладает каким – либо токсическим действием, даже при применении в максимально вводимых дозах (1140 мг/кг - при внутрижелудочном и 126 мг/кг - при парентеральном введении). 64 Таблица 2 – Изменение массы органов белых крыс при применении максимально вводимых доз полисахаридного препарата «Гемив» (n=10) Название Группа При внутрижелудочном Органа введенииОпытная Контрольная При внутримышечном введенииОпытная Контрольная Сердце 0,65±0,02 0,64±0,01 0,67±0,03 0,65±0,01 Лёгкие 0,94±0,07 1,03±0,04 0,95±0,06 0,99±0,03 Селезёнка 0,64±0,03 0,58±0,02 0,72±0,02 0,61±0,02*** Печень 4,89±0,12 4,92±0,09 5,10±0,08 5,06±0,05 Почки 1,07±0,06 1,12±0,02 1,27±0,04 1,25±0,04 Примечание:*** - результаты статистически достоверны (р≤0,01) По классификации Л.И. Медведь, Ю.С. Каган, Е.И. Спыну (1964), принятой в настоящее время ВОЗ, полисахаридный препарат «Гемив» можно отнести к веществам IV класса токсичности. Ввиду того, что гибель животных отсутствовала во всех опытных группах, определить параметры токсичности полисахаридного препарата «Гемив» не представлялось возможным. Поэтому, в дальнейших расчётах было использовано условное ЛД50 от максимальной дозы в зависимости от живой массы и путей введения. 2.2.1.2 Изучение кумулятивных свойств Исследования по определению кумулятивных свойств полисахаридного препарата «Гемив» проводили на белых беспородных крысах, живой массой 90100 г методом субхронической токсичности (R.K. Lim с соавт. (1961)). За исходную дозу была взята доза полисахаридного препарата «Гемив», составлявшая 1/10 часть от условной ЛД50, максимально использованной в острых опытах, что соответствовала – 12,6 мг/кг живой массы. Через каждые четверо 65 суток дозу увеличивали в 1,5 раза. За опытными животными вели клинические наблюдения в течение всего срока введения испытуемого вещества. Учитывали поведение, потребление корма и воды, раздражительность, состояние волосяного покрова и видимых слизистых оболочек. Клинические признаки отравления начали проявляться на 19 – й день опыта и характеризовались незначительным угнетением общего состояния, учащением числа дыхательных движений. При этом крысы забивались в угол, становились менее подвижными. Спустя 3-4 часа, у животных отмечали восстановление поведенческих реакций, показателей дыхания до исходного уровня, животные охотно принимали корм и воду. Необходимо отметить, что подобные изменения отмечали только в опытной группе, где применяли исследуемое вещество. При этом, многократное введение полисахаридного препарата «Гемив» в возрастающих дозах не вызвало гибели животных. Схема определения кумулятивных свойств полисахаридного препарата «Гемив» при внутримышечном введении представлена в таблице 3. Таблица 3 – Определение кумулятивных свойств полисахаридного препарата «Гемив» для белых крыс при суммарном воздействии (n=10) Вводимая доза, мг/кг Ежедневно вводимая Дни введения 1- 4 5-8 9-12 13-16 17-20 21-24 25-28 12,6 18,9 28,3 42,5 63,8 95,7 143,5 50,4 75,6 113,4 170,0 255,1 282,7 574,0 63,0 94,5 141,7 212,5 318,9 378,4 717,5 0 0 0 0 0 0 0 доза, мг/кг Суммарная доза за 4 дня введения, мг/кг Суммарная доза по периодам введения, мг/кг Количество животных павших 66 С учетом отсутствия гибели животных, как при выявлении кумулятивных свойств полисахаридного препарата «Гемив», так при изучении параметров острой токсичности с применением максимально допустимой дозы, коэффициент кумуляции был определен как отношение суммарной дозы (717,5 мг/кг) к максимально вводимой дозе (126 мг/кг) в опыте по изучению острой токсичности. Кк ЛД 50 n ЛД 50 1 717,5 5,69 (2.2.1.2.1) 126 Следовательно, коэффициент кумуляции для исследуемого полисахарида составил 5,69, что свидетельствует о слабовыраженной кумуляции. 2.2.1.3 Изучение хронической токсичности Хроническую токсичность полисахаридного препарата «Гемив» изучали при его внутримышечном введении в объеме 1 мл. Токсичность определяли на 40 белых крысах (живой массой 80 - 85 г) обоего пола, разделенных по принципу аналогов на 4 группы по 10 животных в каждой: на контрольную и три опытные. Лабораторным животным первой опытной группы полисахарид вводили в дозе 126, второй группы - 63, третьей - 31,5 мг/кг массы тела, один раз в сутки в течение 20 суток. Контрольные животные получали физраствор в объёме 1 мл. За животными вели наблюдение в течение 30 суток. Клиническое состояние белых крыс изучали визуально, наблюдая за их поведением, потреблением корма и воды; провели индивидуальные взвешивания. Во время проведения экспериментов у животных определяли морфологический состав крови, выводили лейкоформулу, изучали биохимические показатели сыворотки крови. Были проведены патоморфологические исследования органов и тканей лабораторных животных по окончании периода введения изучаемого полисахарида. Результаты исследований свидетельствуют, что ежедневное введение полисахаридного препарата в указанных дозах не вызывало ухудшения физиологического состояния подопытных животных: они охотно принимали корм 67 и воду, адекватно реагировали на внешние раздражители, отмечалось спокойное поведение и нарушения в координации движений отсутствовали. На протяжении всего периода исследований наблюдали незначительные изменения в живой массе подопытных животных. Анализируя данные таблицы 4 стоит отметить, что все животные за период опыта прибавили в массе (таблица 4). Таблица 4 – Изменение массы тела крыс при длительном введении полисахаридного препарата «Гемив» (n=10) Группа Срок исследования, Контрольная сут. Опытная Первая Вторая Третья 126 мг/кг 63 мг/кг 31,5 мг/кг Исходные данные 84,5±0,35 84,9±0,72 84,7±0,73 84,8±0,40 10 92,5±0,48 96,1±0,40*** 93,8±0,33 92,7±0,34 20 111,6±0,68 120,0±0,53*** 116,8±0,61* 112,5±0,67 30 128,8±0,63 141,3±0,59*** 135,7±0,80* 132,2±0,64* Примечание: * - р≤0,05;*** - р≤0,01 Уже через 10 дней после начала введения полисахаридного препарата масса крыс в первой и второй опытной группе была достоверно выше по сравнению с контрольными показателями (р≤0,05; р≤0,01). На 30 сутки исследований наибольшая живая масса была у животных первой опытной группы, где полисахарид применяли в максимально вводимой дозе - 126 мг/кг массы тела. Стоит отметить, что значения по живой массе в опытных группах на последний день исследований были достоверно выше относительно контрольных показателей на 9,7; 5,4; 2,6 % соответственно ( p<0,001). В течение всего времени исследований проводили контроль за возможными сдвигами в составе крови белых крыс. Морфологические показатели крови в 68 период опыта изменялись, но эти изменения были в пределах физиологической нормы (таблица 5). Как видно из цифровых данных таблицы, содержание эритроцитов в крови подопытных животных первой на 10 сутки исследований увеличивается на 0,2 х 10-12 л с последующим снижением на 20 сутки опыта (p<0,01). Во второй опытной группе, наоборот, на 10 сутки после введения полисахарида наблюдали снижение, а на 20 сутки незначительное повышение количества эритроцитов относительно показателей контрольной группы (p<0,01). В третьей опытной и контрольной группе выявляли аналогичные изменения, но количество эритроцитов на конец опыта относительно аналогов из других групп было ниже. Таблица 5 – Морфологические показатели крови крыс при применении разных доз полисахаридного препарата «Гемив» (n=10) Контрольная Показатель группа Опытные группы Первая Вторая Третья (126 мг/кг) (63 мг/кг) (31,5 мг/кг) Исходные данные Гемоглобин, г/л 144,4±0,32 141,1±0,60 143,4±0,89 141,0±0,93 Эритроциты, х10-12 л 8,4±0,22 8,1±0,10 8,3±0,11 8,1±0,06 Лейкоциты, х10-9 л 12,9±0,10 13,3±0,17 12,7±0,18 12,4±0,17 Лимфоциты, % 66,1±0,50 67,2±0,34 67,9±0,32 68,3±0,61 Нейтрофилы, % 27,0±0,35 28,3±0,29 27,8±0,26 27,0±0,73 Моноциты, % 5,2±0,36 3,3±0,10 3,1±0,09 3,1±0,20 Эозинофилы, % 1,7±0,05 1,2±0,04 1,2±0,04 1,6±0,10 69 Продолжение таблицы № 5 Через 10 дней Гемоглобин, г/л 142,4±0,67 142,0±0,89 140,1±1,06 140,0±0,87 Эритроциты, х10-12 л 8,3±0,22 8,3±0,06 7,9±0,16 7,8±0,10 Лейкоциты, х10-9 л 12,7±0,27 13,0±0,17 Лимфоциты, % 66,0±0,31 67,5±0,49 68,8±0,26* 69,1±0,35 Нейтрофилы, % 26,6±0,24 27,9±0,78** 27,0±0,22* 25,1±0,36* Моноциты, % 5,3±0,09 3,5±0,22 3,2±0,09 3,9±0,29* Эозинофилы, % 2,1±0,05 1,1±0,05 1,0±0,10 1,9±0,10* 11,3±0,34*** 10,5±0,70*** Через 20 дней Гемоглобин, г/л 141,1±0,48 141,7±0,89 141,4±0,97 139,8±1,11 Эритроциты, х10-12 л 7,4±0,02 8,0±0,26 8,2±0,13 6,6±0,08 Лейкоциты, х10-9 л 12,5±0,22 13,2±0,32 9,8±0,15*** 8,4±0,45*** Лимфоциты, % 65,8±0,49 66,1±1,25 69,2±0,39* 65,5±0,62** Нейтрофилы, % 26,1±0,41 28,5±1,89* 24,9±0,34*** 27,8±0,57 Моноциты, % 5,8±0,14 4,4±0,14*** 4,9±0,13*** 5,0±0,17*** Эозинофилы, % 2,2±0,06 1,0±0,07* 1,0±0,12 1,7±0,06 Примечание:* - р≤0,05;*** - р≤0,01 Содержание гемоглобина в периферической крови подопытных животных на 10 сутки исследований во всех опытных группах снизилось по сравнению с контрольной группой животных. На конец наблюдений уровень гемоглобина 70 относительно показателей контрольной группы был выше в первой опытной группе на 0,6, во второй – 0,3 г/л, а в третьей группе была ниже на 1,3 г/л. Данные таблицы 5 показывают, что количество лейкоцитов в крови животных на 10 сутки исследований во всех опытных группах снизилось по сравнению с исходными данными на 0,3; 1,6; 1,9 х10-9 л соответственно. В контрольной группе наблюдали снижение содержания лейкоцитов на конец опыта до уровня 12,5 ±0,22 х10-9 л. На 20 сутки исследований количество лейкоцитов имело тенденцию в первой опытной группе к увеличению, и относительно данных контрольной группы было выше на 5,6 %. Во второй и третьей группе наблюдали снижение содержания лейкоцитов по сравнению с аналогами из контрольной группы на 2,7 и 4,1 х10-9 л соответственно. Что касается биохимических показателей сыворотки крови подопытных животных, после введения полисахаридного препарата «Гемив» уровень глюкозы во всех группах повышается относительно исходных показателей. На 20 сутки исследований содержание глюкозы по сравнению с исходными данными в первой опытной группе было выше на 1,8 ммоль/л, во второй и третьей – на 0,6 и 0,4 ммоль/л соответственно. Активность аланинаминотрансферазы (АлАт) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) в сыворотке крови белых крыс после введения полисахаридного препарата «Гемив» повысилась у животных опытных групп, тогда как в контрольной группе отмечалось их снижение. В опытной группе различия с соответствующими исходными значениями уровня активности трансаминаз были более выражены в первой опытной группе на 20 сутки исследований (р≤0,01). При этом в конце опыта уровень АлАТ и АсАТ в первой опытной группе был выше на 19,3 и 69,1 Ед/л (или на 31,2 и 37,4 %) соответственно, чем в контроле. 71 АлАт, Ед/л 100 Фон 80 60 10 сут 40 20 20 сут 0 Контрольная 1 опытная 2 опытная 3 опытная Группы Рисунок 2 - Показатель АлАт в сыворотке крови, Ед/л 300 АсАт, Ед/л 250 Фон 200 150 10 сут 100 50 20 сут 0 Контрольная 1 опытная 2 опытная 3 опытная Группы Рисунок 3 - Показатель АсАт в сыворотке крови, Ед/л Уровень щелочной фосфатазы во всех опытных группах повысился относительно исходных и контрольных показателей (р≤0,01). В конце опыта уровень щелочной фосфатазы в сыворотке крови первой опытной группы, где применяли максимально вводимую дозу полисахаридного препарата «Гемив», значительно был выше (р<0,001) по сравнению с аналогами из других групп лабораторных животных. 72 Кроме того, в первой опытной группе, отмечалось снижение уровня общего кальция по сравнению с исходными значениями, а уровень неорганического фосфора чуть выше исходных значений (р≤0,001). Относительно контрольных показателей уровень общего кальция в сыворотке крови подопытных животных первой, второй и третьей групп был ниже, а уровень неорганического фосфора выше на 0,8, 1,1 и 0,1 ммоль/л соответственно (р≤0,01). Содержание общего кальция в крови животных первой опытной группы было ниже, чем у контрольных на 3,7%, при достоверно большем содержании фосфора на 0,8 ммоль/л (р≤0,001). Продолжая анализ биохимических показателей сыворотки крови, можно отметить незначительные изменения количества общего белка в опытных группах (рисунок 4). Уровень общего белка на 20 сутки исследований в сыворотке крови животных во всех опытных группах был ниже относительно контрольной группы. Стоит отметить, что данный показатель был значительно ниже в третьей опытной Общий белок, г/л группе на 6,9%. (1гр - 4,6%; 2гр - 6,1%; 3гр - 6,9%). 70 68 66 64 62 60 58 56 Фон 10 сут 20 сут Контрольная 1 опытная 2 опытная 3 опытная Группы Рисунок 4 - Количество общего белка в сыворотке крови крыс Альбумин, % 73 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 Фон 10 сут 20 сут Контрольная 1 опытная 2 опытная 3 опытная Группы Рисунок 5 - Содержание альбуминов в сыворотке крови крыс Что, касается содержания альбуминов, на 20 сутки исследований у животных всех групп наблюдалась тенденция к их снижению. Рисунок 6 - Содержание α – глобулинов в сыворотке крови крыс Содержание α - глобулинов как у контрольной, так и в опытных группах крыс на 10 сутки исследований незначительно увеличилось с последующим снижением на 20 сутки у опытных животных. 74 35 β- глобулин % 30 Фон 25 20 10 сут 15 10 20 сут 5 0 Контрольная 1 опытная 2 опытная 3 опытная Группы Рисунок 7 - Содержание β- глобулинов в сыворотке крови крыс Концентрация β-глобулинов в сыворотке крови опытных групп лабораторных животных на 10 сутки исследований имела тенденцию к снижению, но на 20 сутки эксперимента показатели были достоверно выше относительно контрольных показателей (р≤0,01). Аналогичные изменения наблюдали и со стороны гамма-глобулинов. На последний день исследований концентрация гамма-глобулинов в первой и второй опытной группе была достоверно выше по сравнению с контрольной группой животных на 17,6 и 12,9 % соответственно (р≤0,01). Незначительное повышение концентрации общего белка происходило за счет глобулиновой, преимущественно β и γ-глобулиновой фракций. Рисунок 8 - Содержание γ- глобулинов в сыворотке крови крыс 75 Все изменения в морфо - биохимическом составе крови лабораторных животных после введения полисахаридного препарата «Гемив» находятся в пределах физиологической нормы и свидетельствуют об активизации обмена веществ в частности белкового и положительно сказываются на физиологическом состоянии белых крыс. 2.2.1.4 Изучение раздражающего и аллергизирующего действия полисахаридного препарата «Гемив» Определение местно – раздражающего и аллергизирующего действия полисахаридного препарата «Гемив» проводили на кроликах, соблюдая принцип аналогов по методу В.В. Гацура (1974), Б.И. Любимова, М.И. Миронова (1988). Для проведения данного опыта были выбраны здоровые кролики обоего пола, живой массой 2,0 – 2,5 кг. Местно-раздражающее действие препарата на слизистую оболочку глаза изучали путем однократного нанесения глазной пипеткой двух капель 0,5% - ой суспензии полисахаридного препарата «Гемив» под верхнее веко правого глаза, а под веко левого глаза (контрольный) вводили дистиллированную воду в таких же количествах, после чего в течение одной минуты слегка прижимали слёзноносовой канал. Установлено, что через 3-7 минут после нанесения полисахарида, отмечалось незначительное слезотечение, которое исчезало через 30-40 минут. Спустя 2, 4, 6 часов и через 24 часа после нанесения раствора полисахаридного препарата «Гемив», а в дальнейшем один раз в сутки в течение 20 дней проводили осмотр глаз, и никаких видимых изменений со стороны конъюнктивы и просвета зрачка не наблюдали. Слизистая оболочка глаза была розовой, без отеков и покраснения, умеренно увлажненной. Животным контрольной группы на конъюнктиву вводили дистиллированную воду в аналогичном объёме. Оценку аллергизирующего действия проводили методом эпикутанных аппликаций на кроликах обоего пола. Полисахаридный препарат «Гемив» 76 наносили в течение 14 суток на тщательно выстриженный участок кожи размером 2х2 см. Аппликацию делали в направлении от шеи к хвосту. Волосы были выстрижены по обе стороны на участке спины. Правый бок кролика служил для аппликации изучаемого полисахарида, левый бок служил контролем. Аппликацию полисахаридного препарата «Гемив» в 0,5% концентрации, проводили один раз в сутки, а на контрольный участок наносили физиологический раствор. После нанесения на кожу, исследуемого полисахарида и физиологического раствора, учитывали ректальную температуру тела. Действие препарата при аппликации на кожу оценивали по наличию гиперемии, болевой реакции, отека и утолщения кожной складки в течение первых 3 часов после нанесения средства на кожу, а затем 1 раз в сутки в течение 14 дней. Установлено, что однократная эпикутанная аппликация полисахаридного препарата «Гемив» на кожу не приводит к каким либо реактивным нарушениям. При визуальном осмотре, пальпации и измерении толщины кожной складки при помощи кутиметра, за всё время наблюдений, каких-либо структурных и функциональных нарушений кожи не отмечали. Температура тела подопытных животных, на протяжении всего опыта, оставалась в пределах физиологической нормы. Колебания температуры тела кроликов были в пределах физиологической нормы и не имели статистической достоверности. Таким образом, полисахаридный препарат «Гемив», не обладает раздражающими и аллергизирующими свойствами. 2.2.1.5 Изучение эмбриотоксических и тератогенных свойств Эмбриотоксичность полисахаридного препарата «Гемив» изучали на 20 самках белых крыс живой массой 190 – 210 гр., используя «Методическое пособие по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияния их на репродуктивную функцию» (1986). 77 Самок белых крыс в стадии эструса и проэструса, подсаживали к самцам в вечернее время и исследовали мазки, полученные из влагалищной слизи на утро следующего дня. Со дня обнаружения сперматозоидов в мазках начинали учет срока беременности. Полисахаридный препарат «Гемив» вводили крысам опытной группы внутримышечно в объеме 1 мл в виде 0,5 % раствора с 1-го по 19-е сутки беременности. Самки контрольной группы получали физиологический раствор в аналогичной дозе. На всем протяжении опыта, клиническое состояние крыс опытной группы не отличалось от состояния крыс контрольной группы. Животные были подвижны, охотно принимали корм и воду, изменения состояния волосяного покрова, видимых слизистых оболочек не наблюдали. Во всех группах летальных случаев животных не было. На 20 сутки беременности у части самок, определяли эмбриотоксическую активность после плановой эвтаназии. Для этого вскрывали брюшную полость, вырезали матку, переносили в чашку Петри с физиологическим раствором. Проводили вскрытие рогов матки, обследовали слизистую оболочку, подсчитывали количество живых плодов, предимплантационную гибель зигот, постимплантационную гибель эмбрионов, а также общую эмбриональную смертность. В яичниках так же подсчитывали количество мест имплантаций и резорбций в матке. В то же время, у извлеченных из матки живых плодов изучали возможное тератогенное действие полисахаридного препарата «Гемив», для этого плоды размещали в чашки Петри с физиологическим раствором и исследовали под бинокулярным микроскопом, затем плоды взвешивали, изучали наличие или отсутствие анатомических изменений, измеряли кранио-каудальные размеры (таблица 6). 78 Таблица 6 - Эмбриотоксическое действие полисахаридного препарата «Гемив» Показатель Группа Контрольная Опытная Количество желтых тел 11,0±0,08 11,3±0,10* Количество мест имплантации 9,5±0,05 9,7±0,05** Количество живых эмбрионов 8,3±0,22 9,3±0,32** Средняя длина плода, см 3,6±0,05 3,9±0,06*** Примечание:* - р≤0,05;** - р≤0,02;*** - р≤0,01 Из полученных результатов видно, что применение полисахаридного препарата «Гемив» беременным самкам в течение всего периода беременности не оказывает токсического действия на организм матери и плода. При визуальном осмотре, признаков уродства, отклонений от физиологических норм не обнаружили. Антропометрические данные плодов во всех группах не имели достоверных отличий. Вторую часть беременных самок крыс оставили до появления потомства. Для установления нарушений в постнатальном развитии проводили взвешивание крысят, учитывали длину туловища, сроки прозрения, опушения и отлипания ушей. Результаты проведенных исследований показали, что разницы в сроках беременности крыс опытных и контрольных групп не было. Беременность протекала без каких – либо нарушений, роды у всех лабораторных животных прошли естественно, осложнений не наблюдали (таблица 7). Таблица 7 - Влияние полисахаридного препарата «Гемив» воспроизводительную функцию белых крыс (n=10) Показатель Группа Контроль Количество животных, гол 5 Опытная 5 на 79 Продолжение таблицы 7 Продолжительность беременности, дней 21-22 21-22 44 48 - живых 44 48 - на 1 самку 8,8±0,65 9,6±0,45 -Ъпри рождении 5,3±0,05 5,4±0,04 - на 5 сутки 11,3±0,04 11,5±0,10 - на 15 сутки 24,5±0,21 25,4±0,34* - на 35 сутки 44,6±0,38 45,8±0,24** Срок полного опушения крысят, сутки 14,8±0,26 14,9±0,33 Сохранность к 35 дню после родов, % 100 100 Количество приплода, гол - всего в группах Средняя масса крысят, г Примечание:* - р≤0,05;** - р≤0,02 При анализе полученных данных было установлено, что многократное введение беременным самкам белых крыс полисахаридного препарата «Гемив» не оказывает отрицательного действия на репродуктивную функцию самок и на развитие плода. Исследования показали, что полисахаридный препарат «Гемив», наоборот положительно влияет на развитие, сохранность эмбрионов и на послеродовое развитие крысят. Это видно из количества приплода на одну самку, средней живой массы крысят и из других показателей. Тогда как в контрольной группе количество приплода на одну самку было 8,8, а в опытной 9,6. Средняя живая масса крысят при рождении существенно не отличалась в контрольной и опытной группе, но на 35 сутки разница в опытной группе составила 2,7 % по отношению к контролю. Потомство во всех группах развивалось одинаково, без каких-либо патологических изменений и сохранность составила 100%. Как показали результаты опытов изучаемый полисахаридный препарат «Гемив» не обладает эмбриотоксическим и тератогенным свойствами. 