МЕЗЕНХИМНЫЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ ЭНДОМЕТРИЯ

Реклама
2013
ÖÈÒÎËÎÃÈß
Ò î ì 55, ¹ 1
ÌÅÇÅÍÕÈÌÍÛÅ ÑÒÂÎËÎÂÛÅ ÊËÅÒÊÈ ÝÍÄÎÌÅÒÐÈß ×ÅËÎÂÅÊÀ
ÏÐÈ ÄËÈÒÅËÜÍÎÌ ÊÓËÜÒÈÂÈÐÎÂÀÍÈÈ ÍÅ ÏÎÄÂÅÐÃÀÞÒÑß
ÑÏÎÍÒÀÍÍÎÉ ÒÐÀÍÑÔÎÐÌÀÖÈÈ
© À. Ï. Äîìíèíà,1 È. È. Ôðèäëÿíñêàÿ, Â. È. Çåìåëüêî, Í. À. Ïóãîâêèíà,
Ç. Â. Êîâàëåâà, Â. Â. Çåíèí, Ò. Ì. Ãðèí÷óê, Í. Í. Íèêîëüñêèé
1
Èíñòèòóò öèòîëîãèè ÐÀÍ;
ýëåêòðîííûé àäðåñ: [email protected]
À. Ï. Äîìíèíà è äð.
Ìåçåíõèìíûå ñòâîëîâûå êëåòêè ýíäîìåòðèÿ ÷åëîâåêà (ýÌÑÊ) ÿâëÿþòñÿ ïåðñïåêòèâíûì èñòî÷íèêîì ñòâîëîâûõ êëåòîê äëÿ çàìåñòèòåëüíîé òåðàïèè.  áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ äëÿ ëå÷åíèÿ òðåáóåòñÿ çíà÷èòåëüíàÿ áèîìàññà ýòèõ êëåòîê, êîòîðàÿ íàêàïëèâàåòñÿ èõ êóëüòèâèðîâàíèåì. Íåñêîëüêî ïîëó÷åííûõ
íàìè ëèíèé ýÌÑÊ êóëüòèâèðîâàëè in vitro â òå÷åíèå äëèòåëüíîãî âðåìåíè äëÿ ïðîâåðêè âîçìîæíîé
ñïîíòàííîé çëîêà÷åñòâåííîé òðàíñôîðìàöèè. Âñå ëèíèè èìåëè îãðàíè÷åííûé ñðîê æèçíè è ÷åðåç îïðåäåëåííîå êîëè÷åñòâî êëåòî÷íûõ äåëåíèé, ðàçíîå ó ðàçíûõ ëèíèé, âñòóïàëè â ôàçó ðåïëèêàòèâíîãî ñòàðåíèÿ è ïîãèáàëè. Êàðèîëîãè÷åñêèé àíàëèç êëåòîê íà ðàçíûõ ïàññàæàõ ïîêàçàë, ÷òî áîëüøèíñòâî êëåòîê â èçó÷åííûõ ëèíèÿõ ñîõðàíÿåò íîðìàëüíûé äèïëîèäíûé êàðèîòèï. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ïîêàçûâàþò, ÷òî êóëüòèâèðîâàíèå íå ïðèâîäèò ýÌÑÊ ê çëîêà÷åñòâåííîé òðàíñôîðìàöèè è, ñëåäîâàòåëüíî, ñ
ýòîé òî÷êè çðåíèÿ ïðèìåíåíèå ýÌÑÊ â êëåòî÷íîé òåðàïèè áåçîïàñíî. Ýêñïðåññèÿ ïîâåðõíîñòíûõ ìàðêåðîâ ýÌÑÊ ïðè äëèòåëüíîì êóëüòèâèðîâàíèè ñîõðàíÿåòñÿ.
ýÌÑÊ ÷åëîâåêà ïðè äëèòåëüíîì êóëüòèâèðîâàíèè íå ïîäâåðãàþòñÿ ñïîíòàííîé òðàíñôîðìàöèè
Ê ë þ ÷ å â û å ñ ë î â à: ìåçåíõèìíûå êëåòêè ÷åëîâåêà, ñòâîëîâûå êëåòêè ýíäîìåòðèÿ ÷åëîâåêà, ñïîíòàííàÿ òðàíñôîðìàöèÿ in vitro, êàðèîòèï ýÌÑÊ.
Ìåçåíõèìíûå ñòâîëîâûå êëåòêè (ÌÑÊ) ÷åëîâåêà ÿâëÿþòñÿ òåðàïåâòè÷åñêèì ñðåäñòâîì äëÿ ëå÷åíèÿ ìíîãèõ
çàáîëåâàíèé. Îñíîâíûìè èñòî÷íèêàìè ÌÑÊ ÿâëÿþòñÿ
êîñòíûé ìîçã, ïóïîâèííàÿ êðîâü, æèðîâàÿ òêàíü.  ïîñëåäíèå ãîäû îïèñàí íîâûé èñòî÷íèê òàêèõ êëåòîê —
ìåíñòðóàëüíàÿ êðîâü (Meng et al., 2007; Patel et al., 2008;
Çåìåëüêî è äð., 2011). Ìåçåíõèìíûå ñòâîëîâûå êëåòêè
ýíäîìåòðèÿ ÷åëîâåêà (ýÌÑÊ) ïî ñâîèì ñâîéñòâàì îêàçàëèñü ñõîäíûìè ñî ñâîéñòâàìè ÌÑÊ, âûäåëåííûõ èç äðóãèõ èñòî÷íèêîâ. Ýòè êëåòêè ÿâëÿþòñÿ ìóëüòèïîòåíòíûìè, ìîãóò äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ â ðàçëè÷íûå êëåòî÷íûå
òèïû è, ñëåäîâàòåëüíî, ïåðñïåêòèâíû äëÿ èñïîëüçîâàíèÿ
â çàìåñòèòåëüíîé òåðàïèè. Îñíîâíûì èõ ïðåèìóùåñòâîì
ÿâëÿþòñÿ äîñòóïíîñòü è íåèíâàçèâíûé ñïîñîá ïîëó÷åíèÿ
èñõîäíîãî ìàòåðèàëà.
