Автореферат - Тюменский Государственный Медицинский
реклама
На правах рукописи Никель Виктория Викторовна Структурная организация паравазальной соединительной ткани полых и паренхиматозных органов в возрастном аспекте 14.03.01 – анатомия человека Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Тюмень, 2016 2 Работа выполнена на кафедре анатомии и гистологии человека Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. ВойноЯсенецкого» Министерства здравоохранения Российской Федерации Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Самотесов Павел Афанасьевич Официальные оппоненты: Бородина Галина Николаевна – доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, заведующий кафедрой анатомии человека Баландина Ирина Анатольевна – доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера» Министерства здравоохранения Российской Федерации, заведующий кафедрой нормальной, топографической и клинической анатомии, оперативной хирургии. Лебединский Владислав Юрьевич – академик МАНЭБ, доктор медицинских наук, профессор, ФГБОУ ВО «Национальный исследовательский Иркутский государственный технический университет» научный руководитель Центра медико-биологических исследований Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации. Защита состоится «17» февраля 2016 г. в _____ часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 208.101.02 при ГБОУ ВПО «Тюменский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (625023, г. Тюмень, ул. Одесская, д.54). С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в научной библиотеке и на сайте (www.tyumsma.ru) ГБОУ ВПО «Тюменский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 625023, г. Тюмень, ул. Одесская, д.54; с авторефератом можно ознакомиться на сайте ВАК Министерства образования и науки РФ (www.vak2.ed.gov.ru). Автореферат разослан «__» _________ 2016 г. Ученый секретарь совета по защите докторских и кандидатских диссертаций доктор медицинских наук, доцент Вихарева Лариса Владимировна 3 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования. Основная роль в обеспечении адекватной гемодинамики во всех органах и тканях принадлежит сердцу. Однако, в каждой системе органов имеются строго специфичные морфологические и функциональные механизмы, обеспечивающие регуляцию местного кровотока. Причем в некоторых органах при равных условиях сердечной деятельности и общей гемодинамики местные механизмы регуляции кровотока могут играть решающую роль (Кошев В.И. с соавт., 2007; Волобуев А.Н. с соавт., 2009). Наиболее четко специфика местной гемодинамики проявляется в таких органах как сердце, легкие, печень, почки, что связано с особенностями их функционирования и их вкладом в поддержание гомеостаза организма в целом (Осипов А.И. с соавт., 2008). Органная специфичность соединительной ткани, по мнению ряда авторов (Баринов Э.Ф. с соавт., 2011; Гильмиярова Ф.Н. с соавт., 2011) это особенность ее метаболизма, реактивных проявлений и взаимоотношений с паренхимой. Во многих органах эти отношения носят характер гемато-паренхиматозных барьеров, строение которых поддается точным математическим измерениям, что дает возможность изучения органной специфики соединительной ткани именно на уровне тонких структурных взаимоотношений ее с паренхимой. Cooтнoшeниe cтрoмы и пaрeнхимы в oрraнaх являeтcя вaжным критeриeм для oцeнки рaбoты oрraнa (Кyвaeвa O.В., Вacильeвa Л.C., 2008; Шeрcтюк O.A. c coaвт., 2010). Вce aвтoры рaccмaтривaют рaбoтy oрraнa кaк cиcтeмы, oпрeдeляя ee coвoкyпнocтью cтрyктyр, corлacoвaннo выпoлняющих cлoжнyю фyнкцию, ycтoйчивocть или эффeкт кoтoрoй вышe, чeм aрифмeтичecкaя cyммa ycтoйчивocти или эффeктoв тeх жe cтрyктyр фyнкциoнaльнoй cиcтeмы. Пocкoлькy вce cиcтeмы пocтoяннo рaбoтaют и рaзрyшaютcя, oни дoлжны caмoвoccтaнaвливaтьcя. Имeннo c этих пoзиций и cлeдyeт рaccмaтривaть eдиницy взaимoдeйcтвия cтрoмы и пaрeнхимы (Дyмбрoвa Н.E., Пeрeтяrин O.A., 2005). За единицу взаимоотношения в 80-х годах прошлого века принято было принимать микрорайон (Казначеев В.П., 1971; Чернух А.М., 1980). Положение о функциональном элементе ткани было разработано на основании принципа единства кровообращения, метаболизма, регуляции и функции каждого конкретного органа. Морфологической основой гемодинамики в каждом органе является не только давление нагнетаемой в кровеносное русло крови и строение самой сосудистой стенки, генетически детерминированные, но и специфические черты строения соединительной ткани, располагающейся по периферии сосуда и оказывающей, в определенной степени, сопротивление кровотоку. Структура соединительнотканного остова паренхиматозных органов и особенностей строения органов полых подразумевает наличие паравазальной соединительной ткани, расположенной непосредственно вокруг сосудистой стенки и взаимосвязывающей кровеносные сосуды между собой. Паравазальная соединительная ткань, выделенная впервые, как нозологическая единица еще Т.Д. Никитиной (1986), выполняет не только 4 фиксацию кровеносного сосуда в пределах окружающих тканей органа, но может рассматриваться и как структура, влияющая на гемодинамику органа и степень кровоснабжения стенки самого кровеносного сосуда. Известно, что в течение жизни на сосудистую стенку и паравазальную соединительную ткань действуют различные механические факторы, которые приводят к тем или иным изменениям в структуре ткани. В настоящее время в литературе представлена лишь разрозненная информация о соединительной ткани вокруг крупных сосудисто-нервных пучков и имеются отдельные описания паравазальной клетчатки, упоминающиеся врачами-хирургами при проведении различного вида анестезий (Широченко Н.Д. с соавт., 1994; Павлинов Б.Г. с соавт, 2000). Однако, до настоящего времени, остаются практически не изученными особенности структурной организации паравазальной соединительной ткани полых и паренхиматозных органов большого и малого кругов кровообращения в различные возрастные периоды онтогенеза. Хотя именно возрастные изменения соединительнотканных структур, окружающих внутриорганные кровеносные сосуды, могут играть очень важную, а возможно даже решающую роль в функциональной активности тех или иных внутренних органов. Цель. Установить закономерности возрастных изменений структурной организации паравазальной соединительной ткани внутриорганных кровеносных сосудов полых и паренхиматозных органов на этапах постнатального онтогенеза. Задачи исследования 1. Изучить структурную организацию паравазальной соединительной ткани полых органов трупов мужчин в первом периоде зрелого возраста. 2. Определить строение паравазальной соединительной ткани паренхиматозных органов трупов мужчин первого периода зрелого возраста. 3. Провести сравнительную характеристику внутриорганной паравазальной соединительной ткани полых и паренхиматозных органов у трупов мужчин первого периода зрелого возраста. 4. Исследовать паравазальную соединительную ткань полых органов в возрастном аспекте (в пожилом и старческом возрастах). 5. Выявить закономерности возрастной изменчивости внутриорганной паравазальной соединительной ткани паренхиматозных органов в пожилом и старческом возрастах. 6. Провести сравнительную характеристику паравазальной соединительной ткани полых и паренхиматозных органов в старших возрастных группах. 7. Установить корреляционные связи между индексом пролиферации и индексом апоптоза в клетках внутриорганной паравазальной соединительной ткани полых и паренхиматозных органов. 8. Выявить корреляцию возрастных изменений паравазальной соединительной ткани с возрастными преобразованиями морфо-функциональных показателей кровеносных сосудов (индекс Керногана, вено-артериальный индекс). 5 Научная новизна исследования Впервые описана паравазальная соединительная ткань на уровне кровеносных сосудов четвертого-пятого порядка. С помощью комплексного подхода изучена паравазальная соединительная ткань внутриорганных кровеносных сосудов полых и паренхиматозных органов. Установлены качественные и количественные характеристики паравазальной соединительной ткани полых (на примере сердца, желудка и подвздошной кишки) и паренхиматозных (на примере легких и почек) органов, прослежены особенности взаимодействия структур паравазальной соединительной ткани кровеносных сосудов с адвентицией сосудистой стенки. Выявлено, что все элементы паравазальной соединительной ткани связаны между собой и без резких границ переходят друг в друга, формируя единую целостную систему данного органа. Проведено изучение возрастных изменений паравазальной соединительной ткани внутриорганных кровеносных сосудов легких, почек, сердца, желудка и подвздошной кишки на этапах постнатального онтогенеза (в пожилом и старческом возрастах). Установлено, что паравазальная соединительная ткань полых и паренхиматозных органов характеризуется специфическими возрастными изменениями, находящимися в прямой зависимости от типовой принадлежности органа. Раскрыты закономерности возрастной перестройки соединительнотканного комплекса внутриорганных кровеносных сосудов полых и паренхиматозных органов в возрастном аспекте, характеризующиеся количественными и качественными преобразованиями волоконного состава и экстрацеллюлярного матрикса. Впервые качественные и количественные возрастные изменения волоконного состава паравазальной соединительной ткани подтверждены возрастной динамикой индекса апоптоза (ИА) и индекса пролиферации (ИП) клеточного состава, в частности фибробластов. Выявлены корреляционные взаимосвязи между этими параметрами на различных этапах онтогенеза и построены графические регрессионные модели зависимости ИА и ИП от возраста мужчин. Проведено корреляционное сравнение полученных количественных и качественных возрастных преобразований волокнистого компонента паравазальной соединительной ткани полых и паренхиматозных органов с данными гистохимического исследования (содержание гликопротеинов (ГП) и гликозаминогликанов (ГАГ)) и морфо-функциональными показателями кровеносных сосудов (индекс Керногана и вено-артериальный индекс). Теоретическая и практическая значимость работы Проведенное исследование дополняет современные научные представления о структурной организации соединительной ткани внутренних органов в различные возрастные периоды. Полученные данные о возрастных преобразованиях паравазальной соединительной ткани внутриорганных кровеносных сосудов легких, почек, 6 сердца, желудка и подвздошной кишки необходимы для понимания механизмов возникновения патологического процесса в органах. Данные об индивидуальных возрастных особенностях соединительнотканного комплекса кровеносных сосудов внутренних органов являются предпосылкой для более качественной и своевременной диагностики, а также лечения заболеваний органов и систем. Результаты работы могут быть использованы в практической деятельности врачами патологоанатомами, судебно-медицинскими экспертами, терапевтами, хирургами, онкологами для более точной и своевременной дифференцировки возрастных преобразований, происходящих в органах, и патологических процессов, в них развивающихся. Построенные графические регрессионные модели зависимости между возрастом мужчин и значениями ИА и ИП, могут быть использованы для расчета уровня апоптоза и пролиферации для каждого известного возраста мужчин, что крайне важно для прогнозирования степени активности и старения фибробластов в паравазальной соединительной ткани. Основные положения диссертации используются в научноисследовательской работе и учебно-педагогическом процессе на кафедрах анатомии и гистологии человека и топографической анатомии и оперативной хирургии КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого. Основные положения, выносимые на защиту 1. Паравазальная соединительная ткань полых и паренхиматозных органов в первом периоде зрелого возраста характеризуется специфическими количественными и качественными особенностями, обеспечивающими функциональную биологическую стабильность органов. 2. Паравазальная соединительная ткань в старших возрастных группах обладает характерной органной специфичностью, зависящей от типовой принадлежности органа и кровеносного сосуда. 3. Соотношение уровня апоптоза и пролиферации в клетках паравазальной соединительной ткани полых и паренхиматозных характеризуется наличием обратных корреляционных связей. 4. Морфофункциональные показатели кровеносных сосудов (ИК и ВАИ) находятся в тесной корреляции с количественными параметрами паравазальной соединительной ткани. Апробация работы Тема диссертационного исследования утверждена проблемной комиссией «Морфология человека и животных» и Ученым Советом Красноярского государственного медицинского университета им. проф. В.