80 2.2.2 Эффективность применения полисахаридного препарата «Гемив» для повышения резистентности лабораторных животных 2.2.2.1 Влияние разных доз полисахаридного препарата «Гемив» белым крысам при экспериментальном иммунодефиците Перед проведением терапевтической производственных эффективности, нами оценено испытаний влияние по оценке различных доз полисахаридного препарата «Гемив» на неспецифическую резистентность организма белых крыс при искусственном создании иммунодефицитного состояния. Эксперименты проводили в условиях кафедры зоогигиены. В начале опыта, по принципу аналогов было сформировано 4 группы крыс по 10 в каждой. Три группы были опытными, и одна группа животных служила контролем. Животных взвешивали, определяли температуру тела. Все животные были клинически здоровы, и не имели физиологических отклонений. У животных опытных групп создавали иммунодефицитное состояние путем двукратного внутримышечного введения препарата циклофосфан из расчета 50 мг/кг живой массы. После последнего введения циклофосфана опытным группам внутримышечно вводили полисахаридный препарат «Гемив»: первой опытной группе – 126 мг/кг, второй – 63 мг/кг и третьей опытной группе из расчета 31,5 мг/кг. Перед началом опыта, а также через 3, 7, 14 суток у животных брали кровь для морфологического исследования; в течение опыта измеряли температуру тела, проводили взвешивание. После введения циклофосфана в опытных группах животных наблюдали снижение аппетита, активности, животные больше сидели в углу скученно с закрытыми глазами. Температура тела у опытных крыс на 3 сутки была на 2 – 3 градуса ниже по сравнению с контролем, и составляла 35 – 36 градусов. Восстановление температуры тела наблюдали в первой опытной группе на 5 81 стуки, во второй группе показатель был в нижних пределах физиологической нормы и восстановился только к концу опыта. В третьей опытной группе на 5 сутки обнаружили двух павших животных, а к 8 суткам была обнаружена еще одна павшая крыса. При вскрытии павших животных видимые патологоанатомические изменении не были обнаружены. У животных указанной (третьей) группы температура тела на всем протяжении опыта была ниже физиологической нормы и не восстанавливалась. В течение опыта, у лабораторных животных наблюдали изменения и в живой массе. Таблица 8 - Изменение живой массы крыс при иммунодефиците с применением разных доз полисахаридного препарата «Гемив» (n=10) Группа Срок Контрольная Первая Вторая Третья опытная опытная опытная (126 мг/кг) (63 мг/кг) (31,5 мг/кг) 47,5±0,38 47,2±0,41 46,9±0,62 47,0±0,30 3 48,3±0,34 46,3±0,50 45,4±0,38* 45,1±0,51** 7 52,7±0,61*** 48,3±0,60 45,3±0,40* * 40,7±0,61** 14 55,5±0,49*** 54,6±0,29*** 46,3±0,27 * 36,8±0,74** исследования, сут. Исходный показатель Примечание: * - p<0,05; ** - p<0,02; *** - p<0,001 * В первые дни, этот показатель имел тенденцию к незначительному снижению, по сравнению с исходными данными. В первой опытной группе, где применяли полисахаридный препарат «Гемив» из расчета 126 мг/кг, наблюдали достоверное увеличение живой массы крыс с 3-его дня эксперимента, тогда как в других опытных группах наблюдалась тенденция к снижению указанного показателя. Особенно это проявлялось в третьей опытной группе, где применяли полисахарид из расчета 31,5 мг/кг живой массы. Из полученных результатов следует отметить, что полисахаридный препарат «Гемив» при иммунодефиците наиболее эффективно влияет на 82 сохранность и развитие крыс в дозе 126 мг/кг. Установлено, что двукратное применение полисахарида в дозе 126 мг/кг оказывало выраженное положительное действие на фоне иммунодефицита. На протяжении опыта, у всех животных брали кровь для исследования. Полученные результаты представлены в таблице 9. Таблица 9 - Морфологические показатели крови крыс при применении разных доз полисахаридного препарата «Гемив» на фоне иммунодефицита (n=10) Группа Показатель Контрольная Первая Вторая Третья опытная группа опытная (126 мг/кг) (63 мг/кг) (31,5 мг/кг) Исходные данные Эритроциты, 10-12 л 7,4±0,04 7,6±0,07 7,5±0,11 7,5±0,06 Лейкоциты, х10-9 л 7,9±0,23 7,8±0,12 7,6±0,16 7,7±0,15 Гемоглобин, г/л 154,1±1,13 155,0±0,72 154,6±0,07 154,4±0,58 Лимфоциты, % 70,9±0,39 72,8±0,60 71,5±0,55 71,6±0,55 Нейтрофилы, % 25,0±0,36 23,0±0,62 23,1±0,53 24,5±0,54 Моноциты, % 2,7±0,07 3,0±0,08 3,6±0,12 2,8±0,09 Эозинофилы, % 1,4±0,09 1,2±0,10 1,8±0,10 1,1±0,12 Через 3 дня Эритроциты, х10-12 л 7,6±0,19 6,4±0,06*** 6,1±0,11*** 5,9±0,10*** Лейкоциты, х10-9л 8,2±0,10 3,6±0,11*** 3,7±0,05*** 3,6±0,12*** Гемоглобин, г/л 154,8±0,50 Лимфоциты, % 71,1±0,37 75,6±0,77** 72,6±0,51 65,6±0,54*** Нейтрофилы, % 24,9±0,45 21,2±0,74 22,0±0,57 26,1±0,56 Моноциты, % 2,8±0,09 2,1±0,14*** 3,8±0,13 8,0±0,17*** Эозинофилы, % 1,2±0,04 1,1±0,07*** 1,6±0,11 0,3±0,12 131,3±0,31*** 126,9±0,34*** 119,7±0,65*** 83 Продолжение таблицы 9 Эритроциты, х10-12 л 7,7±0,22 Через 7 дней 6,5±0,16*** Лейкоциты, х10-9 л 8,6±0,13* 4,5±0,05*** Гемоглобин, г/л 155,3±0,96 Лимфоциты, % 70,1±0,27 75,5±0,69** 73,4±0,55* 64,1±0,30*** Нейтрофилы, % 25,9±0,27 20,5±0,65** 21,3±0,56 25,4±0,52 Моноциты, % 2,8±0,12 2,9±0,18 3,9±0,12 9,7±0,28*** Эозинофилы, % 1,2±0,03* 1,1±0,04*** 1,4±0,13* 0,8±0,21 6,2±0,13*** 5,1±0,10*** 13,1±0,11*** 18,8±0,76*** Эритроциты, х10-12 л 5,9±0,18*** 4,0±0,11*** 8,7±0,10*** 12,3±0,31*** 140,7±0,41*** 123,6±0,58*** 104,0±0,89*** Через 14 дней 7,7±0,15 7,0±0,07*** Лейкоциты, х10-9 л 8,8±0,14*** Гемоглобин, г/л 155,6±0,93 142,4±0,29*** 128,3±0,85*** 109,6±1,93*** Лимфоциты, % 70,2±0,34 75,3±0,43*** 73,1±0,66 58,0±1,45*** Нейтрофилы, % 25,6±0,38 21,3±0,43* 22,0±0,60 30,4±0,98*** Моноциты, % 2,9±0,16 2,2±0,10*** 3,9±1,1 11,6±0,66*** Эозинофилы, % 1,3±0,05 1,2±0,05*** 1,0±0,20*** 0,0±0,00 7,9±0,10 Примечание: * - p<0,05; ** - p<0,02; *** - p<0,001 Из полученных результатов видно, что гематологические показатели, в частности концентрация гемоглобина, а так же процентное соотношение клеток белой крови отличались у опытных групп по сравнению с контролем. Полученные данные свидетельствуют о том, что после введения циклофосфана на 3 сутки у животных опытных групп было снижение количества эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина по сравнению с исходными данными. Так, в первой опытной группе количество лейкоцитов снизилось на 4,2х10 -9, во второй на 3,9, третьей опытной группе на 4,1х10-9. Наибольшее снижение эритроцитов и гемоглобина на 3 сутки опыта было в третьей опытной группе, где наблюдали снижение данного показателя в течение всего опыта. 84 В лейкоцитарной формуле наблюдалось незначительное уменьшение количества нейтрофилов и одновременное увеличение количества моноцитов. В третьей опытной группе наблюдали лимфопению. На 7 сутки эксперимента, количество эритроцитов во второй и в третьей опытной группе продолжало снижаться, соответственно и снижался уровень гемоглобина. Показатель лейкоцитов в этих группах резко увеличился по сравнению с исходными показателями, и составил во второй опытной группе 8,7±0,10 и в третьей 12,3±0,31х10-9, что выше на 1,1 и 4,6х10-9 соответственно по сравнению с исходными показателями (р≤0,001). В первой опытной группе к концу эксперимента, где применяли полисахаридный препарат «Гемив» из расчета 126 мг/кг, показатели восстанавливались и достигли исходного уровня. 2.2.2.2 Влияние разных доз полисахаридного препарата «Гемив» кроликам при экспериментальном иммунодефиците После проведения опыта на белых крысах, по определению оптимальной и более эффективной дозы полисахаридного препарата «Гемив», нами были проведены аналогичные исследования на кроликах. Для проведения опыта, по принципу аналогов было сформировано 4 группы по 6 кроликов в каждой группе. Одна группа была контрольной, и три опытные группы. До начала опытов, у опытных кроликов было искусственно смоделировано иммунодефицитное состояние путем двукратного внутримышечного введения препарата циклофосфан из расчета 50 мг/кг живой массы. Опытным животным, после введения циклофосфана, внутримышечно инъецировали полисахаридный препарат «Гемив» из расчета: первой опытной группе – 126 мг/кг, второй – 63 мг/кг и третьей опытной группе 31,5 мг/кг соответственно. На протяжении опыта за животными вели наблюдение, измеряли температуру, массу тела, брали кровь на исследование. 85 Иммунодефицитное состояние после введения циклофосфана у животных проявлялось тем, что у них пропадал аппетит, ухудшалось общее состояние, животные становились малоподвижными, в нижних углах конъюнктивы появлялось экссудативное вещество, температура тела снижалась в среднем на 3-4 0С. Общее состояние, температура тела быстрее восстанавливались в первой опытной группе животных. В остальных группах состояние кроликов восстанавливалось в более длительное временя. При исследовании оптимальной и более эффективной дозы полисахаридного препарата «Гемив» на кроликах, на протяжении эксперимента наблюдали за изменениями живой массы. Таблица 10 - Живая масса кроликов (кг) при иммунодефиците с применением разных доз полисахаридного препарата «Гемив» (n=6) Срок Группа исследования, Живая сут . Контрольная Опытная масса, кг Первая вторая третья 3,7±0,06 3,9±0,12 3,8±0,13 3,8±0,07 3 4,0±0,12* 3,8±0,14 3,5±0,06 3,6±0,17 7 4,4±0,13*** 4,2±0,10 3,9±0,16 3,5±0,18 14 4,9±0,16*** 4,7±0,15*** 4,1±0,12 3,3±0,12*** Исходные показатели Примечание: * - p<0,05; *** - p<0,001 Значительные изменения в живой массе кроликов наблюдали во второй и в третьей опытной группе. Животные указанных групп восстанавливали свое физиологическое состояние более длительное время по сравнению с первой опытной группой. Действие циклофосфана хуже переносили кролики третьей группы. Следует отметить, что масса животных первой опытной группы незначительно отличалась от показателей контрольной группы. 86 Таблица 11 - Морфологические показатели крови кроликов при применении разных доз полисахаридного препарата «Гемив» на фоне иммунодефицита(n=6) Группа Показатель Контрольная Первая Вторая Третья группа опытная опытная опытная (31,5 (126 мг/кг) (63 мг/кг) мг/кг) Исходные данные Эритроциты, х10-12 л 6,4±0,12 6,3±0,15 6,6±0,11 6,4±0,17 Лейкоциты, х10-9 л 6,5±0,18 6,6±0,17 6,4±0,14 6,5±0,11 Гемоглобин, г/л 111,1±1,17 111,7±1,56 112,5±0,93 110,6±0,86 Лимфоциты, % 54,6±0,33 55,9±0,47 55,5±0,44 56,0±0,52 Нейтрофилы, % 42,1±0,37 41,0±0,47 41,3±0,48 41,0±0,41 Моноциты, % 1,8±0,12 1,6±0,10 1,6±0,09 1,7±0,15 Эозинофилы, % 1,5±0,13 1,5±0,11 1,6±0,08 1,3±0,07 Через 3 дня Эритроциты, х10-12 л 6,7±0,14 6,0±0,11 5,9±0,26* 5,9±0,20 Лейкоциты, х10-9 л 6,7±0,22 3,9±0,14*** 3,8±0,17*** 3,6±0,15*** Гемоглобин, г/л 112,9±0,77 110,6±1,00 109,3±1,03* 105,5±0,86*** Лимфоциты, % 54,0±0,39 54,3±0,35* 51,1±0,72*** 50,2±0,40*** Нейтрофилы, % 42,4±0,24 42,3±0,36 45,7±0,07*** 47,2±0,42*** Моноциты, % 2,1±0,13 2,2±0,16* 1,8±0,10 1,5±0,11 Эозинофилы, % 1,7±0,08 1,2±0,06 1,4±0,07 1,1±0,10* Через 7 дней Эритроциты, х10-12 л 6,8±0,12* 6,2±0,08 6,1±0,11** 6,1±0,15 Лейкоциты, х10-9 л 6,9±0,14 5,0±0,16*** 4,2±0,09*** 4,1±0,14*** 87 Продолжение таблицы 11 Гемоглобин, г/л 113,6±0,50 110,9±0,77 109,6±0,72* 108,3±0,77 Лимфоциты, % 52,6±0,24*** 55,8±0,56 54,2±0,51 49,6±0,48*** Нейтрофилы, % 43,2±0,27* 40,5±0,58 42,0±0,45 47,8±0,42*** Моноциты, % 2,2±0,10* 2,1±0,11* 2,3±0,11*** 1,5±0,11 Эозинофилы, % 2,0±0,11* 1,6±0,12 1,5±0,13 1,1±0,10* Через 14 дней Эритроциты, х10-12 л 6,9±0,20 6,4±0,13 6,3±0,12 6,1±0,15 Лейкоциты, х10-9 л 7,0±0,09* 6,9±0,16 6,1±0,16 4,1±0,14*** Гемоглобин, г/л 116,7±0,72*** 114,7±0,89 111,6±0,96 109,9±0,58 Лимфоциты, % 53,8±0,50 54,2±0,40* 54,7±0,42 54,0±0,58* Нейтрофилы, % 41,5±0,55 41,4±0,34 41,6±0,46 43,1±0,47*** Моноциты, % 2,5±0,13*** 2,4±0,13*** 2,1±0,07*** 1,6±0,14 Эозинофилы, % 2,2±0,13** 2,0±0,08*** 1,6±0,10 1,3±0,08 Примечание: * - p<0,05; ** - p<0,02; *** - p<0,001 Как видно из таблицы 11 морфологические показатели крови кроликов, выраженно изменились в опытных группах, где моделировали иммунодефицитное состояние с последующим применением препарата. В этих группах, на 3 сутки опыта, наблюдали резкое снижение лейкоцитов, в то же время увеличение нейтрофилов. Значительное изменения наблюдали во второй, и в третьей опытных группах, где иммунодефицитным кроликам применяли полисахарид в дозах 63 и 31,5 мг/кг соответственно. Данные показатели во второй опытной группе к концу опыта достигли пределов физиологической нормы. Показатели крови животных третьей опытной группы до конца опыта были ниже физиологической нормы. Лейкоциты в данной группе были ниже на 88 2,4х1012, лимфоциты на 2 %, а нейтрофилы были выше на 2,1 % по сравнению с исходными данными. У животных первой опытной группы, которым вводили полисахарид в максимально вводимой дозе (126 мг/кг) резких изменений или отклонений в живой массе и морфологических показателях не наблюдали. Проведенными исследованиями установлено, что оптимальной и эффективной дозой полисахаридного препарата «Гемив» является доза 126 мг/кг живой массы тела. Применение полисахаридного препарата «Гемив» в указанной дозе более выраженно стимулирует прирост массы тела и положительно влияет на весь организм, и состав крови в частности при иммунодефицитном состоянии организма. По результатам ранее проведенных исследований для дальнейшего изучения была отобрана доза «Гемив» - 126 мг/кг живой массы. Применение данного препарата в ветеринарии для стимуляции иммунологического процесса не изучена. В связи с этим целью дальнейших исследований была разработка режима их применения препарата. Для этого использовали 40 белых крыс, разделенных на 4 группы по 10 животных в каждой. У крыс создавали иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана двукратно ежедневно в дозе 50 мг/кг массы тела. Лабораторным животным первой группы за три дня до введения иммунодепрессанта и через день после последнего введения инъецировали «Гемив», а второй группе – через 3 дня после введения циклофосфана двукратно. Третья группа крыс не получала полисахарида. Четвертая группа – интактные животные. Клиническим исследованием с ежедневной термометрией крыс 1 группы установлено, что применение вышеуказанного препарата на фоне иммунодефицита не оказывает отрицательного влияния на общее состояние животных. Во второй группе, после применения циклофосфана, у животных проявлялись незначительные угнетения общего состояния, потребления корма и 89 воды. Применение полисахаридного препарата «Гемив» способствовало восстановлению физиологических показателей, и к концу опыта животные не отличались от интактных животных. Третья группа животных, которая получала только иммунодепрессант, была с явно выраженными признаками иммунодефицита. Животные плохо потребляли корм и воду, были менее подвижны, скученно сидели с закрытыми глазами. К концу опыта, в данной группе пало 70 % животных. Животные интактной группы, до конца экспериментов были без каких-либо патологических изменений в поведении и в общем состоянии. Перед началом эксперимента и спустя 7, 14, 21 день, у животных брали кровь для исследования. Полученные данные позволяют констатировать, что разный режим применения полисахаридного препарата «Гемив» имеет отличительные результаты, которые представлены в таблице 12. Выраженные изменения со стороны общего белка и его фракции были в третьей опытной группе, где крысы не получали полисахаридный препарат «Гемив». В данной группе отмечали увеличение α-глобулинов и одновременное уменьшение γ-глобулинов. Так, к концу опыта содержание α-глобулинов в сыворотке крови животных третьей группы было выше на 14,8%, а содержание γглобулинов на 7,9% ниже исходных данных. В тоже время, в данной группе было наибольшее количество Т-лимфоцитов на 7 день исследования по сравнению с исходными данными на 17,9 %. В первой опытной группе, где иммунодефицит создавали на фоне применения полисахаридного препарата «Гемив» изменений не наблюдали. Процентное соотношение всех элементов фракций белка, на всем протяжении эксперимента резко не отличались от исходных данных и были в пределах физиологической нормы. Вторая группа животных, которая получала полисахарид после применения циклофосфана, имела отличительные результаты по сравнению с первой опытной группой. Так, на 7 день эксперимента, уровень α-глобулинов был на 5,8 % выше и уровень γ-глобулинов на 2,2 % ниже по сравнению с исходными данными. 90 Таблица 12 - Влияние разных режимов применения полисахаридного препарата «Гемив» при моделированном иммунодефиците на показатели крови крыс (n=10) Показатель Ед. изм. 1 2 Общий белок, Альбумины α-глобулины β-глобулины γ-глобулины Т-лимфоцит В-лимфоцит г% % % % % % % Общий белок Альбумины α-глобулины β-глобулины γ-глобулины Т-лимфоцит В-лимфоцит г% % % % % % % Общий белок Альбумины α-глобулины β-глобулины г% % % % Группа Контрольная I опытная 3 4 Исходные данные 7,4±0,12 7,3±0,18 20,1±0,45 19,6±0,49 26,4±0,41 26,7±0,39 26,5±0,21 26,4±0,38 27,0±0,46 27,3±0,99 35,9±0,29 37,3±0,39 31,5±0,39 31,5±0,60 На 7 день опыта 8,4±0,19 7,0±0,17*** 25,0±0,37 23,7±0,44* 40,3±0,43 27,0±0,72*** 15,2±0,22 23,1±0,84*** 19,5±0,35 26,2±0,39*** 53,8±1,85 46,2±0,72*** 35,9±0,98 36,5±0,97 На 14 день опыта 5,3±0,07 5,2±0,07 21,2±0,63 21,4±0,33 41,2±0,80 24,9±0,50*** 19,0±0,66 28,4±0,28*** II опытная 5 Интактная 6 7,3±0,11 17,9±0,19 28,2±0,28 27,5±0,24 26,4±0,28 36,6±0,34 29,0±0,51 7,4±0,18 18,5±0,37 27,5±0,33 26,8±0,22 27,2±0,48 30,9±0,46 26,8±0,31 6,5±0,10*** 16,7±0,31*** 32,8±0,64*** 25,9±0,23*** 24,6±0,82*** 50,1±1,57 40,7±0,87*** 7,2±0,18 19,2±0,53 27,3±0,31 26,2±0,24 27,3±0,43 36,8±1,33 26,2±0,93 5,8±0,15*** 15,3±0,22*** 32,6±0,41*** 30,0±0,40*** 7,4±0,28 17,4±0,92 28,4±0,52 28,2±0,70 91 1 γ-глобулины Т-лимфоцит В-лимфоцит 2 % % % Общий белок Альбумины α-глобулины β-глобулины γ-глобулины Т-лимфоцит В-лимфоцит г% % % % % % % Примечание: * - p<0,05; *** - p<0,001 3 4 18,6±0,42 25,3±0,49*** 37,0±1,61 30,4±0,71*** 27,7±1,17 17,3±0,90*** На 21 день опыта 7,3±0,10 7,8±0,10*** 20,7±1,15 24,1±0,34** 41,2±0,66 24,9±0,94*** 19,0±0,46 24,4±0,21*** 19,1±0,62 26,6±0,77*** 45,4±0,41 39,3±0,76*** 26,3±0,45 21,5±0,38*** Продолжение таблицы 12 5 6 22,1±0,43*** 26,0±0,66 34,6±1,37 29,4±0,87 18,2±0,62*** 19,3±0,74 7,6±0,08* 17,9±0,67* 30,7±0,27*** 26,1±0,19*** 25,3±0,50*** 46,5±0,37 26,5±0,50 7,4±0,05 22,5±0,57 28,0±0,51 23,1±0,67 26,4±0,52 30,5±0,40 16,6±0,39 92 Относительное количество Т и В лимфоцитов, на этот срок исследования были на максимальном уровне, по сравнению с другими сроками и составили 50,1 и 40,7 % соответственно. К концу опыта эти показатели постепенно восстанавливались и достигали исходных показателей. У интактных животных на всем протяжении опыта резких изменений в показателях сыворотки крови не было, уровень общего белка и его фракций были в пределах физиологической нормы. Полученные результаты свидетельствуют о том, что полисахаридный препарат «Гемив» эффективнее действует на фоне профилактического применения, чем при применении с лечебной целью. Профилактическое применение полисахаридного препарата «Гемив» способствует стабильному течению моделированного иммунодефицита, без ярко выраженных изменений в общем состоянии организма и показателей крови. 93 2.2.3 Сравнительная иммуностимулирующая эффективность полисахаридного препарата «Гемив» и «Циклоферон» 2.2.3.1 Результаты клинико-гематологических исследований После окончания опыта по разработке режима применения полисахаридного препарата «Гемив», был проведен следующий эксперимент на кроликах, где сравнивали иммуностимулирующую эффективность препарата «Циклоферон» и полисахаридного препарата «Гемив» при иммунодефиците. По принципу аналогов было сформировано четыре группы по шесть животных в каждой. Первая группа служила контролем, животным данной группы двукратно был применен только циклофосфан из расчета 50 мг/кг массы тела. Кроликам второй опытной группы, внутримышечно вводили препарат циклоферон двукратно в дозе 125 мг/гол с интервалом в три дня. Третья группа животных, также двукратно получала полисахаридный препарат «Гемив» из расчета 126 мг/кг живой массы. После первого ведения препаратов, животным данных групп вводили двукратно иммунодепрессант – циклофосфан, с интервалом 24 часа. Животные четвертой группы оставались интактными. На всем протяжении эксперимента животные находились под наблюдением, учитывали общее их состояние, потребление корма и воды. Кролики опытных групп, до введения циклофосфана по общему состоянию не отличались от интактных животных. После введения циклофосфана, в третьей опытной группе отмечали снижение аппетита, вялость, животные плохо реагировали на внешние раздражители, кролики больше сидели в скученном состоянии с закрытыми глазами. В группах, где применяли циклоферон и полисахаридный препарат «Гемив» изменения в общем состоянии отсутствовали. У животных наблюдалась незначительная реакция, которая исчезала через 30-40 минут. У всех животных до начала и на протяжении опыта брали кровь для исследований. Полученные результаты представлены в таблице 13. 