Ýôôåêòèâíîå ëå÷åíèå ñ ïîìîùüþ êëåòî÷íîé òåðàïèè
âî ìíîãèõ ñëó÷àÿõ òðåáóåò çíà÷èòåëüíîé áèîìàññû ñòâîëîâûõ êëåòîê.  èñõîäíîé òêàíè êîëè÷åñòâî ÌÑÊ, â
òîì ÷èñëå è ýÌÑÊ, î÷åíü íèçêîå, ïîýòîìó íàêîïëåíèå
òðåáóåìîé áèîìàññû êëåòîê äîñòèãàåòñÿ èõ êóëüòèâèðîâàíèåì. Ïîñêîëüêó êóëüòèâèðîâàíèå ñîìàòè÷åñêèõ êëåòîê ìîæåò ñîïðîâîæäàòüñÿ ñóùåñòâåííûìè èçìåíåíèÿìè
èõ ñâîéñòâ, â òîì ÷èñëå ïîÿâëåíèåì îíêîãåííîé òðàíñôîðìàöèè, êëåòêè, ïðåäíàçíà÷åííûå äëÿ ìåäèöèíñêèõ
öåëåé, äîëæíû ñòðîãî îöåíèâàòüñÿ ñ òî÷êè çðåíèÿ èõ áèîëîãè÷åñêîé áåçîïàñíîñòè (Wang et al., 2012). Íàìè ïîëó÷åíû è îõàðàêòåðèçîâàíû ëèíèè ýÌÑÊ (Çåìåëüêî è äð.,
2011). Ïëàñòè÷íîñòü ýÌÑÊ, ñïîñîáíîñòü äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ â ðàçíûå êëåòî÷íûå ëèíèè îòêðûëî øèðîêèå ïåðñïåêòèâû èõ òåðàïåâòè÷åñêîãî èñïîëüçîâàíèÿ.  ýòîé ñâÿ-
çè âîçíèêàåò âîïðîñ îá èõ áèîëîãè÷åñêîé áåçîïàñíîñòè, â
òîì ÷èñëå âîçìîæíîé òóìîðîãåííîñòè. Çàäà÷à äàííîé ðàáîòû ñîñòîÿëà â âûÿñíåíèè, ïîäâåðãàþòñÿ ëè ýÌÑÊ ñïîíòàííîé òðàíñôîðìàöèè ïðè äëèòåëüíîì êóëüòèâèðîâàíèè.
Ìàòåðèàë è ìåòîäèêà
Ê ó ë ü ò è â è ð î â à í è å. Âûäåëåííóþ èç ôðàãìåíòîâ
ýíäîìåòðèÿ, ñîäåðæàùèõñÿ â ìåíñòðóàëüíîé êðîâè, àäãåçèâíóþ êëåòî÷íóþ ïîïóëÿöèþ êóëüòèâèðîâàëè íà ñðåäå
DMEM/F12, ñîäåðæàùåé 10 % êîðîâüåé ýìáðèîíàëüíîé
ñûâîðîòêè, 1 % ãëóòàìèíà è 1 % ñìåñè àíòèáèîòèêîâ (Çåìåëüêî è äð., 2011). Êóëüòóðó ïåðåñåâàëè ñ ïîìîùüþ
0.05%-íîãî ðàñòâîðà òðèïñèíà è EDTA (Invitrogen, ÑØÀ)
â ñîîòíîøåíèè 1 : 3. Äëÿ êóëüòèâèðîâàíèÿ èñïîëüçîâàëè
ôëàêîíû Ò25 è Ò75 (Fisher Scientific, ÑØÀ). Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ýôôåêòèâíîñòè êëîíèðîâàíèÿ êëåòêè ñåÿëè â ÷àøêè Ïåòðè (6 ñì) ñ ïëîòíîñòüþ ïîñåâà 100 êëåòîê íà ÷àøêó. Ýôôåêòèâíîñòü êëîíèðîâàíèÿ îïðåäåëÿëè èç ñîîòíîøåíèÿ ÷èñëà êëîíîâ ê ÷èñëó ïîñåÿííûõ êëåòîê â %. Äëÿ
âèçóàëèçàöèè êëîíîâ èñïîëüçîâàëè êðàñèòåëü Ãèìçà
(BDH, Àíãëèÿ).
È ç ó ÷ å í è å ê è í å ò è ê è ð î ñ ò à. Ðîñòîâûå õàðàêòåðèñòèêè êóëüòóðû îïðåäåëÿëè ìåòîäîì ïîñòðîåíèÿ êðèâûõ ðîñòà. Äëÿ ýòîãî êóëüòóðó ýÌÑÊ ñåÿëè â ÷àøè Ïåòðè
(3.5 ñì) â êîëè÷åñòâå 1$105 êëåòîê íà ÷àøêó. Åæåäíåâíî â
òå÷åíèå 5 ñóò âûïîëíÿëè ïîäñ÷åò êëåòîê ñ ïîìîùüþ êàìåðû Ãîðÿåâà. Äëÿ êàæäîé ãðóïïû èçìåðåíèé èñïîëüçî69
À. Ï. Äîìíèíà è äð.
70
âàëè ïî 2 ÷àøêè, ïîäñ÷åò ïðîèçâîäèëè òðèæäû è âû÷èñëÿëè ñðåäíåå çíà÷åíèå. Âðåìÿ óäâîåíèÿ ïîïóëÿöèè ðàññ÷èòûâàëè ïî ôîðìóëå
td =
2⋅ Δt ⋅ x 0
,
x
ãäå td — âðåìÿ óäâîåíèÿ ïîïóëÿöèè, x0 — êîëè÷åñòâî êëåòîê â íà÷àëå èíòåðâàëà âðåìåíè, x — êîëè÷åñòâî
êëåòîê â êîíöå èíòåðâàëà âðåìåíè, Dt — èíòåðâàë âðåìåíè. Ïî ïîëó÷åííûì äàííûì ñòðîèëè ãðàôèê êðèâîé
ðîñòà.