Ф. ВойноЯсенецкого Министерства здравоохранения РФ (протокол №10 от 19.11.2014 г.). Результаты работы были представлены в виде докладов и публикаций на Всероссийской научной конференции с международным участием, посвященной 10-летию медицинского факультета и кафедры анатомии и 7 гистологии человека БелГУ «Актуальные вопросы эволюционной, возрастной и экологической морфологии» (г. Белгород, 2006); VI Всероссийский съезд морфологов с международным участием (г. Саратов, 2009); Общероссийской научной конференции «Актуальные вопросы науки и образования» (г. Москва, 2009); V Общероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы современной науки и образования» (г. Красноярск, 2010); Научно-практической конференции с международным участием «Естественные науки: достижения нового века» (ОАЭ, г. Шарджа, 2011); Международной научно-практической конференции «Перспективные инновации в науке, образовании, производстве и транспорте» (Украина, г. Одесса, 2011); III Эмбриологическом симпозиуме Всероссийского научного общества анатомов, гистологов, эмбриологов «ЮГРА-ЭМБРИО-2011. Закономерности эмбрио-фетальных морфогенезов у человека и позвоночных животных» (г. Тюмень, 2011); «Должановских чтениях» (г. Тула, 2011, 2012); XI Конгрессе международной ассоциации морфологов (г. Самара, 2012); Международной научно-практической конференции «Наука и образование XXI века» (г. Уфа, 2013); Научно-практической конференции с международным участием «Человек: здоровье, медицина, экология» (Китай, г. Хайнань, 2013); XII Конгрессе международной ассоциации морфологов (г. Тюмень, 2014); II Научно-практической конференции с международным участием «Человек: здоровье, медицина, экология» (Испания, г. Барселона, 2014); Международной научно-практической конференции «Наука и образование: инновации, интеграция и развитие» (г. Уфа, 2014); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной науки» (г. Уфа, 2015). Ежегодные отчеты о ходе выполнения диссертации заслушивались на заседаниях проблемной комиссии «Морфология человека и животных» Красноярского государственного медицинского университета имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого. Публикации По теме диссертации опубликовано 46 работ. Из них 16 статей и 6 тезисов в журналах, рекомендованных ВАК РФ, 8 статей в отраслевых периодических журналах, 16 работ в сборниках научных трудов и материалов международных и всероссийских научно-практических конференций. Получены 3 авторских свидетельства государственной регистрации баз данных количественных и качественных показателей волоконного состава паравазальной соединительной ткани. Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 335 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, четырех глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического списка, включающего 323 отечественных и 162 иностранных источников. Диссертация иллюстрирована 27 таблицами и 108 рисунками. 8 Благодарности Автор выражает глубокую искреннюю признательность и благодарность д.м.н., профессору кафедры анатомии и гистологии человека КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Касимцеву Альберту Александровичу за помощь в разработке и планировании научного исследования, а также постоянную консультативную помощь на всех этапах проведения работы. Личный вклад автора Автором самостоятельно разработан дизайн исследования, проведен забор трупного материала, морфометрические исследования гистотопограмм и гистологических препаратов. Лично автором оформлены первичный материал, электронная база данных, выполнена статистическая обработка полученного материала, проанализированы и интерпретированы результаты. В соответствии с требованиями ВАК России подготовлены диссертация и автореферат. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объект и методы исследования Все проведенные исследования выполнены с соблюдением этических принципов и разрешением локального этического комитета ГОУ ВПО «КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» (председатель Ю.А. Дыхно), протокол заседания №24/2010 от 14.05.2010г. Объектом исследования стали внутренние органы (сердце, легкие, желудок, подвздошная кишка, почки) от 80 трупов мужчин трех возрастных групп (первый период зрелого возраста (n=20), пожилой возраст (n=30), старческий возраст (n=30)), скончавшихся от насильственной и ненасильственной смерти с быстрым темпом умирания, при обязательном условии – смерть не связана с заболеваниями исследуемых органов. Забор органов производился не позднее 24 часов после констатации факта смерти. Извлечение органокомплекса при вскрытии происходило по методу Шора (метод полной эвисцерации). После препарирования сосудов четвертого порядка проводилось изготовление гистотопограмм и гистологических срезов с окраской по стандартным гистологическим методикам: гематоксилин+эозин (обзорный метод окраски для определения отношения между частями органа), ван Гизон (для дифференцировки коллагеновых волокон), резорцин+фуксин (по Вейгерту – для выявления эластических волокон), Маллори (для выявления различных элементов соединительной ткани, четкое окрашивание коллагеновых и ретикулярных волокон) (Елисеев В.Г. с соавт., 1967). Для определения ориентации волокнистых структур и межволоконных взаимоотношений на различных этапах онтогенеза, не выявляемых обычными гистотопографическими и гистологическими методами, проводилась сканирующая электронная микроскопия (СЭМ). Для проведения СЭМ фиксация материала проводилась в 2% глютаральдегиде в течение 5-7 суток с последующим отмыванием в фосфатном 9 буфере и дегидратацией в ряду спиртов возрастающей концентрации. Полное обезвоживание осуществлялось в вакуумной установке. Подготовленный таким образом материал напыляли рафинированной медью. Поверхность ткани для напыления получали путем разрыва материала. Изучение напыленных участков производили на сканирующем электронном микроскопе JSM-15 при ускоряющем напряжении 15 кВ и увеличении от 600 до 3000. Результаты гистологических исследований дополнялись данными гистохимии. Производилось определение ГАГ и ГП. Выявление ГАГ проводилось толуидиновым-синим при рН = 2.8 и 4.6 с использованием в качестве контроля метилирования и деметилирования. ГП выявлялись ШИКреакцией, контроль проводился ацетилированием и деацетилированием в соответствии с классическими гистохимическими методиками (Елисеев В.Г. с соавт., 1967). Для дифференцировки высокосульфатированных кислых ГАГ от слабосульфатированных, от гиалуроновой кислоты и сиаломуцинов проводилось окрашивание из серии соседних срезов. При этом первый срез обрабатывался раствором альцианового синего рН 2,5, второй – раствором альцианового синего рН 1,0. Сравнение двух срезов позволяет дифференцировать слабосульфатированные ГАГ, гиалуроновую кислоту и сиаломуцины на первой срезе (рН 2,5) и ГАГ с большим содержанием сульфидных групп – на втором (рН 1,0) . Идентификация апоптоза клеток соединительной ткани проводилась методом TUNEL (ab66108 – In situ Direct DNA Fragmentation Assay Kit, Abcam, США) для парафиновых блоков согласно стандартному протоколу фирмы производителя набора. При микроскопии (х400, микроскоп «Люмам Р8», видеосистема для анализа изображений Nikon Coolpix 4500 или х1000, микроскоп Olympus CX41 с видеокамерой Olympus DP71, Olympus, Япония) регистрировались FITCпозитивные клетки с разрывами ДНК. Конфокальную микроскопию проводили с помощью полностью автоматизированного конфокального лазерного сканирующего микроскопа с водной иммерсией Olympus FV10i-W (Olympus, Япония). Подсчет количества FITC-позитивных клеток производился на 100300 клеток при анализе не менее 10 полей зрения с последующим определением индекса апоптоза (ИА). При помощи иммуногистохимической методики (ИГХ) проводилась идентификация клеток паравазальной соединительной ткани, находящихся в состоянии пролиферации, путем выявления экспрессии белка Ki-67 (клон MIB1), который является наиболее четким и специфичным маркером пролиферации. При исследовании использовалась система визуализации DAKO REAL Detection System Peroxidase/DAB+ Rabbit/Mouse (DAKO, Дания) согласно стандартному протоколу фирмы производителя антител (DAKO, Дания). При микроскопии (х400, микроскоп «Биолам»-АУ12) регистрировались клетки осуществляющие экспрессию белка Ki-67 (клон MIB-1). Подсчет 10 количества Ki-67-позитивных клеток производился на 100-300 клеток при анализе не менее 10 полей зрения с последующим определением индекса пролиферации (ИП). Динамика возрастной изменчивости паравазальной соединительной ткани внутриорганных кровеносных сосудов легких, почек, сердца, желудка и подвздошной кишки подтверждалась путем определения морфофункциональных показателей: индекса Керногана (ИК) и вено-артериального индекса (ВАИ). Методы статистической обработки полученных данных Репрезентативность выборки исследуемых органов оценено по формуле: n = t2 2 2 , где n – необходимое число наблюдений; t – доверительный коэффициент, обеспечивающий 95% вероятность безошибочного прогноза (при P=0,95 коэффициент доверия t=1,96); σ – дисперсия; δ – предельная относительная ошибка выборки (δ с вероятностью 0,95 не должна превышать 5%) (Громыко Г.Л., 2005; Артюхов И.П. с соавт., 2008). Статистический анализ полученных данных включал в себя методы описательной статистики. Учитывая малый объем выборки (n=20, n=30), применялись непараметрические методы с определением медианы (Ме), верхнего (С25) и нижнего (С75) квартилей. Для сравнения показателей двух исследуемых групп использовался Uкритерий Mann-Whitney. Различия считались статистически значимыми при p<0,05. Для анализа нескольких независимых выборок использовался метод множественных сравнений Н-критерий Крускала-Уоллиса (Kruscal-Wallis test), который является модификацией U-критерий Mann-Whitney на случай для более двух независимых выборок. Для оценки межгрупповых различий распределения относительных долей ИА и ИП применяли непараметрический критерий хи-квадрат (χ²). На основе уравнений экспоненциальной регрессии были разработаны регрессионные модели зависимости ИА и ИП клеток паравазальной соединительной ткани от возраста мужчин. Данное уравнение имеет вид: y = a×eb×x, где у – искомое значение ИА или ИП (%); х – возраст обследуемого; а – коэффициент экспоненциальной регрессии; b – свободный член; е – число Эйлера (основание натурального логарифма, равное 2,718). С целью исследования интенсивности (слабая, средняя, сильная) взаимозависимости между количественными параметрами паравазальной соединительной ткани и данными морфофункционального исследования (ИК, ВАИ) применялся корреляционный анализ. Степень сопряженности (интенсивности) признаков определялась методом парной корреляции с вычислением коэффициента r. Для переменных величин Y и X слабой считалась корреляция при модульном значении r<0,3, при r=0,3÷0,7 интенсивность связи признавалась средней, и при r >0,7 расценивалась как сильная (Гржибовский А.М., 2008). 11 Обработка всех полученных данных проводилась на персональном компьютере с использованием пакета программ MS Office Excel 2007, а также программы «Statistica 6.0 и 10,0 for Windows». Результаты исследования и их обсуждение Установлено, что в первом периоде зрелого возраста вокруг кровеносных сосудов четвертого-пятого порядка полых и паренхиматозных органов определяется зона паравазальной соединительной ткани, в которой можно условно выделить два слоя: «центральный», расположенный непосредственно вокруг стенки кровеносного сосуда, и «периферический», расположенный на отдалении от кровеносного сосуда. При этом выявлено, что слои паравазальной соединительной ткани характеризуются определенными качественными и количественными специфическими особенностями структурной организации в зависимости от локализации, т.