Цитологическое исследование пунктата печени при

БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
Цитологическое исследование пунктата печени
при пироплазмозе у собак
М.С. Кривко, аспирант, Л.П. Славинская, соискатель,
Н.В. Ярошенко, соискатель, ГНУ СКЗНИВИ,
В период реконвалесценции после пироплаз
моза, когда имеют место репаративные процессы,
количество двуядерных клеток увеличивается.
При окраске гемокрафиксом цитоплазма пече
ночных клеток окрашивается в светлолиловый
цвет, в синеватый или в светлофиолетовый.
Протоплазма окрашена неравномерно. Различие
в окраске протоплазмы печеночной клетки, преж
де всего, может быть объяснено физиологическим
состоянием клетки, однако чаще это бывает свя
зано с дистрофическими процессами в клетках.
При легком клиническом течении пироплаз
моза в большинстве своем гепатоциты выглядят
как нормальные, но в их цитоплазме отмечается
незначительная вакуолизация. Возможны измене
ния размеров на 2–4 мкм самих клеток и разме
ров ядра на 1–3 мкм, изменения ядерноцито
плазматического соотношения в пользу ядра, не
значительная метахромазия, нарушение окраски
цитоплазмы и ядра. Отмечаются начальные про
явления дегенерации, протоплазма печеночной
клетки приобретает гомогенную оксифильную
окраску. Иногда протоплазма содержит вакуоли.
По мере утяжеления течения заболевания про
грессирует жировая дистрофия, в продвинутых
случаях число вакуолизированных клеток резко
увеличено.
Печеночные клетки нормального органа со
держат глыбки желчного пигмента – билируби
на, но при пироплазмозе его количество резко
увеличивается даже при легком течении заболе
вания, и билирубин присутствует практически во
всех клетках.
При пироплазмозе средней тяжести гепатоци
ты значительно изменены. В них наблюдается
выраженная вакуолизация цитоплазмы, харак
терны изменения размеров ядра на 1–3 мкм,
изменение ядерноцитоплазматического соотно
шения в сторону цитоплазмы (40–30%), то есть
наблюдается кариопикноз. Возможен и противо
положный процесс – плохое прокрашивание ядра
с одновременным его увеличением, что характер
но для кариолизиса. Выражена метахромазия,
нарушения окраски цитоплазмы и ядра. Возмож
на сильная вакуолизация вплоть до полного от
сутствия ее (контурируется только мембрана) при
наличии нормального ядра. В таком ядре при
пироплазмозе средней тяжести характерны изме
нения не только со стороны цитоплазмы, но и со
стороны ядра. Ядра клеток разного размера, от
гигантских – более 20 мкм до пикнотических,
резко уменьшенных – до 1–2 мкм. Очень часто
визуализируются ядра разной формы, от оваль
ных до треугольных. Нормальная цитоплазма при
В настоящее время возросла актуальность
вопросов пато и морфогенеза гепатитов у собак
паразитарной этиологии, поскольку с этим свя
зано повышение эффективности диагностики и
лечения [1, 2].
При выяснении вопросов тяжести течения пи
роплазмоза нами особое внимание уделялось про
ведению цитологического исследования печени.
Цель работы установить морфологические
изменения в печени при пироплазмозе разной
степени тяжести.
Материал и методы исследования. После уточ
нения топографии печени относительно костных
образований (ребра, позвонки) проводили пунк
цию и забор клеточного материала паренхимы.
Одной рукой кожу смещали в сторону, другой
производили прокол и вводили иглу перпендику
лярно коже на нужную глубину, после чего про
изводили аспирацию шприцем, при этом незна
чительно смещали вперед и назад.
Из полученного материала делали мазок, ко
торый окрашивали готовым красителем «Гемок
рафиксом». При малом увеличении находили
монослойные участки, а затем мазок исследова
ли при большом увеличении. В цитопунктате
печени обращали внимание на клеточный состав
(эритроциты, нейтрофилы, эозинофилы, эпители
альные клетки, макрофаги, атипичные клетки,
бактерии); однородность клеток одного класса
(размер и форма клеток, соотношение размера
цитоплазмы и ядра, форма, восприимчивость к
красителям, размер ядра, различия в форме и раз
мере ядер, наличие множественных ядер, их де
формация, форма и размер ядрышек, наличие ва
куолей и митозов). Изменения цитологической
картины печени при пироплазмозе сравнивали с
цитологической картиной печени здоровых
животных.
Результаты исследования. При микроскопичес
ком исследовании пунктата нормальной печени
в поле зрения представляется однородная карти
на, состоящая почти сплошь из отдельных кле
ток печеночной паренхимы. Клетки печени одно
образны в размерах. Форма клеток полигональ
ная, реже приближающаяся к округлой или слег
ка вытянутой. Ядро округлое, сравнительно с
протоплазмой малых размеров, часто расположе
но эксцентрически. В норме до 20% печеночных
клеток имеют два ядра; двуядерность печеночных
клеток следует рассматривать как проявление ре
генерации, свойственной и нормальному органу.
