Цитохимические показатели нейтрофилов периферической

Оригинальные исследования
УДК 577.15:612.313.1
Цитохимические показатели
нейтрофилов периферической крови
ортопедических больных при
использовании направленной
остеогенной стимуляции
В.А. Ткаченко, П.Н. Колбасин, О.В. Ткаченко, С.А. Бобкова, К.Г. Кушнир,
С.К. Северинова
Крымский государственный медицинский университет им. С.И. Георгиевского, Симферополь
Ключевые слова: цитохимия, Коллапан-Л, ортопедия.
Ш
ирокому внедрению в
стоматологическую
практику имплантантов препятствует ряд факторов,
среди которых сложность проводимых операций, и, пожалуй,
самое главное, биологическая несовместимость, которая определяет, в большей степени, риск возникновения осложнений. В последние годы появились работы
[1, 3, 5, 6] в которых предлагается
воздействовать не на имплантационный материал, а на реактивность организма, в частности, на
способность тканей, окружающих
имплантант, реагировать на него,
как на родственный элемент. Такой подход, по мнению специалистов, рассматривается, как наиболее перспективный [8].
В качестве средств воздействия
на окружающие ткани больше
всего внимания уделяется остеотропным общепринятым препаратам (солям кальция, фосфора,
120
витаминам и др.) [7]. Однако эффективность этих препаратов не
очень высока [4]. Поэтому продолжается поиск новых более эффективных лечебно-профилактических остеотропных средств.
Целью данной работы явилось
изучение комплексного действия
остеотропного препарата «Коллапан-Л» и иммуномодулятора
«Эрбисола» у
пациентов с периимплантитами
по данным мониторинга цитохимической активности периферической крови.
Материал и методы
исследований
Материалом исследования явилось периферическая кровь 22
больных с явлениями периимплантита, а также со сниженными
процессами репарации, которым
мы
применяли
комплексную
остеогенную терапию, включаю-
щую внесение «Коллапана- Л» и
парентеральное введение иммуномодулятора «Эрбисол» в дозе
1,0 1 раз в сутки в течение 10 дней.
«Коллапан-Л» (интермедиапатит, производства России) - биоактивный материал, представляющий собой однородную композицию особо чистого
гидроксиапатита и коллагена
специальной обработки насыщенной антибиотиком линкомицином. «Коллапаном-Л» заполнялась полость, имеющая не менее
трех стенок, порошок смачивался
кровью в дефекте кости и закрывался мембраной.
Забор периферической крови
производился на момент обращения, а также на 1, 3 ,6 и 12 месяцы
после использования остеогенных
препаратов.
Несомненный интерес представляло изучение активности дегидрогеназ, участвующих в окислительных процессах лактатде-
КТЖ 2006, №3
Крымский терапевтический журнал
гидрогеназы (ЛДГ) и сукцинадегидрогеназы (СДГ).
ЛДГ является одним из основных ферментов гликолиза, катализирующих обратимую реакцию
превращения пировиноградной
кислоты в молочную, а СДГ является одним из ферментов цикла
трикарбоновых кислот Кребса и
участвует в реакции дегидрирования янтарной кислоты в фумаровую.
Дегидрогеназы - ферменты, которые отщепляют водород от соответствующего субстрата и переносят его на акцептор. Этот механизм действия используется в цитохимических методах, при кото-
ках крови состоит в том, что последние должны помещаться в
среду (либо подвергаться обработке), содержащую субстрат, кофермент, ингибитор ферментов,
краситель. В указанной среде
клетки крови инкубируются в
течение 45-60 минут при температуре 37°С. Единственный фермент СДГ из определяемых гистохимически не требует кофермента, так как образующийся продукт (фумарат) не тормозит реакцию, и, следовательно, не нужно
вводить какой-либо агент, связывающий его. В указанных выше
работах по определению активности дегидрогеназ использовались
минут при температуре 37° С.