е. условно выделенные слои отличаются друг от друга по ширине, характеру и компактности расположения волокон, а также их размерам. Исследование показало, что «центральный» слой паравазальной соединительной ткани легких находится в тесном контакте с наружной оболочкой сосудистой стенки. В первом периоде зрелого возраста волокнистые элементы в структуре «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани легких составляют 61,97% [60,95; 63,64], а основное вещество в межклеточном матриксе – 38,04% [36,36; 39,05]. Среди всей волокнистой стромы превалируют коллагеновые волокна, составляющие 55,82% [54,37; 58,82]. Кроме того, в первом периоде зрелого возраста выявлены некоторые различия между сосудами артериального и венозного типов по характеру их топографических взаимоотношений с соединительнотканными структурами. Так, артерии связаны с близлежащими альвеолами рыхло, эти связи осуществляются посредством единичных волокон эластического типа. В венах сеть скрепляющих волокон развита значительно лучше, представлена эластическими и ретикулярными волокнами, равномерно переходящими в межальвеолярные перегородки, что создает эффект «сращения» вены и альвеолы. Мы считаем, что такие особенности сосудов артериального и венозного типов могут служить дополнительным критерием дифференцировки внутриорганных артерий и вен при проведении гистотопографических исследований. Установлено, что с возрастом ширина «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани легких увеличивается от 74,59 мкм [65,25; 85,20] в первом зрелом до 91,00 мкм [80,00; 100,00] в пожилом и 108,00 мкм [97,00; 118,30] в старческом возрасте (Н=42,22; р<<0,001). Анализ гистотопограмм показал, что независимо от возраста максимальная ее ширина зарегистрирована в местах взаимодействия с другими сосудами, бронхами и межальвеолярными перегородками. Следовательно, можно утверждать, что паравазальная соединительная ткань легких принимает непосредственное 12 участие в формировании соединительнотканного остова бронхо-васкулярных пучков. Во все возрастные периоды в структуре «центрально» расположенной паравазальной соединительной ткани легких преобладающими являются коллагеновые волокна. Однако количественное соотношение содержания коллагеновых, эластических и ретикулярных волокон имеет особенности в зависимости от возраста. Кроме количественных изменений, характерных для компонентов волокнистой стромы, зарегистрированы их качественные преобразования, а именно – увеличение толщины коллагеновых волокон в 2,6 раза в пожилом возрасте и 3,8 раза в старческом по сравнению с первым зрелым (Н=59,17; р<<0,001). Также отмечается изменение пространственной ориентации волокнистых компонентов, исчезновение извитости эластических волокон. Установлено, что в пожилом и старческом возрастах волокна «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани легких настолько тесно контактируют с наружной оболочкой сосудистой стенки, что приводит к формированию так называемых «околососудистых тоннелей» вокруг сосудов и, как следствие, к деформации самого сосуда. Данные изменения характерны преимущественно для сосудов артериального типа, вены оказываются более устойчивыми к проявлению возрастных изменений и подобного сращения паравазальной ткани с адвентициальной оболочкой не выявлено.. Гистохимическая картина межклеточного матрикса «центрально» расположенной паравазальной соединительной ткани легких в первом периоде зрелого возраста характеризуется умеренно выраженной ШИК-позитивной реакцией (2-3 балла), умеренным количеством ГАГ и ГП, выраженной фуксинофилией (3-5 баллов) и слабой метахромазией (0-2 балла). В пожилом и старческом возрасте сохраняется выраженная фуксинофилия и умеренная ШИК-позитивная реакция при полном отсутствии метахромазии. По мере отдаления от кровеносного сосуда структура паравазальной соединительной ткани меняется, она определяется в виде лучей, расходящихся радиарно во взаимопротивоположных направлениях. В паравазальной соединительной ткани легких, расположенной на отдалении от кровеносного сосуда, в первом зрелом возрасте соотношение волокнистых структур межклеточного матрикса и основного вещества составляют соответственно 69,89% [69,48; 70,65] и 30,11% [29,35; 30,52]. В структуре межклеточного матрикса превалируют грубые компактно расположенные коллагеновые волокна, их количество в указанной возрастной группе составляет 63,77% [63,41; 64,43]. Основное вещество характеризуется выраженной ШИК-позитивной реакцией при минимальной метахромазии, для коллагеновых волокон характерна интенсивная фуксинофилия. В пожилом и старческом возрастах основные закономерности возрастной изменчивости «периферического» слоя паравазальной соединительной ткани легких выражаются в увеличении волокнистого компонента до 89,15% [83,00; 13 92,00] в пожилом возрасте и до 96,41% [93,18; 98,40] (Н=61,44; р<<0,001) в старческом, при синхронном уменьшении доли основного вещества, которая после 75 лет составляет всего 3,59% [1,60; 6,82]. Возрастная дезорганизация «периферически» расположенной паравазальной соединительной ткани легких характеризуется увеличением доли волокон коллагенового типа до 87,30% [83,71; 89,50] в пожилом возрасте и до 96,41% [93,18; 98,40] в старческом (Н=69,46; р<<0,001). Доминирование содержания коллагеновых волокон в структуре межклеточного матрикса сопровождается значительным увеличением их толщины до 84,00 мкм [75,00; 91,00] с определенной степенью деформаций волокон. Также отмечается существенное снижение количества эластических и ретикулярных волокон. Одной из важных возрастных особенностей строения паравазальной соединительной ткани легких, расположенной на отдалении от кровеносных сосудов, является изменение взаимоотношений между кровеносными сосудами и альвеолами в виде образования плотных сращений, значительного утолщения и деформации межальвеолярных перегородок. Гистохимически в пожилом и старческом возрастах в составе «периферического» слоя паравазальной соединительной ткани легких не определяются ГАГ, в то время как в первом зрелом возрасте преобладали сульфатированные ГАГ. Выявленное снижение содержания ГАГ в основном веществе соединительной ткани в старших возрастных группах подтверждает мнение З.Н. Хисматуллиной (2012) о механизмах дисбаланса в соотношении основного вещества и волокон. Показатель этого соотношения снижается не только за счет увеличения содержания коллагеновых волокон, но и в результате уменьшения концентрации ГАГ, что оказывает влияние и на гемодинамику в органе, т.к. они, помимо прочих функций, обладают выраженной противосвертывающей активностью и регулируют проницаемость сосудистой стенки. При исследовании паравазальной соединительной ткани почек выявлено, что и артерии, и вены характеризуются хорошо выраженным «центральным» слоем паравазальной соединительной ткани. При этом независимо от возраста отмечается ее тесный контакт с адвентициальной оболочкой сосудов. Характерной особенностью возрастной перестройки является увеличение ширины «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани от 60,91 мкм [57,51; 63,63] в первом зрелом возрасте до 71,29 мкм [65,20; 78,40] в пожилом и до 109,75 мкм [99,80; 121,00] в старческом (Н=65,44; р<<0,001). Соотношение содержания волокон и основного вещества в первом зрелом возрасте составляет 66,77% [64,43; 67,83] и 33,23% [32,18; 35,58] соответственно. К пожилому возрасту это соотношение изменяется в результате увеличения волокнистого компонента и уменьшения основного вещества. К старческому возрасту содержание основного вещества в «центрально» расположенной паравазальной соединительной ткани почек достигает наименьших значений – 11,64% [10,93; 13,89] (Н=65,00; р<<0,001). Тесные топографические взаимоотношения сосудистой стенки и прилежащей к ней соединительной ткани при развитии возрастных изменений, 14 способствуют формированию ригидности сосудистой стенки, что отражается на специфике гемодинамики почек. Наиболее важная роль в данном процессе принадлежит изменению волокнистой структуры стромы, а именно увеличению процентного содержания коллагеновых волокон. Если в первом периоде зрелого возраста их доля составляет 57,72% [56,88; 58,72], то в пожилом возрасте их содержание увеличивается до 83,04% [81,94; 84,70] (U<<0,001; р<<0,001). Количество эластических волокон соответственно уменьшается от 24,67% [23,91; 25,14] до 13,35% [11,72; 14,72] (U<<0,001; р<<0,001), выявлено значительное уменьшение ретикулярных волокон от 17,76% [17,06; 18,18] в первом зрелом до 3,16% [2,49; 3,81] в пожилом возрасте (U<<0,001; р<<0,001). В старческом возрасте сохраняется тенденция к увеличению доли коллагеновых волокон при уменьшении эластических и ретикулярных, однако по сравнению с пожилым возрастом эти изменения можно обозначить как статистически не значимые. В структуре «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани почек также выявлены возрастные различия пространственного расположения волокон. В первом зрелом возрасте коллагеновые волокна, располагающиеся по всей ширине слоя паравазальной ткани, ориентированы циркулярно, дугообразно или под углом по отношению к просвету сосуда. Эластические волокна сконцентрированы на периферии от сосуда, тонкие ретикулярные волокна располагаются вокруг адвентициальной оболочки сосуда, их ориентация аналогична коллагеновым в указанной возрастной группе. В пожилом возрасте волокна располагается преимущественно перпендикулярно просвету сосуда. В старческом возрасте имеет место очень плотное взаимодействие волокон паравазальной соединительной ткани, расположенной непосредственно вокруг кровеносного сосуда, с адвентициальной оболочкой. Данная картина характерна только для сосудов артериального типа, вокруг которых формируются своеобразные «околососудистые тоннели», которые приводят к значительной деформации кровеносных сосудов. На отдалении от кровеносного сосуда структура паравазальной соединительной ткани несколько меняется, она определяется в виде лучей, расходящихся радиарно во взаимопротивоположных направлениях. В «периферически» расположенной паравазальной соединительной ткани почек в первом зрелом возрасте соотношение волокнистых структур межклеточного матрикса и основного вещества составляет соответственно 67,83% [66,69; 68,68] и 32,17% [31,32; 33,31]. В структуре межклеточного матрикса превалируют грубые компактно расположенные коллагеновые волокна, их количество в указанной возрастной группе составляет 61,24% [60,01; 62,43]. Эластические волокна, обладающие характерной извитостью, и ретикулярные волокна в «периферическом» слое паравазальной соединительной ткани почек расположены равномерно, взаимодействуют друг с другом и с коллагеновыми волокнами, выполняя скрепляющую функцию. 15 Возрастные изменения структурной организации «периферически» расположенной паравазальной соединительной ткани почек характеризуются снижением процентного содержания основного вещества при одновременном увеличении волокнистого компонента. В пожилом возрасте волокнистый компонент составляет 88,17% [86,19; 89,63], а основное вещество в межклеточном матриксе 11,84% [10,37; 13,81]. В старческом возрасте доля волокон достигает абсолютного максимума – 97,24% [95,72; 98,05] (Н=69,45; р<<0,001) при минимальном содержании основного вещества – 1,97% [1,21; 2,15] (Н=69,45; р<<0,001). Содержание коллагеновых волокон с возрастом значительно возрастает и изменяется их структура. Толщина пучков увеличивается до 42,85 мкм [36,00; 48,30] в пожилом возрасте и до 88,15 мкм [73,10; 92,10] в старческом (Н=69,45; р<<0,001). Коллагеновые волокна деформируются, становятся изогнутыми, располагаются радиально по отношению к просвету сосуда. Таким образом, по сравнению с «центрально» расположенной зоной паравазальной соединительной ткани, интенсивность возрастных изменений в структуре «периферического» слоя паравазальной соединительной ткани почек не уменьшается в старческом возрасте. Основное вещество межклеточного матрикса «центрально» расположенной паравазальной соединительной ткани почек характеризуется достаточной интенсивной ШИК-реакцией в 3-4 балла и минимальной интенсивностью метахромазии вплоть до полного ее отсутствия, гистохимическая картина «периферического» слоя практически сходна – ШИКпозитивная реакция до 4-х баллов и минимальная интенсивность метахромазии – от 0 до 1 балла. Для гистохимической картины межклеточного матрикса паравазальной ткани почек в возрасте старше 60 лет сохраняется выраженная фуксинофилия и умеренная ШИК-позитивная реакция при полном отсутствии метахромазии. Изучение паравазальной соединительной ткани внутриорганных кровеносных сосудов сердца выявило существенные возрастные особенности как в «центральном», так и в «периферическом» слоях. В первом периоде зрелого возраста в структуре паравазальной соединительной ткани, расположенной непосредственно вокруг кровеносных сосудов, доля волокнистого компонента составляет 61,80% [59,53; 63,85], в пожилом возрасте увеличивается до 74,47% [73,44; 75,14] и к старческому возрасту достигает 82,75% [81,17; 84,21] (Н=69,45; р<<0,001) и во все возрастные периоды характеризуются выраженной фуксинофилией. Соответственно доля основного вещества от первого периода зрелого возраста до старческого возраста пропорционально уменьшается. Среди волокон во все периоды преобладают коллагеновые, доля которых увеличивается с возрастом от 52,06% [49,61; 53,75] в первом зрелом возрасте до 77,14% [74,62; 79,03] в старческом (Н=63,52; р<<0,001). Толщина их в первом зрелом возрасте составляет 10,00 мкм [8,50; 12,00], в пожилом увеличивается до 18,00 мкм [16,00; 22,00], а в старческом составляют 25,00 мкм [21,00; 28,00] (Н=54,87; р<<0,001). Пространственное расположение коллагеновых волокон в 16 структуре «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани сердца с возрастом практически не изменяется, большинство волокон располагаются под углом по отношению к просвету сосуда. Доля эластических волокон в возрастном аспекте изменяется не столь интенсивно. В первом зрелом возрасте их содержание в структуре волокнистой стромы составляет 27,69% [26,46; 28,31] и остается практически неизменным в пожилом возрасте. Только после 75 лет выявлено снижение доли эластических волокон до 19,83% [18,04; 21,17] (Н=53,40; р<<0,001). Также выявлены возрастные отличия по характеру распределения эластических волокон в слое паравазальной соединительной ткани, расположенной непосредственно вокруг кровеносных сосудов. В первом зрелом и пожилом возрастах этот тип волокон равномерно распределен по всей ширине «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани. В старческом возрасте эластические волокна теряют извитость и сосредоточены преимущественно вблизи адвентициальной оболочки. Снижение доли ретикулярных волокон значительно интенсивнее по сравнению с возрастной трансформацией эластических волокон и возникает в более ранние сроки. Если в первом зрелом возрасте их содержание в «центральном» слое паравазальной соединительной ткани сердца составляет 20,25% [19,48; 22,08], то в пожилом их доля становится в 3,5 раза меньше – 5,77% [3,62; 7,98], а в старческом достигает минимальных значений – 3,66% [2,68; 4,44] (Н=52,47; р<<0,001). При гистохимическом анализе выявлено, что волокнистый компонент паравазальной соединительной ткани сердца, расположенной непосредственно вокруг кровеносных сосудов сердца, обладает фуксинофилией в 3-4 балла, в пожилом и старческом возрастах интенсивность фуксинофилии становится более выраженной до 4-5 баллов. В гистохимической картине основного вещества межклеточного матрикса выявлено возрастное снижение интенсивности ШИК-реакции, что свидетельствует об уменьшении содержания ГП. Известно, что изменения биохимического состава основного вещества существенным образом сказывается на адаптационных и регенераторных способностях органа (в данном случае внутриорганных сосудов сердца) и является предпосылкой к развитию различных патологических процессов, преимущественно склеротических и фибропластических (Горбунов А.А., 2008). Следует отметить, что возрастные преобразования структурной организации паравазальной соединительной ткани, расположенной непосредственно вокруг внутриорганных сосудов сердца, имеют значимые различия в зависимости от типа сосуда. Ширина «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани в первом периоде зрелого возраста одинакова для сосудов как артериального и венозного типов (в среднем 28,50 мкм [23,00; 37,00]). В пожилом возрасте у сосудов артериального типа регистрируется незначительное изменение ширины паравазальной соединительной ткани, расположенной непосредственно вокруг сосудов в большую сторону (30,0 мкм 17 [25,00; 32,90]), для венозных сосудов ее увеличение выражено в большей степени до 43,50 мкм [29,00; 51,00] (U=150,0; р<0,01). В старческом возрасте изменения, характерные для пожилого возраста, еще более нарастают. Кроме того, после 75 лет обнаруживается сращение волокон из «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани в структуру адвентициальной оболочки сосудов венозного типа. Для сосудов артериального типа данная картина не характерна. В структуре паравазальной соединительной ткани, расположенной на отдалении от внутриорганных кровеносных сосудов сердца, имеются специфические отличительные черты, отличающие ее от «центрально» расположенного слоя. Независимо от возраста волокна «периферического» слоя паравазальной соединительной ткани сердца представлены в виде изогнутых тяжей, идущих в различных направлениях от «центрально» расположенной паравазальной соединительной ткани и сосудистой стенки. При изучении структуры «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани стенки желудка, выявлены четкие различия в зависимости от типа сосуда. В первом периоде зрелого возраста, когда соединительная ткань является морфологически и функционально стабильной, ширина слоя «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани сосудов артериального типа почти в 2 раза больше по сравнению с венами – 43,50 мкм [30,50; 51,00] и 22,25 мкм [19,50; 27,50] соответственно. В пожилом и, особенно, в старческом возрасте эти показатели существенно увеличиваются, при этом «центрально» расположенная паравазальная соединительная ткань артерий, по-прежнему, выражена лучше, чем у сосудов венозного типа. Также во всех возрастных группах сохраняется закономерность, чем больше диаметр сосуда, тем шире центральный слой паравазальной соединительной ткани. «Центральный» слой паравазальной соединительной ткани внутриорганных сосудов стенки желудка, плотно прилежит к их адвентициальной оболочке. Данный факт актуален как для артериальных сосудов, так и для венозных. При этом, и в пожилом и старческом возрастах на некоторых участках определяется определенное сращение волокон паравазальной соединительной ткани с наружным слоем сосудистой стенки. Тенденции возрастных изменений структурной организации межклеточного матрикса «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани стенки желудка являются однотипными с другими органами, а именно характеризуются увеличением волокнистого компонента от 60,20% [59,01; 63,43] в первом зрелом возрасте до 72,58% [73,53; 75,08] к пожилому возрасту и до 83,16% [80,74; 85,62] к старческому (Н=69,45; р<<0,001). Доля основного вещества соответственно уменьшается с возрастом. Среди волокнистой стромы превалируют коллагеновые волокна, доля которых от первого периода зрелого возраста до старческого возраста увеличивается от 58,77% [57,53; 61,14] до 83,16% [80,74; 85,32] (Н=69,45; р<<0,001), и они обладают интенсивной фуксинофилией, наиболее ярко выраженной в старческом возрасте. 18 Коллагеновые волокна присутствуют по всей ширине «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани, но в первом зрелом возрасте наибольшая их концентрация определяется вокруг сосудов венозного типа, в непосредственной близости от адвентициальной оболочки. Также в качестве закономерности возрастной изменчивости коллагеновых волокон можно отметить утолщение их пучков и сокращение расстояния между волокнами. Доля волокон эластического типа в «центрально» распложенном слое паравазальной соединительной ткани внутриорганных кровеносных сосудов желудка в первом периоде зрелого возраста составляет 22,24% [21,00; 23,78] и достоверно не изменяется к пожилому возрасту (19,10% [18,43; 19,90]. Только после 75 лет содержание эластических волокон значимо снижается до 12,14% [11,62; 12,76] (Н=68,09; р<<0,001). Эластические волокна распределены по всей ширине слоя паравазальной соединительной ткани, однако в пожилом и старческом возрастах наибольшая их концентрация выявлена около сосудистой стенки (независимо от типа сосуда), в то время как в первом зрелом возрасте в сосудах венозного типа они сконцентрированы в большей степени в «периферических» отделах. Ретикулярные волокна, доля которых в первом зрелом возрасте составляет 18,07% [16,16; 19,47], распределены равномерно по всей ширине «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани. К пожилому возрасту содержание их уменьшается почти в два раза – до 9,58% [8,85; 10,18], а к старческому становится минимальным – 5,53% [5,07; 6,28] (Н=69,44; р<<0,001). Гистохимическая картина основного вещества межклеточного матрикса «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани желудка в первом зрелом возрасте характеризуется слабой интенсивностью метахромазии, которая полностью отсутствует в пожилом и старческом возрастах, а также выраженной ШИК-позитивной реакцией, несколько снижающейся с возрастом. В паравазальной соединительной ткани, расположенной на отдалении от кровеносного сосуда желудка, в первом периоде зрелого возраста содержание волокнистого компонента составляет 63,66% [60,75; 65,75], основного вещества – 36,34% [34,26; 39,26]. В последующих возрастных группах доля волокон увеличивается до 74,60% [72,47;76,35] и 85,39% [84,08; 87,33] в пожилом и старческом возрастах соответственно (Н=69,45; р<<0,001). Объем основного вещества в указанных возрастных группах соответственно снижается до 25,40% [23,65; 27,53] и 14,61% [12,67; 15,95] (Н=69,45; р<<0,001). В волокнистом компоненте преобладающими являются коллагеновые волокна, которые независимо от возраста не имеют четко упорядоченного расположения. При этом, закономерности возрастной трансформации коллагеновых волокон оказались ожидаемыми: доля их возрастает от 64,63% [61,35; 62,12] до 85,34% [83,15; 86,23] (Н=69,22; р<<0,001), толщина пучков увеличивается от 14,05 мкм [12,00; 15,85] в первом периоде зрелого возраста до 46,20 мкм [36,50; 50,00] к старческому возрасту (Н=63,11; р<<0,001). Содержание эластических волокон в структуре «периферического» слоя паравазальной соединительной ткани стенки желудка уменьшается постепенно от первого периода зрелого возраста до пожилого – с 21,72% [20,01; 23,10] до 19 18,04% [17,08; 19,50] соответственно (U=82,00; р<0,001). За период от пожилого до старческого возраста содержание эластических волокон снижается более интенсивно до 12,07% [10,12; 12,83] (U=9,00; р<<0,001). Данный вид волокон с возрастом теряет характерную для них извитость, толщина их уменьшается. Аналогичный характер возрастной изменчивость свойственен и ретикулярным волокнам. Расстояние между волокнами в структуре «периферического» слоя паравазальной соединительной ткани желудка от первого периода зрелого возраста до пожилого возраста практически не изменяется, сокращение этого расстояния в 2,2 раза по сравнению с предыдущей возрастной группой характерно для старческого возраста. Основное вещество межклеточного матрикса паравазальной соединительной ткани, расположенной на отдалении от кровеносных сосудов желудка характеризуется снижением интенсивности ШИК-реакции в пожилом и старческом возрастах по сравнению с первым зрелым. «Центральный» слой паравазальной соединительной ткани подвздошной кишки хорошо определяется как вокруг артерий, так и вокруг вен. Однако в отличие от аналогичных структур желудка, в подвздошной кишке разница в ширине слоя паравазальной соединительной ткани в зависимости от типа кровеносного сосуда не столь очевидна в первом периоде зрелого возраста. Отмечено лишь незначительное преобладание ширины слоя «центрально» расположенной паравазальной соединительной ткани в сосудах артериального типа. Однако, в пожилом возрасте различия между артериями и венами по степени выраженности паравазальной соединительной ткани усугубляются – вокруг артерий ее толщина увеличивается, а вокруг вен, напротив, становится почти в 3 раза меньше. В старческом возрасте для сосудов венозного типа изменения ширины «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани не характерно. Независимо от возраста паравазальная соединительная ткань, расположенная непосредственно вокруг кровеносных сосудов подвздошной кишки, плотно прилежит к адвентициальной оболочке сосуда. В первом периоде зрелого возраста соотношение волокнистого компонента и основного вещества составляет 62,42% [52,96; 55,93] и 37,58% [37,64; 39,03] соответственно. Количественный состав волокон в данной возрастной группе выглядит следующим образом: коллагеновые – 54,53% [53,62; 54,93], эластические – 25,17% [24,67; 25,98], ретикулярные – 20,38% [19,65; 29,74]. Возрастные изменения структурной организации «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани стенки подвздошной кишки характеризуются общими для многих органов тенденциями, а именно, изменением количественного соотношения коллагеновых, эластических и ретикулярных волокон в сторону увеличения доли коллагеновых. При этом, отмечаются ярко выраженные преобразования их структурной организации в виде утолщения коллагеновых волокон, сокращения расстояния между 20 волокнами, истончения эластических волокон и потери их извитости, истончения ретикулярных волокон. В гистохимической картине «центрально» расположенной паравазальной соединительной ткани подвздошной кишки отмечается интенсивная фуксинофилия волокон, несколько уменьшающаяся в пожилом возрасте и выраженная ШИК-позитивная реакция, при слабой метахромазии основного вещества межклеточного матрикса, также уменьшающиеся с возрастом. На отдалении от стенки кровеносного сосуда структура паравазальной соединительной ткани подвздошной кишки в первом периоде зрелого возраста представлена в виде тяжей коллагеновых волокон, скрученных по спирали и распределенных в различных направлениях относительно сосуда и «центрально» расположенной паравазальной соединительной ткани. В данный