97
БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
Цитограмма печени у собак, больных гепатитом
Показатели
Нормальные печеночные
клетки с одним ядром, %
Двуядерные гепатоциты, %
Многоядерные гепатоциты, %
Дегенеративные печеночные
клетки, %
Животные, больные пироплазмозом
Клинически
здоровые
животные
легкое
среднее
тяжелое
крайне
тяжелое
82,1 4,3
74,2 5,6
69,3 6,9
42,3 8,7
9,8 0,38
15,3 2,7
0,82 0,1
1,74 0,25
21,3 3,9
1,53 0,26
2,97 0,19
24,4 5,2
1,79 0,31
4,52 0,28
12,7 2,3
1,96 0,27
43,04 3,47
8,7 0,6
1,03 0,12
80,47 6,97
течение болезни
Данный вывод подтверждает значительное
снижение количества двуядерных гепатоцитов в
цитопунктате печени при тяжелом и очень тяже
лом течении соответственно до 12,7±2,3 и
8,7±0,6%, в то время как при легком и среднем
течении наблюдается обратный процесс – число
двуядерных гепатоцитов увеличивается соответ
ственно до 21,3±3,9 и 24,4±5,2%. Увеличение и
снижение количества двуядерных гепатоцитов
отражает степень регенеративных процессов в
печеночной ткани.
Для тяжелого и крайне тяжелого течения пиро
плазмоза характерны значительные изменения в
морфологии гепатоцитов. В целом гепатоциты
выглядят сильно измененными, практически раз
рушенными, в цитоплазме отмечается значитель
ная вакуолизация; возможны изменения размеров
клетки с изменением ядерноцитоплазматического
соотношения в пользу ядра (30–10%). Ядро прак
тически отсутствует, в нем невозможно выявить яд
рышки или хроматин, сильно воспринимает окрас
ку – наблюдается полный кариорексис, при этом
цитоплазма всегда изменена, без четкой границы.
Значительная метахромазия – нарушение окрас
ки цитоплазмы и ядра. Наличие распада ядра.
Одновременно со снижением двуядерных гепа
тоцитов при тяжелом и крайне тяжелом течении
гепатита отмечается значительное увеличение
числа дегенеративных гепатоцитов с 1,74±0,25 у
здоровых животных до 43,04±3,47 при тяжелом
течении и 80,47±6,97% при крайне тяжелом тече
нии гепатитов (таблица).
Таким образом, по мере развития пироплазмо
за и усиления его тяжести в цитопунктате печени
количество нормальных печеночных клеток с
одним ядром значительно снижается, а число
дегенеративных гепатоцитов возрастает. Два дру
гих показателя (дву и многоядерные клетки)
имеют более сложную количественную динами
ку, обусловленную состоянием регенеративных
процессов в печеночной ткани.
Литература
наличии выраженной сморщенности ядра или
сильного изменения ядерноцитоплазматическо
го соотношения в пользу цитоплазмы также
встречается в цитопунктате печени при среднем
течении гепатита.
Для тяжелого и крайне тяжелого течения пи
роплазмоза характерны значительные изменения
в морфологии гепатоцитов. В целом гепатоциты
выглядят сильно измененными, практически
разрушенными, в цитоплазме отмечается значи
тельная вакуолизация; возможны изменения раз
меров клетки с изменением ядерноцитоплазма
тического соотношения в пользу ядра (30–10%).
Ядро практически отсутствует, в нем невозмож
но выявить ядрышки или хроматин, сильно вос
принимает окраску – наблюдается полный кари
орексис, при этом цитоплазма всегда изменена,
без четкой границы. Значительная метахромазия
– нарушение окраски цитоплазмы и ядра. Нали
чие распада ядра.
При утяжелении пироплазмоза отмечаются
дальнейшие изменения в ядрах клеток. Ядра
гепатоцитов имеют нечеткие контуры, содержат
более двух ядрышек. Часто в них обнаруживают
ся крупные тельцавключения, которые имеют
различную окраску и форму. Тельцавключения
также обнаруживаются и в купферовских клет
ках. При тяжелом течении заболевания характер
ны не столько дистрофические, сколько некро
тические изменения гепатоцитов. Участки некро
за располагаются в основном в периацинарных
областях. Портальные тракты зачастую подвер
гаются клеточной инфильтрации. Ядрышки вы
глядят уменьшенными, сморщенными и сильно
окрашенными.
При пироплазмозе лейкоцитарная реакция в
печени выражена слабо – отмечаются отдель
ные нейтрофильные лейкоциты, лимфоциты,
моноциты.
Таким образом, прослеживается четкая грани
ца между цитограммой при легком и среднем
течении и цитограммой при тяжелом и крайне
тяжелом течении пироплазмоза. Это, прежде все
го, связано со срывом регенеративных процессов
в печеночной паренхиме при тяжелом и очень
тяжелом течении заболевания.
1. Раймонд, Н. Техника цитопункции // Ветеринар. 1999.
№ 3–4. С. 43–44.
2 . Федюк, В.И. Цитологические аспекты диагностики забо
леваний печени у собак / В.И. Федюк, Д.Н. Казаков //
Практик. 2003. № 7–8. С. 98–101.
98