94 Таблица 13 - Морфологические показатели крови кроликов при применении полисахаридного препарата «Гемив» на фоне иммунодефицита (n=6) Группа Показатель Контрольная Первая Вторая опытная опытная Интактная Фон Гемоглобин, г/л 107,3±1,32 109,3±1,76 109,0±1,23 111,0±2,24 Эритроциты, 10-12/ 6,2±0,19 6,3±0,11 6,3±0,17 6,5±0,31 л 10-9/ л Лейкоциты, 6,6±0,26 6,6±0,25 6,71±0,21 6,9±0,20 Лимфоциты, % 51,9±0,97 50,8±1,28 51,0±0,63 50,5±0,85 Сегментоядерные, 39,8±1,43 41,4±0,84 41,3±0,73 41,7±0,69 % Палочкоядерные, 3,8±0,34 3,7±0,37 3,8±0,34 3,7±0,34 % Моноциты, % 3,2±0,44 2,5±0,47 2,7±0,37 2,6±0,37 Эозинофилы, % 1,3±0,23 1,6±0,26 1,2±0,18 1,5±0,24 После применения препаратов Гемоглобин, г/л 110,5±1,01 114,0±1,41 111,6±1,32 115,3±1,85* Эритроциты, 10-12/ 6,4±0,05 6,6±0,13 6,5±0,05 6,7±0,19 л 10-9/ л Лейкоциты, 6,6±0,03 6,3±0,03*** 6,4±0,02*** 6,9±0,14 Лимфоциты, % 51,2±0,66 50,0±0,63 50,7±0,92 51,1±0,66 Сегментоядерные, 37,6±0,78 39,2±0,66 36,2±0,64 41,0±0,84** % Палочкоядерные, 8,5±0,47 8,3±0,63 10,2±0,52* 3,6±0,37** % Моноциты, % 1,4±0,06 1,2±0,10 1,4±0,16 2,8±0,34** Эозинофилы, % 1,3±0,23 1,3±0,23 1,5±0,24 1,5±0,24 После введения циклофосфана Гемоглобин, г/л 99,6±1,38 107,5±0,84*** 106,2±0,77** 112,2±1,48** 95 Продолжение таблицы 13 Эритроциты, 10-12/ 5,8±0,13 6,2±0,11* 6,1±0,08 6,5±0,13** л 10-9/ л Лейкоциты, 1,9±0,05 3,2±0,03*** 3,0±0,07*** 6,6±0,12** Лимфоциты, % 52,8±0,52 54,1±0,66* 52,1±0,84 50,3±0,84 Сегментоядерные, 34,6±0,78 33,2±0,66 35,0±0,63 42,5±0,47** % Палочкоядерные, 8,5±0,47 9,0±0,63 10,2±0,52 4,5±0,47** % Моноциты, % 1,3±0,07 1,0±0,00 1,0±0,00 1,0±0,00 Эозинофилы, % 2,8±0,34 2,7±0,37 1,7±0,24 1,7±0,23* Через 7 суток после введения препаратов Гемоглобин, г/л 98,6±2,27 105,0±0,63* Эритроциты, 10-12/ 5,6±0,02 6,0±0,02*** 6,2±0,02*** 6,7±0,13*** л 10-9/ л Лейкоциты, 3,2±0,06 6,0±0,06*** 6,1±0,04*** 6,8±0,09*** Лимфоциты, % 54,2±0,47 53,5±0,63*** 56,1±0,63*** 53,3±0,61*** Сегментоядерные, 36,3±1,08 38,0±0,62*** 33,6±0,63 40,0±0,63*** % Палочкоядерные, 6,4±0,74 6,2±0,34* 7,7±0,34*** 4,2±0,47 % Моноциты, % 1,5±0,13 1,0±0,00 1,0±0,00 1,0±0,00 Эозинофилы, % 1,6±0,41 1,3±0,23 1,6±0,23 1,5±0,24 107,7±1,51*** 114,6±1,74*** Через 14 суток после введения препаратов Гемоглобин, г/л 102,0±2,83 110,1±1,78* 112,6±0,97*** 110,5±1,22* Эритроциты, 10-12/ 6,0±0,03 6,4±0,11*** 6,5±0,02*** 6,4±0,17* л 10-9/ л Лейкоциты, 4,9±0,12 6,4±0,02*** 6,6±0,12*** 6,9±0,07*** Лимфоциты, % 52,5±0,71 53,0±0,63*** 54,5±0,47*** 53,0±0,63*** Сегментоядерные, 38,4±1,42 37,2±0,63 34,7±0,66 40,8±0,47*** % Палочкоядерные, 4,7±0,71 6,3±0,47*** 7,3±0,61*** 4,0±0,40 % 96 Продолжение таблицы 13 Моноциты, % 1,6±0,12 1,0±0,00 1,0±0,00 1,0±0,00 Эозинофилы, % 2,8±0,34 2,5±0,37 2,5±0,24 1,2±0,18*** Примечание: * - р≤0,05; ** - р≤0,02; *** р≤0,01; р≤0,001 В опытных группах, после введения циклофосфана наблюдали снижение количества эритроцитов и соответственно уровня гемоглобина. В контрольной группе, после введения циклофосфана, уровень гемоглобина был ниже на 7,7 г/л по сравнению с исходными показателями, а количество эритроцитов снизилось на 0,4х10-12/л соответственно. В группах, где применяли препарат циклоферон и полисахаридный препарат «Гемив», указанные показатели незначительно снизились по сравнению с исходными данными, но к концу опыта уровень гемоглобина и количество эритроцитов восстановились и были в пределах физиологической нормы. У животных всех опытных групп, общее количество лейкоцитов снизилось после применения циклофосфана, и составило: в контрольной группе 1,9±0,05х10-9/л, а в первой опытной - 3,2±0,03х10-9/л и во второй опытной группе – 3,0±0,07х10-9/л, что на 4,7; 3,4 и 3,7х10-9/л соответственно ниже по сравнению с исходными показателями. Спустя 7 суток после применения циклоферона и полисахаридного препарата «Гемив» в опытных группах количество лейкоцитов восстановилось и оставалось на этом уровне до конца исследования. В контрольной группе восстановление этого показателя произошло только на 14 день с начала опыта. К концу эксперимента, в лейкоцитарной формуле у животных первой и второй опытной группы отмечалось достоверное увеличение эозинофилов. При подсчете палочкоядерных нейтрофилов установлено, что в опытных группах на 14 сутки после введения препаратов исследуемый показатель превышал исходные значения. Процентное соотношение остальных показателей лейкоцитарной формулы было без особых изменений и различия между группами не установлены. 97 2.2.3.2 Результаты биохимических исследований На фоне применения полисахаридного препарата «Гемив» и циклоферона были изучены биохимические показатели сыворотки крови кроликов. Были установлены достоверные изменения содержания общего белка и его фракций в опытных группах. Однако у кроликов первой и второй опытной группы, которым применяли препарат циклоферон и полисахаридный препарат «Гемив» отмечали колебания этих показателей (Таблица 14). Таблица 14 - Биохимические показатели крови кроликов при сравнительной оценке иммуностимулятора циклоферон и полисахаридного препарата «Гемив» на фоне иммунодефицита (n=6) Группа Показатель Контрольная Первая Вторая опытная опытная Интактная Исходные данные Общий белок,г/л 6,6±0,20 6,7±0,15 6,7±0,27 6,7±0,22 Альбумин, % 65,2±0,17 65,5±0,30 66,1±0,17 65,9±0,73 α-глобулины, % 12,8±0,17 12,4±0,32 12,0±0,36 11,9±0,59 β-глобулины, % 10,0±0,25 9,9±0,25 10,1±0,27 10,5±0,55 γ-глобулины, % 12,0±0,19 12,2±0,26 11,8±0,12 11,7±0,65 АлАт, Ед/л 27,0±0,44 25,3±0,96 26,6±0,45 28,4±0,49 АсАт, Ед/л 27,2±0,70 27,8±0,48 26,4±0,27 27,2±0,36 Глюкоза, ммоль/л 7,4±0,22 6,1±0,08 6,2±0,14 6,7±0,11 Общ. кальций,моль/л 3,3±0,11 3,2±0,18 3,2±0,07 3,5±0,27 Неорг.Фосфор,моль/л 3,2±0,25 3,1±0,10 3,1±0,22 3,2±0,12 8,6±0,29 8,1±0,08 После введения препаратов Общий белок,г/л 7,9±0,33 8,3±0,01 98 Продолжение таблицы 14 Альбумин, % 64,4±0,47 65,6±0,48 64,8±0,27 67,1±0,17*** α-глобулины, % 11,0±0,42 10,4±0,20 11,9±0,27 12,2±0,21* β-глобулины, % 11,1±0,24 10,5±0,23 9,5±0,24 10,9±0,23* γ-глобулины, % 13,5±0,33 13,7±0,16 13,8±0,28 9,8±0,24*** АлАт, Ед/л 29,2±0,50 28,5±0,08 30,0±0,35 27,8±0,67 АсАт, Ед/л 21,5±0,66 16,4±0,09*** 11,2±0,29*** 27,1±0,41*** Глюкоза, ммоль/л 7,2±0,22 6,2±0,23** 7,4±0,20 7,1±0,09 Общ. кальций,моль/л 3,2±0,19 3,2±0,01 2,8±0,28 3,1±0,08 Неорг. фосфор,оль/л 2,7±0,17 1,4±0,14*** 1,5±0,12*** 2,7±0,19 После введения циклофосфана Общий белок,г/л 6,1±0,44 7,7±0,02*** 8,7±0,04*** 8,1±0,09*** Альбумин, % 65,5±0,71 58,0±0,34* 57,9±0,26* 65,3±0,49*** α-глобулины, % 9,1±0,15 9,1±0,23 9,6±0,22* 12,0±0,19*** β-глобулины, % 9,2±0,21 10,9±0,26 10,2±0,21*** 11,7±0,27*** γ-глобулины, % 16,2±0,89 22,0±0,26*** 22,3±0,33*** 11,0±0,23*** АлАт, Ед/л 8,9±0,38 21,5±0,44*** 10,1±0,17** 28,3±0,27*** АсАт, Ед/л 10,9±0,47 10,8±0,08 12,6±0,20*** 26,6±0,31*** Глюкоза, ммоль/л 4,7±0,30 2,0±0,06*** 6,4±0,23*** 7,2±0,19*** Общ. кальций,моль/л 3,2±0,23 3,5±0,33 3,5±0,16 3,3±0,13 Неорг.Фосфор,моль/л 1,2±0,05 1,8±0,16*** 1,5±0,25 2,9±0,12*** Через 7 суток после введения препаратов Общий белок,г/л 7,8±0,47 8,1±0,10 8,3±0,15 8,3±0,20 Альбумин, % 51,0±1,20 54,2±0,76* 60,7±0,34*** 65,6±0,29*** α-глобулины, % 27,2±1,68 11,9±0,34*** 10,0±0,72*** 11,9±0,26*** 99 Продолжение таблицы 14 β-глобулины, % 9,8±0,38 11,7±0,79 10,9±0,75 12,1±0,17*** γ-глобулины, % 12,0±0,25 22,2±1,05*** 18,4±0,24*** 10,4±0,27*** АлАт, Ед/л 13,8±0,48 14,5±0,16 15,6±0,24*** 27,0±0,37*** АсАт, Ед/л 5,7±0,55 7,2±0,14* 7,0±0,14* 26,8±0,31*** Глюкоза, ммоль/л 2,3±0,12 3,3±0,04*** 3,9±0,10*** 8,0±0,11*** Общ. кальций,моль/л 3,1±0,09 3,6±0,13** 3,6±0,18* 3,1±0,11 Неорг.Фосфор,моль/л 1,4±0,07 1,7±0,19 1,6±0,16 3,0±0,14*** Через 14 суток после введения препаратов Общий белок,г/л 7,0±0,17 7,5±0,19 7,2±0,14 8,4±0,12*** Альбумин, % 50,1±0,42 59,9±0,81*** 60,5±0,19*** 66,2±0,30*** α-глобулины, % 34,1±1,77 10,7±0,34*** 13,0±0,26*** 12,2±0,14*** β-глобулины, % 7,0±0,78 12,9±0,21*** 8,4±0,17 11,5±0,32*** γ-глобулины, % 8,8±1,41 16,5±0,72*** 18,1±0,24*** 10,1±0,18 АлАт, Ед/л 9,1±0,87 15,5±0,20*** 11,2±0,17* 26,9±0,30*** АсАт, Ед/л 5,2±0,41 6,4±0,12** 5,7±0,17 26,4±0,27*** Глюкоза, ммоль/л 5,9±0,58 2,3±0,04*** 5,5±0,28 8,0±0,09*** Общ. кальций,моль/л 1,9±0,26 2,9±0,12*** 2,6±0,14* 3,3±0,14*** Неорг.фосфор,моль/л 1,1±0,14 2,5±0,14*** 1,3±0,18 3,1±0,12*** Примечание: * - р≤0,05; ** - р≤0,02; *** р≤0,01; р≤0,001 При исследованиях сыворотки крови опытных животных было установлено, что введение циклофосфана так же отрицательно действует и на биохимические показатели сыворотки крови. До введения циклофосфана, все показатели во всех группах были без выраженных изменений. В первой и во второй опытной группе, после применения препаратов наблюдали увеличение общего белка, по сравнению с исходными показателями на 1,6 г/л и 1,9 г/л 100 соответственно. В контрольной группе этот показатель был ниже по сравнению с опытными группами во всех сроках исследования. После введения препаратов, у животных опытных групп отмечалось достоверное увеличение показателя γ-глобулинов и уменьшение содержания АсАт в сыворотке крови. Применение циклофосфана способствовало снижению альбуминов в сыворотке крови, но к концу эксперимента в первой и во второй опытной группе указанный показатель восстановился и был в пределах физиологической нормы. Наиболее выраженные изменения биохимических показателей были в контрольной группе, где применяли только циклофосфан. Процентное соотношение α-глобулинов достоверно увеличивалось, а содержание γглобулинов достоверно снижалось после введения циклофосфана и к концу опыта содержание α-глобулинов было выше на 21,3%, а γ-глобулинов ниже на 3,2% соответственно. Показатель уровня аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы к концу эксперимента также был значительно ниже по сравнению с исходными показателями. В группах, где применяли препарат циклоферон и полисахаридный препарат «Гемив» биохимические показатели сыворотки крови резко не отличались между собой и находились в пределах физиологической нормы. 2.2.3.3 Результаты иммунологических исследований На фоне применения полисахаридного препарата «Гемив» и циклоферона были изучены иммунологические показатели крови. Полученные результаты (рисунок 8 и 9) свидетельствуют о том, что после применения препаратов в первой и во второй опытной группе количество Тлимфоцитов снизилось по сравнению с исходными цифрами (р≤0,001). Введение циклофосфана так же привело к снижению уровня Т-лимфоцитов во всех опытных группах. 101 60 фон Т-лимфоцит, % 50 на 3 сутки после введения препаратов после введения циклофосфана 40 30 20 10 0 1 опытная 2 опытная Группа на 7 сутки после введения препаратов на 14 сутки после введения препаратов Рисунок 9 - Количество Т-лимфоцитов в крови кроликов К концу опыта указанный показатель достоверно восстанавливался в первой и во второй опытной группе по сравнению с контрольной группой и был В-лимфоцит, % выше на 11,3% и на 12,5% соответственно. 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 фон на 3 сутки после введения препаратов после введения циклофосфана 1 опытная 2 опытная Группа на 7 сутки после введения препаратов на 14 сутки после введения препаратов Рисунок 10 – Количество В-лимфоцитов в крови кроликов Количество В-лимфоцитов имело тенденцию к значительному снижению после применения циклофосфана в опытных группах. В контрольной группе количество В-лимфоцитов было относительно ниже показателей опытных групп. После введения циклоферона и полисахаридного препарата «Гемив» наблюдали достоверное увеличение исследуемого показателя в первой и во второй опытной 102 группе. Наибольшее количество В-лимфоцитов к концу опыта было в группе, в которой применяли полисахаридный препарат «Гемив» и оно составило 18,3%, что на 10,3% больше по сравнению с показателями контрольной группы. Полученные результаты свидетельствуют о том, что препарат циклоферон и полисахаридный препарат «Гемив» обладают иммуностимулирующими свойствами. 103 2.2.4 Производственные исследования полисахаридного препарата «Гемив» 2.2.4.1 Условия содержания и кормления кроликов в КФХ «МИАКРОКАРАТАУ Фермерское хозяйство» КФХ «МИАКРО-КАРАТАУ Фермерское хозяйство» является одним из ведущих кролиководческих хозяйств Республики Татарстан. Территория фермы занимает площадь в 1 га. На этой площади, кроме миниферм расположенных в 4 ряда, находятся административное здание. В имеется: кухня, офис с залом заседания, лаборатория. Кроме административного здания на территории расположен полумеханизированный убойный цех с холодильным отделением. Имеется небольшая площадь для выращивания многолетних трав. Хозяйство занимается выращиванием и разведением кроликов породы советская шиншилла. акселерационная На технология ферме «МИАКРО-КАРАТАУ» кролиководства. Кролики представлена содержатся в минифермах с круглогодичным циклом производства. Кролики содержатся в минифермах конструкции И.Н. Михайлова. Метод разведения кроликов по Михайлову набирает обороты и становится массовым способом эффективного производства мяса и меха кролика. Содержание в минифермах – наружное, в 2 типах конструкции. Юрта – 2 отделения содержания - один для сукрольной крольчихи с отсеком для окрола и один для молодняка или самца, который имеет тоже вход в отсек, но он закрыт. Кварта – по размерам та же миниферма, но имеет уже 4 отделения и используется для доращивания молодняка. Осеменение на ферме проводится естественным путем, т.е. для осеменения используются племенные самцы. При достижении молодняка 4 месячного возраста их взвешивают, если же «невеста» соответствует весу самца или чуть отличается, то проводят осеменение. Если же вес не соответствует, отправляют 104 на доращивание. Осеменение считается проведенным, если самец после 2 садок падает с самки с характерным писком. Рисунок 11 - Миниферма конструкции И.Н. Михайлова Окролы на ферме круглогодичные. Сукрольность крольчих составляет 2530 дней. При достижении 21 дня в отсек для окрола устанавливают гнездо для окрола вместе с сеном, куда самка выщипывает пух с подгрудки, тем самым подготавливается к окролу. Окрол обычно происходит на 30-й день. В гнезде обычно рождаются 8-10 крольчат. Если, например при окроле у одной самки родилось 12, а другой 6, делают правку гнезда, то есть перекидывают крольчат из гнезда с большим количеством в гнездо с малым количеством. 105 Подсосный период в этой технологии кролиководства отличается тем, что вместо 60 дней, как в ретро кролиководстве, в акселерационном он длится от 60 до 80 дней. При отъеме молодняк сразу же разделяется на разные физиологические группы. В этот период молодняк имеет вес от 1,6 – 2,0 кг, среднесуточный прирост у кроликов на 20 день жизни составляет 200-240 гр и при жизни увеличивается в 4 раза. Доращивание и откормочный период на ферме длится до достижения кроликов 4 месячного возраста, обычно это составляет 30 – 60 дней. Кролики при достижении этого возраста имеют живую массу от 4 до 6 кг. Жизненный цикл при обычном кролиководстве составляет 7-8 месяцев и кролики имеют такой же вес. Это достигается неограниченным кормлением и поением. В зимнее время используется подогрев воды и гнездовий. После того как кролики достигли 4 – 6 кг, при наличии заказов их забивают по ГОСТ 7686-88, при этом убойный выход составляет 50-60 %. Если нет заказов идет продажа в живом весе. На КФХ кормление кроликов проводится сутки через 3, так как в системе питания предусмотрено кормление гранулированным комбикормом. Гранулированные комбикорма имеют свою рецептуру, в состав которых включают смеси различных кормов в измельченном виде, содержащий высокий процент протеина, клетчатки, минеральных и витаминных добавок. Состав и питательность комбикорма представлены в таблице 15. Таблица 15 – Состав и питательность комбикорма концентрата № ПЗК-901 для откармливания молодняка кроликов Показатель Ед.изм. Содержание Ячмень % 45 Шрот подсолнечный % 15 Пшеница % 25 Отруби пшеничные % 14 106 Продолжение таблицы 15 Мел, фермент натузим, премикс % 1 Кг 88,268 МДж/кг 10,161 Сырой протеин % 19,140 Сырая клетчатка % 7,214 Лизин % 0,479 Метионин+цистиин % 0,356 Са % 0,858 Р % 1,331 NaCl % 0,169 В рационе содержится: Кормовые единицы в 100 кг Обменная энергия Использование такого корма позволяет более полно балансировать рационы по всем необходимым питательным веществам и энергопротеиновому отношению, включать в них различный набор препаратов, добавок и БАВ. Комбикорм кроликам скармливают вместе с сеном, но сено используется не только как источник клетчатки, а как средство для проталкивания комбикорма в желудок. Сейчас же в основном на ферме сено используется как грелка во время сукрольности. Сено же пока остается необходимой частью питания кроликов. Лучшим для кроликов считают сено бобовых: клевер, люцерна, вика. Эти травы содержат достаточное количество белка, витаминов, и минеральных веществ. Комбикормушки на ферме имеют вместимость 7 литров, что позволяет питаться кролику 80 раз в сутки, как при естественных условиях обитания. Чтобы вырастить 4 месячные товарное животное необходимо затратить 14 кг комбикорма и 7 кг сена. 107 КФХ «МИАКРО-КАРАТАУ Фермерское хозяйство» в настоящее время, старается обеспечивать жителей Республики Татарстан качественным, экологически чистым продуктом – крольчатиной. 2.2.4.2 Влияние полисахаридного препарата «Гемив» на иммунокомпетентные клетки периферической крови при вакцинации кроликов против сальмонеллеза После проведения опыта по определению иммуностимулирующего действия полисахаридного препарата «Гемив» при иммунодефицитном состоянии организма, нами были проведены производственные опыты по изучению влияния полисахаридного препарата «Гемив» на клинико- гематологические и иммунологические показатели крови кроликов при сочетанной вакцинации против сальмонеллеза. Опыты были проведены на кроликах в КФХ «МИАКРО-КАРАТАУ Фермерское хозяйство». В опыте использовали 36 кроликов, породы советская шиншилла. 12 животным в день вакцинации вводили полисахаридный препарат «Гемив» (1 группа) в дозе 126 мг/кг в объеме 1 мл. Контролем при этом служили 24 кролика, из которых 12 были вакцинированы против сальмонеллеза без иммуностимулятора (2 группа), а 12 оставлены интактными (3 группа). Для иммунизации применяли инактивированную вакцину против сальмонеллеза кроликов в дозе 1 мл двукратно с интервалом 7 дней. Формирование иммунитета у кроликов, после вакцинации отмечали по изменениям титра антител в сыворотке крови. Показатели титра антител представлены в таблице 16. 108 Таблица 16 - Изменение титра антител после вакцинации кроликов против сальмонеллеза (n=12) Сроки Группа исследования Опытная Контрольная через 7 суток 2,58±0,02*** 2,08±0,02 через 14 суток 2,68±0,01*** 2,19±0,01 через 21 суток 2,87±0,02*** 2,28±0,01*** Примечание: *** - p<0,001 Полученные результаты по оценке изменения титра антител у кроликов, вакцинированных против сальмонеллеза показывают, что в опытной группе, где проводили вакцинацию против сальмонеллеза в сочетании с полисахаридным препаратом «Гемив» титр антител превосходит показатели контрольной группы, и на 21 день эксперимента были выше на 0,59 log2, что является доказательством выраженного иммуностимулирующего свойства полисахарида. Как показали результаты гематологических, биохимических исследований, введение кроликам полисахаридного препарата «Гемив» в качестве иммуностимулятора положительно влияет на гематологические показатели; при этом отмечается некоторое увеличение содержания эритроцитов и гемоглобина. А у привитых одной лишь вакциной наблюдали некоторое снижение этих показателей. По уровню лейкоцитов существенных различий нам обнаружить не удалось. При исследовании Т- и В - лимфоцитов через 2 недели после сочетанной вакцинации с применением полисахаридного препарата «Гемив» установлено некоторое увеличение уровня Т - лимфоцитов на 14 % по сравнению с контрольной группой, вакцинированной без применения иммуностимулятора. Изменения биохимических показателей в сыворотке крови представлены в таблице 17. 109 Таблица 17 - Биохимические показатели сыворотки крови после вакцинации кроликов против сальмонеллеза (n=12) Показатели Группа Опытная Контрольная Интактная Исходные данные Общий белок, г/% 7,4±0,15 7,3±0,11 7,7±0,14 Альбумин, % 50,5±0,30 61,1±0,21 61,3±0,78 α-глобулин, % 10,6±0,22 13,1±0,18 12,1±0,13 β-глобулин, % 12,9±0,15 6,6±0,31 9,3±0,21 γ-глобулин, % 26,0±0,39 19,2±0,27 17,3±0,43 АлАт, Ед/л 15,4±0,20 25,1±0,22 25,0±0,38 АсАт, Ед/л 6,2±0,08 11,7±0,14 11,3±0,12 А/Г 1,03±0,03 1,57±0,02 1,39±0,01 Через 7 суток Общий белок, % 7,3±0,13 7,5±0,04 8,1±0,08* Альбумины, % 56,1±0,50*** 55,9±0,40*** 56,0±0,38*** α-глобулины, % 12,6±0,18*** 12,2±0,16*** 14,2±0,13 β-глобулины, % 10,7±0,23*** 14,6±0,24*** 10,1±0,17** γ-глобулины, % 20,6±0,48*** 17,3±0,39*** 19,7±0,36 АлАт, Ед/л 25,3±0,27*** 24,9±0,45 24,1±0,21 АсАт, Ед/л 5,9±0,12 11,7±0,20 11,0±0,08 А/Г 1,31±0,01*** 1,29±0,02*** 1,25±0,01*** Через 14 суток Общий белок, % 8,2±0,34 8,5±0,19*** 9,1±0,08*** Альбумины, % 59,6±0,77*** 53,7±0,41*** 57,0±0,37*** 110 Продолжение таблицы 17 α-глобулины, % 14,3±0,39*** 10,9±0,25*** 13,9±0,15 β-глобулины, % 8,8±0,27*** 13,6±0,12*** 12,1±0,26*** γ-глобулины, % 17,3±0,64*** 21,8±0,24* 17,0±0,24 АлАт, Ед/л 58,0±0,18*** 26,2±0,37 25,8±0,18 АсАт, Ед/л 6,1±0,21 11,8±0,15 10,4±0,26** А/Г 1,77±0,06*** 1,18±0,01*** 1,27±0,01*** Через 21 суток Общий белок, % 7,3±0,08 7,1±0,10 8,9±0,11*** Альбумины, % 60,5±0,31*** 55,5±0,30*** 56,8±0,26*** α-глобулины, % 9,1±0,10*** 11,6±0,14*** 12,9±0,15*** β-глобулины, % 9,4±0,10*** 13,9±0,12*** 13,3±0,27*** γ-глобулин, % 21,0±0,32*** 19,0±0,18 17,0±0,38*** АлАт, Ед/л 2,6±0,14*** 8,3±0,10*** 26,3±0,49 АсАт, Ед/л 3,4±0,10*** 6,2±0,07*** 11,1±0,19 А/Г 1,50±0,02*** 1,24±0,01*** 1,30±0,01*** Примечание: * - p<0,05; ** - p<0,02; *** - p<0,001 Данные таблицы 17 показывают незначительные изменения биохимических показателей в группах. В опытной группе после сочетанной вакцинации с полисахаридным препаратом «Гемив» наблюдали достоверное увеличение содержания альбуминов и на 21 сутки исследования оно было выше на 9,9% по сравнению с исходными показаниями. Количество альбуминов в контрольной группе к концу эксперимента снизился от 61,1% до 55,5% соответственно. 