Мичурин Игорь Евгеньевич РЕГИОНАРНЫЕ ЛИМФАТИЧЕСКИЕ
реклама
На правах рукописи Мичурин Игорь Евгеньевич РЕГИОНАРНЫЕ ЛИМФАТИЧЕСКИЕ УЗЛЫ ЯИЧКА В НОРМЕ, ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОПУХОЛЕВОМ РОСТЕ В ЯИЧКЕ И ЕГО ЛЕЧЕНИЕ ЦИТОСТАТИКАМИ И ФИТОПРЕПАРАТОМ 14.00.02- анатомия человека АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Новосибирск-2004 Работа выполнена в отделе профилактической и экологической лимфологии Новосибирского научно-исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Асташов Вадим Васильевич Научный консультант: Академик СО РАМН, Бородин Юрий Иванович Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Шмерлинг Михаил Давыдович кандидат медицинских наук Овсянко Елена Владимировна Ведущая организация: Научно-исследовательский институт региональной патологии и патоморфологии Сибирского отделения академии медицинских наук Российской Федерации (г. Новосибирск). Защита состоится на заседании диссертационного совета Д 208.062.05 Новосибирской государственной медицинской академии (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52) С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирской государственной медицинской академии(630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52). Автореферат разослан Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук профессор А.В.Волков ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Проблема лечения злокачественных новообразований является одной из наиболее актуальных в медицине в настоящее время. По данным статистики каждый пятый житель России заболевает в течение жизни одной из форм злокачественных опухолей. При этом отмечается постоянное, неуклонное увеличение онкологических больных, как в России, так и в других странах. По результатам исследования Госкомстата России, в 2000 г. количество больных, с установленным впервые в жизни диагнозом злокачественное новообразование составляло 309,9 на 100000 населения, увеличившись за 10 лет на 15%. Большинство злокачественных опухолей на различных этапах своего развития метастазируют по лимфатической системе (Грех И.Ф. и др., 1966; Зербино Д.Д., 1974; Каралин Е.И. и др., Л.М.,1996). В условиях неопластического процесса в организме лимфатическая система обеспечивает не только поддержание постоянства внутренней среды, но и осуществляет дренажно-детоксикационную и лимфопоэтическую функции В структуре злокачественных опухолей половых органов - опухоли яичка встречаются достаточно редко и составляют 0,5-3% (Б.П. Матвеев и соавт., 1983; D. Shottenfeld, 1981; Н.А. Лопаткин и соавт., 1995), но среди причин смертности у мужчин, умерших во второй и третьей декадах жизни, в 11-13% случаев смерть обусловлена именно тестикулярными опухолями ( A.M. Гарин., 1986). Злокачественные опухоли яичка имеют тенденцию к быстрому метастазированию. В первую очередь метастазами поражаются регионарные лимфатические узлы, расположенные в зоне эмбриональной закладки, в области почечных сосудов, спереди от аорты и нижней полой вены до уровня отхождения нижней брыжеечной артерии (Тиктинский О .Л., 1990). При некоторых формах опухолей яичка метастазы возникают так часто, что проблема лечения больного сводится в значительной степени к лечению метастазов (Чебан Н.Л., 1983). Einborn L.H. (1989) доказал, что именно герминогенные опухоли яичка уникально чувствительны к химиотерапевтическому лечению. Вместе с тем результаты терапии пациентов с запущенными формами рака яичка при наличии метастазов нередко являются неудовлетворительными. Необходимость создания новых противоопухолевых препаратов диктуется не только требованиями, предъявляемыми комбинированной химиотерапией, но и хорошо известными фактами наличия 3 рактерности, преодоление которой достигается путем изменения схем лечения, чередованием новых препаратов, применением различных модуляторов биологического эффекта (Акимов Л.А, 1994; Валякина Т.И., 2003; Монцевичуте-Эрпнгене Г.В., 1975). Кроме этого, одной из основных задач онкологии и фармакологии является создание новых препаратов, обладающих большей избирательностью противоопухолевого действия и меньшей токсичностью, так как многие из имеющихся цитостатиков оказывают повреждающие действие нате или иные жизненно важные органы, кроветворную ткань, иммунную систему (Ишбаева Г.Г., 1999). Поэтому использование лекарственных трав, с противоопухолевой активностью и с богатейшим набором биологически активных веществ, является неисчерпаемым источником такого рода препаратов. Актуальным представляется изучение реактивной способности регионарных лимфатических узлов яичка при опухолевом росте и в условиях терапии различными противоопухолевыми препаратами-цитостатиками и фитосборами, а также непосредственное действие на первичную опухоль новых препаратов с предполагаемой цитостатической активностью. Цель исследования. Выявить особенности структурно-клеточной организации почечных и подвздошных лимфатических узлов в физиологических условиях, экспериментальном опухолевом росте в яичке и при введении платиносодержащих цитостатиков в виде монотерапии и в сочетании с фитопрепаратами. Задачи исследования. 1. Изучить структурную организацию почечных и подвздошных лимфатических узлов в норме и при экспериментальном опухолевом росте в яичке. 