6. Meyer, F. Rhinologische Aspelcte in der Diagnostik der rezidivierenden Epistaxis /...

6.
Meyer, F. Rhinologische Aspelcte in der Diagnostik der rezidivierenden Epistaxis / F. Meyer // Zschr.
Arztl. Fortbild. Qualitatssicherung. 1998. - Bd.92, №6. - S. 407-413.
ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ВКСА-КАНАЛОВ ОПОСРЕДУЕТСЯ АКТИВАЦИЕЙ
ИНДУЦИБЕЛЬНОЙ NO-СИНТАЗЫ
Лазуко С.С., Медведев М.Н.
УО «Витебский государственный медицинский университет»
Актуальность. В мембранах гладкомышечных клетках сосудов, лимфоцитов, эритроцитов, нейронах
ЦНС обнаружены кальцием активируемые калиевые каналы большой проводимости (ВКСа). Открытие ВКСаканалов связано с увеличением внутриклеточной концентрации ионов кальция, что сопровождается выходом
ионов калия из клетки и развитием гиперполяризации мембраны. Это приводит к закрытию потенциалзависимых
кальциевых каналов и расслаблению гладкомышечных клеток.
Существует две гипотезы, объясняющие эффект монооксида азота на ВКСа-каналы. Одна из них связана с
активацией оксидом азота растворимой гуанилатциклазы с последующим увеличением производства цГМФ и
активацией цГМФ-зависимой протеинкиназы. Последняя в свою очередь увеличивает активность ВКСа-каналов.
Другая гипотеза утверждает, что монооксид азота активирует ВКСа-каналы независимо от цГМФ-зависимой
протеинкиназы, т.е. предполагается прямое воздействие NO на ВКСа-каналы [2]. Однако, влияние монооксида
азота, продуцируемого iNOS, на ВКСа-каналы остается не изученным. Особый интерес представляют изучение
веществ, которые будут способствовать дозированному образованию iNOS, когда она будет продуцировать
увеличенное, но не избыточное количество NO.
Цель. В настоящем исследовании мы предположили, что производное бензимидазола 2этилтиобензимидазола гидробромид способен дозированно индуцировать iNOS, а также и то, что NO,
продуцируемый iNOS способствует активации ВКСа-каналов гладкомышечных клеток коронарных сосудов.
Материал и методы. Тонус коронарных сосудов и сократительную функцию миокарда изучали на
препаратах изолированного по Лангендорфу сердцах крыс-самок, в полость левого желудочка которых вводили
латексный баллончик. Животные были подразделены на группы: 1-ая - контрольная (n=12); 2-ая - группа
животных, которым внутрибрюшинно вводили 2-этилтиобензимидазола гидробромида (n=10). Сердца
перфузировали в условиях постоянного потока, на уровне объемной скорости коронарного потока (ОСКП) 10
мл/мин. Сердце сокращалось в постоянном ритме с частотой 240 в одну минуту. Для изучения роли монооксида
азота в регуляции тонуса коронарных сосудов в перфузионный раствор добавляли высокоселективный блокатор
iNOS S-метилизотиомочевину (S-MT, 10-6 М, Sigma, USA). Для изучения роли ВКСа-каналов в регуляции тонуса
коронарных сосудов и сократительной функции миокарда в перфузионный раствор добавляли блокатор ВКСаканалов тетраэтиламмония в концентрации 1 Ммоль/л. Вклад ВКСа-каналов в регуляцию тонуса сосудов сердца
определяли по величине вазоконстрикторного эффекта тетраэтиламмония (ТЭА), выраженного в % от исходного
перфузионного давления.
Для гистологического исследования использовали следующие методы окраски: гематоксилином и
эозином, иммуногистохимическая с использованием поликлональных антител Anti-iNOS antibody (1:75) и AntieNOS antibody (1:150) (Abcam, UK). В качестве визуализирующей системы использовали Bond Polymer Refine
Detection (Leica, UK), включающую комплекс вторичных антител и диаминобензин (ДАБ) в качестве хромогена и
гематоксилин для докрашивания препаратов.
Активность фермента iNOS и eNOS в сыворотке
крови определяли методом твердофазного
иммуноферментного анализа, используя тест-системы и реагенты для iNOS и eNOS. Определение экспрессии
генов Nos2 (iNOS), Nos3 (eNOS), а также референсных генов Tbp1, Rplp1 и Hprt1 проводили методом ПЦР в
реальном времени (ПЦР-РВ). Статистическая обработка полученных результатов проводилась с применением
пакета программ Microsoft Excel 2000 и STATISTICA 6.0 и методы дескриптивной статистики.
Результаты и обсуждение. Интракоронарное введение блокатора ВКСа-каналов тетраэтиламмония в
контрольной группе животных закономерно сопровождалось повышением коронарного перфузионного давления
на 92% (р<0,05, по сравнению с интактными животными), развиваемое внутрижелудочковое давление не
изменялось.Совместная блокада iNOS и ВКСа-каналов в контрольной группе животных сопровождалась
коронароконстрикторным эффектом тетраэтиламмония выраженным в той же степени, что без добавления
блокатора S-MT. Данный факт указывает на то, что в контроле индукция индуцибельной NO-синтазы выражена
слабо.
Внутрибрюшинное введение 2-этилтиобензимидазола гидробромида (в течение 3 дней, (в/б 2-ЭБГ)), не
приводило к изменению тонуса коронарных сосудов и сократительной функции миокарда. Введение в
коронарное русло изолированного сердца группы «контроль+ в/б 2-ЭБГ» блокатора ВКСа-каналов ТЭА
сопровождалось повышением коронарного перфузионного давления на 125%, развиваемое внутрижелудочковое
давление при этом не изменялось. Совместная блокада iNOS и ВКСа-каналов в контрольной группе животных
135
сопровождалась коронароконстрикторным эффектом тетраэтиламмония выраженным в той же степени, что без
добавления блокатора S-MT.