111 На 14 сутки опыта в опытной и контрольной группе, показатель общего белка незначительно превышал исходные цифры, но на 21 сутки исследования был ниже показателей интактных животных. К концу эксперимента показатель γ-глобулинов в опытной группе по отношению к контрольной группе был выше на 0,8%, а по отношению к показателям интактных животных на 3% соответственно. Наиболее значительные изменения были в содержании аланинаминотрансферазы как в опытной, так и в контрольной группе. Данный показатель значительно увеличился на 14 сутки в опытной группе, а к концу эксперимента был ниже исходных данных. Показатель соотношения альбуминов к глобулинам (А/Г) на протяжении эксперимента имел недостоверные изменения. К концу эксперимента, в опытной группе этот показатель имел наибольшее соотношение по сравнению с остальными группами. Во время проведения указанного опыта также следили за изменением живой массы Живая масса, г 6 кроликов. Исходные данные 5 Через 7 сут 4 3 Через 14 сут 2 Через 21 сут 1 0 Опытная Контрольная Интактная Группа Рисунок 12 - Изменение массы тела кроликов после вакцинации с применением полисахаридного препарата «Гемив» 112 Исходные показатели живой массы кроликов были одинаковы, но по ходу эксперимента имели различные значения. В опытной группе наблюдали достоверное увеличение живой массы кроликов до конца эксперимента. К концу опыта масса тела у животных была в среднем на 400 г выше, чем у интактных кроликов. Полученные результаты свидетельствуют о том, что применение полисахаридного препарата «Гемив» при иммунизации кроликов против сальмонеллеза дает более высокий результат, вызывая выработку специфических антител больше чем у иммунизированных животных без полисахаридного препарата «Гемив». В то же время полисахаридный препарат «Гемив» положительно влияет и на прирост кроликов 2.2.4.3 Ветеринарно - санитарная оценка мяса кроликов после проведения иммунизации с полисахаридным препаратом «Гемив» Качество мяса кроликов оценивали по ГОСТ 20235.0-74 Мясо кроликов. Методы отбора образцов. Органолептические методы определения свежести. – М.: Стандартинформ, 2010. – 8 с., ГОСТ 20235.1-74 Мясо кроликов. Методы химического и микроскопического анализа свежести мяса. – М.: Государственный стандарт Союза ССР, 1981. – 6 с. Тушки подопытных и контрольных кроликов по своим органолептическим показателям были идентичными: на поверхности тушек имелась корочка подсыхания бледно-розового цвета, серозные оболочки брюшной полости были влажные и блестящие, внутренний жир белого цвета. Мышечная ткань плотная, упругая, бледно-розового цвета с красноватым оттенком, на разрезе слегка влажная, не оставляющая влажного пятна на фильтровальной бумаге, ямка после надавливания пальцем выравнивалась быстро. Запах мышечной ткани специфический, свойственный запаху мяса кроликов. Жир - плотный, белого цвета, со специфическим запахом, характерным для жира кроликов. Бульон, полученный при постановке пробы варкой, был прозрачный и ароматный. 113 Результаты физико-химических исследований и микроскопии мазковотпечатков представлены в таблице 18. Таблица 18 - Результаты физико-химических исследований и бактериоскопии мяса подопытных кроликов (n=12) Группы опыта Показатель Контрольная Опытная Амино-аммиачный азот, мг 0,42±0,06 0,56±0,08 Отрицательный Отрицательный 5,8±0,26 5,9±0,22 Бензидиновая проба Положительный Положительный Аммиак и соли аммония Отрицательный Отрицательный одном поле зрения 3,4±0,54 2,8±0,38 Кислотное число жира 0,22±0,08 0,34±0,1 Продукты первичного распада белков рН Количество бактерий в Материалы таблицы свидетельствуют, что величина рН мясной вытяжки из мышечной ткани кроликов обеих групп соответствовали аналогичным показателям доброкачественного мяса и составляли 5,8 и 5,9, что свидетельствует о синхронном протекании процессов созревания мяса в этих группах. Фермент мышечной ткани пероксидаза (бензидиновая проба) был активным во всех группах, а продукты первичного распада белков не обнаружились. Реакция водных вытяжек мяса на аммиак и соли аммония с реактивом Несслера была отрицательной в первой и во второй группах, а количество амино-аммиачного азота находилось в пределах 0,42-0,56 мг, что характерно для доброкачественного мяса кроликов. При микроскопии мазков - отпечатков из глубоких слоев мышечной ткани микробных клеток обнаружено не было. В мазках-отпечатках из поверхностных 114 слоев были обнаружены единичные грамположительные кокковые формы микроорганизмов, что не противоречит требованиям действующих нормативных документов. При определении кислотного числа жира было установлено, что оно не превышает 0,22 в одном случае и 0,34 в другом, что соответствует доброкачественному жиру кроликов. Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что органолептические, физико-химические и бактериоскопические показатели мяса, соответствуют стандартам, предусмотренным для доброкачественного мяса здоровых кроликов, и оно может быть использовано для пищевых целей без каких-либо ограничений. 2.2.4.4 Биологическая оценка мяса кроликов Биологическую оценку мяса кроликов проводили согласно рекомендациям Н.Г. Беленького (1973) на 20 белых крысятах – отъёмышах. Проваренное мясо кроликов опытной группы животных скармливали крысятам – отъемышам ежедневно в течение 28 дней из расчета 50г/кг массы тела в день. Взвешивание белых крысят проводили на 5, 10, 15, 25 сутки с начала опыта. Результаты исследований представлены в таблице 19. Таблица 19 - Динамика массы тела крысят-отъемышей при скармливании мяса кроликов (n=10) Сроки исследования Масса тела, г Контрольная Опытная группа группа Исходные данные 52,1±0,86 52,2±0,90 5-е сутки 55,2±1,38 57,3±0,87 10-е сутки 59,1±0,56 62,9±0,49*** 115 Продолжение таблицы 19 15-е сутки 65,6±0,47 69,0±0,55*** 25-е сутки 80,9±0,91 82,1±0,30 Примечание: *** - р<0,001 Общее состояние белых крысят всех групп в течение эксперимента было в пределах физиологической нормы, клинических признаков интоксикации не наблюдали. Они были подвижны, активно принимали корм и воду, адекватно реагировали на внешние раздражители. Сваренное мясо подопытных кроликов все крысята поедали с охотой, однако прирост живой массы опытной группы был выше относительно контрольных показателей. На протяжении эксперимента прирост массы тела белых крысят – отъёмышей всех групп существенно изменялся. Результаты таблицы 19 свидетельствуют, о том, что прирост массы тела крысят, которым скармливали мясо опытных животных, превышал контрольные показатели. Статистически достоверные значения отмечены на 10-е и 15-е сутки опыта (р<0,001). На последний день наблюдений разница по живой массе опытных групп, которым скармливали мясо кроликов, составила в среднем 1,2 г по сравнению с контрольными животными. Биологическая проба мяса кроликов показала, что ухудшения аппетита, нарушения в общем состоянии, отставания в росте и развитии крысят не наблюдается. Скармливание мяса кроликов не вызывало видимых патологических изменений во внутренних органах и тканях крысят. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что сочетанное применение полисахаридного препарата «Гемив» в качестве иммуностимулятора при вакцинации кроликов против сальмонеллеза не оказывает отрицательного влияния на качество получаемой продукции. 116 2.2.4.5 Микроструктура отдельных внутренних органов кроликов после применения полисахаридного препарата «Гемив» на фоне иммунизации В течение опыта проводили гистоморфологические исследования внутренних органов подопытных животных, наблюдали отличия между контрольной и опытными группами в зависимости от срока исследования. Гистологическое строение селезенки в группе с применением полисахаридного препарата «Гемив» на второй неделе было выраженным (рисунок 13). По всей поверхности среза органа располагались многочисленные небольшие по величине лимфатические узелки, округло-овальной формы с хорошо обозначенными структурно-функциональными зонами. В периартериальной области узелков компактно в несколько слоев располагались малые лимфоциты. Рисунок 13 - Селезенка кролика опытной группы с многочисленными небольшими по величине лимфатическими узелками через 2 недели после вакцинации с полисахаридным препаратом «Гемив». Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 20. 117 В мантийной области большинства лимфатических узелков обозначались компактные герминативные центры, содержащие многочисленные малодифференцированные лимфоидные клетки и единичные фигуры митоза. Между новообразованными ретикулоциты с резко лимфоидными утолщенными клетками отростками. располагались Отдельные клетки лимфоидного ряда выделялись пикноморфностью ядер. Возникшая в результате гиперплазии лимфоидных клеток повышенная плотность расположения лимфоцитов способствовала сдавливанию просветов капилляров лимфатических узелков, и они были неравномерно кровенаполненными. Умеренно набухшие стенки центральных артерий с выпавшими в просвет отдельными эндотелиоцитами, заметно суживали просветы этих сосудов, но не прекращали гемоциркуляцию в структурах белой пульпы. Маргинальная область лимфатических узелков была менее выраженной вследствие разреженного расположения в ней лимфоцитов, макрофагов и ретикулоцитов, в результате границы лимфатических узелков без четкого обозначения сливались с ретикулярной основой красной пульпы. В умеренно кровенаполненной красной пульпе среди ретикулоцитов диффузно располагались малые и средние лимфоциты, макрофаги и мелкие зерна гемосидерина. Встречались отдельные скопления клеток плазматического ряда и мегакариоциты с выраженной полиплоидизацией ядра и не равномерной по ширине цитоплазмы. Наблюдалась насыщенность в периартериальной зоне Т-лимфоцитов, в сформировавшихся узелках. Центральная артерия с сохранившимся просветом. Эллипсоидные макрофагально-лимфоцитарные муфты выделялись полиморфизмом, обозначением границ и контуров просвета сосудов. Они были окружены неравномерным слоем лимфоцитов и макрофагов. Следовательно, поствакцинальные иммуноморфологические изменения в селезенке после применения испытуемого полисахарида показали более длительную и выраженную лимфопролиферативную реакцию с заметно менее 118 выраженным проявлением мезенхимальных дистрофических изменений и нарушениями внутриорганной гемоциркуляции. Рисунок гистологического строения селезенки на 3 неделю исследования в опытной группе был выраженным (рисунок 14). По всей поверхности среза органа располагались многочисленные лимфатические узелки различной формы и величины. Большинство узелков выделялись насыщенностью лимфоцитами мантийной зоны и особенно ее периартериальной области, представленной плотно расположенными малыми лимфоцитами. В мантийной области обозначались центры размножения, состоящие из бластных форм лимфоидных клеток, средних лимфоцитов, между которыми располагались ретикулоциты с утолщенными отростками и отдельные фрагменты гиперхромных ядер мононуклеарных клеток. Выделяемая, вследствие насыщения лимфоцитами, но сравнительно тонкая маргинальная зона ограничивала внешние контуры белой пульпы. Рисунок 14 - Насыщенность лимфоцитами мантийной зоны в селезенке кролика опытной группы через 3 недели после вакцинации с полисахаридным препаратом «Гемив». Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 20. 119 В центральной артерии лимфатических узелков заметно ослабевали признаки мукоидного набухания сосудистой стенки, выпадение клеток эндотелия в просвет сосуда было также слабо обозначенным. О сохранении внутри узелков гемоциркуляции свидетельствовали также обозначенные профили капилляров. Гиперплазия клеток лимфатических узелков сочеталась минимальным сохранением признаков нарушения внутриорганной гемоциркуляции. Просветы трабекулярных сосудов, центральной артерии, гемокапилляров лимфатических узлов были хорошо обзначенными. Только в отдельных стенках крупных кровеносных сосудов отмечали слабые признаки мукоидного набухания. В умеренно кровенаполненной красной пульпе располагались многочисленные средние и малые лимфоциты, плазмоциты различной степени зрелости, единичные макрофаги, содержащие в цитоплазме буроватые зерна гемосидерина. Ретикулярная основа была представлена клетками, утолщенными отростками, местами в красной пульпе встречались единичные эозинофильные гранулоциты. Элипсоидные макрофагально-лимфоцитарные муфты имели округло-овальную форму с наличием по их границам многочисленных макрофагов и лимфоцитов, что свидетельствовало об адекватном проявлении процесса элиминации разрушаемых эритроцитов. Проявления признаков гиперплазии лимфоидной ткани и дифференциации ее клеток в функционально ответственных зонах белой пульпы явилось отражением более длительного иммуностимулирующего действия примененного средства. Гистологическая структура печени на 2 неделю исследования в группе, в которой проводили иммунизацию в сочетании с полисахаридом оставалась выраженной (рисунок 15). По всей поверхности среза органа обозначались радиально расположенные балки, образованные из отличающихся по величине и форме гепатоцитов. Подавляющее большинство эпителиальных клеток органа имело значительный объем цитоплазмы неравномерно заполненной оксифильно зернистой массой. Наиболее крупные из них тесно соприкасались друг с другом и выделялись бледной оксифильной окраской. Вследствие пониженной 120 синтетической активности, округло-овальные формы ядра этих клеток были насыщены гетерохоматином, имели небольшие ядрышки, большая часть из которых располагались вблизи кариолеммы. Тесно расположенные, увеличенные в объеме гепатоциты, сдавливая друг друга, создавали очаги локальных препятствий для гемоциркуляции в синусоидных капиллярах, а также продвижении желчи. Максимальную выраженность этих изменений отмечали вблизи центральных вен. Содержание гепатоцитов с двумя ядрами в одном поле зрения при большом увеличении микроскопа составило 6,7±0,85 клетки, при Cv= 5,2%. Темной оксифильной окраски гепатоциты с округлыми ядрами, насыщенными мелким и рассеянным в кариоплазме хроматином, располагались преимущественно вблизи сосудов триад. Местами эти функционально активные клетки формировали компактные скопления. Рисунок 15 - Увеличенные в объеме гепатоциты с темной окраской цитоплазмы кролика опытной группы через 2 недели после вакцинации с полисахаридным препаратом «Гемив». Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 40. В венозных сосудах триад отмечали полнокровие, тогда как в артериальных сосудах и желчных протоках профили просветов были слабо 121 обозначенными. В отдельных участках среза органа, вокруг триад, а также собирательных вен отмечали присутствие малочисленных фибробластов и мелких пучков волокнистой соединительной ткани. Отмеченные изменения в печени соответствовали умеренно-выраженному белковому, обратимому гепатозу с нарушениями внутриорганной гемоциркуляции. Об умеренной степени повреждения сосудисто-стромальных структур органа указывали малочисленные скопления клеток мезенхимального происхождения в участках триад. На конец эксперимента гистологическое строение печени в опытной группе оставалось выраженной (рисунок 16). В подавляющем большинстве обследованных участков органа паренхима была представлена радиально расположенными балками, образованными из полиморфных гепатоцитов. Большая часть балочного эпителия была представлена средними по объему клетками, имевшие светлую оксифильную окраску цитоплазмы, а меньшая часть округлыми реже овальными ядрами с маргинально расположенным одним мелким ядрышком. В цитоплазме части клеток паренхимы печени отмечали присутствие липидных капель и мелкой оксифильной зернистой массы. Вблизи центральной вены и сосудов триад располагались большие по объему с интенсивно-темной оксифильной окраской цитоплазмы гепатоциты с крупными насыщенными хроматином ядрами с большим центрального расположения ядрышком. Отсутствие у этих клеток признаков белковой и жировой дистрофии свидетельствует об усилении в них биосинтетических процессов. Количество двухъядерных гепатоцитов в одном поле зрения микроскопа составило 6,8±0,75 клетки при Cv= 4,7%. Наличие в печени разнородных по объему клеток гемоциркуляции. центральных создавало неравномерные Вследствие артерий, чего существенно условия просветы для внутриорганной синусоидных различались в капилляров кровенаполнении в зависимости от их расположения. Вместе с тем, заметно увеличился объем клеток, формирующих капиллярную сеть. 122 Рисунок 16 - Большое количество двухъядерных гепатоцитов в печени кролика опытной группы через 3 недели после вакцинации с полисахаридным препаратом «Гемив». Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 40. В области триад желчные протоки сохраняли просветы, а их эпителий кубическую форму. Вокруг области триад заметных скоплений клеток мезенхимального происхождения не наблюдали, что отражало слабый уровень выраженности раздражающего действия на мезенхимальные структуры органа, примененной комбинации вакцины и полисахаридного препарата «Гемив». Рисунок гистологического строения почек на вторую неделю исследования был сохранен (рисунок 17). Почечные тельца в корковом веществе органа различались как по величине, так и по форме строения. Многие клубочки имели очаг умеренно выраженного отека полости капсул. Капилляры сосудистых клубочков были неравномерно сдавлены в направлении почечных артериол. Капилляры сосудистых клубочков местами сохраняли профили просвета, местами они отсутствовали. Клетки наружного листка капсулы частично сохраняли признаки атрофии. Базальная мембрана в виде тонкой линии ограничивала разреженные клетки эндотелия. Большинство клеток мезангиума сохраняло свой объем. Следует отметить выраженность структуры клеток юкстагломерулярного и юкставаскулярного аппаратов. Эпителиальные клетки 123 канальцев в проксимальных участках характеризовались наличием умеренных признаков зернистой дистрофии. Неравномерно набухшие эпителиальные клетки местами сдавливали просветы канальцев. В просвете преимущественно проксимальных отделов, в том числе тонких канальцев, местами содержалась оксифильная белковая масса, затрудняющая ток жидкости и способствующая возникновению нарушений процесса фильтрации крови в отдельных капиллярах клубочков. В мозговом веществе большинство собирательных трубочек сохраняли проходимость. Клетки интерстиция мозгового вещества были разреженными и уменьшенными в объеме. Рисунок 17 - Зернистая дистрофия в почке кролика опытной группы через 2 недели после вакцинации с полисахаридным препаратом «Гемив». Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 40. Сохранившие свои просветы собирательные трубочки состояли, в основном, из светлых клеток, но вследствие набухания они приобретали округлую форму. Наряду с этим возникали отдельные участки с разрушением эпителия, скоплением слущенных клеток в его просвете. Вблизи этих участков эпителий 124 собирательных трубочек имел признаки атрофии. Отмеченные изменения в почках на 14-е сутки после вакцинации с полисахаридным препаратом соответствовали умеренному проявлению обратимого белкового тубулонефроза, признаков локальных нарушений гемоциркуляции, при сохранении регуляторных структур эндокринного аппарата почечных телец. В опытной группе на конец эксперимента рисунок гистологического строения почек был сохранен (рисунок 18). В большинстве почечных телец отсутствовали признаки следствий нарушения клубочковой фильтрации в виде отека полости капсулы, сдавливания капилляров и их оттеснения в сторону клубочковых артериол. Полость капсулы клубочков была представлена в виде щелевидного образования. Клетки наружного и внутреннего листков сохраняли свою структуру. Подоциты выделялись объемом цитоплазмы. Капилляры клубочков большинства сохраняли профили просвета. Клетки мезангиума, окружающего капилляры имели несколько гипертрофированный вид. Сохранившиеся в большинстве почечных телец юкставаскулярные клетки, выделялись базофильной окраской, насыщенностью ядер хроматином. К особенностям строения эпителия большинства канальцев дистального отдела следует отнести сохранность клеток плотного места. Эпителий канальцевой сети, как в проксимальных, так и дистальных отделах сохранял, в большинстве участков, однородную структуру эпителиальных клеток и ядер. Только в просвете отдельных канальцев, преимущественно проксимальных отделов, отмечали небольшое количество рыхлой оксифильной белковой массы. Местами эпителиальные клетки канальцев дистального отдела сохраняли признаки атрофии. Небольшие по объему ядра этих клеток содержали конденсированный хроматин. Перитубальные капилляры в большинстве участков коркового вещества сохраняли свой просвет и содержали эритроциты. 125 Рисунок 18 - Восстановление структуры почечных телец в почке кролика опытной группы через 3 недели после вакцинации с полисахаридным препаратом «Гемив». Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 40. В большинстве слоев мозгового вещества собирательные трубочки сохраняли структуру эпителиальных клеток. Подавляющее большинство эпителиальных клеток имели кубическую форму, а их округлой формы ядра содержали преимущественно эухроматин. Большинство этих клеток имело светлую цитоплазму, но также встречались эпителиоциты с темной окраской цитоплазмы. В отдельных участках глубоких слоев мозгового вещества единичные собирательные трубочки, в результате предшествующего нарушения структуры, атрофии, утрачивали просветы, а в окружающей их интерстициальной ткани заметно увеличивалось присутствие мононуклеарных клеток. Отмеченные изменения почек на 21-е сутки после вакцинации с применением полисахаридного препарата «Гемив» соответствовали восстановлению, как структуры почечных телец, эпителия канальцевой сети коркового вещества так и собирательных трубочек медулярной области органа. Рисунок гистологического строения селезенки в вакцинированной группе без иммуностимулятора на 2 – неделе5 исследования, умеренно выражен 126 (рисунок 19). По всей поверхности среза органа располагаются сравнительно небольшие лимфатические узелки с умеренным проявлением лимфопролиферативной активности. В новообразованных лимфатических узелках отмечали отсутствие выраженности зонального распределения популяций клеток лимфоидной ткани. Рисунок 19 - Умеренный уровень лимфопролиферативной активности в селезенке кролика контрольной группы без применения полисахаридного препарата «Гемив» через 2 недели. Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 20. Только в отдельных наиболее крупных лимфатических узелках отмечали насыщенность малыми лимфоцитами периартериальной области, при едва обозначенных границах мантийной зоны. В герминативных центрах этих узелков обнаруживали утолщение отростков ретикулярных клеток, между которыми располагались сравнительно немногочисленные бластной формы клетки и отдельные фигуры митоза. На умеренный уровень пролиферативной активности лимфоидной ткани в лимфатических узелках указывал тот факт, что в срезах, проходящих через белую пульпу, сохранялся рисунок ретикулярной основы. 127 Маргинальная зона из-за разреженности ее клеток без четко обозначенных границ переходила в окружающую красную пульпу. В стенке центральной артерии, а также сосудов трабекул отмечены отек, проявления мукоидного набухания, гиперхромия ядер эндотелиальных клеток и их выбухание в просвет сосуда. Капилляры белой пульпы сохраняли неравномерно обозначенные просветы. В умеренно кровенаполненной красной пульпе органа обнаруживали малочисленные и разреженные скопления больших и средних лимфоцитов, плазмобластов, эозинофильных гранулоцитов и единичных, сравнительно небольших по объему, ядер мегакариоцитов. Небольшие по величине эллипсоидные макрофагально-лимфоцитарные муфты имели округлую форму с наличием по их границам малочисленных макрофагов и лимфоцитов, что свидетельствовало об умеренном уровне выраженности процесса элиминации эритроцитов. Отмеченные изменения в селезенке отражали умеренный уровень лимфопролиферативной активности, вызванной воздействием только компонентов вакцинного препарата, сопровождаемые хорошо обозначенными признаками нарушения структуры сосудисто-стромальных образований органа. На конец опыта селезенка у вакцинированных животных без полисахарида имела незначительные изменения (рисунок 20). Рисунок строения органа был умеренно выражен вследствие малочисленности сравнительно небольших по объему лимфатических узелков. Большинство лимфатических узелков попрежнему были без выраженного разделения на структурно-функциональные зоны. Лимфоидная ткань в них была представлена в основном скоплениями средних и малых лимфоцитов. Заметно расширенная периартериальная область содержала только несколько слоев малых лимфоцитов вокруг центральной артерии, сохраняющей признаки мукоидного набухания и отека. В подавляющем большинстве внешние границы лимфатических узелков незаметно переходили в окружающую их красную пульпу. В единичных крупных лимфатических узелках увеличение объема отмечали в первую очередь за счет гиперплазии, набухания клеток ретикулярной основы и только местами обнаруживали умеренные признаки митотической активности клеток лимфоидной ткани. В результате в 128 срезах этих узелков обнаруживали отсутствие выраженных границ, как мантийной, так и маргинальной областей. В сосудисто-стромальных образованиях органа по-прежнему отмечали явления мукоидного набухания, повышения проницаемости стенок мелких сосудов. В слабо кровенаполненной красной пульпе располагались небольшими и немногочисленными группами малые и средние лимфоциты, плазматические клетки и единичные эозинофильные гранулоциты и макрофаги. Содержание мегакароцитов не изменилось и они по-прежнему имели небольшой объем умеренно полиплоидизированного ядра. Небольшие по объему эллипсоидные макрофагально-лимфоцитарные муфты сохраняли округлую форму. Рисунок 20 – Небольшие по объему лимфатические узелки в селезенке контрольных животных без применения полисахаридного препарата «Гемив» на 3 неделю. Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 20. Отмеченные изменения в структурах белой и красной пульпы органа отражали процесс ослабления лимфопролиферативной активности после ее предварительной стимуляции, при сохранении проявлений нарушения обмена веществ в структурах мезенхимального происхождения. 129 Заметно уменьшены в объеме округлые ядра гепатоцитов, выделялись преобладанием гетерохроматина, большая часть которого располагалась маргинально непосредственно вблизи кариолеммы. В участках, содержащих большие по объему гепатоциты, отмечали неравномерное сужение просвета межбалочных и желчных капилляров. Рисунок гистологического строения печени в группе, где вакцинацию проводили без иммуностимулятора на 2 неделе исследования, был умерено сохранен (рисунок 21). Печеночные балки были представлены различающимися по величине и форме гепатоцитами. Подавляющее большинство этих клеток имело небольшую светлоокрашенную цитоплазму, в которой обозначались многочисленные мелкозернистые включения. Резко уменьшенные в объеме эндотелиальные клетки капилляров в этих участках обнаруживались с трудом. Содержание гепатоцитов с двумя ядрами в одном поле зрения, при большом увеличении было уменьшенным и составляло 4,8±1,1 при Сv=13,2%. Рисунок 21 - Различающиеся по величине и форме гепатоциты в печени кроликов контрольной группы без применения полисахаридного препарата «Гемив» на 2 неделе. Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 40. 130 Желчные протоки в отдельных триадах сохраняли просвет и кубическую форму эпителиоцитов, в других участках в них отмечали нарушения оттока желчи. Мелкие и особенно крупные кровеносные сосуды портальной системы органа были резко расширенными. В соединительнотканном окружении триад располагались лимфоциты и единичные макрофаги. Отмеченные изменения в печени соответствовали белковой дистрофии, с ослаблением уровня обновления клеток паренхимы органа в сочетании с явлениями дискинезии желчи и нарушениями внутриорганного кровотока. К концу опыта, в контрольной группе рисунок гистологического строения печени был слабо выражен (рисунок 22). Плохо обозначенные печеночные балки, были представлены небольшими по объему, овальной формы гепатоцитами со светлой оксифильной окраской цитоплазмы и с небольшими гиперхромными ядрами. Большинство этих клеток содержало неравномерно распределенную в цитоплазме мелкозернистую оксифильную массу. Рисунок 22 – Вакуольная, зернистая дистрофия клеток паренхимы печени кролика в контрольной группы без применения полисахаридного препарата «Гемив» на 3 неделе. Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 40. 131 В отдельных участках структура печеночных балок была невыраженной благодаря очагам вакуольной дистрофии клеток паренхимы. Немногочисленные крупные с располагались, темной оксифильной преимущественно окраской вблизи цитоплазмы триад. гепатоциты, Пониженный уровень биосинтетической активности клеток паренхимы компенсировался относительно возросшим количеством двухъядерных гепатоцитов в среднем 8,9±1,2 при Cv=13,2%. Синусоидные капилляры, в результате сдавливания увеличенными в объеме клетками печеночного эпителия, были неравномерного кровенаполнения. Клетки ретикулоэндотелия органа выделялись вследствие умеренной функциональной активности, небольшим объемом цитоплазмы и мелкими гиперхромными ядрами. Наличие небольших по объему со светлой оксифильной окраской цитоплазмы гепатоцитов и гиперхромия их ядер соответствовала пониженному уровню биосинтетической активности клеток паренхимы органа. Наличие мелких очагов с вакуолизированным эпителием балок, при сохранении относительно высокого уровня содержания двухъядерных клеток указывало на ближайшие сроки возникновения деструктивных процессов. Рисунок гистологического строения почек был умеренно выраженным, на 2 неделе исследования в контрольной группе, где иммунизировали кроликов без полисахарида (рисунок 23). Почечные тельца, расположенные в поверхностных слоях коркового вещества, выделялись значительным объемом и округлой формой. В них наблюдали резкий отек полости капсулы и заметное уплощение клеток эпителия наружного листка, а также подоцитов. В сдавленных и смещенных в сторону клубочковых артериол сосудистых клубочках исчезли профили просвета капилляров. Увеличенные в объеме, набухшие эндотелиальные клетки и клетки мезангиума выделялись бледной оксифильной окраской цитоплазмы. Ядра этих клеток имели слабую окраску хроматина, распределенного преимущественно по периферии вблизи кариолеммы. Клетки эндокринного аппарата сосудистых клубочков были уменьшенными в объеме и выделялись базофильной окраской цитоплазмы и гиперхромными ядрами. В 132 результате нарушения внутриорганной гемоциркуляции перитубальные капилляры практически не обозначались. В эпителии канальцевой сети, коркового вещества отмечали выраженные признаки зернистой и местами вакуольной дистрофии. В результате просветы канальцев проксимального отдела были заполнены мелкозернистой оксифильной белковой массой с примесью слущенных клеток. Возникшие препятствия создавали частичную или полную непроходимость для тока жидкости. Менее выраженные деструктивные изменения были обозначены в области тонкого и дистального отделов канальцев. Рисунок 23 – Отек полости капсулы и заметное уплощение клеток эпителия наружного листка, а также подоцитов в почке кролика контрольной группы без применения полисахаридного препарата «Гемив» через 2 недели. Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 40. Эпителий собирательных трубочек мозгового вещества отличался слабой дифференцированностью на темные и светлые формы клеток. Местами эпителиальный слой частично отслаивался от базальной располагался в просвете, нарушая ее проходимость для мочи. мембраны и 133 Отмеченные дистрофические, десквамативные изменения первоначально возникали в эпителии канальцевой сети, а затем и в структурах почечных телец, сопровождались нарушениями регуляции клубочковой фильтрации с последующим ослаблением уровня ведения мочи. В контрольной группе, на конец эксперимента почки имели некоторые изменения (рисунок 24). Рисунок гистологического строения органа был умеренно выражен. Почечные тельца становились заметно уменьшенными в объеме. В большинстве из них ослабевали и даже исчезли признаки отека полости капсулы клубочков. В сохранившихся в поверхностных слоях коры органа встречались значительные по объему почечные тельца с выраженным отеком полости капсулы, атрофией клеток внутреннего и наружного листков. В этих клубочках фильтрация крови в капиллярной сети оставалась сильно сдавленной вследствие предшествующего нарушения оттока жидкости и была оттеснена в зону клубочковых артериол. Рисунок 24 – Зернистая дистрофия клеток паренхимы почек кроликов контрольной группы без применения полисахаридного препарата «Гемив» через 3 недели исследования. Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 40. 134 Малочисленность экставаскулярного и и уменьшение объема юкстагломерулярного клеток аппаратов мезангиума, также отражали нарушения клубочковой фильтрации. В канальцевой сети органа отмечали неравномерное проявление дистрофических, атрофических изменений со стороны эпителия проксимального отдела. Преимущественно в этих отделах канальцев отмечали наличие в просвете оксифильной белковой массы с примесью слущенных эпителиоцитов частично или полностью препятствующих оттоку жидкости. Канальцевый эпителий в них был с признаками атрофии, и располагался на базальной мембране неравномерным слоем. Различные по величине клетки эпителия проксимального и, в меньшей степени тонкого и дистального отделов сохраняли признаки зернистой, местами вакуольной дистрофии. Отмеченные изменения в почках на этот срок исследования после вакцинации характеризовались ослаблением и неравномерным проявлением признаков нарушения клубочковой фильтрации и тока первичной мочи в канальцевой сети с сохранением деструктивных явлений в эндокринном аппарате органа. Степень выраженности этих патологических изменений заметно ослабевала по сравнению с предыдущим сроком опыта. У интактных животных, так же проводили гистологические исследования и обнаруживали некоторые изменении в селезенке, печени и в почках. Рисунок гистологического строения селезенки был слабо выраженным (рисунок 25). Малочисленные лимфатические узелки в селезенке отличались полиморфизмом, небольшим объемом, разреженностью клеток лимфоидного ряда, вследствие чего отсутствовало выраженное разделение на структурнофункциональные зоны. Небольшая плотность расположения малых лимфоцитов в периартериальной зоне, разреженность лимфоидных клеток в центральной области, наличие в ней ретикулоцитов с набухшими отростками единичных больших лимфоцитов, отличала структуру лимфатических узелков у контрольных животных. В маргинальной области узелков располагались единичные макрофаги и плазмоциты. Стенки центральной артерии сохраняли профили просвета и структуру слоев. Вследствие отсутствия препятствий для 135 тока крови гемокапилляры лимфатических узелков имели обозначенные профили просвета кровенаполненной многочисленные и были красной малые, заполнены пульпе средние эритроцитами. органа, лимфоциты диффузно и В умеренно располагались компактные скопления плазмобластов. Единичные мегакариоциты представляли собой клетки с умеренно полиплоидизированным ядром и неравномерным по ширине ободком цитоплазмы. Выравненная линия кариолеммы у этих клеток указывала на пониженную выработку тромбоцитов. Трабекулярные и центральные артерии выделялись утолщением стенки, выбуханием в просвет эндотелиальных клеток и умеренным отеком окружающих участков. Рисунок 25 - Отсутствие выраженного разделения на структурнофункциональные зоны в селезенке кролика интактной группы. Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 20. Элипсоидные макрофагально-лимфоцитарные муфты имели обозначенные границы благодаря скоплениям мононуклеарных клеток. В цитоплазме многочисленных макрофагов красной пульпы располагались зерна и гранулы гемосидерина. Отмеченные изменения в селезенке соответствовали 136 пониженному уровню регенераторной активности лимфоидной ткани, при сохранении внутриорганной гемоциркуляции. Печень кролика в интактной группе имела сохранённое гистологическое строение (рисунок 26). Подавляющее большинство гепатоцитов сохраняли округло-овальную форму, были значительно увеличены в объеме со светлой оксифильной окраской цитоплазмы. Они содержали относительно мелкие ядра, лишенные выраженной структуры хроматина. Отмеченные признаки соответствовали пониженному уровню биосинтетической активности клеток паренхимы органа. Повсеместно, среди эпителиальных клеток, отмечали признаки умеренно выраженной зернистой дистрофии и мелкокапельной жировой инфильтрации. Местами встречались гепатоциты с выраженными признаками вакуолизации цитоплазмы и пикноза ядер. Некоторые из них имели полностью разрушенные ядра. Содержание гепатоцитов с двумя ядрами в одном поле зрения составило 8,9±1,24 клетки Cv = 9,5%. Рисунок 26 – Увеличенные в объеме гепатоциты в результате зернистой дистрофии печени кролика интактной группы. Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 40. 137 Неравномерное увеличение объема клеток паренхимы печени создавало условия для нарушений внутриорганной гемоциркуляции в результате профили просвета синусоидных капилляров и клетки эндотелия были слабо обозначенными. Просветы центральных, собирательных вен, а также вен области триад были расширенными. Желчные протоки сохраняли просвет, а их эпителиальные клетки сохраняли кубическую форму. В соединительнотканном окружении триад присутствовали единичные гистиоциты, лимфоидные клетки и фиброциты. Отмеченная гистологическая структура печени соответствует неравномерному проявлению обратимых и необратимых форм нарушения обмена веществ, с сохранением регенераторного потенциала клеток паренхимы органа. Рисунок гистологического строения почек в интактной группе животных был сохранен (рисунок 27). Почечные тельца резко различались по объему и форме. Расположенные в поверхностных слоях коркового вещества почечные тельца характеризовались большим объемом вследствие выраженного отека полости капсулы. В отдельных участках толщи коры органа сосудистые клубочки на фоне умеренного отека полости капсулы, приобретали лапчатую форму. В этих сосудистых клубочках отмечали признаки атрофии и пикноза ядер клеток эндотелия, мезангиума и подоцитов, а также нарушения местной гемоциркуляции, в виде сдавливания и исчезновения профилей просвета капилляров. В цитополазме эпителия проксимальных и в меньшей выраженности дистальных отделов отмечали оксифильную зернистость, мелкие вакуоли и липидные включения. 138 Рисунок 27 - Выраженный отек полости капсулы, лапчатая форма сосудистых клубочков почки кролика интактной группы. Окраска гематоксилином – эозином. Ок. 10. Об. 40. Местами просветы канальцев были заполнены рыхлой оксифилной белковой массой с примесью отдельных слущенных клеток эпителия, что создавало картину продолжительности выраженного отмеченных белково-жирового дистрофических тубулонефроза. изменений в О органе свидетельствовали также наличие рассеянных скоплений лимфоидных клеток в перитубальных участках. В мозговом веществе почек эпителий собирательных трубочек также резко отличался по уровню сохранности. Наряду с участками сохранившихся структур эпителия отмечали области, где эпителиальные клетки собирательных трубочек полностью отделялись от базальной мембраны и слущивались в просвет. Среди сохранившихся эпителиоцитов трубочек преобладающими формами были светлые клетки. Интерстициальные клетки расположены между собирательными трубочками, отличающихся соответствовали тубулонефроза. пикнаморфным умеренному видом. Указанные проявлению изменения подострому в гломеруло почках - и 139 В происследованных полисахаридного органах выявили препарата «Гемив» при то, вакцинации что применение кроликов против сальмонеллеза не влияет отрицательно на функцию и на структуру внутренних органов. По результатам гисто-морфологических исследований внутренних органов кроликов при иммунизации против сальмонеллеза наиболее яркие морфологические изменения наблюдали в селезенке, печени у животных опытной группы, которых вакцинировали в сочетании с полисахаридным препаратом «Гемив». В частности в селезенке опытной группы наблюдали формирование многочисленных лимфатических узелков, насыщенность в периартериальной зоне Т-лимфоцитов в сформировавшихся узелках после воздействия вакцины и полисахаридного препарата «Гемив». Лимфатическая ткань селезенки представлена средними и большими лимфоцитами. Структура печени была сохранена даже к концу эксперимента. Наблюдали значительное количество двухъядерных гепатоцитов, что указывает на сохранность репоративного свойства. 140 2.2.5 Экономическая эффективность разработанных мероприятий Экономический эффект, получаемый в результате проведения профилактических, оздоровительных и лечебных мероприятий (Эв) определяют по формуле: Эв = Дс – Зв, (2.2.5.1) где Дс – стоимость, полученная дополнительно за счет увеличения прироста живой массы кроликов и повышения качества продукции, руб.; З в – затраты на проведение ветеринарных мероприятий, руб. при применении «Гемив»: Эв = 856,8 – 38,267 = 818,532 руб. при применении «Циклоферон»: Эв = 616,8 – 261,264 = 355,536 руб. 2) Дополнительную стоимость (Дс), полученную за счет увеличения количества продукции в результате применения более эффективных средств, определяли по формуле: Дс = П ∙ Ц, (2.2.5.2) где П – разница в привесе между опытной и контрольной группами; Ц – стоимость произведенной продукции при применении средств Расчет стоимости дополнительной продукции, полученной через 120 дней выращивания кроликов Дс – «Гемив» = (5200 г - 4843 г) ∙ 200 руб/кг = 357 г(0,357 кг) ∙ 200 руб/кг = 71,4 руб (на 1 гол) 71,4 руб. ∙ 12 гол. = 856,8 руб. Дс – «Циклоферон» = (5100 г - 4843 г) ∙ 200 руб. = 257 г(0,257 кг) ∙ 200 руб/кг = 51,4 (на 1 гол) 51,4 ∙ 12 гол. = 616,8 руб. 141 3) Затраты на оплату труда (От) определяли исходя из среднемесячной зарплаты вет. врача и персонала 30000 рублей и затрат оперативного рабочего времени на инъекцию препарата одному кролику – 3,0 мин. Оплата одной минуты составляет: 30000 руб. : 25,6 дней : 8 часов : 60 мин. = 2,44 руб./мин. Общее количество человеко-часов 12 ∙ 3,0 : 60 = 0,6 часов Зп = 3,0 мин. ∙ 2,44 руб./мин. = 7,32 руб./гол. Часовая тарифная ставка = 60 : 3,0 ∙ 2,44 = 48,80 руб. 7,3 2руб ∙ 12 гол. = 87,84 руб. От = количество человеко-часов ∙ часовая тарифная ставка страховые взносы в Пенсионный фонд 0,6 ∙ 48,80 ∙ 1,30 = 38,064 руб. 4) Текущие затраты устанавливали путем суммирования стоимости препарата и затрат на оплату труда (М + От) специалистов, осуществляющих обработку молодняка. Зв = Мз + От (2.2.5.3) Мз = Мо ∙ Ц, (2.2.5.4) где Мо - число обработанных животных, голов; Ц - Цена одной дозы вакцины. Мз «Гемив» = 12 ∙ 0,017 = 0,204 руб. Мз «Циклоферон» = 12 ∙ 18,6 = 223,2 руб. Зв «Гемив» = 0,204 + 38,064 = 38,268 руб. Зв «Циклоферон» = 223,2 + 38,064 = 261,264 руб. 5) Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий на рубль затрат (Эр) определяется путем деления экономического эффекта на затраты по осуществлению указанных мероприятий: Эр = Эв : Зв, (2.2.5.5) 142 где Эв – экономический эффект, руб., Зв – затраты на проведение ветеринарных мероприятий. При применении «Гемив»: Эр = 816,532 : 38,268 = 21,34 руб. «Циклоферон»: Эр = 355,536 : 261,264 = 1,361 руб. 143 3 ЗАКЛЮЧЕНИЕ С переводом животноводства на промышленную основу количество неблагоприятных факторов внешней среды, отрицательно сказывающихся на становлении и проявлении защитно-приспособительных механизмов и продуктивности животных, значительно возросло. Поэтому актуальной задачей является поиск средств и способов повышения защитных сил организма, особенно в условиях промышленной технологии. Одним из самых перспективных способов считается использование иммуностимулирующими для этой цели свойствами соединений, (Зайцева М. обладающих Применение иммуномодуляторов в животноводстве / М. Зайцева, А. Деева // Животновод для всех. – 2004. - № 5. – С.26; Середа А.