отзыв - Научно-исследовательский институт общей патологии

отзыв
официального оппонента на диссертацию Комиссаровой Светланы Владимировнына тему:
«Регенерация нейронов коры головного мозга при экспериментальном геморрагическом ин­
сульте: влияние тромбоцитов и моделированных эффектов микрогравитации»
по специальности 14.03.03 - патологическая физиология
на соискание ученой степени кандидата биологических наук.
Актуальность избранной темы. Диссертационная работа С.В. Комиссаровой по­
священа сложной и малоизученной проблеме патофизиологии - репаративной регенерации
нейронов ЦНС. В патогенезе нейротравмы, цереброваскулярных и других неврологиче­
ских заболеваний, лежащих в основе двигательных, когнитивных и психических рас­
стройств, ключевым звеном является гибель нервных клеток. Известно, что утраченные
функции в значительной степени компенсируются способностью выживших нейронов
брать на себя функции погибших клеток, которые при этом увеличиваются в размерах и
образуют новые нервные связи. Это явление называют нейропластичностью. Структурное
же восстановление нервной ткани в последнее время, после выявления в головном мозге
герминативных нейрогенных зон, пытались связать с нейрогенезом. Однако факт новооб­
разования нейронов в коре головного мозга, как и в большинстве других его областей, до
настоящего времени не доказан.
В последнее десятилетие объектом многочисленных отечественных и зарубежных
исследований стала способность нейронов взрослого организма, подобно ранним стадиям
нейрогенеза, образовывать синцитиальные межнейрональные связи со слиянием тел
нейронов и формированием двуядерных клеток. Показано, что этот процесс, редкий в нор­
ме, при патологии активизируется. Сотрудниками НИИ Общей патологии и патофизиоло­
гии РАМН впервые в коре головного мозга крыс обнаружен факт слияния нейронов с олигодендроцитами с формированием гетерокарионов, встречающийся чаще после моделиро­
вания инсульта. Авторы постулировали, что феномен слияния региональных клеток мозга
является одним из механизмов регенерации ЦНС.
Диссертационная работа С.В. Комиссаровой, посвящённая изучению морфологиче­
ских и функциональных проявлений репаративной регенерации нейронов при эксперимен­
тальном кровоизлиянии в мозг, является логическим продолжением и развитием этих ис­
следований и, безусловно, является актуальной.
Степень обоснованности научных положений и выводов, сформулированных в
диссертации. Положения, выносимые на защиту, и выводы, сформулированные соискате­
лем, базируются на экспериментальных данных, полученных автором в разных опытах, и
1
представляются обоснованными, о чем свидетельствует согласованность собственных
данных с известными достижениями экспериментальных работ других отечественных и
*
зарубежных авторов, а также обсуждение возможных механизмов выявленных в работе
закономерностей.
Достоверность и новизна исследования, полученных результатов и выводов
сформулированных в диссертации. Автором получены оригинальные результаты, досто­
верность которых подтверждена корректным использованием известных научных методов
исследования и адекватной статистической обработкой полученных данных. Сформулиро­
ванные соискателем выводы вытекают из фактических данных и отвечают поставленной
цели и задачам исследования.
Значимость для науки и практики полученных автором результатов. Результа­
ты работы С.В. Комиссаровой имеют как научное, так и практическое значение. Получен­
ные данные о слиянии нейронов с олигодендроцитами с образованием двуядерных гетерокарионов, имеющих двойной набор генов и, следовательно, большие функциональные
возможности, расширяют представление о механизмах регенерации, дополняя их новым,
принципиально отличным от таковых, известных ранее. Они дают новый материал для
дальнейших сравнительных фундаментальных и доклинических прикладных исследова­
ний.
Конкретные рекомендации по использованию результатов и выводов диссер­
тации. Выявленный феномен образования двуядерных клеток в коре мозга и их связь с ре­
генерацией нейронов могут быть применены для поиска патогенных факторов и доклини­
ческого испытания различных способов применения медикаментозных средств с ноотропным действием с количественным определением их влияния на процесс регенерации по
содержанию двуядерных клеток в структурах головного мозга.
Оценка содержания и завершенности диссертации.
Объём и структура представленной работы отвечают требованиям, предъявляемым
к диссертациям соответствующего уровня. Диссертация изложена на 139 страницах маши­
нописного текста и построена по традиционному плану: введение, обзор литературы, ма­
териалы и методы, результаты, обсуждение, выводы и список литературы. Диссертация
проиллюстрирована 40 рисунками и 4 таблицами.
