Alcohol Reagent Set Каталожный № HTI-A7504

Alcohol
Reagent Set
Каталожный № HTI-A7504-150
Каталожные номера:
Подготовка реагентов
HTI-A7504-150
Растворить
реагент
дистиллированной/
деионизированной водой в объеме, указанном на
этикетке. Хорошо перемешать.
Назначение
Набор
предназначен
для
количественного
определения этилового спирта в сыворотке или
цельной крови. Только для in vitro диагностики.
Введение
Определение концентрации этилового спирта
используют для дифференциальной диагностики
пациентов с угнетением центральной нервной
системы и пациентов с алкогольной интоксикацией.
Тест также используется для судебно-медицинской
экспертизы.
История метода
Ферментный метод определения концентрации
этилового спирта с использованием алкоголь
дегидрогеназы и NAD впервые был описан Bonnishen
и соавт. Впоследствии были представлены
различные модификации этого метода. В настоящем
тесте используют модификацию этого оригинального
метода. Так как тест быстро и легко проводится, он
получил широкое распространение в клинической
лабораторной практике. Так как тест может
для
судебно-медицинской
использоваться
экспертизы, требуется очень аккуратное проведение
теста.
Поэтому
рекомендуется
сравнивать
полученные результаты с данными других тестов,
например – газовой хроматографии.
Принцип метода
Алкоголь
дегидрогеназа
Этанол + NAD+
ацетальдегид + NADH + H+
Алкоголь дегидрогеназа катализирует окисление
этанола до ацетальдегида, NAD превращается в
NADH. Абсорбции, измеренная при 340 нм
пропорциональна
концентрации
этанола
в
исследуемом образце.
Реагенты
Концентрации растворенных реагентов: алкоголь
дегидрогеназа (дрожжи) 200000 МЕ/л, NAD 2,8 ммоль,
буфер, рН 9,2 + 0,1, сурфактант, консерванты.
Хранение реагентов
1. Реагент хранить в холодильнике при 2-80С.
2. Разведенный реагент стабилен 7 суток
холодильнике при 2-80С.
в
Предостережения
1. Только для in vitro диагностики
2. Реагент является раздражающим веществом.
Необходимо
соблюдать
общепринятые
меры
предосторожности. При контакте с кожей промыть
большим количеством воды. См. инструкции MSDS.
3. Не использовать реагент при попадании влаги во
флакон и спекании реагента, а также, если начальная
абсорбция реагента против воды при 340 нм больше
0,500.
4. Все образцы и контроли необходимо использовать при
соблюдении всех правил проведения лабораторных
исследований.
Сбор и хранение образцов
1. Место венепункции необходимо обрабатывать
водными дезинфицирующими растворами, такими как
зефиран и мертиолат. Не использовать этиловый
спирт и другие испаряющиеся дезинфицирующие
растворы.
2. При сборе образцов крови в качестве антикоагулянта
можно использовать цитрат, гепарин, оксалат. Хотя, в
качестве консерванта лучше всего использовать
флюорид – 5 мг/дл. Концентрация этилового спирта в
образцах стабильна в течение нескольких дней, при
условии хранения в холодильнике при 2-8 0С.
3. При использовании образцов сыворотки крови не
требуется депротеинизации.
4. Ни один из методов не может гарантировать
отсутствие инфекционных агентов в исследуемых
образцах сыворотки крови. Поэтому к ним следует
относиться как к потенциально биологически опасным.
Влияние других соединений
1. Наибольшее влияние на результаты анализа может
оказывать использование этилового спирта при
проведении венепункции.
Alcohol
Reagent Set
Каталожный № HTI-A7504-150
2. Влияние других соединений приведено ниже:
Реагенты, содержащие этиловый спирт (инкубация 5
минут, 300С).
Этанол
100%
n-Бутанол
38,5%
Изопропанол
6,6%
Метанол
0,0%
Этиленгликоль
1,4%
Ацетон
0,0%
Материалы, входящие в состав набора
1. Реагент алкоголя
2. Алкоголь стандарт
3. Дистиллированная/деионизированная вода
Материалы
необходимые,
поставляемые
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
но
не
Автоматические пипетки.