Àíàëèç àêòèâíîñòè SA-b-ãàëàêòîçèäàçû
(SA-b-gal), êîòîðàÿ ÿâëÿåòñÿ øèðîêî ðàñïðîñòðàíåííûì
ìàðêåðîì êëåòî÷íîãî ñòàðåíèÿ. Îïðåäåëåíèå àêòèâíîñòè
ýòîãî ôåðìåíòà ïðîâîäèëè ñ ïîìîùüþ Senescence SA-bgalactosidase staining kit (Cell Signaling, ÑØÀ). Äëÿ ýòîãî
êëåòêè âûñåâàëè íà 3.5-ñàíòèìåòðîâûå ÷àøêè Ïåòðè. Íà
2—3-è ñóò êóëüòèâèðîâàíèÿ ðîñòîâóþ ñðåäó óäàëÿëè,
êóëüòóðó îòìûâàëè ðàñòâîðîì PBS. Äàëåå êëåòêè ôèêñèðîâàëè ñìåñüþ ôîðìàëüäåãèäà è ãëóòàðàëüäåãèäà ïðè
êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå â òå÷åíèå 10—15 ìèí. Ïîñëå
ôèêñàöèè êóëüòóðó òùàòåëüíî ïðîìûâàëè ðàñòâîðîì
PBS. Çàòåì äîáàâëÿëè îêðàøèâàþùèé ðàñòâîð è èíêóáèðîâàëè ïðè 37 °Ñ áåç CO2 â òå÷åíèå 8 ÷. Ïðè îêðàøèâàíèè
âåëè÷èíó ðÍ ïîääåðæèâàëè íà óðîâíå 6.0. Ðåçóëüòàòû
îöåíèâàëè ñ ïîìîùüþ ñâåòîâîãî ìèêðîñêîïà. Êëåòêè,
âñòóïèâøèå â ñòàäèþ ñòàðåíèÿ, îáíàðóæèâàëè ïî ïîÿâëåíèþ àêòèâíîñòè SA-b-gal, ÷òî ïðèâîäèëî ê ÿðêî-ñèíåìó
îêðàøèâàíèþ öèòîïëàçìû
Ê à ð è î ò è ï è ÷ å ñ ê è é à í à ë è ç. Ïðåïàðàòû ìåòàôàçíûõ õðîìîñîì ïîëó÷àëè ïî ñõåìå: íàêàïëèâàëè êëåòêè â ñòàäèè ìåòàôàçû ñ èñïîëüçîâàíèåì ìèòîñòàòèêà, îáðàáàòûâàëè èõ ãèïîòîíè÷åñêèì ðàñòâîðîì, ôèêñèðîâàëè
è ðàñêàïûâàëè ñóñïåíçèþ íà ïðåäìåòíûå ñòåêëà.  êà÷åñòâå ìèòîñòàòèêà èñïîëüçîâàëè 0.05 ìêã äåìèêîëöèíà
(Sigma, ÑØÀ) íà 1 ìë ñðåäû. ýÌÑÊ ñíèìàëè 0.05%-íûì
ðàñòâîðîì òðèïñèíà è EDTA. Ãèïîòîíè÷åñêóþ îáðàáîòêó
ïðîâîäèëè 0.56%-íûì ðàñòâîðîì KCl. Êëåòêè ôèêñèðîâàëè ñòàíäàðòíûì ñïîñîáîì â òðåõ ñìåíàõ ñâåæåïðèãîòîâëåííîé ñìåñè ìåòèëîâîãî ñïèðòà è ëåäÿíîé óêñóñíîé
êèñëîòû (3 : 1). Ôèêñèðîâàííûé ìàòåðèàë ðàñêàïûâàëè
íà âëàæíûå îõëàæäåííûå ïðåäìåòíûå ñòåêëà è âûñóøèâàëè ïðè 37 °Ñ. Õðîìîñîìû îêðàøèâàëè íà G-äèñêè êðàñèòåëåì Ãèìçà â ôîñôàòíîì áóôåðå (pH 6.4) ïîñëå ïðåäâàðèòåëüíîé îáðàáîòêè 0.25%-íûì ðàñòâîðîì òðèïñèíà
ïî ìîäèôèöèðîâàííîìó ìåòîäó Ñèáðàéò (Seabright,
1977). Ìåòàôàçíûå ïëàñòèíêè àíàëèçèðîâàëè ñ ïîìîùüþ
ñâåòîâîãî ìèêðîñêîïà (Carl Zeiss, Ãåðìàíèÿ) ñ èñïîëüçîâàíèåì èììåðñèîííîãî îáúåêòèâà 100%. Èäåíòèôèöèðîâàëè õðîìîñîìû â ñîîòâåòñòâèè ñî ñòàíäàðòíîé íîìåíêëàòóðîé (Yunis, 1980; Ìàìàåâà, 2002).
Ï ð î ò î ÷ í à ÿ ö è ò î ô î ò î ì å ò ð è ÿ. Èììóíîôåíîòèïè÷åñêèé àíàëèç ïîëó÷åííûõ ýÌÑÊ íà ïîâåðõíîñòíûå
CD-ìàðêåðû ïðîâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì ïðîòî÷íîãî
öèòîôëóîìåòðà Epics XL (Beckman Coulter, ÑØÀ). Åäèíè÷íóþ êëåòî÷íóþ ñóñïåíçèþ ïîëó÷àëè ïðè ïîìîùè
0.05%-íîãî òðèïñèíà è EDTA. Êëåòêè (1 ìëí/ìë) ðåñóñïåíäèðîâàëè â ðàñòâîðå PBS, ñîäåðæàùåì 5 % ýìáðèîíàëüíîé êîðîâüåé ñûâîðîòêè. Äëÿ àíàëèçà èñïîëüçîâàëè àíòèòåëà, êîíúþãèðîâàííûå ñ FITC èëè ôèêîýðèòðèíîì: CD13, CD29, CD34, CD44, CD73, CD90, CD105,
HLA-DR.