2. Исследовать структурную организацию почечного и подвздошного лимфатических узлов в условиях опухолевого роста в яичке при его коррекции противоопухолевыми препаратами (цисплатином и «платисерином» в виде монотерапии). 3. Выявить структурную организацию почечного и подвздошного лимфатических узлов в условиях опухолевого роста в яичке при его коррекции противоопухолевыми препаратами (цисплатином и «платисерином» в сочетании с фитокоррекцией (биологически активной добавкой к пище «Бережник»). Научная новизна. Получены дополнительные данные о строении и структурно-функциональной организации почечного и подвздошного лим- фатических узлов в физиологических условиях, а также о п р е о б р а з о в а ниях, происходящих в лимфатических узлах при экспериментальном опухолевом процессе в яичке. Показано, что коррекция экспериментального о п у х о л е в о г о роста в яичке новым противоопухолевым препаратом «платисерин», р а з р а б о т а н ным на кафедре неорганической химии Новосибирского г о с у д а р с т в е н ного университета, оказывает более выраженное действие на опухолевую ткань в сравнении с цисплатином. Практическая значимость исследования. Выявленыые структурные изменения, происходящие в лимфатическом узле при м о д е л и р о в а нии опухолевого процесса в яичке, помогут лучше понять м е х а н и з м неопластического процесса в яичке и особенности метастазирования злокачественных опухолей данной локализации. Детальное изучение преобразований, происходящих в п о ч е м ном и подвздошном лимфатических узлах при экспериментальном о п у х о л е в о м росте в яичке, поможет глубже понять роль и функции л и м ф а т и ч е с к и х узлов при данном патологическом процессе. Сравнительный анализ структурных изменений в л и м ф а т и ч е с к и х узлах при экспериментальном опухолевом росте в условиях к о р р е к ц и и различными препаратами платины позволит более д и ф ф е р е н ц и р о в а н н о подходить к выбору противоопухолевого препарата при л е ч е н и и опухолей яичка. Изучение морфофункциональных преобразований л и м ф а т и ческих узлов при введении противоопухолевых препаратов п л а т и н ы в виде монотерапии и в комбинации с БАД к пище «Бережник» и их сравнительная оценка позволит на практике создать более э ф ф е к т и в н ы е схемы противоопухолевой терапии злокачественных новообразований яичка. Основные положения, выносимые на защиту. 1. В нормальных условиях гемо- лимфоциркуляции у э к с п е р и м е н т а л ь ных животных(мыши) почечный лимфатический узел я в л я е т с я регионарным лимфатическим узлом 1-го порядка для яичка, а п о д в з д о ш н ы й регионарным лимфатическим узлом 2-го порядка. 2. Экспериментальный опухолевый рост в яичке в ы з ы в а е т характерные структурно-функциональные преобразования в р е г и о н а р н ы х лимфатических узлах, зависящие от их анатомической л о к а л и з а ц и и : для почечного лимфатического узла характерны изменения в п е р и ф е р и ч е с к и х отделах коркового вещества, а для подвздошного лимфатического узла характерны изменения в глубоких отделах. 3. Введение препаратов платины (цисплатин, «платисерин») при экс- пери ментальном опухолевом росте в яичке вызывает деструктивные и з м е н е н и я в ткани опухоли (некроз, изменение стромалыю-паренхимат о з н о г о соотношения) и структурные преобразования в региональных л и м ф а т и ч е с к и х узлах, зависящие от их локализации, причем использов а н и е «платисерина» вызывает более выраженный эффект. 4. Сочетание препаратов платины и фитокоррекции (БАД к пище «Бер е ж н и к » ) при экспериментальном опухолевом росте в яичке приводит к у в е л и м е н и ю размеров Т и В-зависимых зон в регионарных лимфатических у з л а х и активации лимфопролиферативных процессов. Внедрение результатов исследования. По результатам исследования разработана схема комбинированной химиотерапии больных со злокачественными опухолями яичка, используемая в урологических отд е л е н и я х МУЗ ГКБ№1 г. Новосибирска для лечения пациентов с подобной п а т о л о г и е й . Разработанный, описанный и использованный в работе с п о с о б моделирования экспериментального опухолевого роста в яичке п р и м е н я е т с я в отделе профилактической и экологической лимфологии научно—исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН (г. Новосибирск). Апробация результатов исследования. Основные положения дис- с е р т а ц и и доложены на межрегиональной конференции «Проблемы эксп е р и ментальной, клинической и профилактической лимфологии» (Новос и б и р с к , 2002); ежегодной конференции молодых ученых и студентов ( Н о в о с и б и р с к , 2002). По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ. Структура и объем диссертации. Диссертационная работа излож е н а на 161 странице машинописного текста, состоит из введения, обзора л и т е р а т у р ы , глав - материалы и методы исследования, собственные р е з у л ь т а т ы , обсуждение, выводы, приложения. Работа иллюстрирована 16 т а б л и ц а м и , 28 рисунками и 14 графиками. Библиографический указат е л ь включает 97 работ отечественных и 53 — иностранных авторов. Материал и методы исследования. Для исследования в качестве экспериментального животного были выбраны беспородные белые мышис а м ц ы с исходной массой 17-20 г. (возраст животных 3-4 месяца). Колич е с т в о животных, используемых в эксперименте - 180. В с е животные были разделены на 6 групп. 