Д. Иммуностимуляторы, классификация, характеристика, область применения: (Обзор) / А.Д. Середа, В.С. Кропотов, М.М. Зубаиров // Сельскохозяйственная биология. – 2001. - № 4. – С. 83 – 93). Необходимость изучения проблем иммуностимуляции в ветеринарии объясняется тем, что при современной системе ведения животноводства животные нередко находятся в состоянии низкого иммунного статуса и неустойчивы различного рода заболеваниям. Весьма интересным является аспект регулирования иммунного ответа в ранний постнатальный период. Умелое управление системой иммунитета дает животноводству большой экономический эффект (Духовский А.А. Особенности контроля ассоциированных инфекционных болезней в свиновокомплексах / А.А. Духовский, А.Л. Делян // Свиноводство. – 2013. - № 3. – С. 67 – 69; Петрянкин Ф.П. Использование биологически активных препаратов при выращивании молодняка / Ф.П. Петрянкин, Л.В. Пыркина, И.И. Крылова // Ветеринария. – 1994. - № 4. – С. 13 – 14; Дорожкин В.И. Особенности естественной резистентности и обмена веществ телят под действием иммунокорректоров / Р.А. Асрутдинова, В.И. Дорожкин // Материалы 111 Съезда фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации», Санкт-Петербург, 2011, С.154 – 156). Иммунокоррекция всегда была очень актуальным направлением в фармакологии. В настоящее время разработка иммуносупрессоров и 144 иммуностимуляторов идет особенно интенсивно, причем приоритет принадлежит иммуностимулирующим средствам. Лекарственные препараты могут усиливать как специфические иммунные реакции (синтез антител, отбор Т-клеток с участием таких ферментов, как лизоцим, пропердин и др. специфическими рецепторами), так и неспецифические процессы (лейкоцитоз; реакции с участием таких ферментов, как лизоцим, пропердин) (Земсков Н.Н. Специфическая и неспецифическая иммунокоррекция / Н.Н. Земсков // Успехи современной биологии. – 1997. – Т. 117. - № 3. – С. 261 – 267; Машковский М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. – Харьков: Тарсинг, 1997. – С. 243 – 246; Петров Р.В. Иммунология / Р.В. Петров – М.: Медицина, 1987. – 411с.; Прийма О.Б. Неферментные катионные белки лейкоцитов переферической крови / О.Б. Прийма. – Клиническая медицина, 1997. - № 2. – С. 4 – 5). Каждое новое синтезированное химическое соединение требует безотлагательной токсикологической оценки, так как она является основой предупреждения вредного воздействия химических соединений на человека при производстве и потреблении продукта. Первичная экспертиза должна сопутствовать их разработке ещё на «стадии пробирки», постепенно усложняясь по мере перехода к полузаводскому и заводскому производству. Раннее токсикологическое исследование позволяет избежать ненужных затрат, связанных с заменой более токсичных и более опасных веществ, а иногда и целых технологических процессов менее токсичными и менее опасными, однако обладающими теми же необходимыми свойствами (Основы клинической фармакологии и рациональной фармакотерапии / Под ред. Ю.Б. Белоусова, М.В. Леонова. – М. Литтерра, 2002. – 356 с.). В ходе проводимых опытов, связанных с изысканием и изучением новых материалов, экспериментатору в той или иной форме необходимо регистрировать реакции, возникающие в организме животного под влиянием исследуемого вещества. При этом накапливается достоверный материал, позволяющий сделать заключение о характере и механизме действия изучаемых веществ (Страус Ш.Е. Медицина, основанная на доказательствах / Ш.Е. Страус [и др.]. – М.: ГЭОТАР, 145 2010. – 320 с.). Основной целью исследований иммуностимулирующих свойств явилось определение полисахаридного токсических, препарата микробного происхождения «Гемив» и его влияние на гематологические, биохимические, иммунологические показатели крови лабораторных и других животных, на качество мяса кроликов. При внедрении предварительно в практику определяют два нового основных фармакологического параметра: средства безвредность и эффективность его применения в условиях производства. В связи с этим, в первую очередь была проведена серия опытов по определению токсических свойств полисахаридного препарата «Гемив». Токсические свойства полисахаридного препарата «Гемив» изучали путем определения острой, хронической и субхронической токсичности, местнораздражающего и аллергенного действия (Г.Н. Першин и др., 1971; Л.П. Маланин и др., 1988; Р.У. Хабриев 2005; Б.И. Любимов, М.И. Миронов, 1988; В.В. Гацура, 1974). Также изучены всевозможные отдаленные последствия в соответствии с методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве, утверждёнными ГУВ СССР (1988). Об общем действии полисахарида судили по изменению поведения животных, появлению у них после введения препарата тех или иных признаков, не наблюдавшихся в параллельном контроле после применения физиологического раствора. Опыты были проведены на клинически здоровых лабораторных животных. При изучении острой токсичности полисахаридного препарата «Гемив» на белых крысах было установлено, что при внутрижелудочном и внутримышечном введении во всех испытанных дозах, полисахаридный препарат «Гемив» не вызывал гибели и не оказывал никакого токсического действия на организм лабораторных животных. Применение его внутрижелудочно в максимально вводимой дозе 1140 мг/кг и внутримышечно 126 мг/кг не вызывает гибели животных и патологоанатомических изменений в органах и тканях и относится к 146 малотоксичным соединениям по классификации Л.И. Медведь, Ю.С. Каган, Е.И. Спыну (1964). Определение кумулятивных свойств полисахаридного препарата «Гемив» были проведены на белых беспородных крысах, живой массой 90-100 г методом субхронической токсичности (R.K. Lim с соавт. (1961)). Исходная доза, которая была взята для проведения данного опыта составила 1/10 часть от условной ЛД50, максимально использованной в острых опытах, что соответствовала – 12,6 мг/кг живой массы. Клинические признаки отравления лабораторных животных начали проявляться на 19 – й день опыта и характеризовались незначительным угнетением общего состояния, учащением числа дыхательных движений. Спустя 3-4 часа, у животных отмечали восстановление поведенческих реакций, показателей дыхания до исходного уровня, животные охотно принимали корм и воду, были активны. Следует отметить, что многократное введение полисахаридного препарата «Гемив» в возрастающих дозах не вызывало гибели животных. Хроническую токсичность полисахаридного препарата «Гемив» изучали при его внутримышечном введении в объёме 1 мл. Токсичность определяли на 40 белых крысах живой массой 80 - 85 г, разделённых по принципу аналогов на 4 группы. Лабораторным животным первой опытной группы полисахарид вводили в дозе 126, второй группы - 63, третьей - 31,5мг/кг массы тела один раз в сутки в течение 20 суток. Результаты исследований показали, что ежедневное введение полисахаридного препарата в указанных дозах не вызывало ухудшения физиологического состояния подопытных животных: они охотно принимали корм и воду, адекватно реагировали на внешние раздражители, отмечалось спокойное поведение и нарушения в координации движений отсутствовали. На протяжении всего периода исследований наблюдали незначительные изменения в живой массе подопытных животных. Стоит отметить, что значения по живой массе в опытных группах на последний день исследований были 147 достоверно выше относительно контрольных показателей на 9,7; 5,4; 2,6 % соответственно ( p<0,001). Во время морфологический проведения состав экспериментов крови, выводили у животных определяли лейкоформулу, изучали биохимические показатели сыворотки крови. Гематологические показатели в период опыта изменялись, но эти изменения были в пределах физиологической нормы. Активность аланинаминотрансферазы (АлАт) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) в сыворотке крови белых крыс после введения полисахаридного препарата «Гемив» повысилась у животных опытных групп, тогда как в контрольной группе отмечалось их снижение. Уровень щелочной фосфатазы во всех опытных группах повысился относительно исходных и контрольных показателей (р≤0,01). Кроме того, в первой опытной группе, отмечалось снижение уровня общего кальция по сравнению с исходными значениями, а уровень неорганического фосфора чуть выше исходных значений (р≤0,001). Относительно контрольных показателей, уровень общего кальция в сыворотке крови подопытных животных первой, второй и третьей групп был ниже, а уровень неорганического фосфора выше на 0,8, 1,1 и 0,1 ммоль/л соответственно (р≤0,01). Содержание α - глобулинов как у контрольной, так и в опытных группах крыс на 10 сутки исследований незначительно увеличилось с последующим снижением на 20 сутки у опытных животных. Концентрация β-глобулинов в сыворотке крови опытных групп лабораторных животных на 10 сутки исследований имела тенденцию к снижению, но на 20 сутки эксперимента показатели были достоверно выше относительно контрольных показателей (р≤0,01). Аналогичные изменения наблюдали и со стороны гамма-глобулинов. На последний день исследований концентрация гамма-глобулинов в первой и второй опытной группе была достоверно выше по сравнению с контрольной группой животных на 17,6 и 12,9 % соответственно (р≤0,01). Незначительное 148 повышение концентрации общего белка происходило за счет глобулиновой, преимущественно β и γ-глобулиновой фракций. Что касается биохимических показателей сыворотки крови подопытных животных, то после введения полисахаридного препарата «Гемив» уровень глюкозы во всех группах повышается относительно исходных показателей. На 20 сутки исследований содержание глюкозы по сравнению с исходными данными в первой опытной группе было выше на 1,8 ммоль/л, во второй и третьей – на 0,6 и 0,4 ммоль/л соответственно. Полученные результаты указывают на то, что полисахаридный препарат «Гемив» не токсичен при максимально вводимых дозах и благоприятно влияет на общее состояние животных, прирост живой массы, морфологические и биохимические показатели крови. Как показали результаты опытов, изучаемый полисахаридный препарат «Гемив» не обладает раздражающими, аллергизирующими, эмбриотоксическими и тератогенными свойствами. Следующая серия опытов была направлена на выявление оптимальной, более эффективной дозы и разработке режима применения полисахаридного препарата «Гемив». При сравнительной физиологической оценке действия различных доз полисахаридного препарата «Гемив» на организм крыс и кроликов при экспериментальном иммунодефиците, выявлена оптимальная доза - 126 мг/кг. Применение полисахаридного препарата «Гемив» в указанной дозе более выраженно стимулирует прирост массы тела и положительно влияет на весь организм и состав крови, в частности, при иммунодефицитном состоянии организма. Для разработки режима применения, так же экспериментально, моделировали иммунодефицит у лабораторных животных с применением препарата циклофосфан. Лабораторным животным первой группы за три дня до введения иммунодепрессанта и через день после инъецировали «Гемив», а второй группы – через 3 дня после введения циклофосфана двукратно. Третья 149 группа крыс не получала полисахарида. Четвертая группа – интактные животные. В первой опытной группе резких изменений со стороны общего состояния, морфологических и биохимических показателей крови животных не наблюдали. Процентное соотношение всех элементов фракций белка, на всем протяжении эксперимента резко не отличались от исходных показателей и были в пределах физиологической нормы. Вторая применения группа животных, иммунодепрессанта, которая имела получала полисахарид отличительные после результаты по сравнению с первой опытной группой. Так, на 7 день эксперимента, уровень αглобулинов был на 5,8 % выше и уровень γ-глобулинов на 2,2 % ниже по сравнению с исходными данными. В группах, в которых применяли препарат циклоферон и полисахаридный препарат «Гемив», показатели крови незначительно снизились по сравнению с исходными цифрами, но к концу опыта восстановились и были в пределах физиологической нормы. Тогда как в контрольной группе животных показатели крови были ниже нормы до конца эксперимента. После введения циклоферона и полисахаридного препарата «Гемив» наблюдали так же достоверное увеличение показателей Т и В-лимфоцитов в первой и во второй опытной группе. Полученные результаты свидетельствуют о том, что полисахаридный препарат «Гемив» и препарат циклоферон обладают иммуностимулирующими свойствами. Производственные опыты были проведены в условиях КФХ «МИАКРОКАРАТАУ Фермерское хозяйство» Республики Татарстан. Исследовали влияние полисахаридного препарата «Гемив» на иммунокомпетентные клетки периферической крови и титр антител при вакцинации кроликов против сальмонеллёза. Для этого были сформированы три группы животных: первой группе вводили полисахаридный препарат «Гемив» и вакцинировали против сальмонеллёза. Вторую группу животных вакцинировали без применения полисахаридного препарата «Гемив». Третья группа животных оставалась 150 интактной. К концу эксперимента титр антител в первой группе, где вакцинацию проводили на фоне применения полисахаридного препарата «Гемив», был достоверно выше показателей контрольной группы на 0,59log2. После проведённых исследований относительного количества Т- и В – лимфоцитов установлено, что через 2 недели после сочетанной вакцинации с применением полисахаридного препарата «Гемив» уровень Т - лимфоцитов на 14 % был выше по сравнению с контрольной группой. При оценке прироста кроликов во время вакцинации выявили достоверное увеличение живой массы в группе, в которой применяли полисахаридный препарат. Полученные результаты свидетельствуют о том, что применение полисахаридного препарата «Гемив» способствуют улучшению состояния обмена веществ и повышению показателей резистентности организма. По завершению опыта провели ветеринарно-санитарную экспертизу мяса кроликов. Результаты проведённых исследований свидетельствуют о том, что органолептические, физико-химические и бактериоскопические показатели мяса кроликов, соответствуют стандартам ГОСТ 20235.0-74, предусмотренным для доброкачественного мяса кроликов. Таким образом, иммунокоррекция с помощью полисахаридного препарата «Гемив» в современных условиях практического кролиководства представляется перспективной мероприятий, и позволит снизить повысить ущерб от эффективность заболеваемости профилактических сельскохозяйственных животных, обеспечить стойкое ветеринарное благополучие и значительно повысить неспецифическую резистентность кроликов. Полученные результаты позволили сделать следующие выводы: 1. Полисахаридный препарат микробного происхождения «Гемив» относится к нетоксичным препаратам для лабораторных животных, не обладает кумулятивными, аллергизирующими, раздражающими свойствами. Применение его внутрижелудочно внутримышечно 126 в максимально мг/кг не вводимой вызывает дозе гибели 1140 мг/кг животных и и 151 патологоанатомических изменений в органах и тканях и по классификации Л.И. Медведь, Ю.С. Каган, Е.И. Спыну (1964) полисахарид относится к малотоксичным соединениям. 2. Полисахаридный препарат «Гемив» не проявляет эмбриотоксическое и тератогенное действие при введении крысам в максимально вводимой дозе в разные сроки беременности, включая критические стадии эмбриогенеза. 3. Многократное внутримышечное введение «Гемив» белым крысам в дозах 31,5; 63 и 126 мг/кг живой массы в течение 21 дня не вызывает функциональных изменений в организме. Применение «Гемив не оказывает влияния на морфологические и биохимические показатели крови животных. 4. Установлено, что «Гемив» оказывает наиболее выраженное влияние на Тсистему иммунитета кроликов, а также способствует увеличению количества В лимфоцитов на 18,3%. 5. Производственные испытания полисахаридного препарата «Гемив» подтвердили его иммуностимулирующее действие при вакцинации кроликов против сальмонеллеза, которое проявлялось повышением титра антител от 0,50 до 0,59 log2, увеличением уровня Т – лимфоцитов на 14%. 6. Поствакцинальные иммуноморфологические изменения в печени, почках и селезёнке кроликов, получавших полисахаридный препарат «Гемив» при иммунизации против сальмонеллёза были значительно лучше по сравнению с аналогичными органами контрольных животных. 7. На фоне применения «Гемив» у кроликов усиливаются обменные процессы, повышается прирост живой массы на 23,2% чем контрольных животных. Органолептические и биохимические показатели мяса соответствуют ГОСТ 20235.0-74 и ГОСТ 20235.1-74. 8. Экономическая эффективность применения полисахаридного препарата «Гемив» в качестве иммуностимулятора при иммунизации кроликов против сальмонеллеза из расчета на 1 рубль затрат составил 21,34 руб. 152 ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ 1. Для повышения неспецифической резистентности кроликов полисахаридный препарат «Гемив» следует применять внутримышечно из расчета 126 мг/кг двукратно. 2. Рекомендуется к применению в практике кролиководства полисахаридный препарат «Гемив» согласно разработанной схеме и «Временные правила по применению полисахарида «Гемив» в ветеринарии», утвержденным начальником Главного управления ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан А.Г. Хисамутдиновым (от 07апреля 2015 года). 3. Результаты исследований используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий: на кафедрах фармакологии и токсикологии, эпизоотологии, микробиологии, зоогигиены, физиологии и патофизиологии ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»; на факультете биотехнологии и ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет»; на кафедре морфологии, акушерства и терапии факультета ветеринарной медицины и зоотехнии ФГБОУ ВПО «Чувашская государственная сельскохозяйственная академия». 153 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ М – средняя арифметическая m – ошибка ± – само отклонение р – достоверность ЛД50 – доза препарата, вызывающая гибель 50 % животных АсАТ - аспартатаминотрансфераза АлАТ - аланинаминотрансфераза РГА – реакция гемагглютинации 154 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 1. ГОСТ 20235.0-74 Мясо кроликов. Методы отбора образцов. Органолептические методы определения свежести. – М.: Стандартинформ, 2010. – 8 с. 2. ГОСТ 20235.1-74 Мясо кроликов. Методы химического и микроскопического анализа свежести мяса. – М.: Государственный стандарт Союза ССР, 1981. – 6 с. 3. Алюшин, М.Т. Современное состояние научных исследований по применению полимеров в фармации / М.Т. Алюшин, И.С. Грицаенко, М.В. Каменская // Научные труды ВНИИ Фармации. - 1990. - Вып.28. - С. 5 - 11. 4. Андреева, А.В. Естественная резистентность и микро-биоценоз кишечника телят при применении БАВ / А.В. Андреева, Ю.Ф. Арсланова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. - 2011. - Т.207. - С. 37-42. 5. Андреева, А.В. Использование фитопробиотических композиций на основе лактобактерий и лекарственного растительного сырья в комплексе с полисолями микроэлементов для профилактики желудочно-кишечных заболеваний у телят / А.В. Андреева, О.Н. Николаева // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. - 2008. - Т.191. - С. 23-28. 6. Андреева, Н.Л. Иммуностимуляторы в ветеринарии / Н.Л. Андреева// Материалы XVIII международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии». - СПб, 2006. - С. 87 - 88. 7. Андреева, Н.Л. Иммуностимуляторы в ветеринарии / Н.Л. Андреева, В.Д. Войтенко // Материалы ХVIII международной межвузовской научнопрактической конференции «Новые ветеринарии». - СПб. - 2006. - С. 87 - 88. фармакологические средства в 155 8. Андреева, Н.Л. Иммуностимуляторы, повышающие эффективность химиопрепаратов / Н.Л. Андреева, В.Д. Войтенко // Международный вестник в ветеринарии. – 2010. - № 1. – С. 42. 9. Андреева, Н.Л. Ростостимулирующие свойства иммуностимуляторов / Н.Л. Андреева // Тезисы. Доклады 2-ой межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» - Л., 1990. – С 32. 10. Аркадьева, Г.Е. Биологическая активность некоторых микробных полисахаридов: дис. д-ра биол. наук. - Л., 1974. 11. Аркадьева, З.А. Промышленная микробиология / З.А. Аркадьева, А.М. Безбородова, И.Н. Блохина. Под ред. Егорова. - М: Высшая школа, 1989 – 688 с. 12. Артемов, Б.Т. Влияние некоторых экологических факторов на общую резистентность и специфическую реактивность животных / Б.Т. Артемов, Л.И. Ефанова,. О.А. Манжурина // Вестник ВГАУ: научные доклады и сообщения. - Воронеж: ВГАУ, 1998. - Выпуск 1. - С. 188 – 194. 13. Асадуллина, И. Показатели гуморального иммунитета кроликов при ассоциативной болезни и после патогенетической терапии / И. Асадуллина, В. Галимова // Ветеринария сельскохозяйственных животных. - 2011.- №11.С. 27-30. 14. Асрутдинова, Р.