Актуальность работы диссертантка объективно обосновала во введении, где также
сформулирована цель и задачи исследования, научная новизна, теоретическая и практиче­
ская значимость полученных результатов.
2
В разделе «Обзор литературы» автором проведён исторический экскурс в развитие
представлений о регенерации и нейрогенезе у взрослых млекопитающих с анализом со­
временных методических возможностей исследования последнего; дано современное
представление о механизмах и роли локального воспаления и ангиогенеза, а также влияние
микрогравитации на развитие инсульта и последствия нейротравмы.
Обзор литературы
радует включением классических работ по регенерации, цитированием результатов, полу­
ченных (в том числе с участием автора) в лаборатории, где выполнялась работа, а также
точной, без излишеств подборкой работ зарубежных авторов за последние 15 лет по теме
исследования. Обзор литературы содержит резюме и служит достаточным обоснованием
для формулировки цели и конкретных задач исследования.
В разделе «Материалы и методы» наряду с описанием всех использованных извест­
ных методов подробно описана придуманная автором модель экспериментального крово­
излияния (геморрагического инсульта) в моторную кору левого полушария головного моз­
га крыс, позволяющая оценивать особенности двигательной функции правой передней ко­
нечности в зависимости от изменения состава форменных элементов во вводимой крови.
Из текста диссертации видно, что работа выполнена с привлечением внушительного ряда
разнообразных современных методов, адекватных поставленным цели и задачам. В их
числе патофизиологические (моделирование кровоизлияния в мозг, ортостатической про­
бы у крыс; тестирование двигательной активности животных) и морфологические методы
(световая, люминесцентная и электронная микроскопия с количественным методом оценки
изображения), а также методы авторадиографии (выявление нейронов по включению ЗНуридина в синтезируемую РНК) и иммуногистохимии (использование антител к нейронспецифическому белку NeuN и белку микротрубочек МАР2). Следует подчеркнуть, что
для решения поставленных задач традиционные методики успешно сочетаются с совре­
менными методическими подходами.
В трёх основных параграфах раздела «Результаты» последовательно изложены дан­
ные, полученные непосредственно самим автором.
В первом параграфе представлены данные о летальности животных после повре­
ждения моторной коры мозга и введения в очаг повреждения коллагеновой губки, пропи­
танной бесклеточной или богатой тромбоцитами плазмой, а также различиях двигательной
функции контралатеральной конечности и количестве двуядерных клеток в III - V слоях
коры перифокальной области через 7 дней. Показано увеличение по сравнению с нормой
числа двуядерных клеток в перифокальной области, а также протекторный эффект присут­
ствия в губке тромбоцитов и профилактический эффект предварительной 2-дневной орто-
3
статической пробы, что проявлялось в виде меньшего двигательного дефицита и большей
плотности двуядерных нервных клеток.
Во втором параграфе охарактеризованы морфологические особенности очага и
окружающей ткани мозга в каждой группе и выявлена взаимосвязь увеличения количества
двуядерных клеток с хорошим восстановлением функции и выраженным процессом ангио­
генеза. Это позволило автору сделать вывод о регенераторной роли слияния клеток в пато­
генезе экспериментального повреждения ткани мозга.
В третьем параграфе приведены результаты иммуногистохимического и авторадио­
графического исследования выявленных на полутонких срезах двуядерных клеток на
предмет наличия у них нейрон-специфических маркёров. На основании выявленных раз­
личий в структуре хроматина в ядрах олигодендроцитов, слившихся с нейронами, автором
сделан вывод о репрограммировании ядер олигодендроцитов и обретении ими свойств
нейронального ядра. Важно отметить, что раздел «Результаты» хорошо проиллюстрирован
цветными фотографиями и таблицами.
Раздел «Обсуждение» суммирует все наиболее важные полученные автором данные
и проводит сравнительный анализ с полученными ранее, на другой модели данными. Об­
суждение в целом проведено корректно. Здесь же автор кратко подводит итог.
Выводы логически вытекают из фактических данных.
Список литературы включает 200 первоисточников, из которых 17 - отечественные,
а 183 - зарубежные.
Содержание автореферата правильно отражает основные положения диссертации,
хотя выявляются некоторые несоответствия. Диссертация в целом представляет собой за­
конченный труд, в котором содержится решение задачи, имеющее самостоятельное значе­
ние для данного направления фундаментальной науки.
