На правах рукописи Цветков Иван Сергеевич СТРУКТУРНО
advertisement
На правах рукописи Цветков Иван Сергеевич СТРУКТУРНО–ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И ОРГАНОВ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ КРЫС ВИСТАР ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ АУТОИММУННОМ ВОСПАЛЕНИИ В УСЛОВИЯХ НОРМО- И ГИПЕРАНДРОГЕНЕМИИ 03.03.04 − клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва-2012 1 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт морфологии человека» Российской академии медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Научный консультант: кандидат биологических наук, ст.научн.сотр. Официальные оппоненты: Макарова Ольга Васильевна Мхитаров Владимир Аршакович зав. лабораторией клеточной иммунопатологии и биотехнологии ФГБУ «НИИ морфологии человека» РАМН доктор биологических наук, проф. Болтовская Марина Николаевна зав. патологоанатомическим отделением госпиталя для ветеранов войн № 2 доктор медицинских наук Гундорова Людмила Викторовна Ведущая организация – Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Защита диссертации состоится « 27 » сентября 2012 г. в ______ часов на заседании диссертационного совета Д 001.004.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт морфологии человека» РАМН по адресу: 117418, Москва, ул. Цюрупы, д.3 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «НИИ морфологии человека» РАМН Автореферат разослан «____» августа 2012 года Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук Михайлова Лилия Петровна 2 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность. Одной из важных проблем клинической андрологии является хронический простатит в связи с тем, что этиология и патогенез его недостаточно изучены, а лечение не всегда эффективно. Заболеванием страдают мужчины репродуктивного возраста. Распространённость хронического простатита составляет 2–16% (Shoskes D.A., Nickel J.C., 2011). В клинической классификации простатита Национального Института Здоровья США (NIH, 1998) выделяют следующие классификационные группы простатита: категория I – острый бактериальный простатит – острое инфекционное воспаление предстательной железы; категория II – хронический бактериальный простатит; категория III – синдром хронической тазовой боли, основным клиническим критерием заболевания является болевой синдром, длящийся более 3 мес. Эта категория хронического простатита подразделена на воспалительный синдром хронической тазовой боли (III А) и невоспалительный синдром хронической тазовой боли (III В); категория IV – асимптоматический воспалительный простатит. Структурно-функциональные особенности предстательной железы в норме, при гиперандрогенемии и хронических воспалительных процессах у человека изучены недостаточно вследствие ограниченных возможностей получения биопсийного материала. В литературе обсуждается роль аутоиммунных механизмов в развитии синдрома хронической тазовой боли (Depiante-Depaoli M., Pacheco-Rupil B., 1985; Maccioni M., 1998), а также культивируемых неклассическим путем микроорганизмов (Хомяков Ю.Н., Северин С.Е., 2007; Domingue G.J., Sr. Hellstrom W.J., 1998; Mandar R., Raukas E. et al., 2005). Для изучения иммунологических механизмов хронического простатита и синдрома хронической тазовой боли широко используются экспериментальные модели аутоиммунного простатита. Аутоиммунный воспалительный процесс в предстательной железе индуцируется у лабораторных животных подкожным введением гомогената добавочных половых желез с адъювантом Фрейнда (Pacheco-Rupil B., 1981; Orsilles М.А., 1995). В ряде работ представлены данные о морфологических проявлениях экспериментального хронического аутоиммунного простатита, выявлены простатоспецические антигены, введение которых вызывает развитие аутоиммунного воспалительного процесса в предстательной железе (Depiante-Depaoli M., Pacheco-Rupil B., 1985; Maccioni M., 1998). Однако в литературе отсутствуют сведения о структурных изменениях предстательной железы и ее долей при экспериментальном хроническом аутоиммунном простатите, а также остаются неизученными морфофункциональные изменения органов иммунной системы. В последнее десятилетие у мужчин для коррекции метаболического синдрома, андрогенной недостаточности, а также с целью контрацепции стали достаточно широко использоваться фармакологические препараты 3 тестостерона (Nieschlag E. et al., 2010). В литературе сведения о влиянии гиперандрогенемии на морфологические и иммунологические проявления хронического простатита и синдрома хронической тазовой боли отсутствуют, что диктует необходимость проведения дальнейших экспериментальных исследований. Цель исследования – изучение морфофункциональных изменений дорсальной и вентральной долей предстательной железы и органов иммунной системы при моделировании хронического аутоиммунного воспалительного процесса на фоне физиологического и повышенного уровня андрогенов Задачи исследования 1. Провести морфологическую и морфометрическую оценку структурных особенностей дорсальной и вентральной долей предстательной железы крыс Вистар в норме. 2. Провести иммуноморфологическое исследование для доказательства наличия аутоантител в сыворотке крови крыс с экспериментальным хроническим аутоиммунным простатитом. 3. Изучить морфологические изменения дорсальной и вентральной доли предстательной железы при экспериментальном хроническом аутоиммунном воспалительном процессе. 4. Провести сравнительную морфометрическую оценку функциональных зон тимуса, селезёнки, определить цитокиновый профиль у крыс Вистар при экспериментальном хроническом аутоиммунном простатите. 5. Изучить морфологические изменения предстательной железы, органов иммунной системы и цитокиновый профиль у крыс Вистар с гиперандрогенемией. 6. Провести сравнительную оценку морфологических изменений предстательной железы, органов иммунной системы и цитокинового профиля у крыс Вистар при хроническом аутоиммунном простатите на фоне физиологического уровня тестостерона и при гиперандрогенемии. Научная новизна. Впервые с помощью морфометрических методов проведена объективная сравнительная оценка структуры вентральной и дорсальной долей предстательной железы у крыс Вистар. Показано, что в дорсальной доле выше объемная доля ацинусов и ацинусов, содержащих секрет, эпителия, показатель индекса дегрануляции тучных клеток и ниже доля внутридольковой стромы, а содержание фиброцитов среди клеточных элементов в ней выше. Установлено, что при хроническом аутоиммунном воспалительном процессе структурные изменения вентральной и дорсальной долей предстательной железы различаются. В дорсальной доле снижается объемная доля ацинусов, содержащих секрет, и объемная доля эпителия. В вентральной доле объемная доля ацинусов увеличивается, а стромы снижается. В обеих долях увеличиваются показатели числа 4 десквамированных эпителиальных клеток в просвете ацинусов, объемной доли воспалительного инфильтрата и содержания в нем лимфоцитов и фибробластов. При хроническом аутоиммунном простатите у крыс Вистар развивается вторичное иммунодефицитное состояние, характеризующееся акцидентальной инволюцией I-II стадии, гиперплазией белой пульпы селезенки за счет ПАЛМ-зоны и