возрастной период доля коллагеновых волокон составляет 65,14% [62,61; 67,24], в пожилом возрасте увеличивается до 75,51% [73,80; 78,00], а в старческом достигает – 83,56% [82,54; 86,32] (Н=69,45; р<<0,001). Соответственно доля эластических и ретикулярных волокон пропорционально уменьшается. Наряду с этим установлено существенное сокращение расстояния между волокнами. В первом периоде зрелого возраста данный показатель составляет 17,85 мкм [16,00; 21,50], в пожилом возрасте сокращается до 9,55 мкм [8,50; 10,80], а старческом – до 5 мкм [4,00; 5,00] (Н=67,99; р<<0,001). Гистохимичекая картина «периферического» слоя паравазальной соединительной ткани подвздошной кишки аналогична «центральному» слою. На основании проведенного исследования была сформулирована научная концепция о структурной организации паравазальной соединительной ткани полых и паренхиматозных органов в первом периоде зрелого возраста, а также в старших возрастных группах. Установлено, что возрастные изменения «центрального» и «периферического» слоев паравазальной соединительной ткани представлены рядом сходных аспектов, которые прослеживаются во всех изучаемых органах и заключаются в увеличении содержания волокнистой стромы и уменьшении доли основного вещества в межклеточном матриксе; изменении структуры волокнистого компонента в виде увеличения количества коллагеновых волокон и уменьшения эластических и ретикулярных; утолщении пучков коллагеновых волокон, истончении эластических и ретикулярных волокон, утрате извитости эластическими волокнами, сокращении расстояния между волокнами. Гистохимически выявлена выраженная фуксинофилия коллагеновых волокон (4-5 баллов) независимо от возраста и снижение интенсивности ШИКреакции в пожилом и старческом возрасте. В то же время выявлено, что структурная организация паравазальной соединительной ткани полых и паренхиматозных органов в исследуемые возрастные периоды, характеризуется не только сходными тенденциями возрастных преобразований, но и обладает строго специфичными отличительными чертами, в зависимости от слоя паравазальной ткани, вида сосуда и типовой принадлежности органа. Первый период зрелого возраста определяется как период биологической надежности соединительнотканных структур, когда количественные и 21 качественные показатели структурной организации соединительной ткани характеризуются определенными постоянными параметрами и поэтому его можно считать периодом биологической стабильности. Выявлено, что в возрасте 21-36 лет в структуре «центрального» и «периферического» слоев паравазальной соединительной ткани и полых и паренхиматозных органов преобладает волокнистый компонент, среди которого более 50% составляют волокна коллагенового типа. Доля эластических (U=609,5; р<0,001) и ретикулярных (U=1144,0; р=0,70) волокон в структуре «центрально» расположенной паравазальной соединительной ткани, в данной возрастной группе, примерно одинаковая и не имеет достоверных отличий. В тоже время установлено, что в «периферическом» слое паравазальной соединительной ткани процентное содержание эластических волокон превышает аналогичный показатель ретикулярных волокон. Помимо общих характеристик, которыми обладает паравазальная соединительная ткань в первом периоде зрелого возраста, в процессе исследования выявлены определенные особенности, находящиеся в зависимости от типовой принадлежности органа. Паравазальная соединительная ткань создает специфические условия для гемодинамики в органе, поэтому одной из наиболее важных особенностей является различная ширина «центрального» и «периферического» слоев в полых и паренхиматозных органах. Кровеносные сосуды паренхиматозных органов характеризуются достоверно более развитой зоной паравазальной соединительной ткани (и «центрального» и «периферического» ее слоев) (U<<0,001; р<<0,001). Наибольшие значения данного параметра характерны для паравазальной ткани легких, где ширина «центрального» слоя составляет 74,59 мкм [65,25; 85,20], «периферического» - 61,60 мкм [57,36; 64,35] (U<<0,001; р<<0,001). Кроме того, выявлено, что кровеносные сосуды органов пищеварительной системы (желудка и подвздошной кишки) имеют разную ширину «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани в зависимости от типовой принадлежности сосуда. При этом, сосуды артериального типа имеют более широкий слой «центрального» слоя паравазальной ткани, по сравнению с венами. Возрастная перестройка паравазальной соединительной ткани полых и паренхиматозных органов, укладывающаяся в общие закономерности возрастных изменений соединительной ткани в организме человека, но при этом характеризуется индивидуальными особенностями в зависимости от типовой принадлежности органа, что было выявлено в процессе исследования. Так, общая тенденция всех возрастных изменений соединительнотканных образований заключается в нарастании волокнистой стромы, среди которой в значительной мере превалируют коллагеновые волокна. На этом фоне обнаруживается уменьшение содержания с возрастом волокон эластического типа. 22 Еще одним общим направлением возрастной изменчивости соединительной ткани является качественная деградация волокнистой стромы, проявляющаяся индивидуально в широких возрастных пределах. С возрастом происходит постепенное увеличение ширины зоны паравазальной соединительной ткани, причем и «центрального», и «периферического» ее слоев. Однако, изменение этого параметра происходит неравнозначно, зависит от видовой принадлежности кровеносных сосудов и типовой принадлежности органов. Прежде всего, установлено, что кровеносные сосуды паренхиматозных органов характеризуются более широким слоем паравазальной соединительной ткани в пожилом и старческом возрастах по сравнению с полыми органами, при этом ширина «центрального» слоя увеличивается в большей степени (U<<0,001; р<<0,001), нежели «периферически» расположенной соединительной ткани (U=57,5; р<<0,001). При этом, до 70 лет ширина слоя превалирует в легких, после 75 лет показатели в легких и почках практически равны. Для полых органов характерной чертой структурной организации «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани является разница в значениях для сосудов артериального и венозного типов, причем если для желудка и подвздошной кишки эти особенности были свойственны и в первом периоде зрелого возраста, то в сердце они были обнаружены после 65 лет. Установлено, что с возрастом в структурной организации паравазальной соединительной ткани изучаемых органов в значительной мере преобладает волокнистый компонент, количество которого в пожилом и старческом возрастах увеличивается, в большей степени в паренхиматозных органах. Кроме того выявлено, что волокнистый компонент преобладает в «периферическом» слое паравазальной соединительной ткани. Наибольшее содержание волокнистой стромы в «центральном» слое паравазальной ткани обнаружено в почках (Н=65,0; р<<0,001), а в «периферическом» слое – в легких (Н=61,44; р<<0,001) и эта тенденция сохраняется и в пожилом и в старческом возрастах. Содержание волокнистого компонента в структуре «центрального» (Н=210,06; р<<0,001) и «периферического» (Н=209,65; р<<0,001) слоев паравазальной ткани полых органов практически одинаковое на этапах постнатального онтогенеза. В процессе работы выявлено, что среди всего волоконного состава в структуре паравазальной соединительной ткани всех изучаемых органов в значительной мере доминируют коллагеновые волокна, которые и пожилом и в старческом возрастах в большей степени представлены в «периферическом» слое (U<<0,001; р<<0,001). Установлено, что с возрастом наибольшее содержание волокон коллагенового типа, как и всей волокнистой стромы, характерно для «центрального» (U=366,0; р<<0,001) и «периферического» (U<<0,001; р<<0,001) слоев паравазальной ткани паренхиматозных органов по сравнению с полыми. 23 Среди всех изучаемых органов наименьшее процентное содержание коллагеновых волокон в возрастном аспекте выявлено в «центральном» слое паравазальной соединительной ткани внутриорганных кровеносных сосудов сердца (Н=63,52; р<<0,001). Содержание волокон эластического типа зависит от типовой принадлежности органа. Так, полые органы характеризуются достаточно высоким содержанием эластических волокон как в «центральном» (U=585,5; р<<0,001), так и в «периферическом» (U<<0,001; р<<0,001) слоях паравазальной соединительной ткани, причем достоверных отличий в зависимости от зоны не установлено. При этом, максимальное количество эластических волокон среди всех исследованных органов установлено в паравазальной ткани сердца. В противовес этому в «периферическом» слое паравазальной ткани паренхиматозных органов содержание данных волокон минимально и составляет 1,12% [0,74; 1,90] и 1,79% [1,21; 2,15] в легких и почках соответственно. Выявлено, что процесс накопления избыточной массы коллагеновых волокон прекращается после 65 лет, что полностью согласуется с данными А.А. Касимцева с соавт. (1998) и соответствует их мнению о том, что эти явления дезавуируются проявлением старческой эмфиземы. При этом перерастянутые, расщепленные и фрагментированные волокна принимают качественно новый характер взаимоотношений, что в последующем подтверждено и другими исследователями (Абросимов В.Н. с соавт., 2005). Кроме того, в пожилом и старческом возрастах установлена значительная деформация сосудистой стенки. Это явление связано с тем, что волокна паравазальной соединительной ткани легких и почек, расположенной непосредственно вокруг адвентициальной оболочки, плотно с ней «сращиваются», что приводит к формированию так называемых «околососудистых тоннелей» вокруг сосудов, преимущественно артериального типа, при этом сосуды венозного типа оказываются более устойчивыми к проявлению возрастных изменений и столь плотного взаимодействия паравазальной ткани с адвентицией не происходит. По всей видимости, такие деформации в паренхиматозных органах могут быть гемодинамически значимыми, приводящими к нарушениям кровотока, что подтверждается данными литературы о присутствии корреляций между наличием приобретенных деформаций кровеносных сосудов, возрастом и частотой развития сосудистых катастроф (Бугровецкая О.Г. с соавт., 2010). В данном случае наше мнение о роли паравазальной соединительной ткани в возникновении деформаций сосудистой стенки согласуется с данными М.А. Лобова с соавт. (2006), изучавшими причины и последствия дезорганизации соединительно-тканного каркаса внутренних сонных артерий. Таким образом, можно констатировать, что паравазальная соединительная ткань полых и паренхиматозных органов подвержена существенным возрастным трансформациям, общей тенденцией которых является нарастание коллагеновой стромы, вытесняющей другие виды волокон. Уменьшение с возрастом эластических волокон скорее всего связано с высоким 24 уровнем эластазы в организме, который отмечается после 45 лет по данным И.П. Гонтаря с соавт. 2012. При этом конструктивная слабость эластических структур компенсируется в ткани за счет накопления коллагена (Herrmann K.L. et al., 2003). Полученные нами сведения не идут в противовес исследованиям, подтверждающим наличие в различных органах коллагенизации соединительнотканной стромы, деструкции эластических и ретикулярных волокон (Кобалава Ж.Д. с соавт., 2010; Альфонсова Е.В., 2012). В то же время, новые данные о содержании эластических волокон в структуре паравазальной соединительной ткани несколько противоречат Ю.И. Афанасьеву с соавт. (1972), по чьим данным количество эластина в почке крысы с возрастом увеличивается. Не вызывает сомнений, что соединительная ткань, окружающая внутриорганные кровеносные сосуды, способна влиять на характер гемодинамики в органах. Наиболее важным морфологическим субстратом гемодинамических нарушений можно считать «сращение» волокон соединительной ткани с наружной оболочкой сосуда, влекущее за собой снижение ее эластичности. Также значимым фактором можно назвать возрастные изменения направления волокон паравазальной соединительной ткани относительно стенки сосуда. Исходя из полученных результатов, можно сделать вывод, что паравазальная соединительная ткань внутриорганных кровеносных сосудов полых и паренхиматозных органов имеет определенные особенности структурной организации, что, безусловно, связано с тем давлением, которое действует на «центральный» и «периферический» слои паравазальной соединительной ткани, как со стороны кровеносного сосуда, так и со стороны близлежащих анатомических структур. С учетом особенностей строения «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани паренхиматозных органов, а также, учитывая «сращение» волокон с наружной оболочкой сосудистой стенки, можно говорить о том, что кровеносные сосуды органов данного типа характеризуются большей ригидностью, что в определенной степени сказывается на гемодинамических особенностях внутренних органов. Кровеносные сосуды полых органов окружены слоем паравазальной соединительной ткани с достаточно высоким содержанием эластических волокон, что приводит к формированию более выгодных функциональных условий, «сращения» волокон с адвентициальной оболочкой сосуда в пожилом и старческом возрастах практически не встречается. Таким образом, можно говорить о том, что кровеносные сосуды полых органов находятся в более «выигрышном», с анатомической точки зрения, положении, т.