Пластиковые пробирки.
Таймер
Биохимический анализатор, для измерения
абсорбции при длине волны 340 нм.
Набор аммиак/алкоголь контроля
Водяная баня или термостатируемый блок (300С
или 370С)
Изотонический раствор NaCl. Для приготовления
раствора, растворить 0,9 г NaCl до 100 мл
дистиллированной/дионизированной воды.
Раствор трихлоруксусной кислоты (6,25% w\v) –
при использовании образцов цельной крови.
Центрифуга - при использовании образцов
цельной крови.
Автоматический метод определения
Wavelength
Temperature
Assay Type
Sample/Reagent Ratio
Reaction Direction
Incubation Time
Low Normal
High Normal
340nm
37°C or 30°C
Endpoint
1:201
Increasing
5 minutes
0 mg/dl
100 mg/dl
Существуют параметры измерения концентрации
этилового спирта на других анализаторах.
Необходимо связываться со службой технической
поддержки.
Ручной метод определения
1. Развести реагенты в соответствии с инструкцией.
2. Внести по 1,0 мл реагента в соответствующие
пробирки.
3. Нагреть пробирки до необходимой температуры
(300С). Внести в соответствующие пробирки по 5 мкл
стандартов, контролей и исследуемых образцов. В
пробирку с бланком внести 5 мкл изотонического
солевого раствора.
4. Хорошо перемешать. Инкубировать в течение 5 минут.
5. После инкубации, измерить абсорбцию при 340 нм
против бланка. Использовать полученные результаты
для определения концентрации алкоголя в
исследуемом образце.
Внимание: При использовании для анализа образцов
цельной крови необходимо проводить депротеинизацию.
1. Внести в пробирки по 1,8 мл трихлоруксусной кислоты.
2. Медленно внести по 200 мл образцов крови.
3. Закрыть пробирку и перемешать. Оставить пробирку в
течение 5 минут при комнатной температуре.
4. Центрифугировать в течение 5 минут (2000 об/мин).
Отобрать супернатант.
5. Супернатант можно использовать для проведения
анализа. Так как произошло разведение образца
крови, рекомендуется для построения калибровочной
кривой использовать разведенный (1:10) стандарт.
Ограничения
Если в исследуемом образце предполагаемая
концентрация этилового спирта выше, чем 400 мг/дл, то
необходимо провести разведение: 1 объем исследуемой
сыворотки на 1 объем изотонического солевого раствора.
Полученные результаты необходимо умножить на 2.
Калибровочная кривая
Для построения калибровочной кривой рекомендовано
использовать калибратор – Этанол стандарт NIST.
Построение
калибровочной
кривой
необходимо
проводить так часто, как это указано в инструкции к
прибору. Если концентрация этилового спирта выходит за
пределы указанных значений, необходимо провести
повторную калибровку.
Подсчет результатов
Конц. этанола = Abs. образца Х конц. стандарта
(мг/дл)
Abs. стандарта
Пример подсчета:
Alcohol
Reagent Set
Каталожный № HTI-A7504-150
Abs. в образце = 0,450, Abs. в стандарте = 0,500,
концентрация этилового спирта в стандарте = 100.
То есть: 0,450/0,500Х100 = 90 мг/дл
Контроль качества
Рекомендовано при каждом проведении серии
анализов включать коммерческие контрольные
сыворотки с известной концентрацией этилового
спирта. В каждой лаборатории рекомендовано
устанавливать свою частоту проведения контроля
качества.
Концентрация у практически здоровых лиц
У обследуемых, воздерживающихся от употребления
алкоголя, концентрация этилового спирта не
определяется
ни
ферментными,
ни
хроматографическими методами. Ниже представлена
связь уровней этилового спирта с процентом
обследуемых, признанных в состоянии алкогольной
интоксикации. При исследовании более чем 6000 лиц
оказалось, что среди лиц с уровнем этилового спирта
менее 0,05% обследуемых в состоянии алкогольной
интоксикации очень мало – около 4%.
