ИССЛЕДОВАНИЕ ЭМБРИОТОКСИЧЕСКОГО И

ÁÞËËÅÒÅÍÜ ÂÑÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ, 2011, ¹ 1 (77), ×àñòü 2
УДК 615.32
Я.Г. Разуваева, К.С. Лоншакова, В.В. Аюшеева ИССЛЕДОВАНИЕ ЭМБРИОТОКСИЧЕСКОГО И ТЕРАТОГЕННОГО ДЕЙСТВИЯ
РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА ВЕНТРОФИТ
Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН (Улан-Удэ)
Бурятский государственный университет (Улан-Удэ)
Установлено, что введение белым крысам линии Wistar в период беременности растительного
средства Вентрофит в дозах 50 и 100 мг/кг не оказывает эмбриотоксического и тератогенного
действия. Введение животным Вентрофита в дозе 50 мг/кг с 6 по 19 день беременности не влияет на
постнатальное развитие потомства белых крыс.
Ключевые слова: растительное средство Вентрофит, эмбриотоксическое и тератогенное действие, постнатальное развитие
EMBRIOTOXIC AND TERATOGENIC EFFECT OF HERBAL REMEDY VENTROFIT
Yà.G. Razuvayevà, K.S. Lonshakova, V.V. Ajusheyeva
Institute of General and Experimental Biology SB RAS, Ulan-Ude
Buryat State University, Ulan-Ude
It is established, that introduction of herbal remedy Ventrofit in doses of 50 and 100 mg/kg in pregnancy period does not render embriotoxic and terotogenic effect to white rats of Wistar line. Introduction of Ventrofit
in a dose of 50 mg/kg from the 6th to the 19th day of pregnancy does not influence postnatal development of
posterity of white rats.
Key words: herbal remedy Ventrofit, embriotoxic and terotogenic effect, postnatal development
ВВЕДЕНИЕ
Вентрофит – условное название комплексного растительного средства, представляющего
собой сумму экстрактивных веществ из 9 видов
растительного сырья:: соцветия календулы лекарственной Calendula officinalis L. (25 ч.), листья подорожника большого Plantago major L. (10 ч.), трава
сушеницы топяной Gnaphalium uliginosum L. (5 ч.),
корни солодки уральской Glycyrrhiza uralensis Fish.
(10 ч.) и девясила высокого Inula helenium L. (5 ч.),
плоды боярышника кроваво-красного Crataegus
sanguinea Pall. (15 ч.), шиповника Rosa L. (20 ч.),
кориандра посевного Coriandrum sativum L. (5 ч.) и
облепихи крушиновидной Hippophae rhamnoides
L. (5 ч.) [3]. Ранее в экспериментах на животных
было установлено, что Вентрофит оказывает выраженное гастропротективное действие при острых
повреждениях желудка индометацином и ацетилсалициловой кислотой, при нейрогенной язве, а
также рефлюкс-гастрите, и относится к группе
малотоксичных веществ [1, 6, 7].
Цель настоящей работы явилось исследование
эмбриотоксического и тератогенного действия растительного средства Вентрофит.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Экспериментальная работа выполнена на белых крысах линии Wistar. Животные находились
в стандартных условиях содержания и кормления
в виварии (Приказ МЗ № 1179 от 10.10.83 г.). Эксперименты на животных осуществляли в соответствии с правилами Европейской конвенции по
защите позвоночных животных, используемых для
экспериментальных и иных научных целей.