Âðåìÿ óäâîåíèÿ ïîïóëÿöèè
è ýôôåêòèâíîñòü êëîíèðîâàíèÿ ýÌÑÊ ðàçíûõ ëèíèé
Ëèíèÿ
Âðåìÿ óäâîåíèÿ, ÷
Ýôôåêòèâíîñòü
êëîíèðîâàíèÿ, %
2304
2804
2206
1410
0111
2810
27.4
27.2
26.9
26.7
27.1
28.6
66
62
59
60
64
60
Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå
Èññëåäîâàííûå íàìè ëèíèè ýÌÑÊ ìîðôîëîãè÷åñêè è
ïî ýêñïðåññèè ìàðêåðîâ áûëè ñõîæè. Èõ ïðîëèôåðàòèâíûå õàðàêòåðèñòèêè îöåíèâàëèñü ïî âðåìåíè óäâîåíèÿ
ïîïóëÿöèè, ýôôåêòèâíîñòè êëîíèðîâàíèÿ è ïî êðèâîé
ðîñòà. Â òàáëèöå ïðèâåäåíû äàííûå ïî õàðàêòåðèñòèêè
âðåìåíè óäâîåíèÿ ïîïóëÿöèè è ýôôåêòèâíîñòè êëîíèðîâàíèÿ êëåòîê ðàçíûõ ëèíèé. Âèäíî, ÷òî âðåìÿ óäâîåíèÿ
ïîïóëÿöèè â ðàçíûõ ëèíèÿõ âàðüèðîâàëî â áëèçêèõ ïðåäåëàõ îò 26.7 äî 28.6 ÷, ò. å. ïîïóëÿöèÿ óäâàèâàëàñü ïðèìåðíî ÷åðåç 1 ñóò êóëüòèâèðîâàíèÿ. Ýòè äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò îá àêòèâíîì äåëåíèè êëåòîê. Äëÿ ñðàâíåíèÿ
âðåìÿ óäâîåíèÿ êëåòîê êîñòíîãî ìîçãà äàæå íà ðàííèõ
ïàññàæàõ ñîñòàâëÿåò îêîëî 60 ÷ (Røsland et al., 2009). Âûñîêàÿ ýôôåêòèâíîñòü êëîíèðîâàíèÿ ýÌÑÊ (îêîëî 60 %)
òàêæå ñâèäåòåëüñòâóåò î âûñîêîì ïðîëèôåðàòèâíîì ïîòåíöèàëå äàííûõ êëåòîê. Îäíàêî ïî ìåðå êóëüòèâèðîâàíèÿ ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü êëåòîê ïîñòåïåííî ñíèæàåòñÿ. Àíàëèç êðèâûõ ðîñòà ýÌÑÊ íà ðàçíûõ ïàññàæàõ
ïîêàçàë, ÷òî íà 13-ì ïàññàæå êëåòêè äîñòèãàþò ñòàöèîíàðíîé ôàçû (îñòàíîâêè äåëåíèÿ) ïîçäíåå, ÷åì íà 5-ì
ïàññàæå. Êîëè÷åñòâî êëåòîê íà ñòàäèè ïëàòî (ñòàöèîíàðíîé ôàçû) â êóëüòóðàõ áîëåå ïîçäíèõ ïàññàæåé òàêæå
óìåíüøàåòñÿ (ðèñ. 1).
Óñòàíîâëåíî, ÷òî, íåñìîòðÿ íà òî ÷òî ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü ýÌÑÊ ñíèæàåòñÿ ïî ìåðå êóëüòèâèðîâàíèÿ, êëåòêè ñîõðàíÿëè ýêñïðåññèþ õàðàêòåðíûõ äëÿ
ýÌÑÊ ïîâåðõíîñòíûõ ìàðêåðîâ (ðèñ. 2). Ïðîôèëü ýêñïðåññèè ìàðêåðîâ íå ìåíÿëñÿ äàæå íà î÷åíü ïîçäíèõ ïàññàæàõ. Îíè ïî-ïðåæíåìó áûëè ïîçèòèâíû ïî ìàðêåðàì
ÌÑÊ CD13, CD29, CD44, CD73, CD90, CD105 è íåãàòèâ-
Ðèñ. 1. Êðèâûå ðîñòà ìåçåíõèìíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê ýíäîìåòðèÿ ÷åëîâåêà (ýÌÑÊ) íà ðàçíûõ ïàññàæàõ.
Êðèâûå 1 è 2 — ïàññàæè 4 è 13 ñîîòâåòñòâåííî.
ýÌÑÊ ÷åëîâåêà ïðè äëèòåëüíîì êóëüòèâèðîâàíèè íå ïîäâåðãàþòñÿ ñïîíòàííîé òðàíñôîðìàöèè
Ðèñ. 2. Îêðàñêà ýÌÑÊ íà àêòèâíîñòü b-ãàëàêòîçèäàçû íà 8-ì (à) è 26-ì (á) ïàññàæàõ.
Âèäíî, ÷òî àêòèâíîñòü ïðîÿâëÿåòñÿ òîëüêî íà 26-ì ïàññàæå (á).
Ðèñ. 3. Ýêñïðåññèÿ ìàðêåðîâ ýÌÑÊ íà ðàííèõ è ïîçäíèõ ïàññàæàõ. Äàííûå ïðîòî÷íîé öèòîìåòðèè.
Ñëåâà óêàçàí íîìåð ïàññàæà; íà êàæäîé ãèñòîãðàììå óêàçàíû ìàðêåð è åãî äîëÿ (%).
71
72
À. Ï. Äîìíèíà è äð.
Ðèñ. 4. Êàðèîòèï ýÌÑÊ.
à — êàðèîòèï êëåòêè ýÌÑÊ ñ íîðìàëüíûì íàáîðîì õðîìîñîì, 2n = 46, XX; á — êàðèîòèï ýÌÑÊ ñ òðèñîìèåé õðîìîñîì 3 è 7 è ýêòîïè÷åñêîé êîíúþãàöèåé ãîìîëîãîâ õðîìîñîìû 22. Ñòðåëêîé óêàçàíà èçîõðîìîñîìà 22.
íû ïî ãåìàòîïîýòè÷åñêèì ìàðêåðàì CD34 è HLA-DR
(êëàññ ²²).
Ïî ìåðå êóëüòèâèðîâàíèÿ ìîðôîëîãèÿ êëåòîê èçìåíÿåòñÿ. Èñõîäíûå êëåòêè èìåþò ôèáðîáëàñòîïîäîáíóþ
ôîðìó è îáðàçóþò ïîñëå ïåðåñåâà è êóëüòèâèðîâàíèÿ ìîíîñëîé. Íà ïîçäíèõ ïàññàæàõ êëåòêè óâåëè÷èâàþòñÿ â
ðàçìåðå, óïëîùàþòñÿ è íå îáðàçóþò ïëîòíîãî ìîíîñëîÿ.
Ýòè ïðèçíàêè õàðàêòåðíû äëÿ êëåòî÷íîãî ñòàðåíèÿ. Äëÿ
èäåíòèôèêàöèè êëåòî÷íîãî ñòàðåíèÿ øèðîêî èñïîëüçóåòñÿ îêðàñêà íà àññîöèèðîâàííóþ ñî ñòàðåíèåì SA-b-gal.