Концентрация этилового спирта
0.1 – 0.15%
0.15 – 0.2%
0.2 – 0.25%
Доля лиц в состоянии алкогольной
интоксикации
63%
89%
95%
Характеристики теста
1. Линейность: 0-400 мг/дл
2. Сравнение: проведен корреляционный анализ
результатов (n=100), полученных на данных тестнаборах и другого коммерческого тест-набора.
Коэффициент корреляции составил 0,999, линейная
регрессия - у=1,01Х-1,01. Концентрация этилового
спирта в исследуемых образцах составила 2-412 (в
среднем 12,84).
3.
Точность:
протестированы
коммерческие
контрольные сыворотки.
Внутри серии
Среднее
S.D.
40.3
0.72
93.4
1.04
219.8
2.17
C.V.%
1.78%
1.11%
0.99%
От серии к серии
Среднее S.D.
40.6
1.36
89.0
3.27
224.7
3.71
C.V.%
3.34%
3.67%
1.65%
4. Чувствительность: определялась по изменению
абсорбции изотонического солевого раствора при 340
нм и в образце сыворотки крови с известной
концентрацией этилового спирта. Были проведены
серии из 10 исследований. Результаты показали, что в
изотоническом солевом растворе абсорбция практически
не отличается от таковой в реагенте этилового спирта.
Изменение абсорбции на 0,006 примерно эквивалентно
концентрации этанола 1 мг/дл.
Произведено High Technology Inc.
109 Production Rd
Walpole, MA 02081 USA
Fax: 1 508 660-22-24
e-mail: [email protected]
Alcohol Standard
Каталожный № HTI-A7504-150
Каталожные номера:
Калибровка
HTI-A7504-150
См. инструкции к реагентам и руководства
пользователя. Диапазон калибровки устанавливается
по внутри лабораторным данным. Концентрация
этилового спирта в стандарте указана на этикетке.
Назначение
Алкоголь стандарт предназначен для построения
калибровочной
кривой
при
определении
концентрации этилового спирта в сыворотке или
цельной крови.
Рекомендовано при проведении анализа помимо
стандартов использовать контрольную сыворотку.
Контроль качества является составляющей частью
диагностической
процедуры.
Определение
концентрации этилового спирта в контрольной
сыворотке необходимо для оценки внутри
лабораторного качества исследований.
Ограничения
Для получения точных результатов концентрация
этилового спирта в калибраторе постоянно
контролируется. Поэтому, необходимо уточнять
концентрацию этилового спирта в калибраторе,
которая указана на этикетке.
См. разделы «ограничения» в инструкции к тестнабору и в руководстве пользователя.
Описание реагента
Стандарт алкоголя представляет собой раствор с
определенной концентрацией этилового спирта –
один уровень (1 Х 5мл). Не требуется разведения или
дополнительной подготовки. В состав реагента
входят бычий альбумин, насыщенный этанолом, и
химические
стабилизаторы.
Добавление
консервантов, таких как тимеросал, позволяет
предотвращать микробную контаминацию.
Только для in vitro диагностики.
Хранение реагента и стабильность
1. Хранить в холодильнике при 2-80С.
2. При условии хранения в холодильнике при 2-80С
реагент стабилен в течение всего срока годности,
указанного на этикетке.
3. Открытый реагент необходимо использовать в
течение 4 месяцев.
4. Не использовать стандарт при наличии мутности
или микробной контаминации.
Процедура
1.
2.
3.
4.
Дать реагенту прогреться до комнатной
температуры (20-250С) в течение 15-20 минут.
Аккуратно перемешать стандарт для достижения
гомогенности раствора. Избегать вспенивания.
Использовать
стандарт
для
построения
калибровочной кривой так часто, как это указано
в руководстве для пользователя.
После использования стандарт необходимо
сразу вернуть в холодильник (2-80С).
Произведено High Technology Inc.
109 Production Rd
Walpole, MA 02081 USA
Fax: 1 508 660-22-24
e-mail: [email protected]