снижением продукции цитокинов ИЛ-2, ИЛ-4, ИНФ-γ, ФНО-α клетками селезенки, активированными Con-A. Гиперандрогенемия вызывает изменение морфофункционального состояния предстательной железы крыс: увеличение объемной доли ацинусов без секрета и десквамированного эпителия, уменьшение числа тучных клеток в строме. Структурные изменения вентральной доли менее выражены и их отличает от дорсальной снижение объемной доли эпителия и более выраженная десквамация эпителия ацинусов. Гиперандрогенемия оказывает иммуносупрессорное действие, снижает продукцию и секрецию провоспалительных и иммунорегуляторных цитокинов, вызывает развитие акцидентальной инволюции тимуса I-II стадии, опустошение В-зоны селезенки. При гиперандрогенемии по сравнению с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне физиологического уровня андрогенов более выражены увеличение объемной доли ацинусов, десквамация эпителия, фиброз. Гиперандрогенемия оказывает иммуносупрессорный эффект: в воспалительном инфильтрате снижается содержание лимфоцитов. При хроническом аутоиммунном простатите на фоне гиперандрогенемии по сравнению с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне физиологического уровня андрогенов выявлено опустошение Т- и В-зон селезёнки, снижение объемной доли светлых центров лимфоидных узелков. Практическая значимость. Экспериментальная модель хронического аутоиммунного простатита с количественной оценкой структурных изменений может быть использована для доклинического исследования эффективности фармакологических препаратов, применяемых для лечения хронического простатита. Полученные данные об иммуносупрессорном и профибротическом эффекте гиперандрогенемии при хроническом аутоиммунном простатите следует учитывать при использовании андрогенсодержащих препаратов для коррекции андрогенной недостаточности, метаболического синдрома, в спортивной медицине и с целью контрацепции. Внедрение в практику. Результаты исследования используются в лекционном курсе по гистологии, цитологии, клеточной биологии в ФГОУ Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина. 5 Апробация результатов исследования. Основные положения диссертации были представлены и обсуждены на конференциях и конгрессах: «Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии», (Москва, 2008); «Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии», (Москва, 2010); Всероссийском форуме с международным участием имени академика Иоффе В.И. «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2011»; «Х Конгрессе международной ассоциации морфологов» (Ярославль, 2011); «Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии», (Москва, 2012); межлабораторной конференции ФГБУ «НИИ морфологии человека» РАМН (май, 2012). Публикации. По материалам исследования опубликовано 7 научных работ, из них 2 статьи в журналах, включенных в «Перечень периодических изданий», рекомендованных ВАК РФ. Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения и 6 глав: обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 198 страницах машинописного текста, содержит 37 таблиц и проиллюстрирована 51 рисунком. Библиографический указатель включает 173 источника (40 отечественных и 133 иностранных). СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования Материалы. Лабораторные животные. В работе использованы 42 особи половозрелых крыс–самцов Вистар (питомник «Столбовая»). Масса тела экспериментальных животных составляла 240–280 гг. Все эксперименты выполнены в осенне–зимний период. При работе с экспериментальными животными руководствовались приказом Минздрава СССР №755 от 12.08.1977г. На проведение эксперимента получено разрешение биоэтической комиссии ФГБУ «НИИ морфологии человека» РАМН (протокол №5 от 12.03.2008). Исследование проводилось на 4–х рандомизированых группах крыс– самцов Вистар: контрольной (n=14); с хроническим аутоиммунным простатитом (n=14); с гиперандрогенемией (n=7); с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне гиперандрогенемии (n=7). Использовали экспериментальную модель хронического аутоиммунного простатита с введением гомогената добавочных половых желез крыс и адъюванта Фрейнда, разработанную B. Pacheco-Rupil et al. (1981), B. Pacheco-Rupil (1984) и модифицированную M. Orsilles et al. (1995). У половозрелых беспородных крыс извлекали добавочные половые железы (предстательная, пузырьковидная, коагуляционные), которые затем с помощью ультразвукового гомогенизатора измельчали до однородной массы. Гомогенат центрифугировали 30 мин. при 14000 об/мин. Концентрацию белка в супернатанте определяли на автоматическом биохимическом анализаторе Thermo Fisher Scientific “Konelab prime 60i”, и она составила 15 6 мг/мл. Полученный супернатант добавочных половых желез с адъювантом Фрейнда в равных объемах (по 0,75 мл) вводили крысам подкожно в область холки троекратно с интервалом в 7 сут. Гиперандрогенемию моделировали путем внутримышечного введения фармакологического препарата тестостерона Омнадрен 250 (Jelfa, Польша). Для моделирования гиперандрогенемии подбирали экспериментальным путем оптимальную дозу омнадрена, которая составила 165 мг/кг. При внутримышечном введении крысам этой дозы омнадрена уровень тестостерона превышал физиологические пределы в 4-5 раз и стабильно сохранялся в течение 7 сут. Для создания устойчивого фона гиперандрогенемии первое введение масляного раствора омнадрена крысам группы с гиперандрогенемией сделано за 7 дней до первой инъекции гомогената добавочных половых желез. В дальнейшем, введение омнадрена животным этой группы совпадало по времени с введением гомогената добавочных половых желез с адъювантом Фрейнда. Животных выводили из эксперимента передозировкой диэтилового эфира на 31-е сутки после первого введения гомогената добавочных половых желез с адъювантом Фрейнда или омнадрена. Методы исследования Гистологические и гистохимические. Проводили забор предстательной железы, тимуса и селезенки. Материал фиксировали в растворе Буэна в течение 24 ч., обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и хлороформе, заливали в парафин. Изготовляли гистологические срезы толщиной 5-7 мкм, окрашивали их гематоксилином и эозином, по ван Гизону. Для выявления нейтральных гликопротеинов проводили PAS–реакцию, для определения кислых гликопротеинов применяли окраску альциановым синим. С целью выявления тучных клеток соединительной ткани гистологические срезы окрашивали толуидиновым синим (рН 2.0). Морфометрические. Морфометрическое исследование проводили на микроскопе Leica DM 2500 с цифровой фотокамерой. Изображение передавалось на экран монитора, на котором при помощи графического планшета и программы “Image Scope” измеряли стереологические параметры гистоструктуры методом точечного счета с применением 100– узловой тест-сетки (Автандилов Г.Г., 1973). В гистологических срезах дорсальной и вентральной долей предстательной железы методом точечного счета определяли: объемную долю ацинусов, ацинусов содержащих и не содержащих секрет, стромы, воспалительного инфильтрата. Подсчитывали количество тучных клеток на площади среза 0,1мм2. Индекс дегрануляции тучных клеток оценивали по методу Д.