Ýòîò ôåðìåíò ÿâëÿåòñÿ ëèçîñîìàëüíîé ãèäðîëàçîé è àêòèâåí â íîðìå ïðè ðÍ 4.0. Èäåíòèôèêàöèÿ ñòàðåþùèõ
êëåòîê îñíîâàíà íà òîì, ÷òî â íèõ ýòîò ôåðìåíò ïðîÿâëÿåò ñâîþ àêòèâíîñòü ïðè ðÍ 6.0. Ïî ìåðå êóëüòèâèðîâàíèÿ ÷èñëî SA-b-gal-ïîçèòèâíûõ êëåòîê óâåëè÷èâàåòñÿ
(ðèñ. 3) è â êîíöå êîíöîâ äîñòèãàåò ïðàêòè÷åñêè 100 %.
 îáùåé ñëîæíîñòè âñå ïîëó÷åííûå íàìè ëèíèè ïðîøëè îêîëî 40—45 óäâîåíèé êëåòî÷íîé ïîïóëÿöèè, ïîñëå
÷åãî êëåòêè íåîáðàòèìî óòðàòèëè ñïîñîáíîñòü äåëèòüñÿ è
ïîñòåïåííî ïîãèáëè. Íè â îäíîé ëèíèè íå îòìå÷åíî ïåðåðîæäåíèÿ ýÌÑÊ â òðàíñôîðìèðîâàííûå èììîðòàëèçîâàííûå êëåòêè.
Êàðèîòèïèðîâàíèå êëåòîê äâóõ ëèíèé ýÌÑÊ ñ ïðèìåíåíèåì äèôôåðåíöèàëüíîé îêðàñêè õðîìîñîì íà G-äèñêè íà ðàííèõ ýòàïàõ êóëüòèâèðîâàíèÿ (ïàññàæè 3 è 6) è
áîëåå ïîçäíèõ (ïàññàæè 15 è 22) ïîêàçàëî, ÷òî áîëüøèíñòâî ïðîàíàëèçèðîâàííûõ êëåòîê èìåëè ñòðóêòóðó êàðèîòèïà, òèïè÷íóþ äëÿ êëåòîê ÷åëîâåêà â íîðìå. Íà ýòîì
ôîíå ñ íèçêîé ÷àñòîòîé âñòðå÷àëèñü êëåòêè ñ îòêëîíåíèÿìè êàê â ÷èñëå õðîìîñîì, òàê è â ñòðóêòóðå êàðèîòèïà (ïîÿâëÿëèñü àíåóïëîèäíûå, îêîëîòåòðàïëîèäíûå
êëåòî÷íûå âàðèàíòû). Öèòîãåíåòè÷åñêèå èçìåíåíèÿ áûëè íåñêîëüêèõ òèïîâ — ýêòîïè÷åñêàÿ êîíúþãàöèÿ ìåæäó õðîìîñîìàìè, ïîÿâëåíèå èçîõðîìîñîì, ëèøíèõ õðîìîñîìíûõ êîïèé, ïîëîìîê õðîìîñîìíîãî ìàòåðèàëà
(ðèñ. 4). Âûÿâëåííûå â ïðåäåëàõ êàæäîé ïðîàíàëèçèðîâàííîé êëåòî÷íîé ïîïóëÿöèè êàðèîòèïè÷åñêèå èçìåíåíèÿ íå áûëè çàêîíîìåðíûìè, íå ïîëó÷àëè ïðîëèôåðàòèâíîãî ïðåèìóùåñòâà â ïðîöåññå êóëüòèâèðîâàíèÿ êëåòîê
è íå ïðåïÿòñòâîâàëè ðàçâèòèþ èõ ðåïëèêàòèâíîãî ñòàðåíèÿ.
 ëèòåðàòóðå òàêæå èìåþòñÿ ñîîáùåíèÿ î òîì, ÷òî â
ïðîöåññå äëèòåëüíîãî êóëüòèâèðîâàíèÿ ÌÑÊ èç êîñòíîãî
ìîçãà è æèðîâîé òêàíè èíîãäà íàáëþäàþòñÿ ÷èñëåííûå
õðîìîñîìíûå èçìåíåíèÿ (àíåóïëîèäèÿ) (Buyanovskaya
et al., 2008; Tarte et al., 2010). Íè â îäíîì ñëó÷àå íàáëþäàâøèåñÿ õðîìîñîìíûå íàðóøåíèÿ íå ïðèâîäèëè ê
òðàíñôîðìàöèè ÌÑÊ. Áîëåå òîãî, îïèñàí ñëó÷àé òðàíñïëàíòàöèè êóëüòóðû ÌÑÊ êîñòíîãî ìîçãà ñ íåêîòîðûìè
öèòîãåíåòè÷åñêèìè èçìåíåíèÿìè â ñòðóêòóðå êàðèîòèïà
ïàöèåíòó. Ïðè íàáëþäåíèè çà ïàöèåíòîì â òå÷åíèå 2 ëåò
îïóõîëåé èëè äðóãèõ ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ ó íåãî íå îòìå÷àëè (Tarte et al., 2010).
Õîðîøî èçâåñòíî, ÷òî êóëüòèâèðóåìûå ôèáðîáëàñòû
èìåþò îãðàíè÷åííûé ñðîê æèçíè in vitro. Ïðè äëèòåëüíîì êóëüòèâèðîâàíèè îíè ïîñòåïåííî èñ÷åðïûâàþò ïðîëèôåðàòèâíûé ïîòåíöèàë è âõîäÿò â ôàçó êðèçèñà. Äàëüíåéøàÿ ñóäüáà êëåòîê îïðåäåëÿåòñÿ èõ âèäîâûì ïðîèñõîæäåíèåì.  êóëüòóðàõ êëåòîê ãðûçóíîâ áîëüøèíñòâî
êëåòîê â ôàçå êðèçèñà ïîãèáàåò, íî íåêîòîðûå èç íèõ ïðåîäîëåâàþò åå, âîçîáíîâëÿþò äåëåíèå è ïðèîáðåòàþò ñïîñîáíîñòü ê íåîãðàíè÷åííîìó ðàçìíîæåíèþ, ò. å. òðàíñôîðìèðóþòñÿ (Rossi et al., 2003).  îòëè÷èå îò êëåòîê
ãðûçóíîâ êóëüòèâèðóåìûå íîðìàëüíûå ôèáðîáëàñòû ÷åëîâåêà èìåþò îãðàíè÷åííûé ñðîê æèçíè in vitro è íå
òðàíñôîðìèðóþòñÿ (Hayflick, 1965). Èõ äëèòåëüíîå êóëüòèâèðîâàíèå ñîïðîâîæäàåòñÿ ðåïëèêàòèâíûì ñòàðåíèåì,
â ðåçóëüòàòå ÷åãî â êîíöå êîíöîâ êëåòêè ïîãèáàþò.