к. их соединительнотканный комплекс сохраняет достаточно большой процент эластических волокон, размер пучков коллагеновых волокон увеличивается не столь значительно, и самое главное, что не формируется «сращения» волокон «центрального» слоя паравазальной соединительной ткани с сосудистой стенкой. 25 Количественные результаты возрастных изменений соединительнотканного комплекса внутриорганных кровеносных сосудов, получили качественное подтверждение при проведении гистохимических исследований. Проводилось определение ГАГ и ГП, необходимость изучения которых вытекает из того, что они являются составной частью экстра-целлюлярного матрикса и претерпевают преобразования в процессе онтогенеза и в какой-то степени отражают строение соединительнотканного остова органа (David G. et al., 1995). Для паравазальной соединительной ткани, расположенной непосредственно вокруг кровеносных сосудов, характерна умеренно выраженная ШИК-реакция в 2-3 балла, в то же самое время, основное вещество сосудистой стенки обладает более активной ШИК-реакцией, что является еще одним критерием для дифференцировки структур. «Периферический» слой паравазальной соединительной ткани в первом периоде зрелого возраста также характеризуется несколько более выраженной ШИК-реакцией до 3-4 баллов. Среди ГАГ в данной возрастной группе преобладают сульфатированные полисахариды, при умеренном содержании гиалуроновой кислоты. Гиалуроновая кислота осуществляет регуляцию тканевой и сосудистой проницаемости, чему способствуют и –S-S-группы белков, которые стабилизируют макромолекулярную структуру белков. В основном веществе межклеточного матрикса «периферически» расположенной паравазальной соединительной ткани, характерно высокое содержание судьфатированных ГАГ, с преобладанием хондроитинсульфатов. По-видимому, усиление функциональной нагрузки в данной зоне соединительнотканного комплекса кровеносных сосудов внутренних органов, согласно теории «Биомеханического контроля морфогенеза» (Серов В.В., Шехтер А.Б., 1981), вызывает его перестройку с образованием более прочных структур за счет взаимосвязей с белками. Волокна соединительной ткани оказываются погруженными в гелеподобную субстанцию, которая выполняет одновременно две функции: объединяет волокнистые элементы паравазальной соединительной ткани и в то же время изолирует их друг от друга с учетом направления биомеханической нагрузки (Казначеев В.П., Маянский Д.Н., 1988). С возрастом количество ГАГ существенно уменьшается, их качественный состав, способность к образованию агрегатов и взаимодействию с коллагеном меняются, что отражается на трофике и механических свойствах тканей. Кроме того, после 65-70 лет ГАГ в структуре паравазальной соединительной ткани практически не определяются. Отмечается значительное снижение гиалуроновой кислоты, при преобладании крупнодисперсных молекул сульфатированных ГАГ типа хондроитинсульфатов «В» и «С». В противовес этому, количество ГП в пожилом и старческом возрасте увеличивается, что подтверждается данными ШИК-реакции. Выявленное в процессе проведения исследования возрастное изменение содержания кислых ГАГ и преобладание среди них хондроитинсульфатов при одновременном снижении количества гиалуроновой кислоты в структуре 26 паравазальной соединительной ткани почек полностью согласуется с возрастными преобразованиями остальной соединительнотканной стромы и приводит к формированию патологических процессов в органе. В частности, нарастание количества коллагена в структуре соединительнотканного комплекса кровеносных сосудов, изменение степени полимеризации основного вещества и накопление сульфатированных кислых ГАГ приводит к изменению структуры самих кровеносных сосудов и, как следствие, ведет к снижению фильтрационно-резорбционных процессов и развитию олигоурии, альбуминурии, цилиндрурии, уменьшению канальцевой реабсорбции фосфора и увеличению удельного веса мочи (Афанасьев Ю.И. с соавт., 1972). Можно предположить, что возрастное изменение фракционного состава кислых полисахаридов в основном веществе паравазальной соединительной ткани приводит к изменению фильтрующей способности гелевого фильтра, представляющего собой раствор высокополимерной гиалуроновой кислоты. Уменьшение соотношения гиалуроновой кислоты / хондроитинсульфатов и возросшая вследствие этого проницаемость, делают возможным увеличенное поступление в саму паравазальную ткань, а в последующем и в стенку кровеносного сосуда таких крупных молекулярных соединений, как фибриноген, липопротеиды и т.д. и стимуляции отложения фибрина и ионов кальция (Siegel G. et al., 1996), что приводит к нарушению функциональных свойств кровеносных сосудов. С целью подтверждения возрастных преобразований качественного и количественного характера, происходящих с волокнистыми элементами паравазальной соединительной ткани полых и паренхиматозных органов, было проведено исследование по изучению апоптоза и пролиферации в клетках паравазальной ткани, в частности фибробластов, которые являются основной и наиболее распространенной клеточной формой соединительной ткани и активно продуцируют компоненты межклеточного матрикса (Серов В.В, Шехтер А.Б., 1981). Апоптоз – это особый процесс гибели клеток после запуска специальной генетической программы самоуничтожения. Регулирование апоптоза на генномолекулярном уровне позволяет сохранить генетически запрограммированное для каждой ткани и органа постоянство числа клеток на протяжении всей жизни (Плосконос М.В., Николаев А.А., 2013; Потапнев М.П., 2014; Suh Y.S. et al., 2002). Универсальным маркером для оценки клеточного цикла является ядерный белок – антиген Ki-67 (клон MIB-1) – это наиболее надежный и четкий маркер пролиферации, который используется как важный прогностический критерий (Моргун А.В, Салмина А.Б., 2006; Bui M.H. et al., 2004). Установлено, что в первом периоде зрелого возраста апоптотическая активность клеток паравазальной ткани находится практически на одном уровне, при этом достоверных отличий по значению данного параметра установлено не было, однако максимальное значение зафиксировано в подвздошной кишке 9,85±1,12%, а минимальное – в желудке 6,79±0,49% (χ2=0,89) (рис. 1). 27 1 1 1 1 3 3 2 2 Рис. 1. TUNEL-позитивные клетки (1) в структуре паравазальной соединительной ткани артерии (2) и вены (3) стенки желудка мужчины 35 лет (× 400). Доказано, что с возрастом происходит нарастание данного параметра, причем в данном процессе имеются определенные особенности в зависимости от типовой принадлежности органа. В паренхиматозных органах отмечается значительное достоверное нарастание ИА к пожилому возрасту от 9,07±0,44% до 21,15±0,67% (χ2=0,89) в паравазальной ткани легких и от 8,24±0,46% до 20,09±0,71% (χ 2=0,89) – в почках. В последующем, к старческому возрасту, данный индекс продолжает увеличиваться (в зависимости от органа на 4-6%), однако темпы прироста значительно замедляются (рис. 2). В клетках паравазальной соединительной ткани полых органов пищеварительного тракта подобного резкого увеличения к пожилому возрасту не отмечается. Здесь темпы прироста ИА более постепенные, и они сохраняются и к старшей возрастной группе (старческому возрасту). Обособленно по возрастной динамике ИА клеток паравазальной ткани стоит сердце, где происходит значительное увеличение параметра от первого периода зрелого возраста (9,03±0,51%) к пожилому возрасту (33,9±1,07%), (χ2=0,89), а к старческому возрасту ИА практически не меняется (рис. 3). 1 1 1 Рис. 2. TUNEL-позитивные клетки (1) паравазальной соединительной ткани стенки подвздошной кишки мужчины 65 лет (× 400). 1 Рис. 3. TUNEL-позитивные клетки (1) в структуре паравазальной соединительной стенки желудка мужчины 88 лет (× 400). 28 ИП фибробластов паравазальной соединительной ткани изучаемых полых и паренхиматозных органов характеризуется совершенно противоположными темпами возрастной изменчивости на этапах постнатального онтогенеза. Так, в первом периоде зрелого возраста ИП находится практически на одном уровне в клетках паравазальной ткани и паренхиматозных, и полых органов пищеварительного тракта. Фибробласты паравазальной ткани сердца обладают наименьшей активностью пролиферации, среди всех изучаемых органов в данной возрастной группе, которая составляет 33,60±0,78% (χ 2=8,91), что на 10-15% меньше, чем в остальных изучаемых органах (рис. 4). 1 1 Рис. 4. Кi-67-позитивные клетки (1) паравазальной соединительной ткани сердца мужчины 30 лет (× 400). С возрастом интенсивность клеточной пролиферации снижается, причем в пожилом возрасте достоверных отличий по значению индекса установлено не было, а в возрасте старше 75 лет выявляется четко выраженная органная специфичность. В клетках паравазальной ткани паренхиматозных органов ИП характеризуется минимальными значениями среди всех изучаемых органов и составляет 10,09±0,24% (χ2=44,44) и 10,35±0,73% (χ2=64,69) в легких и почках соответственно (рис. 5). Клетки паравазальной ткани полых органов сохраняют значительно большую пролиферативную активность в старческом возрасте (особенно в желудке и подвздошной кишке), которая практически в два раза превосходит аналогичный параметр паренхиматозных органов в данной возрастной группе (рис. 6). 1 1 1 Рис. 5. Кi-67–позитивные клетки (1) паравазальной соединительной ткани левой почки мужчины 62 лет (× 400). 1 Рис. 6. Кi-67–позитивные клетки (1) паравазальной соединительной ткани стенки подвздошной кишки мужчины 88 лет (× 400). 29 Между уровнем апоптоза и уровнем пролиферации установлены обратные корреляционные взаимосвязи различной силы в ряде органов в различных возрастных группах. В частности, среди паренхиматозных органов наиболее типичный уровень взаимосвязей средней силы установлен в клетках паравазальной соединительной ткани почек в старческом возрасте (r=-0,635), что свидетельствует о снижении уровня пролиферации при повышении уровня апоптоза. Среди полых органов сильные корреляционные связи удалось выявить лишь среди клеток паравазальной соединительной ткани подвздошной кишки также в возрасте старше 75 лет (r=-0,874). Корреляционные взаимосвязи между изучаемыми параметрами в паравазальной соединительной ткани сердца несколько отличаются от аналогичных взаимосвязей в других органах. Так, уровни апоптоза и пролиферации фибробластов паравазальной соединительной ткани сердца характеризуются сильными корреляционными связями в первом периоде зрелого возраста (r=-0,862) и в старческом возрасте (r=0,927). Причем для первого периода зрелого возраста характерен обратный характер корреляционных связей, а в старческом возрасте – прямой, что может говорить о специфических приспособительных механизмах сердца, обеспечивающих компенсаторные реакции на различных этапах постнатального онтогенеза. По результатам проведенного исследования были построены графические регрессионные модели зависимости между возрастом мужчин и значение ИА и ИП и был установлен достаточно высокий уровень аппроксимации между этими параметрами (рис 7, 8). 35 y = 4,7623e0,0217x R² = 0,9375 30 Индекс апоптоза, % 30 Индекс апоптоза, % 35 y = 4,7623e0,0217x R² = 0,9375 25 20 15 10 5 25 20 15 10 5 0 0 0 20 40 60 80 100 Возраст, лет Рис. 7. Экспоненциальная регрессионная модель зависимости ИА клеток паравазальной соединительной ткани почек от возраста мужчин 0 20 40 60 80 100 Возраст, лет Рис. 8. Экспоненциальная регрессионная модель зависимости ИП клеток паравазальной соединительной ткани желудка от возраста мужчин По полученным уравнениям экспоненциальной регрессии, можно рассчитать уровень апоптоза и пролиферации для каждого известного возраста мужчин, что может быть использовано для прогнозирования степени активности и старения фибробластов в паравазальной соединительной ткани. 30 Полученные данные, касающиеся апоптоза и пролиферативной активности фибробластов паравазальной соединительной ткани полых и паренхиматозных органов, а также динамики их изменений возрастом аспекте, в определенной степени согласуются с данными Зугаировой О.