1-ая группа - интактные ж и в о т н ы е . 2-ая группа—животные с индуцированным опухолевым рост о м в правом яичке. 3-я и 4-ая группы - животные с индуцированной о п у х о л ь ю яичка, которым вводился цисплатин и «платисерин» в каче- стве монотерапии соответственно. 5-ая и 6-ая группы - животные с индуцированной опухолью яичка, которым вводился цисплатин и «платисерин» в комбинации с биологически активной добавкой к пище «Бережник» соответственно. Создание экспериментального опухолевого роста производилось следующим образом. Перед операцией у мыши - носителя опухоли Эрлиха, аспирировалось 0,375 мл асцитической жидкости. Далее определялась концентрация в 1 мл клеток опухоли Эрлиха, и опытным путем была выведена концентрация в 250000 клеток опухоли Эрлиха в 1 мл. Подобная концентрация позволяет быть уверенным в том, что опухоль индуцирована и обеспечивает необходимую продолжительность жизни экспериментальных животных. Далее в паренхиму яичка экспериментальной группы животных вводится 0,075 мл асцитической жидкости. На описанный метод создания опухолевого процесса в яичке получен патент на изобретение №2220458 от 27 декабря 2003 года. Экспериментальная опухоль прививалась в правое яичко, поэтому объектом исследования были выбраны правое яичко, правые подвздошный и почечный лимфатические узлы. Почечный и подвздошный лимфатические узлы являются регионарным к моделируемой опухоли, что подтверждено инъекционным методом. В качестве противоопухолевых агентов использовались: фармакопейный препарат «цисплатин» и бисеринатплатина 2, условное название «платисерин», новый, раннее не использовавшийся для лечения опухолей препарат, разработанный на кафедре неорганической химии Новосибирского государственного университета д.м.н. Л.Ф. Крыловой. В качестве вспомогательного средства экспериментальные животные получали фитопрепарат - БАД к пище «Бережник», разработанный в НИИКиЭЛ СО_РАМН. Введение цитостатиков и БАД к пище «Бережник» проводилось в стадии сформированной опухоли, для максимального приближения эксперимента к условиям клиники. Лекарственные препараты («цисплатин» и «платисерин») вводились ежедневно один раз в сутки в течение 7-ми дней, начиная с 8-го дня после индуцирования опухолевого процесса в правом яичке. «Цисплатин» вводили в дозе 2мг/кг, ссылаясь на рекомендации Н.Г. Захарьевича (1993). «Платисерин» вводили в такой же дозе - 2мг/кг веса животного, внутрибрюшинно. БАД к пище «Бережник» экспериментальные животные получали в виде порошка смешанного с пищей, в дозе 1,5 мг на мышь один раз в сутки, параллельно с введением цитостатиков. Для изучения особенностей структуры и функциональных характеристик почечного и подвздошного лимфатических узлов, яичка и сыворотки крови были использованы следующие методы: 1. Морфометрия гистологических срезов лимфатических узлов. 2. Изучение клеточного состава в отдельных структурно-функциональных зонах лимфатических узлов, определение ядерно-цитоплазматического и стромально-паренхиматозного соотношений ткани яичка методом световой микроскопии. 3. Аналитические методы для определения уровня концентрации микроэлементов в ткани яичка и сыворотке крови. Материал забирали и обрабатывали по общепринятой методике: фиксация в растворе Телесницкого, обезвоживание в серии спиртов возрастающей концентрации. Органы заключали в парафиновые блоки, с которых делали серийные срезы на ротационном микротоме "Reichert" вдоль продольной оси органа. Для морфометрии структурно-функциональных зон лимфатических узлов готовили срезы 7 мкм, для анализа клеточного состава узлов и ткани яичка с опухолью готовили срезы толщиной 5 мкм. Для морфометрического исследования применяли окраску гематоксилином Майера и эозином, для цитологического исследования - окраску азур 2-эозином. Определение стромально-паренхиматозного соотношения в опухолевой ткани яичка производили методом «полей» (Автандилов Г.Г., 1981; Краевский СП., 1993) с помощью стандартной окулярной сетки-вставки с 25-ю равноудаленными точками. Ядерно-цитоплазматическое соотношение в опухолевых клетках определяли по аналогичной схеме с использованием окуляра 100. Все полученные данные обрабатывались методом вариационной статистики Стьюдента-Фишера (Лакин Г.Ф., 1980) с определением средней арифметической, ее ошибки и доверительного интервала с надежностью р - 95%. В таблицах приведены значения М±т, указана достоверность различий между показателями по t-критерию Стьюдента. Результаты собственных исследований. 1. Результаты гистологических и морфометрических исследований выявили, что в физиологических условиях структура почечного и подвздошного лимфатических узлов белых беспородных мышей характеризуется преобладанием коркового вещества над мозговым, и оба узла по структурно-функциональной специализации являются компактными (корково-мозговой индекс у почечного лимфатического узла составляет 8 2,6, у подвздошного 2,5). Значительную площадь коркового вещества занимает «глубокая кора» - паракортикальная зона, сопоставимая у сравниваемых узлов. Относительные площади, занимаемые первичными лимфоидными узелками несколько больше у почечного лимфатического узла, в то время как площади вторичных лимфоидных узелков больше в подвздошном лимфатическом узле и в их структуре заметное место занимает мантийная зона. Для клеточного состава обоих узлов в центрах размножения вторичных лимфоидных узелков и паракортикальной зоны характерно преобладание малых и средних лимфоцитов, в мозговых тяжах и синусах доминируют зрелые плазматические клетки. Следует отметить в обоих узлах хорошее развитие капсулы, и достаточно широкий краевой синус в почечном лимфатическом узле, что свидетельствует о дополнительном депонировании афферентной лимфы в условиях физиологического почечного кровотока. 