Исследование эмбриотоксического и тератогенного действия Вентрофита проводили согласно
методическим указаниям по изучению репродуктивной токсичности фармакологических веществ
[5] на 20-дневных плодах, полученных от половозрелых самок белых крыс массой 180–200 г и
самцов массой 200–250 г. День обнаружения сперматозоидов во влагалищном мазке считали первым
днем беременности. Вентрофит исследовали в 2
дозах – 50 и 100 мг/кг, соответствующих 1/10 и 1/5
LD50. Вентрофит в дозе 50 мг/кг (терапевтическая
доза) вводили внутрижелудочно крысам одной
группы ежедневно с 1 по 19 сутки беременности,
Вентрофит в дозе 100 мг/кг – двум группам самок:
с 1-х по 6-е (доимплантационный период) и с 6-х по
19-е сутки (органогенез) беременности. Животные контрольной группы получали очищенную
воду с 1-х по 19-е сутки беременности. Для оценки
эмбриотоксической активности Вентрофита подсчитывали количество желтых тел в яичниках,
число мест имплантаций, количество живых и
мертвых плодов, а также резорбций. По данным
параметрам вычисляли предимплантационную,
постимплантационную и общую эмбриональную
смертность. 20-дневные плоды каждого помета
взвешивали, измеряли их кранио-каудальные размеры и обследовали под бинокулярным микроскопом для обнаружения внешних видимых аномалий
развития. После наружного осмотра плоды каждого
помета делили на две группы. �дну группу плодов
(около 1/3) фиксировали в жидкости �уэна и использовали для изучения внутренних органов. Исследование внутренних органов плодов проводили
по методике Вильсона [5]. Для изучения состояния
Ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ â áèîëîãèè è ìåäèöèíå
165
ÁÞËËÅÒÅÍÜ ÂÑÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ, 2011, ¹ 1 (77), ×àñòü 2
скелета остальные плоды фиксировали в 96° этаноле. Состояние костной системы исследовали по
методу Доусона [5].
Во второй серии экспериментов исследовали
влияние Вентрофита на постнатальное развитие
потомства белых крыс согласно методическим
указаниям [5]. Исследуемое средство в дозе 50 мг/
кг вводили самкам один раз в сутки с 6 дня беременности и до родов (период органо- и фетогенеза),
животным контрольной группы – очищенную
воду в эквивалентном объеме по аналогичной схеме. Наблюдение за потомством крыс вели по 28
день жизни крысят. При наблюдении учитывали
количество живых и погибших крысят в эти сроки,
прирост массы тела и кранио-каудальные размеры
крысят по методу А.П. Дыбана [2] и следили за ходом постнатального развития крысят.
Результаты исследований статистически обработаны общепринятыми методами для малой
выборки с определением средней величины (М) и
средней ошибки (m). Достоверность результатов
исследований оценивали с помощью непараметрического критерия Манна – Уитни [4].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Результаты исследований (табл. 1) свидетельствуют о том, что у самок белых крыс, получавших
экстракт противоязвенного средства в дозах 50 и
100 мг/кг все показатели эмбриолетальности (количество мест имплантаций, количество живых
плодов и число резорбций) не имеют достоверных
различий с показателями у самок контрольной
группы.
Показатели предимплантационной и постимплантационной смертности в опытных группах
также не отличаются от данных в контроле. Масса и
кранио-каудальные размеры плодов соответствуют
таковым в контроле.
При внешнем осмотре плодов каждого помета
видимые внешние аномалии развития обнаружены не были. При исследовании тератогенного
действия экстракта противоязвенного средства
на основании микроанатомического изучения
внутренних органов эмбрионов не было выявлено каких-либо существенных отклонений от
контрольных показателей. При исследовании под
бинокулярным микроскопом плодов контрольной и опытных групп, окрашенных ализарином,
аномалий в костной системе также определено
не было.
При исследовании влияния Вентрофита на
постнатальное развитие потомства, было установлено, что гибель крысят в опытной группе наблюдалась в первые сроки исследования и составляла
2,3 %, что в 2 раза ниже показателя у животных в
контрольной группе (4,6 %). В последующие сроки
наблюдения (14-е, 21-е и 28-е сутки) гибель крысят
в опытной и контрольной группах не отмечалась.
Введение Вентрофита беременным самкам не
оказывало влияния на прирост массы и краниокаудальные размеры их потомства (табл. 2), а также
на сроки отлипания ушных раковин, открытия глаз,
появления первичного волосяного покрова и прорезывания резцов.
�аким образом, курсовое введение белым крысам в период беременности растительного средства
Вентрофит в дозах 50 и 100 мг/кг не оказывает эмбриотоксического и тератогенного эффекта. Введение самкам белых крыс в период беременности
Вентрофита в дозе 50 мг/кг, не оказывает влияния
на постнатальное развитие потомства.