А. Фармако-токсикологические свойства и применение гала-вета для повышения неспецифической резистентности сельскохозяйственных животных: дис. д-ра вет. наук: 06.02.03 / Асрутдинова Резиля Ахметовна. – М., 2010. – 304 с. 15. Асрутдинова, Р.А. Способ защиты здоровья поросят / Р.А. Асрутдинова // Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. - Казань.-2010.-С.25-29. 16. Асрутдинова, Р.А. Поиск средств для использования в качестве адъювантов/ Р.А. Асрутдинова, М.Г. Сагитова, А.Р. Камалиев, Ф.Ф. Сунагатов // 156 Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. – 2014. - Том 217. - С. 12 – 16. 17. Атауллаханов, Р. И. Адъюванты в составе вакцин. Сообщение 1. Микро- и нано - частицы / Р. И. Атауллаханов, Р.М. Хаитов // Иммунология. 2011. - Т. 32, - №. - С. 37 - 45. 18. Афанасьев, В. А. Влияние полисахаридов ромашки аптечной на функциональное состояние иммунной системы при охлаждении / В. А. Афанасьев, И. Л. Бровкина, Л. Г. Прокопенко // Человек и его здоровье: Сборник научных работ. - Курск, 1999. - Вып. 2. - С. 71 – 73. 19. Баринский, И.Ф. Изучение эффективности использования отечественных иммуномодуляторов, а так же сочетанного их действия со специфическими вакцинами при экспериментальных арбовирусных инфекциях / И.Ф. Баринский, А.А. Лазаренко, Л.М. Алимбарова // Иммунология. - 2012. № 4. - С.181 – 183. 20. Басова, Н.Ю. Респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота инфекционной этиологии в условиях Северного Кавказа: автореф. дис. дра ветеринарных наук: 16.00.03. / Басова Наталья Юрьевна. - Краснодар, 2002. 42с. 21. Басс-Шадхам, фракции, Х.Ф. выделенных Биологическая из лишайника активность полисахаридных Cetrariaislandica. Новые иммунореагирующие препараты и иммунологические методы / Х.Ф. БассШадхам. – Рига, 1978. - С. 9 - 14. 22. Беленький, М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Л.: Медицина, 1963. - С. 152. 23. Белоусова, М.В. Основы клинической фармакологии и рациональной фармакотерапии / Под ред. Ю.Б. Белоусова, М.В. Леонова. – М. Литтерра, 2002.– 356 с. 24. Бородин, Ю.И. Фармакологические средства, стимулирующие дренажную функцию лимфатической системы / Ю.И. Бородин, А.А. Зыков // Фармакология и токсикология. - 1989. - Т. 52. - № 2. - С. 106 – 110. 157 25. Боряев, Г.И. Влияние минеральных элементов на иммунный статус бычков/ Г.И. Боряев, А.Ф. Блинохватов, Ю.Н. Федоров [и др.] // Ветеринария.1999. - №12. - С.36 – 38. 26. Бочкарев, В.Н. Приобретенные иммунодефицитные состояния у крупного рогатого скота в зоне экологического неблагополучия / В.Н.Бочкарев [и др.] // Ветеринарная патология. - 2003 - № 2.- С.8 -14. 27. Бригадиров, Ю.Н. Применение иммуномодуляторов при вакцинации поросят против сальмонеллёза и их влияние на показатели неспецифической резистентности и биохимический статус / Ю.Н. Бригадиров, И.Т. Шапошников, О.А. Манжурина [и др.] // Ветеринарный врач. - 2012. - №5. - С.39 – 42. 28. Васильева, Е.А. Клиническая биохимия сельскохозяйственных животных / Е.А. Васильева. - М.: Россельхозиздат, 1982. - 254 с. 29. Федоров, Ю.Н. Клинико-иммунологическая характеристика и иммунокррекция иммунодефицитов животных / Ю.Н. Федоров // Ветеринария. № 2. – 2013. – С.7-8. 30. Вишневская, Т. Анализ гематологических показателей у кроликов в условиях стресса и его иммунокоррекции / Т. Вишневская // Ветеринария сельскохозяйственных животных. - 2013. - №1. - С. 13-16. 31. Власенко, В.С. Перспектива использования дискретно-динамического принципа оценки иммунной статуса в ветеринарии / В.С. Власенко, М.А. Бажин, А. Н. Новиков // Ветеринарная патология. - 2005. - С. 90 - 94. 32. Войтенко, В.Д. Аэрозоли неомицина в сочетании с иммуностимуляторами при экспериментальном колибактериозе цыплят / В.Д. Войтенко // Международный вестник ветеринарии. - СПб., 2004.- № 1. – С. 58 – 60. 33. Войтенко, В.Д. Повышение эффективности антибиотикотерапии / В.Д. Войтенко // Новые ветеринарные препараты и кормовые добавки. Экспресс - информ. 2003 – Выпуск 14 – С. 8 – 9. 158 34. Войтенко, В.Д. Повышение эффективности байтрила и диоксициклина с помощью иммуностимулятора фоспренил / В.Д. Войтенко // Международный вестник ветеринарии. – 2012. - № 1. – С. 29 – 32. 35. Войтенко, В.Д. Терапевтическая эффективность химиопрепаратов, иммуностимуляторов и пневмонина при бронхопневмонии поросят / В.Д. Войтенко // Материалы 1 международной, межвузовской научнопрактической конференции аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент в науке». СПб, 2003. С. 6 – 8. 36. Войтенко, В.Д. Целесообразность повышения эффективность химиотерапевтических средств / В.Д. Войтенко // Фармакология практическому здравоохранению. Материалы 111 съезда фармакологов России.. - 2007. - Том 7.С. 1-1641. 37. Воронин, Е. С. Профилактика диареи телят лактобактерином: Инфекционные болезни телят / Е.С. Воронин, Д.А. Девришов. - Кишинев, 2003. С.7-9. 38. Воронин, Е.С. Иммуномодуляторы в ветеринарии / Е.С. Воронин, Д.А. Дервишов // Проблемы экологии в ветеринарной медицине: тезисы, доклады всероссийской научно-технической конференции. - М., 1989. - С. 15. 39. Выдрин, В.Л. Заболеваемость скота в зависимости от условий содержания и кормления / В.Л. Выдрин [и др.] // Ветеринария. – 1998. - № 1. – C. 42. 40. Глозман, О. М. Производные декстрана. XII. Присоединение производных у аминомасляной кислоты к декстрану / О. М. Глозман, Л.A. Журенко, В.В. Шавырина [и др.] // Журнал Общей химии. - 1980. - Т. 50. № 7. - С. 1640 - 1648. 41. Гнидой, И.М. Пищевые волокна в лечении заболеваний гепатобилиарной системы у детей / И.М. Гнидой, И.И. Дихтярюк // Педиатрия. 2000. - № 5. - С. 97. 42. Гомазков, О.В. Успехи современной биологии / О.В. Гомазков //. – 1996.-Т.116. - №1. - С.60-68. 159 43. Гринберг, Т.А. Микробный синтез экзополисахаридов на СГС 2 соединениях / Т.А. Гринберг, Т.П. Пирог, Ю.Р. Малашенко. - Киев: Наукова думка, 1992. - 211 с. 44. Гугушвили, Н.Н. Динамика изменения клеточного и гуморального иммунитета у коров при беременности и после родов / Н.Н. Гугушвили // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2003. - №6. С. 64 – 66. 45. Демидов, В.К. Морфологическая характеристика лимфатических узелков и печени крыс линии Вистар, получавших полисахариды из лишайника Cetrariaislandica / В.К. Демидов // В книге: Новые иммунореагирующие препараты и иммунологические методы. - Рига, 1978.- С.17 - 18. 46. Демидов, Д.А. Послеоперационное лечение перитонита пектиносодержащим препаратом в эксперименте и клинике / Д.А. Демидов, Т.С. Попова, Т.П. Газина // Вестник восстановительной медицины: Диагностика. Оздоровление. Реабилитация: орган Ассоциации специалистов восстановительной медицины // Российский центр восстановительной медицины и курортологии МЗ РФ. - М.: Ассоциация специалистов восстановительной медицины.-2005.-№ 4. - С.47 – 52. 47. Дерябин, В.В. Выделение, состав и свойства микробных полисахаридов: дис. д-ра хим. наук: 03.00.23 / Дерябин Владимир Викторович. М., 1991.-50 с. 48. Диатроптов, системы мышей М.Е. BALA/c Морфофункциональные и C57BL/6 при изменения воздействие иммунной низкой дозы липополисахарида / М.Е. Диатроптов, С.Н.Макарова, Серебряков С.Н. [и др.] // Иммунология. - 2011. -Т. 32. - №.3.- С. 135 - 138. 49. Доверишов, Д.А. Т-активин при ОРЗ телят. Применение биотехнологии в животноводстве и вет. медицине / Д.А. Доверишов, Е.С. Воронин // Всесоюзный научно-техническая конференция: Тезисы. Доклады. - М., 1988. - С. 36-37. 160 50. Доми, И.А. Особенности клеточного иммунитета телят / И.А. Доми // Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях: Материалы Международной научно-производственной конференции, посвященной 60летию ГНУ Краснодарского НИВИ. - Краснодар, 2006. - С.395 – 397. 51. Донник, И.М. Оценка иммунологического статуса крупного рогатого скота из районов экологического неблагополучия / И.М. Донник // Экологические проблемы патологии, фармакология и терапия животных: Материалы Международного координационного совещания (19-23 мая 1997 г.): Сборник научных трудов. ВНИВИПФиТ. - Воронеж, 1997 - С.70 -71. 52. Донцов, В.И. Социально-гигиенический мониторинг здоровья населения / В. И. Донцов, И. А. Сычев, Т. Ю. Колосова // Материалы межрегиональной научно-практической конференции. Под ред. В. Г. Макаровой, В. А. Кирюшина. – Рязань, 2000. – С. 204 – 207. 53. Дорожкин В.И. Особенности естественной резистентности и обмена веществ телят под действием иммунокорректоров / В.И. Дорожкин, Р.А. Асрутдинова // Материалы 111 Съезда фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации». Санкт-Петербург.-2011.-С. 156-159. 54. Дурдыев, С.М. Гипертермия и иммунологическая реактивность каракульских овец / С.М. Дурдыев // Экологические проблемы патологии, фармакология и терапия животных: Материалы международного координационного совещания (19-23 мая 1997г.): Сборник научных трудов / ВНИВИПФиТ. – Воронеж, 1997 – С.71 – 72. 55. Духовский, А.А. Особенности контроля ассоциированных инфекционных болезней в свиновокомплексах / А.А. Духовский, А.Л. Делян // Свиноводство. – 2013. - № 3. – С. 67 – 69. 56. Емельянов, А.М. Физиологические особенности новорожденных животных В.Г. и пути повышения Серебренников // их Бюро резистентности / А.М. научно-технической Емельянов, информации 161 агропромышленного комитета Свердловской области. - Свердловск, 1990. – 109 с. 57. Ершов, Ф.И. Антивирусные препараты: Справочник / Ф. И. Ершов. М.: Медицина, 1998. - 186 с. 58. Жаров, А.В. Роль иммунодефицитов в патологии животных / А.В. Жаров // Ветеринарная патология.-2003.-№3(7). - С.7-12. 59. Жестков, В.А. Разработка антианемических препаратов на основе декстрана и изучение их в эксперименте: автореф. дис. канд. биол. наук. - ML, 1975. 60. Зайцева, М. Применение иммуномодуляторов в животноводстве / М. Зайцева, А. Деева // Животновод для всех. – 2004. - № 5. – С.26. 61. Захаров, П.Г. Профилактика и лечение болезней новорожденных телят/ П.Г. Захаров, Н.И. Петров. - С.-Петербург: «Петролазер», 2001. - 48 с. 62. Захарова, И.Я. Методы изучения микробных полисахаридов / И.Я. Захарова, Л.B. Косенко. - Киев: Наукова думка, 1982. - 192 с. 63. Звягинцева, Т.Н. Структура и иммунотропное действие 1,3;1,6-β-Dглюканов / Т.Н. Звягинцева, Н.Н. Беседнова, Л.Л. Елякова.- Владивосток: Дальнаука, 2002; - 160 с. 64. Земсков, В.М. Принципы дифференцированной иммунокоррекции / В.М. Земсков, А.М. Земсков // Иммунология.- 1996. - №3. - С.4 - 6. 65. Земсков, Н.Н. Специфическая и неспецифическая иммунокоррекция / Н.Н. Земсков // Успехи современной биологии. – 1997. – Т. 117. - № 3. – С. 261 – 267. 66. Зиганшина, М.М. Естественные антитела как ключевой элемент механизма, поддерживающего гомеостаз в иммунной системе / М.М Зиганшина, Н.В. Бовин, Г.Т. Сухих // Иммунология. – 2013. – Т. 34.- № 5. - С. 277 – 281. 67. Иванычева, Ю.Н. Исследование биологически активных полисахаридов, выделенных из лекарственного растения Geranium pretense L., применяемого при различных нарушениях обмена веществ / Ю.Н. Иванычева, Г.И. Чурилов // Материалы научной конференции Рязанского государственного 162 медицинского университета имени академика И.П. Павлова. - Рязань: РГМУ, 2005.- Ч.1.- С.20 – 22. 68. Камалиев А. Р. Исследование хронической токсичности препаратов / А.Р. Камалиев, М.Г. Сагитова, А.С. Дубовой // Материалы международной научной конференции «Научное и кадровое обеспечение инновациионного развития агропромышленного комплекса». Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана. - 2013 Т.215. -С.153-156. 69. Камалиев, А.Р. Морфологические показатели крови крыс под влиянием препаратов / А.Р. Камалиев, М.Г. Сагитова // Материалы международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны». – СПб: Издательство ФГБОУ ВПО «СПбГАВМ», 2013. – С.58 – 59. 70. Камалиев А.Р. Оценка безопасности некоторых полисахаридов / А.Р. Камалиев, М.Г. Сагитова, Р.А. Асрутдинова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана. - 2014. Т.217. - С.109-112. 71. Камалиев, А.Р. Влияние полисахарида «Гемив» на биохимический состав крови кроликов / А.Р. Камалиев, Р.А. Асрутдинова, Р.М. Ахмадеев // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию образования Иркутской государственной сельскохозяйственной академии и 10-летию первого выпуска ветеринарных врачей «Фундаментальные и прикладные исследования в ветеринарии и биотехнологии 10-11 декабря 2014, Издательство «Перо» г. Москва, 2014, С. 73-77. 72. Камалиев, А.Р. Эффективность применения полисахарида «Гемив» в ветеринарии / А.Р. Камалиев // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. – 2015. - Том 221(1). С. 102 – 104. 73. Камалиев, кроликов после А.Р. Ветеринарно-санитарная применения полисахаридного оценка качества препарата мяса «Гемив» / 163 А.Р. Камалиев, Р.А. Асрутдинова, Ф.Ф. Сунагатов, М.Г. Сагитова, Л.Ф. Якупова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. – 2015. - Том 222. - С. 87-90. 74. Кетлинский, С.А. Цитокины / С.А. Кетлинский, А.С. Симбирцев. СПб: Фолиант, 2008. - 552 с. 75. Климов, В.В. Иммунная система и основные формы иммунопатологии/ В.В. Климов, Е.Н. Кологривова, Н.А. Черевенко [и др]. - Ростов-на-Дону: Феникс, 2006. - 224 с. 76. Кондратенко, И.В. Первичные иммунодефициты / И.В. Кондратенко, А.А. Бологов. - М., 2005. – С. 35 – 83. 77. Коротков, В.М. Гомеостаз естественной резистентности организма телят / В.М.Коротков, А.Ф.Кузнецов // Физиологические и биохимические основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных, птиц и пушных зверей: сборник научных трудов. Ленинградский ветеринарный институт. - Ленинград, 1989. - С.100-102. - USSN 0135-3195. 78. Коршак, В.В. Полимеры в процессах иммобилизации и модификации природных соединений. / В.В. Коршак, М.Н. Штильман. - М.: Наука, 1984. 671 с. 79. Краснолобов, А.Г. Ранозаживляющее действие водорастворимых полисахаридов ирги обыкновенной / А.Г. Краснолобов, Е.А. Лаксаева, Е.Г. Мартынов // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. - 2010. - Выпуск 2. - С. 125 - 129. 80. Кузьмина, А.А. Разработка фитопрепаратов для профилактике и лечения заболеваний органов дыхания у детей: автореф. дис. канд. фарм. наук: 15.00.02 и 14.00.25 / Кузьмина А.А. - СПб, 2000. – 29 с. 81. Курочка, Н.Е. Влияние технологических приемов выращивания на иммунологический статус ягнят / Н.Е. Курочка, М.М. Мирсаитов // Актуальные проблемы ветеринарии в промышленном животноводстве.- Труды ВИЭВ. - М., 1984. - Т.60. - С.105 - 109. 164 82. Лазарева, Е.Б. Опыт и перспективы использования пектинов в лечебной практике / Е.Б. Лазарева, Д.Д. Меньшиков // Антибиотики и химиотерапия. 1999. - Т. 44. - № 2. - С. 37 – 40. 83. Лаксаева, Е.А. Влияние полисахарида обыкновенной ирги на кровь здоровых животных / Е.А. Лаксаева, И.А. Сычев // Российский медикобиологический вестник имени академика И.П. Павлова. - 2010. - №3.С.155 - 162. 84. Лапшин, С.А. Взаимосвязь биохимических и физиологических показателей материнского организма с внутриутробным ростом ягнят / С.А.Лапшин // Методы повышения продуктивности с.-х. животных.- Саранск, 1980. - С.124-133. 85. Лесков, В.П. Иммуностимуляторы / В.П. Лесков // Аллергия, астма и клиническая иммунология. - 1999. - №4. - С.12-25. 86. Лопатина, К.А. Растительные полисахариды в комплексной терапии перевиваемых опухолей / К.А. Лопатина, Т.Г. Разина, Е.П. Зуева [и др.] // Бюллетень эксперим. биологии и медицины. - 2006. - Приложение № 1. С. 30 - 35. 87. Лысов, В.Ф. Здоровый молодняк-основа высокопродуктивного стада / В.Ф. Лысов, Л.Г. Замарин, А.И.Чернышев. - Казань, 1988. - 165 с. 88. Макарова, фармакологическое В.Г. Полисахариды действие / В.Г. аронии Макарова черноплодной [и др.] // и их Клинико- физиологические материалы диагностики и коррекции физического состояния организма. Под ред. проф. М.Ф. Сауткина. - Рязань, 1995. - С. 83 – 86. 89. Макарова, В.Г. Фармакологическое действие полисахаридов некоторых плодовых и ягодных растений / В.Г. Макарова [и др.] // Вопросы диагностики и коррекции физического состояния организма. Под ред. проф. М.Ф. Сауткина и проф. В.А. Кирюшина.- Рязань, - 1996.- С. 83 - 87. 90. Маланин, Л.П. Ветеринарные препараты / Л.П. Маланин / Справочник. Под ред. А.Д. Третьякова. – М.: Агропромиздат, 1988. – 319. с. 165 91. Мальцева, Н.Н. Экзополисахариды олигонитрофильных бактерий как фактор, обуславливающий образование микробных сообществ почвы / Н.Н. Мальцева. - Киев: Наукова думка, 1981. - 242 с. 92. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. – Харьков: Тарсинг, 1997. – С. 243 – 246. 93. Медуницин, Н.В. Лечебные вакцины и иммунотерапия инфекционных болезней / Н.В. Медуницин // Эпидемиология и инфекционные болезни.-2002. №4. - С. 52 – 56. 94. Медуницын, Н.В. Вакцинология. / Н.В. Медуницын. - М.: Триада - Х, 1999.-272 с. 95. Мельникова, Т.И. Сравнительная иммунофармакологическая оценка растительных экстрактов с полифенольными и полисахаридными комплексами / Т.И. Мельникова, В.О. Николаев // Фармация в ХХI веке: инновации и традиции - СПб, 1999. - С.179. 96. Мкртчан, Ш.А. Рекомендации по использованию естественной резистентности животных при индустриализации животноводства в Алтайском крае / Ш.А. Мкртчан. - Барнаул, 1977. - 20с. 97. Методические указания по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияния их на репродуктивную функцию. - М., 1986.-37с. 98. Могиленко, А.Ф. Иммунный статус молодняка крупного рогатого скота при внутренних незаразных болезнях и его коррекция: автореф. дис. д-ра вет. наук: 16:00:01/ Могиленко Анатолий Филимонович. Витебский ветеринарный институт - Витебск, 1990. - С. 37. 99. Морякина, С.В. Патология репродуктивной функции у молочных коров/ С.В. Морякина // Зоотехния. - 2008. - №2. - С.16. 100. Наровлянский, А.Н. Интерфероны: Перспективные направления исследований / А.Н. Наровлянский, Ф.И. Иммунология.- 2013. - Т. 34. - №.3. - С. 168 – 175. Ершов, А.Л. Гинцбург // 166 101. Немченко, М.И. Гипогаммаглобулинемия новорожденных телят / М.И. Немченко // Ветеринария. - 1984. - №5. - С.52 - 54. 102. Никитина, Т.Н. Изучение иммуноадъювантного действия цитокинов на экспериментальных моделях / Т.Н. Никитина, Ж.И. Авдеева, Н.А. Алпатова // Цитокины и воспаление. -2010. - Т. 9. - №3. - С. 19 - 24. 103. Новикова, Н.В. Окружающая среда и здоровье человека / Н.В. Новикова. - Бишкек, 1992. – С. 81-85. 104. Обернихин, С.С. Структурно – функциональные изменения органов иммунной системы при развитии системного воспалительного ответа у потомства самок мышей, перенесших стимулирующее воздействие на иммунную систему в ранние сроки беременности / С.С. Обернихин, Н.В. Яглова // Иммунология. - 2014. - Т. 35. №.4. - С. 8 - 12. 105. Оводов, Ю.С. Полисахариды цветковых растений: структура и физиологическая активность / Ю.С. Оводов // Биоорганическая химия.- 1998. Т. 24. - № 7. - С. 483 - 501. 106. Патент 5895804 США, МПК6 С 08 G 63/48, С 08 G 63/91. Lee S. P., Pauls S.P., Solarek D.B. Термореактивные полисахариды // РЖ Химия, - реф. № ЗФ26П2000. 107. Патент РФ № 2012564, МКИ5 С 08 В 11/12. Усманов Т.И., Каримова У.Г., Сарымсаков А. Способ получения карбоксиметилцеллюлозы. // РЖ Химия реф. № 2Ф38П 1996. 108. Усманов, Т.И. Исследование распределения заместителей в карбоксиметиловых эфирах полисахаридов методом ЯМР13С. / Т.И. Усманов, У.Г. Каримова, А.А. Сарымсаков // Высокомолекулярные соединения. - 1990. Т.32, - № 6. - С. 1176-1183. 109. Пащенков, М. В. Результаты фазы I клинических испытаний иммуномодулятора полимурамила / М.В. Пащенков, Б А. Субихина, Н. М. Голубева [и др.] // Иммунология. - 2011. - Т. 32. - №. 6 - С. 315 - 321. 110. Петров, В.А. Роль микробного фактора в этилогенезе и частота одновременно протекающих субклинического мастита и эндометрита у коров / 167 В.А. Петров, А. Парахин // Материалы международной МПК. - Воронеж, 2002. С.483-485. 111. Петров, Р. В. Коррекция иммунодефицитных состояний с помощью иммуномодулятора полиоксидоний / Р. В. Петров, Р. М. Хаитов, Т. Б. Мастернак [и др.] // Аллергия, астма и клиническая иммунология. – 2009. - № 9. - С. 3 – 7. 112. Петров, Р.В. Иммунодиагностика иммунодефицитов / Р.В.Петров, Р.М.Хаитов, В.П.Пинегин // Иммунология. - 1997. - №4. – С.4-7. 113. Петров, Р.В. Конъюгированные полимер-субъединичные иммуногены и вакцины / Р.В. Петров, В.А.Кабанов, Р.М. Хаитов [и др.] // Иммунология. – 2002. – Т. 23. - №. 6 - С. 324 - 328. 114. Петров, Р.В. Конъюгированные полимер-субъединичные иммуногены и вакцины / Р.В. Петров, В.А.Кабанов, Р.М. Хаитов [и др.] // Иммунология. - 2002. - Т. 23. - №.6 - С. 324 - 328. 115. Петрянкин, повышения Ф.П. физиологического Использование статуса иммуностимуляторов молодняка / Ф.П. для Петрянкин, О.Ю. Петрова // Ветеринарный консультант - 2007. - №20. - С.18 - 20. 116. Петрянкин, Ф.П. Использование биологически активных препаратов при выращивании молодняка / Ф.П. Петрянкин, Л.В. Пыркина, И.И. Крылова // Ветеринария. – 1994. - № 4. – С. 13 – 14. 117. Плященко, С.И. Получение и выращивание здоровых телят / С.И. Плященко, В.Т. Сидоров, А.Ф. Трофимов.- Минск: Ураджай, 1990. - 222 с. 118. Придыбайло, Н. Д. Иммунодефициты у сельскохозяйственных животных и птиц. Профилактика и лечение их иммуностимуляторами / Н. Д. Придыбайло. - М.: ВАСХНИЛ, 1991. - 43 с. 119. Придыбайло, Н.Д. Иммунодефициты у сельскохозяйственных животных, профилактика и лечение их иммуномодуляторами: Обзорная информация / Н.Д. Придыбайло. - ВНИИТИ, Агропром - М.,1991. - 44 с. 120. Прийма, О.Б. Неферментные катионные белки лейкоцитов переферической крови / О.Б. Прийма. – Клиническая медицина, 1997. - № 2. – С. 4 – 5. 168 121. Ратников, В.Я. Совершенствование способов защиты иммунной системы при медикаментозных иммуносупрессиях / В.Я. Ратников, Г.