2. В условиях развития любого патологического процесса в организме преимущественную антигенную нагрузку принимают регионарные к патологическому очагу лимфатические узлы, где совершаются все процесса биохимической, биофизической и иммунной обработки поступающего материала (Бородин Ю.И., 2000). По данным авторов, исследовавших перевиваемые опухоли, особенно опухоль Эрлиха (Афанасьева О.Г, 2001, Исакова Н.Б, 2002, Валякина Т.И., 2003) показано, что 15-е сутки опухолевого роста являются критическими именно для перевиваемых опухолей. Большинство авторов свидетельствует о стереотипной реакции лимфатических узлов в условиях опухолевой агрессии (Бадриева Э.А., 1979, Мастихина И.В., 1999, Цыплакова Д.Э., 1988, Tarillion Р.,1997), однако в нашем исследовании выявлены своеобразные отличия морфофункциональных изменений в почечном и в подвздошном лимфатических узлах при развитии экспериментальной опухоли яичка. В проведенном исследовании регионарными лимфатическими узлами являются почечные лимфатические узлы, соответственно и максимальные морфофункциональные изменения отмечены именно в почечных лимфатических узлах. На 15-е сутки опухолевого роста отмечены изменения преимущественно в корковом веществе узла - увеличены в 2,4 раза относительные площади, занимаемые вторичными лимфоидными узелками, в которых значительно увеличиваются центры размножения, в цитоархитектонике последних следует выделить значительное увеличение относительного количества макрофагов (в 4 раза), ретикулярных клеток (клеток «памяти» об антигене) в 3,4 раза, и средних лимфоцитов (в 2,4 раза). В подвздошном лимфатическом узле площадь герминативных центров увеличилась в 2,32 раза, в цитологическом составе превалируют лимфобласты и средние лимфоциты, в то время как, относительное количество ретикулоцитов, наоборот, даже уменьшается. Сравнивая с данными литературы (Цыплаков Д.Э, Петров С.В, 1995) можно предположить, что вторичные лимфоидные узелки в почечном лимфатическом узле относятся к фолликулам 1 -го и 2-го типов по их классификации, а в подвздошном лимфатическом узле скорее к 3-му типу фолликулов. Если первые 2 типа - являются типичными В-клеточными образованиями и встречаются в подавляющем большинстве наблюдений, то лимфоидные фолликулы 3-го типа (Т-клеточные) встречаются намного реже, но именно для них характерно наличие большого количество лимфобластов и в большинстве случаев она совпадает с активной паракортикальной гиперплазией, подобные изменения характерны и в нашем исследовании для подвздошного лимфатического узла. Площади первичных лимфоидных узелков и коркового плато в обоих узлах уменьшаются. На 15е сутки опухолевого роста отмечена выраженная гиперплазия паракортикальной зоны в подвздошном лимфатическом узле (43,6%) против некоторого (17,6%) в почечном лимфатическом узле, что, соответственно, приводит к достоверному увеличению размеров Т-зависимой зоны в подвздошном лимфатическом узле, а в почечном лимфатическом узле аналогичный показатель достоверно не изменился. Однако в цитологическом составе «глубокой» коры произошли более выраженные изменения именно в почечном лимфатическом узле - так же, как и в центрах размножения вторичных лимфоидных узелков - отмечены максимальные достоверные изменения относительного количества макрофагов и ретикулярных клеток. В почечном лимфатическом узле реагирует более выражено и мозговое вещество, причем преимущественно мозговые синусы с выраженным синусным гистиоцитозом с преимущественной «плазматизацией». Отмечается также значительное увеличение суммы площадей синусов - краевого и мозговых, при достоверно не изменившемся показателе мозгового вещества и его составляющих в подвздошном лимфатическом узле. По структурно-функциональной специализации почечный лимфатический узел в условиях развития опухолевого роста становится промежуточным, в то время как подвздошный узел не меняет своей специализации. Таким образом, на фоне развития в организме опухолевого процесса и имея во многом сходное строение в физиологических условиях, почечный и подвздошный лимфатические узлы 10 реагируют на опухолевый процесс в яичке по-разному. Подобные изменения в реакциях подвздошного и почечного лимфатических узлов на 15-е сутки опухолевого роста, по всей видимости, связаны со многими причинами: отдаленностью и/или регионарностью узлов к очагу опухолевого роста, поздним периодом злокачественного процесса в организме, когда регионарный (почечный) лимфатический узел исчерпывает свои детоксикационные ресурсы, в то время как в отдаленных лимфатических узлах организма еще происходят ярко выраженные процессы, свидетельствующие об активации их дренажно-детоксикационных функций. На 15-е сутки опухолевого роста в яичке обнаружена картина выраженного тканевого и клеточного атипизма - структурные компоненты яичка практически полностью замещены полями атипичных опухолевых клеток. Опухолевые клетки неправильной формы с обильной цитоплазмой и округлым ядром, встречаются многоядерные клетки, клетки с уродливыми ядрами. Крайне редко встречаются склерозированные извитые семенные канальца. Большинство кровеносных и лимфатических сосудов значительно расширены, вены полнокровны. Стромально-паренхиматозный индекс опухолевой ткани равен 0,17±0,021, ядерно-цитоплазматический индекс равен 3,39±0,041. 