Н с соавт. (2009), проводивших исследование на клетках щитовидной железы. Среди всех изучаемых нами органов, клетки паравазальной соединительной ткани сердца обладают уникальными, с нашей точки зрения, возможностями и апоптоза и пролиферации во всех исследованных возрастных группах. Клетки этого органа даже в старших возрастных группах сохраняют достаточно высокий уровень пролиферации, но в тоже самое время характеризуются значительным ИА (самым высоким среди всех изученных органов), что, по-видимому, является результатом адаптационноприспособительных механизмов в соединительной ткани органа, который испытывает колоссальные нагрузки на протяжении всего периода онтогенеза. В тоже самое время, высокий уровень пролиферативной активности в клетках паравазальной соединительной ткани полых органов пищеварительного тракта (желудка и подвздошной кишки) при среднем уровне апоптотической активности, в старческом возрасте свидетельствует о больших пролиферативных возможностях, которые увеличивают шанс образования клеток с поврежденной ДНК и, как следствие, возможность возникновения «злокачественных» мутаций, которые, в свою очередь, приводят к опухолевой трансформации. Для подтверждения роли соединительнотканного комплекса кровеносных сосудов в обеспечении гемодинамических процессов проведена оценка возрастной изменчивости основных морфо-функциональных показателей сосудов – индекса Керногана (ИК) и вено-артериального индекса (ВАИ). ИК характеризует пропускную способность сосудов и напрямую зависит от толщины tunica media стенки кровеносного сосуда и ширины его просвета. Установлено, что пропускная способность сосудов полых и паренхиматозных органов имеет ряд специфических отличий. Является очевидным и общепризнанным, что толщина сосудистой стенки артерий с возрастом увеличивается. Наше исследование по данному вопросу не выявило исключений из этого правила – во всех изученных органах данный показатель был существенно выше в пожилом и, особенно, в старческом возрасте по сравнению с первым зрелым. Ряд работ (Wei J.Y., 1992) указывают на то, что ширина просвета сосудов артериального типа с возрастом уменьшается. Однако наше исследование показало, что тенденция возрастных изменений данного показателя в сосудах полых и паренхиматозных органах является разнонаправленной. Постепенное значительное сужение просвета артерий характерно для паренхиматозных органов. Так внутриорганные артерии легких в первом зрелом возрасте имеют ширину просвета 167,1 мкм [164,3; 186,6], а в старческом – 143,3 мкм [138,7; 162,5]. В почках выявлено сужение просвета артерий от 173,1 мкм [170,0; 176,4] в первом зрелом возрасте до 147,3 мкм [145,1; 150,9]. 31 В полых органах ширина просвета внутристеночных артерий, напротив, увеличивается, что наиболее отчетливо проявляется у органов пищеварительной системы – желудка и подвздошной кишки. В связи с вышеизложенным характером возрастных изменений толщины стенки артерий и ширины их просвета ИК сосудов легких и, особенно, почек с возрастом значительно увеличивается. Это свидетельствует об ухудшении пропускной способности сосудов в пожилом и старческом возрастах. ИК артерий полых органов увеличивается только в промежутке от первого периода зрелого возраста до пожилого. В старческом возрасте, по сравнению с пожилым, пропускная способность артерий сердца, желудка и подвздошной кишки практически остается неизменной (рис. 9). 35 29,5 25 29,9 27,5 30 22,5 27 20,4 24,9 25 21,6 22,8 22,8 20,9 22,7 22,7 20,3 20 15 10 5 0 легкие почки 1 период зрелого возраста сердце пожилой возраст желудок подвздошная кишка старческий возраст Рис. 9. Пропускная способность (ИК) артериальных сосудов внутренних органов Показатели пропускной способности зависят также и от видовой принадлежности сосуда. Установлено, что толщина tunica media стенки сосудов венозного типа изменяется не столь значительно по сравнению с артериями. В паренхиматозных органах достоверных возрастных изменений толщины стенки венозных сосудов выявлено не было. Увеличение данного параметра от первого периода зрелого возраста до старческого возраста зарегистрировано в венах сердца, желудка и подвздошной кишки. В то же время ширина просвета венозных сосудов во всех изученных нами органах постепенно увеличивается с возрастом, причем наиболее значительные изменения данного параметра характерны для полых органов. Пропускная способность венозных сосудов лучше выражена по сравнению с артериями. Во всех возрастных группах и во всех органах ИК вен представлен меньшими значениями, чем аналогичный индекс артериальных сосудов. Возрастное снижение ИК венозных сосудов наиболее четко выражено в легких и почках. В венозных сосудах сердца изменения пропускной способности выявлены в период от первого периода зрелого возраста до старческого, а в желудке и подвздошной кишке на всем протяжении 32 онтогенетического цикла данный параметр остается практически неизменным (рис. 10). 18 16 14 14,8 13,8 13,7 15,5 14,2 13,9 13,9 13,2 13 13,3 13,2 13,2 13,8 13,6 13,4 12 10 8 6 4 2 0 легкие почки 1 период зрелого возраста сердце пожилой возраст желудок подвздошная кишка старческий возраст Рис. 10. Пропускная способность (ИК) венозных сосудов внутренних органов Таким образом, можно утверждать, что выявленный характер возрастных изменений связан с особенностями строения и функционирования внутренних органов. Паренхиматозные органы являются более уязвимыми в плане нарушений пропускной способности их кровеносных сосудов, при том, что внутриорганные сосуды полых органов представляют собой достаточно стабильные в структуры в гемодинамическом плане (особенно данный факт характерен для желудка и подвздошной кишки). Также в работе изучены емкостные характеристики сосудистого русла, определяемые по соотношению площади венозных и артериальных сосудов (вено-артериальному индексу – ВАИ). На всех этапах постнатального онтогенеза площадь артериальных сосудов меньше, чем венозных. При этом во всех исследованных органах, кроме почек, площадь венозных сосудов увеличивается. В почках в старческом возрасте отмечено снижение данного показателя. Возрастные изменения площади артериальных сосудов неравнозначны в зависимости структуры внутреннего органа. Так, в паренхиматозных органах площадь артерий с возрастом снижается. Для всех полых органов типичным является достоверное увеличение площади артериальных сосудов от первого периода зрелого возраста до пожилого. В старческом возрасте данный показатель в сердце продолжает нарастать, а в желудке и подвздошной кишке после 75 лет отмечено снижение площади артериальных сосудов. Показатели ВАИ как в полых, так и в паренхиматозных органах в первом зрелом возрасте имеют практически равные значения, что свидетельствует об относительной биологической стабильности систем в данный возрастной период (рис. 11). 33 Рис. 11. Показатели вено-артериального индекса кровеносных сосудов внутренних органов Возрастные преобразования ВАИ являются достаточно синхронными в полых и паренхиматозных органах. Во всех органах отмечается стойкая тенденция к нарастанию значений индекса. Исключением является только желудок, где в промежутке от пожилого до старческого возраста динамики индекса не наблюдается. Наиболее выраженное нарастание ВАИ характерно для паренхиматозных органов (рис. 11). При анализе корреляционных связей между параметрами паравазальной соединительной ткани и морфофункциональными параметрами кровеносных сосудов полых и паренхиматозных органов установлено, что они характеризуются взаимосвязями средней и сильной степени, причем с определенными особенностями в зависимости от типовой принадлежности органа. Так, для паравазальной ткани паренхиматозных органов (легких и почек) характерны тесные корреляционные связи практически со всеми параметрами кроме размеров эластических и ретикулярных волокон. Паравазальная ткань полых органов пищеварительного тракта (желудка и подвздошной кишки), в свою очередь имеет общую тенденцию корреляции, в основном с ИК и ВАИ. В сердце корреляции несколько отличаются от других изучаемых полых органов. Если рассматривать особенность корреляционных взаимосвязей в отдельные возрастные периоды, то они носят средний характер и с возрастом в значительной мере ослабевают. Подобная возрастная особенность, по-видимому, связана с наличием специфических механизмов в кровеносных сосудах, которые нивелируют влияние возрастных преобразований в структуре паравазальной соединительной ткани и обеспечивают определенные адаптационные условия кровотока на уровне органов даже в старших возрастных группах. Таким образом, наличие значительных возрастных изменений в структуре соединительнотканного остова кровеносных сосудов полых и паренхиматозных органов в сочетании с изменчивостью морфо-функциональных показателей 34 сосудистого русла указывают на роль соединительнотканных структур внутриорганных кровеносных сосудов в функциональной активности внутренних органов в возрастном аспекте. Выводы 1. Внутриорганная паравазальная соединительная ткань, являющаяся составной частью соединительно-тканного остова органа, состоит из «центрального» и «периферического» слоев, имеет органную, возрастную и локальную специфичность, заключающуюся в ее качественных и количественных характеристиках. 2. В паравазальной соединительной ткани паренхиматозных органов мужчин в первом периоде зрелого возраста преобладает волокнистый компонент, среди которого доминируют коллагеновые волокна. В «периферическом» слое их количество составляет 63,77% [63,41;64,43] в легких и 61,24% [60,01;62,43] в почках, по сравнению с центральным слоем, где процентное содержание коллагеновых волокон составляет 55,82% [54,37; 58,82] и 57,72% [56,88; 58,72] в легких и почках соответственно. 3. В структуре паравазальной соединительной ткани полых органов мужчин в возрасте 22-35 лет превалируют волокнистые элементы с преобладанием коллагенового компонента в «периферически» расположенных отделах с различной шириной «центрального» слоя вокруг сосудов и в большей степени вокруг артерий. 4. Паравазальная соединительная ткань полых и паренхиматозных органов мужчин в возрастном аспекте характеризуется увеличением ширины слоя, нарастанием содержания коллагеновых волокон и их дезорганизацией, сокращением расстояния между волокнами. 5. Паравазальная соединительная ткань паренхиматозных органов в старших возрастных группах уплотняется и плотно прилежит к адвентициальной оболочке артериальной сосудистой стенки, формируя при этом своеобразный «околососудистый тоннель». По периферии волокнистые структуры утолщаются по сравнению с центральным слоем и составляют в легких 84,00 мкм [75,00;91,00], в почках - 88,15 мкм [73,10;92,10] (р<<0,001). 6. Структура паравазальной соединительной ткани полых органов с возрастом характеризуется в сердце увеличением ширины «центрального» слоя вокруг артериальных сосудов до 40,50 мкм [24,00;49,00], вокруг венозных сосудов – до 65,00 мкм [48,00;74,00]; в желудке увеличением ширины слоя вокруг артерий и вен; в подвздошной кишке – увеличением ширины слоя вокруг сосудов артериального типа до 44,00 мкм [41,00;47,00] и уменьшением вокруг сосудов венозного типа до 11,00 мкм [10,00;12,00]. 7. Апоптоз фибробластов паравазальной соединительной ткани в изучаемых органах с возрастом постепенно увеличивается, что в большей степени характерно для клеток паравазальной ткани сердца – 32,43% ±0,78 и свидетельствует об адаптационно-приспособительных механизмах соединительнотканных структур органа. 35 8. Индекс пролиферации в фибробластах паравазальной соединительной ткани с возрастом снижается как в полых, так и в паренхиматозных органах. Клетки паравазальной соединительной ткани полых органов после 75 лет сохраняют высокий уровень пролиферации (20,50% ±0,79 и 20,24% ±0,73 в желудке и подвздошной кишке соответственно). 9. Морфофункциональные показатели пропускной способности кровеносных сосудов полых и паренхиматозных органов характеризуются средними и сильными корреляционными связями с количественными параметрами паравазальной соединительной ткани, отражают особенности внутриорганного кровотока и являются критериями, по которым можно косвенно судить о характере возрастной изменчивости паравазальной соединительной ткани. Практические рекомендации 1. Выявленные закономерности структурной организации паравазальной соединительной ткани полых и паренхиматозных органов в первом периоде зрелого возраста, а также в пожилом и старческом возрастах могут использоваться в практическом здравоохранении и судебной медицине в качестве критериев нормы у мужчин соответствующих возрастных групп 2. В связи с тем, что возрастные преобразования соединительной ткани создают в организме фоновые условия для запуска и развития атеросклеротических процессов, рекомендуется всем мужчинам старших возрастных групп проводить профилактические мероприятия данного заболевания. 