П. Линдер (1980). Во внутридольковой строме предстательной железы в препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином, подсчитывали содержание 7 нейтрофилов и лимфоцитов (на 500 клеток). В препаратах тимуса и селезенки, окрашенных гематоксилином и эозином, методом точечного счета определяли объемные доли структурно-функциональных зон: для тимуса – коркового и мозгового слоев; для селезенки – белой пульпы, ПАЛМ–зоны, лимфоидных узелков, их светлых центров. Ширину субкапсулярной зоны тимуса измеряли с помощью программы Image Pro. Иммунофлюоресцентный. Иммуноморфологическое исследование предстательной железы проводили с целью выявления в сыворотке крови крыс с хроническим аутоиммунным простатитом аутоантител к антигенам предстательной железы. На криостатные срезы предстательной железы и печени интактных крыс наносили сыворотку крови крыс с хроническим аутоиммунным простатитом в титре 1:400. В качестве контроля использовали срезы, которые инкубировали с фосфатным буфером или сывороткой крови интактных крыс контрольной группы в титре 1:400. В качестве «вторых» антител использовали меченные ФИТЦ–антитела козы против IgG крысы в титре 1:100 (ИМТЕК, Россия). Препараты просматривали в люминесцентном микроскопе Carl Zeiss Axioplan 2. Культуральные. Для изучения цитокинового профиля из селезенки животных выделяли спленоциты с помощью стеклянного гомогенизатора Поттера. Выделенные клетки центрифугировали в среде 199 10 мин при 1000 об/мин. Суспензию клеток селезенки в количестве 1х106/мл культивировали 24 ч в 1 мл полной ростовой среды с добавлением конканавалина А (в конечной концентрации 5 мкг/мл) в 24–луночных культуральных панелях при 37°С в атмосфере 5% СО2 для индукции синтеза и секреции цитокинов. По окончании инкубации отбирали надосадочную жидкость, которую хранили не более месяца при – 40°С. Среда для культивирования лимфоцитов состояла из RPMI 1640 (ПанЭко) с 5% инактивированной телячьей эмбриональной сывороткой, 2 мМ глутамина и 50 мкг/мл гентамицина. Иммуноферментный. В сыворотке крови методом ИФА проводили определение уровня общего и свободного тестостерона (“Аdaltis”, Италия), кортикостерона (“IBL international”, Германия). В культуральной жидкости клеток селезенки методом ИФА (тест-системы фирмы “BioSource International”, США, “BenderMedsystems”, Австрия) определяли концентрацию интерлейкинов (ИЛ) ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, интерферона-γ (ИНФ-γ), фактора некроза опухолей α (ФНО-α). Статистический. Полученные цифровые данные оценивали на нормальность распределения при помощи метода Колмогорова и Смирнова в пакете Statistica 7.0. Цифровые данные, подчиняющиеся нормальному распределению, обрабатывали параметрическими методами, сравнение групп проводили по t–критерию Стьюдента, в противном случае использовали непараметрический метод Манна-Уитни. Статистически значимыми считали значения при р< 0,05. 8 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Структурно–функциональная и иммунологическая характеристика экспериментального хронического аутоиммунного воспалительного процесса в предстательной железе В работе использовали экспериментальную модель хронического аутоиммунного простатита, индуцированного введением гомогената добавочных половых желез и адъюванта Фрейнда (Pacheco-Rupil B., 1981; Orsilles М.А., 1995). Несмотря на длительное использование этой модели, детальная характеристика структурных изменений предстательной железы и изучение морфофункциональных изменений органов иммунной системы при хроническом аутоиммунном простатите не проводилась, что в значительной мере ограничивает применение указанной модели для изучения патогенеза заболевания и доклинической оценки эффективности лечебных средств. По E.Witebsky (1961) одним из критериев аутоиммунного процесса является обнаружение в сыворотке крови аутоантител. С целью доказательства аутоиммунного характера воспалительного процесса, вызванного введением гомогената добавочных половых желез с адъювантом Фрейнда, проводили иммуноморфологическое исследование. Для выявления аутоантител к антигенам предстательной железы сыворотку крови крыс Вистар с хроническим аутоиммунным простатитом наносили на криостатные срезы предстательной железы печени интактной крысы. При нанесении сыворотки крови всех животных с хроническим аутоиммунным простатитом выявили линейное и гранулярное свечение в базальной пластинке ацинусов предстательной железы. В криостатных срезах печени интактных крыс свечение отсутствовало, что свидетельствует о специфичности антител к антигенам предстательной железы. Выявление аутоантител в сыворотке крови крыс Вистар с хроническим аутоиммунным простатитом в настоящем исследовании является прямым доказательством участия в воспалительном процессе в предстательной железе аутоиммунных реакций (Rose N.R., Bona C., 1993). По сравнению с контрольной группой крыс Вистар при хроническом аутоиммунном простатите показатели уровня половых стероидов – общего и свободного тестостерона, а также кортикостерона, статистически значимо не различались. Структурно–функциональная характеристика предстательной железы крыс Вистар при экспериментальном хроническом аутоиммунном простатите Для оценки структурно-функциональных изменений предстательной железы при хроническом аутоиммунном простатите проводили ее морфологическое и морфометрическое исследование у крыс контрольной группы и крыс опытной группы, которым вводили гомогенат добавочных половых желез и адъювант Фрейнда. В контрольной группе ацинусы предстательной железы были округлой и овальной формы, просветы их были частично заполнены эозинофильным, 9 слабо PAS-положительным гомогенным секретом. Эпителий ацинусов был призматический с небольшим количеством эпителиально–стромальных выростов. В просветах части ацинусов выявлены клетки десквамированного эпителия. Строма была представлена тонкими прослойками пикринофильной рыхлой волокнистой соединительной ткани, в которой располагались диффузно рассеянные тучные клетки, лимфоциты и единичные гистиоциты. Цитоплазма большинства тучных клеток была заполнена плотно упакованными гранулами, метахроматически окрашивающимися толуидиновым синим. Выводные протоки были выстланы кубическим эпителием, вокруг них определялся тонкий слой пикринофильной или слабо фуксинофильной соединительной ткани. Качественная характеристика структуры предстательной железы крыс в норме представлена в работе C. J. Jesik et al. (1982). Детального изучения структуры предстательной железы крыс в норме с использованием морфометрических методов не проводилось. По данным выполненного нами морфометрического исследования структура дорсальной и вентральной долей предстательной железы крыс Вистар в норме различается. В дорсальной доле выше объемная доля ацинусов и их эпителия, и ниже – показатель индекса дегрануляции тучных клеток и объемной доли внутридольковой стромы. Выявленные структурные особенности дорсальной и вентральной долей предстательной железы крыс Вистар в норме отражают их функциональные различия. Основным секреторным белком дорсальной доли предстательной железы является дорсальный протеин-I, большой белковый комплекс, в составе которого содержатся гликопротеины. Секреция этого белка является андрогензависимой (Wilson E.M., French