Достоинства и недостатки в содержании и оформлении диссертации. Диссерта­
ционная работа С.В. Комиссаровой представляется интересной, законченной работой, от­
крывающей новые перспективы в исследовании регенерации ЦНС и поиске средств, се­
лективно влияющих на частоту клеточных слияний. Среди достоинств работы хочется вы­
делить следующие: во-первых, автором впервые продемонстрирована связь между стати­
стически значимым увеличением по сравнению с нормой количества двуядерных клеток в
коре головного мозга крыс и наилучшим восстановлением неврологической функции по­
сле экспериментального повреждения моторной коры мозга, что доказывает регенератор­
ную роль слияния нейронов с олигодендроцитами. Во-вторых, выявлен четко выраженный
протекторный эффект присутствия в очаге повреждения тромбоцитов, которые способ4
ствуют формированию густой сети сосудов по периферии очага повреждения, что откры­
вает перспективу поиска новых терапевтических возможностей с использованием тромбоцитарного потенциала.
Несмотря на общее положительное впечатление о работе, к ней имеются отдель­
ные замечания, а также вопросы, по которым хотелось бы получить разъяснение.
Вопросы и замечания.
1. Диссертация написана излишне литературным языком. При общей её выверенное™, в
тексте встречаются орфографические и стилистические ошибки.
2. Не всегда при прочтении фактического материала понятны границы между наблюдае­
мыми фактами и мнением автора по этому поводу.
3. Неясно, почему автор назвала предложенную модель повреждения коры головного
мозга моделью геморрагического инсульта, и чем принципиально она отличается от из­
вестной, используемой в различных модификациях модели нейротравмы, предложенной
Feenry DM et al. (1981).
4. Из текста неясно, для чего в предложенной модели брали плазму другого вида живот­
ного - кролика?
5. В работе отсутствует группа сравнения - ложнооперированных животных с поврежде­
нием ткани мозга без введения бесклеточной/богатой тромбоцитами плазмы крови.
6. В работе недостаточно четко оговорено, на какой площади срезов мозга считали коли­
чество двуядерных нейронов (стр. 60). Была ли эта площадь стандартной для срезов раз­
ных участков мозга?
7. Из текста диссертации неясно, по каким критериям идентифицировали вновь образо­
ванные сосуды.
8. Во втором положении, выносимом на защиту, говорится: «Увеличение содержания
тромбоцитов в очаге локального воспаления коры мозга уменьшает объем разрушенных
тканей, увеличивает скорость ангиогенеза, ускоряет восстановление нарушенной двига­
тельной функции и частоту слияний нервных клеток». Из текста диссертации неясно, на
основании чего было сделано заключение о динамике указанных показателей, поскольку в
работе не приведены данные об измерении объёма повреждённых тканей, а остальные
данные представлены однократно и только на 7-й день после операции.
9. Возможность неоднозначно трактовать присутствие в двуядерной клетке двух ядер,
экспрессирующих нейрон-специфические белки, позволяет сомневаться в правильности
однозначной трактовки автором того, что одно из ядер является перепрограммированным
5
ядром олигодендроцита, а не ядром нейрона, который образовал с другим нейроном межнейрональную синцитиальную связь.
10. В автореферате не приведены выводы, отражающие выполнение 1-ой и 2-ой постав­
ленных задач, а также присутствуют фотографии, отсутствующие в диссертации.
Заключение.
Таким образом, диссертация С.В. Комиссаровой является научно­
квалификационной работой, в которой содержится решение задачи - изучения морфологи­
ческих и функциональных проявлений репаративной регенерации нейронов при экспери­
ментальном кровоизлиянии в мозг, имеющей значение для развития соответствующей от­
расли знаний, что соответствует требованиям п. 9 «Положения о порядке присуждения
ученых степеней», утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации
от 24.09.2013 г. № 842, предъявляемым к диссертациям на соискание ученой степени кан­
дидата наук, а ее автор заслуживает присуждения искомой ученой степени.
Официальный оппонент:
доктор биологических наук,
ведущий научный сотрудник лаборатории
экспериментальной нейроцитологии
отдела исследований мозга Федерального
государственного бюджетного научного учреждения
«Научный центр неврологии» (ФГБНУ НЦН)
И.Л. Конорова
Москва105064, пер. Обуха, д. 5,
телефон: 8(495)917-01-21
e-mail: [email protected]
I
Подпись официального оппонента заверяю:
И.О. Ученого секретаря ФГБЩ$
кандидат медицинских наук
Е.В. Лысогорская
02.04.2015
6