Ýìáðèîíàëüíûå ñòâîëîâûå êëåòêè ÷åëîâåêà (ÝÑÊ) â
îòëè÷èå îò íîðìàëüíûõ ôèáðîáëàñòîâ èìåþò íåîãðàíè÷åííûé ñðîê æèçíè â êóëüòóðå. Ýòî ñâîéñòâî äåëàåò èõ
ñõîæèìè ñ ðàêîâûìè êëåòêàìè. Â ïåðâûõ èññëåäîâàíèÿõ
ïðåäïîëàãàëè, ÷òî õðîìîñîìíûõ íàðóøåíèé â ÝÑÊ ÷åëîâåêà ïðè êóëüòèâèðîâàíèè íå ïðîèñõîäèò. Îäíàêî ïîçäíåå áûëî ïîêàçàíî, ÷òî, òàê æå êàê è îïóõîëåâûå êëåòêè,
ÝÑÊ ãåíåòè÷åñêè íå ñòàáèëüíû è ïðè äëèòåëüíîì êóëüòèâèðîâàíèè ìîãóò ïîäâåðãàòüñÿ çàìåòíûì öèòîãåíåòè÷åñêèì èçìåíåíèÿì (Hanson, Caisander, 2005; Maitra et al.,
2005). Ïëþðèïîòåíòíîñòü ÝÑÊ, ñïîñîáíîñòü èõ äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ ïðàêòè÷åñêè âî âñå òêàíè îðãàíèçìà îòêðûëè øèðîêóþ ïåðñïåêòèâó èõ èñïîëüçîâàíèÿ äëÿ êëåòî÷íîé òåðàïèè. Îäíàêî ãåíåòè÷åñêàÿ íåñòàáèëüíîñòü,
ýÌÑÊ ÷åëîâåêà ïðè äëèòåëüíîì êóëüòèâèðîâàíèè íå ïîäâåðãàþòñÿ ñïîíòàííîé òðàíñôîðìàöèè
îáðàçîâàíèå òåðàòîì ó ðåöèïèåíòîâ ïðè èõ òðàíñïëàíòàöèè (Anisimov et al., 2010) çíà÷èòåëüíî îãðàíè÷èâàþò
øèðîêîå ïðèìåíåíèå ýòèõ êëåòîê â ìåäèöèíñêèõ öåëÿõ.
 íàñòîÿùåå âðåìÿ áîëüøåå çíà÷åíèå äëÿ êëåòî÷íîé òåðàïèè ïðèäàþò âçðîñëûì ñòâîëîâûì êëåòêàì.
Âçðîñëûå ñòâîëîâûå êëåòêè ÿâëÿþòñÿ ìóëüòèïîòåíòíûìè è ìîãóò äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ â ðàçíûå êëåòî÷íûå
òèïû. Ó íèõ ðàçíîå ïðîèñõîæäåíèå, íî íàèáîëüøóþ ïåðñïåêòèâó äëÿ ìåäèöèíñêèõ òåõíîëîãèé èìåþò ÌÑÊ ÷åëîâåêà, êîòîðûå ïîëó÷àþò èç êîñòíîãî ìîçãà, æèðîâîé òêàíè, ïóïîâèííîé è ìåíñòðóàëüíîé êðîâè è äð. Êàê ïðàâèëî, êîëè÷åñòâà ÌÑÊ â èñõîäíîì ìàòåðèàëå íåäîñòàòî÷íî
äëÿ òðàíñïëàíòàöèè. Íåîáõîäèìîå êîëè÷åñòâî äîñòèãàåòñÿ ïîñëåäóþùèì êóëüòèâèðîâàíèåì êëåòîê. Ïîñêîëüêó
äëèòåëüíîå ïàññèðîâàíèå êëåòîê ìîæåò ñîïðîâîæäàòüñÿ
èõ ãåíåòè÷åñêèìè èçìåíåíèÿìè, à ñëåäîâàòåëüíî, ìîæåò
áûòü íåáåçîïàñíûì äëÿ ïàöèåíòîâ ïðè òðàíñïëàíòàöèè,
âîçíèê âîïðîñ î âîçìîæíîé òðàíñôîðìàöèè ÌÑÊ ÷åëîâåêà ïðè äëèòåëüíîì êóëüòèâèðîâàíèè.
Íàêîïëåííûå ê íàñòîÿùåìó âðåìåíè äàííûå ïðîòèâîðå÷èâû. Ïîñêîëüêó ÌÑÊ, òàê æå êàê è ôèáðîáëàñòû,
ïðîèñõîäÿò èç ìåçîäåðìû è ìîðôîëîãè÷åñêè ñ íèìè
ñõîäíû, ìîæíî áûëî áû ïðåäïîëàãàòü, ÷òî èõ ïîâåäåíèå
â êóëüòóðå áóäåò ñõîäíûì. Äåéñòâèòåëüíî, ÌÑÊ ìûøåé,
êàê è èõ ôèáðîáëàñòû, ïðè äëèòåëüíîì êóëüòèâèðîâàíèè
òðàíñôîðìèðóþòñÿ è èììîðòàëèçóþòñÿ (Ãðèí÷óê è äð.,
2008; Ïîïîâ è äð., 2009), à äëèòåëüíîå êóëüòèâèðîâàíèå
ÌÑÊ èç êîñòíîãî ìîçãà ÷åëîâåêà, òàê æå êàê äèïëîèäíûõ
ôèáðîáëàñòîâ ÷åëîâåêà, íå ñîïðîâîæäàëîñü èõ ñïîíòàííîé òðàíñôîðìàöèåé (Bernardo et al., 2007). Òåì íå ìåíåå
ïîÿâèëèñü ïóáëèêàöèè î ñïîíòàííîé òðàíñôîðìàöèè
ñòâîëîâûõ êëåòîê æèðîâîé òêàíè ÷åëîâåêà (Rubio et al.,
2005), êëåòîê êîñòíîãî ìîçãà (Røsland et al., 2009), íåéðîíàëüíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê (Wu et al., 2011). Îäíàêî ïåðâûå äâå ïóáëèêàöèè íåäàâíî áûëè îòîçâàíû àâòîðàìè
â ñâÿçè ñ òåì, ÷òî â îáîèõ ñëó÷àÿõ, êàê îêàçàëîñü, èìåëà ìåñòî êðîññ-êîíòàìèíàöèÿ êóëüòóð êëåòêàìè ïîñòîÿííûõ îïóõîëåâûõ ëèíèé ÷åëîâåêà (Torsvik et al., 2012),
ò. å. ôàêò ñïîíòàííîé òðàíñôîðìàöèè ÌÑÊ íå ïîäòâåðäèëñÿ.