F.S., 1980). Эпителий ацинусов вентральной доли предстательной железы секретирует лимонную кислоту и белки, относящиеся к семейству простатеина - спермин и спермидин (Lea O.A., Petrusz P., French F.S., 1979; Maccioni M., Rivero V.E., Riera C.M., 1998). Простатеин является одним из антигенов, введение которого вызывает развитие хронического аутоиммунного простатита (Maccioni M., Rivero V.E., Riera C.M., 1998). При хроническом аутоиммунном простатите, вызванном введением гомогената добавочных половых желез с адъювантом Фрейнда, в предстательной железе крыс выявлена морфологическая картина, характерная для хронического простатита: сочетание дистрофических, десквамативных и пролиферативных изменений эпителия ацинусов, расширение их просвета, очаговый фиброз внутридольковой стромы, диффузно-очаговая воспалительная инфильтрация из лимфоцитов, гистиоцитов, тучных клеток. Выявленные патоморфологические изменения предстательной железы при хроническом аутоиммунном простатите у крыс Вистар согласуются с данными M.A. Orsilles (1998) и C. N. Rudick (2007). В гистологических срезах предстательной железы крыс с хроническим аутоиммунным простатитом просветы ацинусов были расширены, частично 10 заполнены эозинофильными и слабо PAS–положительным гомогенным секретом. Эпителий ацинусов был высоким призматическим, выявлялось большое количество эпителиально-стромальных выростов. В части ацинусов эпителий располагался рыхло, границы клеток были нечеткими. В просветах ацинусов выявлялось большое число клеток десквамированного эпителия. Строма была очагово склерозирована и в этих зонах представлена пучками зрелой фуксинофильной при окраске по ван Гизону соединительной ткани. Отмечалась слабо и умеренно выраженная диффузно–очаговая инфильтрация лимфоцитами, единичными гистиоцитами, тучными клетками. Преобладали тучные клетки без признаков дегрануляции, их цитоплазма была заполнена плотно упакованными метахроматичными при окраске толуидиновым синим гранулами. В отдельных участках периацинарная воспалительная лимфоидная инфильтрация, разрушая базальную пластинку, распространялась на эпителиальный слой. Подобные изменения описаны в работе С.В. Стовбун и соавт. (2011) на биопсийном материале предстательной железы мужчин, страдавших хроническим простатитом. По данным морфометрического исследования при хроническом простатите отмечалось повышение показателей объемной доли ацинусов, не содержащих секрет, и числа эпителиальных клеток в просвете ацинусов, увеличение объемной доли воспалительного инфильтрата во внутридольковой строме. Число тучных клеток, а также индекс их дегрануляции в сравниваемых группах не различались (табл. 1). Среди клеточных элементов во внутридольковой строме предстательной железы в сравниваемых группах преобладали фиброциты и фибробласты. При этом в группе крыс с хроническим аутоиммунным простатитом по сравнению с контролем преобладали фибробласты (табл. 2). В группе крыс с хроническим аутоиммунным простатитом был статистически значимо повышен показатель содержания лимфоцитов и снижен – нейтрофилов. Выявленный нами при экспериментальном хроническом аутоиммунном простатите у крыс Вистар внутридольковый очаговый воспалительный процесс был слабо выраженным, объемная доля инфильтрата по сравнению с контрольной группой была увеличена в 2 раза и составляла 4,0 %. В составе воспалительного инфильтрата повышалось содержание лимфоцитов, а также фибробластов (табл. 2). По данным литературы в предстательной железе у мужчин, страдающих хроническим простатитом, объемная доля воспалительного инфильтрата также составляет 4,0 % (Щеплев П.А., 2007). Лимфоидная инфильтрация предстательной железы у крыс Вистар с хроническим аутоиммунным простатитом выявлялась в межацинарной соединительной ткани вокруг ацинусов. Подобные изменения описаны С.В. Стовбун и соавт. (2011) при ультраструктурном исследовании биоптатов 11 Таблица 1 Морфометрическая характеристика предстательной железы крыс Вистар контрольной группы и при хроническом аутоиммунном простатите, M±SE, Me (25L; 75U) Группы наблюдений Порог доверительной вероятности Контрольная группа Хронический аутоиммунный простатит Ацинусы, Р/р 66,85±1,69 59,6±1,50 0,0053 Строма, Р/р 33,51±1,69 40,3±1,40 0,0076 Эпителий, Р/р Ацинусы содерж.секрет, Р/р Ацинусы не содерж.секрет, Р/р Десквамация эпителия, (кол–во на 1 ацинус) Клеточный инфильтрат, Р/р Число тучных клеток (на стандартн. площадь среза) Индекс дегрануляции (усл.ед.) 30,74±1,87 23,30±1,01 0,0003 20,77±3,36 26,09±2,08 0,1800 13,25±2,97 15,67±1,18 0,3630 7,5 (4,5;12,5) 23,0 (12;35) 2,0 (0;4) 4,0 (3;6) 0,0076 8,95±0,90 9,58±0,62 0,2738 1,75±0,13 1,79±0,08 0,7425 Показатели (р) 0,0178 Таблица 2 Состав клеточных элементов внутридольковой стромы предстательной железы крыс Вистар контрольной группы и при хроническом аутоиммунном простатите, Me (25L; 75U) Группа наблюдения Показатели, % Контрольная Хронический аутоиммунный простатит Порог доверительной вероятности (р) Нейтрофилы 4,6 (3,5;6,2) 1,7 (0,7;1,6) 0,0031 Лимфоциты 7,2 (6,2;8) 15,1 (11,4;16,8) 0,0002 Фибробласты 12,5 (9,2;13) 36,0 (29;40) 0,0001 Фиброциты 51,0 (45,3;60,4) 32,0 (29,5;33,5) 0,0001 12 предстательной железы мужчин, страдавших хроническим простатитом. Популяция лимфоцитов в предстательной железе представлена главным образом NK и NKT– клетками, которые оказывают цитотоксические эффекты (Naslund M.J., Strandberg J.D. et al., 1988). По сравнению с популяциями лимфоцитов, заселяющими селезенку, печень, подвздошную кишку и мезентериальные лимфатические узлы, предстательная железа содержит высокую долю NK- и NKТ- клеток, среди которых преобладают CD45, CD4+ Т-клетки (Vykhovanets E.V., 2005). Анализ популяций лимфоцитов дорсолатеральной и вентральной долей предстательной железы у крыс Вистар и Спрейг-Доули выявил низкий показатель индекса CD4/CD8 Тлимфоцитов (Vykhovanets E.V., 2005.; Vykhovanets E.V. et al., 2006.). Предстательная железа в физиологических условиях, очевидно, резистентна к воспалению, так как в ней высокий уровень CD8 – цитотоксических Т– лимфоцитов (Godfrey D.I., MacDonald H.R. et al., 2004). При активации NKT клетки продуцируют ИНФ-γ и ИЛ-4, играющие важную роль в развитии хронической воспалительной реакции (Iwakoshi N.N., Greiner D.L. et al., 1999; Shao H., Van Kaer L., 2003). По данным литературы (Donadio A.C., Depiante-Depaoli M, 1997) и результатам настоящего исследования в предстательной железе при экспериментальном хроническом аутоиммунном простатите количество гистиоцитарных элементов небольшое и практически отсутствуют нейтрофилы. Низкое содержание гистиоцитов и нейтрофилов определяет слабую выраженность альтеративных и экссудативных реакций в предстательной железе, так как эти клетки секретируют большое количество протеолитических ферментов и генерируют кислородные радикалы, вызывающие повреждение ткани (Белоцкий С.М., Спивак Н.Я., 2009). Альтеративные изменения в предстательной железе при экспериментальном хроническом аутоиммунном простатите характеризовались, главным образом, десквамацией эпителия, что, с одной стороны, отражает усиление гибели эпителиоцитов ацинусов, очевидно, по механизму апоптоза, и с другой стороны, изменение типа секреции с меро- и апокринового преимущественно на голокриновый (Шубникова Е.