Ядра клеток докрашивали раствором метилового зеленого. Высушенные мазки микроскопировали
с иммерсионным объективом на
микроскопе МБИ-15.
Для оценки активности ферментов в клетках крови применялся морфометрический метод, с
выведением среднего цитохимического показателя (СЦП) по следующей формуле:
СЦП=
((Х1*1)+(Х2*2)+(Х3*3)+(Х4*4))/100
где х - количество клеток из 100
просмотренных нейтрофилов в
одном мазке
с определенной степенью активности фермента;
1, 2, 3, 4 - степень активности;
Табл. 1
Цитохимические показатели нейтрофилов периферической крови
100 - число просмотренных нейортопедических больных при использовании остеогенных
трофилов в одном мазке.
препаратов (усл. ед.), n=22
При этом выделяли четыре стеПоказатель
На момент
Сроки наблюдений (месяцы)
пени активности (4 ст. - нейтрообращения
1
3
6
12
фил полностью покрыт гранулами формазана; 3 ст. – 3/4 активноСДГ
1,42±0,05
1,55±0,08
1,72±0,06
1,84±0,0
1,86±0,07
сти; 2 ст. – 1/2 активности и 1 ст. –
p1<0,05
p1<0,05
p1>0,05
7
p1<0,05
1/4 активности).
p2>0,05
p2<0,05
p1<0,05
p2>0,01
Весь полученный цифровой маp2>0,01
ЛДГ
2,80±0,10
2,69±0,11
2,47±0,09
2,33±0,0
2,27±0,13
териал обрабатывали методом ваp1<0,05
p1<0,05
p1>0,05
9
p1<0,05
риационной статистики с выведеp2>0,05
p2>0,05
p1<0,05
p2>0,05
нием критерия Стьюдента, достоp2>0,05
Контроль
1,88±0,010
верными считали показатели при
СДГ,
2,26±0,14
Р<0,05.
ЛДГ
n=18
Результаты и обсуждение
Р1- достоверность по отношению к контролю.
Р2- достоверность по отношению к показателю на момент обращеАнализ цитохимических покания.
зателей нейтрофилов периферирых в систему вводится индика- разные индикаторы с соответству- ческой крови у ортопедических
тор, принимающий на себя водо- ющей окраской клеток крови и больных с явлениями непереносирод. Индикатор при этом должен методы фиксации (высушивание мости к несъемным мостовидным
менять окраску и выпадать в оса- на воздухе, выдерживание в 60% протезам и периимплантита покадок, для этих целей наиболее ча- ацетоне и другие).
зал, что на момент обращения за
сто применяют водорастворимые
В наших исследованиях в каче- стоматологической помощью отсоли тетразолия-неотразолий хло- стве индикатора ферментного мечалось значительное снижение
рид (НТ), синий тетразолий (СТ), процесса использован нитротет- аэробного окисления, так, активнитротетразолий синий (НСТ) и разолий синий (НСТ), образую- ность сукцинатдегидрогеназы содругие которые под действием щий при восстановлении в клетке ставлял 1,42±0,05 усл. ед, что было
восстанавливающих
веществ мелкие гранулы формазана и на 24,5% (p1<0,05) ниже контроля
превращаются в водораствори- окрашивающий цитоплазму от и рост активности лактавдегидромый окрашенный формазан, поз- серо-дымчатого до интенсивно- геяазы, которая была выше
воляющий устанавливать внутри- синего цвета В работе использова- контроля на 23,9% (p1<0,05). (Таклеточную локализацию дегидро- ли тонкие нативные мазки крови, блица 1).
