Разработка методики выделения стволовых клеток из жировой

УДК
А.С.Бекряшева 1,Калашникова Е.А2, Перова Н.В2, В.И.Севастьянов1,2
1
Московский физико-технический институт (государственный университет)
2
ФГУ “НИИ трансплантологии и искусственных органов Росздрава”
РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ВЫДЕЛЕНИЯ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ИЗ
ЖИРОВОЙ ТКАНИ ЧЕЛОВЕКА
В последнее время во всем мире все большее внимание уделяется
использованию стволовых клеток (СК) в терапии различных заболеваний [1].
Наиболее привлекательными для использования в клинической медицине
кажутся эмбриональные СК, поскольку они наименее дифференцированы. Но
использование этих клеток связано с высоким риском развития злокачественных
опухолей, иммунных осложнений, реакции отторжения, высокой вероятностью
инфицирования, этическими проблемами и запрещено во многих странах мира [2].
В отличие от эмбриональных, СК, выделяемые из различных источников
постнатального происхождения или взрослого организма, обладают ограниченным
потенциалом дифференцировки, но устраняют иммунологические и этические
проблемы, поэтому являются более приемлемым для клинического использования
материалом. Согласно современным данным, практически все известные тканевые
системы организма содержат популяции СК [1]. Идеальный источник СК должен
обеспечивать простую технологию выделения клеток, давать достаточный выход
клеток, а при его заборе – минимально травмировать пациента.
В 2001 году ученые впервые обнаружили в жировой ткани стволовые клетки [3].
Дальнейшие исследования показали, что эти клетки способны дифференцироваться в
клетки адипогенной, хондрогенной, миогенной, остеогенной и нейрогенной линий [35]. К преимуществам этого источника СК относят малоинвазивный (в сравнении с
биопсией костного мозга) способ получения и малую контаминированность другими
видами клеток [5]. Таким образом, жировая ткань может выступать в качестве
доступного источника СК.
Однако большая часть публикаций касается получению СК из жировой ткани
экспериментальных животных. Более того, даже в этих случаях нет детальных
протоколов выделения СК. В связи с этим, основной целью данной работы являлось
разработка технологии получения СК из адипоцитной ткани и аппробация протокола на
жировой ткани человека.
Источником СК были образцы сальника и подкожно-жировой клетчатки
(операционный материал) пациента 40 лет, страдающим диабетом I типа ФГУ
НИИТиИО Росздрава. Клетки культивировали в течение 1-9 пассажей. Было
установлено, что за один пассаж популяция увеличивается в среднем в 2 раза, что
хорошо согласуется с литературными данными [4, 5]. На четвертый день
культивирования количество клеток было 3,68 млн.
Полученные клетки были фенотипически гетерогенны, что может быть
обусловлено наличием в культуре прогениторных клеток разных типов, что также
отмечалось другими исследователями. На более поздних пассажах различия в
морфологии СК исчезают [5].
Из подкожно-жировой клетчатки выход клеток был мал, и нам не удалось
получить культуру СК.
В результате данной работы был проведен сравнительный анализ методов
выделения стволовых клеток из жировой ткани лабораторных животных и человека;
разработан оригинальный протокол выделения стволовых клеток из жировой ткани
человека; проведена апробация предложенной технологии выделения стволовых клеток
из ткани сальника и подкожно-жировой клетчатки.
Литература
1. М.А. Пальцев, А.А. Иванов, В.Н. Смирнов, Ю.А. Романов “Стволовые клетки в
современной медицине: настоящее и будущее”, Молекулярная медицина. 2006,
№2. С. 5-9.
2. В.С. Репин “Эмбриональная стволовая клетка (от фундаментальной биологии к
медицине)”, Пат. физиол. и эксп. тер.- 2001; 2: С. 3-8.
3. Patricia A. Zuk, Min Zhu, Hiroshi Mizuno, Jerry Huang, William Futrell, Adam J.
Katz, Prosper Benhaim, Peteer Lorenz, Marc H. Hedrik. “Maltilineage cells from
human adipose tissue: implications for cell- based therapies”, Tissue engineering,
2001, Vol.7, pp. 211-228.
4. Patricia A. Zuk, Min Zhu, Peter Ashjian, Daniel A. De Ugarte, Jerry I. Huang, Hiroshi
Mizuno, Zeni C/ Alfonso, John K. Fraser, Prosper Benhaim, and Marc H. Hedrik.
“Human adipose tissue is a solurse of multipotent stem cells”, Molecular Biology of
the Cell, 2002, Vol. 13, 4279-4295.
5. М.А. Лагарькова, А.В. Лякишева, Е.С. Филоненко, П.Ю. Волчков, К.В. Рубцова,
Ю.В. Герасимов, Р.Х. Чайлахян, С.Л. Киселев “Характеристика мезенхимальных
стволовых клеток костного мозга человека, выделенных методом
иммуномагнитной селекции”, Клеточные технологии в биологии и медицине,
2006, №1, С. 3 – 7.