А., 1996). При хроническом аутоиммунном простатите в вентральной и дорсальной долях выявлены однонаправленные изменения показателей объемной доли ацинусов, стромы, эпителия, числа десквамированного эпителия, клеточного инфильтрата. Различия выявлены между дорсальной и вентральной долями предстательной железы по показателям объемной доли ацинусов, содержащих секрет. Их показатель снижался при хроническом аутоиммунном простатите в дорсальной доле и увеличивался в вентральной. Аналогичные изменения показателей наблюдались для индекса числа тучных клеток – он снижался в дорсальной доле и не изменялся в вентральной. 13 Морфофункциональная характеристика органов иммунной системы при хроническом аутоиммунном простатите. В тимусе выявлена акцидентальная инволюция I–II стадии, характеризующаяся увеличением объемной доли коркового и субкортикального слоев. В селезенке отмечалась гиперплазия белой пульпы (50,7±2,1 – хронический аутоиммунный простатит и 40,5±1,7 – контрольная группа; р= 0,0012) за счет ПАЛМ–зоны (30,0±1,8 – хронический аутоиммунный простатит и 21,3±1,2 – контрольная группа; р= 0,0007) и трансформация светлых центров лимфоидных узелков в эпителиоидноклеточные. У крыс опытной группы был снижен уровень продукции цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ФНО-α) клетками селезенки, активированными Соn-A, что отражает развитие на фоне хронического аутоиммунного воспалительного процесса иммунодефицитного состояния (Кетлинский С.А., Симбирцев А.С., 2008) Морфологическая характеристика предстательной железы, органов иммунной системы и цитокиновый профиль крыс Вистар при гиперандрогенемии С целью оценки влияния гиперандрогенемии на структурно– функциональные изменения предстательной железы при хроническом аутоиммунном простатите проводили морфологическое и морфометрическое исследование предстательной железы крыс группы сравнения, которым вводили фармакологический препарат пролонгированного действия Омнадрен 250. В группе животных, которым вводили омнадрен, отмечалось статистически значимое многократное увеличение в сыворотке крови уровня общего и свободного тестостерона (табл. 3). Показатели концентрации кортикостерона в сравниваемых группах статистически значимо не различались. Таблица 3 Показатели уровня общего и свободного тестостерона, кортикостерона в сыворотке крови крыс Вистар с гиперандрогенемией, Me (25L; 75U) Группа наблюдений Уровень тестостерона в сыворотке крови крыс Уровень кортикостерона в сыворотке крови крыс (нг/мл) Общий (нг/мл) Свободный (пг/мл) Контрольная 0,7 (0,17; 0,81) 1,96 (1,68; 2,16) 149,6 (104,4; 210) Гиперандрогенемия 14,0 (12,1; 15,4) 8,8 (8,2; 9,2) 258,0 (153;262) Порог доверительной вероятности (р) 0,0143 0,0143 0,1171 14 Сравнительная морфологическая характеристика вентральной и дорсальной долей предстательной железы у крыс Вистар в норме и при гиперандрогенемии По данным морфологического и морфометрического исследования при сравнении контрольной группы крыс и животных с гиперандрогенемией обе доли предстательной железы характеризовались увеличением стромальноэпителиальных выростов, расширением просвета ацинусов, в которых было увеличено число гибнущих эпителиальных клеток. Объемная доля клеточных элементов стромы увеличивалась в 3,2 раза, показатель процентного содержания лимфоцитов среди клеточных элементов внутридольковой стромы статистически значимо не изменялся (табл. 4). Содержание фибробластов возрастало (66.0 при гиперандрогенемии и 12.5 в контрольной группе; р= 0,0022) а фиброцитов снижалось. Снижался также показатель числа тучных клеток (5.38 при гиперандрогенемии и 8,95 в контрольной группе; р= 0,0017), а индекс их дегрануляции статистически значимо не изменялся. В дорсальной доле предстательной железы крыс Вистар с гиперандрогенемией строма была представлена рыхлой волокнистой соединительной тканью, пикринофильной и очагово слабо фуксинофильной при окраске по ван Гизону. В ней выявлены диффузно рассеянные клеточные элементы, представленные тучными клетками, фибробластами, фиброцитами, единичными лимфоцитами и гистиоцитами. В части ацинусов выявлялся гомогенный эозинофильный, очагово слабо PAS–положительный, и слабо окрашивающийся альциановым синим секрет. Ацинусы были выстланы кубическим однорядным эпителием с четкими границами цитоплазмы и ядер. В просветах части ацинусов выявлялось большое количество гибнущих эпителиальных клеток. По данным морфометрического исследования в дорсальной доле предстательной железы у крыс с гиперандрогенемией увеличивалась объемная доля ацинусов и снижалась – стромы (табл. 4). Показатель отношения объемной доли ацинусов к строме составил 2,8 (контроль 1,7). В 3 раза снижался показатель объемной доли ацинусов содержащих секрет, и увеличивался – ацинусов, не содержащих секрет, возрастал показатель числа эпителиальных клеток в просвете ацинусов, объемной доли клеточных элементов во внутридольковой строме, числа тучных клеток, но индекс их дегрануляции не изменялся. При гиперандрогенемии по сравнению с контрольной группой среди клеточных элементов внутридольковой стромы дорсальной доли предстательной железы увеличивалось процентное содержание фибробластов (78,0 при гиперандрогенемии и 9,6 в контрольной группе; р= 0,0253) и снижалось – фиброцитов. При гиперандрогенемии в вентральной доле предстательной железы преобладали ацинусы. Строма была представлена рыхлой волокнистой соединительной тканью пикрино-фуксинофильной при окраске по ван Гизону. В ней выявлялось небольшое количество диффузно рассеянных 15 клеточных элементов, представленных тучными клетками, лимфоцитами, а также фиброцитами и фибробластами. Ацинусы были неправильной формы, просветы их были частично заполнены гомогенным или сетевидным, эозинофильным, слабо PAS–положительным и слабо окрашивающимся альциановым синим секретом. Эпителий ацинусов был кубическим или призматическим, с небольшим числом эпителиально–стромальных выростов. При морфометрическом исследовании вентральной доли у крыс с гиперандрогенемией по сравнению с контрольной группой значимо возрастал показатель объемной доли ацинусов и снижался стромы (табл. 4). Индекс отношения показателя объемной доли ацинусов к объемной доле стромы возрастал за счет ацинусов и составил 2,26, в контрольной группе 1,34. У крыс с гиперандрогенемией статистически значимо увеличивался показатель числа эпителия в просвете ацинусов и объемной доли клеточных элементов в строме, статистически значимо снижался показатель числа тучных клеток, а индекс их дегрануляции возрастал. В вентральной доле предстательной железы у крыс Вистар на фоне гиперандрогенемии среди клеточных элементов внутридольковой стромы возрастало процентное содержание фибробластов (56,4 при гиперандрогенемии и 13,0 в контрольной группе; р= 0,0253), снижалось – фиброцитов и нейтрофилов. Таким образом, по данным морфологического и морфометрического исследования предстательной железы установлено, что гиперандрогенемия вызывает в вентральной и дорсальной долях предстательной железы однонаправленные структурные изменения, которые характеризуются увеличением объемной доли ацинусов и снижением стромы, снижением объемной доли ацинусов, содержащих секрет, и увеличением не содержащих секрет, увеличением числа гибнущих эпителиальных клеток в просвете ацинусов, повышением объемной доли клеточных элементов в строме с увеличением содержания фибробластов и снижением числа тучных клеток. Полученные данные об увеличении в предстательной железе крыс Вистар при гиперандрогенемии объемной доли ацинусов согласуется с данными литературы, в которой указывается на то, что андрогены вызывают гипертрофию и усиливают секреторную функцию эпителия ацинусов предстательной железы (Печерский А.