Полученные данные аргументируют возможность применения Вентрофита в клинической
практике для профилактики осложнений со стороны желудочно-кишечного тракта у беременных
женщин.
Таблица 1
Исследование эмбриотоксического действия Вентрофита на белых крысах
–
/
100
/
1–19
1–19
1–6
6–19
18
21
20
20
157/8,7
171/8,1
188/9,4
180/9,0
154/8,6
168/8,0
180/9,0
172/8,6
149/8,3
159/7,6
175/8,8
168/8,4
3
5
2
4
,%
1,9
1,8
4,3
4,4
,%
3,2
5,4
2,9
2,3
,%
5,1
7,0
6,9
6,7
,
-
50
,
2,4 ± 0,06
2,3 ± 0,05
2,2 ± 0,11
2,5 ± 0,04
3,0 ± 0,04
3,1 ± 0,03
2,9 ± 0,09
3,1 ± 0,02
Примечание: в числителе – общее количество, в знаменателе – количество на одну крысу.
166
Ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ â áèîëîãèè è ìåäèöèíå
ÁÞËËÅÒÅÍÜ ÂÑÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ, 2011, ¹ 1 (77), ×àñòü 2
Таблица 2
Влияние Вентрофита на прирост массы тела и линейные размеры крысят
,
,
-
,
1
6,2 ± 0,14
5,9 ± 0,23
4,9 ± 0,15
4,9 ± 0,17
7
12,1 ± 0,43
13,5 ± 0,89
6,1 ± 0,12
6,4 ± 0,16
14
19,0 ± 0,88
20,6 ± 0,34
7,6 ± 0,15
7,9 ± 0,06
21
27,9 ± 1,63
30,4 ± 1,10
9,4 ± 0,19
9,6 ± 0,20
28
34,9 ± 1,44
37,4 ± 4,60
11,6 ± 0,24
11,8 ± 0,31
ЛИТЕРАТУРА
1. Ажунова �.А., Лубсандоржиева П.�., Шантанова Л.Н. и др. Противоязвенная активность
фитопрепарата Вентрофит // Раст. ресурсы. –
2007. – �. 43, Вып. 2. – С. 69–75.
2. Дыбан А.П. �ехника тератологического эксперимента на млекопитающих // Методы биологии
развития. – М., 1974. – С. 299–313.
3. Лубсандоржиева П.�., Ажунова �.А., Шантанова Л.Н. и др. �иологически активные вещества антиязвенного растительного средства «Вентрофит» // Химия растительного сырья. – 2006. – № 1. – С. 59–64.
4. Сергиенко В.И., �ондарева И.�. Математическая статистика в клинических исследованиях. –
М., 2006. – 256 с.
5. Смольникова Н.М., Любимов �.И., Дурнев А.Д. Методические указания по изучению
репродуктивной токсичности фармакологических
веществ // Руководство по экспериментальному
(доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. – М., 2005. – С. 87–100.
6. �оропова А.А., Разуваева Я.Г., Шантанова Л.Н. и др. Фармакотерапевтическая эффективность растительного средства «Вентрофит» при
экспериментальной индометациновой гастропатии
// Сибирский медицинский журнал. – 2009. –
№ 2. – С. 100–106.
7. Унагаева А.А. Муханова Л.Х., Разуваева Я.Г., Лоншакова К.С. Морфометрическая
оценка гастропротективного действия растительного средства Вентрофит на модели аспиринового
гастрита // Вестник �ГУ. – 2006. – Вып. 6. –
С. 189–193.
Сведения об авторах
Разуваева Янина Геннадьевна – к.б.н., научный сотрудник лаборатории безопасности биологически активных веществ
Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6; тел.: (3012) 43-37-13;
e-mail: tatur75@ mail.ru).
Лоншакова Клара Сергеевна – доктор биологических наук, профессор медицинского факультета Бурятского государственного университета (670000, г. Улан-Удэ, ул. Смолина, 24а).
Аюшеева Виктория Валерьевна – ведущий инженер лаборатории безопасности биологически активных веществ Института
общей и экспериментальной биологии СО РАН (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6; тел.: (3012) 43-37-13).
Ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ â áèîëîãèè è ìåäèöèíå
167