3. Использование цитостатической терапии - препаратов платины приводит к своеобразным изменениям в лимфатических узлах на 15-е сутки развития экспериментального канцерогенеза. При коррекции цисплатипом в почечном лимфатическом узле наиболее значимые изменения произошли в корковом веществе узла - значительно уменьшились площади вторичных лимфоидных узелков, преимущественно за счет редукции центров размножения, в которых значительно уменьшается количество ретикулярных клеток. Это происходит на фоне увеличения площади паракортикальной зоны узла, в которой увеличивается численность незрелых лимфоидных клеток. На фоне коррекции цисплатином значительно сокращается синусная система узла - как краевые, так и мозговые синусы, в которых достоверно уменьшается количество макрофагов. Сравнивая изменения по зонам, следует отметить, что в почечном лимфатическом узле на фоне коррекции цисплатином наиболее значимые изменения претерпевает Т-зависимая зона(увеличивается ее размер на 13%). Все вышеперечисленные изменения, особенно клеточного состава узла, свидетельствуют о том, что использование цисплатина, как цитостатического препарата вызывает в регионарном лимфатическом узле изменения, свидетельствующие о значительном уменьшении 11 антигенной нагрузки на узел. Подобные изменения получены так же в работах Афанасьевой О.Г. (2001). В подвздошном лимфатическом узле на фойе коррекции цисплатинам наиболее значимые изменения произошли, наоборот, в В-зависимой зоне, причем преимущественно за счет уменьшения площадей вторичных лимфоидных узелков, в которых уменьшаются размеры центров размножения. Значительно увеличивается на фоне коррекции цитостатиком размеры краевого синуса и несколько увеличиваются мозговые. В цитоархитектонике узла практически во всех зонах происходят однонаправленные изменения - уменьшение на фоне коррекции бластных форм клеток и увеличение зрелых. Однако, так же, как и в регионарном почечном лимфатическом узле - в паракортикалькой зоне остается большое число макрофагов и ретикулярных клеток. Подобные изменения свидетельствуют о том, что относительно отдаленный от очага поражения лимфатический узел остается более сохранным и выявленные в нем морфофункциональные изменения, отражают системную реакцию лимфоидной ткани на неопластический процесс в организме, что подтверждается многими авторами (Цыплаков Д.Э., 1995, Dworak О., 1991, Sugio К., 1993). На фоне коррекции опухоли яичка цисплатином в тканях яичка макроскопически выявлено значительное размягчение опухолевого узла, уменьшение размеров (в среднем на 25%) пораженного яичка в сравнении с нелеченными животными. Микроскопически наблюдались участки замещения опухолевой ткани жировой тканью, иногда определялись участки некроза. Стромально-паренхиматозный индекс увеличился на 5,68% в сравнении с нелеченными животными, а ядерно-цитоплазматический, наоборот, уменьшился на 16,68%. 4. Анализируя данные по использованию нового цитостатического препарата платины - «платисерина» выявлено, что в почечном лимфатическом узле происходят своеобразные, несколько отличающиеся от группы с использованием цисплатина морфофункциональные изменения. Так же, как и в группе с использованием цисплатина отмечено уменьшение относительной площади, занимаемой вторичными лимфоидными узелками, уменьшаются центры размножения, но судя по цитологической картине центров размножения можно свидетельствовать о том, что на фоне «платисерина» происходит более выраженная лимфоцито-лимфобластная гиперплазия (по B.Leiber) лимфоидных узелков. «Глубокая кора», наоборот, на фоне использования «платисерина» выглядит более сохранной, с достоверным уменьшением, как относительной численности макрофагов, так и ретикулярных клеток. Синусный «гистиоцитоз» лим12 фатического узла сохраняется, особенно мозговые синусы остаются более широкими, заполненными макрофагами и незрелыми формами плазматических клеток. Следует отметить, что в группе с использованием «платисерина» в качестве противоопухолевого препарата в структуре подвздошного лимфатического узла произошли минимальные и стереотипные морфофункциональные изменения, отражающие наличие в организме неопластического процесса. Подвздошный лимфатический узел по сравнению с почечным в этой же группе коррекции выглядит более «сохранным» и преимущественные изменения произошли только в соединительно-тканных компонентах узла - выявлено на фоне коррекции «платисерином» уменьшение явлений отека капсулы и трабекул. В ткани яичка наблюдалось замещение опухолевой ткани обширными полями некроза, участками разрастания соединительной ткани. На цитологическом уровне характерен лизис ядер, но патологические митозы опухолевых клеток еще встречаются. Стромально-паренхиматозный индекс возрос относительно нелеченных животных на 7,39%. Ядерно-цитоплазматический индекс стал меньше на 21,89% относительно нелеченных животных и на 6,05% в сравнении с животными, которым вводился цисплатин. 