3. Учитывая высокий уровень индекса пролиферации в клетках паравазальной соединительной ткани полых органов пищеварительного тракта, необходима высокая онконастороженность врачей первичного звена и узких специалистов с целью профилактики и ранней диагностики новообразований желудка и тонкой кишки у мужчин в пожилом и старческом возрастах. 4. Построенные, по результатам проведенного исследования, графические регрессионные модели зависимости между возрастом мужчин и значениями индексов апоптоза и пролиферации, могут быть использованы для расчета уровня апоптоза и пролиферации для каждого известного возраста мужчин, что крайне важно для прогнозирования степени активности и старения фибробластов в паравазальной соединительной ткани. 5. Теоретические основы диссертационной работы внедрены в теоретический и лекционный курсы по дисциплинам «Анатомия», «Гистология, эмбриология, цитология», «Топографическая анатомия и оперативная хирургия» для обучающихся в медицинских ВУЗах. Список трудов, опубликованных по теме диссертации 1. Касимцев, А. А. Особенности паравазальной соединительной ткани субсегментарных сосудов малого круга кровообращения у детей первых лет жизни / А. А. Касимцев, В. В. Никель, Л. Ю. Вахтина // Естествознание и гуманизм : сб. науч. тр. – Томск, 2007. - №1 - С. 54-55. 36 2. Никель, В. В. Структурная организация паравазальной соединительной ткани внутриорганных кровеносных сосудов малого круга кровообращения в первом периоде зрелого возраста / В. В. Никель // Актуальные вопросы медицины и новые технологии: сб. науч. тр. – Красноярск, 2007. – С. 133-138. 3. Никель, В. В. Гистохимическая характеристика паравазальных структур легких / В. В. Никель, А. А. Касимцев // Актуальные проблемы морфологии: сб. науч. тр., посвященный 65-летию организации Красноярской государственной медицинской академии. – Красноярск, 2007. – С. 101-103. 4. Касимцев, А. А. Особенности структурной организации паравазальной соединительной ткани в различных отделах легких / А. А. Касимцев, В. В. Никель // Актуальные проблемы морфологии: сб. науч. тр., посвященный 65летию организации Красноярской государственной медицинской академии. – Красноярск, 2007. – С. 57-59. 5. Касимцев, А. А. Локальные проявления возрастной изменчивости паравазальной соединительной ткани внутриорганных артерий легких на протяжении органа / А. А. Касимцев, В. В. Никель // Успехи современного естествознания. - М., 2009. - №7. – С. 66-68. 6. Касимцев, А. А. Структурная организация паравазальной соединительной ткани внутриорганных кровеносных сосудов малого круга кровообращения / А. А. Касимцев, В. В. Никель // Успехи современного естествознания. - М., 2009. №7. – С. 68-70. 7. Никель, В. В. Особенности метаболизма паравазальной соединительной ткани легких в возрастном аспекте / В. В. Никель, А. А. Касимцев // Морфология. – 2009. - №4. – С. 106. 8. Касимцев, А. А. Паравазальная соединительная ткань кровеносных сосудов малого круга кровообращения / А. А. Касимцев, В. В. Никель // Морфология. – 2009. - №4. – С. 72. 9. Никель, В. В. Возрастная изменчивость морфо-функциональных показателей внутриорганных субсегментарных сосудов легких / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова // Актуальные вопросы биомедицинской антропологии и морфологии: сб. науч. тр. – Красноярск, 2009. – С. 230-236. 10. Касимцев, А. А. Паравазальная соединительная ткань внутриорганных кровеносных сосудов легких в пожилом и старческом возрасте / А. А. Касимцев, В. В. Никель // Сиб. мед. журн. (Иркутск). – 2009. - №4. – С. 95-97. 11. Никель, В. В. Паравазальная соединительная ткань кровеносных сосудов почек / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова // Актуальные вопросы современной науки и образования: сб. материалов V Общероссийской научнопрактической конференции с международным участием.- Красноярск, 2010. – С. 342-344. 12. Касимцев, А. А. Паравазальная соединительная ткань почек в пожилом возрасте / А. А. Касимцев, В. В. Никель, В. П. Ефремова // Актуальные вопросы современной науки и образования: сб. материалов V Общероссийской научнопрактической конференции с международным участием.- Красноярск, 2010. – С. 337-340. 37 13. Никель, В. В. Структурная организация паравазальной соединительной ткани почек в старческом возрасте / В. В. Никель // В мире науч. открытий. – Красноярск, 2010. - №6.3 (12). – С. 348-350. 14. Батухтина, Н. П. Структурная организация паравазальной соединительной ткани внутриорганных кровеносных сосудов сердца в первом периоде зрелого возраста / Н. П. Батухтина, Л. Ю. Вахтина, В. П. Ефремова [и др.] // Вест. новых мед. технологий. – 2011. - №2. – С. 41-43. 15. Никель, В. В. Паравазальная соединительная ткань внутриорганных сосудов малого круга кровообращения в первом периоде зрелого возраста / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова // Сиб. мед. журн. (Иркутск). – 2011. №4. – С. 54-56. 16. Касимцев, А. А. Структурная организация межсосудистой соединительной ткани легких в пожилом и старческом возрастах / А. А. Касимцев, В. В. Никель, В. П. Ефремова // Академический журн. Западной Сибири. – 2011. - №2. – С. 23-24. 17. Никель, В. В. Межсосудистая соединительная ткань легких в первом периоде зрелого возраста / В. В. Никель // Перспективные инновации в науке, образовании, производстве и транспорте: сб. науч. тр. по материалам международной науч.-практ. конф. – Одесса, 2011. – С. 71-74. 18. Никель, В. В. Структура паравазальной соединительной ткани внутриорганных кровеносных сосудов сердца в пожилом возрасте / В. В. Никель // В мире науч. открытий. – 2011. - №7.2 (19). – С. 975-981. 19. Никель, В. В. Паравазальная соединительная ткань кровеносных сосудов желудка в первом периоде зрелого возраста / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова // Фундаментальные исследования. – 2011. - №10. – С. 333-335. 20. Никель, В. В. Особенности строения паравазальной ткани почек в первом периоде зрелого возраста / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова // Морфология. – 2011. - №5. – С. 103-104. 21. Касимцев, А. А. Паравазальная соединительная ткань почек в старческом возрасте / А. А. Касимцев, В. В. Никель, В. П. Ефремова // Морфология. – 2011. - №5. – С. 91-92. 22. Никель, В. В. Возрастная структурная организация паравазальной соединительной ткани почек человека / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова, Н. П. Батухтина // Сиб. мед. обозрение. – 2012. - №2. – С. 33-36. 23. Никель, В. В. Паравазальная соединительная ткань внутристеночных кровеносных сосудов подвздошной кишки у мужчин старческого возраста / В. В. Никель // Фундаментальные исследования. – 2012. - №4(2). – С. 344-346. 24. Никель, В. В. Паравазальная соединительная ткань внутриорганных кровеносных сосудов сердца мужчин в возрасте 75-89 лет / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова, Н. Н. Медведева // Сиб. мед. журн. (Томск). – 2012. №1. – С. 124-126. 25. Никель, В. В. Структурная организация паравазальной соединительной ткани внутристеночных кровеносных сосудов подвздошной кишки в пожилом возрасте / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова // Вест. новых мед. технологий. – 2012. - №2. – С. 185-187. 38 26. Никель, В. В. Паравазальная соединительная ткань внутристеночных артериальных сосудов сердца в постнатальном онтогенезе / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова // Актуальные вопросы биомедицинской антропологии и морфологии: сб. науч. тр. – Красноярск, 2012. – С. 264-267. 27. Никель, В. В. Паравазальная соединительная ткань внутриорганных вен сердца на этапах постнатальнго онтогенеза / В. В. Никель // Морфология. – 2012. - №3. – С.113. 28. Никель, В. В. Межсосудистая соединительная ткань легких в возрастном аспекте / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова, Л. Ю. Вахтина // Морфология. – 2012. - №3. – С.113-114. 29. Никель, В. В. Паравазальная соединительная ткань внутристеночных кровеносных сосудов сердца в возрастном аспекте / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова // Успехи геронтологии. – 2012. - №2. – С. 612-616. 30. Никель, В. В. Межсосудистая соединительная ткань почек в старческом возрасте / В. В. Никель // Наука и образование XXI века : мат-лы Междунар. науч.-практ. конф. – Уфа, 2013. – С. 204-206. 31. Никель, В. В. Паравазальная соединительная ткань кровеносных сосудов кишки в первом периоде зрелого возраста / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова, Н. П. Батухтина // Астраханский медицинский журнал. – 2013. №1. – С. 167-170. 32. Никель, В. В. Структурная организация межсосудистой соединительной ткани почек в пожилом возрасте / В. В. Никель // Академический журнал Западной Сибири. – 2013.- №3. – С. 105-106. 33. Никель, В. В. Возрастная изменчивость межсосудистой соединительной ткани легких на этапах постнатального онтогенеза / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова // Казанский мед. журн. – 2014. - №2. – С. 240-244. 34. Никель, В. В. Динамика возрастной изменчивости вено-артериального индекса легких / В. В. Никель // Морфология. – 2014. - №3. – С. 141. 35. Никель, В. В. Особенности строения межсосудистой соединительной ткани сердца в пожилом возрасте / / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова // Морфология. – 2014. - №3. – С. 141. 36. Никель, В. В. Межсосудистая соединительная ткань желудка мужчин на этапах постнатального онтогенеза [Электронный ресурс] / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова // Современные проблемы науки и образования (Электронный журнал). – 2014. - № 4. – Режим доступа : http://www.scienceeducation.ru/118-13894. 37. Никель, В. В. Закономерности соединительно-тканного комплекса кровеносных сосудов подвздошной кишки мужчин старческого возраста [Электронный ресурс] / В. В. Никель, П. А. Самотесов, А. А. Касимцев [и др.] // Медицина и образование в Сибири (Электронный журнал). – 2014. - № 6. – Режим доступа : http://www.ngmu.ru/cozo/mos/article/text_full.php?id=1577. 38. Никель, В. В. Особенности компонентного состава межсосудистой соединительной ткани желудка в первом периоде зрелого возраста / В. В. Никель // Наука и образование: инновации, интеграция и развитие : мат-лы Междунар. науч.-практ. конф. – Уфа, 2014. – С. 76-78. 39 39. Никель, В. В. Показатели индекса Керногана артерий сердца мужчин на этапах постнатального онтогенеза / В. В. Никель // Академический журнал Западной Сибири. – 2014. - №3. – С. 88. 40. Никель, В. В. Структурная организация межсосудистой соединительной ткани подвздошной кишки в пожилом возрасте [Электронный ресурс] / В. В. Никель // Современные проблемы науки и образования (Электронный журнал). – 2014. - № 6. – Режим доступа : http://www.science-education.ru/120-15686. 41. Касимцев, А. А. Структурная организация соединительнотканного комплекса кровеносных сосудов подвздошной кишки в первом периоде зрелого возраста / А. А. Касимцев, П. А. Самотесов, В. В. Никель, В. П. Ефремова // Журн. анатомии и гистопатологии. – 2014. - №3. – С. 48-50. 42. Никель, В. В. Компонентный состав периферической зоны паравазальной соединительной ткани стенки желудка мужчин в возрасте 61-74 лет / В. В. Никель, В. П. Ефремова, П. А. Самотесов // Актуальные проблемы современной науки : сб. статей Междунар. науч.-практ. конф. – Уфа, 2015. – С.152-154. 43. А. с. 2014621724 Рос. Федерация. Компонентный состав межсосудистой соединительной ткани полых и паренхиматозных органов мужчин / В. В. Никель, А. А. Касимцев, Л. В. Синдеева, В. П. Ефремова (Рос. Федерация). № 2014621724 ; заявл. 21.10.2014 № 2014621405; опубл. 20.01.2015. 44. А. с. 2015620129 Рос. Федерация. Структурная организация паравазальной соединительной ткани полых и паренхиматозных органов мужчин / А. А. Касимцев, В. В. Никель, В. П. Ефремова, Л. В. Синдеева (Рос. Федерация). № 2015620129 ; заявл. 21.10.2014 № 2014621404; опубл. 20.02.2015. 45. А. с. 2015620132 Рос. Федерация. Морфофункциональные показатели кровеносных сосудов внутренних органов / В. В. Никель, А. А. Касимцев, В. П. Ефремова, Л. В. Синдеева (Рос. Федерация). № 2015620132 ; заявл. 21.10.2014 № 2014621403; опубл. 20.02.2015. 46. Никель, В. В. Морфофункциональное состояние артериальных сосудов полых и паренхиматозных органов / В. В. Никель, П. А. Самотесов, В.П. Ефремова [и др.] // Медицина и образование в Сибири (Электронный журнал). – 2015. № 3. – Режим доступа : http://ngmu.ru/cozo/mos/article/text_full.php?id=1742 40 Список сокращений, использованных в диссертации ВАИ – вено-артериальный индекс ГАГ – гликозаминогликаны ГП – гликопротеины ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота ИА – индекс апоптоза ИГХ – иммуногистохимия ИК – индекс Керногана ИП – индекс пролиферации СЭМ – сканирующая электронная микроскопия