Ïðè èñïîëüçîâàíèè ìåòîäà ÄÍÊ ôèíãåðïðèíòèíãà ñ
êîðîòêèìè òàíäåíìíûìè ïîâòîðàìè áûëî óñòàíîâëåíî,
÷òî â ïåðâîì ñëó÷àå êîíòàìèíàíòàìè îêàçàëèñü êëåòêè ôèáðîñàðêîìû ÷åëîâåêà HT1080, à êóëüòóðà êëåòîê
êîñòíîãî ìîçãà áûëà êîíòàìèíèðîâàíà êëåòêàìè HeLa.
Òåì íå ìåíåå èñõîäíûå äàííûå ýòèõ àâòîðîâ ïðîäîëæàþò
öèòèðîâàòü (Wang et al., 2012). Îêàçàëîñü òàêæå, ÷òî
êðîññ-êîíòàìèíàöèÿ îïóõîëåâûìè êëåòêàìè ÷åëîâåêà
HeLa èìåëà ìåñòî è â ðàáîòå ñî ñòâîëîâûìè íåéðîíàëüíûìè êëåòêàìè ÷åëîâåêà (Shen, 2012). Òàêèì îáðàçîì, äîñòîâåðíûå ñâåäåíèÿ î âîçìîæíîé ñïîíòàííîé òðàíñôîðìàöèè ñòâîëîâûõ êëåòîê êîñòíîãî ìîçãà è æèðîâîé òêàíè
÷åëîâåêà ïðè äëèòåëüíîì êóëüòèâèðîâàíèè îòñóòñòâóþò.
Õîòÿ ìû íå íàøëè â ëèòåðàòóðå ñîîáùåíèé îá èññëåäîâàíèÿõ ñïîíòàííîé òðàíñôîðìàöèè ýÌÑÊ, êîñâåííî
ìîæíî ñóäèòü î åå îòñóòñòâèè, ïîñêîëüêó â ðÿäå ðàáîò
óêàçûâàþò íà îãðàíè÷åííûé ïðîëèôåðàòèâíûé ïîòåíöèàë ýòèõ êëåòîê. Íàøè äàííûå ïî äëèòåëüíîìó êóëüòèâèðîâàíèþ íåñêîëüêèõ ëèíèé ýÌÑÊ ïîêàçàëè, ÷òî, êàê è
äèïëîèäíûå ôèáðîáëàñòû ÷åëîâåêà, âñå èññëåäîâàííûå
íàìè ëèíèè èìåëè îãðàíè÷åííûé ñðîê æèçíè in vitro. Ïî
ìåðå êóëüòèâèðîâàíèÿ ïðîëèôåðàòèâíûé ïîòåíöèàë êëåòîê âñåõ ëèíèé èñ÷åðïûâàëñÿ, êëåòêè âñòóïàëè â ôàçó
ðåïëèêàòèâíîãî ñòàðåíèÿ è â êîíöå êîíöîâ ïîãèáàëè. Íè
îäíà ëèíèÿ íå ïîäâåðãëàñü ñïîíòàííîé òðàíñôîðìàöèè.
73
Íà îñíîâàíèè íàøèõ è ïîñëåäíèõ ëèòåðàòóðíûõ äàííûõ ìîæíî óòâåðæäàòü, ÷òî ÌÑÊ ÷åëîâåêà íå ìîãóò ïîäâåðãàòüñÿ ñïîíòàííîé òðàíñôîðìàöèè.
Ðàáîòà âûïîëíåíà ïðè ôèíàíñîâîé ïîääåðæêå Ìèíèñòåðñòâà îáðàçîâàíèÿ è íàóêè ÐÔ (Ãîñóäàðñòâåííûé
êîíòðàêò ¹ 16.512.11.2191) è Ðîññèéñêîãî ôîíäà ôóíäàìåíòàëüíûõ èññëåäîâàíèé (ïðîåêò 11-04-12077-îôè-ì).
Ñïèñîê ëèòåðàòóðû
Ãðèí÷óê Ò. Ì., Èâàíöîâ Ê. Ì., Àëåêñååíêî Ë. Ë., Êîæóõàðîâà È. Â., Çàé÷èê À. Ì., Ïåòðîâ Í. Ñ., Ìèõàéëîâ Â. Ì., Ïîïîâ Á. Â. 2008. Õàðàêòåðèñòèêà êóëüòóðû ìåçåíõèìíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê ìûøè, ýêñïðåññèðóþùèõ GPF. Öèòîëîãèÿ. 50 (12) :
1030—1035.
Çåìåëüêî Â. È., Ãðèí÷óê Ò. Ì., Äîìíèíà À. Ï., Àðöûáàøåâà È. Â., Çåíèí Â. Â., Êèðñàíîâ À. À., Áè÷åâàÿ Í. Ê., Êîðñàê Â. Ñ., Íèêîëüñêèé Í. Í. 2011. Ìóëüòèïîòåíòíûå ìåçåíõèìíûå ñòâîëîâûå êëåòêè äåñêâàìèðîâàííîãî ýíäîìåòðèÿ. Âûäåëåíèå, õàðàêòåðèñòèêà è èñïîëüçîâàíèå â êà÷åñòâå ôèäåðíîãî
ñëîÿ äëÿ êóëüòèâèðîâàíèÿ ýìáðèîíàëüíûõ ñòâîëîâûõ ëèíèé
÷åëîâåêà. Öèòîëîãèÿ. 53 (12): 919—929.
Ìàìàåâà Ñ. Å. 2002. Àòëàñ õðîìîñîì ïîñòîÿííûõ êëåòî÷íûõ ëèíèé ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ. Ì.: Íàóêà. 231 ñ.
Ïîïîâ Á. Â., Ïåòðîâ Í. Ñ., Ìèõàéëîâ Â. Ì., Òîìèëèí À. Í.,
Àëåêñååíêî Ë. Ë., Ãðèí÷óê Ò. Ì., Çàé÷èê À. Ì. 2009. Ñïîíòàííàÿ òðàíñôîðìàöèÿ è èììîðòàëèçàöèÿ ìåçåíõèìíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê in vitro. Öèòîëîãèÿ. 51 (2) : 91—102.