5. Как уже упоминалось, по данным многих авторов считается, что 15-е сутки опухолевого роста являются критическими, как для выявления морфофункциональных изменений лимфатических узлов, так и для выявления физиологических критериев выживаемости/летальности экспериментальных животных. В нашем исследовании выявлено, что при развитии экспериментальной опухоли яичка без лечения -смертность у животных составила 33% в среднем на 10-12-е сутки, такой высокий показатель вполне совпадает с полученными ранее по перевиваемым опухолям Эрлиха данными (Афанасьева О.Г., 2000, Исакова Н.Б., 2002, Валякина Т.И., 2003). Использование только цитостатической терапии у животных с введением цисплатина приводило к 18% гибели животных на 11-13-е сутки; у животных с введением «платисерина» гибель составила 15% на 11-13-е сутки эксперимента. Комплексное использование цитостатической терапии и БАД к пище «Бережник» у животных с использование цисплатина приводила к 6% летальности на 14-е сутки, а в группе с использованием «платисерина» и БАД к пище «Бережник» гибели животных до 15-х суток не выявлено. По всей видимости, комплексное использование цитостатической терапии и БАД к пище «Бережник» повышает адаптационные ресурсы организма, уменьшает явления 13 эндогенной интоксикации, обязательно присутствующей при неопластическом процессе и уменьшает побочные эффекты действия цитостатического препарата на организм. Анализируя морфофункциональные изменения лимфатических узлов на фоне комплексного использование БАД к пище «Бережник» одновременно с цитостатической терапией (цисплатин), показано, что подобное сочетание влияет преимущественно на изменения «глубокой коры» регионарного к опухоли почечного лимфатического узла. Достоверно значительно уменьшается относительная площадь паракортикальной зоны( на 18%), причем только на фоне использования цисплатина таких изменений не выявлено, однако в цитологическом составе зоны достоверных отличий по сравнению как с нелеченными животными, так и в условиях коррекции только цисплатином обнаружено не было. Кроме паракортикальной зоны, значительным изменениям на фоне коррекции цисплатином в сочетании с БАД «Бережник» по сравнению с монотерапией цисплатином подвержено мозговое вещество почечного лимфатического узла и преимущественно мозговые тяжи, которые значительно увеличиваются, но в цитоархитектонике которых так же, как и в паракортикальной зоне выраженных изменений не обнаружено - сохраняется высокое количество незрелых форм клеток, плазмобластов. В подвздошном лимфатическом узле произошли совсем другие изменения, чем в структуре почечного в таких же, комбинированных условиях коррекции. Показано, что использование БАД в сочетании с цисплатином оказывает выраженное влияние на синусный и стромальный компоненты лимфатического узла. По сравнению с нелеченными животными и монотерапией только цисплатином значительно увеличиваются и краевой, и, особенно мозговые синусы. Значительно уменьшаются размеры капсулы, по всей видимости, за счет уменьшения отека на фоне показанной активации дренажной системы и на фоне улучшения циркуляции лимфы внутри узла уменьшается и относительная площадь трабекул. При коррекции экспериментальной опухоли яичка цисплатином в сочетании с БАД «Бережник» в ткани яичка наблюдалось некоторая сохранность структур яичка, местами определялся относительно сохранный сперматогенный эпителий. В некоторых полях зрения опухолевая ткань замещена полями некроза и здесь же участки разрастания соединительной ткани. Встречаются патологические митозы опухолевых клеток. Стромально-паренхиматозный индекс возрос относительно нелеченных животных на 28,6% и на 11,9% в сравнении с группой коррекции только цисплатином. Ядерно-цитоплазматический индекс стал меньше на 26,1% относительно нелеченных животных и на 9,1% в сравнении с животными, которым вводился только цисплатин. 6. Использование «платисерина» в комбинации с БАД приводило к своеобразным изменениям в структуре регионарного к опухолевому очагу почечного лимфатического узла.. Выраженные изменения произошли в мозговом веществе узла - на фоне дополнительного использования БАД- значительно увеличились относительные площади мозговых тяжей, в которых особенно изменилось содержание бластных форм клеток (в 4,6 раза). Вообще, следует отметить, что на фоне дополнительного к цитостатической терапии введения БАД по всем зонам почечного лимфатического узла увеличивается численность именно бластных форм клеток, незрелых плазмоцитов, средних лимфоцитов. Кроме мозговых тяжей, значительные преобразования претерпевает и синусная система узла - значительно уменьшаются как краевой, так и особенно, мозговые синусы, в клеточном составе которых по сравнению с монотерапией цитостатиком стало значительно меньше макрофагов, средних и малых лимфоцитов. Все это свидетельствует о том, что дополнительный к цитостатической терапии прием БАД к пище «Бережник», по всей видимости, способствует стимуляции В клеточного гуморального иммунитета на фоне активных Т- клеточных иммунных