В., 2007). Выявленное увеличение числа гибнущих эпителиальных клеток в ацинусах отражает усиление секреторной активности ацинарного эпителия с переходом на голокриновый тип секреции (Шубникова Е.А., 1996). В нашей работе показано, что гиперандрогенемия вызывает увеличение числа фибробластов, что указывает на развитие фибротических процессов во внутридольковой строме. Активация фибробластов сопровождается увеличением продукции таких факторов роста, как инсулиноподобный, эпидермальный, трансформирующий, которые повышают пролиферативную активность эпителия ацинусов и могут инициировать процессы канцерогенеза (Cunha G.R., Cooke P.S., 2004). 16 Таблица 4 Морфометрическая характеристика предстательной железы крыс Вистар контрольной группы и при гиперандрогенемии, M±SE, Me (25L; 75U) Группы наблюдений Показатели Ацинусы Р/р Строма Р/р Эпителий Р/р Ацинусы содерж.секрет Р/р Ацинусы не содерж.секрет Р/р Десквамация эпителия Клеточные элементы в строме Р/р Число тучных клеток (на стандартн. площадь среза) Индекс дегрануляции усл.ед Контрольная Группа крыс с гиперандрогенемией Порог доверительной вероятности (р) 66,85±1,69 33,51±1,69 30,74±1,87 70,30±1,24 28,99±1,15 27,09±1,45 0,1365 0,0355 0,1660 20,77±3,3 17,20±1,57 0,2771 13,25±2,97 18,44±1,14 0,0485 7,5 (4,5;12,5) 21,5 (14,5;39,5) 0,0083 2,0 (0;4) 6,4 (6,14; 7,4) 0,0064 8,95±0,90 5,38±0,66 0,0001 1,75±0,13 2,14±0,13 0,2077 Морфологическая характеристика органов иммунной системы и цитокиновый профиль крыс Вистар при гиперандрогенемии Литературные данные о влиянии гиперандрогенемии на морфологическое состояние иммунной системы фрагментарны и выполнены, главным образом, в системе in vitro (Klein S.L., Roberts C.W., 2010). На основании этих данных сформулированы представления о том, что гиперандрогенемия оказывает иммуносупрессорное и провоспалительное действие. Поэтому в работе было оценено влияние гиперандрогенемии на морфологическое состояние иммунной системы у крыс Вистар. В тимусе у крыс с гиперандрогенемией преобладал корковый слой, который был плотно «заселен» лимфоцитами. Границы коркового и мозгового слоев были четкие. В мозговом слое соотношение ретикулоэпителия к лимфоцитам составило 1:1, в нем выявлялись тимические тельца с отложениями кератогиалина. У животных с гиперандрогенемией по сравнению с контрольной группой в тимусе отмечалось увеличение показателей объемной доли коркового слоя (67,6±1,1 в контрольной группе и 56,5±2,1; р=0,0012) и снижение мозгового. Показатели ширины субкапсулярного слоя тимуса в сравниваемых группах статистически значимо не различались. 17 Таблица 5 Морфометрические показатели селезенки крыс Вистар контрольной группы и при гиперандрогенемии, M±SE Группа наблюдений Контрольная Гиперандро генемия Порог доверительной вероятности (р) Морфометрические параметры Объемная плотность, % Белая пульпа 40,56±1,69 30,37±1,17 0,0075 Красная пульпа 59,43±1,69 69,62±1,17 0,0075 Индекс отношения объемной плотности белой пульпы к красной, усл.ед. 0,72±0,05 0,45±0,02 0,0075 Лимфоидные узелки 19,26±1,29 9,48±0,68 0,009 ПАЛМ 21,3±1,21 20,88±1,00 0,9056 Светлые центры 26,49±3,3 18,8±2,63 0,0290 Таким образом, при гиперандрогенемии по данным морфологического и морфометрического исследования в тимусе выявляется акцидентальная инволюция I–II стадии, характеризующаяся расширением коркового слоя и появлением тимических телец более поздних фаз развития. В селезенке крыс с гиперандрогенемией по сравнению с контрольной группой отмечалось опустошение белой пульпы, лимфоидные узелки были небольшие со светлыми центрами, представленными лимфобластами. В них определялись митозы, а также небольшое количество диффузно рассеянных фрагментов ядер. По данным морфометрического исследования при гиперандрогенемии отмечалось значимое снижение показателей объемной доли белой пульпы и увеличение красной (табл. 5). Показатель объемной доли ПАЛМ – зоны не изменялся, а лимфоидных узелков и светлых центров достоверно снижался. Таким образом, по данным морфологического и морфометрического исследования гиперандрогенемия вызывает опустошение белой пульпы селезенки за счет В-зоны c уменьшением размеров лимфоидных узелков и их светлых центров. По сравнению с контрольной группой у животных с гиперандрогенемией в культуральной жидкости клеток селезенки, 18 активированных Con-A, выявлено статистически значимое снижение концентрации ИЛ-2, ФНО-α, ИНФ-γ, а уровень ИЛ-6 не изменялся. Выявленные нами при гиперандрогенемии у крыс Вистар акцидентальная инволюция тимуса I-II стадии, опустошение белой пульпы селезенки за счет В-зон, снижение продукции и секреции цитокинов согласуются с данными литературы о супрессорном эффекте андрогенов на реакции клеточного и гуморального иммунного ответа. (Viselli S.M., Reese K.R., Fan J. et al., 1997; Olsen N.J., Kovacs W.J. 2001; Heng T.S., Goldberg G.L., Gray D.H.et al., 2005). Сравнительная морфологическая и иммунологическая характеристика хронического аутоиммунного процесса на фоне нормои гиперандрогенемии Сравнительная морфологическая характеристика хронического аутоиммунного воспалительного процесса в предстательной железе на фоне нормо- и гиперандрогенемии В связи с высокой распространенностью хронического абактериального простатита среди мужчин и расширением использования препаратов тестостерона в андрологической и урологической практике представляет интерес изучение морфологических и иммунологических особенностей хронического воспалительного процесса в предстательной железе на фоне гиперандрогенемии. По сравнению с животными, у которых моделировали хронический аутоиммунный простатит на фоне физиологического уровня тестостерона в группе крыс, которым вводили гомогенат добавочных половых желез с адъювантом Фрейнда на фоне гиперандрогенемии, показатели концентрации в сыворотке крови общего и свободного тестостерона были достоверно выше (табл. 6). Таблица 6 Показатели уровня общего и свободного тестостерона в сыворотке крови крыс Вистар с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне нормо- и гиперандрогенемии, Me (25L; 75U) Уровень тестостерона Группа наблюдений Хронический аутоиммунный простатит Хронический аутоиммунный простатит при гиперандрогенемии Порог доверительной вероятности (р) Общий (нг/мл) Свободный (пг/мл) 0,80 (0,33; 0,86) 1,86 (1,5; 2,47) 19,0 (17,2; 20) 6,7 (4,8; 7,9) 0,0044 0,0176 19 Таблица 7 Морфометрическая характеристика структурных изменений предстательной железы крыс Вистар с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне нормо- и гиперандрогенемии, M±SE, Me (25L; 75U) Группы наблюдений Хронический Хронический аутоиммунный простатит аутоиммунный на фоне простатит гиперандрогенемии Показатели Порог доверительной вероятности (р) Ацинусы, Р/р 59,6±1,48 64,13±1,64 0,0401 Строма, Р/р 40,3±1,44 36,40±1,67 0,0218 Эпителий, Р/р 23,3±1,015 20,72±1,37 0,0321 26,09±2,08 22,47±2,05 0,1225 15,67±1,18 22,57±1,78 0,0058 23,0 (12;35) 9,0 (4,5;14) 0,0131 4,0 (3;6) 9,2 (8; 10,8) 0,0142 9,58±0,62 6,64±0,75 0,1933 1 ,79±0,08 1,99±0,15 0,1982 Ацинусы содерж. секрет, Р/р Ацинусы не содерж.