При расчете изменения экспрессии генов методом ПЦР в реальном времени у крыс в опытных группах
значения нормированных уровней экспрессии соотносили со значениями контрольной группы [1]. В гомогенате
миокарда крыс группы «контроль+ в/б 2-ЭБГ» уровень транскриптов, кодирующих iNOS, был выше в 9,1 раз, а
еNOS в 2,9 раза. В группе животных «контроль+ в/б 2-ЭБГ» реакция eNOS в кардиомиоцитах была выражена от
слабой до умеренной. При этом окрашивание наблюдалось в цитоплазме кардиомиоцитов и в эндотелии сосудов.
iNOS экспрессировала +/++ в кардиомиоцитах, в миоцитах и эндотелии сосудов «+». В сыворотке крови
контрольных животных активность фермента eNOS и iNOS не обнаруживалась. В группе животных «контроль+
в/б 2-ЭБГ» концентрация eNOS составила в среднем 57,7 пг/мл, концентрация iNOS составила в среднем – 21,0
нг/мл. Таким образом, предварительное внутрибрюшинное введение 2-ЭБГ сопровождается увеличением уровня
транскриптов, кодирующих как iNOS так и eNOS. Увеличение трансриптов, кодирующих iNOS происходило на
фоне увеличения активности фермента и локализации продуктов умеренной экспрессии iNOS в миокарде и
эндотелии сосудов.
Выводы:
1. 2-этилтиобензимидазола гидробромид способствует дозированной индукции iNOS.
2. Внутрибрюшинное введение 2-этилтиобензимидазола гидробромида увеличивает функциональную
активность ВКСа-каналов гладкомышечных клеток коронарных сосудов.
3. Функциональная активность ВКСа-каналов модулируется NO, продуцируемый iNOS.
Литература
1.
Оценка потенциальных референсных генов для нормализации данных ПЦР-РВ в экспериментах с
клетками линии HeLa [Н.А.Крайнова и др.]. Биотехнология. – 2013. – Т. 1. – С. 42–50.
2.
Nitric oxide directly activates calcium-dependent potassium channels in vascular / V.M. Bolotina [et al.]
// Nature. – 1994. – Vol. 368. – Р. 850–853.
РИСК ВНЕЗАПНОЙ СЕРДЕЧНОЙ СМЕРТИ У ПАЦИЕНТОВ ИБС ПОСЛЕ ЧРЕСКОЖНЫХ
КОРОНАРНЫХ ВМЕШАТЕЛЬСТВ
Лоллини В.А., Лоллини С.В.,Смирнова О.И.
УО «Витебский государственный медицинский университет»
Актуальность. Реваскуляризация венечных сосудов, в настоящее время является «золотым» стандартом
восстановления нарушенного коронарного кровотока и предупреждения острого инфаркта миокарда. Однако,
несмотря на успехи ангиохирургических вмешательств и внедрения новых, совершенных технологии, больные,
страдающие ишемической болезнью сердца (ИБС), имеют высокий риск внезапной сердечной смерти (ВСС) в
ранний послеоперационный период. Наиболее частой причиной ВСС у данной группы пациентов является
развитие реперфузионных аритмий. Согласно современным представлениям, этиология и патогенез фатальных
аритмий предполагают взаимодействие множества факторов: наличие анатомического субстрата в виде
ишемизированного миокарда, электрической нестабильности сердечной мышцы, суточных механизмов,
генетических дефектов и нейрогуморальных триггерных факторов [1]. В роли таких пусковых агентов выступают
неэстерифицированные жирные кислоты – энергетический субстрат миокарда. Повышение концентрации этих
кислот, наблюдающееся при ИБС, способствует активации перекисного окисления липидов и оказывает влияние
на структуру биомембран форменных элементов. В свою очередь, ухудшение реологических свойств крови
сопровождается снижением порога возникновения аритмий [2]. Кроме того, у больных с ИБС повышается синтез
эндотелина-1 (ЭТ-1) вследствие эндотелиальной дисфункции. ЭТ-1 –самый мощный из известных сегодня
вазоконстрикторов, благодаря этим свойствам он так же отнесен к группе триггерных факторов в отношении
развития аритмий [3]. Повышенный синтез, а также сниженный клиренс приводит к накоплению
вышеперечисленных аритмогенных субстанций в ишемизированном участке миокарда. В результате проведения
чрезкожных коронарных вмешательств и соответственно восстановления перфузии сердечной мышцы,
происходит их «вымывание» и поступление в системный кровоток. Воздействуя в купе с нарушениями
электролитного и вегетативного баланса, у больных с ИБС, уязвимый миокард приобретает аритмогенную
предрасположенность. Наибольший интерес для практической медицины представляет поиск факторов,
способных выявить возможный миокардиальный субстрат злокачественных аритмий и достоверно предсказать
возможность ВСС.
Цель. Оценка валидности турбулентности сердечного ритма (ТСР) и вариабельности сердечного ритма
(ВСР) в стратификации риска внезапной смерти у пациентов после проведения коронарного стентирования.
Материал и методы. Обследовано 23 пациента кардиологического отделения ВОКБ с ИБС ФК 3-4.
Кроме общеклинических методов, ультразвукового исследования сердца и коноранографии, всем пациентам
проводили суточное мониторирование ЭКГ и артериального давления (АД) аппаратом «Кардиан-СДМ» с
136