М. Рассохина // Диагностика, лечение и профилактика инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария: Материалы юбилейной научной конференции, посвященной 50-летию Центра военно-технических проблем биологической защиты НИИ микробиологии МО РФ, 30 апреля - 1 июня 1999 г. - Екатеринбург, 1999. - С.208-209. 122. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей редакцией члена- корреспондента РАМН, профессора Р.У. Хабриева. – 2-изд., перераб. и доп. - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. – 832 с. 123. Рустамов, Я.И. Особенности технологии синтеза натрий карбоксиметилцеллюлозы из различных сырьевых материалов / Я.И. Рустамов, Ф.М. Садыков, Г.А. Карамамедов [и др.] // Химическая промышленность. 1997. - №9. - С 606 – 610. 124. Рыбченко, И.Н. Научные и практические аспекты применения иммуностимулирующих препаратов для повышения иммунной реактивности животных / И.Н. Рыбченко // Ветеринарный врач. - 2011.- № 5. - С. 37. 125. Сагитова, М.Г. Гигиеническое обоснование применения полисахарида «Грамо» в птицеводстве: дис. кан. биол. наук: 06.02.05/ Сагитова Минзиля Габдулхаевна. - Казань, 2015. - 184 с. 126. Сагитова, М.Г. Определение острой токсичности препаратов / М.Г. Сагитова, А.Р. Камалиев, Р.А. Асрутдинова и [др.] // Материалы международной научной конференции «Научное и кадровое обеспечение инновационного развития агропромышленного комплекса» Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. - 2013. - Т.215. - С.298 - 302. 127. Сагитова, М.Г. Влияние препаратов на биохимические показатели сыворотки крови лабораторных животных / М.Г. Сагитова, А.Р. Камалиев // Материалы международной научной конференции студентов, аспирантов и 169 молодых ученых «Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны». – СПб: Издательство ФГБОУ ВПО «СПбГАВМ», 2013. – С.116 –118. 128. Сагитова, М.Г. Влияние соединения «Грамо» в составе образцов инактивированной вакцины на эффективность иммунизации птицы против ньюкаслской болезни / М.Г. Сагитова, А.Р. Камалиев, Э.Д. Джавадов и [др.] // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана.- 2014. - Т. 217. - С.233-236. 129. Серебрянная, Н. Б. Нуклеотиды как регуляторы иммунного ответа / Н. Б. Серебрянная // Иммунология. - 2010.-Т.31. - №.3. - С. 273 - 281. 130. Середа, А.Д. Иммуностимуляторы, классификация, характеристика, область применения: (Обзор) / А.Д. Середа, В.С. Кропотов, М.М. Зубаиров // Сельскохозяйственная биология. – 2001. - № 4. – С. 83 – 93. 131. Сколов, В.Д. Применение аэрозолей неомицина и продигиозана при пуллорозе – тифе птиц / В.Д. Сколов, В.В. Шорников Ф.С. Киржаев // Тезисы третьей Всесоюзной конференции по аэрозолям. - М., 1977. - С. 57 - 58. 132. Смирнов, А.М. Научно-методологические аспекты исследования токсических свойств фармакологических лекарственных средств для животных / А.М Смирнов, В.И. Дорожкин. - М., 2008. - С. 120. 133. Соколов, В.Д. Иммуностимуляторы в ветеринарии / В.Д. Соколов, Н.Л. Андреева, А.В. Соколов// Ветеринария. - 1992. - № 7. - 8. - С. 49-50. 134. Страус, Ш.Е. Медицина, основанная на доказательствах / Ш.Е. Страус [и др.]. – М.: ГЭОТАР, 2010. – 320 с. 135. Смирнова, О.В. Определение бактерицидной активности сыворотки крови методом фотонефелометрии / О.В. Смирнова, Т.А. Кузьмина // ЖМЭИ.1966. - № 4. – С. 8 – 11. 136. Сычев, И. А. Иммуннокоррегирующее, антианемическое и адаптогенное действие полисахаридов из донника лекарственного / И. А. Сычев, А. А. Подколзин, В. И. Донцов [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 1996. – № 6. –С. 661 – 663. 170 137. Сычев, И. А. Экспериментальное изучение антиоксидантной активности полисахаридов донника желтого и их действия на Na+,K+-АТФ / И. А. Сычев, И. А. Донцов, Т. Ю. Колосова // Материалы межрегиональной научно-практической конференции «Социально-гигиенический мониторинг здоровья населения». – Рязань, 2000. – С. 204 – 207. 138. Сычев, И.А. Влияние полисахарида Донника желтого пектин на некоторые свойства иммунной системы животных / И.А. Сычев // Российский медико-биологический вестник имени Академика И.П. Павлова. - Рязань: РГМУ, 2004. - № 1 - 2. - С. 75 – 82. 139. Сычев, И.А. Действие полисахаридов донника желтого на систему кроветворения в норме и при патологии/ И.А. Сычев, В.М. Смирнов, Г.В. Порядин // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. - 2007.- № 1. - С. 50 – 58. 140. Сычев, И.А. Действие полисахаридов донника желтого на систему крови облученных животных / И.А. Сычев, В.М. Смирнов, Т.Ю. Колосова // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. - 2006. - № 1. - С. 51 – 55. 141. Сычев, И.А. Изучение противовоспалительного действия полисахаридов Донника желтого / И.А. Сычев, В.М. Смирнов, Т.Ю. Колосова // Российский медико-биологический вестник имени Академика И.П. Павлова. Рязань: РГМУ, 2003. - № 1 - 2. - С. 58 – 63. 142. Сычев, И.А. Лечебные свойства препаратов водорастворимых полисахаридов из растений донника желтого / И.А. Сычев, А.К. Рачков // Информационный Листок ЦНТИ г. Рязани. - 1993. - № 169. – 3 с. 143. Сычев, И.А. Механизм повышения неспецифической резистентности организма под действием полисахарида Донника жёлтого / И.А. Сычев, В.М. Смирнов, Г.В. Порядин // Монография. - Рязань, 2006. – С. 13. 144. Сычев, И.А. Механизм противовоспалительного действия полисахаридов Донника желтого / И.А. Сычев // Российский медико- 171 биологический вестник имени академика И.П. Павлова. - 2008. - №2. С.95 – 101. 145. Сунагатов, Ф.Ф. Исследование токсических свойств препаратов «Гемив» и «Гидамир» / Ф.Ф. Сунагатов, А.Р. Камалиев, Р.А. Асрутдинова, М.Г. Сагитова // Материалы VI международной научно-практической конференции «Актуальные направления фундаментальных и прикладных исследований», 22 - 23 июня 2015 г., North Charleston, USA. - Том 2. - С. 18-21. 146. Топурия, Л.Ю. Структурно-функциональная и клиническая оценка влияния иммуномодуляторов природного происхождения на организм животных: автореф. дис. д-ра биол. наук: 16.00.02. / Лариса Юрьевна Топурия – Оренбург, 2008. - 46 с. 147. Трошева, Г.А. Взаимосвязь факторов естественной устойчивости организма птиц и иммунитета при вакцинации / Г.А. Трошева, Н.Р. Есакова // Ветеринария.-2000. - №8. - С.24-27. 148. Туманян, М.А. Успехи иммунологии / М.А. Туманян, А.П. Дуплищева, М.С. Гордеева. – М., 1977. 149. Турова, А.Д. Биологическая активность полисахаридов растительного происхождения / А.Д. Турова, А.С. Гладких // Фармакология и токсикология.- 1965. - Т. 28. - Выпуск 4. - С. 498 – 504. 150. животных Урбан, В.П. Иммунные и стимулирующие препараты из крови и перспективны их применения / В.П. Урбан // Новые фармакологические средства в ветеринарии: тезисы, доклады 1-й межвузовской научно-профессиональной конференции - Ленинград, 1989. - С.68-69. 151. Федоров, Ю.Н. Иммунодефицит домашних животных / Ю.Н. Федоров, О.А. Верховский. – М., 1996. - 94 с. 152. Федоров, Ю.Н. Иммунологический фактор как причина желудочнокишечных заболеваний у телят / Ю.Н. Федоров // Предложения ученых по профилактике желудочно-кишечных болезней телят до месячного возраста: материалы круглого стола отделения Россельхозакадемии. – Москва. - 2000. - С. 36 – 37. ветеринарной медицины 172 153. Федоров, иммунокоррекция Ю.Н. Клинико-иммунологическая иммунодефицитов животных / характеристика Ю.Н. Федоров и // Ветеринария. – 2013. - № 2. – С.3, 7 – 8. 154. Хазиахметов, Ф.С. Основные результаты использования пробиотиков серии Витафорт при выращивании телят / Ф.С. Хазиахметов, А.А. Башаров // Вестник БГАУ. - № 2. - 2012. - С. 17-19. 155. Хаитов Р.М. Основные представления об иммунотропных лекарственных средствах / Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология.- 1996. № 1. - С. 4 – 9. 156. Хаитов, Р.М. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение / Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология.- 2003. - № 4. - Т 24. С. 196 – 203. 157. Чекулаева, Г.Ю. Выделение и химико-биологическое исследование полисахарида из лекарственного сырья / Г.Ю. Чекулаева, Г.И. Чурилов // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2002. - № 3 - 4. - С. 95 – 100. 158. Чурилов, водорастворимых Г.И. Исследование полисахаридов герани моносахаридного луговой / Г.И. состава Чурилов, Ю.Н. Иванычева // Материалы ежегодной научной конференции Рязанского государственного медицинского университета имени академика И.П. Павлова. Рязань: РязГМУ,2006. - Ч.1. - С. 16 – 18. 159. Шуканов, А.А. К проблеме иммунодефицита и повышения резистентности животных / А.А. Шуканов, Н.К. Кириллов, Ф.П. Петрянкин // Известия Национальной академии наук и искусств Чувашской республики. Чебоксары, - 1996.- № 4. - С.43 – 53. 160. Яковлев, Ю.Ю. Иммуномодулирующие свойства глутоксима свиней с парвовирусной инъекцией: автореф. дис. канд. ветеринар. наук: 16.00.04 / Яковлев Юрий Юрьевич. - Троицк,2004. – 18 с. 161. Altman, J.D. Phenotypic analysis of antigen-specific T lymphocytes / J.D. Altman, P.A.Moss, P.J. Gouldre [et all.] // Science. - 1996. - N. 274. - Р. 9 – 6. 173 162. Bamford, С. H. Studies of the esterify-cation of dextran: Routes to bioactive polymers and graft copolymers / С. H. Bamford, I. P. Middleton, К. G. Al-Lamec // Polymer. - 1986. - V. 27. - N- 12. P. 1981-1985. 163. Belokrinitskaya T.E., / Effect of erythrocyte polypeptides on the eritropoiesis system and immunity in vivo and in vitro / T.E. Belokrinitskaya, B. I. Kuznik, V. Kh. Khavinson // Molecular mechanisms to modern medicine. Montreal. – 1994. -Р. 120. 164. Betss, M.R. Sensitive and viable identification of antigen-specific CD8+ T cells by a flow cytometric assay for degranulation / M.R. Betss, J.M.Brenchley, D.A.Price [et all.] // J. Immunol. Methods. - 2003; 281: - P. 65 – 78. 165. Brewer, J. M. How do aluminum adjuvants work? / J. Brewer // Immunol. Lett. – 2006. – Vol. 102. - N 1. – P. 10 – 15. 166. Conley, M. E. Diagnostic criteria for primary immunodeficiency’s. PAGID (Pan-American Group for Immunodeficiency) and ESID (European Society for Immunodeficiencies) / M. E. Conley, L. D. Notarangelo, A. Elzioni // Clin. Immunol. – 1999. – Vol. 93. – P. 190 – 197. 167. Fraser, C. K. Impoving vaccines by incorporating immunological coadyuvants / C. K. Fraser, K. R. Diener, M. P Brown [et all.] // Expert Rev. Vaccines. – 2007. – Vol. 6. – P. 559 – 578. 168. Furusawa, E. / Antitumour potential of a polysacchariderich substance from the fruit juice of Morinda citrifolia (Noni) on sarcoma 180 ascites tumour in mice. // E. Furusawa, A.Hirasumi, S. Story [et all]. // Phytother. Res. - 2003. - V. 17. - № 10. P. 1158 – 1164. 169. Geha, R. S. Primary immunodeficiency diseases: an update from the International Union of Immunological Societies Primary Immunodeficiency Diseases Classification Committee / R. S. Geha, L. D. Notarangelo, J. L. Casanova [et all.] // J. Allergy Clin. Immunol. – 2007. Vol. 120. – P. 776 – 794. 170. Heinze, Т. Studies on the synthesis and characterization of carboxymethylcellulose / Т. Heinze, K. Pfeiffer // Appl. Macromol. Chem. and Phys. 1999. - № 266. - P. 37 - 35. 174 171. Hem, S. L. Relationship Between physical and chemical properties of aluminium containing adjuvants and immunopotentiation / S. L. Hem, H. Hogen Esch// Expert Rev. Vaccines. – 2007. – Vol. 6. – P. 685 – 698. 172. HogenEsch, H. Mechanisms of stimulation of the immune response by aluminium adjuvants / H. HogenEsch // Vaccine. – 2002. – Vol. 20. - Suppl. 3. – S34-S39. 173. Ingolfsdottin, K. In vitro inhibition of 5-lipoxygenase by protolichesterinic acid from Cetraria islandica / K. Ingolfsdottin, W. Breu, S. Huneek, [et. all.] // Phytomedicine. - 1994 a. - № 1. - P. 187 – 191. 174. Kilpatric, D.C. Immunological aspects of the potential role of dietary carbohydrates and lectins in human health / D.C. Kilpatric // Eur. J. Nutr.- 1999. Vol. 38. - P. 107 – 117. 175. Koide, S.S. Chitin-chitosan: properties, benefits and risks / S.S. Koide // Nutr.Res. - 1998. - Vol. 18, - № 6.-P. 1091 – 1101. 176. Kono, H. How dying cells alert the immune system to danger / H. Kono, K. L. Rock // Annu. Rev. Immun. – 2008. – Vol. 8. – P. 279 – 289. 177. Lahaye, M. Seaweed dietary fibers: structure, physicochemical and biological properties relevant to intestinal physiology / M. Lahaye, B. Kaeffer // Sciences and Aliments. - 1997. - Vol. 17. - P. 563 – 584. 178. Lawery, S.D. Biological role of lichen substances / S.D. Lawery // Bryologist. - 1986. - V 89, 2. - P 112 – 122. 179. Lechner, M.D. Biodegradable crosslinked polysaccharide absorbent for aqueous solutions and body fluids / M.D. Lechner, W. Lazik // Chem. Abstr., 1998. – P 129: 97265h. 180. McAuslan, B.R. Enhanced in vitro fibrinolytic activity of immobilized plasmin on collagen beads / B.R. McAuslan, G. Johnson // J. Biomed. Mater. Res. 1987. -V.21. - N 7. - P. 921 – 935. 181. Mutwiri, G. Innate immunity and new adjuvants / G. Mutwiri, V.Gerdts, M. Lopez [et all.] // Rev. Scient. Techn. ( Int.Office Epizoot.). – 2007. – Vol. 26 N 1. – P. 147 – 156. 175 182. Niemela, K. Identification of the products of hydrolysis of carboxymetylcellulose / K. Niemela, E. Sjostrom // Carbohydrate Research. 1988. V. 180. - P. 43 - 52. 183. Ning, L. Enhancement of the antioxidative potential of heart, liver, spleen and kidney cells and erythrocytes of mice by the polysaccharide krestin / L. Ning, Z. Mei, C. Yuan // Med. Sci. Res. - 1996. - Vol. 24, Iss 9. - P. 615 – 616. 184. Pashenkov, M.V. Detection and characterization of cytolytic CD8+ and CD4+ T cells / M.V. Pashenkov, N.E. Murugina, V.V. Murugin [et all.] // Immunology Russ. 2010; 31: P. 4-12. 185. Popov, S.V. Effects of polysaccharides from Silen vulgaris on phagocytes / S.V. Popov, G.Yu. Popova, R.G. Ovodova // Int. J. Immunopharmacol. - 1999. - Vol. 21. - P. 617 – 624. 186. Quan, J. Производство и возможности ипользования модифицированной карбоксиметил гемицеллюлозы / Jinying Quan, Peiqing Wang // Linchan huaxue yu gongye - Chem. And Ind. Forest Prod.- 1997. - N4. - C. 25-31. 187. Ramon, G. Sur la toxine or surranatoxine diphtheriques / Ramon G. // Ann. Inst. Pasture. – 1924. - Vol. 38. – P. 1 – 7. 188. Rock, K. L. The inflammatory response to cell death / K. L. Rock, H. Kono // Annu. Rev. Pathol.– 2008. – Vol. 3. – P. 99 – 126. 189. Rodriguez-Sosa, M. Macrophage Migration Inhibitory Factor plays a critical role in mediating protection against the helminth parasite taenia crassiceps / M. Rodriguez-Sosa, L. E. Rosas, J. R.David [et all.] // Infect. Immun. - 2003; - N. 71: 1247 – 1254. 190. Rosha de Souza, M.C. Antioxidant activities of sulfated polysaccharides from brown and red seaweeds / M.C. Rosha de Souza, C.T. Marques, C.M. Guerra Dore // J. Appl. Phycol. - 2007. - Vol. 19. - P. 153 – 160. 191. Rubio, V. Ex vivo identification, isolation and analysis of tumorcytolytic T cells / V. Rubio, T.B. Stuge, N. Singh [et all.] // Nat. Med. – 2003. - N.9.- Р. 1377-82. 192. Scheibenbogen, C. Quantitation of antigen-reactive T cells in peripheral blood by IFNgamma-ELISPOT assay and chromiumrelease assay: a four-centre 176 comparative trial / C. Scheibenbogen, P. Romero, L. Rivoltini [et all.] // J. Immunol. Methods. – 2000. - N. 244. - P. 81-89. 193. Schlueter, C. Angiogenetic signaling through hypoxia: HMGBI: an angiogenetic switch molecule / C. Schlueter, H. Weber, B. Meyer [et all.] // Am. J. Pathol. – 2005. – Vol. 166. – P. 1259 – 1263. 194. Simionescu, C.I. Polymeres bioactifs. IX. Derives de la cellulose des groupements reactifs / C.I. Simionescu, S. Dumitriu, J. Rouzaher // Cellul. Chem. And Tech-nol. - 1982. - V. 16. - N1. - P. 67-75. 195. Sutherland, J.W. Microbial exopolysaccharides. Industrial polymers patent and future potential / J.W. Sutherland, D.C. Ellwood // Microbial. Technol. Curr. State Future Prospects: 29 Soc. Gen. Microbial. Cambridge etc., 1979. - P. 107-150. 196. Thakur, B.R. Chemistry and uses of pectin – a review / B.R. Thakur, R.K. Singh, A.K. Handa // Critical Rev. Food Sci. Nutr. - 1997. - Vol. 37.- № 1. P. 47 – 73. 197. Tompkins, W.A. Immunimodulation and therapeutic effects of the oral use of interferon – alpha: mechanism of action / W.A. Tompkins // J. Interferon Cytokine Res. - 1999. - N.19(8). - Р. 817 – 828. 198. Ulmer, J. B. Vaccine manufacturing: challenges and solutions / J. B. Ulmer, U. Valley, R. Rappuoli // Nat. Biotechnol. – 2006. – Vol. 24. – P. 1377 – 1383. 199. Vlad, A. Immobilization of urease on KM-cellulose / A. Vlad, D. Florin, O. Severian [ et all.] // Biotechnol. and Bioengin. -1989. -V. 34, - N 3. - P. 283 – 290. 200. Werner, G.H., Immunostimulating agents: what next? A review of their present and potential applications / G.H. Werner, P. Jolles // Eur. J. Immunol.-1996. Vol. 242. - P. 1 – 19. 201. White, B. T. Effects of temperature stress on growth performance and bacon quality in grow-finish pigs housed at two densities / B.T. White // Journal of Animal Science. – 2008. - Vol.86, Iss.8.- P.1789 - 1798. 177 202. Xu, J. Immobilization of trypsin on sefarose derivatives using various covalent bonding methods / J. Xu, S. Qi, Zh. Yyan // Shengwu Gongcheng Xuebao. 1993. - V.9. - №1. - P. 69 – 73. 203. Zeller, S. Analysis of position of O-CM-groops in partially O-carboxymethyledcellulose by the reductive-cleavage method / S.G. Zeller, G.W. Griesgraber, G.R. Grau // Carbohydrate Research. - 1991. - V.211. - P. 41-45. 178 СПИСОК ИЛЛЮСТРИРОВАННОГО МАТЕРИАЛА Рисунки: 1 Схема основных направлений и результатов проведенных исследований (с. 56) 2 Показатель АлАт в сыворотке крови (с. 71) 3 Показатель АсАт в сыворотке крови (с. 71) 4 Количество общего белка в сыворотке крови крыс (с. 72) 5 Содержание альбуминов в сыворотке крови (с. 73) 6 Содержание α-глобулинов в сыворотке крови (с. 73) 7 Содержание β-глобулинов в сыворотке крови (с. 74) 8 Содержание γ-глобулинов в сыворотке крови (с. 74) 9 Количество Т-лимфоцитов в крови кроликов (с. 101) 10 Содержание В-лимфоцитов в крови кроликов (с. 101) 11 Миниферма конструкции И.Н. Михайлова (с. 104) 12 Изменение массы тела кроликов после вакцинации с применением полисахаридного препарата (с. 111) 13 Селезенка кролика через 2 недели после вакцинации с полисахаридным препаратом «Гемив» (с. 116) 14 Селезенка кролика опытной группы через 3 недели после вакцинации с полисахаридным препаратом «Гемив» (с. 118) 15 Печень кролика опытной группы через 2 недели после вакцинации с полисахаридным препаратом «Гемив» (с. 120) 16 Печень кролика опытной группы через 3 недели после вакцинации с полисахаридным препаратом «Гемив» (с. 122) 17 Почки кролика опытной группы через 2 недели после вакцинации с полисахаридным препаратом «Гемив» (с. 123) 18 Почки кролика опытной группы через 3 недели после вакцинации с полисахаридным препаратом «Гемив» (с. 125) 179 19 Селезенка кролика в контрольной группе на 2 недели исследования (с. 126) 20 Селезенка кролика в контрольной группе на 3 недели исследования (с. 129) 21 Печень в контрольной группе без применения полисахаридного препарата «Гемив» на 2 недели (с. 130) 22 Печень в контрольной группе без применения полисахаридного препарата «Гемив» на 3 недели (с. 131) 23 Почка в контрольной группе без применения полисахаридного препарата «Гемив» на 2 недели (с. 133) 24 Почка в контрольной группе без применения полисахаридного препарата «Гемив» на 3 недели исследования (с. 134) 25 Селезенка кролика интактной группы (с. 136) 26 Печень кролика интактной группы (с. 137) 27 Почка кролика интактной группы (с. 138) Таблицы: 1 Перечень проведенных исследований (с. 56 – 57) 2 Изменение массы органов белых крыс при применении максимально вводимых доз полисахаридного препарата «Гемив» (с. 64) 3 Определение кумулятивных свойств полисахаридного препарата «Гемив» для белых крыс при суммарном воздействии (с. 65) 4 Изменение массы тела крыс при длительном введении полисахаридного препарата (с. 67) 5 Морфологические показатели крови крыс при применении разных доз полисахаридного препарата «Гемив» (с. 68 – 69) 6 Эмбриотоксическое действие полисахаридного препарата «Гемив» (с. 7 Влияние полисахаридного препарата «Гемив» на воспроизводительную 78) функцию белых крыс (с. 78 – 79) 180 8 Изменение живой массы крыс при иммунодефиците с применением разных доз полисахаридного препарата «Гемив» (с. 81) 9 Морфологические показатели крови крыс при применении разных доз полисахаридного препарата «Гемив» на фоне иммунодефицита (с. 82 – 83) 10 Живая масса кроликов при иммунодефиците с применением разных доз полисахаридного препарата «Гемив» (с. 85) 11 Морфологические показатели крови кроликов при применении разных доз полисахаридного препарата «Гемив» на фоне иммунодефицита (с. 86 – 87) 12 Влияние разных режимов применения полисахаридного препарата «Гемив» при моделированном иммунодефиците на показатели крови крыс (с. 90 – 91) 13 Морфологические показатели крови кроликов при применении полисахаридного препарата «Гемив» на фоне иммунодефицита (с. 94 – 96) 14 Биохимические показатели крови кроликов при сравнительной оценке иммуностимулятора циклоферон и полисахаридного препарата «Гемив» на фоне иммунодефицита (с. 97 – 99) 15 Состав и питательность комбикорма концентрата № ПЗК - 90 - 1 для откармливания молодняка кроликов (с. 105 – 106) 16 Изменение титра антител после вакцинации кроликов против сальмонеллеза (с. 108) 17 Биохимические показатели сыворотки крови после вакцинации кроликов против сальмонеллеза (с. 109 – 110) 18 Результаты физико-химических исследований и бактериоскопии мяса подопытных кроликов (с. 112 – 113) 19 Динамика массы тела крысят-отъемышей при скармливании мяса кроликов (с. 114 – 115 ) 181 ПРИЛОЖЕНИЯ 182 Приложение A 183 Приложение А 184 Приложение А 185 Приложение Б 186 Приложение В 187 Приложение Г 188 Приложение Д 189 Приложение Д 190 Приложение Е 191 Приложение Ж 192 Приложение Ж 193 Приложение Ж