секрет, Р/р Десквамация эпителия (число на 1 ацинус) Инфильтрат, Р/р Число тучных клеток (на стандартн. площадь среза) Индекс дегрануляции (усл.ед.) Таблица 8 Клеточный состав воспалительного инфильтрата предстательной железы крыс Вистар с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне нормо- и гиперандрогенемии, Me (25L; 75U) Группа наблюдения Показатели, % Порог доверительной вероятности (р) Хронический аутоиммунный простатит Хронический аутоиммунный простатит на фоне гиперандрогенемии Нейтрофилы 1,7 (0,7;1,6) 1,0 (0;1,98) 0,0031 Лимфоциты 15,1(11,4;16,8) 5,5 (4,95;6) 0,0002 36,0 (29;40) 70,0 (59;72) 0,0001 32,0 (29,5;33,5) 20,0 (17;22) 0,0001 Фибробласты Фиброциты 20 По данным морфометрического исследования у крыс с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне гиперандрогенемии по сравнению с животными с физиологическим уровнем тестостерона показатель числа десквамированного ацинарного эпителия, эпителия ацинусов был достоверно ниже; объемная доля ацинусов, ацинусов, не содержащих секрет и воспалительного инфильтрата – статистически значимо более высокой (табл.7). Структурные изменения вентральной доли предстательной железы при хроническом аутоиммунном простатите на фоне гиперандрогенемии были более выражены по ряду показателей. В группе животных, у которых хронический аутоиммунный простатит развивался на фоне гиперандрогенемии, были статистически значимо более высокими показатели объемной доли ацинусов, ацинусов, не содержащих секрет, воспалительного инфильтрата, а показатель объемной доли стромы, эпителия и десквамации эпителия был ниже (табл. 7). При хроническом аутоиммунном простатите на фоне гиперандрогенемии по сравнению с хроническим аутоиммунным простатитом с физиологическим уровнем тестостерона в инфильтрате внутридольковой стромы были статистически значимо ниже показатели процентного содержания лимфоцитов и фиброцитов и выше – фибробластов (табл. 8). В дорсальной доле предстательной железы у крыс с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне гиперандрогенемии по сравнению с животными с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне физиологического уровня тестостерона были статистически значимо ниже показатели объемной доли эпителия и его десквамации, числа тучных клеток, а показатель объемной доли инфильтрата был статистически значимо выше. В составе клеточного инфильтрата внутридольковой стромы дорсальной доли предстательной железы крыс с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне гиперандрогенемии, по сравнению с группой животных с физиологическим уровнем тестостерона статистически значимо снижалось процентное содержание лимфоцитов и повышалось – фибробластов. Таким образом, структурные изменения предстательной железы при хроническом аутоиммунном простатите на фоне гиперандрогенемии по сравнению с животными с физиологическим уровнем тестостерона характеризуется более низкими показателями объёмной доли эпителия и его десквамации, числа тучных клеток и более высоким показателем объемной доли воспалительного инфильтрата. Хронический аутоиммунный простатит на фоне гиперандрогенемии характеризуется расширением просвета ацинусов, снижением числа десквамированного эпителия, увеличением в строме содержания фибробластов и снижением содержания лимфоцитов и нейтрофилов, т.е. гиперандрогенемия оказывает иммуносупрессорный и профибротический эффекты. 21 В литературе сведения о влиянии гиперандрогенемии на особенности хронического воспалительного процесса в предстательной железе отсутствуют. Морфологическая и морфометрическая характеристика тимуса и селезенки и цитокиновый профиль крыс Вистар с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне физиологического уровня андрогенов и при гиперандрогенемии При морфологическом и морфометрическом исследовании тимуса крыс Вистар с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне гиперандрогенемии по сравнению с животными с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне физиологического уровня андрогенов на качественном и количественном уровне изменений не выявлено. В селезенке крыс Вистар по данным морфологического и морфометрического исследования в группе крыс с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне гиперандрогенемии по сравнению с животными с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне физиологического уровня тестостерона отмечалось опустошение белой пульпы со статистически значимым снижением ее объемной доли, а также лимфоидных узелков и их светлых центров, ПАЛМ–зоны. При сравнении цитокинового профиля в сыворотке крови крыс Вистар с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне физиологического уровня тестостерона и хронического аутоиммунного простатита при гиперандрогенемии значимых различий в сравниваемых группах животных не выявлено. При хроническом аутоиммунном простатите на фоне гиперандрогенемии по сравнению с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне физиологического уровня тестостерона по данным морфологического и морфометрического исследования в тимусе изменений не выявлено, а в селезенке отмечалось опустошение В и Т–зон и сужение светлых центров лимфоидных узелков. Таким образом, в работе воспроизведена и количественными морфологическими методами охарактеризована экспериментальная модель хронического аутоиммунного простатита у крыс Вистар на фоне нормо- и гиперандрогенемии. Морфологические изменения при экспериментальном хроническом аутоиммунном простатите, выявленные у всех иммунизированных животных, соответствуют морфологической картине хронического абактериального простатита, выявляемого в биоптатах у мужчин, страдающих этим заболеванием. Аутоиммунный характер воспалительного процесса у крыс Вистар в простате верифицирован по наличию аутоантител к базальной пластинке эпителия ацинусов предстательной железы. Данные по количественной оценке структурных изменений предстательной железы при экспериментальном хроническом аутоиммунном простатите могут быть основой алгоритма для объективной доклинической 22 оценки эффективности фармакологических препаратов, используемых при лечении хронического абактериального простатита. Важными для андрологии, эндокринологии, спортивной медицины являются результаты количественной оценки особенностей морфологических изменений предстательной железы при введении тестостерона. Гиперандрогенемия, индуцированная введением фармакологического препарата тестостерона пролонгированного действия, вызывает у крыс Вистар повышение секреторной активности дорсальной и вентральной долей предстательной железы, которое характеризуется повышением объемной доли ацинусов, усилением десквамации эпителия, а также снижением числа и увеличением индекса дегрануляции тучных клеток. Гиперандрогенемия оказывает профибротическое действие, увеличивая