Anisimov S. V., Morizane A., Correia A. S. 2010. Risks and
mechanisms of oncological disease following stem cell transplantation. Stem Cell Rev. and Rep. 6 : 411—424.
Bernardo M. E., Zaffaroni N., Novara F., Cometa A. M., Avanzini M. A., Moretta A., Montagna D., Maccario R., Villa R., Daidone M. G., Zuffardi O., Locatelli F. 2007. Human bone marrow derived mesenchymal stem cells do not undergo transformation after
long-term in vitro culture and do not exhibit telomere maintenance
mechanisms. Cancer Res. 67 : 9142—9149.
Buyanovskaya O. A., Kuleshov N. P., Nikitina V. A., Voronina E. S., Katosova L. D., Bochkov N. P. 2008. Spontaneous aneuploidy and clone formation in adipose tissue stem cells during different periods of culturing. Bull. Exp. Biol. Med. 146 : 344—347.
Hanson C., Caisander G. 2005. Human embryonic stem cells
and chromosome stability. APMIS. 113 : 751—755.
Hayflick L. 1965. The limited in vitro lifetime of human diploid cell strains. Exp. Cell Res. 37: 614—636.
Li H., Fan X., Kovi R. C., Jo Y., Moquin B., Konz R., Stoicov C., Kurt-Jones E., Grossman S. R., Lyle S., Rogers A. B., Montrose M., Houghton J. 2007. Spontaneous expression of embryonic
factors and p53 point mutations in aged mesenchymal stem cells: a
model of age-related tumorigenesis in mice. Cancer Res.
67 : 10 889—10 898.
Maitra A., Arking D. E., Shivapurkar N., Ikeda M., Stastny V.,
Kassauei K. et al. 2005. Genomic alterations in cultured human
embryonic stem cells. Nature Genetics. 37 : 1099—1103.
Meng X., Ichim T. E., Zhong J., Rogers A., Yin Z., Jackson J.,
Wang H., Ge W., Bogin V., Chan K. W., Thebaud B., Riordan N. H.
2007. Endometrial regenerative cells: a novel stem cell population.
J. Transl. Med. 5: 57—66.
Miura M., Miura Y., Padilla-Nash H. M., Molinolo A. A.,
Fu B., Patel V., Seo B. M., Sonoyama W., Zheng J. J., Baker C. C.,
Chen W., Ried T., Shi S. 2006. Accumulated chromosomal instability in murine bone marrow mesenchymal stem cells leads to malignant transformation. Stem Cells. 24 : 1095—1103.
Patel A. N., Park E., Kuzman M., Benetti F., Silva F. J., Allickson J. G. 2008. Multipotent menstrual blood stromal stem cells:
isolation, characterization, and differentiation. Cell Transplant. 17 :
303—311.
Røsland G. V., Svendsen A., Torsvik A., Sobala E., McCormack E., Immervoll H., Mysliwietz J., Tonn J. C., Goldbrunner R.,
74
À. Ï. Äîìíèíà è äð.
Lonning P. E., Bjerkvig R., Schichor C. 2009. Long-term cultures
of bone marrow-derived human mesenchymal stem cells frequently
undergo spontaneous malignant transformation. Cancer Res. 69 :
5331—5339.
Rossi O., Barbieri O., Frosina G. 2003. Time-course of spontaneous transformation of CD-1 mouse embryonic fibroblasts. Anticancer Res. 23 : 1373—1377.
Rubio D., Garcia-Castro J., Martín M. C., Fuente R., Cigudosa J. C., Lloyd A. C., Bernadet A. 2005. Spontaneous human adult
stem cell transformation. Cancer Res. 65 : 3035—3039.
Seabright M. 1971. A rapid banding technique for human
chromosomes. Lancet. 11: 971—972.
Shen L. 2012. In reply to Torsvik et al. Spontaneous transformation of stem cells in vitro and the issue of cross-contamination.
Int. J. Biol. Sci. 8 : 1053—1054.
Tarte K., Gaillard J., Lataillade J.-J. 2010. Clinical-grade production of human mesenchymal stromal cells: occurrence of aneuploidy without transformation. Blood. 115 : 1549—1553.
Torsvik A., Røsland G. V., Bjerkvig R. 2012. Spontaneous transformation of stem cells in vitro and the issue of cross-contamination. Int. J. Biol. Sci. 8 : 1051—1052.
Wang S., Qu X., Zhao R. C. 2012. Clinical applications of mesenchymal stem cells. J. Hematol. Oncol. 5 : 19—20.
Wu W., He Q., Li X., Zhang X., Lu A., Ge R., Zhen H.,
Chang A. E., Li Q., Shen L. 2011. Long-term cultured human neural stem cells undergo spontaneous transformation to tumor-initiating cells. Int. J. Biol. Sci. 7 : 892—901.
Yunis J. J. 1980. Nomenclature for high resolution human
chromosomes. Cancer Genet. Cytogenet. 2 : 221—229.
Ïîñòóïèëà 7 VIII 2012
MESENCHYMAL STEM CELLS OF HUMAN ENDOMETRIUM DO NOT UNDERGO
SPONTANEOUS TRANSFORMATION DURING LONG-TERM CULTIVATION
A. P. Domnina,1 I. I. Fridlianskaia, V. I. Zemelko, N. A. Pugovkina, Z. V. Kovaleva,
V. V. Zenin, T. M. Grinchuk, N. N. Nikolsky
Institute of Cytology RAS, St. Petersburg;
e-mail: [email protected]
Mesenchymal stem cells isolated from human endometrium (eMSC) are perspective source of stem cells
for regenerative medicine. Large amount of these cells accumulated by in vitro cultivation is usually required
for transplantation into patients. We established several cell eMSC lines and cultivated them during long period
of time to examine the possibility of their spontaneous transformation. All cell lines demonstrate limited lifespan, undergo replicative senescence and die. Karyotypic analysis on different passages reveals that most cells
display karyotypic stability. Thus, extended in vitro cultivation of eMSCs does not lead to spontaneous transformation that makes therapeutic application of these cells safety for patients. During long-term cultivation
eMSCs sustain the expression of surface markers.
K e y w o r d s: human mesenchymal stem cells, endometrial stem cells, spontaneous transformation, karyotype of eMSCs.
Похожие документы
Скачать