геназ под световым микроскопом. высушенные на воздухе, которые
После применения остеогенных
Сущность цитохимического мето- после соответствующей обра- препаратов к 1 месяцу наблюдеда изучения дегидрогеназ в клет- ботки инкубировали в течение 45 ний отмечался рост аэробного
КТЖ 2006, №3
121
Оригинальные исследования
окисления и снижение анаэробного гликолиза, так, показатели
СДГ активности к этому сроку составили 1,53±0,08 усл. ед., а активности ЛДГ 2,69±0,11 усл. ед. К 3-6
месяцу наблюдений после применения остеогенных препаратов
цитохимические характеристики
в нейтрофилах периферической
крови приближались к показателям контроля, приобретая при
этом по отношению к данным
контроля недостоверный характер (p1>0,05), а по отношению к
показателям цитохимической активности нейтрофилов периферической крови на момент обращения статистически выраженный характер (р2<0,05-0,01).
Таким образом, проведенные
исследования цитохимической активности дегидрогеназ в нейтрофилах периферической крови показали, что применение остеогенных препаратов снижает процессы воспаления к 1 месяцу наблюдений, а к 3-6 месяцу цитохимиче
ская активность дегидрогеназ
не отличается от контроля, что
может свидетельствовать о закончившихся процессах репарации в
ротовой полости.
нусмертинге и несъемном протезировании.
//Российский стоматологический журнал, 2000. - № 1. - С. 40-41.
7. Мансур А., Левицкий А.П., Денью О.В.
Влияние фитоадаптогенов на состояние костной
ткани альвеолярного отростка нижней челюсти
крыс. //Вісник стоматології. - 2002, - № 4. С. 4-6.
Литература
8. Розуменко А.П. Разработка и обоснование
1. Абрамова Ж.И., Оксенденгелер Г.И. Чело- способа профилактики атрофии альвеолярных
век и противоокислительные вещества. — Л: гребней челюсти при протезировании с опорой
Наука, 1985. -230с.
наимплантнт. /Авт. дис.... канд. мед. наук. 2. Берченко Г.Н с соавт. Активизация репа- Одесса, 2005. - 22с.
ративного остеогенеза с помощью биоактивных
резорбирующих материалов — кальций-фосфатной биокерамики и комплексного препарата
Коллапан. //Ортопедия, травматология и протезирование. - 2000. - № 2. - С.96.
3.Григорьян А.С., Ялдунков В.И. Динамика
структурных превращений аутотрансплантантов из теменной кости. //Стоматология,
2000. - № 6. -С.6-9.
4. Ілик Р.Р. Використання імплантантів
при замещенні дефектів зубних рядів. // Вісник
стоматології. – 1997. -№4. – С.716-717.
5. Микроанатомическая организация регионарного лимфатического узла при дентальной
имплантологии. //Российский стоматологический журнал.-2000,-№4-С. 11-14
6. Лосев Ф.Ф., Ширин А.Н. Эффективность направленной костной регенерации при си
Цитохімічні показникі нейтрофілів периферичної крові
ортопедичних хворих при вживанні спрямованої остеогенної
стимуляції
В.А. Ткаченко, П.M. Колбасін, О.В. Ткаченко, С.А. БобковА, К.Г. Кушнір,
С.К. Северінова
Вивчено вплив остеогенних препаратів (Коллапана-Л и Ербісола) у хворих на
періімлантіти на цитохімічні показникі крові. Встановлено позитивний ефект вивчаємих показників при вживанні комплексної остеогенної терапіі.
Ключові слова: цитохімія, Коллапан-Л, ортопедія.
The neutrophil cytochemical indicators in the peripheral blood
of the orthopedic patients while using the direct osteogenic
stimulation
V.A. Tkachenko, P.N. Kolbasyn, O.V. Tkachenko, S.A. Bobkova, K.G. Kushnir,
S.K. Severinova
In the research it is revealed the affection of the osteogenic preparations (the Collapan-L
and the Erbisol) of the patients with periimplantitis upon the cytochemical blood indicators. It was discovered the positive effect of the studied indicators while using the complex osteogenic stimulation.
Key words: cytochemistry, Collapan-L, orthopedics.
122
КТЖ 2006, №3