количество фибробластов во внутридольковой строме. В связи с расширением показаний к использованию фармакологических препаратов тестостерона для коррекции метаболического синдрома, андрогенной недостаточности и возросшим распространением хронического простатита среди мужчин репродуктивного возраста, полученные данные о морфологических особенностях экспериментального хронического аутоиммунного простатита на фоне гиперандрогенемии имеют важное значение. Установлено, что морфологические проявления хронического аутоиммунного простатита, развивающегося на фоне гиперандрогенемии по сравнению с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне физиологического уровня тестостерона характеризуются увеличением объемной доли ацинусов, как содержащих, так и не содержащих секрет, уменьшением десквамации эпителия, что, по-видимому, связано с изменением реологических свойств секрета. На фоне гиперандрогенемии в составе воспалительного инфильтрата снижается содержание лимфоцитов, что отражает иммуносупрессорное действие тестостерона. Тестостерон усиливает процессы фиброза в предстательной железе, увеличивая объемную долю стромы и фиброцитов в ней. В работе показано, что при экспериментальном хроническом аутоиммунном простатите развиваются морфологические изменения иммунной системы, которые характеризуются акцидентальной инволюцией тимуса, изменением соотношения Т и В зон селезенки и снижением уровня иммунорегуляторных и провоспалительных цитокинов. К сожалению, в литературе данные об изменениях иммунной системы при хроническом абактериальном простатите у мужчин представлены фрагментарно. Исходя из этого, необходимо более детальное углубленное изучение иммунных нарушений при хроническом абактериальном простатите, что, возможно, позволит разработать новые направления в терапии этого распространенного социально значимого заболевания. Следует учитывать, как показано в нашем исследовании, что гиперандрогенемия модулирует морфофункциональное состояние иммунной системы, оказывает иммуносупрессорное действие и 23 может привести к нарушению механизмов противоинфекционного и противоопухолевого иммунитета. ВЫВОДЫ 1. При введении гомогената добавочных половых желез с адъювантом Фрейнда у крыс Вистар в 100% в предстательной железе воспроизводится аутоиммунный хронический воспалительный процесс, который по данным морфологического исследования характеризуется слабо выраженной диффузноочаговой лимфоидной воспалительной инфильтрацией, фиброзом внутридольковой стромы, десквамацией эпителия ацинусов, а также наличием в сыворотке крови аутоантител к антигенам предстательной железы. 2. Выявлены структурные особенности функционально различающихся вентральной и дорсальной долей предстательной железы крыс Вистар. В дорсальной доле железы объемная доля ацинусов, эпителия и индекса дегрануляции тучных клеток были выше, чем в вентральной, в то время как количество внутридольковой стромы, содержащей фиброциты, было ниже. 3. При хроническом аутоиммунном простатите в обеих долях предстательной железы развиваются воспалительные и фибротические процессы, которые характеризуются увеличением содержания лимфоцитов и фибробластов во внутридольковой строме. Морфофункциональные изменения ацинусов дорсальной и вентральной долей предстательной железы разнонаправлены. В вентральной доле, в отличие от дорсальной, объемная доля ацинусов, содержащих секрет, увеличивается, что в сочетании с усилением десквамации эпителия отражает повышение его секреторной активности с переключением мерокринового и апокринового типов секреции на голокриновый. 4. При хроническом аутоиммунном простатите в тимусе выявляется акцидентальная инволюция I–II степени с увеличением объемной доли коркового и субкапсулярного слоев, в селезенке – гиперплазия белой пульпы за счет увеличения ПАЛМ–зоны. По сравнению с контрольной группой у крыс с хроническим аутоиммунным простатитом снижается продукция активированными Соn-А клетками селезенки ИЛ-2, ИЛ-4, ИФН-γ и ФНО-α. 5. Гиперандрогенемия, индуцированная введением фармакологического препарата тестостерона пролонгированного действия (Омнадрен 250), вызывает у крыс Вистар повышение секреторной активности обеих долей предстательной железы с увеличением объемной доли ацинусов, усилением десквамации эпителия, а также снижение числа тучных клеток с увеличением индекса их дегрануляции. Длительная гиперандрогенемия оказывает профибротическое действие, увеличивая объемную долю клеточных элементов во внутридольковой строме, содержание фибробластов. Структурные изменения вентральной доли предстательной железы по сравнению с дорсальной более выражены. 24 6. Морфологические проявления хронического аутоиммунного простатита, развивающегося на фоне гиперандрогенемии, по сравнению с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне физиологического уровня тестостерона, характеризуются увеличением объемной доли ацинусов, содержащих и не содержащих секрет, и снижением десквамации эпителия. На фоне гиперандрогенемии в составе воспалительного инфильтрата снижается содержание лимфоцитов, что отражает иммуносупрессорное действие тестостерона. Тестостерон усиливает процессы фиброза в предстательной железе, увеличивая объемную долю стромы и фиброцитов. Структурные изменения более выражены в вентральной доле. 7. При хроническом аутоиммунном простатите на фоне гиперандрогенемии по сравнению с хроническим аутоиммунным простатитом на фоне физиологического уровня тестостерона в селезенке выявлено опустошение Т и В-зон с уменьшением объемной доли светлых центров лимфоидных узелков. 25 Список опубликованных работ по теме диссертации 1. Цветков И.С., Мхитаров В.А., Андреева Е.В. «Морфология экспериментального абактериального простатита» // Материалы конференции Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины. –2008 – с.41-42 2. Цветков И.С.,Мхитаров В.А., Андреева Е.В, Макарова О.В. «Морфология экспериментального простатита, вызванного введением динитробензолсульфокислоты» //Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии. –2008 –с.169-170 3. Цветков И.С., Мхитаров В.А. «Морфологические особенности хронического простатита при гипо- и гиперандрогенемии» // Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии. –2010.– с.188-190 4. Цветков И.С., Мхитаров В.А. «Иммуноморфологическая характеристика экспериментального хронического аутоиммунного простатита» //Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова.–2010. –с.8-16 5. Цветков И.С., Мхитаров В.А. «Морфометрическая характеристика структурных изменений предстательной железы крыс Вистар при хроническом простатите» // «Х Конгресс международной ассоциации морфологов» // «Морфология» –2010. –4. – с.207 6. Цветков И.С. Макарова О.В., Мхитаров В.А «Иммуноморфологические особенности хронического экспериментального аутоиммунного простатита при гиперандрогенемии» // Дни иммунологии в Санкт-Петербурге им. В.И.Иоффе Медицинская иммунология Том 13 №4-5 – 2011.–с. 341-342 7. Цветков И.С., Макарова О.В., Мхитаров В.А. «Иммуноморфологическая характеристика хронического экспериментального аутоиммунного простатита при гиперандрогенемии» //Морфологические ведомости. –2012 .–4. –с. 56-64 Соискатель И.С. Цветков 26