реакций. В структуре подвздошного лимфатического узла на фоне дополнительного приема БАД «Бережник» в значительной степени стимулируется мозговое вещество, и, что характерно именно для подвздошного лимфатического узла - именно мозговые тяжи. Только в условиях коррекции опухолевого роста комбинированным способом - цитостатик и БАД «Бережник» - подвздошный лимфатический узел меняет свою функциональную специализацию и становится промежуточным ( корковомозговой индекс составляет 1,4). В синусной системе узла также произошли своеобразные изменения - на фоне приема БАД - в отличие от монотерапии цитостатиком также увеличиваются мозговые синусы, но сокращается краевой, что свидетельствует о дополнительном перераспределении лимфы внутри узла. По всем зонам узла так же, как и в структурах почечного лимфатического узла отмечается значительное увеличение бластных форм клеток, средних лимфоцитов и в большей степени уменьшается количество ретикулярных клеток, как в центрах размножения, так и мозговых тяжах. Все вышеперечисленное свидетельствует о стереотипном ответе лимфатических узлов независимо от 15 отдаленности к очагу поражения на дополнительное к цитостатической терапии введение БАД к пище, характеризующееся активацией дренажной системы узлов и активной бласттрансформацией клеток лимфоидного ряда. В ткани яички наблюдалась сохранность эпителиальных структур, сперматогенного эпителия. Очаги замещения опухолевой ткани соединительной или жировой тканью сочетались с небольшими полями некроза. Патологические митозы опухолевых клеток заметно меньше. Стромально-паренхиматозный индекс возрос относительно нелеченных животных на 33,1 % и на 9,2% в сравнении с группой коррекции только платисерином. Ядерно-цитоплазматический индекс стал меньше на 24,6% относительно нелеченных животных и на 14,2% в сравнении с животными, которым вводился только платисерин. 7. Исследование ряда микроэлементов в опухолевой ткани и сыворотке крови экспериментальных животных выявило значительное увеличение концентрации цинка и магния, особенно в группах с сочетанной коррекцией (цитостатики и БАД «Бережник»). Своеобразные изменения выявлены для железа. Из литературы известно, что опухоли синтезируют повышенное количество трансферрина, соответственно, в организме при неоплазиях в повышенном количестве утилизируется железо, происходит подавление синтеза ферритина и активизация синтеза трансферрина, что приводит к увеличению концентрации сывороточного железа и уменьшению его тканевого депо. В нашем исследовании выявлено, что уровень железа в сыворотке крови в динамике опухолевого роста и его коррекции не меняется, оставаясь высоким на протяжении всего эксперимента, а в ткани яичка уменьшается и самое минимальное содержание выявлено при коррекции цисплатином и в сочетании с БАД «Бережник». В ткани яичка отмечается высокое содержание кальция во всех группах с коррекцией, превышая показатель у интактных животных на фоне уменьшения его концентрации в сыворотке. В опухолевой ткани при коррекции новым препаратом «платисерином», как в виде монотерапии, так и в группе с сочетанной коррекцией отмечено значительное (в 21,1 раза) накопление платины. Следует отметить, что, сравнивая содержание микро-макроэлементов сыворотки крови в группах с коррекцией цисплатином и платисерином, достоверных отличий между группами по большинству элементов не выявлено, за исключением содержания платины и кальция. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об очень сложной специфике минерального и микроэлементного состава при экспериментальном опухолевом росте. 16 Полученные данные свидетельствуют, что морфофункциональные изменения в почечном лимфатическом узле являются маркером изменений, происходящих в лимфатическом регионе при экспериментальной опухоли яичка. Новый препарат «платисерин» обладает более выраженным противоопухолевым действием по сравнению с цисплатином, повидимому, за счет увеличения биодоступности платины для экспериментальной опухоли. Фитосбор, представленный в БАД к пище «Бережник», усиливает противоопухолевое действие цитостатиков, уменьшая явления эндогенной интоксикации, всегда определяющейся при опухолевом росте. Большинство онкологов склоняется к мнению, что ведущую роль в сдерживании онкологической смертности в 2004 году будут играть не только новые синтезируемые химиопрепараты, но и изменение навыков питания и использование диеты. Выводы. К Выявлено, что почечный и подвздошный лимфатические узлы экспериментальных животных (мыши) в нормальных условиях гемо- лимфоциркуляции являются регионарными лимфатическими узлами яичка, причем почечный лимфатический узел является регионарным лимфатическим узлом первого порядка, а подвздошный лимфатический узел регионарным лимфатическим узлом второго порядка. Почечный и подвздошный лимфатические узлы по своей структурно-функциональной специализации относятся к узлам компактного типа. 2. Разработана модель экспериментального опухолевого роста в яичке, получаемая путем введения клеточной культуры опухолевых клеток Эрлиха в паренхиму яичка, позволяющая проводить исследование регионарного лимфатического русла с сохранением его топографо-анатомических соотношений. Экспериментальная опухоль представлена опухолевым узлом, по периферии выявлены явления выраженного лимфостаза, расширение прелимфатических пространств. 3. На 15-е сутки экспериментального опухолевого роста в яичке возникают характерные структурно-клеточные преобразования в почечном и подвздошном лимфатических узлах: В почечном лимфатическом узле наблюдается увеличение размеров коркового вещества, вторичных лимфоидных узелков; во всех структурно-функциональных зонах узла выявлено увеличение количества макрофагов и ретикулярных клеток. В подвздошном лимфатическом узле показано значительное увеличение площади паракортикальной зоны. В цитоархитектонике узла во всех 17 зонах преобладают и незрелые клетки лимфоидного ряда (увеличение числа лимфобластов и средних лимфоцитов). 4. Введение препаратов платины при экспериментальном опухолевом росте в яичке приводит к деструкции опухолевого узла- появлению в опухолевом узле многочисленных очагов некроза, частичному замещению опухолевой ткани соединительной или жировой тканью, увеличению стромально-паренхиматозного и уменьшению ядерно-цитоплазматического соотношений. При использовании «платисерина» увеличивается область деструкции опухолевого узла и стромально-паренхиматозное соотношение. 5. Введение цисплатина при экспериментальном опухолевом росте в яичке вызывает в почечном лимфатическом узле выраженную активацию Т-зависимой зоны - увеличение площади паракортикальной зоны, уменьшение размеров лимфоидных узелков и синусной системы узла на фоне уменьшения по всем зонам относительного количества макрофагов и ретикулоцитов. При использовании цисплатина в подвздошном лимфатическом узле выявлена выраженная активация В-зависимой зоны узла. 6. Введение «платисерина» при экспериментальном опухолевом росте в яичке в почечном лимфатическом узле вызывает активацию Т-зависимой зоны - увеличение площади паракортикальной зоны, уменьшение размеров лимфоидных узелков и синусной системы узла на фоне уменьшения по всем зонам относительного количества макрофагов и ретикулоцитов, а также увеличение бластных форм клеток по всем зонам узла. В подвздошном лимфатическом узле отмечается значительное уменьшение размеров соединительно-тканных структур (капсула, трабекулы). 7. Сочетанное использование препаратов платины и фитокоррекции (БАД к пище «Бережник») при экспериментальном опухолевом росте в яичке способствует уменьшению летальности, уменьшению ядерно-цитоплазмотического соотношения, увеличению стромально-паренхиматозного соотношения в опухоли. Одновременное использование цисплатина и фитокоррекции в приводит к увеличению размеров как Т-, так и В-зависимой зон почечного и подвздошного узлов. Одновременное использование «платисерина» и фитокоррекции приводит в подвздошном лимфатическом узле к значительному увеличению мозгового вещества и увеличение числа незрелых лимфоидных клеток в структурно-функциональных зонах лимфатического узла. 8. В условиях развития неопластического процесса в яичке наибольшим колебаниям подвергается содержание следующих элементов: цинк, 18 железо, магний, кальций. Выявлено, что цинк и кальций накапливаются в опухолевой ткани. При использовании препаратов платины, особенно «платисерина» как в ткани яичка, так и в крови значительно увеличивается содержание платины. Практические рекомендации 1. Способ создания экспериментального опухолевого роста в яичке может использоваться для изучения регионарного лимфатического русла органа в условиях неопластического процесса в нем и первичного отбора противоопухолевых препаратов. 2. Совместное использование БАД к пище «Бережник» и цитостатиков на основе платины эффективно и позволяет снизить явления интоксикации и приводит к активации лимфопролиферативных процессов. Список изобретений и работ, опубликованных по теме диссертации 1. Патент на изобретение. Способ моделирования опухолевого процесса яичка, применяемый для исследования его регионарного лимфатического русла. №2220458 от 27 декабря 2003 года (соавт. Бородин Ю.И., Асташов В.В., Исаенко В.И., Ларионов П.М., Малыгин М.В.) 2. Моделирования опухолевого роста в яичке с целью изучения состояния регионарного лимфатического русла и противоопухолевой активности новых цитостатиков // Бюллетень СО РАМН, 2002 - №4. - С. 82-86 (соавт. Бородин Ю.И., Асташов В.В., Исаенко В.И., Старкова Е.В.) 3. Лечение экспериментальной опухоли яичка цитостатиками на основе платины и фитопрепаратами//Тезисы межрегиональной конференции — проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфалогии: Труды НИИКиЭл СО РАМН, Новосибирск -Т.9.-С.32-35 (соавт. Асташов В.В., Исаенко В.И.) 4. Способ моделирования опухолевого процесса в яичке, применяемый для изучения противоопухолевой активности новых цитостатиков и регионарного русла яичка в условиях опухолевого роста // Тезисы межрегиональной конференции — проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфалогии: Труды НИИКиЭл СО РАМН, Новосибирск, 2002 - Т.9. - С. 36-38. (соавт. Асташов В.В., Исаенко В.И.) 5. Способ моделирования опухолевого процесса в яичке // Тезисы докладов 63-й сессии студентов и молодых ученых 24 апреля 2002 года, Новосибирск. - С. 241-242. (соавт. Асташов В.В., Исаенко В.И., Титяев И.И., Гайтан А.С.) Формат 60Ч84'/16. Тираж 100. Усл. печ.л. 1,0. Заказ №7. Отпечатано в тип. СО РАМН 630117, г. Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 2/12
